專利名稱：一種姜辣素脂質(zhì)體及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥領(lǐng)域，尤其是一種透皮性能優(yōu)良的姜辣素脂質(zhì)體的制備方法。
背景技術(shù)：
隨著科學(xué)技術(shù)、儀器和方法學(xué)的迅速發(fā)展，人們對于自身的認識越來越深刻，對于皮膚生理病理的研究已經(jīng)深入到基因和分子生物學(xué)水平，對相關(guān)生物醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)的發(fā)展產(chǎn)生了巨大的推動作用，許多具有生物活性的動植物成分和生物高分子成分已經(jīng)應(yīng)用到生物醫(yī)藥行業(yè)，取得了巨大的社會和經(jīng)濟效益。但是，如何將這些具有生物活性的成分應(yīng)用到生物醫(yī)藥領(lǐng)域中，面臨著許多難題，主要表現(xiàn)在以下方面1、這些生物活性物質(zhì)的穩(wěn)定性問題，除了由其自身的結(jié)構(gòu)和空間構(gòu)象決定外，外界環(huán)境因素的影響也不容小視，例如表皮活性因子溶液，在外界環(huán)境中的活性持續(xù)時間有短短的數(shù)小時，在其被皮膚吸收發(fā)揮作用之前就基本失活了，根本不能發(fā)揮其應(yīng)有的作用和效果。2、高分子成分難于被人體皮膚吸收的問題，通常來說，活性物分子量越小，越容易透過皮膚，一旦分子量大于600，活性物就很難被皮膚吸收了，而近年來應(yīng)用的具有特定皮膚活性功能的物質(zhì)大多數(shù)是肽類等高分子物質(zhì)，其分子量少則數(shù)千，多則數(shù)十萬，·這就決定了它們很難透過皮膚從而被有效吸收。3、生物活性物質(zhì)的可溶性問題，大部分有效成分不能溶于水被皮膚表層吸收，很難發(fā)揮其作用。姜辣素能夠加速血液流動，促使排汗，帶走體內(nèi)多余的熱量，具有排毒、養(yǎng)顏、減肥的作用，但是由于上述原因，很難被皮膚吸收，難以發(fā)揮其應(yīng)有的作用。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種設(shè)計合理、透皮性能優(yōu)良的姜辣素脂質(zhì)體的制備方法。本發(fā)明解決其技術(shù)問題是采取以下技術(shù)方案實現(xiàn)的—種姜辣素脂質(zhì)體，其構(gòu)成組分及其組分的重量份數(shù)為大豆磷脂65 70份、膽固醇30 35份、姜辣素O. 5 30份、無水乙醇1000 1500份、磷酸鹽緩沖液70 120份。而且，所述的磷酸鹽緩沖液的pH值為7. 2 7. 5。一種姜辣素脂質(zhì)體的制備方法，包括以下步驟⑴稱取大豆磷脂、膽固醇置于茄形瓶中，加入相當(dāng)于大豆磷脂和膽固醇總體積6 10倍的無水乙醇使大豆磷脂和膽固醇完全溶解；⑵將茄形瓶置于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上，48 50°C減壓蒸發(fā)溶劑，在茄形瓶中形成一層薄膜，然后中空干燥使溶劑除盡；⑶將姜辣素與無水乙醇按體積比I :5混合使姜辣素完全溶解，制得姜辣素溶液備用；
⑷將磷酸鹽緩沖液加入到姜辣素溶液中形成姜辣素磷酸鹽溶液；(5)將占O. 05 O. 14倍大豆磷脂和膽固醇總質(zhì)量的姜辣素磷酸鹽溶液加到步驟⑵含薄膜的茄形瓶中，35 40°C恒溫震蕩至薄膜脫落，然后放置2 3h水化，水化液分別經(jīng)O. 80 μ m、0. 45 μ m、0. 22 μ m濾膜高壓擠出，制得姜辣素脂質(zhì)體混懸液；(6)采用凍干法制備姜辣素脂質(zhì)體取姜辣素脂質(zhì)體混懸液置于燒瓶中，浸入低溫浴器內(nèi)，緩慢旋轉(zhuǎn)40 60min，直到冷凍成膜狀；(7)將燒瓶連于冷凍干燥儀上，抽真空5 lOmin，使水分完全升華，制備出姜辣素脂質(zhì)體。 一種姜辣素凍干脂質(zhì)體，其構(gòu)成組分及其組分的重量份數(shù)為大豆磷脂65 70份、膽固醇30 35份、姜辣素O. 5 30份、無水乙醇1000 1500份、凍干保護劑O. 5 3份，磷酸鹽緩沖液70 120份。而且，所述的凍干保護劑為低濃度甘氨酸。一種姜辣素凍干脂質(zhì)體的制備方法，包括以下步驟⑴稱取大豆磷脂、膽固醇置于茄形瓶中，加入相當(dāng)于大豆磷脂和膽固醇總體積6 10倍的無水乙醇使大豆磷脂和膽固醇完全溶解；⑵將茄形瓶置于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上，48 50°C減壓蒸發(fā)溶劑，在茄形瓶中形成一層薄膜，然后中空干燥使溶劑除盡；⑶將姜辣素與無水乙醇按體積比I :5混合使姜辣素完全溶解，制得姜辣素溶液備用；⑷將磷酸鹽緩沖液及凍干保護劑加入到姜辣素溶液中形成姜辣素磷酸鹽溶液；(5)將占O. 05 O. 14倍大豆磷脂和膽固醇總質(zhì)量的姜辣素磷酸鹽溶液加到上述含薄膜的茄形瓶中，35 40°C恒溫震蕩至薄膜脫落，然后放置2 3h水化，水化液分別經(jīng)O. 80 μ m、0. 45 μ m、0. 22 μ m濾膜高壓擠出，制得姜辣素脂質(zhì)體混懸液；(6)采用凍干法制備姜辣素脂質(zhì)體取姜辣素脂質(zhì)體混懸液置于燒瓶中，浸入低溫浴器內(nèi)，緩慢旋轉(zhuǎn)40 60min，直到冷凍成膜狀；(7)將燒瓶連于冷凍干燥儀上，抽真空5 lOmin，使水分完全升華，制備出姜辣素凍干脂質(zhì)體。本發(fā)明的優(yōu)點和積極效果是本發(fā)明以姜辣素為模型成分，并以大豆磷脂、膽固醇作為脂質(zhì)體原料，采用擠出-凍干法制備出透皮性能優(yōu)良的姜辣素脂質(zhì)體，通過姜辣素脂質(zhì)體的外觀、pH、粒徑、表面電荷等基本數(shù)據(jù)，以及包封率和載藥量檢測、體外釋放和透皮吸收試驗表明，本發(fā)明的姜辣素脂質(zhì)體具有非常強的體外透皮吸收性能，為姜辣素脂質(zhì)體技術(shù)應(yīng)用于生物醫(yī)藥行業(yè)提供實驗依據(jù)。
具體實施例方式以下結(jié)合實例對本發(fā)明做進一步描述。一種姜辣素脂質(zhì)體，其構(gòu)成組分及其組分的重量份數(shù)為大豆磷脂65 70份、膽固醇30 35份、姜辣素O. 5 30份、無水乙醇1000 1500份、PBS緩沖鹽(pH 7. 2 7. 5) 70 120 份。
一種姜辣素脂質(zhì)體的制備方法，包括以下步驟(I)按比例精密稱取大豆磷脂、膽固醇置于茄形瓶中，加入相當(dāng)于大豆磷脂和膽固醇總體積6 10倍的無水乙醇使大豆磷脂和膽固醇完全溶解。(2)將茄形瓶置于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上，48 50°C減壓蒸發(fā)溶劑，在茄形瓶中形成一層薄膜，然后中空干燥過夜，使溶劑除盡。(3)按姜辣素與無水乙醇按體積比I :5混合使姜辣素完全溶解，制得姜辣素溶液備用。(4)將磷酸鹽緩沖液(PBS pH 7. 2 7. 5)加入到步驟(3)制得的姜辣素溶液中形成姜辣素磷酸鹽溶液，磷酸鹽緩沖液(PBS pH 7. 2 7. 5)與姜辣素溶液的體積比為7 8 ··O. 3 O. 8。 (5)將占O. 05 O. 14倍大豆磷脂和膽固醇總質(zhì)量的姜辣素磷酸鹽溶液加到上述含薄膜的茄形瓶中，35 40°C恒溫震蕩至薄膜脫落，然后放置2 3h水化，水化液分別經(jīng)O. 80 μ m、0. 45 μ m、0. 22 μ m濾膜高壓擠出，制得姜辣素脂質(zhì)體混懸液。(6)采用凍干法制備姜辣素脂質(zhì)體取姜辣素脂質(zhì)體混懸液置于磨口圓底燒瓶中，浸入低溫浴器內(nèi)，緩慢旋轉(zhuǎn)40 60min，直到冷凍成膜狀。(7)將燒瓶連于冷凍干燥儀上，抽真空5 lOmin，使水分完全升華，制備出姜辣素脂質(zhì)體。一種姜辣素凍干脂質(zhì)體，其構(gòu)成組分及其組分的重量份數(shù)為大豆磷脂65 70份、膽固醇30 35份、姜辣素O. 5 30份、無水乙醇1000 1500份、凍干保護劑O. 5 3份，PBS緩沖鹽(pH 7. 2 7. 5) 70 120份。姜辣素凍干脂質(zhì)體與前述姜辣素脂質(zhì)體的區(qū)別在于加入了凍干保護劑，該凍干保護劑采用低濃度甘氨酸，由于氨基酸離子具有酸、堿兩性，可抑制磷酸緩沖鹽結(jié)晶，在冷凍干燥過程中抑制pH值的改變而阻止蛋白質(zhì)藥物變性。一種姜辣素凍干脂質(zhì)體的制備方法，包括以下步驟(I)按比例精密稱取大豆磷脂、膽固醇置于茄形瓶中，加入相當(dāng)于大豆磷脂和膽固醇總體積6 10倍的無水乙醇使大豆磷脂和膽固醇完全溶解。(2)將茄形瓶置于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上，48 50°C減壓蒸發(fā)溶劑，在茄形瓶中形成一層薄膜，然后中空干燥過夜，使溶劑除盡。(3)按姜辣素與無水乙醇按體積比I :5混合使姜辣素完全溶解，制得姜辣素溶液備用。(4)按比例將磷酸鹽緩沖液(PBS pH 7. 2 7. 5)及凍干保護劑(低濃度甘氨酸)力口入到步驟(3)制得的姜辣素溶液中形成姜辣素磷酸鹽溶液。(5)將占O. 05 O. 14倍大豆磷脂和膽固醇總質(zhì)量的姜辣素磷酸鹽溶液加到上述含薄膜的茄形瓶中，35 40°C恒溫震蕩至薄膜脫落，然后放置2 3h水化，水化液分別經(jīng)O. 80 μ m、0. 45 μ m、0. 22 μ m濾膜高壓擠出，制得姜辣素脂質(zhì)體混懸液。(6)采用凍干法制備姜辣素脂質(zhì)體取姜辣素脂質(zhì)體混懸液置于磨口圓底燒瓶中，浸入低溫浴器內(nèi)，緩慢旋轉(zhuǎn)40 60min，直到冷凍成膜狀。(7)將燒瓶連于冷凍干燥儀上，抽真空5 lOmin，使水分完全升華，制備出姜辣素凍干脂質(zhì)體。
下面對姜辣素脂質(zhì)體(姜辣素凍干脂質(zhì)體)的理化性質(zhì)說明(I)外觀性質(zhì)。目測姜辣素脂質(zhì)體混懸液為均勻淡黃色；姜辣素脂質(zhì)體(未加凍干保護劑)為淡黃色海綿狀松散粉末或塊狀；姜辣素凍干脂質(zhì)體(加入凍干保護劑)為流動性良好的白色粉末。在電鏡下觀察制備的脂質(zhì)體為小多室脂質(zhì)體；掃描電鏡下，未加凍干保護劑的脂質(zhì)體為白色蠟塊狀，加凍干保護劑的脂質(zhì)體為白色球狀。(2) 一般理化性質(zhì)(pH、粒徑和表面電荷)姜辣素脂質(zhì)體的pH為7. 08，粒徑70. 16nm, Zeta電位為-63. 9mV (陽離子表面吸附的緩沖液中的陰離子的表現(xiàn))。下面通過HPLC方法對姜辣素脂質(zhì)體的姜辣素含量進行檢測 樣品處理精密量取樣品500 μ 1，加入100 μ I 10%TritonX_100，渦旋混合2min，IOOOOrpm離心4min,取上清液20 μ I進樣,在色譜條件下分析,記錄峰面積,用外標(biāo)法計算姜辣素含量。色譜固定相WatersSYMMETRY C18 5 μ m 色譜柱(250_Χ4· 6mm);流動相甲醇-水(58:42V/V)，流速11111/1^11;檢測波長20511111;柱溫351;進樣量2(^1。姜辣素保留時間約為8. 8min。特異性空白脂質(zhì)體+10%Tri tonX-100、姜辣素對照品+10%Tri tonX-100分別進樣，發(fā)現(xiàn)脂質(zhì)成分和TritonX-IOO對姜辣素檢測無干擾，本方法具有良好的特異性。精密度在空白脂質(zhì)體中加入不同量的姜辣素配置成低、中、高(30、200、700. O μ g/ml)不同濃度PBS (1_10)溶液，每個濃度各6個樣品，按上述分別測定日內(nèi)、日間變異，結(jié)果見表I。表I HPLC測定空白脂質(zhì)體PBS (1_10)溶液中姜辣素的精密度
權(quán)利要求
1.一種姜辣素脂質(zhì)體，其特征在于其構(gòu)成組分及其組分的重量份數(shù)為大豆磷脂65 70份、膽固醇30 35份、姜辣素O. 5 30份、無水乙醇1000 1500份、磷酸鹽緩沖液70 120份。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的一種姜辣素脂質(zhì)體，其特征在于所述的磷酸鹽緩沖液的PH值為7. 2 7. 5。
3.—種如權(quán)利要求I或2所述姜辣素脂質(zhì)體的制備方法，其特征在于包括以下步驟 ⑴稱取大豆磷脂、膽固醇置于茄形瓶中，加入相當(dāng)于大豆磷脂和膽固醇總體積6 10倍的無水乙醇使大豆磷脂和膽固醇完全溶解； ⑵將茄形瓶置于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上，48 50°C減壓蒸發(fā)溶劑，在茄形瓶中形成一層薄膜，然后中空干燥使溶劑除盡； ⑶將姜辣素與無水乙醇按體積比I :5混合使姜辣素完全溶解，制得姜辣素溶液備用； ⑷將磷酸鹽緩沖液加入到姜辣素溶液中形成姜辣素磷酸鹽溶液； (5)將占O.05 O. 14倍大豆磷脂和膽固醇總質(zhì)量的姜辣素磷酸鹽溶液加到步驟⑵含薄膜的茄形瓶中，35 40°C恒溫震蕩至薄膜脫落，然后放置2 3h水化，水化液分別經(jīng)O. 80 μ m、0. 45 μ m、0. 22 μ m濾膜高壓擠出，制得姜辣素脂質(zhì)體混懸液； (6)采用凍干法制備姜辣素脂質(zhì)體取姜辣素脂質(zhì)體混懸液置于燒瓶中，浸入低溫浴器內(nèi)，緩慢旋轉(zhuǎn)40 60min，直到冷凍成膜狀； ⑴將燒瓶連于冷凍干燥儀上，抽真空5 lOmin，使水分完全升華，制備出姜辣素脂質(zhì)體。
4.一種姜辣素凍干脂質(zhì)體，其特征在于其構(gòu)成組分及其組分的重量份數(shù)為大豆磷脂65 70份、膽固醇30 35份、姜辣素O. 5 30份、無水乙醇1000 1500份、凍干保護劑O. 5 3份，磷酸鹽緩沖液70 120份。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的一種姜辣素凍干脂質(zhì)體，其特征在于所述的磷酸鹽緩沖液的pH值為7. 2 7. 5。
6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的一種姜辣素凍干脂質(zhì)體，其特征在于所述的凍干保護劑為低濃度甘氨酸。
7.—種如權(quán)利要求4至6任一項所述姜辣素凍干脂質(zhì)體的制備方法，其特征在于包括以下步驟 ⑴稱取大豆磷脂、膽固醇置于茄形瓶中，加入相當(dāng)于大豆磷脂和膽固醇總體積6 10倍的無水乙醇使大豆磷脂和膽固醇完全溶解； ⑵將茄形瓶置于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上，48 50°C減壓蒸發(fā)溶劑，在茄形瓶中形成一層薄膜，然后中空干燥使溶劑除盡； ⑶將姜辣素與無水乙醇按體積比I :5混合使姜辣素完全溶解,制得姜辣素溶液備用； ⑷將磷酸鹽緩沖液及凍干保護劑加入到姜辣素溶液中形成姜辣素磷酸鹽溶液； (5)將占O.05 O. 14倍大豆磷脂和膽固醇總質(zhì)量的姜辣素磷酸鹽溶液加到上述含薄膜的茄形瓶中，35 40°C恒溫震蕩至薄膜脫落，然后放置2 3h水化，水化液分別經(jīng)O. 80 μ m、0. 45 μ m、0. 22 μ m濾膜高壓擠出，制得姜辣素脂質(zhì)體混懸液； (6)采用凍干法制備姜辣素脂質(zhì)體取姜辣素脂質(zhì)體混懸液置于燒瓶中，浸入低溫浴器內(nèi)，緩慢旋轉(zhuǎn)40 60min，直到冷凍成膜狀；⑴ 將燒瓶連于冷凍干燥儀上，抽真空5 lOmin，使水分完全升華，制備出姜辣素凍干脂質(zhì)體。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種姜辣素脂質(zhì)體及其制備方法，姜辣素脂質(zhì)體的構(gòu)成組分及其組分的重量份數(shù)為大豆磷脂65～70份、膽固醇30～35份、姜辣素0.5～30份、無水乙醇1000～1500份、磷酸鹽緩沖液70～120份；其制備方法為⑴稱取大豆磷脂、膽固醇置于茄形瓶中并使用無水乙醇使其溶解；⑵將茄形瓶減壓蒸發(fā)溶劑；⑶制得姜辣素溶液；⑷形成姜辣素磷酸鹽溶液；⑸制備姜辣素脂質(zhì)體混懸液；⑹采用凍干法制備姜辣素脂質(zhì)體；⑺通過冷凍干燥儀抽真空5～10min，使水分完全升華，制備出姜辣素脂質(zhì)體。本發(fā)明設(shè)計合理，制備出的姜辣素脂質(zhì)體具有非常強的體外透皮吸收性能，為姜辣素脂質(zhì)體技術(shù)應(yīng)用于生物醫(yī)藥行業(yè)提供實驗依據(jù)。
文檔編號A61P43/00GK102895189SQ20121038019
公開日2013年1月30日 申請日期2012年10月9日 優(yōu)先權(quán)日2012年10月9日
發(fā)明者李歡, 孟剛 申請人:天津蕓熙生物技術(shù)有限公司