專利名稱：一種靶向人核仁蛋白hRrp15 esiRNA的制備方法及應用的制作方法
技術領域：
本發(fā)明屬于人核糖體蛋白分子研究技術領域，更具體的說是一種靶向人核仁蛋白hRrpl5 esiRNA的制備方法。
背景技術：
核仁(nucleolus)是真核細胞間期核中最顯著的結構，核仁結構控制細胞內和核糖體的生物發(fā)生過程，是核糖體RNA合成、加工和核糖體亞單位的組裝場所。核糖體的生物發(fā)生與細胞內外的環(huán)境密切相關，決定細胞的命運。近年的研究發(fā)現(xiàn)，反應于各種細胞內外刺激，細胞通過核糖體發(fā)生的改變做出快速的應答反應。大量研究證實核仁蛋白、核糖體大小亞基蛋白及核糖體相關蛋白的沉默可以導致細胞周期阻滯，其主要機制是這些蛋白沉默后干擾核糖體發(fā)生，細胞中游離的RPLll和RPL5增加，這兩種蛋白可以結合并抑制Mdm2功能，進而活化重要的腫瘤抑制基因一P53的功能。核糖體相關蛋白15 (Rrpl5p)最早由Alessandro Fatica實驗室于2005年發(fā)現(xiàn)于酵母細胞中，該實驗室研究證實Rrpl5p分子是核糖體大亞基(60S)前體的組成成分，并與核糖體大亞基的成熟相關。我們根據(jù)蛋白分子氨基酸序列的同源性，從人子宮頸癌細胞HeLa的cDNA文庫中克隆出hRrpl5的cDNA。并制備了 hRrpl5的多克隆抗體并對其亞細胞定位以及細胞功能進行深入研究。

發(fā)明內容
本發(fā)明公開了一種制備人核仁蛋白hRrpl5 esiRNA的特異性引物,其特征在于它具有
權利要求
1.一種制備人核仁蛋白hRrpl5 esiRNA的特異性引物，其特征在于它具有 上游引物AGTTAATACGACTCACTATAGGGGTCATCCTCTGATAGTTGGGG 下游引物AGTTAATACGACTCACTATAGGGAATCATATCTTCCAGATTACC。
2.一種采用權利要求1所述的特異性引物制備人核仁蛋白hRrpl5 esiRNA的方法，其特征在于按如下的步驟進行 (1)設計PCR引物 將hRrpl5基因序列與人類基因組序列進行比對，并找到hRrpl5基因的3’ UTR序列，在·3’ UTR區(qū)域設計一段5’端含有T7啟動子序列的PCR引物 上游引物
3.權利要求2所述的人核仁蛋白hRrpl5esiRNA在治療宮頸癌方面的應用。
4.權利要求3所述的應用，其中它是將制備的hRrpl5esiRNA文庫分別轉染人正常細胞RPEl和宮頸癌細胞HeLa，證實hRrpl5表達沉默后誘導正常細胞RPEl周期阻滯，但是誘導HeLa細胞發(fā)生凋亡，有效的殺傷體外培養(yǎng)的宮頸癌細胞；同時裸鼠實驗證實hRrp5es iRNA可以有效抑制裸鼠體內宮頸癌異體移植瘤的生長。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種制備人核仁蛋白hRrp15esiRNA的特異性引物及采用此引物制備人核仁蛋白hRrp15esiRNA的方法。本發(fā)明根據(jù)蛋白分子氨基酸序列的同源性，從人子宮頸癌細胞HeLa的cDNA文庫中克隆出hRrp15的cDNA。并制備了hRrp15的多克隆抗體并對其亞細胞定位以及細胞功能進行深入研究。本發(fā)明利用核糖核酸內切酶III酶切的方法成功制備了hRrp15的小分子干擾RNA文庫(esiRNAlibrary)，并經鑒定可以有效抑制細胞內hRrp15的表達。在體外實驗中證實hRrp15esiRNA文庫可以特異性殺傷宮頸癌細胞HeLa，該esiRNA文庫也可以抑制裸鼠體內宮頸癌異體移植瘤的生長，表明利用新型方法制備的hRrp15小分子RNA干擾文庫可以作為有效地治療手段用于治療宮頸癌。
文檔編號A61P35/00GK103060316SQ20121049953
公開日2013年4月24日 申請日期2012年11月30日 優(yōu)先權日2012年11月30日
發(fā)明者朱長軍, 姜偉, 董智雄 申請人:天津師范大學