專利名稱：膠原/納米纖維素皮膚再生材料及其制備方法與應用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于皮膚再生材料制備技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及一種膠原/納米纖維素皮膚再生材料及其制備方法與應用。
背景技術(shù)：
皮膚是人體最大的器官，是機體與外界的天然屏障。皮膚的組成與結(jié)構(gòu)具有高度的復雜性，包括多種細胞、彈性纖維、膠原纖維、蛋白多糖等生物大分子以及葡萄糖、氨基酸、無機鹽和維生素等小分子。人體的皮膚由表皮、基底膜、真皮以及皮下組織四個部分構(gòu)成的。臨床上，外傷、潰瘍、發(fā)炎、燒傷、手術(shù)及先天性畸形等皮膚缺損與異常，不僅造成患者身體的痛苦，同時也常造成心靈創(chuàng)傷。皮膚組織工程便是這一新興學科中發(fā)展最早、最快的領(lǐng)域之一。人工皮膚作為一種皮膚創(chuàng)傷修復材料和損傷皮膚的替代品，在自體皮有限的情況下，可以使皮膚大面積受損和深度燒傷者，進行修復治療并使之恢復相關(guān)的生理功能。皮膚再生材料血管化速度是影響其再生性能、決定材料移植成活率的關(guān)鍵。因此，如何促進皮膚再生材料的血管化速度，進而縮短創(chuàng)面缺血時間，提高移植存活率，是皮膚再生與修復研究中的關(guān)鍵問題。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的首要目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)`的缺點與不足，提供一種膠原/納米纖維素皮膚再生材料的制備方法。本發(fā)明的另一目的在于提供有上述制備方法得到的膠原/納米纖維素皮膚再生材料。本發(fā)明的再一目的在于提供所述的膠原/納米纖維素皮膚再生材料的應用。本發(fā)明的目的通過下述技術(shù)方案實現(xiàn):一種膠原/納米纖維素皮膚再生材料的制備方法，包括如下步驟:(I)將山梨糖醇酐油酸酯(斯盤-80，Span80)加入植物油中，于40 60°C邊機械攪拌邊加入明膠溶液，機械攪拌2 3h后，邊冰浴攪拌邊加入戊二醛，冰浴攪拌2 3h后加入丙酮A，靜置，過濾，得到微球；將微球置于丙酮B中，室溫固化12 24h后轉(zhuǎn)移到氨基乙酸中，離心，取微球沉淀，分別用丙酮C和異丙酮交替洗滌3 6次后浸泡于去離子水中，-20 -60°C冷凍干燥，得到明膠微球；將明膠微球加入生長因子溶液中，混合均勻，得到負載生長因子的明膠微球溶液；每毫升植物油中含有1.00 6.25mg山梨糖醇酐油酸酯，每毫克明膠微球加入10 100 μ I生長因子溶液；植物油、明膠溶液、戊二醛、丙酮Α、丙酮B、氨基乙酸與去離子水的體積比為100 200:5 30:0.5 1:20 50:50 100:50 100:100 200 ；(2)將0.1 1.0wt%的納米微晶纖維素溶液(CNC溶液)加入0.5 1.0wt%的膠原溶液中，納米微晶纖維素與膠原的質(zhì)量百分比為I 10%，機械攪拌2 3h，真空脫泡，得到膠原/納米微晶纖維素混合溶液；將膠原/納米微晶纖維素混合溶液注入模具中，于-5 _60°C冷凍干燥，得到膠原/納米微晶纖維素三維多孔支架；將膠原/納米微晶纖維素三維多孔支架浸泡于0.25 1.00wt%的戊二醛水溶液中，4 25°C反應6 24h后用去離子水清洗3 6次，于-5 _60°C冷凍干燥，得到膠原/納米微晶纖維素支架；(3)將步驟(I)的負載生長因子的明膠微球按質(zhì)量比0.5:100 5:100加到步驟
(2)的膠原/納米微晶纖維素支架上，室溫放置2 5h，自然干燥，得到膠原/納米纖維素皮膚再生材料；步驟(I)中:所述的攪拌的速度優(yōu)選為500 1000r/min ；所述的明膠溶液優(yōu)選為5 10wt%的明膠水溶液；所述的戊二醛優(yōu)選為15 25wt%的戊二醛水溶液；所述的離心的條件優(yōu)選為2000r/min離心10分鐘；所述的生長因子溶液為20 50 μ g/mL生長因子水溶液，優(yōu)選為50 μ g/mL生長因子水溶液；每毫克明膠微球優(yōu)選加入100 μ I生長因子溶液；所述的生長因子優(yōu)選為表達血管內(nèi)皮 細胞生長因子(VEGF)、酸性成纖維細胞生長因子(aFGF)或堿性成纖維細胞生長因子(bFGF)；步驟(2)中:所述的0.5 lwt%的膠原溶液優(yōu)選采用以下方法進行配制:將膠原加入0.5 lwt%的乙酸溶液中，攪拌均勻，配制成0.5 lwt%的膠原溶液；所述的0.1 lwt%的納米微晶纖維素(cellulose nanocrystals, CNC)溶液優(yōu)選采用以下方法進行配制:將納米微晶纖維素加入0.5 lwt%的乙酸溶液中，攪拌均勻，配制成0.1 lwt%的納米微晶纖維素溶液；所述的0.5 lwt%的乙酸溶液優(yōu)選為0.5 lwt%的乙酸水溶液；所述的攪拌的速度優(yōu)選為500 1000r/min ；所述的模具優(yōu)選為聚四氟乙烯模具；所述的步驟(3)中，優(yōu)選將步驟(I)的負載生長因子的明膠微球按質(zhì)量比0.5:100加到步驟(2)的膠原/納米微晶纖維素支架上；一種膠原/納米纖維素皮膚再生材料，由上述制備方法得到；所述的膠原/納米纖維素皮膚再生材料可應用于創(chuàng)傷、燒傷等深度皮膚缺損和慢性皮膚潰瘍的治療；本發(fā)明的發(fā)明機理:本發(fā)明采用再生醫(yī)學的方法和技術(shù)，選擇具有良好生物相容性和生物降解性能的膠原為基因載體材料，添加納米微晶纖維素具有增強機械性能、溶脹性能及耐降解作用；通過改變相關(guān)反應條件，得到具有特定微結(jié)構(gòu)的多孔支架。通過控制生長因子的種類和負載量，將可表達促血管化的生長因子負載在的明膠微球上；進一步將該微球與膠原/納米微晶纖維素組織工程皮膚支架復合，利用生長因子對創(chuàng)面細胞進行原位轉(zhuǎn)染，實現(xiàn)促血管生成因子的可控持續(xù)分泌，促進皮膚再生材料的血管化，最終獲得具有良好再生修復效果的皮膚再生材料。實驗表明該支架能夠有效的促進細胞的遷移、增殖和分化，促進細胞浸入，具有良好的生物相容性。大鼠皮下埋植實驗發(fā)現(xiàn)該材料能夠快速血管化，超薄皮片移植后能較好成活；14天即能充分血管化，超薄皮片移植后能較好成活。另夕卜，外源性的膠原/納米微晶纖維素支架會隨著時間的推移而逐漸降解，被機體吸收，最終得到的是與人體自身完全相似的組織。本發(fā)明相對于現(xiàn)有技術(shù)具有如下的優(yōu)點及效果:(I)本發(fā)明為創(chuàng)傷、燒傷等深度皮膚缺損和慢性皮膚潰瘍的治療提供了一種性能良好的皮膚替代物，可以顯著促進創(chuàng)面的愈合，減少瘢痕的增生，進而減輕病人的痛苦?？梢詮V泛應用于創(chuàng)傷、燒傷和外科整形等方面。本發(fā)明制備方法簡單，材料來源廣泛，生產(chǎn)效率高，適用于產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)。與國外同類產(chǎn)品相比，本發(fā)明產(chǎn)品的成本較低。(2)本發(fā)明采用納米微晶纖維素與膠原基真皮活性支架復合，并利用戊二醛輔助交聯(lián)，提高膠原基支架的生物穩(wěn)定性。其中膠原/納米微晶纖維素多孔支架可以有效誘導缺損組織處細胞的遷移、增殖和分化，原位誘導缺損真皮組織的再生；該支架同時充當臨時表皮層的作用，有效控制了創(chuàng)面水分的揮發(fā)及組織細菌的侵入等，從而構(gòu)建具有生物活性和抗菌功能的組織工程化復合支架。同時，膠原與納米微晶纖維素都是具有良好生物相容性、低免疫原性和可降解性的高分子材料。


圖1是對比實施例的納米微晶纖維素的原子力顯微鏡圖。圖2是實施例1的明膠微球的掃描電鏡圖。圖3是對比實施例的膠原/納米微晶纖維素三維復合支架宏觀形貌圖。圖4是實施例2的純膠原支架表面形貌和5wt%CNC復合支架表面形貌的掃描電鏡圖；其中:a為純膠原支架表面形貌的掃描電鏡圖，b`為5wt%CNC復合支架表面形貌的掃描電鏡圖。圖5是實施例2的負載VEGF明膠微球的膠原/納米微晶纖維素復合支架和負載bFGF明膠微球的膠原/納米微晶纖維素復合支架的掃描電鏡圖；其中:a為負載VEGF明膠微球的膠原/納米微晶纖維素復合支架的掃描電鏡圖，b為負載bFGF明膠微球的膠原/納米微晶纖維素復合支架的掃描電鏡圖。圖6是對比實施例的不同質(zhì)量百分比的CNC復合膠原多孔支架的溶脹性能曲線圖；其中:a為純膠原的溶脹性能曲線；b為lwt%CNC復合膠原多孔支架的溶脹性能曲線；c為3wt%CNC復合膠原多孔支架的溶脹性能曲線；d為5wt%CNC復合膠原多孔支架的溶脹性能曲線；eS7wt%CNC復合膠原多孔支架的溶脹性能曲線；f為10wt%CNC復合膠原多孔支架的溶脹性能曲線。圖7是對比實施例的不同質(zhì)量百分比的CNC復合膠原多孔支架的熱重分析(TG)曲線圖；其中:a為純膠原的熱重分析曲線山為lwt%CNC復合膠原多孔支架的熱重分析曲線；c為3wt%CNC復合膠原多孔支架的熱重分析曲線；d為5wt%CNC復合膠原多孔支架的熱重分析曲線；e*7wt%CNC復合膠原多孔支架的熱重分析曲線；f為10wt%CNC復合膠原多孔支架的熱重分析曲線。圖8是實施例3的負載bFGF明膠微球的膠原/納米微晶纖維素復合支架的體外釋放曲線圖。圖9是對比實施例的負載bFGF明膠微球的膠原/納米微晶纖維素復合支架細胞毒性測試(MTT)圖。
圖10是實施例2的負載了 VEGF明膠微球的膠原/納米微晶纖維素復合支架埋置皮下的大體觀察圖；其中:a為負載了 VEGF明膠微球的膠原/納米微晶纖維素復合支架埋置皮下7天后的大體觀察圖，b為負載了 VEGF明膠微球的膠原/納米微晶纖維素復合支架埋置皮下10天后的大體觀察圖，c為負載了 VEGF明膠微球的膠原/納米微晶纖維素復合支架埋置皮下14天后的大體觀察圖。圖11是實施例3的負載了 bFGF明膠微球的膠原/納米微晶纖維素復合支架埋置皮下的大體觀察圖；其中:a為負載了 bFGF明膠微球的膠原/納米微晶纖維素復合支架埋置皮下7天后的大體觀察圖，b為負載了 bFGF明膠微球的膠原/納米微晶纖維素復合支架埋置皮下10天后的大體觀察圖，c為負載了 bFGF明膠微球的膠原/納米微晶纖維素復合支架埋置皮下14天后的大體觀察圖。
具體實施例方式下面結(jié)合 實施例及附圖對本發(fā)明作進一步詳細的描述，但本發(fā)明的實施方式不限于此。實施例1(1)將0.7g山梨糖醇酐油酸酯(斯盤_80，Span80)加入200ml植物油中，60°C邊機械攪拌(500r/min)邊加入30mll0wt%的明膠溶液,機械攪拌2h后,邊冰浴攪拌(500r/min)邊加入0.5ml25wt%的戊二醛水溶液，冰浴攪拌2h后加入50ml丙酮A，靜置，過濾，得到微球；將微球置于50ml丙酮B中室溫固化12h后轉(zhuǎn)移到50ml氨基乙酸中，2000r/min離心10分鐘，取微球沉淀，分別用丙酮C和異丙酮交替洗漆6次后浸于去IOOml離子水中，-60°C冷凍干燥，得到明膠微球；將5mg明膠微球混在500 μ I生長因子aFGF (50 μ g/ml)溶液中，混合均勻，得到負載生長因子aFGF的明膠微球溶液；SEM觀察明膠微球的粒徑和形貌結(jié)果如圖2所示；(2)將lwt%的納米微晶纖維素溶液(將納米微晶纖維素加入lwt%的乙酸水溶液中，攪拌均勻，配制成lwt%的納米微晶纖維素溶液；)加入lwt%的膠原溶液(將膠原加入lwt%的乙酸水溶液中，攪拌均勻，配制成lwt%的膠原溶液；)中，制備成lwt% (CNC/膠原)混合溶液，500r/min攪拌2h，真空脫泡，得到膠原/納米微晶纖維素混合溶液；然后把膠原/納米微晶纖維素混合溶液注入聚四氟乙烯模具中，于-60°C冷凍干燥，得到膠原/納米微晶纖維素三維多孔支架；將膠原/納米微晶纖維素三維多孔支架浸泡于0.25wt%戊二醛水溶液中，4°C靜置6h后用去離子水清洗6次，于_60°C冷凍干燥，得到膠原/納米微晶纖維素支架；(3)取5μ I步驟(I)的負載生長因子aFGF的明膠微球溶液滴加在IOmg步驟(2)的膠原/納米微晶纖維素支架上，室溫放置2h，自然干燥，得到負載生長因子納米微球的膠原/納米纖維素皮膚再生材料。實施例2(1)將0.625g山梨糖醇酐油酸酯加入IOOml植物油中，50°C邊機械攪拌(800r/min)邊加入5ml8wt%的明膠溶液，機械攪拌2.5h后，邊冰浴攪拌(800r/min)邊加入lmll5wt%的戊二醛水溶液，冰浴攪拌2.5h后加入20ml丙酮A，靜置，過濾，得到微球；將微球置于70ml丙酮B中室溫固化16h后轉(zhuǎn)移到70ml氨基乙酸中，2000r/min離心10分鐘，取微球沉淀，分別用丙酮C和異丙酮交替洗漆6次后浸于去150ml離子水中，-40°c冷凍干燥，得到明膠微球；將5mg明膠微球混在500 μ I生長因子VEGF (50 μ g/ml)溶液中，混合均勻，得到負載生長因子VEGF的明膠微球溶液；(2)將0.lwt%的納米微晶纖維素溶液(將納米微晶纖維素加入0.5wt%的乙酸水溶液中，攪拌均勻，配制成lwt%的納米微晶纖維素溶液；)加入0.5wt%的膠原溶液(將膠原加入0.5wt%的乙酸水溶液中，攪拌均勻，配制成lwt%的膠原溶液；)中，制備成5wt% (CNC/膠原)混合溶液，800r/min攪拌2.5h，真空脫泡，得到膠原/納米微晶纖維素混合溶液；然后把膠原/納米微晶纖維素混合溶液注入聚四氟乙烯模具中，于-40°C冷凍干燥，得到膠原/納米微晶纖維素三維多孔支架；將膠原/納米微晶纖維素三維多孔支架浸泡于0.75wt%戊二醛水溶液中，15°C靜置24h后用去離子水清洗6次，于_40°C冷凍干燥，得到膠原/納米微晶纖維素支架；膠原/納米微晶纖維素支架的微觀結(jié)構(gòu)如圖4所示，孔徑為100 200 μ m ;(3)取5μ I步驟(I)的負載生長因子VEGF的明膠微球溶液滴加在IOmg步驟(2)的膠原/納米微晶纖維素支架上，室溫放置3h，自然干燥，得到負載生長因子納米微球的膠原/納米纖維素皮膚再生材料，其SEM圖如圖5所示；在負載生長因子納米微球的膠原/納米纖維素皮膚再生材料上種植小鼠成纖維細胞(3T3)，以20Wt%胎牛血清、100單位/毫升青霉素和100單位/毫升的鏈霉素的RPMI1640培養(yǎng)基培養(yǎng)3天后，放在2.5wt%的戊二醛水溶液中固定，梯度乙醇(依次為50wt%、70wt%、80wt%、90wt°/c^P 100wt%的乙醇)脫水、超臨界干燥后SEM觀察。3T3細胞可以在負載VEGF的支架上較好地粘附并保持其形態(tài)。在大鼠背上進行皮下實驗，埋置負載VEGF的膠原/納米微晶纖維素皮膚再生支架。圖10是負載了 VEGF的膠原/納米微晶纖維素支架埋置皮下7、10、14天后的大體觀察圖。從圖中可以看出7天的時候支架還有剩余，創(chuàng)面紅潤，10天的時候支架幾乎全部降解，1 4天支架完全降解，肉芽組織顏色紅潤，表明血管較為豐富。實施例3(I)將0.15g山梨糖醇酐油酸酯加入150ml植物油中，40°C邊機械攪拌(IOOOr/min)邊加入20ml5wt%的明膠溶液，機械攪拌3h后，邊冰浴攪拌(1000r/min)邊加入
0.8ml20wt%的戊二醛水溶液，冰浴攪拌3h后加入40ml丙酮A，靜置，過濾，得到微球；將微球置于IOOml丙酮B中室溫固化24h后轉(zhuǎn)移到IOOml氨基乙酸中，2000r/min離心10分鐘，取微球沉淀，分別用丙酮C和異丙酮交替洗漆6次后浸于去200ml離子水中，-20°C冷凍干燥，得到明膠微球；將5mg明膠微球混在500 μ I生長因子bFGF (50 μ g/ml)溶液中，混合均勻，得到負載生長因子aFGF的明膠微球溶液；(2)將0.5wt%的納米微晶纖維素溶液(將納米微晶纖維素加入0.8wt%的乙酸水溶液中，攪拌均勻，配制成0.5wt%的納米微晶纖維素溶液；)加入0.8wt%的膠原溶液(將膠原加入0.8wt%的乙酸水溶液中，攪拌均勻，配制成0.8wt%的膠原溶液；)中，制備成10wt% (CNC/膠原)混合溶液，1000r/min攪拌3h,真空脫泡,得到膠原/納米微晶纖維素混合溶液；然后把膠原/納米微晶纖維素混合溶液注入聚四氟乙烯模具中，于_5°C冷凍干燥，得到膠原/納米微晶纖維素三維多孔支架；將膠原/納米微晶纖維素三維多孔支架浸泡于
1.00wt%戊二醛水溶液中，25°C靜置12h后用去離子水清洗6次，于_5°C冷凍干燥，得到膠原/納米微晶纖維素支架；膠原/納米微晶纖維素支架的孔徑為100 200 μ m ;
(3)取5μ I步驟(I)的負載生長因子bFGF的明膠微球溶液滴加在IOmg步驟(2)的膠原/納米微晶纖維素支架上，室溫放置5h，自然干燥，得到負載生長因子納米微球的膠原/納米纖維素皮膚再生材料；將負載生長因子納米微球的膠原/納米纖維素皮膚再生材料浸入5mL含牛血清白蛋白(lmg/mL)的PBS溶液中，于37°C培養(yǎng)箱孵化0.5、1、1.5、2……一直持續(xù)到第14天，每天收集等量的PBS溶液(20μ 1)，標記后置于-20°C保存。采用酶聯(lián)吸附免疫法(enzymelinked immunosorbent assay, ELISA)法測定PBS溶液中釋放的bFGF濃度，并繪制bFGF體外釋放曲線(圖8)。在大鼠背部埋置該上述支架，圖11是負載了 bFGF明膠微球的膠原/納米微晶纖維素支架植入皮下7、14、21天后的大體觀察圖。從圖中可以看出7天的時候支架還有剩余，創(chuàng)面顯紅色，14天的時候支架幾乎全部降解，21天支架完全降解，皮下組織成長正常。對比實施例(I)將納米微晶纖維素(圖1)加入lwt%的乙酸水溶液中，攪拌均勻，配制成lwt%的納米微晶纖維素溶液；將膠原加入lwt%的乙酸水溶液中，攪拌均勻，配制成lwt%的膠原溶液；將lwt%的納米微晶纖維素溶液滴入到lwt%的膠原溶液中，500r/min機械攪拌2h,分別制備CNC含量為0wt%、lwt%、3wt%、5wt%、7wt%和10wt%的CNC/膠原混合溶液，然后將CNC/膠原混合溶液倒入聚四氟乙烯的模具中，4°C靜置過夜，然后在_60°C冷凍干燥，成型后得lwt%、3wt%、5wt%、7wt°/c^P 10wt%三維多孔復合支架；將上述支架分別浸在0.25wt%的戊二醛水溶液中固定，4°C靜置24h后取出支架，并用三蒸水反復洗滌6次，再次在_60°C冷凍干燥，得到一系列三維多孔復合支架(圖3)，通過溶脹性能測試(GB/T14797.3-2008)(圖6)及熱重分析(JB/T6856-1993)(圖7)，選出性`能較好多孔支架。將負載生長因子的明膠微球溶液按重量比為0.5:100逐滴加到膠原/納米微晶纖維素三維多孔支架上，室溫自然干燥后觀察其微觀形貌如圖5所示，孔徑為100 200 μ m。將消過毒的支架放在24孔板中，每孔加入5X IO4成纖維細胞(3T3)，加入培養(yǎng)基培養(yǎng)1、3、5、7天后進行MTT測試(GB/T14233.2-2005)，發(fā)現(xiàn)細胞成長良好，生長因子的加入有利于細胞的生長(圖9)，表明該材料具有良好的細胞相容性。上述實施例為本發(fā)明較佳的實施方式，但本發(fā)明的實施方式并不受上述實施例的限制，其他的任何未背離本發(fā)明的精神實質(zhì)與原理下所作的改變、修飾、替代、組合、簡化，均應為等效的置換方式，都包含在本發(fā)明的保護范圍之內(nèi)。
權(quán)利要求
1.一種膠原/納米纖維素皮膚再生材料的制備方法，其特征在于包括如下步驟: (1)將山梨糖醇酐油酸酯加入植物油中，于40 60°C邊機械攪拌邊加入明膠溶液，機械攪拌2 3h后，邊冰浴攪拌邊加入戊二醛，冰浴攪拌2 3h后加入丙酮A，靜置，過濾，得到微球；將微球置于丙酮B中，室溫固化12 24h后轉(zhuǎn)移到氨基乙酸中，離心，取微球沉淀，分別用丙酮C和異丙酮交替洗漆3 6次后浸泡于去離子水中,-20 _60°C冷凍干燥，得到明膠微球；將明膠微球加入生長因子溶液中，混合均勻，得到負載生長因子的明膠微球溶液；每毫升植物油中含有1.00 6.25mg山梨糖醇酐油酸酯，每毫克明膠微球加入10 100 μ I生長因子溶液；植物油、明膠溶液、戊二醛、丙酮A、丙酮B、氨基乙酸與去離子水的體積比為 100 200:5 30:0.5 I:20 50:50 100:50 100:100 200 ； (2)將0.1 1.0wt%的納 米微晶纖維素溶液加入0.5 1.0wt%的膠原溶液中，納米微晶纖維素與膠原的質(zhì)量百分比為I 10%，機械攪拌2 3h，真空脫泡，得到膠原/納米微晶纖維素混合溶液；將膠原/納米微晶纖維素混合溶液注入模具中，于-5 _60°C冷凍干燥，得到膠原/納米微晶纖維素三維多孔支架；將膠原/納米微晶纖維素三維多孔支架浸泡于0.25 1.00wt%的戊二醛水溶液中，4 25°C反應6 24h后用去離子水清洗3 6次，于-5 -60°C冷凍干燥，得到膠原/納米微晶纖維素支架； (3)將步驟(I)的負載生長因子的明膠微球按質(zhì)量比0.5:100 5:100加到步驟(2)的膠原/納米微晶纖維素支架上，室溫放置2 5h，自然干燥，得到膠原/納米纖維素皮膚再生材料。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的膠原/納米纖維素皮膚再生材料的制備方法，其特征在于:步驟(I)中所述的生長因子溶液為20 50 μ g/mL生長因子水溶液。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的膠原/納米纖維素皮膚再生材料的制備方法，其特征在于:步驟(I)中所述的生長因子為表達血管內(nèi)皮細胞生長因子、酸性成纖維細胞生長因子或堿性成纖維細胞生長因子。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的膠原/納米纖維素皮膚再生材料的制備方法，其特征在于:步驟(I)中所述的明膠溶液為5 10wt%的明膠水溶液；所述的戊二醛為15 25wt%的戊二醛水溶液。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的膠原/納米纖維素皮膚再生材料的制備方法，其特征在于:步驟(I)中所述的攪拌的速度為500 1000r/min ;所述的離心的條件為2000r/min離心10分鐘。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的膠原/納米纖維素皮膚再生材料的制備方法，其特征在于:步驟(2)中所述的0.5 lwt%的膠原溶液采用以下方法進行配制:將膠原加入0.5 lwt%的乙酸溶液中，攪拌均勻，配制成0.5 lwt%的膠原溶液。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的膠原/納米纖維素皮膚再生材料的制備方法，其特征在于:步驟(2)中所述的0.1 lwt%的納米微晶纖維素溶液采用以下方法進行配制:將納米微晶纖維素加入0.5 lwt%的乙酸溶液中，攪拌均勻，配制成0.1 lwt%的納米微晶纖維素溶液。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的膠原/納米纖維素皮膚再生材料的制備方法，其特征在于:步驟(2)中所述的0.5 lwt%的乙酸溶液為0.5 lwt%的乙酸水溶液；所述的攪拌的速度為500 1000r/min ;所述的模具為聚四氟乙烯模具。
9.一種膠原/納米纖維素皮膚再生材料，由權(quán)利要求1 8任一項所述的制備方法得到。
10.權(quán)利要求9所述的膠原/納米纖維素皮膚再生材料應用于創(chuàng)傷、燒傷的深度皮膚缺損或慢性 皮膚潰瘍的治療。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種膠原/納米纖維素皮膚再生材料及其制備方法與應用。本發(fā)明以具有良好生物相容性和降解性的膠原為基因載體材料，通過控制生長因子的種類和負載量，將可表達促血管化的生長因子負載在的明膠微球上；將該微球與膠原/納米微晶纖維素組織工程皮膚支架復合，利用生長因子對創(chuàng)面細胞進行原位轉(zhuǎn)染，實現(xiàn)促血管生成因子的可控持續(xù)分泌，促進皮膚再生材料的血管化，獲得具有良好再生修復效果的皮膚再生材料。本發(fā)明為創(chuàng)傷、燒傷等深度皮膚缺損和慢性皮膚潰瘍的治療提供了性能良好的皮膚替代物，可以顯著促進創(chuàng)面的愈合，減少瘢痕的增生，減輕病人的痛苦。本發(fā)明到制備方法簡單，生產(chǎn)效率高，成本較低，適用于產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)。
文檔編號A61L27/54GK103083723SQ20131002081
公開日2013年5月8日 申請日期2013年1月18日 優(yōu)先權(quán)日2013年1月18日
發(fā)明者郭瑞, 張淵明, 李衛(wèi)昌 申請人:暨南大學