專(zhuān)利名稱(chēng)：來(lái)自金黃色葡萄球菌的多肽和使用方法
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本發(fā)明涉及來(lái)自金黃色葡萄球菌的多肽和使用方法。本申請(qǐng)要求享受于2005年2月14日提交的美國(guó)臨時(shí)申請(qǐng)序列號(hào)60/652,843的權(quán)益，其內(nèi)容全部引入本文作為參考。
背景技術(shù)：
革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌是顯著多樣化的一類(lèi)生物，可導(dǎo)致人類(lèi)和動(dòng)物多種疾病。一些病原體被公認(rèn)對(duì)人類(lèi)和/或動(dòng)物健康是重要的，包括屬于棒狀桿菌科、腸球菌科、微球菌科、分支桿菌科、諾卡菌科和消化球菌科家族的細(xì)菌，包括這樣的細(xì)菌種類(lèi):放線菌屬物種、雙岐桿菌屬物種、棒狀桿菌屬物種、腸球菌屬物種、丹毒絲菌屬物種、真細(xì)菌屬物種、皮球菌屬屬物種、乳酸桿菌屬物種、微球菌屬物種、動(dòng)彎桿菌屬物種、分枝細(xì)菌屬物種、消化鏈球菌屬物種、丙酸桿菌屬物種和葡萄球菌屬物種。這些病原體在許多不同的動(dòng)某種類(lèi)中導(dǎo)致多種臨床癥狀。這樣感染的治療在歷史上是攻擊革蘭氏陽(yáng)性生物體共同結(jié)構(gòu)和功能的抗生素。但是，許多更加普遍存在的革蘭氏陽(yáng)性生物體發(fā)展了對(duì)幾類(lèi)抗生素的抗性，使感染的治療困難。對(duì)人類(lèi)和食物生產(chǎn)動(dòng)物廣泛使用抗生素治療細(xì)菌疾病，可能是許多對(duì)抗生素有抗性的革蘭氏陽(yáng)性生物體菌株種類(lèi)增生的主要原因。因此，對(duì)發(fā)現(xiàn)不同的預(yù)防或消除動(dòng)物和人類(lèi)革蘭氏陽(yáng)性生物體感染的治療方法有巨大的需求。在農(nóng)業(yè)動(dòng)物中的葡萄球菌感染在農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)中許多重要的疾病是革蘭氏陽(yáng)性生物體導(dǎo)致的。革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌感染導(dǎo)致的臨床病癥實(shí)例包括乳房炎、敗血病、肺炎、骨髓炎、腦膜腦炎、淋巴管炎、皮炎、生殖道感染、子宮炎、圍產(chǎn)期疾病、垂體膿腫、關(guān)節(jié)炎、粘液囊炎、睪丸炎、膀胱炎和腎盂腎炎、干酪性壞死淋巴腺炎、肺結(jié)核，潰瘍性淋巴管炎、丹毒、蹄葉炎、tyzzer疾病、破傷風(fēng)、波特淋菌中毒、腸炎、惡性腫脹、羊炭疽、桿菌性血紅蛋白尿、腸原性毒血癥。葡萄球菌屬物種特別能夠感染許多不同種類(lèi)的農(nóng)業(yè)動(dòng)物，并能導(dǎo)致大量經(jīng)濟(jì)損失。例如，美國(guó)牛奶產(chǎn)業(yè)估計(jì)每頭奶牛每年由于乳房炎損失約185美元，乳房炎經(jīng)常是金黃色葡萄球菌導(dǎo)致的疾病。因?yàn)樵诿绹?guó)有9百50萬(wàn)頭產(chǎn)奶奶牛，乳房炎每年的代價(jià)大約為約18億美元。這大約是農(nóng)場(chǎng)牛奶銷(xiāo)售額總價(jià)值的10%，這個(gè)損失的三分之二是由于減少了亞臨床感染奶牛的牛奶產(chǎn)量而引起的。其它損失是由于棄去異常牛奶和用抗生素治療的奶牛產(chǎn)奶受到抑制所致，感染奶牛被提早更換的費(fèi)用，精選奶牛減少銷(xiāo)售價(jià)值，藥物和獸醫(yī)服務(wù)費(fèi)用，和增加的勞動(dòng)力費(fèi)用。除了在牛奶產(chǎn)業(yè)盛行以外，革蘭氏陽(yáng)性球菌導(dǎo)致的乳房炎在山羊和綿羊中也常見(jiàn)。金黃色葡萄球菌導(dǎo)致的另外的動(dòng)物疾病包括馬的葡萄狀菌病，家禽的化膿性滑膜炎和骨髓炎，兔子的鼻塞，豬的流產(chǎn)，和羊羔的扁虱膿毒癥。葡萄球菌的其它種類(lèi)是犬(S.1ntermedius)和豬(S.hycius)的主要皮膚病原體。在家禽種類(lèi)中，葡萄球菌病原體導(dǎo)致心內(nèi)膜炎和敗血病。
人類(lèi)葡萄球菌感染葡萄球菌屬也是人類(lèi)的病原體，導(dǎo)致各種各樣的感染。種類(lèi)金黃色葡萄球菌是人類(lèi)粘膜和皮膚的常見(jiàn)建群者，是能夠?qū)е露喾N人類(lèi)感染的條件性病原體。例如，金黃色葡萄球菌是幾種皮膚感染的病因性媒介，包括膿皰病、癤病、蜂窩織炎(cellulitis)、和燙傷皮膚綜合征以及潛在致命的手術(shù)后傷口感染。此外，免疫減弱的個(gè)體在醫(yī)院環(huán)境下暴露于金黃色葡萄球菌可導(dǎo)致器官感染例如肺炎、尿路感染、骨髓炎、關(guān)節(jié)炎、菌血癥和心內(nèi)膜炎。金黃色葡萄球菌還是中毒癥、最著名的中毒休克綜合征和食物中毒的病因性媒介。葡萄球菌腸毒素B導(dǎo)致的食物中毒是食物致疾病的最常見(jiàn)原因，甚至超過(guò)沙門(mén)氏菌病、彎曲菌病和利斯特菌病。其它種類(lèi)的葡萄球菌也導(dǎo)致人類(lèi)疾病；表皮葡萄球菌、凝固酶陰性葡萄球菌和人肉孢子蟲(chóng)通常感染建群醫(yī)療器械，腐生葡萄球菌與婦女尿路感染有關(guān)。葡萄球菌的毒性機(jī)制葡萄球菌感染多種宿主組織，通過(guò)以下方式躲避免疫系統(tǒng):產(chǎn)生幾種類(lèi)型分泌蛋白、表面表達(dá)毒性因子，和代謝系統(tǒng)被設(shè)計(jì)為在有限資源中生存，和宿主環(huán)境相關(guān)的活性防御。建群是建立感染的必需的第一個(gè)步驟；許多因子包括被膜、脂磷壁質(zhì)酸和磷壁酸是幫助建群的常見(jiàn)結(jié)構(gòu)的成分。此外，表面蛋白例如葡萄球菌纖維連接蛋白結(jié)合蛋白和骨唾液酸糖蛋白結(jié)合蛋白特異性與宿 主組織成分結(jié)合。葡萄球菌病原體通常產(chǎn)生毒素，并是高度破壞性的；幾種人類(lèi)疾病包括食物中毒、中毒休克綜合征和表皮脫落皮膚病癥是細(xì)胞外分泌毒素蛋白的直接結(jié)果。單個(gè)分離菌可以編碼20-30個(gè)不同的分泌毒素的基因。一些分泌的蛋白產(chǎn)物是超級(jí)抗原，能非特異性地與抗原-產(chǎn)生細(xì)胞的MHC類(lèi)II分子結(jié)合，同時(shí)與T細(xì)胞的T-細(xì)胞受體結(jié)合。結(jié)合誘導(dǎo)T細(xì)胞信號(hào)，導(dǎo)致高水平前炎癥因子的釋放，最終誘導(dǎo)宿主由于不可抵抗的免疫響應(yīng)的損傷。另一類(lèi)在表面表達(dá)的毒性因子偽裝來(lái)自宿主免疫系統(tǒng)的細(xì)菌。例如，金黃色葡萄球菌表面-表達(dá)的蛋白A通過(guò)與宿主抗體Fe成分結(jié)合抑制調(diào)理素作用和噬菌作用。許多蛋白酶、溶血素(α、β、Υ和δ)、核酸酶、脂肪酶、透明質(zhì)酸酶和膠原質(zhì)還幫助細(xì)菌從環(huán)境細(xì)胞提取營(yíng)養(yǎng)素，保護(hù)它們對(duì)抗宿主的防御。在葡萄球菌中抗生素抗性⑶C估計(jì)在美國(guó)每年有接近二百萬(wàn)人受到醫(yī)院源性感染，每年導(dǎo)致90，000例死亡。在這些致命感染中70%是由抗生素-抗性細(xì)菌導(dǎo)致的。在微生某種類(lèi)中抗生素-抗性的增加在皮膚和粘膜建群者例如金黃色葡萄球菌中特別明顯。例如，絕大部分從醫(yī)院環(huán)境分離的金黃色葡萄球菌是對(duì)青霉素抗性的，50%還對(duì)半合成青霉素類(lèi)例如二甲氧基苯青霉素、萘夫西林和苯唑西林有抗性。這些分離菌，被稱(chēng)作MRSA (二甲氧基苯青霉素抗性金黃色葡萄球菌)在1970年代第一次被發(fā)現(xiàn)，現(xiàn)在在醫(yī)院環(huán)境中已經(jīng)明確地確立。最近出現(xiàn)幾例在社區(qū)的MRSA感染，其中被感染的個(gè)體以前沒(méi)有暴露于醫(yī)院或健康護(hù)理工作者。這個(gè)令人擔(dān)憂(yōu)的趨勢(shì)通過(guò)MRSA分離菌的分離被強(qiáng)化，該分離菌對(duì)用于治療MRSA的糖肽萬(wàn)古霉素敏感性差。按照CDC對(duì)萬(wàn)古霉素抗性的定義非常少的菌株曾表現(xiàn)出對(duì)萬(wàn)古霉素真正的抗性，但是幾種MRSA菌株曾被鑒定為包含對(duì)萬(wàn)古霉素敏感性降低的亞群落，或VISA (萬(wàn)古霉素中間體金黃色葡萄球菌)。因?yàn)閷⑷f(wàn)古霉素抗性菌株和萬(wàn)古霉素中間體菌株分離是相對(duì)新的進(jìn)展，只有很少關(guān)于它們?cè)卺t(yī)院和/或社區(qū)流行性的數(shù)據(jù)。偶爾地，對(duì)萬(wàn)古霉素具有完全抗性的和帶有可能從腸球菌某種獲得的抗性質(zhì)粒的VRSA (萬(wàn)古霉素抗性金黃色葡萄球菌)也曾從人體中找到。
預(yù)防和治療葡萄球菌屬感染的策略許多對(duì)多種抗生素抗性的革蘭氏陽(yáng)性病原體的出現(xiàn)激發(fā)了旨在發(fā)展預(yù)防性疫苗以對(duì)抗疾病研究的努力。設(shè)計(jì)施用給患者的疫苗是為了引起免疫系統(tǒng)長(zhǎng)期記憶效應(yīng)，以致在未來(lái)時(shí)間遭遇到該病原體時(shí)，免疫系統(tǒng)能更快速和更有效地清除該病原體。目前，對(duì)抗革蘭氏陽(yáng)性病原體的具有廣泛保護(hù)作用的疫苗還沒(méi)有得到，所述革蘭氏陽(yáng)性病原體是與許多嚴(yán)重的人類(lèi)疾病相關(guān)的，特別是與葡萄球菌感染的那些疾病相關(guān)的。發(fā)展預(yù)防葡萄球菌感染疫苗的方法包括報(bào)導(dǎo)使用微生物表面成分識(shí)別粘連基質(zhì)分子的那些:[MSCRAMMS(Nilsson 等 1998.JClin InvestlOl:2640-9 ；Menzies 等 2002.J InfectDisl85:937-43 ；Fattom 等 2004.Vaccine22:880-7]，表面多糖類(lèi)(McKenney 等 2000 ；McKenney 等 1999.Science284: 1523-7 ；Maira-Litran 等 2002.1nfect Tmmun70:4433-40 ；Maira-Litran 等 2004.Vaccine22:872-9 ；Maira-Litran 等 2005.1nfect Immun73:6752-62)和突變的外蛋白(Lowerell 等 1996.1nfect Tmmun64:4686-93 ；Stiles 等 2001.1nfect TmmunBQ:2031-6 ;Gampfer 等 2002.Vaccine20:3675-84),在亞單位疫苗組合物中作為抗原，以及活的無(wú)毒菌株(Reinoso等2002.Can J Vet Res66:285-8)，和幾種DNA疫苗方法(Ohwada 等 1999.J Antimicrob Chemother44:767-74) ；Brouillette 等 2002.Vaccine20:2348-57 ；Senna 等 2003.Vaccine21:2661-6)。盡管這些組合物中許多表現(xiàn)出一些程度保護(hù)作用，它們對(duì)抗不同葡萄球菌菌株的交叉-保護(hù)作用很小，在免疫減弱患者中不會(huì)引起另外的實(shí)質(zhì)性免疫響應(yīng)，這對(duì)于處于醫(yī)院源性感染危險(xiǎn)的人群是重要的。最嚴(yán)重的葡萄球菌疾病是通過(guò)前述超級(jí)抗原致熱外毒素(SPE)介導(dǎo)的那些，其不依賴(lài)抗原表達(dá)非特異性地刺激T-細(xì)胞。這樣的疾病包括中毒休克綜合征、表皮脫落性皮膚疾病和可能的Kawasaki綜合征。對(duì)于這些SPE-介導(dǎo)的疾病，在活性感染期間促進(jìn)免疫系統(tǒng)的免疫治療劑通常比疫苗更有效，而疫苗典型地在感染之前施用。對(duì)SPE免疫響應(yīng)的不可抵抗性質(zhì)使得將快速減小毒素活性作為第一治療目標(biāo)成為必要。目前，在金黃色葡萄球菌-介導(dǎo)的疾病中毒素中和是通過(guò)靜脈內(nèi)施用人類(lèi)免疫球蛋白(IVIG)來(lái)最有效完成的，其是來(lái)源于幾千人類(lèi)提供者的純化濃縮的人類(lèi)抗體制劑(Takei等1993.J Clin Invest91:602-7 ；Stohl 和 Elliot.1996.Clin Tmmunol Immunopatho179:122-33)。金黃色葡萄球菌分布廣泛，健康人類(lèi)成人 約30 %有建群，與大多數(shù)人群高暴露率是一致的，所以在IVIG中抗-葡萄球菌抗-毒素抗體水平常常足以中和毒素足夠的長(zhǎng)時(shí)間以穩(wěn)定免疫響應(yīng)，直至細(xì)菌負(fù)載用抗生素減小(Schlievert, 2001.J Allergy Clin Immunol 108 (4Sup P I):S107-110)。來(lái)自多個(gè)生產(chǎn)者的IVIG制劑已經(jīng)表明用人類(lèi)外周血單核細(xì)胞在增生分析中中和毒素，體外抑制毒素-誘導(dǎo)的人類(lèi)T細(xì)胞-驅(qū)動(dòng)的B細(xì)胞分化(Stohl和Elliot.1996.Clin Tmmunol Immunopathol79:122-33 ;Stohl 和 Elliott.1995.J Immunol 155:1838-50 ;Stohl等1994.J Immunol 153:117-27)，和在用葡萄球菌腸毒素B刺激的PBMC中減小IL-4和 IL-2 分泌(Takei 等 1993.J Clin Invest91:602-7 ；Darenberg 等 2004.Clin InfectDis38:836-42)。證明中和SPE能力的IVIG治療現(xiàn)在是Kawasaki綜合征的推薦療法，作為葡萄球菌中毒休克綜合征治療方法越來(lái)越受到歡迎(Schlievert2001.JAllergy ClinImmunoll08(4Suppl):S107_110)。使用IVIG作為外科手術(shù)期間免疫保護(hù)的傷口灌洗已經(jīng)在小鼠中進(jìn)行了研究(Poelstra等2000.Tissue Eng6 (4) =401-411) 盡管標(biāo)準(zhǔn)IVIG已經(jīng)用于限制一些葡萄球菌SPE-介導(dǎo)疾病的發(fā)展，從成千上萬(wàn)未經(jīng)選擇的人類(lèi)給體中得到的IVIG制劑的安全性、效力和一致性還存在爭(zhēng)議(Baker等1992.N Engl J Med327:213-9 ;Miller 等 2001.J Allergy Clin Tmmunol 108:S91-4 ；Sacher, 2001.J Allergy ClinImmunol 108:S139_46 ；Darenberg 等 2004.Clin Infect Dis38:836-42)。而且，IVIG 在預(yù)防一些葡萄球菌感染中的益處是可疑的(Baker等1992.N Engl J Med327:213-9 ；Hill,H.R.2000.J Pediatrl37:595-7 ；Darenberg 等 2004.Clin Infect Dis38:836-42)。為了提高IVIG在某些危險(xiǎn)人群中治療葡萄球菌感染的效果，制備了來(lái)源于血漿的給體選擇的多克隆抗-葡萄球菌人類(lèi)IgG，具有指向葡萄球菌MSCRAMMS聚集因子A(ClfA)和纖維蛋白原-結(jié)合蛋白G(SdrG)的高抗體滴定度，在非常低出生體重的嬰兒中成功實(shí)驗(yàn)預(yù)防葡萄球菌胺毒癥(Vernachio 等 2003.Antimicrob Agents Chemother47:3400-6 ；Bloom等 2005.Pediatr Infect Dis J24:858-866 ；Capparelli 等 2005.Antimicrob AgentsChemother49:4121-7)。也開(kāi)發(fā)了指向金黃色葡萄球菌MSCRAMM聚集因子A的特異性人化單克隆抗體。該抗體選自成千上萬(wàn)鼠科動(dòng)物具有與ClfA結(jié)合能力的抗-ClfA抗體，其結(jié)合方式廢除了金黃色葡萄球菌與人纖連蛋白的結(jié)合，隨后通過(guò)突變特定的靶標(biāo)殘基人化以模擬同源人類(lèi)幼體亞組抗體(Hall 等 2003.1nfect Tmmun71:6864-70 ；Domanski 等 2005.1nfect Immun73:5229-32)。特定抗體被設(shè)計(jì)用于與抗生素結(jié)合以治療嚴(yán)重的致命性金黃色葡萄球菌感染，盡管動(dòng)物研究還證明有預(yù)防性保護(hù)作用。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供包括兩個(gè)或多個(gè)分離多肽的組合物。兩個(gè)分離的多肽可以具有88kDa、55kDa、38kDa、37kDa、36kDa、35kDa、33kDa或其組合的分子量。例如，組合物可以包括88kDa和55kDa的分離蛋白。在一些方面組合物可以包括具有分子量88kDa、55kDa、38kDa、37kDa、36kDa、35kDa和33kDa的分離多肽。分子量通過(guò)在十二烷基硫酸鈉_聚丙烯基酰胺凝膠上的電泳確定。多肽是可從當(dāng)在包含鐵螯合劑介質(zhì)中培養(yǎng)時(shí)的金黃色葡萄球菌中分離出來(lái)的，并且不能從當(dāng)在不含鐵螯合劑的介質(zhì)中生長(zhǎng)時(shí)的金黃色葡萄球菌中分離出來(lái)。組合物保護(hù)動(dòng)物，例如小鼠或奶?；蛉祟?lèi)，對(duì)抗用金黃色葡萄球菌菌株例如ATCC菌株19636的激發(fā)。組合物可以進(jìn)一步包括可藥用載體，和可以進(jìn)一步包括具有150kDa、132kDa、120kDa、75kDa、58kDa、50kDa、 44kDa、43kDa、41kDa、40kDa或其組合的分子量的分離多肽，并且可從當(dāng)在不含鐵螯合劑的介質(zhì)中生長(zhǎng)時(shí)的金黃色葡萄球菌中分離出來(lái)的。在一些方面，組合物的多肽可以從金黃色葡萄球菌ATCC菌株19636中分離。本發(fā)明還提供使用組合物的方法。在一方面該方法用于治療患者的感染，包括施用有效量的本發(fā)明組合物給患有或處于患有葡萄球菌屬物種導(dǎo)致的感染危險(xiǎn)的患者。在另一方面，該方法用于治療患者的癥狀，包括施用有效量的本發(fā)明組合物給患有葡萄球菌屬導(dǎo)致的感染的患者?；颊呖梢詾椴溉閯?dòng)物，例如人類(lèi)、馬或奶牛。葡萄球菌屬物種可以為金黃色葡萄球菌。本發(fā)明進(jìn)一步提供使用抗體例如多克隆抗體的方法，其特異性地與本發(fā)明多肽結(jié)合。在一方面，該方法用于治療患者的感染，包括給患有或有危險(xiǎn)患有葡萄球菌屬物種導(dǎo)致感染的患者施用有效量的組合物，其中組合物包括特異性地與本發(fā)明兩個(gè)分離的多肽結(jié)合的抗體。在另一方面，該方法用于治療患者的癥狀，包括給患有由葡萄球菌屬導(dǎo)致的感染的患者施用有效量的組合物，其中組合物包括特異性地與本發(fā)明兩個(gè)分離的多肽結(jié)合的抗體?；颊呖梢詾椴溉閯?dòng)物，例如人類(lèi)、馬或奶牛。葡萄球菌屬物種可以為金黃色葡萄球菌。本發(fā)明還提供在患者中減少建群的方法。在一方面，該方法包括施用有效量的本發(fā)明組合物給被葡萄球菌屬物種建群的患者。在另一方面，該方法包括施用有效量的組合物給被葡萄球菌屬物種建群的患者。其中組合物包括與本發(fā)明兩個(gè)分離的多肽特異性結(jié)合的抗體。本發(fā)明提供檢測(cè)與多肽特異性結(jié)合的抗體的試劑盒。該試劑盒包括在分離的容器中本發(fā)明的分離多肽，和檢測(cè)與多肽特異性結(jié)合抗體的試劑。本發(fā)明進(jìn)一步提供組合物，包括具有分子量選自88kDa、55kDa、38kDa、37kDa、36kDa、35kDa和33kDa的兩個(gè)分離的多肽，其中分子量通過(guò)在十二烷硫酸鈉-聚丙烯基酰胺凝膠上的電泳確定。組合物的每個(gè)多肽具有的質(zhì)量指紋圖譜至少80%類(lèi)似于金黃色葡萄球菌ATCC菌株19636表達(dá)的相同分子量多肽的多肽質(zhì)量指紋圖譜，其中多肽是從當(dāng)在包含鐵螯合劑介質(zhì)中培養(yǎng)時(shí)的金黃色葡萄球菌中可分離出來(lái)的，并且當(dāng)在不含鐵螯合劑的介質(zhì)生長(zhǎng)時(shí)不可分離出來(lái)的。例如，分子量88kDa分離多肽的質(zhì)量指紋圖譜有至少80%與金黃色葡萄球菌ATCC菌株19636表達(dá)的88kDa多肽質(zhì)量指紋圖譜類(lèi)似，分子量55kDa分離多肽的質(zhì)量指紋圖譜有至少80%與金黃色葡萄球菌ATCC菌株19636表達(dá)的55kDa多肽質(zhì)量指紋圖譜類(lèi)似。


圖1.從在有鐵和沒(méi)有鐵下生長(zhǎng)的不同種類(lèi)得到的不同菌株金黃色葡萄球菌的蛋白的毛細(xì)管電泳譜(泳道分別表示Fe++和DP)。圖2.在用金黃色葡萄球菌同源和異源激發(fā)后免疫接種小鼠和未免疫接種小鼠之間死亡率的差異。圖3.在接種疫苗和用金黃色葡萄球菌ATCC19636同源激發(fā)后表現(xiàn)百分生存率的Kaplan-Meier 生存曲線。圖4.在接種疫苗和用金黃色葡萄球菌ATCC19636異源激發(fā)后表現(xiàn)百分生存率的Kaplan-Meier 生存曲線。圖5.在被動(dòng)免疫和用金黃色葡萄球菌ATCC19636同源激發(fā)后表現(xiàn)百分生存率的Kaplan-Meier 生存曲線。圖6.在被動(dòng)免疫和用金黃色葡萄球菌菌株1477異源激發(fā)后表現(xiàn)百分生存率的Kaplan-Meier 生存曲線。
具體實(shí)施例方式本發(fā)明提供多肽和包含多肽的組合物。本文中所用的“多肽”意指通過(guò)肽鍵連接的氨基酸聚合物。因此例如術(shù) 語(yǔ)肽、寡肽、蛋白和酶包括多肽定義之內(nèi)。該術(shù)語(yǔ)還包括多肽表達(dá)后的修飾，例如糖基化、乙?；?、磷酸化等等。術(shù)語(yǔ)多肽不意味著特定長(zhǎng)度的氨基酸聚合物。多肽可以直接從天然來(lái)源分離出來(lái)，或可以用重組、酶或化學(xué)技術(shù)制備。在天然出現(xiàn)的多肽的情況下，這樣的多肽典型地是分離的。“分離的”多肽是指將其從天然環(huán)境中移出。例如，分離的多肽是指從細(xì)胞質(zhì)或從細(xì)胞膜中移出的多肽，許多在其天然環(huán)境中的多肽、核酸和其它細(xì)胞材料不再存在?！翱煞蛛x出來(lái)的”多肽是指能從特定來(lái)源中分離的多肽?！凹兓摹倍嚯氖侵笍钠涮烊幌嚓P(guān)的其它成分中至少60%游離，優(yōu)選至少75%游離，最優(yōu)選至少90 %游離的多肽。在其天然發(fā)生的生物體外邊產(chǎn)生的多肽，例如，通過(guò)化學(xué)的或重組方法，考慮被分離和按照定義被純化，因?yàn)樗鼈儚膩?lái)不存在于天然環(huán)境中。本文中所用的“多肽片段”意指部分多肽，用蛋白酶消化多肽而得到。除非另外指明，“一種”、和“至少一種”可以交換使用，含義為一種或超過(guò)一種。當(dāng)這些術(shù)語(yǔ)出現(xiàn)在說(shuō)明書(shū)和權(quán)利要求中時(shí)，術(shù)語(yǔ)“包含”和其變種沒(méi)有限制的含義。本發(fā)明的多肽可以通過(guò)分子量、質(zhì)量指紋圖譜或其組合表征。多肽的分子量典型地以千道爾頓(kDa)表示，可以使用常規(guī)方法確定，包括例如凝膠過(guò)濾、包括十二烷基硫酸鈉(SDS)聚丙烯基酰胺凝膠電泳(PAGE)的凝膠電泳、毛細(xì)管電泳、質(zhì)譜和液相色譜法，包括HPLC。優(yōu)選通過(guò)使用具有約4%積層凝膠和約10%分離凝膠的SDS聚丙烯基酰胺凝膠在還原和變性的條件下分離多肽來(lái)測(cè)定分子量。除非另外指明，分子量意指通過(guò)SDS-PAGE確定的分子量。本文中所用的“質(zhì)量指紋圖譜”意指在用蛋白酶消化后，從多肽獲得的多肽片段的種群。典型地，使用質(zhì)譜方法分析從消化得到的多肽片段。每個(gè)多肽片段通過(guò)質(zhì)量表征，或通過(guò)質(zhì)量(m)與電荷(ζ)的比率表征，其被稱(chēng)為“m/z比”或“m/z值”。產(chǎn)生多肽質(zhì)量指紋圖譜的方法是常規(guī)的。這樣方法的實(shí)例在實(shí)施例13公開(kāi)。本發(fā)明多肽可以為金屬調(diào)節(jié)的多肽。本文中所用的“金屬調(diào)節(jié)多肽”是指微生物當(dāng)在低金屬的條件下生長(zhǎng)時(shí)與在高金屬的條件下相同微生物的生長(zhǎng)比較，通過(guò)微生物表達(dá)更高水平的多肽。低金屬和高金屬的條件在本文描述。例如，葡萄球菌屬物種產(chǎn)生的一類(lèi)金屬調(diào)節(jié)多肽在高金屬的條件下微生物生長(zhǎng)期間不以可檢測(cè)水平表達(dá)，但是在低金屬的條件下生長(zhǎng)期間以可檢測(cè)水平表達(dá)。在低鐵條件下生長(zhǎng)后，可從金黃色葡萄球菌分離出來(lái)這樣的金屬調(diào)節(jié)多肽的實(shí)例具有分子量88kDa、55kDa、38kDa、37kDa、36kDa、35kDa和33kDa。在低鋅或低銅條件下生長(zhǎng)后，可從金黃色葡萄球菌分離出來(lái)這樣的金屬調(diào)節(jié)多肽的實(shí)例具有分子量 115kDa、88kDa、80kDa、71kDa、69kDa、35kDa、30kDa、29kDa 和 27kD。本發(fā)明還包括不是金屬調(diào)節(jié)的多肽。這樣的多肽在金屬離子例如氯化鐵存在下表達(dá)，也在低鐵的條件下生 長(zhǎng)時(shí)表達(dá)?？蓮慕瘘S色葡萄球菌分離出來(lái)的這樣多肽的實(shí)例具有分子量 150kDa、132WDa、120kDa、75kDa、58kDa、50kDa、44kDa、43kDa、41kDa 和 40kDa。多肽是金屬調(diào)節(jié)的多肽或不是能通過(guò)用于比較多肽存在的方法確定，包括例如凝膠過(guò)濾、包括十二烷基硫酸鈉-聚丙烯基酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)的凝膠電泳、毛細(xì)管電泳、質(zhì)譜和液相色譜法，包括HPLC。分離在高金屬的條件下和在低金屬的條件下生長(zhǎng)的微生物培養(yǎng)物，按照本文描述的分離本發(fā)明的多肽，將存在于每種培養(yǎng)物中的多肽分離并比較。典型地，來(lái)自每種培養(yǎng)物中的多肽等量使用。優(yōu)選，使用具有約4%積層凝膠和約10%分離凝膠的SDS聚丙烯基酰胺凝膠在還原和變性的條件下分離多肽。例如，可以使用來(lái)自每種培養(yǎng)物的30微克(Ug)總多肽，并負(fù)載到凝膠孔中。在運(yùn)行完凝膠后，用Coomasie亮藍(lán)染色，可比較二條泳道。當(dāng)確定了多肽是否在可檢測(cè)水平表達(dá)時(shí)，將來(lái)自培養(yǎng)物的30 yg總多肽在SDS-PAGE凝膠上分離,使用本領(lǐng)域已知方法用Coomasie亮藍(lán)染色?？梢酝ㄟ^(guò)眼睛可視化的多肽被認(rèn)為是在可檢測(cè)水平表達(dá)的，同時(shí)不能被眼睛可視化的多肽則被認(rèn)為不是以可檢測(cè)水平表達(dá)的。本發(fā)明多肽可以具有免疫原活性?！懊庖咴钚浴币庵付嚯囊饎?dòng)物免疫響應(yīng)的能力。對(duì)多肽的免疫響應(yīng)是在動(dòng)物中發(fā)展的對(duì)多肽的細(xì)胞和/或抗體-介導(dǎo)的免疫響應(yīng)。通常，免疫響應(yīng)包括但是不限于一種或多種下列作用:指向多肽一種或多種抗原決定部位的抗體、B細(xì)胞、輔助T細(xì)胞、抑制T細(xì)胞和/或細(xì)胞毒T細(xì)胞的產(chǎn)生?！翱乖瓫Q定部位”意指在B細(xì)胞和/或T細(xì)胞特異性地響應(yīng)以致產(chǎn)生抗體的抗原上的位點(diǎn)。免疫原活性可以為保護(hù)作用?！氨Ｗo(hù)性免疫原活性”意指多肽在動(dòng)物中引起免疫響應(yīng)以預(yù)防或抑制葡萄球菌屬物種例如金黃色葡萄球菌感染的能力。多肽是否具有保護(hù)性免疫原活性可以通過(guò)本領(lǐng)域已知方法確定，例如在實(shí)施例5，9或12中描述的方法。例如，本發(fā)明多肽或本發(fā)明多肽的組合保護(hù)嚙齒動(dòng)物例如小鼠對(duì)抗用葡萄球菌屬物種的激發(fā)。本發(fā)明多肽可以具有血清激活活性?！把寮せ罨钚浴币庵负钸x多肽與來(lái)自感染葡萄球菌屬物種例如金黃色葡萄球菌的動(dòng)物的康復(fù)期血清中存在的抗體反應(yīng)的能力。在一些方面，康復(fù)期血清可以來(lái)自ATCC分離菌19636、菌株SAAV1、菌株2176或菌株1477感染的動(dòng)物。本發(fā)明多肽可以具有免疫調(diào)節(jié)活性。“免疫調(diào)節(jié)活性”意指多肽以非特異性方式作用以增強(qiáng)對(duì)特定抗原免疫響應(yīng)的能力。確定多肽是否具有免疫調(diào)節(jié)活性的方法是本領(lǐng)域已知的。本發(fā)明多肽可以具有參考微生物表達(dá)多肽的特征。特征可包括分子量和質(zhì)量指紋圖譜兩者。參考微生物可以 是革蘭氏陽(yáng)性的，優(yōu)選是微球菌科家族的成員，優(yōu)選葡萄球菌屬物種，更優(yōu)選金黃色葡萄球菌。優(yōu)選的菌株實(shí)例在表I中詳細(xì)描述。表1.細(xì)菌菌株
細(xì)菌細(xì)胞I實(shí)驗(yàn)室名稱(chēng)
金黃色葡萄球菌 ATCC分離菌19636金黃色葡萄球菌菌株SAAVl金黃色葡萄球菌菌株1477金黃色葡萄球菌菌株2176當(dāng)參考微生物是金黃色葡萄球菌ATCC分離菌19636時(shí)，如果侯選多肽具有分子量88kDa、55kDa、38kDa、37kDa、36kDa35kDa或33kDa和與參考微生物表達(dá)的以及分別具有分子量88kDa、55kDa、38kDa、37kDa、36kDa35kDa或33kDa的金屬調(diào)節(jié)多肽的質(zhì)量指紋圖譜類(lèi)似的質(zhì)量指紋圖譜，則侯選多肽被考慮為本發(fā)明的多肽。優(yōu)選，這樣的多肽為金屬調(diào)節(jié)的。例如，如果侯選多肽具有88kDa的分子量，并且具有參考菌株金黃色葡萄球菌ATCC分離菌19636產(chǎn)生的88kDa金屬調(diào)節(jié)多肽的質(zhì)量指紋圖譜類(lèi)似的質(zhì)量指紋圖譜，則侯選多肽被考慮為本發(fā)明的多肽。當(dāng)參考微生物是金黃色葡萄球菌分離菌SAAVl，如果侯選多肽具有88kDa、55kDa、38kDa、37kDa、36kDa、35kDa或33kDa分子量(通過(guò)SDS-PAGE確定的)，且具有參考微生物表達(dá)的以及分別具有88kDa、55kDa、38kDa、37kDa、36kDa、35kDa或33kDa的分子量(通過(guò)SDS-PAGE確定的)的多肽的質(zhì)量指紋圖譜類(lèi)似的質(zhì)量指紋圖譜，則候選多肽被考慮為本發(fā)明的多肽。優(yōu)選，這樣的多肽為金屬調(diào)節(jié)的。例如，如果侯選多肽具有88kDa的分子量，和與參考菌株金黃色葡萄球菌分離菌SAAVl產(chǎn)生的88kDa金屬調(diào)節(jié)多肽的質(zhì)量指紋圖譜類(lèi)似的質(zhì)量指紋圖譜，則侯選多肽為本發(fā)明的多肽。
當(dāng)參考微生物是金黃色葡萄球菌菌株2176時(shí)，如果侯選多肽具有88kDa、80kDa、65kDa、55kDa、37kDa、36kDa、35kDa、33kDa 或 32kDa 分子量(通過(guò) SDS-PAGE 確定的)，且具有與參考微生物表達(dá)的以及具有 88kDa、80kDa、65kDa、55kDa、37kDa、36kDa、35kDa、33kDa 或32kDa的分子量(通過(guò)SDS-PAGE確定的)的多肽的質(zhì)量指紋圖譜類(lèi)似的質(zhì)量指紋圖譜，則侯選多肽被考慮為本發(fā)明的多肽。優(yōu)選這樣的多肽為金屬調(diào)節(jié)的。例如，如果侯選多肽具有88kDa的分子量，和與參考菌株金黃色葡萄球菌分離菌2176產(chǎn)生的88kDa金屬調(diào)節(jié)多肽的質(zhì)量指紋圖譜類(lèi)似的質(zhì)量指紋圖譜，則侯選多肽被考慮為本發(fā)明的多肽。當(dāng)參考微生物是金黃色葡萄球菌菌株1477時(shí)，如果侯選多肽具有88kDa、80kDa、65kDa、55kDa、37kDa、36kDa、35kDa、33kDa 或 32kDa 的分子量(通過(guò) SDS-PAGE 確定的)，且具有與參考微生物表達(dá)的以及分別具有88kDa、80kDa、65kDa、55kDa、37kDa、36kDa、35kDa、33kDa或32kDa的分子量(通過(guò)SDS-PAGE確定的)的多肽質(zhì)量指紋圖譜類(lèi)似的質(zhì)量指紋圖譜，則候選多肽被考慮為本發(fā)明的多肽。優(yōu)選這樣的多肽為金屬調(diào)節(jié)的。例如，如果侯選多肽具有88kDa的分子量，和與參考菌株金黃色葡萄球菌分離菌1477產(chǎn)生的88kDa金屬調(diào)節(jié)多肽的質(zhì)量指紋圖譜類(lèi)似的質(zhì)量指紋圖譜，則侯選多肽被考慮為本發(fā)明的多肽。被參考微生物所表達(dá)的和以上分子量指代的多肽，可以通過(guò)參考微生物在低金屬的條件下生長(zhǎng)，并隨后通過(guò)本文公開(kāi)的方法分離多肽得到。侯選多肽是從微生物中可分離出來(lái)的，優(yōu)選革蘭氏陽(yáng)性微生物，更優(yōu)選微球菌科家族成員，優(yōu)選葡萄球菌屬物種，更優(yōu)選金黃色葡萄球菌。來(lái)自多肽可以被分離的其它革蘭氏陽(yáng)性微生物，包括棒狀桿菌屬物種、腸球菌某種、丹毒絲菌屬物種、皮球菌屬物種，和微球菌屬物種、分支桿菌屬物種和丹毒絲菌屬物種。侯選多肽還可以使用重組、酶或化學(xué)的技術(shù)生產(chǎn)。侯選多肽可以通過(guò)質(zhì)譜評(píng)價(jià)分析以確定侯選多肽是否具有與參考微生物表達(dá)的并參考上述分子量的多肽之一類(lèi)似的質(zhì)量指紋圖譜。典型地將侯選多肽分離，例如通過(guò)凝膠電泳分離侯選多肽，并切除含有侯選多肽的凝膠部分?？梢允褂没诓煌卣鞣蛛x多肽分任何凝膠電泳方法，包括I維或2維凝膠電泳，以及基于例如疏水性、pi或大小的液相色譜法分離法。例如通過(guò)用蛋白酶消化，侯選多肽被分段。優(yōu)選蛋白酶在氨基酸賴(lài)氨酸的羧基端和氨基酸精氨酸之間裂解肽鍵，在賴(lài)氨酸或精氨酸之后的氨基酸是脯氨酸的除外。這樣蛋白酶的實(shí)例是胰島素。用胰島素消化多肽的方法是常規(guī)的，并本領(lǐng)域是已知的。這樣方法的實(shí)例在實(shí)施例13中公開(kāi)。多肽的質(zhì)譜分析方法是常規(guī)的，本領(lǐng)域是已知的，包括但不限于基質(zhì)輔助激光解吸/離子化飛行時(shí)間質(zhì)譜(MALD1-TOF MS)。典型地，將含有從侯選多肽獲得的多肽片段混合物與發(fā)揮將激光能量轉(zhuǎn)移給樣品功能的基質(zhì)混合，產(chǎn)生離子化，優(yōu)選單同位素的多肽片段?？梢允褂玫幕|(zhì)的實(shí)例包括例如芥子酸或氰基-4-羥基肉桂酸。通過(guò)MALD1-TOF MS分析多肽方法的實(shí)例在實(shí)施例13中描述。離子化的多肽片段根據(jù)它們的m/z比分離，檢測(cè)生成m/z比對(duì)于強(qiáng)度的光譜。光譜包括表示從侯選多肽得到多肽片段的m/z值。對(duì)于任何給定的多肽，從胰島素消化得到的每個(gè)多肽片段的量應(yīng)當(dāng)是等摩爾的。但是，已知胰島素消化不總是100%有效，例如，一些位點(diǎn)被更有效地裂解。因此，當(dāng)MALD1-TOF MS用于確定m/ζ值時(shí)，每個(gè)m/z值的強(qiáng)度典型地是不相同的。一般說(shuō)來(lái)，光譜具有在絕大部分X-軸(即軸具有m/z比率的值)存在噪音的背景水平。這種噪音的背景水平依據(jù)運(yùn)行條件和使用的儀器而變化，容易通過(guò)光譜視覺(jué)分析鑒定。當(dāng)強(qiáng)度比噪音背景水平高至少2倍，至少3倍，至少4倍時(shí)，一個(gè)m/z值一般說(shuō)來(lái)被認(rèn)為代表一個(gè)多肽片段。光譜通常包括其它m/z值，其是假象，例如由以下原因?qū)е?不完全的消化、過(guò)分消化、在混合物中存在的其它多肽，或用于消化多肽的蛋白酶，包括從蛋白酶自水解得到的m/z值。這種用蛋白酶消化多肽的方法在本領(lǐng)域被認(rèn)為是可得到高度專(zhuān)一性的質(zhì)量指紋圖譜，能被用于準(zhǔn)確鑒定多肽和將其與其它多肽區(qū)分的方法。在本發(fā)明的這方面，當(dāng)侯選多肽通過(guò)質(zhì)譜法分析時(shí)，優(yōu)選將侯選多肽和來(lái)自參考微生物的多肽兩者共同制備和分析，因此可減少在樣品處理和操作條件上差異導(dǎo)致的任何潛在的假象，優(yōu)選，用于制備和分析兩種多肽的所有試劑都是相同的。例如，將來(lái)自參考微生物的多肽和侯選多肽在基本上相同的條件下分離，在基本上相同的條件下破碎，在相同的儀器和基本上相同的條件下通過(guò)MALD1-TOF MS分析。當(dāng)侯選多肽的質(zhì)量指紋圖譜有至少80%，至少90%，至少95%或基本上所有的m/z值出現(xiàn)在參考微生物多肽的光譜中時(shí)，侯選多肽的質(zhì)量指紋圖譜被認(rèn)為與來(lái)自參考微生物的多肽質(zhì)量指紋圖譜是類(lèi)似的，上述噪音的背景水平也出現(xiàn)在侯選多肽的光譜中。在另一方面，如果多肽具有在表2，3，4或5中描述的參考多肽的分子量，且質(zhì)量指紋圖譜包括如表2，3，4或5所列參考多肽的多肽片段的種群，則考慮該多肽是本發(fā)明的多肽。例如本發(fā)明多肽包括88kDa的多肽，包括具有質(zhì)量HVDVR，YSYER，II⑶YRR，IFTDYRK，ELKELGQK, YAQVKPIR, QMQFFGAR, SMQPFGGIR, VSGYAVNFIK, NHATAffQGFK, LffEQVMQLSK,SLGKEPEDQNR,DGISNTFSIVPK,AGVITGLPDAYGR, TSTFLDIYAER,SMQPFGGIRMAK, THNQGVFDAYSR,KAGVITGLPDAYGR， TLLYAINGGKDEK, IEMALHDTEIVR, AGEPFAPGANPMHGR, VALYGVDFLMEEK,KTHNQGVFDAYSR, YGFDLSRPAENFK, TSSIQYENDDIMR, KAGEPFAPGANPMHGR, RVALYGVDFLMEEK,LWEQVMQLSKEER, MLETNKNHATAffQGFK, MHDFNTMSTEMSEDVIR, YGNNDDRVDDIAVDLVER,ETLIDAMEHPEEYPQLTIR，YAQVKPIRNEEGLVVDFEIE⑶FPK的多肽片段的質(zhì)量指紋圖譜。可以通過(guò)質(zhì)譜方法確定侯選多肽的質(zhì)量指紋圖譜，例如通過(guò)MALD1-T0FMS。侯選多肽的質(zhì)量指紋圖譜一般具有另外的多肽片段，因此有不同于表2，3，4或5所列那些多肽的另外的m/z值。優(yōu)選，當(dāng)將候選多肽與在表2，3，4或5的多肽比較時(shí)，侯選多肽是從微生物中可分離出來(lái)的，優(yōu)選革蘭氏陽(yáng)性微生物， 更優(yōu)選微球菌科家族成員，優(yōu)選葡萄球菌屬物種，更優(yōu)選金黃色葡萄球菌。其它革蘭氏陽(yáng)性生物體包括棒狀桿菌屬物種、腸球菌某種、丹毒絲菌屬物種、皮球菌屬物種、李斯特菌屬物種、微球菌屬物種、分支桿菌屬物種和丹毒絲菌屬物種。侯選多肽可以通過(guò)在低金屬的條件下生長(zhǎng)微生物，隨后通過(guò)本文描述的方法分離多肽獲得。在本領(lǐng)域眾所周知在樣品處理期間，例如氧化和形成甲酰胺甲基衍生物，氨基酸的修飾可以意外引入。進(jìn)一步地，這些類(lèi)型的修飾改變多肽片段的m/z值。例如，如果多肽片段含有氧化的甲硫氨酸，其m/z值相對(duì)于不含氧化甲硫氨酸的相同片段將增加16。因此，在表2，3，4或5中有符號(hào)“氧化(M) ”的那些多肽片段的m/z值相對(duì)于不含氧化的甲硫氨酸的相同片段增加16。應(yīng)當(dāng)理解表2，3，4或5中多肽片段可以在樣品處理期間被修飾。
權(quán)利要求
1.組合物，所述組合物包含: 分離的全細(xì)胞，其包含分子量為88kDa、55kDa、38kDa、37kDa、36kDa、35kDa或33kDa的至少五種多肽，其中分子量通過(guò)在十二烷基硫酸鈉一聚丙烯基酰胺凝膠上的電泳測(cè)定，其中所述多肽由當(dāng)在包含鐵螯合劑的介質(zhì)中培養(yǎng)時(shí)的金黃色葡萄球菌ATCC菌株19636表達(dá)，并且不由當(dāng)在不含鐵螯合劑的介質(zhì)中生長(zhǎng)時(shí)的金黃色葡萄球菌ATCC菌株19636表達(dá)，其中組合物保護(hù)動(dòng)物對(duì)抗金黃色葡萄球菌ATCC菌株19636的激發(fā)。
2.權(quán)利要求1的組合物，其進(jìn)一步包含可藥用載體。
3.權(quán)利要求1的組合物，其中所述分離的全細(xì)胞進(jìn)一步表達(dá)具有分子量150kDa、132kDa、120kDa、75kDa、58kDa、50kDa、44kDa、43kDa、41kDa 或 40kDa 的至少一種多肽，所述多肽由當(dāng)在不含鐵螯合劑的介質(zhì)中生長(zhǎng)時(shí)的金黃色葡萄球菌ATCC菌株19636表達(dá)。
4.組合物在制備用于治療患有由葡萄球菌屬物種導(dǎo)致的感染或有風(fēng)險(xiǎn)患有由葡萄球菌屬物種導(dǎo)致的感染的患者感染的藥物中的用途，其中該組合物包含: 分離的全細(xì)胞，其包含分子量為88kDa、55kDa、38kDa、37kDa、36kDa、35kDa或33kDa的至少五種多肽，其中分子量通過(guò)在十二烷基硫酸鈉一聚丙烯基酰胺凝膠上的電泳測(cè)定，其中所述多肽由當(dāng)在包含鐵螯合劑的介質(zhì)中培養(yǎng)時(shí)的金黃色葡萄球菌ATCC菌株19636表達(dá)，并且不由當(dāng)在不含鐵螯合劑的介質(zhì)中生長(zhǎng)時(shí)的金黃色葡萄球菌ATCC菌株19636表達(dá)，其中組合物保護(hù)動(dòng)物對(duì)抗金黃色葡萄球菌ATCC菌株19636的激發(fā)。
5.權(quán)利要求4的用途，其中患者是哺乳動(dòng)物。
6.權(quán)利要求5的用途，其中哺乳動(dòng)物是人類(lèi)。
7.權(quán)利要求4的用途，其中葡萄球菌屬物種是金黃色葡萄球菌。
8.組合物在制備用于 治療患有由葡萄球菌屬物種導(dǎo)致的感染或有風(fēng)險(xiǎn)患有由葡萄球菌屬物種導(dǎo)致的感染的患者癥狀的藥物中的用途，其中該組合物包含: 分離的全細(xì)胞，其包含分子量為88kDa、55kDa、38kDa、37kDa、36kDa、35kDa或33kDa的至少五種多肽，其中分子量通過(guò)在十二烷基硫酸鈉一聚丙烯基酰胺凝膠上的電泳測(cè)定，其中所述多肽由當(dāng)在包含鐵螯合劑的介質(zhì)中培養(yǎng)時(shí)的金黃色葡萄球菌ATCC菌株19636表達(dá)，并且不由當(dāng)在不含鐵螯合劑的介質(zhì)中生長(zhǎng)時(shí)的金黃色葡萄球菌ATCC菌株19636表達(dá)，其中組合物保護(hù)動(dòng)物對(duì)抗金黃色葡萄球菌ATCC菌株19636的激發(fā)。
9.權(quán)利要求8的用途，其中患者是哺乳動(dòng)物。
10.權(quán)利要求9的用途，其中哺乳動(dòng)物是人類(lèi)。
11.權(quán)利要求8的用途，其中葡萄球菌屬物種是金黃色葡萄球菌。
12.組合物在制備用于減少在患有由葡萄球菌屬物種導(dǎo)致的感染或有風(fēng)險(xiǎn)患有由葡萄球菌屬物種導(dǎo)致的感染的患者中建群的藥物中的用途，其中組合物包含: 分離的全細(xì)胞，其包含分子量為88kDa、55kDa、38kDa、37kDa、36kDa、35kDa或33kDa的至少五種多肽，其中分子量通過(guò)在十二烷基硫酸鈉一聚丙烯基酰胺凝膠上的電泳測(cè)定，其中所述多肽由當(dāng)在包含鐵螯合劑的介質(zhì)中培養(yǎng)時(shí)的金黃色葡萄球菌ATCC菌株19636表達(dá)，并且不由當(dāng)在不含鐵螯合劑的介質(zhì)中生長(zhǎng)時(shí)的金黃色葡萄球菌ATCC菌株19636表達(dá)，其中組合物保護(hù)動(dòng)物對(duì)抗金黃色葡萄球菌ATCC菌株19636的激發(fā)。
13.權(quán)利要求12的用途，其中患者是哺乳動(dòng)物。
14.權(quán)利要求13的用途，其中哺乳動(dòng)物是人類(lèi)。
15.權(quán)利 要求12的用途，其中葡萄球菌屬物種是金黃色葡萄球菌。
全文摘要
本發(fā)明提供可從葡萄球菌屬物種分離出來(lái)的分離的多肽。本發(fā)明還提供包括一種或多種該多肽的組合物，以及所述多肽的制備方法和使用方法。
文檔編號(hào)A61K39/085GK103143006SQ201310020750
公開(kāi)日2013年6月12日 申請(qǐng)日期2006年2月14日 優(yōu)先權(quán)日2005年2月14日
發(fā)明者D.A.艾默里, D.E.斯特勞布, L.溫德林, L.L.合朗奧爾森 申請(qǐng)人:埃皮托皮克斯有限責(zé)任公司