專(zhuān)利名稱(chēng)：促甲狀腺素受體的表位區(qū)域和針對(duì)該區(qū)域的抗體的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及促甲狀腺素(TSH)受體的表位區(qū)域，及其用途和針對(duì)該區(qū)域的抗體，以及用于篩選針對(duì)TSH受體的自身抗體的試劑盒。
背景技術(shù)：
促甲狀腺素或甲狀腺刺激激素(TSH)是一種垂體激素，它在調(diào)節(jié)甲狀腺的功能上起重要作用。在下丘腦中形成的TRH能刺激TSH的釋放，并且TSH控制重要的甲狀腺激素如甲狀腺素(T4)和三-碘化甲腺氨酸(T3)的形成及釋放。根據(jù)反饋機(jī)理，血清中的甲狀腺激素的濃度會(huì)控制TSH的釋放。甲狀腺細(xì)胞中T3和T4的形成受TSH的刺激，其中在刺激步驟中垂體釋放的TSH與甲狀腺細(xì)胞膜上的TSH受體結(jié)合。在某些病理?xiàng)l件下，也會(huì)形成各種類(lèi)型的針對(duì)TSH受體的自身抗體。當(dāng)存在各種類(lèi)型的自身抗體時(shí)，由于TSH分子受到屏蔽，在TSH受體上T3和T4的生成和釋放會(huì)受到抑制，或者，另一方面，由于抗TSH受體的自身抗體模擬TSH的作用并且刺激甲狀腺激素的合成及釋放，使得甲狀腺激素會(huì)以一種不受控的方式被釋放。自身免疫甲狀腺疾病(AITD)是一種在世界不同人群中最常見(jiàn)的自身免疫病。一部分AITD病人，主要是有甲狀腺機(jī)能亢進(jìn)疾病的病人就具有前述的針對(duì)TSH受體的自身抗體。自身抗體會(huì)結(jié)合TSH受體并且通常會(huì)模擬TSH功能，它刺激甲狀腺產(chǎn)生高水平的甲狀腺激素。這些自身抗體具有刺激作用。在某些病人身上，自身抗體結(jié)合TSH受體但是不刺激甲狀腺激素的產(chǎn)生，這些抗體被稱(chēng)為具有封閉作用(J Sanders, Y Oda, S-ARoberts,M Maruyamaj J Furmaniakj B Rees Smith^Understanding the thyrotrophinreceptor function-structure relationship.^Bailliereis Clinical Endocrinologyand Metabolism.Ed.TF Davies199711 (3):451-479.Pub.Bailliere Tindall，London)。在診斷和治療AITD、尤其是甲狀腺機(jī)能亢進(jìn)疾病中，測(cè)定TSH受體的自身抗體非常重要。目前有三種分析方法用于測(cè)定TSH受體的自身抗體:(a)競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合分析，它測(cè)定TSH受體的自身抗體對(duì)TSH與TSH受體制備物結(jié)合的抑制能力；(b)生物分析，它測(cè)定TSH受體自身抗體剌激培養(yǎng)物中細(xì)胞表達(dá)TSH受體的能力；
(c)用TSH受體自身抗 體對(duì)TSH受體制備物的免疫沉淀。用這些分析方法對(duì)TSH受體自身抗體的測(cè)定在下列文獻(xiàn)中有記載:J Sanders, YOdaj S-A Roberts,M Maruyamaj J Furmaniakj B Rees Smith^Understanding thethyrotrophin receptor function-structure relationship.^Bailliereis ClinicalEndocrinology and Metabolism.Ed.T F Daviesl99711 (3):451-479.Pub.BailliereTindall, London, and J Sanders, Y Odaj S Roberts, A Kiddie, T Richards, J Bolton, VMcGrath, S Walters, D Jaskolskij J Furmaniak，B Rees Smith〃The interaction of TSHreceptor autoantibodies with125I_labelled TSH receptor."Journal of ClinicalEndocrinology and Metabolisml99984(10):3797-3802.
但是，上述目前這些用于測(cè)定TSH受體自身抗體的分析方法中存在一些缺陷。競(jìng)爭(zhēng)分析(a)可用于不同的類(lèi)型，并且非常敏感，而且在常規(guī)使用中相對(duì)容易操作。但是，現(xiàn)在已知的用于檢測(cè)TSH受體自身抗體的競(jìng)爭(zhēng)性放射受體分析方法具有一些使用上的根本性的弱點(diǎn):這是因?yàn)閷?duì)于受體的變化或與之結(jié)合的生物分子的變化，TSH受體制備物的結(jié)合能力通常會(huì)發(fā)生敏感的反應(yīng)。肽或蛋白這些生物分子，例如激素或自身抗體，與受體的結(jié)合在性質(zhì)上是非常復(fù)雜的，并且受體和生物分子間的特異性結(jié)合對(duì)于受體的結(jié)構(gòu)變化尤其敏感，這種敏感性遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過(guò)涉及受體的大部分免疫檢測(cè)中作為基礎(chǔ)的抗原/抗體結(jié)合對(duì)的情況。為了固定和/或標(biāo)記TSH受體，通常會(huì)導(dǎo)致結(jié)構(gòu)改變，從而大大影響了受體的功能。就生物分析(b)而言，它由于昂貴、費(fèi)時(shí)長(zhǎng)、對(duì)操作人員的技術(shù)要求高，因而不適合常規(guī)使用。而免疫沉淀分析(C)，目前可用的這類(lèi)免疫沉淀分析方法在實(shí)際中不具備檢測(cè)TSH受體自身抗體所需的敏感度。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明減少了現(xiàn)有技術(shù)檢測(cè)TSH受體自身抗體時(shí)存在的問(wèn)題。尤其是，本發(fā)明提供了篩選TSH受體自身抗體的診斷方法和試劑盒，它比現(xiàn)有的診斷方法和試劑盒具有更高的敏感度，并且，如果需要的話(huà)，允許在上述的競(jìng)爭(zhēng)分析方法中使用一種或多種TSH受體的競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合對(duì)應(yīng)物或競(jìng)爭(zhēng)因子。尤其是，本發(fā)明在篩選TSH受體自身抗體的診斷方法和試劑盒中使用一種或多種TSH受體特定的表位區(qū)域。因此，本發(fā)明提供了一段多肽序列，用于診斷或治療與TSH受體的免疫反應(yīng)相關(guān)的自身免疫疾病，該多肽序列含有一個(gè)或多個(gè)TSH受體表位的部分或全部一級(jí)結(jié)構(gòu)(它是氨基酸殘基的連續(xù)序列)，針對(duì)TSH受體的自身抗體和/或淋巴細(xì)胞能與這些表位發(fā)生相互作用(在允許TSH受體和這些自身抗體或淋巴細(xì)胞相互作用的合適條件下)，所述的多肽序列包含下列序列、由這些序列組成，或者主要是由下列序列組成:TSH受體的22-91位氨基酸、TSH受體的246-260位氨基酸、TSH受體的260-363位氨基酸、和TSH受體的380-418位氨基酸中的一個(gè)或多個(gè)，或者一個(gè)或多個(gè)突變體、類(lèi)似物、衍生物或其中的片段，或這些片段的突變體、類(lèi)似物或衍生物。(所述的多肽序列尤其包含下列序列、由這些序列組成，或者主要是由下列序列組成:TSH受體的277-296位氨基酸的一級(jí)結(jié)構(gòu)，或TSH受體的277-296位氨基酸的一個(gè)或多個(gè)突變體、類(lèi)似物、衍生物或它的片段，或者是它的片段的突變體、類(lèi)似物或衍生物；和/或TSH受體的246-260位氨基酸的一級(jí)結(jié)構(gòu)，或TSH受體的246-260位氨基酸的一個(gè)或多個(gè)突變體、類(lèi)似物、衍生物或它的片段，或者是它的片段的突變體、類(lèi)似物或衍生物)；其中，針對(duì)TSH受體的自身抗體和/或淋巴細(xì)胞能與這些多肽序列發(fā)生相互作用(在允許TSH受體和這些自身抗體或淋巴細(xì)胞相互作用的合適條件下)，從而實(shí)現(xiàn)診斷和治療的目的。更優(yōu)選地，本發(fā)明提供了一段多肽序列，用于診斷或治療與TSH受體的免疫反應(yīng)相關(guān)的自身免疫疾病，該多肽序列含有或由一個(gè)或多個(gè)TSH受體表位的部分或全部一級(jí)結(jié)構(gòu)組成，或主要由該一級(jí)結(jié)構(gòu)組成 ，針對(duì)TSH受體的自身抗體能與這些多肽序列發(fā)生相互作用(在允許TSH受體和這些自身抗體相互作用的合適條件下)，所述的多肽序列包含下列序列、由這些序列組成，或者主要是由下列序列組成:TSH受體的22-91位氨基酸、TSH受體的246-260位氨基酸、TSH受體的260-363位氨基酸、和TSH受體的380-418位氨基酸中的一個(gè)或多個(gè)，上述序列中的一個(gè)或多個(gè)突變體、類(lèi)似物、衍生物或其中的片段，或這些片段的突變體、類(lèi)似物或衍生物。(所述的多肽序列尤其包含下列序列、由這些序列組成，或者主要是由下列序列組成:TSH受體的277-296位氨基酸的一級(jí)結(jié)構(gòu)，或TSH受體277-296位氨基酸的一個(gè)或多個(gè)突變體、類(lèi)似物、衍生物或它的片段，或者是它的片段的突變體、類(lèi)似物或衍生物；和/或TSH受體的246-260位氨基酸的一級(jí)結(jié)構(gòu)，或TSH受體的246-260位氨基酸的一個(gè)或多個(gè)突變體、類(lèi)似物、衍生物或它的片段，或者是它的片段的突變體、類(lèi)似物或衍生物)；其中，針對(duì)TSH受體的自身抗體能與這些多肽序列發(fā)生相互作用(在允許TSH受體和這些自身抗體相互作用的合適條件下)，從而實(shí)現(xiàn)診斷和治療的目的。此外，本發(fā)明提供了一段多肽 序列，用于診斷或治療與TSH受體的免疫反應(yīng)相關(guān)的自身免疫疾病，該多肽序列含有或由一個(gè)或多個(gè)TSH受體表位的部分或全部一級(jí)結(jié)構(gòu)組成，或主要由該一級(jí)結(jié)構(gòu)組成，針對(duì)TSH受體的淋巴細(xì)胞能與這些多肽序列發(fā)生相互作用(在允許TSH受體和這些淋巴細(xì)胞相互作用的合適條件下)，所述的多肽序列包含下列序列、由這些序列組成，或者主要是由下列序列組成:TSH受體的22-91位氨基酸、TSH受體的246-260位氨基酸、TSH受體的260-363位氨基酸、和TSH受體的380-418位氨基酸中的一個(gè)或多個(gè)，上述序列中的一個(gè)或多個(gè)突變體、類(lèi)似物、衍生物或其中的片段，或這些片段的突變體、類(lèi)似物或衍生物。(所述的多肽序列尤其包含下列序列、由這些序列組成，或者主要是由下列序列組成:TSH受體的277-296位氨基酸的一級(jí)結(jié)構(gòu)，或TSH受體277-296位氨基酸的一個(gè)或多個(gè)突變體、類(lèi)似物、衍生物或它的片段，或者是它的片段的突變體、類(lèi)似物或衍生物；和/或TSH受體的246-260位氨基酸的一級(jí)結(jié)構(gòu)，或TSH受體的246-260位氨基酸的一個(gè)或多個(gè)突變體、類(lèi)似物、衍生物或它的片段，或者是它的片段的突變體、類(lèi)似物或衍生物)；其中，針對(duì)TSH受體的淋巴細(xì)胞能與這些多肽序列發(fā)生相互作用(在允許TSH受體和這些淋巴細(xì)胞相互作用的合適條件下)，從而實(shí)現(xiàn)診斷和治療的目的。本發(fā)明進(jìn)一步提供了一段多肽序列，用于診斷或治療與TSH受體的免疫反應(yīng)相關(guān)的自身免疫疾病，該多肽序列含有或由一個(gè)或多個(gè)TSH受體表位的部分或全部一級(jí)結(jié)構(gòu)組成，或主要由該一級(jí)結(jié)構(gòu)組成，針對(duì)TSH受體的自身抗體和/或淋巴細(xì)胞能與這些表位發(fā)生相互作用(在允許TSH受體和這些自身抗體或淋巴細(xì)胞相互作用的合適條件下)，所述的多肽序列包含下列序列、由這些序列組成，或者主要是由下列序列組成:TSH受體的22-91位氨基酸、TSH受體的246-260位氨基酸、TSH受體的260-363位氨基酸、和TSH受體的380-418位氨基酸中的一個(gè)或多個(gè)，上述序列的一個(gè)或多個(gè)突變體、類(lèi)似物、衍生物或其中的片段，或這些片段的突變體、類(lèi)似物或衍生物。如圖1，3，5和7中描述的任一段氨基酸序列，(所述的多肽序列尤其包含下列序列、由這些序列組成，或者主要是由下列序列組成:如圖5所描述的任一氨基酸序列中TSH受體的277-296位氨基酸的一級(jí)結(jié)構(gòu)，或如圖5所描述的任一氨基酸序列的TSH受體的277-296位氨基酸的一個(gè)或多個(gè)突變體、類(lèi)似物、衍生物或它的片段，或者是它的片段的突變體、類(lèi)似物或衍生物；和/或如圖3所描述的任一氨基酸序列的TSH受體的246-260位氨基酸的一級(jí)結(jié)構(gòu)，或如圖3所描述的任一氨基酸序列的TSH受體的246-260位氨基酸的一個(gè)或多個(gè)突變體、類(lèi)似物、衍生物或它的片段，或者是它的片段的突變體、類(lèi)似物或衍生物)；其中，針對(duì)TSH受體的自身抗體和/或淋巴細(xì)胞能與這些多肽序列發(fā)生相互作用(在允許TSH受體和這些自身抗體或淋巴細(xì)胞相互作用的合適條件下)，從而實(shí)現(xiàn)所述的診斷和治療的目的。更特殊的是，本發(fā)明進(jìn)一步提供了一段多肽序列，用于診斷或治療與TSH受體的免疫反應(yīng)相關(guān)的自身免疫疾病，該多肽序列含有或由一個(gè)或多個(gè)TSH受體表位的部分或全部一級(jí)結(jié)構(gòu)組成,或主要由該一級(jí)結(jié)構(gòu)組成,針對(duì)TSH受體的自身抗體能與這些多肽序列發(fā)生相互作用(在允許TSH受體和這些自身抗體相互作用的合適條件下)，所述的多肽序列包含下列序列、由這些序列組成，或者主要是由下列序列組成:TSH受體的22-91位氨基酸、TSH受體的246-260位氨基酸、TSH受體的260-363位氨基酸、和TSH受體的380-418位氨基酸中的一個(gè)或多個(gè)，或者上述序列中的一個(gè)或多個(gè)突變體、類(lèi)似物、衍生物或其中的片段，或這些片段的突變體、類(lèi)似物或衍生物；如圖1，3，5和7任一圖中描述的任一段氨基酸序列，(所述的多肽序列尤其包含下列序列、由這些序列組成，或 者主要是由下列序列組成:如圖5所描述的任一氨基酸序列的TSH受體的277-296位氨基酸的一級(jí)結(jié)構(gòu)，或如圖5所描述的任一氨基酸序列的TSH受體的277-296位氨基酸的一個(gè)或多個(gè)突變體、類(lèi)似物、衍生物或它的片段，或者是它的片段的突變體、類(lèi)似物或衍生物；和/或如圖3所描述的任一氨基酸序列的TSH受體的246-260位氨基酸的一級(jí)結(jié)構(gòu)，或如圖3所描述的任一氨基酸序列的TSH受體的246-260位氨基酸的一個(gè)或多個(gè)突變體、類(lèi)似物、衍生物或它的片段，或者是它的片段的突變體、類(lèi)似物或衍生物)；其中，針對(duì)TSH受體的自身抗體能與這些多肽序列發(fā)生相互作用(在允許TSH受體和這些自身抗體相互作用的合適條件下)，從而實(shí)現(xiàn)診斷和治療的目的。本發(fā)明進(jìn)一步提供了一段多肽序列，用于診斷或治療與TSH受體的免疫反應(yīng)相關(guān)的自身免疫疾病，該多肽序列含有或由一個(gè)或多個(gè)TSH受體表位的部分或全部一級(jí)結(jié)構(gòu)組成，或主要由該一級(jí)結(jié)構(gòu)組成，針對(duì)TSH受體的淋巴細(xì)胞能與這些多肽序列發(fā)生相互作用(在允許TSH受體和這些淋巴細(xì)胞相互作用的合適條件下)，所述的多肽序列包含下列序列、由這些序列組成，或者主要是由下列序列組成:TSH受體的22-91位氨基酸、TSH受體的246-260位氨基酸、TSH受體的260-363位氨基酸、和TSH受體的380-418位氨基酸中的一個(gè)或多個(gè)，或上述序列的一個(gè)或多個(gè)突變體、類(lèi)似物、衍生物或其中的片段，或這些片段的突變體、類(lèi)似物或衍生物。如圖1，3，5和7任一圖中描述的任一段氨基酸序列，(所述的多肽序列尤其包含下列序列、由這些序列組成，或者主要是由下列序列組成:如圖5所描述的任一氨基酸序列的TSH受體的277-296位氨基酸的一級(jí)結(jié)構(gòu)，或如圖5所描述的任一氨基酸序列的TSH受體的277-296位氨基酸的一個(gè)或多個(gè)突變體、類(lèi)似物、衍生物或它的片段，或者是它的片段的突變體、類(lèi)似物或衍生物；和/或如圖3所描述的任一氨基酸序列的TSH受體的246-260位氨基酸的一級(jí)結(jié)構(gòu)，或如圖3所描述的任一氨基酸序列的TSH受體的246-260位氨基酸的一個(gè)或多個(gè)突變體、類(lèi)似物、衍生物或它的片段，或者是它的片段的突變體、類(lèi)似物或衍生物)；其中，針對(duì)TSH受體的淋巴細(xì)胞能與這些多肽序列發(fā)生相互作用(在允許TSH受體和這些淋巴細(xì)胞相互作用的合適條件下)，從而實(shí)現(xiàn)診斷和治療的目的。更加優(yōu)選，在診斷或治療中優(yōu)選使用下述的一段多肽序列，或包含一個(gè)或多個(gè)下列一級(jí)結(jié)構(gòu)、由這些一級(jí)結(jié)構(gòu)組成，或者主要是由這些一級(jí)結(jié)構(gòu)組成的序列:TSH受體的32-41位氨基酸、TSH受體的36_42位氨基酸、TSH受體的247-260位氨基酸、TSH受體的277-296位氨基酸、和TSH受體的381-385位氨基酸中的一個(gè)或多個(gè)，或上述序列中的一個(gè)或多個(gè)突變體、類(lèi)似物、衍生物或其中的片段，或這些片段的突變體、類(lèi)似物或衍生物。(所述的多肽序列尤其包含下列序列、由這些序列組成，或者主要是由下列序列組成:TSH受體的277-296位氨基酸的一級(jí)結(jié)構(gòu)，或TSH受體277- 296位氨基酸的一個(gè)或多個(gè)突變體、類(lèi)似物、衍生物或它的片段，或者是它的片段的突變體、類(lèi)似物或衍生物；和/或TSH受體的247-260位氨基酸的一級(jí)結(jié)構(gòu)，或TSH受體的246-260位氨基酸的一個(gè)或多個(gè)突變體、類(lèi)似物、衍生物或它的片段，或者是它的片段的突變體、類(lèi)似物或衍生物)；尤其是，根據(jù)本發(fā)明優(yōu)選診斷或治療用的多肽序列使用TSH受體的第277-296位氨基酸，或它的一個(gè)或多個(gè)突變體、類(lèi)似物、衍生物或它的片段，或者是它的片段的突變體、類(lèi)似物或衍生物。尤其是，根據(jù)本發(fā)明優(yōu)選診斷或治療用的多肽序列使用TSH受體的第246-260位氨基酸，或它的一個(gè)或多個(gè)突變體、類(lèi)似物、衍生物或它的片段，或者是它的片段的突變體、類(lèi)似物或衍生物。尤其是，根據(jù)本發(fā)明優(yōu)選診斷或治療用的多肽序列使用TSH受體的第247-260位氨基酸，或它的一個(gè)或多個(gè)突變體、類(lèi)似物、衍生物或它的片段，或者是它的片段的突變體、類(lèi)似物或衍生物。本發(fā)明特別優(yōu)選的診斷或治療應(yīng)用包含與TSH受體的免疫反應(yīng)相關(guān)的自身免疫疾病的診斷和治療:(i)多肽序列含有或由一個(gè)或多個(gè)TSH受體表位的部分或全部一級(jí)結(jié)構(gòu)組成，或主要由該部分或全部一級(jí)結(jié)構(gòu)組成，針對(duì)TSH受體的自身抗體和/或淋巴細(xì)胞能與這些表位發(fā)生相互作用(在允許TSH受體和這些自身抗體或淋巴細(xì)胞相互作用的合適條件下)，所述的多肽序列包含下列一級(jí)結(jié)構(gòu)、由這些一級(jí)結(jié)構(gòu)組成，或者主要是由下列一級(jí)結(jié)構(gòu)組成:TSH受體的277-296位氨基酸，或TSH受體的277-296位氨基酸的一個(gè)或多個(gè)突變體、類(lèi)似物、衍生物或其中的片段，或這些片段的突變體、類(lèi)似物或衍生物；和(ii)多肽序列含有或由一個(gè)或多個(gè)TSH受體表位的部分或全部一級(jí)結(jié)構(gòu)組成，或主要由該部分或全部一級(jí)結(jié)構(gòu)組成，針對(duì)TSH受體的自身抗體和/或淋巴細(xì)胞能與這些表位發(fā)生相互作用(在允許TSH受體和這些自身抗體或淋巴細(xì)胞相互作用的合適條件下)，所述的多肽序列包含下列一級(jí)結(jié)構(gòu)、由這些一級(jí)結(jié)構(gòu)組成，或者主要是由下列一級(jí)結(jié)構(gòu)組成:TSH受體的246-260位氨基酸，或TSH受體的246-260位氨基酸的一個(gè)或多個(gè)突變體、類(lèi)似物、衍生物或其中的片段，或這些片段的突變體、類(lèi)似物或衍生物；其中，針對(duì)TSH受體的自身抗體和/或淋巴細(xì)胞能與這些多肽序列發(fā)生相互作用(在允許TSH受體和這些自身抗體或淋巴細(xì)胞相互作用的合適條件下)，從而實(shí)現(xiàn)診斷和治療的目的。尤其是，這些診斷或治療用途中可包含:(i)多肽序列含有或由一個(gè)或多個(gè)TSH受體表位的部分或全部一級(jí)結(jié)構(gòu)組成，或主要由該部分或全部一級(jí)結(jié)構(gòu)組成，針對(duì)TSH受體的自身抗體能與這些多肽序列發(fā)生相互作用(在允許TSH受體和這些自身抗體相互作用的合適條件下)，所述的多肽序列包含下列一級(jí)結(jié)構(gòu)、由這些一級(jí)結(jié)構(gòu)組成，或者主要是由下列一級(jí)結(jié)構(gòu)組成:TSH受體的277-296位氨基酸，或TSH受體的277-296位氨基酸的一個(gè)或多個(gè)突變體、類(lèi)似物、衍生物或其中的片段，或這些片段的突變體、類(lèi)似物或衍生物；和(ii)多肽序列含有或由一個(gè)或多個(gè)TSH受體表位的部分或全部一級(jí)結(jié)構(gòu)組成，或主要由該部分或全部一級(jí)結(jié)構(gòu)組成，針對(duì)TSH受體的自身抗體能與這些多肽序列發(fā)生相互作用(在允許TSH受體和這 些自身抗體相互作用的合適條件下)，所述的多肽序列包含下列一級(jí)結(jié)構(gòu)、由這些一級(jí)結(jié)構(gòu)組成，或者主要是由下列一級(jí)結(jié)構(gòu)組成:TSH受體的246-260位氨基酸，或TSH受體的246-260位氨基酸的一個(gè)或多個(gè)突變體、類(lèi)似物、衍生物或其中的片段，或這些片段的突變體、類(lèi)似物或衍生物；其中，針對(duì)TSH受體的自身抗體能與這些多肽序列發(fā)生相互作用(在允許TSH受體和這些自身抗體相互作用的合適條件下)，從而實(shí)現(xiàn)診斷和治療的目的。此外,這些診斷或治療用途還包含:(i)多肽序列含有或由一個(gè)或多個(gè)TSH受體表位的部分或全部一級(jí)結(jié)構(gòu)組成，或主要由該部分或全部一級(jí)結(jié)構(gòu)組成，針對(duì)TSH受體的淋巴細(xì)胞能與這些多肽序列發(fā)生相互作用(在允許TSH受體和這些淋巴細(xì)胞相互作用的合適條件下)，所述的多肽序列包含下列一級(jí)結(jié)構(gòu)、由這些一級(jí)結(jié)構(gòu)組成，或者主要是由下列一級(jí)結(jié)構(gòu)組成:TSH受體的277-296位氨基酸，或TSH受體的277-296位氨基酸的一個(gè)或多個(gè)突變體、類(lèi)似物、衍生物或其中的片段，或這些片段的突變體、類(lèi)似物或衍生物；和(ii)多肽序列含有或由一個(gè)或多個(gè)TSH受體表位的部分或全部一級(jí)結(jié)構(gòu)組成，或主要由該部分或全部一級(jí)結(jié)構(gòu)組成，針對(duì)TSH受體的淋巴細(xì)胞能與這些多肽序列發(fā)生相互作用(在允許TSH受體和這些淋巴細(xì)胞相互作用的合適條件下)，所述的多肽序列包含下列一級(jí)結(jié)構(gòu)、由這些一級(jí)結(jié)構(gòu)組成，或者主要是由下列一級(jí)結(jié)構(gòu)組成:TSH受體的246-260位氨基酸，或TSH受體的246-260位氨基酸的一個(gè)或多個(gè)突變體、類(lèi)似物、衍生物或其中的片段，或這些片段的突變體、類(lèi)似物或衍生物；其中，針對(duì)TSH受體的淋巴細(xì)胞能與這些多肽序列發(fā)生相互作用(在允許TSH受體和這些淋巴細(xì)胞相互作用的合適條件下)，從而實(shí)現(xiàn)診斷和治療的目的。本發(fā)明特別優(yōu)選的診斷或治療應(yīng)用包含與TSH受體的免疫反應(yīng)相關(guān)的自身免疫疾病的診斷和治療:⑴多肽序列含有或由一個(gè)或多個(gè)TSH受體表位的部分或全部一級(jí)結(jié)構(gòu)組成，或主要由該部分或全部一級(jí)結(jié)構(gòu)組成，針對(duì)TSH受體的自身抗體和/或淋巴細(xì)胞能與這些多肽序列發(fā)生相互作用(在允許TSH受體和這些自身抗體或淋巴細(xì)胞相互作用的合適條件下)，所述的多肽序列包含下列一級(jí)結(jié)構(gòu)、由這些一級(jí)結(jié)構(gòu)組成，或者主要是由下列一級(jí)結(jié)構(gòu)組成:如圖5所示的任一個(gè)氨基酸序列的TSH受體的277-296位氨基酸，或如圖5所示的任一個(gè)氨基酸序列的TSH受體的277-296位氨基酸的一個(gè)或多個(gè)突變體、類(lèi)似物、衍生物或其中的片段，或這些片段的突變體、類(lèi)似物或衍生物；和(ii)多肽序列含有或由一個(gè)或多個(gè)TSH受體表位的部分或全部一級(jí)結(jié)構(gòu)組成，或主要由該部分或全部一級(jí)結(jié)構(gòu)組成，針對(duì)TSH受體的自身抗體和/或淋巴細(xì)胞能與這些表位發(fā)生相互作用(在允許TSH受體和這些自身抗體或淋巴細(xì)胞相互作用的合適條件下)，所述的多肽序列包含下列一級(jí)結(jié)構(gòu)、由這些一級(jí)結(jié)構(gòu)組成，或者主要是由下列一級(jí)結(jié)構(gòu)組成:如圖3所示的任一個(gè)氨基酸序列的TSH受體的246-260位氨基酸，或如圖3所示的任一個(gè)氨基酸序列的TSH受體的246-260位氨基酸的一個(gè)或多個(gè)突變體、類(lèi)似物、衍生物或其中的片段，或這些片段的突變體、類(lèi)似物或衍生物；其中，針對(duì)TSH受體的自身抗體和/或淋巴細(xì)胞能與這些多肽序列發(fā)生相互作用(在允許TSH受體和這些自身 抗體或淋巴細(xì)胞相互作用的合適條件下)，從而實(shí)現(xiàn)診斷和治療的目的。尤其是，這些診斷或治療用途包含:⑴多肽序列含有或由一個(gè)或多個(gè)TSH受體表位的部分或全部一級(jí)結(jié)構(gòu)組成，或主要由該部分或全部一級(jí)結(jié)構(gòu)組成，針對(duì)TSH受體的自身抗體能與這些多肽序列發(fā)生相互作用(在允許TSH受體和這些自身抗體相互作用的合適條件下)，所述的多肽序列包含下列一級(jí)結(jié)構(gòu)、由這些一級(jí)結(jié)構(gòu)組成，或者主要是由下列一級(jí)結(jié)構(gòu)組成:如圖5所示的任一個(gè)氨基酸序列中的TSH受體的277-296位氨基酸，或如圖5所示的任一個(gè)氨基酸序列的TSH受體的277-296位氨基酸的一個(gè)或多個(gè)突變體、類(lèi)似物、衍生物或其中的片段，或這些片段的突變體、類(lèi)似物或衍生物；和(ii)多肽序列含有或由一個(gè)或多個(gè)TSH受體表位的部分或全部一級(jí)結(jié)構(gòu)組成，或主要由該部分或全部一級(jí)結(jié)構(gòu)組成，針對(duì)TSH受體的自身抗體能與這些多肽序列發(fā)生相互作用(在允許TSH受體和這些自身抗體相互作用的合適條件下)，所述的多肽序列包含下列一級(jí)結(jié)構(gòu)、由這些一級(jí)結(jié)構(gòu)組成，或者主要是由下列一級(jí)結(jié)構(gòu)組成:如圖3所示的任一個(gè)氨基酸序列中的TSH受體的246-260位氨基酸，或如圖3所示的任一個(gè)氨基酸序列中的TSH受體的246-260位氨基酸的一個(gè)或多個(gè)突變體、類(lèi)似物、衍生物或其中的片段，或這些片段的突變體、類(lèi)似物或衍生物；其中，針對(duì)TSH受體的自身抗體能與這些多肽序列發(fā)生相互作用(在允許TSH受體和這些自身抗體相互作用的合適條件下)，從而實(shí)現(xiàn)診斷和治療的目的。此外，這些診斷或治療用途可包含:(i)多肽序列含有或由一個(gè)或多個(gè)TSH受體表位的部分或全部一級(jí)結(jié)構(gòu)組成，或主要由該部分或全部一級(jí)結(jié)構(gòu)組成，針對(duì)TSH受體的淋巴細(xì)胞能與這些多肽序列發(fā)生相互作用(在允許TSH受體和這些淋巴細(xì)胞相互作用的合適條件下)，所述的多肽序列包含下列一級(jí)結(jié)構(gòu)、由這些一級(jí)結(jié)構(gòu)組成，或者主要是由下列一級(jí)結(jié)構(gòu)組成:如圖5所示的任一個(gè)氨基酸序列中的TSH受體的277-296位氨基酸，或如圖5所示的任一個(gè)氨基酸序列中的TSH受體的277-296位氨基酸的一個(gè)或多個(gè)突變體、類(lèi)似物、衍生物或其中的片段，或這些片段的突變體、類(lèi)似物或衍生物；和(ii)多肽序列含有或由一個(gè)或多個(gè)TSH受體表位的部分或全部一級(jí)結(jié)構(gòu)組成，或主要由該部分或全部一級(jí)結(jié)構(gòu)組成，針對(duì)TSH受體的淋巴細(xì)胞能與這些多肽序列發(fā)生相互作用(在允許TSH受體和這些淋巴細(xì)胞相互作用的合適條件下)，所述的多肽序列包含下列一級(jí)結(jié)構(gòu)、由這些一級(jí)結(jié)構(gòu)組成，或者主要是由下列一級(jí)結(jié)構(gòu)組成:如圖3所示的任一個(gè)氨基酸序列中的TSH受體的246-260位氨基酸，或如圖3所示的任一個(gè)氨基酸序列中的TSH受體的246-260位氨基酸的一個(gè)或多個(gè)突變體、類(lèi)似物、衍生物或其中的片段，或這些片段的突變體、類(lèi)似物或衍生物；其中，針對(duì)TSH受體的淋巴細(xì)胞能與這些多肽序列發(fā)生相互作用(在允許TSH受體和這些淋巴細(xì)胞相互作用的合適條件下)，從而實(shí)現(xiàn)診斷和治療的目的。本發(fā)明進(jìn)一步優(yōu)選上述的診斷或治療用途，其利用:(i)多肽序列含有或由一個(gè)或多個(gè)TSH受體表位的部分或全部一級(jí)結(jié)構(gòu)組成，或主要由該部分或全部一級(jí)結(jié)構(gòu)組成，針對(duì)TSH受體的自身抗體和/或淋巴細(xì)胞能與這些表位發(fā)生相互作用(在允許TSH受體和這些自身抗體或淋巴細(xì)胞相互作用的合適條件下)，所述的多肽序列包含下列一級(jí)結(jié)構(gòu)、由這些一級(jí)結(jié)構(gòu)組成，或者主要是由下列一級(jí)結(jié)構(gòu)組成:TSH受體的277-296位氨基酸，或TSH受體的277-296位氨基酸的一個(gè)或多個(gè)突變體、類(lèi)似物、衍生物或其中的片段 ，或這些片段的突變體、類(lèi)似物或衍生物；和(ii)多肽序列含有或由一個(gè)或多個(gè)TSH受體表位的部分或全部一級(jí)結(jié)構(gòu)組成，或主要由該部分或全部一級(jí)結(jié)構(gòu)組成，針對(duì)TSH受體的自身抗體和/或淋巴細(xì)胞能與這些表位發(fā)生相互作用(在允許TSH受體和這些自身抗體或淋巴細(xì)胞相互作用的合適條件下)，所述的多肽序列包含下列一級(jí)結(jié)構(gòu)、由這些一級(jí)結(jié)構(gòu)組成，或者主要是由下列一級(jí)結(jié)構(gòu)組成:TSH受體的246-260位氨基酸，或TSH受體的246-260位氨基酸的一個(gè)或多個(gè)突變體、類(lèi)似物、衍生物或其中的片段，或這些片段的突變體、類(lèi)似物或衍生物；進(jìn)一步利用:(iii)多肽序列含有或由一個(gè)或多個(gè)TSH受體表位的部分或全部一級(jí)結(jié)構(gòu)組成，或主要由該部分或全部一級(jí)結(jié)構(gòu)組成，針對(duì)TSH受體的自身抗體和/或淋巴細(xì)胞能與這些表位發(fā)生相互作用(在允許TSH受體和這些自身抗體或淋巴細(xì)胞相互作用的合適條件下)，所述的多肽序列包含下列一級(jí)結(jié)構(gòu)、由這些一級(jí)結(jié)構(gòu)組成，或者主要是由下列一級(jí)結(jié)構(gòu)組成:TSH受體的381-385位氨基酸，或TSH受體的381-385位氨基酸的一個(gè)或多個(gè)突變體、類(lèi)似物、衍生物或其中的片段，或這些片段的突變體、類(lèi)似物或衍生物。尤其是，這些優(yōu)選的診斷或治療用途用到:⑴多肽序列含有或由一個(gè)或多個(gè)TSH受體表位的部分或全部一級(jí)結(jié)構(gòu)組成，或主要由該部分或全部一級(jí)結(jié)構(gòu)組成，針對(duì)TSH受體的自身抗體和/或淋巴細(xì)胞能與這些表位發(fā)生相互作用(在允許TSH受體和這些自身抗體或淋巴細(xì)胞相互作用的合適條件下)，所述的多肽序列包含下列一級(jí)結(jié)構(gòu)、由這些一級(jí)結(jié)構(gòu)組成，或者主要是由下列一級(jí)結(jié)構(gòu)組成:如圖5所示的任一個(gè)氨基酸序列中的TSH受體的277-296位氨基酸，或如圖5所示的任一個(gè)氨基酸序列中的TSH受體的277-296位氨基酸的一個(gè)或多個(gè)突變體、類(lèi)似物、衍生物或其中的片段，或這些片段的突變體、類(lèi)似物或衍生物；和(ii)多肽序列含有或由一個(gè)或多個(gè)TSH受體表位的部分或全部一級(jí)結(jié)構(gòu)組成，或主要由該部分或全部一級(jí)結(jié)構(gòu)組成，針對(duì)TSH受體的自身抗體和/或淋巴細(xì)胞能與這些表位發(fā)生相互作用(在允許TSH受體和這些自身抗體或淋巴細(xì)胞相互作用的合適條件下)，所述的多肽序列包含下列一級(jí)結(jié)構(gòu)、由這些一級(jí)結(jié)構(gòu)組成，或者主要是由下列一級(jí)結(jié)構(gòu)組成:如圖3所示的任一個(gè)氨基酸序列中的TSH受體的246-260位氨基酸，或如圖3所示的任一個(gè)氨基酸序列中的TSH受體的246-260位氨基酸的一個(gè)或多個(gè)突變體、類(lèi)似物、衍生物或其中的片段，或這些片段的突變體、類(lèi)似物或衍生物；和(iii)多肽序列含有或由一個(gè)或多個(gè)TSH受體表位的部分或全部一級(jí)結(jié)構(gòu)組成，或主要由該部分或全部一級(jí)結(jié)構(gòu)組成，針對(duì)TSH受體的自身抗體和/或淋巴細(xì)胞能與這些表位發(fā)生相互作用(在允許 TSH受體和這些自身抗體或淋巴細(xì)胞相互作用的合適條件下)，所述的多肽序列包含下列一級(jí)結(jié)構(gòu)、由這些一級(jí)結(jié)構(gòu)組成，或者主要是由下列一級(jí)結(jié)構(gòu)組成:如圖7所示的任一個(gè)氨基酸序列中的TSH受體的381-385位氨基酸，或如圖7所示的任一個(gè)氨基酸序列中的TSH受體的381-385位氨基酸的一個(gè)或多個(gè)突變體、類(lèi)似物、衍生物或其中的片段，或這些片段的突變體、類(lèi)似物或衍生物。技術(shù)人員結(jié)合相應(yīng)的圖能更好理解，上述的氨基酸序列可以是人的、豬的、牛的、犬科動(dòng)物的、貓科動(dòng)物的、小鼠的、大鼠的或來(lái)源于綿羊的，上述每一物種中的特定的氨基酸序列在后面結(jié)合圖1，3, 5和7將會(huì)詳細(xì)描述。本發(fā)明還提供了一個(gè)或多個(gè)TSH受體表位，針對(duì)TSH受體的自身抗體和/或淋巴細(xì)胞能與這些表位發(fā)生相互作用(在允許TSH受體和這些自身抗體或淋巴細(xì)胞相互作用的合適條件下)，所述的一個(gè)或多個(gè)TSH受體表位包含下列序列、由這些序列組成，或者主要是由下列序列組成:TSH受體的22-91位氨基酸、TSH受體的246-260位氨基酸、TSH受體的260-363位氨基酸、和TSH受體的380-418位氨基酸中的一個(gè)或多個(gè)，或上述序列的一個(gè)或多個(gè)突變體、類(lèi)似物、衍生物或其中的片段，或這些片段的突變體、類(lèi)似物或衍生物。(尤其是TSH受體的277-296位氨基酸，或TSH受體的277-296位氨基酸的一個(gè)或多個(gè)突變體、類(lèi)似物、衍生物或它的片段，或者是它的片段的突變體、類(lèi)似物或衍生物；或TSH受體的246-260位氨基酸，或TSH受體的246-260位氨基酸的一個(gè)或多個(gè)突變體、類(lèi)似物、衍生物或它的片段，或者是它的片段的突變體、類(lèi)似物或衍生物)；尤其是，本發(fā)明還提供了一個(gè)或多個(gè)TSH受體表位，針對(duì)TSH受體的自身抗體能與這些表位發(fā)生相互作用(在允許TSH受體和這些自身抗體相互作用的合適條件下)，所述的一個(gè)或多個(gè)TSH受體表位包含下列序列、由這些序列組成，或者主要是由下列序列組成:TSH受體的22-91位氨基酸、TSH受體的246-260位氨基酸、TSH受體的260-363位氨基酸、和TSH受體的380-418位氨基酸中的一個(gè)或多個(gè)，或上述序列的一個(gè)或多個(gè)突變體、類(lèi)似物、衍生物或其中的片段，或這些片段的突變體、類(lèi)似物或衍生物；(尤其是TSH受體的277-296位氨基酸，或TSH受體的277-296位氨基酸的一個(gè)或多個(gè)突變體、類(lèi)似物、衍生物或它的片段，或者是它的片段的突變體、類(lèi)似物或衍生物；或TSH受體的246-260位氨基酸，或TSH受體的246-260位氨基酸的一個(gè)或多個(gè)突變體、類(lèi)似物、衍生物或它的片段，或者是它的片段的突變體、類(lèi)似物或衍生物)。此外，本發(fā)明還提供了一個(gè)或多個(gè)TSH受體表位,針對(duì)TSH受體的淋巴細(xì)胞能與這些表位發(fā)生相互作用(在允許TSH受體和這些淋巴細(xì)胞相互作用的合適條件下)，所述的一個(gè)或多個(gè)TSH受體表位包含下列序列、由這些序列組成，或者主要是由下列序列組成:TSH受體的22-91位氨基酸、TSH受體的246-260位氨基酸、TSH受體的260-363位氨基酸、和TSH受體的380-418位氨基酸中的一個(gè)或多個(gè)，或上述序列的一個(gè)或多個(gè)突變體、類(lèi)似物、衍生物或其中的片段，或這些片段的突變體、類(lèi)似物或衍生物；(尤其是TSH受體的277-296位氨基酸，或TSH受體的277-296位氨基酸的一個(gè)或多個(gè)突變體、類(lèi)似物、 衍生物或它的片段，或者是它的片段的突變體、類(lèi)似物或衍生物；或TSH受體的246-260位氨基酸，或TSH受體的246-260位氨基酸的一個(gè)或多個(gè)突變體、類(lèi)似物、衍生物或它的片段，或者是它的片段的突變體、類(lèi)似物或衍生物)。本發(fā)明進(jìn)一步提供了一個(gè)或多個(gè)TSH受體表位，針對(duì)TSH受體的自身抗體和/或淋巴細(xì)胞能與這些表位發(fā)生相互作用(在允許TSH受體和這些自身抗體或淋巴細(xì)胞相互作用的合適條件下)，所述的一個(gè)或多個(gè)TSH受體表位包含下列序列、由這些序列組成，或者主要是由下列序列組成:TSH受體的22-91位氨基酸、TSH受體的246-260位氨基酸、TSH受體的260-363位氨基酸、和TSH受體的380-418位氨基酸中的一個(gè)或多個(gè)，或上述序列的一個(gè)或多個(gè)突變體、類(lèi)似物、衍生物或其中的片段，或這些片段的突變體、類(lèi)似物或衍生物；如圖1，3, 5和7任一圖所不的任一氨基酸序列(尤其是如圖5所不的任一氨基酸中的TSH受體的277-296位氨基酸，或如圖5所示的任一氨基酸中的TSH受體的277-296位氨基酸的一個(gè)或多個(gè)突變體、類(lèi)似物、衍生物或它的片段，或者是它的片段的突變體、類(lèi)似物或衍生物；或如圖3所示的任一氨基酸中的TSH受體的246-260位氨基酸，或如圖3所示的任一氨基酸中的TSH受體的246-260位氨基酸的一個(gè)或多個(gè)突變體、類(lèi)似物、衍生物或它的片段，或者是它的片段的突變體、類(lèi)似物或衍生物)。尤其是，本發(fā)明進(jìn)一步提供了一個(gè)或多個(gè)TSH受體表位，針對(duì)TSH受體的自身抗體能與這些表位發(fā)生相互作用(在允許TSH受體和這些自身抗體相互作用的合適條件下)，所述的一個(gè)或多個(gè)TSH受體表位包含下列序列、由這些序列組成，或者主要是由下列序列組成:TSH受體的22-91位氨基酸、TSH受體的246-260位氨基酸、TSH受體的260-363位氨基酸、和TSH受體的380-418位氨基酸中的一個(gè)或多個(gè)，或上述序列的一個(gè)或多個(gè)突變體、類(lèi)似物、衍生物或其中的片段，或這些片段的突變體、類(lèi)似物或衍生物；如圖1，3，5和7所示的任一氨基酸序列(尤其是如圖5所示的任一氨基酸的TSH受體的277-296位氨基酸，或如圖5所示的任一氨基酸的TSH受體的277-296位氨基酸的一個(gè)或多個(gè)突變體、類(lèi)似物、衍生物或它的片段，或者是它的片段的突變體、類(lèi)似物或衍生物；或如圖3所示的任一氨基酸的TSH受體的246-260位氨基酸，或如圖3所示的任一氨基酸的TSH受體的246-260位氨基酸的一個(gè)或多個(gè)突變體、類(lèi)似物、衍生物或它的片段，或者是它的片段的突變體、類(lèi)似物或衍生物)。本發(fā)明進(jìn)一步提供了一個(gè)或多個(gè)TSH受體表位，針對(duì)TSH受體的淋巴細(xì)胞能與這些表位發(fā)生相互作用(在允許TSH受體和這些淋巴細(xì)胞相互作用的合適條件下)，所述的一個(gè)或多個(gè)TSH受體表位包含下列序列、由這些序列組成，或者主要是由下列序列組成:TSH受體的22-91位氨基酸、TSH受體的246-260位氨基酸、TSH受體的260-363位氨基酸、和TSH受體的380-418位氨基酸中的一個(gè)或多個(gè)，或上述序列的一個(gè)或多個(gè)突變體、類(lèi)似物、衍生物或其中的片段，或這些片段的突變體、類(lèi)似物或衍生物；如圖1，3，5和7所示的任一氨基酸序列(尤其是如圖5所示的任一氨基酸中的TSH受體的277-296位氨基酸，或如圖5所示的任一氨基酸中的TSH受體的277-296位氨基酸的一個(gè)或多個(gè)突變體、類(lèi)似物、衍生物或它的片段，或者是它的片段的突變體、類(lèi)似物或衍生物；或如圖3所示的任一氨基酸的TSH受體的246-260位氨基酸，或如圖3所示的任一氨基酸的TSH受體的246-260位氨基酸的一個(gè)或多個(gè)突變體、類(lèi)似物、衍生物或它的片段，或者是它的片段的突變體、類(lèi)似物或衍生物)。更優(yōu)選的是，優(yōu)選一個(gè)或多個(gè)TSH受體表位包含TSH受體的32-41位氨基酸、TSH受體的36-42位氨基酸、TSH受體的247-260位氨基酸、TSH受體的277-296位氨基酸、和TSH受體的381-385位氨基酸中的一個(gè)或多個(gè)，或上述序列的一個(gè)或多個(gè)突變體、類(lèi)似物、衍生物或其中的片段，或這些片段的突 變體、類(lèi)似物或衍生物；(尤其是TSH受體的277-296位氨基酸，或TSH受體的277-296位氨基酸的一個(gè)或多個(gè)突變體、類(lèi)似物、衍生物或它的片段，或者是它的片段的突變體、類(lèi)似物或衍生物；或TSH受體的247-260位氨基酸，或TSH受體的247-260位氨基酸的一個(gè)或多個(gè)突變體、類(lèi)似物、衍生物或它的片段，或者是它的片段的突變體、類(lèi)似物或衍生物)。根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)尤其優(yōu)選的TSH受體表位，它包含下述氨基酸序列、或由下述氨基酸序列組成、或者主要是由下述氨基酸序列組成:TSH受體的277-296位氨基酸，或TSH受體的277-296位氨基酸的一個(gè)或多個(gè)突變體、類(lèi)似物、衍生物或其中的片段，或這些片段的突變體、類(lèi)似物或衍生物，針對(duì)TSH受體的自身抗體和/或淋巴細(xì)胞能與這些表位發(fā)生相互作用(在允許TSH受體和這些自身抗體或淋巴細(xì)胞相互作用的合適條件下)。根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)尤其優(yōu)選的TSH受體表位，它包含下述氨基酸序列、或由下述氨基酸序列組成、或者主要是由下述氨基酸序列組成:TSH受體的246-260位氨基酸，或TSH受體的246-260位氨基酸的一個(gè)或多個(gè)突變體、類(lèi)似物、衍生物或其中的片段，或這些片段的突變體、類(lèi)似物或衍生物，針對(duì)TSH受體的自身抗體和/或淋巴細(xì)胞能與這些表位發(fā)生相互作用(在允許TSH受體和這些自身抗體或淋巴細(xì)胞相互作用的合適條件下)。根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)尤其優(yōu)選的TSH受體表位，它包含下述氨基酸序列、或由下述氨基酸序列組成、或者主要是由下述氨基酸序列組成:TSH受體的247-260位氨基酸，或TSH受體的247-260位氨基酸的一個(gè)或多個(gè)突變體、類(lèi)似物、衍生物或其中的片段，或這些片段的突變體、類(lèi)似物或衍生物，針對(duì)TSH受體的自身抗體和/或淋巴細(xì)胞能與這些表位發(fā)生相互作用(在允許TSH受體和這些自身抗體或淋巴細(xì)胞相互作用的合適條件下)。本發(fā)明還提供了一種多肽，由于該多肽的存在，針對(duì)TSH受體的自身抗體和/或淋巴細(xì)胞能與該多肽發(fā)生相互作用(在允許TSH受體和這些自身抗體或淋巴細(xì)胞相互作用的合適條件下)，并且它包含或是由一個(gè)或多個(gè)TSH受體表位的部分或全部一級(jí)結(jié)構(gòu)組成,或者主要是由該一級(jí)結(jié)構(gòu)組成，針對(duì)TSH受體的自身抗體和/或淋巴細(xì)胞能與這些結(jié)構(gòu)序列發(fā)生相互作用(在允許TSH受體和這些自身抗體或淋巴細(xì)胞相互作用的合適條件下)，所述的多肽序列包含下列序列、由這些序列組成，或者主要是由下列序列組成:TSH受體的22-91位氨基酸、TSH受體的246-260位氨基酸、TSH受體的260-363位氨基酸、和TSH受體的380-418位氨基酸中的一個(gè)或多個(gè)，或者上述序列的一個(gè)或多個(gè)突變體、類(lèi)似物、衍生物或其中的片段，或這些片段的突變體、類(lèi)似物或衍生物；(尤其是TSH受體的277-296位氨基酸，或TSH受體的277-296位氨基酸的一個(gè)或多個(gè)突變體、類(lèi)似物、衍生物或它的片段，或者是它的片段的突變體、類(lèi)似物或衍生物；和/或TSH受體的246-260位氨基酸，或TSH受體的246-260位氨基酸的一個(gè)或多個(gè)突變體、類(lèi)似物、衍生物或它的片段，或者是它的片段的突變體、類(lèi)似物或衍生物)，針對(duì)TSH受體的自身抗體和/或淋巴細(xì)胞能與這些氨基酸序列發(fā)生相互作用(在允許TSH受體和這些自身抗體或淋巴細(xì)胞相互作用的合適條件下)，不包括全長(zhǎng)TSH受體。尤其是，本發(fā)明提供了一種多肽，針對(duì)TSH受體的自身抗體能與該多肽發(fā)生相互作用(在允許TSH受體和這些自身抗體相互作用的合適條件下)，并且它包含或是由一個(gè)或多個(gè)TSH受體表位的部分或全部一級(jí)結(jié)構(gòu)(它是氨基酸殘基的連續(xù)序列)組成，或者主要是由該一級(jí)結(jié)構(gòu)組成，針對(duì)TSH受體的自身抗體能與該表位發(fā)生相互作用(在允許TSH受體和這些自身抗體相互作用的合適條件下)，所述的多肽序列包含下列序列、由這些序列組成，或者主要是由下列序列組成:TSH受體的22-91位氨基酸、TSH受體的246-260位氨基酸、TSH受體的260-363位氨基酸、和TSH受體的380-418位氨基酸中的一個(gè)或多個(gè)，或上述序列的一個(gè)或多個(gè)突變體、類(lèi)似物、衍生物或其中的片段，或這些片段的突變體、類(lèi)似物或衍生物；(尤其是TSH受體的277-296位氨基酸，或TSH受體的277-296位氨基酸的一個(gè)或多個(gè)突變體、類(lèi)似物、衍生物或它的片段，或者是它的片段的突變體、類(lèi)似物或衍生物；和/或TSH受體的246-260位氨基酸，或TSH受體的246-260位氨基酸的一個(gè)或多個(gè)突變體、 類(lèi)似物、衍生物或它的片段，或者是它的片段的突變體、類(lèi)似物或衍生物)，針對(duì)TSH受體的自身抗體能與這些氨基酸序列發(fā)生相互作用(在允許TSH受體和這些自身抗體相互作用的合適條件下)，TSH受體的全長(zhǎng)序列除外。此外，本發(fā)明提供了一種多肽，針對(duì)TSH受體的淋巴細(xì)胞能與該多肽發(fā)生相互作用(在允許TSH受體和這些淋巴細(xì)胞相互作用的合適條件下)，并且它包含或是由一個(gè)或多個(gè)TSH受體表位的部分或全部一級(jí)結(jié)構(gòu)(它是氨基酸殘基的連續(xù)序列)組成，或者主要是由該一級(jí)結(jié)構(gòu)組成，針對(duì)TSH受體的淋巴細(xì)胞能與該表位發(fā)生相互作用(在允許TSH受體和這些淋巴細(xì)胞相互作用的合適條件下)，所述的多肽序列包含下列序列、由這些序列組成，或者主要是由下列序列組成:TSH受體的22-91位氨基酸、TSH受體的246-260位氨基酸、TSH受體的260-363位氨基酸、和TSH受體的380-418位氨基酸中的一個(gè)或多個(gè)，或上述序列的一個(gè)或多個(gè)突變體、類(lèi)似物、衍生物或其中的片段，或這些片段的突變體、類(lèi)似物或衍生物；(尤其是TSH受體的277-296位氨基酸，或TSH受體的277-296位氨基酸的一個(gè)或多個(gè)突變體、類(lèi)似物、衍生物或它的片段，或者是它的片段的突變體、類(lèi)似物或衍生物；和/或TSH受體的246-260位氨基酸，或TSH受體的246-260位氨基酸的一個(gè)或多個(gè)突變體、類(lèi)似物、衍生物或它的片段，或者是它的片段的突變體、類(lèi)似物或衍生物)，針對(duì)TSH受體的淋巴細(xì)胞能與這些氨基酸序列產(chǎn)生相互作用(在允許TSH受體和這些淋巴細(xì)胞相互作用的合適條件下)，而TSH受體的全長(zhǎng)序列除外。本發(fā)明進(jìn)一步提供了一種多肽，針對(duì)TSH受體的自身抗體和/或淋巴細(xì)胞能與該多肽發(fā)生相互作用(在允許TSH受體和這些自身抗體或淋巴細(xì)胞相互作用的合適條件下)，并且它包含或是由一個(gè)或多個(gè)TSH受體表位的部分或全部一級(jí)結(jié)構(gòu)(它是氨基酸殘基的連續(xù)序列)組成，或者主要是由該一級(jí)結(jié)構(gòu)組成，針對(duì)TSH受體的自身抗體和/或淋巴細(xì)胞能與該表位發(fā)生相互作用(在允許TSH受體和這些自身抗體或淋巴細(xì)胞相互作用的合適條件下)，所述的多肽序列包含下列序列、由這些序列組成，或者主要是由下列序列組成:TSH受體的22-91位氨基酸、TSH受體的246-260位氨基酸、TSH受體的260-363位氨基酸、和TSH受體的380-418位氨基酸中的一個(gè)或多個(gè)，或上述序列的一個(gè)或多個(gè)突變體、類(lèi)似物、衍生物或其中的 片段，或這些片段的突變體、類(lèi)似物或衍生物；如圖1，3, 5和7任一圖中所不的任意一段氨基酸序列(尤其是如圖5中所不的任意一段氨基酸序列中的TSH受體的277-296位氨基酸，或如圖5中所示的任意一段氨基酸序列中的TSH受體的277-296位氨基酸的一個(gè)或多個(gè)突變體、類(lèi)似物、衍生物或它的片段，或者是它的片段的突變體、類(lèi)似物或衍生物；和/或如圖3中所示的任意一段氨基酸序列中的TSH受體的246-260位氨基酸，或如圖3中所示的任意一段氨基酸序列中的TSH受體的246-260位氨基酸的一個(gè)或多個(gè)突變體、類(lèi)似物、衍生物或它的片段，或者是它的片段的突變體、類(lèi)似物或衍生物)；針對(duì)TSH受體的自身抗體和/或淋巴細(xì)胞能與這些氨基酸序列產(chǎn)生相互作用(在允許TSH受體和這些自身抗體或淋巴細(xì)胞相互作用的合適條件下)，而TSH受體的全長(zhǎng)序列除外。尤其是，本發(fā)明進(jìn)一步提供了一種多肽，針對(duì)TSH受體的自身抗體能與該多肽發(fā)生相互作用(在允許TSH受體和這些自身抗體相互作用的合適條件下)，并且它包含或是由一個(gè)或多個(gè)TSH受體表位的部分或全部一級(jí)結(jié)構(gòu)(它是氨基酸殘基的連續(xù)序列)組成，或者主要是由該一級(jí)結(jié)構(gòu)組成，針對(duì)TSH受體的自身抗體能與該表位發(fā)生相互作用(在允許TSH受體和這些自身抗體相互作用的合適條件下)，所述的多肽序列包含下列序列、由這些序列組成，或者主要是由下列序列組成:TSH受體的22-91位氨基酸、TSH受體的246-260位氨基酸、TSH受體的260-363位氨基酸、和TSH受體的380-418位氨基酸中的一個(gè)或多個(gè)，或上述序列的一個(gè)或多個(gè)突變體、類(lèi)似物、衍生物或其中的片段，或這些片段的突變體、類(lèi)似物或衍生物；如圖1，3, 5和7中所不的任意一段氨基酸序列(尤其是如圖5中所不的任意一段氨基酸序列中的TSH受體的277-296位氨基酸，或如圖5中所示的任意一段氨基酸序列中的TSH受體的277-296位氨基酸的一個(gè)或多個(gè)突變體、類(lèi)似物、衍生物或它的片段，或者是它的片段的突變體、類(lèi)似物或衍生物；和/或如圖3中所示的任意一段氨基酸序列中的TSH受體的246-260位氨基酸，或如圖3中所示的任意一段氨基酸序列中的TSH受體的246-260位氨基酸的一個(gè)或多個(gè)突變體、類(lèi)似物、衍生物或它的片段，或者是它的片段的突變體、類(lèi)似物或衍生物)，針對(duì)TSH受體的自身抗體能與這些氨基酸序列產(chǎn)生相互作用(在允許TSH受體和這些自身抗體相互作用的合適條件下)，而TSH受體的全長(zhǎng)序列除外。
本發(fā)明進(jìn)一步提供了一種多肽，針對(duì)TSH受體的淋巴細(xì)胞能與該多肽發(fā)生相互作用(在允許TSH受體和這些淋巴細(xì)胞相互作用的合適條件下)，并且它包含或是由一個(gè)或多個(gè)TSH受體表位的部分或全部一級(jí)結(jié)構(gòu)(它是氨基酸殘基的連續(xù)序列)組成，或者主要是由該一級(jí)結(jié)構(gòu)組成，針對(duì)TSH受體的淋巴細(xì)胞能與該表位發(fā)生相互作用(在允許TSH受體和這些淋巴細(xì)胞相互作用的合適條件下)，所述的多肽序列包含下列序列、由這些序列組成，或者主要是由下列序列組成:TSH受體的22-91位氨基酸、TSH受體的246-260位氨基酸、TSH受體的260-363位氨基酸、和TSH受體的380-418位氨基酸中的一個(gè)或多個(gè)，或上述序列的一個(gè)或多個(gè)突變體、類(lèi)似物、衍生物或其中的片段，或這些片段的突變體、類(lèi)似物或衍生物；如圖1，3, 5和7任一圖中所不的任意一段氨基酸序列(尤其是如圖5中所不的任意一段氨基酸序列中的TSH受體的277-296位氨基酸，或如圖5中所示的任意一段氨基酸序列中的TSH受體的277-296位氨基酸的一個(gè)或多個(gè)突變體、類(lèi)似物、衍生物或它的片段，或者是它的片段的突變體、類(lèi)似物或衍生物；和/或如圖3中所示的任意一段氨基酸序列中的TSH受體的246-260位 氨基酸，或如圖3中所示的任意一段氨基酸序列中的TSH受體的246-260位氨基酸的一個(gè)或多個(gè)突變體、類(lèi)似物、衍生物或它的片段，或者是它的片段的突變體、類(lèi)似物或衍生物)，針對(duì)TSH受體的淋巴細(xì)胞能與這些氨基酸序列產(chǎn)生相互作用(在允許TSH受體和這些淋巴細(xì)胞相互作用的合適條件下)，而TSH受體的全長(zhǎng)序列除外。更優(yōu)選的是，本發(fā)明優(yōu)選的多肽包含一個(gè)或多個(gè)TSH受體表位的部分或全部一級(jí)結(jié)構(gòu)，針對(duì)TSH受體的自身抗體和/或淋巴細(xì)胞能與該表位發(fā)生相互作用(在允許TSH受體和這些自身抗體或淋巴細(xì)胞相互作用的合適條件下)，所述的多肽序列包含下列序列、由這些序列組成，或者主要是由下列序列組成:TSH受體的32-41位氨基酸、TSH受體的36_42位氨基酸、TSH受體的247-260位氨基酸、TSH受體的277-296位氨基酸、和TSH受體的381-385位氨基酸中的一個(gè)或多個(gè)，或者上述序列的一個(gè)或多個(gè)突變體、類(lèi)似物、衍生物或其中的片段，或這些片段的突變體、類(lèi)似物或衍生物，針對(duì)TSH受體的自身抗體和/或淋巴細(xì)胞能與這些序列發(fā)生相互作用(在允許TSH受體和這些自身抗體或淋巴細(xì)胞相互作用的合適條件下)。優(yōu)選本發(fā)明的多肽包含下列序列、由下列序列組成，或者主要是由下列序列組成:TSH受體的277-296位氨基酸，或其一個(gè)或多個(gè)突變體、類(lèi)似物、衍生物或其中的片段，或這些片段的突變體、類(lèi)似物或衍生物。優(yōu)選本發(fā)明的多肽包含下列序列、由下列序列組成，或者主要是由下列序列組成:TSH受體的246-260位氨基酸，或其一個(gè)或多個(gè)突變體、類(lèi)似物、衍生物或其中的片段，或這些片段的突變體、類(lèi)似物或衍生物。優(yōu)選根據(jù)本發(fā)明的多肽包含下列序列、由下列序列組成，或者主要是由下列序列組成:TSH受體的247-260位氨基酸，或其一個(gè)或多個(gè)突變體、類(lèi)似物、衍生物或其中的片段，或這些片段的突變體、類(lèi)似物或衍生物。優(yōu)選本發(fā)明所提供的多肽，針對(duì)TSH受體的自身抗體和/或淋巴細(xì)胞能與該多肽發(fā)生相互作用(在允許TSH受體和這些自身抗體或淋巴細(xì)胞相互作用的合適條件下)，并且所述的多肽包含TSH受體表位的部分或全部一級(jí)結(jié)構(gòu),針對(duì)TSH受體的自身抗體和/或淋巴細(xì)胞能與該表位發(fā)生相互作用(在允許TSH受體和這些自身抗體或淋巴細(xì)胞相互作用的合適條件下)，該多肽包含下列序列、由這些序列組成，或者主要是由下列序列組成:(i) TSH受體的277-296位氨基酸的一級(jí)結(jié)構(gòu)，或TSH受體的277-296位氨基酸的一個(gè)或多個(gè)突變體、類(lèi)似物、衍生物或其中的片段，或這些片段的突變體、類(lèi)似物或衍生物，針對(duì)TSH受體的自身抗體和/或淋巴細(xì)胞能與這些序列發(fā)生相互作用(在允許TSH受體和這些自身抗體或淋巴細(xì)胞相互作用的合適條件下)；以及(ii) TSH受體的246-260位氨基酸的一級(jí)結(jié)構(gòu)，或TSH受體的246-260位氨基酸的一個(gè)或多個(gè)突變體、類(lèi)似物、衍生物或其中的片段，或這些片段的突變體、類(lèi)似物或衍生物，針對(duì)TSH受體的自身抗體和/或淋巴細(xì)胞能與這些序列發(fā)生相互作用(在允許TSH受體和這些自身抗體或淋巴細(xì)胞相互作用的合適條件下)；TSH受體的全長(zhǎng)序列除外。更加優(yōu)選的是本發(fā)明所提供的多肽，針對(duì)TSH受體的自身抗體能與該多肽發(fā)生相互作用(在允許TSH受體和這些自身抗體相互作用的合適條件下)，并且所述的多肽包含TSH受體表位的部分或全部一級(jí)結(jié)構(gòu)，針對(duì)TSH受體的自身抗體能與該表位發(fā)生相互作用(在允許TSH受體和這些 自身抗體相互作用的合適條件下)，該多肽包含下列序列、由這些序列組成，或者主要是由下列序列組成:(i) TSH受體的277-296位氨基酸的一級(jí)結(jié)構(gòu)，或TSH受體的277-296位氨基酸的一個(gè)或多個(gè)突變體、類(lèi)似物、衍生物或其中的片段，或這些片段的突變體、類(lèi)似物或衍生物，針對(duì)TSH受體的自身抗體能與這些序列發(fā)生相互作用(在允許TSH受體和這些自身抗體相互作用的合適條件下)；以及(ii) TSH受體的246-260位氨基酸的一級(jí)結(jié)構(gòu)，或TSH受體的246-260位氨基酸的一個(gè)或多個(gè)突變體、類(lèi)似物、衍生物或其中的片段，或這些片段的突變體、類(lèi)似物或衍生物，針對(duì)TSH受體的自身抗體能與這些序列發(fā)生相互作用(在允許TSH受體和這些自身抗體相互作用的合適條件下)；TSH受體的全長(zhǎng)序列除外。此外，本發(fā)明提供了一種多肽，針對(duì)TSH受體的淋巴細(xì)胞能與該多肽發(fā)生相互作用(在允許TSH受體和這些淋巴細(xì)胞相互作用的合適條件下)，并且所述的多肽包含TSH受體表位的部分或全部一級(jí)結(jié)構(gòu)，針對(duì)TSH受體的淋巴細(xì)胞能與該表位發(fā)生相互作用(在允許TSH受體和這些淋巴細(xì)胞相互作用的合適條件下)，該多肽包含下列序列、由這些序列組成，或者主要是由下列序列組成:(i) TSH受體的277-296位氨基酸的一級(jí)結(jié)構(gòu)，或TSH受體的277-296位氨基酸的一個(gè)或多個(gè)突變體、類(lèi)似物、衍生物或其中的片段，或這些片段的突變體、類(lèi)似物或衍生物，針對(duì)TSH受體的淋巴細(xì)胞能與這些序列發(fā)生相互作用(在允許TSH受體和這些淋巴細(xì)胞相互作用的合適條件下)；以及(ii) TSH受體的246-260位氨基酸的一級(jí)結(jié)構(gòu)，或TSH受體的246-260位氨基酸的一個(gè)或多個(gè)突變體、類(lèi)似物、衍生物或其中的片段，或這些片段的突變體、類(lèi)似物或衍生物，針對(duì)TSH受體的淋巴細(xì)胞能與這些序列發(fā)生相互作用(在允許TSH受體和這些淋巴細(xì)胞相互作用的合適條件下)；TSH受體的全長(zhǎng)序列除外。本發(fā)明進(jìn)一步提供了一種多肽，針對(duì)TSH受體的自身抗體和/或淋巴細(xì)胞能與該多肽發(fā)生相互作用(在允許TSH受體和這些自身抗體或淋巴細(xì)胞相互作用的合適條件下)，并且所述的多肽包含TSH受體表位的部分或全部一級(jí)結(jié)構(gòu)，針對(duì)TSH受體的自身抗體和/或淋巴細(xì)胞能與該表位發(fā)生相互作用(在允許TSH受體和這些自身抗體或淋巴細(xì)胞相互作用的合適條件下)，該多肽包含下列序列、由這些序列組成，或者主要是由下列序列組成:(i)如圖5中的任意一個(gè)氨基酸序列中的TSH受體的277-296位氨基酸的一級(jí)結(jié)構(gòu)，或如圖5中的任意一個(gè)氨基酸序列中的TSH受體的277-296位氨基酸的一個(gè)或多個(gè)突變體、類(lèi)似物、衍生物或其中的片段，或這些片段的突變體、類(lèi)似物或衍生物，針對(duì)TSH受體的自身抗體和/或淋巴細(xì)胞能與這些序列發(fā)生相互作用(在允許TSH受體和這些自身抗體或淋巴細(xì)胞相互作用的合適條件下)；以及(ii)如圖3中的任意一個(gè)氨基酸序列中的TSH受體的246-260位氨基酸的一級(jí)結(jié)構(gòu)，或如圖3中的任意一個(gè)氨基酸序列中的TSH受體的246-260位氨基酸的一個(gè)或多個(gè)突變體、類(lèi)似物、衍生物或其中的片段，或這些片段的突變體、類(lèi)似物或衍生物，針對(duì)TSH受體的自身抗體和/或淋巴細(xì)胞能與這些序列發(fā)生相互作用(在允許TSH受體和這些自身抗體或淋巴細(xì)胞相互作用的 合適條件下)；TSH受體的全長(zhǎng)序列除外。更優(yōu)選，本發(fā)明進(jìn)一步提供了一種多肽，針對(duì)TSH受體的自身抗體能與該多肽發(fā)生相互作用(在允許TSH受體和這些自身抗體相互作用的合適條件下)，并且所述的多肽包含TSH受體表位的部分或全部一級(jí)結(jié)構(gòu)，針對(duì)TSH受體的自身抗體能與該表位發(fā)生相互作用(在允許TSH受體和這些自身抗體相互作用的合適條件下)，該多肽包含下列序列、由這些序列組成，或者主要是由下列序列組成:(i)如圖5中的任意一個(gè)氨基酸序列中的TSH受體的277-296位氨基酸的一級(jí)結(jié)構(gòu)，或如圖5中的任意一個(gè)氨基酸序列中的TSH受體的277-296位氨基酸的一個(gè)或多個(gè)突變體、類(lèi)似物、衍生物或其中的片段，或這些片段的突變體、類(lèi)似物或衍生物，針對(duì)TSH受體的自身抗體能與這些序列發(fā)生相互作用(在允許TSH受體和這些自身抗體相互作用的合適條件下)；以及(ii)如圖3中的任意一個(gè)氨基酸序列中的TSH受體的246-260位氨基酸的一級(jí)結(jié)構(gòu)，或如圖3中的任意一個(gè)氨基酸序列中的TSH受體的246-260位氨基酸的一個(gè)或多個(gè)突變體、類(lèi)似物、衍生物或其中的片段，或這些片段的突變體、類(lèi)似物或衍生物，針對(duì)TSH受體的自身抗體能與這些序列發(fā)生相互作用(在允許TSH受體和這些自身抗體相互作用的合適條件下)；TSH受體的全長(zhǎng)序列除外。本發(fā)明進(jìn)一步提供了一種多肽，針對(duì)TSH受體的淋巴細(xì)胞能與該多肽發(fā)生相互作用(在允許TSH受體和這些淋巴細(xì)胞相互作用的合適條件下)，并且所述的多肽包含TSH受體表位的部分或全部一級(jí)結(jié)構(gòu)，針對(duì)TSH受體的淋巴細(xì)胞能與該表位發(fā)生相互作用(在允許TSH受體和這些淋巴細(xì)胞相互作用的合適條件下)，該多肽包含下列序列、由這些序列組成，或者主要是由下列序列組成:(i)如圖5中的任意一個(gè)氨基酸序列中的TSH受體的277-296位氨基酸的一級(jí)結(jié)構(gòu)，或如圖5中的任意一個(gè)氨基酸序列中的TSH受體的277-296位氨基酸的一個(gè)或多個(gè)突變體、類(lèi)似物、衍生物或其中的片段，或這些片段的突變體、類(lèi)似物或衍生物，針對(duì)TSH受體的淋巴細(xì)胞能與這些序列發(fā)生相互作用(在允許TSH受體和這些淋巴細(xì)胞相互作用的合適條件下)；以及(ii)如圖3中的任意一個(gè)氨基酸序列中的TSH受體的246-260位氨基酸的一級(jí)結(jié)構(gòu)，或如圖3中的任意一個(gè)氨基酸序列中的TSH受體的246-260位氨基酸的一個(gè)或多個(gè)突變體、類(lèi)似物、衍生物或其中的片段，或這些片段的突變體、類(lèi)似物或衍生物，針對(duì)TSH受體的淋巴細(xì)胞能與這些序列發(fā)生相互作用(在允許TSH受體和這些淋巴細(xì)胞相互作用的合適條件下)；TSH受體的全長(zhǎng)序列除外。本發(fā)明優(yōu)選提供了一種多肽，針對(duì)TSH受體的自身抗體和/或淋巴細(xì)胞能與該多肽發(fā)生相互作用(在允許TSH受體和這些自身抗體或淋巴細(xì)胞相互作用的合適條件下)，并且所述的多肽包含TSH受體表位的部分或全部一級(jí)結(jié)構(gòu)，針對(duì)TSH受體的自身抗體和/或淋巴細(xì)胞能與該表位發(fā)生相互作用(在允許TSH受體和這些自身抗體或淋巴細(xì)胞相互作用的合適條件下)，該多肽包含下列序列、由這些序列組成，或者主要是由下列序列組成:(i) TSH受體 的277-296位氨基酸的一級(jí)結(jié)構(gòu)，或TSH受體的277-296位氨基酸的一個(gè)或多個(gè)突變體、類(lèi)似物、衍生物或其中的片段，或這些片段的突變體、類(lèi)似物或衍生物，針對(duì)TSH受體的自身抗體和/或淋巴細(xì)胞能與這些序列發(fā)生相互作用(在允許TSH受體和這些自身抗體或淋巴細(xì)胞相互作用的合適條件下)；以及(ii) TSH受體的246-260位氨基酸的一級(jí)結(jié)構(gòu)，或TSH受體的246-260位氨基酸的一個(gè)或多個(gè)突變體、類(lèi)似物、衍生物或其中的片段，或這些片段的突變體、類(lèi)似物或衍生物，針對(duì)TSH受體的自身抗體和/或淋巴細(xì)胞能與這些序列發(fā)生相互作用(在允許TSH受體和這些自身抗體或淋巴細(xì)胞相互作用的合適條件下)；(iii) TSH受體的381-385位氨基酸的一級(jí)結(jié)構(gòu)，或TSH受體的381-385位氨基酸的一個(gè)或多個(gè)突變體、類(lèi)似物、衍生物或其中的片段，或這些片段的突變體、類(lèi)似物或衍生物，針對(duì)TSH受體的自身抗體和/或淋巴細(xì)胞能與這些序列發(fā)生相互作用(在允許TSH受體和這些自身抗體或淋巴細(xì)胞相互作用的合適條件下)；TSH受體的全長(zhǎng)序列除外。更優(yōu)選的是，本發(fā)明進(jìn)一步提供了一種多肽，針對(duì)TSH受體的自身抗體和/或淋巴細(xì)胞能與該多肽發(fā)生相互作用(在允許TSH受體和這些自身抗體或淋巴細(xì)胞相互作用的合適條件下)，并且所述的多肽包含TSH受體表位的部分或全部一級(jí)結(jié)構(gòu)，針對(duì)TSH受體的自身抗體和/或淋巴細(xì)胞能與該表位發(fā)生相互作用(在允許TSH受體和這些自身抗體或淋巴細(xì)胞相互作用的合適條件下)，該多肽包含下列序列、由這些序列組成，或者主要是由下列序列組成:(i)如圖5中的任意一個(gè)氨基酸序列中的TSH受體的277-296位氨基酸的一級(jí)結(jié)構(gòu)，或如圖5中的任意一個(gè)氨基酸序列中的TSH受體的277-296位氨基酸的一個(gè)或多個(gè)突變體、類(lèi)似物、衍生物或其中的片段，或這些片段的突變體、類(lèi)似物或衍生物，針對(duì)TSH受體的自身抗體和/或淋巴細(xì)胞能與這些序列發(fā)生相互作用(在允許TSH受體和這些自身抗體或淋巴細(xì)胞相互作用的合適條件下)；以及(ii)如圖3中的任意一個(gè)氨基酸序列中的TSH受體的246-260位氨基酸的一級(jí)結(jié)構(gòu)，或如圖3中的任意一個(gè)氨基酸序列中的TSH受體的246-260位氨基酸的一個(gè)或多個(gè)突變體、類(lèi)似物、衍生物或其中的片段，或這些片段的突變體、類(lèi)似物或衍生物，針對(duì)TSH受體的自身抗體和/或淋巴細(xì)胞能與這些序列發(fā)生相互作用(在允許TSH受體和這些自身抗體或淋巴細(xì)胞相互作用的合適條件下)；(iii)如圖7中的任意一個(gè)氨基酸序列中的TSH受體的381-385位氨基酸的一級(jí)結(jié)構(gòu)，或如圖7中的任意一個(gè)氨基酸序列中的TSH受體的381-385位氨基酸的一個(gè)或多個(gè)突變體、類(lèi)似物、衍生物或其中的片段，或這些片段的突變體、類(lèi)似物或衍生物，針對(duì)TSH受體的自身抗體和/或淋巴細(xì)胞能與這些序列發(fā)生相互作用(在允許TSH受體和這些自身抗體或淋巴細(xì)胞相互作用的合適條件下)；TSH受體的全長(zhǎng)序列除外。技術(shù)人員結(jié)合相應(yīng)的圖能更好理解，上述的氨基酸序列可以是人的、豬的、牛的、犬科動(dòng)物的、貓科動(dòng)物的、小鼠的、大鼠的或來(lái)源于綿羊的，上述每一物種中的特定的氨基酸序列在后面結(jié)合圖1，3，5和7將會(huì)詳細(xì)描述。合適地，根據(jù)本發(fā)明第二種技術(shù)方案的多肽，它包含對(duì)應(yīng)于TSH受體一個(gè)以上表位的部分或全部一級(jí)結(jié)構(gòu)氨基酸序列，對(duì)應(yīng)于相應(yīng)表位的部分或全部一級(jí)結(jié)構(gòu)的氨基酸序列可被氨基酸連接序列分離，以便所提供的特定氨基酸序列在構(gòu)形、 排列或序列上都能與TSH受體的活性位點(diǎn)的氨基酸序列相似或?qū)嵸|(zhì)上類(lèi)似，和/或能有效提供上述TSH受體的特定氨基酸序列，使其在構(gòu)形、排列或序列上都最適合與此處所述的自身抗體和/或淋巴細(xì)胞產(chǎn)生相互作用。本發(fā)明優(yōu)選的多肽序列和多肽包含分別由圖1，3，5或7所示的特定的TSH受體氨基酸序列，或由該序列組成，或是主要由該序列組成。如上述所述，本發(fā)明還包括在此所述的特定氨基酸序列的“突變體”、“類(lèi)似物”、“衍生物”和“片段”，當(dāng)用來(lái)指示本發(fā)明的多肽序列和多肽時(shí)(例如，附圖所示的具有特定氨基酸一級(jí)結(jié)構(gòu)的多肽)，所用的術(shù)語(yǔ)“突變體”、“類(lèi)似物”、“衍生物”和“片段”是指和附圖所示的具有特定氨基酸一級(jí)結(jié)構(gòu)的多肽序列和多肽具有實(shí)質(zhì)上相同的生物學(xué)功能或活性(根據(jù)在此表述的自身抗體和/或淋巴細(xì)胞相互作用)的多肽序列和多肽。合適地，在此所述的突變體、類(lèi)似物、衍生物和片段，或這些片段的突變體、類(lèi)似物或衍生物可具有如圖所示的氨基酸一級(jí)結(jié)構(gòu)，其中幾個(gè)或少數(shù)一些(例如5到10，I到5或I到3)氨基酸殘基以任何組合被取代、缺失或添加。尤其優(yōu)選的是沉默的取代、缺失和添加，它們沒(méi)有改變或沒(méi)有實(shí)質(zhì)上改變本發(fā)明上述多肽的生物活性或功能。保守取代也是優(yōu)選的，這在后面會(huì)詳細(xì)介紹。更優(yōu)選的是，結(jié)合附圖，在此描述的具有特定氨基酸一級(jí)結(jié)構(gòu)的多肽突變體、類(lèi)似物或衍生物可以是:(i)其中一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基被一個(gè)保守的或非保守的氨基酸殘基取代(優(yōu)選一個(gè)保守的氨基酸殘基)；或(ii)其中一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基含有一個(gè)取代基；或(iii)進(jìn)一步含有額外的氨基酸，以便所有效提供的本發(fā)明多肽中特定氨基酸序列在構(gòu)形、排列或序列上都能與TSH受體的活性位點(diǎn)的氨基酸序列相似或?qū)嵸|(zhì)上類(lèi)似，和/或有效提供的本發(fā)明多肽中上述TSH受體的特定氨基酸序列，使其在構(gòu)形、排列或序列上都最適合與此處所述的自身抗體和/或淋巴細(xì)胞產(chǎn)生相互作用。這些突變體、類(lèi)似物或衍生物是在本領(lǐng)域的技術(shù)人員的認(rèn)識(shí)范圍內(nèi)的。一般來(lái)說(shuō)，突變體、類(lèi)似物或衍生物可以通過(guò)保守氨基酸取代而與參考序列(例如，附圖所示的具有特定氨基酸一級(jí)結(jié)構(gòu)的多肽)不同的多肽。這些取代可以利用類(lèi)似性質(zhì)的另一氨基酸取代多肽中的一個(gè)給定的氨基酸。常見(jiàn)的保守取代是在脂肪族氨基酸A、V、L和I上相互進(jìn)行的取代；在羥基殘基S和T上的相互取代；在酸性殘基D和E上的相互取代；在酰胺殘基N和Q上的相互取代；在堿性殘基K和R上的相互取代；在芳香殘基F和Y上的相互取代。優(yōu)選本發(fā)明提供的突變體、類(lèi)似物或衍生物進(jìn)一步包含額外的氨基酸，以便所有效提供的本發(fā)明多肽中特定氨基酸序列在構(gòu)形、排列或序列上都能與TSH受體的活性位點(diǎn)的氨基酸序列相似或?qū)嵸|(zhì)上類(lèi)似，和/或有效提供的本發(fā)明多肽中上述TSH受體的特定氨基酸序列，使其在構(gòu)形、排列或序列上都最適合與此處所述的自身抗體和/或淋巴細(xì)胞產(chǎn)生相互作用。更加優(yōu)選，所用的術(shù)語(yǔ)“片段”代表的多肽具有的氨基酸序列與具有圖示的特定氨基酸一級(jí)結(jié)構(gòu)的多肽及其突變體或衍生物的氨基酸一級(jí)結(jié)構(gòu)的部分序列(而非全部)完全相同，這些片段可以是“自由形式的(free standing) ”，也就是，不是其它氨基酸或多肽的部分或與其它氨基酸或多肽融合，或是其它更大的多肽的部分或一個(gè)區(qū)域。本領(lǐng)域的技術(shù)人員能夠理解到，本發(fā)明的片段含有或包含在此所述的TSH受體的一個(gè)或多個(gè)表位的氨基酸一級(jí)結(jié)構(gòu)，以便能和自身抗體和/或淋巴細(xì)胞相互作用。因此，本發(fā)明的包括含有圖示的特定氨基酸的一級(jí)結(jié)構(gòu)多肽，并且多肽(即上述的突變體、類(lèi)似物和衍生物)至少具有與圖示的特定氨基酸的一級(jí)結(jié)構(gòu)多肽70%的同一性，優(yōu)選至少80%同一性，更加優(yōu)選具有至少90%的同一性，更優(yōu)選與圖示的特定氨基酸的一級(jí)結(jié)構(gòu)多肽具有至少95%的同一性，并且本發(fā)明的多肽還包含上述多肽序列的片段。本發(fā)明的多肽還可通過(guò)表達(dá)后面將 要提到的本發(fā)明的多聚核苷酸來(lái)獲得。此外，本發(fā)明的多肽還可通過(guò)本領(lǐng)域公知的技術(shù)，由多肽合成儀來(lái)合成。本發(fā)明通過(guò)這些方式獲得的多肽不會(huì)與其它真核多肽或污染物結(jié)合，而在天然環(huán)境中這些真核多肽或污染物則可能與所述多肽結(jié)合。在此所述的本發(fā)明的多肽可以用各種制備重組蛋白的系統(tǒng)表達(dá)。例如，在E coli表達(dá)系統(tǒng)中，編碼本發(fā)明合適多肽的cDNA譯碼可被克隆到載體中，如pET22、pMEX8、pGEX2T或pQE81L His或其對(duì)應(yīng)物。在酵母中表達(dá)時(shí)(例如，Saccharomyces cerevisiae或Schizosaccharornyces pombe)，可以使用的載體例如，pYES2、pESP2 或 pYES2/CT 或其對(duì)應(yīng)物。AcMNPV(Bac-N-Blue)載體或其對(duì)應(yīng)物可被用在昆蟲(chóng)細(xì)胞中的表達(dá)，pRC/CMV、pcDNA3.1載體或它們的對(duì)應(yīng)物可被用在哺乳細(xì)胞中的表達(dá)，例如中國(guó)蒼鼠卵巢細(xì)胞(CHO)。本發(fā)明的多肽可以不連續(xù)的蛋白方式被表達(dá)，或以融合蛋白的方式連接到例如谷胱甘肽S轉(zhuǎn)移酶(GST)或多組氨酸連接處。在不連續(xù)的蛋白表達(dá)方式中，使用親和柱層析純化，其中色譜柱上的瓊脂糖顆粒偶聯(lián)了針對(duì)本發(fā)明多肽相應(yīng)部分的鼠單克隆抗體。如果本發(fā)明的多肽與GST融合，則可使用谷胱甘肽瓊脂糖層析純化來(lái)分離融合蛋白。能夠使用特定的蛋白酶將GST與本發(fā)明的多肽分開(kāi)，接著使用第二輪谷胱甘肽瓊脂糖層析來(lái)將GST和本發(fā)明的多肽分離。在多肽與多組氨酸連接的情況下，可使用固定金屬親和層析來(lái)純化。本發(fā)明進(jìn)一步提供了制備前述多肽的方法，其包括下述步驟:(i)提供一種前述的宿主細(xì)胞；(ii)培養(yǎng)宿主細(xì)胞；并且
(iii)從中回收本發(fā)明的多肽?？墒褂贸Ｒ?guī)的分離和純化技術(shù)來(lái)回收本發(fā)明的多肽，例如本領(lǐng)域普通技術(shù)人員公知的層析分離和免疫分離技術(shù)。本發(fā)明進(jìn)一步的技術(shù)方案所提供的多聚核苷酸包括:(i)編碼前述多肽的核苷酸序列；(ii)編碼前述多肽的核苷酸序列，其中該多肽包含一段或多段如圖1，3，5和7任意一個(gè)所示的TSH受體的特定氨基酸序列；(iii)編碼(ii)中多肽的核苷酸序列，其中核苷酸序列包含編碼上述圖1，3，5和7任意一個(gè)所示的TSH受體特定氨基酸的核苷酸堿基，該核苷酸堿基分別由圖2，4，6和8定義；(iv)核苷酸序列，由于遺傳密碼的簡(jiǎn)并性而在密碼子序列上不同于序列(iii)；(V)核苷酸序列，它含有序列(iii)的等位突變；(vi)核苷酸序列,它含有(i), (ii), (iii), (iv)或(V)序列中任意一個(gè)的片段；或(vii)核苷酸序列,它在嚴(yán)格條件下能和(i), (ii), (iii), (iv), (v)或(vi)中任意一個(gè)序列雜交。本發(fā)明多肽的核苷酸堿基，它編碼上述本發(fā)明多肽的表位區(qū)域，概述如下:
氨基酸序列數(shù)~I核苷酸序列數(shù) 22-9164-273
32-4194-123
36-42106-126
246-260736-780
247-260739-780260-363 778-1089277-296 829-888
380-4181138-1254
381-385 1141-1155本發(fā)明的多聚核苷酸可以是DNA形式，包括例如cDNA、合成的DNA和基因組DNA，它們可以是克隆獲得的、或化學(xué)合成的，或兩種技術(shù)的組合獲得的。本發(fā)明的優(yōu)選的實(shí)施方式包括cDNA或合成的DNA。編碼本發(fā)明多肽的編碼序列可以和上述(iii)中的以及圖2、4、6和8中任意一個(gè)的多聚核苷酸編碼序列相同。它也可以是具有不同序列的多聚核苷酸，由于遺傳密碼的冗余(簡(jiǎn)并)而編碼本發(fā)明的多肽。本發(fā)明進(jìn)一步涉及上述多聚核苷酸的突變體，它編碼具有圖示的特定氨基酸一級(jí)結(jié)構(gòu)的多肽，或該多肽的突變體、類(lèi)似物、衍生物或片段，或片段的突變體、類(lèi)似物或衍生物，如前文所詳細(xì)表述的。多聚核苷酸的突變體可以是自然突變體，例如自然產(chǎn)生的等位突變體，或可預(yù)知的天然突變體。那些非天然產(chǎn)生的多聚核苷酸突變體可以是由突變技術(shù)制備的。突變體可以是通過(guò)核苷酸取代、缺失或添加而與前述多聚核苷酸不同的突變體。取代、缺失或添加可以涉及一個(gè)或多個(gè)核苷酸。如前所述，編碼區(qū)域的改變可以產(chǎn)生保守的或非保守的氨基酸取代、缺失或添加。適宜地，本發(fā)明的突變多聚核苷酸與編碼圖示的特定氨基酸一級(jí)結(jié)構(gòu)多肽的多聚核苷酸以及與此多聚核苷酸互補(bǔ)或雜交的多聚核苷酸的全長(zhǎng)序列具有至少70%的同一丨丨生。此外，更加優(yōu)選的多聚核苷酸是與編碼圖示的特定氨基酸一級(jí)結(jié)構(gòu)多肽的多聚核苷酸以及與此多聚核苷酸互補(bǔ)或雜交的多聚核苷酸的全長(zhǎng)序列具有至少80%同一丨丨生。尤其優(yōu)選的核苷酸與上述序列具有至少90%同一性，更優(yōu)選具有至少95%同一性。在具有至少95%同一性的多聚核苷酸中，優(yōu)選具有至少97%同一性的多聚核苷酸，更優(yōu)選具有至少98%和至少99%同一性，最有選的是具有至少99%同一性的多聚核苷酸。事實(shí)上，如前所述，本發(fā)明進(jìn)一步涉及與前 述序列雜交的多聚核苷酸。在這一點(diǎn)，本發(fā)明尤其涉及在嚴(yán)格條件下與前述多聚核苷酸雜交的多聚核苷酸。在此所用的術(shù)語(yǔ)“嚴(yán)格條件”意思是只有在序列之間存在至少95%和優(yōu)選至少97%的互補(bǔ)情況下才會(huì)發(fā)生雜交。本發(fā)明還涉及載體，它包含本發(fā)明的一種或多種多聚核苷酸，還涉及含有本發(fā)明載體的基因工程宿主細(xì)胞，以及用重組技術(shù)生產(chǎn)本發(fā)明的多肽。因此，本發(fā)明進(jìn)一步提供了具有生物功能的載體系統(tǒng)，它含有前述的多聚核苷酸，并且能夠?qū)⒍嗑酆塑账釋?dǎo)入宿主微生物的基因組中。通過(guò)遺傳工程的方式可以使多聚核苷酸被整合到宿主細(xì)胞中，并表達(dá)本發(fā)明的多肽，并且本發(fā)明進(jìn)一步提供了一種宿主細(xì)胞，該宿主細(xì)胞被分別由本發(fā)明前述的多聚核苷酸、或載體系統(tǒng)轉(zhuǎn)化或轉(zhuǎn)染。合適的DNA序列可以通過(guò)本發(fā)明任一種公知的技術(shù)被插入到載體中。根據(jù)本發(fā)明一個(gè)尤其優(yōu)選的實(shí)施方式，本發(fā)明還提供了一種方法，用來(lái)從受試者(尤其是人)的體液樣品中篩選針對(duì)TSH受體的自身抗體或淋巴細(xì)胞,該受試者懷疑患有、容易患有或患有與TSH受體免疫反應(yīng)相關(guān)的自身免疫疾病、或者受試者是該自身免疫疾病的康復(fù)者，所述方法包含:(a)提供:(i)從所述受試者中獲得的所述體液樣品或(ii)從所述樣品中分離到的淋巴細(xì)胞；(b)將所述的樣品或分離到的淋巴細(xì)胞與前述的本發(fā)明的多肽接觸(在允許TSH受體和這些針對(duì)TSH受體的自身抗體或淋巴細(xì)胞相互作用的合適條件下)，以便允許所述的多肽能夠和針對(duì)TSH受體的自身抗體或淋巴細(xì)胞相互作用，該抗體或淋巴細(xì)胞存在于所述的樣品中或從所述的樣品中分離到；以及(c)監(jiān)測(cè)所述的多肽與所述的針對(duì)TSH受體的自身抗體或淋巴細(xì)胞相互作用的程度和效果，其中該抗體或淋巴細(xì)胞存在于所述的樣品中或從所述的樣品中分離到，因而提供了所述自身抗體或所述淋巴細(xì)胞存在于樣品中或從樣品中分離的指示。實(shí)際上，如上所述，本發(fā)明的方法適合用來(lái)從受試者的體液樣品中篩選針對(duì)TSH受體的自身抗體或淋巴細(xì)胞。本發(fā)明的方法，尤其適合用來(lái)從受試者的體液樣品中篩選針對(duì)TSH受體的自身抗體，這在后面會(huì)有詳細(xì)敘述。本發(fā)明尤其提供了一種方法，用來(lái)從受試者(尤其是人)的體液樣品中篩選針對(duì)TSH受體的自身抗體,該受試者懷疑患有、容易患有或患有與TSH受體免疫反應(yīng)相關(guān)的自身免疫疾病、或者受試者是該自身免疫疾病的康復(fù)者，所述方法包含:(a)從所述受試者中提供所述的體液樣品；(b)將所述的樣品與前述的本發(fā)明的多肽接觸(在允許TSH受體和這些針對(duì)TSH受體的自身抗體相互作用的合適條件下)，以便允許所述的多肽能夠和針對(duì)TSH受體、并存在于所述的樣品中的自身抗體相互作用；以及(c)監(jiān)測(cè)所述的多肽與所述的針對(duì)TSH受體、并存在于所述的樣品中的自身抗體相互作用的程度，因而提供了所述自身抗體存在于樣品中的指示。典型地，本發(fā)明 的方法還用到對(duì)照，例如，從正常受試者中獲得的體液樣品，換句話(huà)說(shuō)，受試者沒(méi)有與TSH受體免疫反應(yīng)相關(guān)的自身免疫疾病。篩選本發(fā)明TSH受體的自身抗體的方法包括:直接監(jiān)測(cè)(i)受試者體液樣品中針對(duì)TSH受體的自身抗體與(ii)多肽的相互作用，如本發(fā)明前面所述，使用本領(lǐng)域已知的典型的非競(jìng)爭(zhēng)性的三明治型檢測(cè)方法。典型地，本發(fā)明使用非競(jìng)爭(zhēng)性技術(shù)的方法監(jiān)測(cè)前述的(i)樣品中TSH受體的自身抗體與(ii)本發(fā)明多肽相互作用的程度，該方法包括給本發(fā)明前述的多肽或者TSH受體自身抗體的結(jié)合對(duì)應(yīng)物提供標(biāo)記的方法，任一種技術(shù)都能夠達(dá)到監(jiān)測(cè)前述相互作用的目的。例如，本發(fā)明的方法可包括直接地或間接地標(biāo)記本發(fā)明前述的多肽；將該標(biāo)記的多肽與準(zhǔn)備篩選TSH受體自身抗體的體液樣品接觸，從而提供它們的混合物；往混合物中加入存在于體液樣品中的TSH受體自身抗體的結(jié)合對(duì)應(yīng)物(如，抗IgG試劑)，從而導(dǎo)致了混合物中標(biāo)記的多肽和TSH受體自身抗體的任一復(fù)合物的沉淀。此外，優(yōu)選本發(fā)明的方法進(jìn)一步包含往混合物中加入TSH受體自身抗體的標(biāo)記過(guò)的結(jié)合對(duì)應(yīng)物(例如，標(biāo)記的抗IgG試劑，如蛋白A或抗人IgG，或標(biāo)記的TSH受體的全長(zhǎng)序列或它的表位)，其中混合物是通過(guò)接觸(i)固定到支持物上的本發(fā)明前述的多肽和(ii)準(zhǔn)備用來(lái)篩選TSH受體自身抗體的體液樣品而得到的。此外，還優(yōu)選使用已知的競(jìng)爭(zhēng)性檢測(cè)方法，從本發(fā)明的體液樣品中篩選TSH受體的自身抗體。例如，本發(fā)明的方法可使用至少一個(gè)競(jìng)爭(zhēng)物，該競(jìng)爭(zhēng)物能與TSH受體的自身抗體競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合本發(fā)明前述的多肽。典型地，本發(fā)明的競(jìng)爭(zhēng)性檢測(cè)方法中使用的競(jìng)爭(zhēng)物可包含一個(gè)或多個(gè)抗體，該抗體可以是天然的，或部分或全部合成得到的。本發(fā)明使用的競(jìng)爭(zhēng)物可選擇性的含有任何其它具有結(jié)合結(jié)構(gòu)域或區(qū)域的蛋白(例如TSH)，該含有結(jié)合結(jié)構(gòu)域或區(qū)域的蛋白能夠與TSH受體的自身抗體競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合本發(fā)明前述的多肽。優(yōu)選地，本發(fā)明使用的競(jìng)爭(zhēng)物包含單克隆抗體，重組抗體和多克隆抗體(尤其是單克隆抗體)，它們能與TSH受體的自身抗體競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合本發(fā)明前述的多肽。因此典型地，本發(fā)明的競(jìng)爭(zhēng)性檢測(cè)方法可進(jìn)一步包含提供至少一個(gè)競(jìng)爭(zhēng)物，例如單克隆或多克隆抗體，從而在所述方法的步驟(b)中本發(fā)明前述的多肽能夠與競(jìng)爭(zhēng)物，如單克隆或多克隆抗體，或者所述樣品中的TSH受體的自身抗體相互作用。典型地，根據(jù)本發(fā)明在競(jìng)爭(zhēng)性檢測(cè)方法中監(jiān)測(cè)包括比較:(i)在不存在待篩選的體液樣品(也就是疑似疾病樣品)，但正常受試者的體液樣品、也就是沒(méi)有與TSH受體免疫反應(yīng)相關(guān)的自身免疫疾病的受試者的體液樣品任意存在的條件下，本發(fā)明前述的多肽與一個(gè)或多個(gè)前述的競(jìng)爭(zhēng)物(尤其是單克隆或多克隆抗體)的相互作用；與(ii)在存在待篩選的體液樣品(也就是疑似疾病樣品)的條件下，本發(fā)明前述的多肽與一個(gè)或多個(gè)前述的競(jìng)爭(zhēng)物(尤其是單克隆或多克隆抗體)的相互作用。典型地，這種比較涉及觀察與⑴相比(ii)中的競(jìng)爭(zhēng)物與本發(fā)明前述多肽之間相互作用的減小，以便能為所述樣品中存在TSH受體的自身抗體提供指征。一般地，可以通過(guò)直接或間接地標(biāo)記競(jìng)爭(zhēng)物，在含有和不含有準(zhǔn)備篩選TSH受體自身抗體的體液樣品的條件下，監(jiān)測(cè)上述標(biāo)記的競(jìng)爭(zhēng)物與本發(fā)明多肽的相互作用間的任何變化，從而觀察到相互作用的減小。合適地，本發(fā)明前述的 多肽可被固定住以便進(jìn)行上述的監(jiān)測(cè)。本發(fā)明尤其提供了一種從受試者(尤其是人)的體液樣品中篩選針對(duì)TSH受體的自身抗體的方法，該受試者懷疑患有、容易患有或患有與TSH受體免疫反應(yīng)相關(guān)的自身免疫疾病、或者受試者是該自身免疫疾病的康復(fù)者，所述方法包含:(a)提供來(lái)自所述受試者的所述體液樣品；(b)使所述樣品接觸:(i) TSH受體的全長(zhǎng)序列(尤其是重組獲得的TSH受體的全長(zhǎng)序列)接觸，和(ii)至少一個(gè)競(jìng)爭(zhēng)物接觸，其中該競(jìng)爭(zhēng)物能與本發(fā)明的TSH受體自身抗體競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合本發(fā)明前述的多肽，(在允許TSH受體和這些針對(duì)TSH受體的自身抗體相互作用的合適條件下)，以便允許所述的TSH受體的全長(zhǎng)序列與所述樣品中TSH受體的自身抗體或所述的競(jìng)爭(zhēng)物相互作用；并且(c)監(jiān)測(cè)所述的TSH受體的全長(zhǎng)序列與所述樣品中的自身抗體相互作用，因而提供了所述的TSH受體自身抗體存在于樣品中的指示。TSH受體的全長(zhǎng)序列可以是人的、豬的、牛的、犬科動(dòng)物的、貓科動(dòng)物的、小鼠的、大
鼠的或來(lái)源于綿羊的，更優(yōu)選是重組獲得的TSH受體的全長(zhǎng)序列。在該檢測(cè)中使用的競(jìng)爭(zhēng)物通常包括前述的單克隆或多克隆抗體(優(yōu)選單克隆)。在本發(fā)明的方法中使用的合適的可探測(cè)到的標(biāo)記物選自酶標(biāo)記物、同位素標(biāo)記物、化學(xué)發(fā)光標(biāo)記物、熒光標(biāo)記物，染料等。在使用同位素標(biāo)記(例如125I，14C，3H或35S)的情況下，監(jiān)測(cè)包括測(cè)定放射性，該放射性依賴(lài)于本發(fā)明前述多肽的結(jié)合。一般用8&_&計(jì)數(shù)器或液態(tài)閃爍計(jì)數(shù)器來(lái)測(cè)定放射性。在根據(jù)本發(fā)明篩選淋巴細(xì)胞的方法下，一般優(yōu)選首先使用本領(lǐng)域公知的技術(shù)從受試者體液樣品中分離到淋巴細(xì)胞，接著與本發(fā)明的多肽接觸來(lái)刺激分離的淋巴細(xì)胞的增殖。監(jiān)測(cè)本發(fā)明的多肽與上述增殖的淋巴細(xì)胞相互接觸的效果，一般使用本領(lǐng)域公知的技術(shù)來(lái)監(jiān)測(cè)淋巴細(xì)胞的增殖。
根據(jù)本發(fā)明進(jìn)一步優(yōu)選的實(shí)施方式，提供了一種試劑盒用來(lái)篩選受試者(尤其是人)體液樣品中針對(duì)TSH受體的自身抗體或淋巴細(xì)胞,該受試者懷疑患有、容易患有或患有與TSH受體免疫反應(yīng)相關(guān)的自身免疫疾病、或者受試者是該自身免疫疾病的康復(fù)者,所述的試劑盒包括:(a)本發(fā)明前述的多肽；(b)用于將(i)從所述受試者中獲得的所述體液樣品，或(ii)從所述受試者體液樣品中分離到的淋巴細(xì)胞，與本發(fā)明前述的的多肽接觸(在允許TSH受體和這些針對(duì)TSH受體的自身抗體或淋巴細(xì)胞相互作用的合適條件下)的裝置(means)，以便允許所述的多肽能夠與針對(duì)TSH受體的自身抗體或淋巴細(xì)胞相互作用，該抗體或淋巴細(xì)胞存在于所述的樣品中或從所述的樣品中分離到；以及(c)用于監(jiān)測(cè)所述的多肽與所述的針對(duì)TSH受體的自身抗體或淋巴細(xì)胞相互作用的程度和效果的裝置，其中該抗體或淋巴細(xì)胞存在于所述的樣品中或從所述的樣品中分離至IJ，從而為所述自身抗體或所述淋巴細(xì)胞存在于樣品中或從樣品中分離出提供指征。實(shí)際上，如上所述， 本發(fā)明的試劑盒適合用來(lái)從受試者的體液樣品中篩選針對(duì)TSH受體的自身抗體或淋巴細(xì)胞。本發(fā)明的試劑盒，尤其適合用來(lái)從受試者的體液樣品中篩選針對(duì)TSH受體的自身抗體，在后面會(huì)有詳細(xì)敘述。本發(fā)明尤其提供了一種試劑盒，用來(lái)從受試者(尤其是人)的體液樣品中篩選針對(duì)TSH受體的自身抗體,該受試者懷疑患有、容易患有或患有與TSH受體免疫反應(yīng)相關(guān)的自身免疫疾病、或者受試者是該自身免疫疾病的康復(fù)者，所述試劑盒包含:(a)本發(fā)明前述的多肽；(b)用于將從所述受試者中獲得的所述體液樣品與前述的本發(fā)明的多肽接觸(在允許TSH受體和這些針對(duì)TSH受體的自身抗體相互作用的合適條件下)，以便允許所述的多肽能夠與存在于所述樣品中的針對(duì)TSH受體的自身抗體相互作用的裝置(means);以及(c)用于監(jiān)測(cè)所述的多肽與所述的存在于所述樣品中的針對(duì)TSH受體的自身抗體相互作用的程度，從而為所述自身抗體存在于樣品中提供指征的裝置。典型地，本發(fā)明的試劑盒還包括對(duì)照，例如，從正常受試者、也就是沒(méi)有與TSH受體免疫反應(yīng)相關(guān)的自身免疫疾病的受試者中獲得體液樣品。篩選本發(fā)明TSH受體的自身抗體的試劑盒可以包括直接監(jiān)測(cè)(i)受試者體液樣品中的針對(duì)TSH受體的自身抗體與(ii)如本發(fā)明前述的多肽的相互作用的裝置，典型地包括本領(lǐng)域已知的非競(jìng)爭(zhēng)性三明治型檢測(cè)方法。典型地，本發(fā)明的試劑盒包含非競(jìng)爭(zhēng)性的檢測(cè)方法，用來(lái)監(jiān)測(cè)(i)前述樣品中的TSH受體的自身抗體與(ii)本發(fā)明多肽的相互作用的程度，該方法包括給本發(fā)明前述的多肽或者TSH受體自身抗體的結(jié)合對(duì)應(yīng)物提供標(biāo)記物,任一種技術(shù)都能夠達(dá)到監(jiān)測(cè)前述相互作用的目的。例如，本發(fā)明的試劑盒可包括直接地或間接地標(biāo)記本發(fā)明前述的多肽；將該標(biāo)記的多肽與準(zhǔn)備篩選TSH受體自身抗體的體液樣品接觸，從而提供它們的混合物；存在于體液樣品中的TSH受體自身抗體的結(jié)合對(duì)應(yīng)物(如，抗IgG試劑)；往混合物中加入該結(jié)合對(duì)應(yīng)物，從而導(dǎo)致了混合物中標(biāo)記的多肽和TSH受體自身抗體的任意一種復(fù)合物的沉淀。此外，優(yōu)選本發(fā)明的試劑盒進(jìn)一步包含往混合物中加入TSH受體自身抗體的標(biāo)記過(guò)的結(jié)合對(duì)應(yīng)物(例如，標(biāo)記的抗IgG試劑,如蛋白A或抗人IgG,或標(biāo)記的TSH受體的全長(zhǎng)序列或它的表位)，其中混合物是通過(guò)接觸(i)固定到支持物上的本發(fā)明前述的多肽和(ii)準(zhǔn)備用來(lái)篩選TSH受體自身抗體的體液樣品而得到的。此外，還優(yōu)選使用包含已知的競(jìng)爭(zhēng)性檢測(cè)方法的試劑盒從本發(fā)明的體液樣品中篩選TSH受體自身抗體。例如，本發(fā)明的試劑盒可使用至少一個(gè)競(jìng)爭(zhēng)物，該競(jìng)爭(zhēng)物能與TSH受體的自身抗體競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合本發(fā)明前述的多肽。典型地，本發(fā)明的競(jìng)爭(zhēng)性檢測(cè)試劑盒中使用的競(jìng)爭(zhēng)物可包含一個(gè)或多個(gè)抗體，該抗體可以是天然的，或部分或全部合成得到的。本發(fā)明使用的競(jìng)爭(zhēng)物可選擇性的含有任何其它具有結(jié)合結(jié)構(gòu)域或區(qū)域的蛋白(例如TSH)，該含有結(jié)合結(jié)構(gòu)域或區(qū)域的蛋白能夠與TSH受體的自身抗體競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合本發(fā)明前述的多肽。優(yōu)選地，本發(fā)明使用的競(jìng)爭(zhēng)物包含單克隆抗體或多克隆抗體(尤其是單克隆抗體)，它們能與TSH受體的自身抗體競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合本發(fā)明前述的多肽。因此典型地，本發(fā)明的競(jìng)爭(zhēng)性檢測(cè)試劑盒可進(jìn)一步包含提供至少一個(gè)競(jìng)爭(zhēng)物，例如單克隆或多克隆抗體，從而本發(fā)明前述的多肽能夠與競(jìng)爭(zhēng)物，如單克隆或多克隆抗體，或者所述樣品中的TSH受體的自 身抗體相互作用。典型地，根據(jù)本發(fā)明監(jiān)測(cè)競(jìng)爭(zhēng)性檢測(cè)的試劑盒包括比較:(i)在不存在待篩選的體液樣品(也就是疑似疾病樣品)，并且但正常受試者的體液樣品、也就是沒(méi)有與TSH受體免疫反應(yīng)相關(guān)的自身免疫疾病的受試者的體液樣品任意存在的條件下，本發(fā)明前述的多肽與一個(gè)或多個(gè)前述的競(jìng)爭(zhēng)物(尤其是單克隆或多克隆抗體)的相互作用；與(ii)在存在待篩選的體液樣品的條件下，本發(fā)明前述的多肽與一個(gè)或多個(gè)前述的競(jìng)爭(zhēng)物(尤其是單克隆或多克隆抗體)的相互作用。典型地，這種比較涉及觀察與⑴相比(ii)中的競(jìng)爭(zhēng)物與本發(fā)明前述多肽之間相互作用的減小，以便能為所述樣品中存在TSH受體的自身抗體提供指征。一般地，可以通過(guò)直接或間接地標(biāo)記競(jìng)爭(zhēng)物，在含有和不含有準(zhǔn)備篩選TSH受體自身抗體的體液樣品的條件下，監(jiān)測(cè)上述標(biāo)記的競(jìng)爭(zhēng)物與本發(fā)明多肽的相互作用間的任何變化，從而觀察到相互作用的減小。合適地，本發(fā)明前述的多肽可被固定住以便進(jìn)行上述的監(jiān)測(cè)。本發(fā)明尤其提供了一種試劑盒，用來(lái)從受試者(尤其是人)的體液樣品中篩選針對(duì)TSH受體的自身抗體,該受試者懷疑患有、容易患有或患有與TSH受體免疫反應(yīng)相關(guān)的自身免疫疾病、或者受試者是該自身免疫疾病的康復(fù)者，所述試劑盒包含:(a)TSH受體的全長(zhǎng)序列(尤其是重組獲得的TSH受體的全長(zhǎng)序列)；(b)至少一個(gè)競(jìng)爭(zhēng)物，其中該競(jìng)爭(zhēng)物能與本發(fā)明的TSH受體自身抗體競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合本發(fā)明前述的多肽，(c)用來(lái)接觸來(lái)源于受試者的體液樣品、所述的TSH受體全長(zhǎng)序列和所述的競(jìng)爭(zhēng)物(在允許TSH受體和這些針對(duì)TSH受體的自身抗體相互作用的合適條件下)，以便允許所述的TSH受體全長(zhǎng)序列與所述樣品中TSH受體的自身抗體或所述的競(jìng)爭(zhēng)物相互作用的裝置(means);并且(d)監(jiān)測(cè)所述的TSH受體全長(zhǎng)序列與所述樣品中的自身抗體相互作用，因而為所述的TSH受體自身抗體存在于樣品中提供指征的裝置。TSH受體的全長(zhǎng)序列可以是人的、豬的、牛的、犬科動(dòng)物的、貓科動(dòng)物的、小鼠的、大鼠的或來(lái)源于綿羊的，更優(yōu)選是重組獲得的TSH受體全長(zhǎng)序列。在該檢測(cè)試劑盒中使用的競(jìng)爭(zhēng)物通常包括前述的單克隆或多克隆抗體(優(yōu)選單克隆)。在本發(fā)明的試劑盒中使用的合適的可探測(cè)到的標(biāo)記物選自酶標(biāo)記物、同位素標(biāo)記物、化學(xué)發(fā)光標(biāo)記物、熒光標(biāo)記物，染料等。在使用同位素標(biāo)記(例如125I，14C，3H或35S)的情況下，監(jiān)測(cè)包括測(cè)定放射性，該放射性依賴(lài)于本發(fā)明前述多肽的結(jié)合。一般用8&_&計(jì)數(shù)器或液態(tài)閃爍計(jì)數(shù)器來(lái)測(cè)定放射性。在利用本發(fā)明篩選淋巴細(xì)胞的試劑盒的情況下，一般優(yōu)選首先使用本領(lǐng)域公知的技術(shù)從受試者體液樣品中分離到淋巴細(xì)胞，接著與本發(fā)明的多肽接觸來(lái)刺激分離的淋巴細(xì)胞的增殖。本發(fā)明的試劑盒還提供了監(jiān)測(cè)本發(fā)明的多肽與上述增殖的淋巴細(xì)胞相互接觸效果的手段(也為本領(lǐng)域所公知)。從前文的描述可知，本發(fā)明提供了檢測(cè)方法和試劑盒，用來(lái)檢測(cè)針對(duì)體液樣品中TSH受體的自身抗體(尤其)或淋巴細(xì)胞。針對(duì)體液樣品中TSH受體的自身抗體和/或淋巴細(xì)胞(或至少是樣品中這類(lèi)自身抗體和/或淋巴細(xì)胞的水平)是可檢測(cè)出的，檢測(cè)結(jié)果可表明在受試者中是否 存在與TSH受體免疫反應(yīng)相關(guān)的自身免疫疾病，其中樣品是從該受試者中獲得的，該檢測(cè)可以用來(lái)診斷與TSH受體免疫反應(yīng)相關(guān)的自身免疫疾病的征兆或疾病的存在與否。因此，本發(fā)明進(jìn)一步提供了一種方法，該方法用來(lái)診斷在受試者(尤其是人)中與TSH受體免疫反應(yīng)相關(guān)的自身免疫疾病的征兆或疾病的存在與否，其中該受試者懷疑患有、容易患有或患有與TSH受體免疫反應(yīng)相關(guān)的自身免疫疾病、或者受試者是該自身免疫疾病的康復(fù)者，所述方法包含檢測(cè)受試者體液樣品中針對(duì)TSH受體的自身抗體或淋巴細(xì)胞，因而，檢測(cè)到的自身抗體和/或淋巴細(xì)胞可以用來(lái)診斷在受試者中與TSH受體免疫反應(yīng)相關(guān)的自身免疫疾病的征兆或疾病的存在與否。本發(fā)明進(jìn)一步提供了一種方法，該方法用來(lái)在動(dòng)物受試者(尤其是人)中推遲或預(yù)防與TSH受體免疫反應(yīng)相關(guān)的自身免疫疾病的發(fā)作,其中該受試者懷疑患有或容易患有與TSH受體免疫反應(yīng)相關(guān)的自身免疫疾病、或者受試者是該自身免疫疾病的康復(fù)者，所述方法包含首先檢測(cè)受試者體液樣品中針對(duì)TSH受體的自身抗體或淋巴細(xì)胞，因而,該自身抗體和/或淋巴細(xì)胞是受試者中與TSH受體免疫反應(yīng)相關(guān)的自身免疫疾病的發(fā)作或存在的指征，根據(jù)上述指征對(duì)受試者與TSH受體免疫反應(yīng)相關(guān)的自身免疫疾病的發(fā)作征兆進(jìn)行診斷，以便推遲與TSH受體免疫反應(yīng)相關(guān)的自身免疫疾病的發(fā)作和/或預(yù)防該疾病.
本發(fā)明前述的多肽尤其適合用于與TSH受體免疫反應(yīng)相關(guān)的自身免疫疾病的治療。例如,通過(guò)給予懷疑患有、容易患有或患有與TSH受體免疫反應(yīng)相關(guān)的自身免疫疾病、或者是該自身免疫疾病的康復(fù)者的受試者(尤其是人)本發(fā)明前述的多肽，會(huì)產(chǎn)生耐受性。因而，本發(fā)明進(jìn)一步提供了一種藥物組合物，其包括本發(fā)明前述的多肽，以及藥學(xué)上可接受的載體，稀釋劑或賦形劑，其中該多肽可以和針對(duì)TSH受體的自身抗體和/或淋巴細(xì)胞相互作用。本發(fā)明進(jìn)一步提供了前述的多肽在制備治療甲狀腺機(jī)能亢進(jìn)疾病的藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明所述的組合物或藥物應(yīng)包含治療有效量或預(yù)防有效量的至少一種本發(fā)明的多肽，以及藥學(xué)上可接受的載體。藥學(xué)載體可以是任何適合用于向病人給予多肽的可相容的、無(wú)毒的物質(zhì)。無(wú)菌水、酒精、脂肪、蠟和惰性固體都可用作載體。藥學(xué)上可接收的佐劑、緩沖試劑、分散劑等也可加到藥物組合物中。這種組合物可包含本發(fā)明中的單個(gè)多肽或含有兩個(gè)或更多的多肽。也可將本發(fā)明的多肽與免疫球蛋白，如IgG偶聯(lián)，或與患者的淋巴細(xì)胞偶聯(lián)，用來(lái)促進(jìn)耐受性。這種方法記載在 Bradley-Mullen, Activation of Distinct Subsetsof T Suppressor Cells with Type III Ptzemnococcal Polysaccharide Coupled toSyngeneic Spleen Cells, in:1MMUNOLOGICAL TOLERANCE TO SELF AND NON-SELF, Buttistoet al.，eds.，Annals N.Y.Acad.Sc1.Vol.392，ppl56_166，1982。此外，多妝可經(jīng)過(guò)修飾以便保持或促進(jìn)與MHC的結(jié)合，同時(shí)減少或消除與相關(guān)的T細(xì)胞受體的結(jié)合。在該方法下，經(jīng)修飾過(guò)的多肽可與天然TSH受體競(jìng)爭(zhēng)，用來(lái)抑制輔助T細(xì)胞活化，從而抑制免疫反應(yīng)。在該情況下，需要注意，給予的本發(fā)明的藥物組合物能改善但不會(huì)加強(qiáng)自身免疫反應(yīng)。本發(fā)明的藥物組合物能用于腸道外給藥。優(yōu)選，組合物可腸道外給藥，即皮下、肌肉內(nèi)或靜脈內(nèi)給藥。因此，本發(fā)明包括以腸道外給藥的方式給予患者的組合物，該組合物包含存在于如前所述的可接 受載體中的多肽的溶液或分散體。藥物組合物中的多肽濃度可在很大范圍內(nèi)變動(dòng)，即，從小于約0.1%重量比，通常小于約1%重量比，到20%重量百分比或更大的范圍內(nèi)變動(dòng)。典型的用于肌肉內(nèi)注射的藥物組合物含有，例如，Iml的無(wú)菌緩沖水和I至IOOii g的本發(fā)明的純化多肽。一種用于靜脈灌輸?shù)牡湫偷慕M合物包含100至500ml的無(wú)菌Ringer’ s溶液，以及100至500mg的本發(fā)明純化的多肽。制備腸道外給藥組合物的實(shí)際方法是本領(lǐng)域公知的，并且在多處都有詳細(xì)記載，如Remington’s PharmaceuticalScience, 15th Edition, Mack Publishing Company, Easton, Pa.(1980)。除了直接使用本發(fā)明的多肽用于藥物組合物中，還可根據(jù)下述的原理將本發(fā)明的多肽用于增加受試者對(duì)TSH受體的耐受性,該受試者懷疑患有、容易患有或患有與TSH受體免疫反應(yīng)相關(guān)的自身免疫疾病、或者受試者是該自身免疫疾病的康復(fù)者。更特別的是，可使用常規(guī)方法收集受試者的外周血淋巴細(xì)胞，并如上所述與本發(fā)明的多肽相接觸而刺激淋巴細(xì)胞。通常，可存在其它的有絲分裂素和生長(zhǎng)強(qiáng)化子，例如植物血球凝集素、白細(xì)胞介素2，及其它。在本發(fā)明多肽的刺激下，增殖的T輔助細(xì)胞可被分離和克隆。然后持續(xù)增殖的克隆可用來(lái)制備應(yīng)用于受試者的治療組合物?？寺〉腡細(xì)胞可通過(guò)諸如暴露于輻射等方式被弱化，然后給予受試者用來(lái)誘導(dǎo)耐受。此外，T細(xì)胞受體或它的一部分可通過(guò)常規(guī)的蛋白純化方法從克隆的T細(xì)胞中分離到,然后給予受試者。這種免疫治療方法可參考Sinha etal.(1990)Science248:1380-1388。在某些情況下，T輔助細(xì)胞被上述克隆后，也可從T細(xì)胞受體中開(kāi)發(fā)治療用肽，這種肽能有效治療懷疑患有、容易患有或患有與TSH受體免疫反應(yīng)相關(guān)的自身免疫疾病的病人，或者剛從該自身免疫疾病中康復(fù)的病人。在這種情況下，可通過(guò)常規(guī)方法分離并克隆T細(xì)胞受體基因，并通過(guò)上述的重組技術(shù)生產(chǎn)基于該受體的肽。然后，可將重組方法獲得的肽加入到上述的藥物組合物中。本發(fā)明還提供了一種克隆針對(duì)TSH受體的淋巴細(xì)胞的方法，該方法包括:提供淋巴細(xì)胞源；將淋巴細(xì)胞與本發(fā)明前述的多肽接觸，以便使所述的淋巴細(xì)胞增殖；并且分離和克隆增殖的淋巴細(xì)胞。本發(fā)明還提供了上述制備得到的克隆的淋巴細(xì)胞在治療與TSH受體免疫反應(yīng)相關(guān)的自身免疫疾病中的應(yīng)用。因此，提供了一種藥物組合物，含有上述制備到的克隆的淋巴細(xì)胞、藥學(xué)上可接受的載體、稀釋劑和賦形劑，以及這種克隆的淋巴細(xì)胞在制備治療與TSH受體免疫反應(yīng)相關(guān)的自身免疫疾病，尤其是甲狀腺機(jī)能亢進(jìn)疾病，的藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明還提供了一個(gè)或多個(gè)治療劑，該治療劑通過(guò)接觸含有前述的TSH受體的一個(gè)或多個(gè)表位的部分或全部一級(jí)結(jié)構(gòu)的氨基酸序列而產(chǎn)生治療效果，本發(fā)明進(jìn)一步提供了一個(gè)或多個(gè)治療劑，該治療劑通過(guò)接觸含有前述的TSH受體的一個(gè)或多個(gè)表位的部分或全部一級(jí)結(jié)構(gòu)的氨基酸序列而產(chǎn)生治療效果，并且用于治療與TSH受體免疫反應(yīng)相關(guān)的自身免疫疾病。本發(fā)明還進(jìn)一步提供了一種治療與受試者TSH受體免疫反應(yīng)相關(guān)的自身免疫性疾病的方法，該方法包括首先按前述方法檢測(cè)受試者的體液樣品中針對(duì)TSH受體的自身抗體或淋巴細(xì)胞，從而對(duì)受試者的自身免疫性疾病進(jìn)行診斷，然后給予受試者治療有效劑量的至少一種能夠有效治療這種自身免疫疾病的治療劑，例如本發(fā)明前述的多肽。本發(fā)明還進(jìn)一步提供了一種治療與受試者(尤其是人類(lèi)受試者)TSH受體免疫反應(yīng)相關(guān)的自身免疫性疾病的治療方法，該方法包括給予受試者治療有效劑量的治療劑，該治療劑通過(guò)與包含前述TSH受體的一個(gè)或多個(gè)表位的氨基酸一級(jí)結(jié)構(gòu)的部分或全部序列的氨基酸相互反應(yīng)，從而起到治療效果。所給予的治療劑的量根據(jù)所治療的特定的自身免疫性疾病的情況而確定，該情況可能為患者的年齡，最終要依靠治療醫(yī)生的判斷。本發(fā)明還進(jìn)一步提供了前述的試劑盒與 治療有效量的至少一種可有效治療與TSH受體免疫反應(yīng)相關(guān)的自身免疫性疾病的治療劑的聯(lián)合應(yīng)用。如前所述，本發(fā)明篩選的體液樣品一般包括血液樣品或其它液態(tài)血液的部分，例如尤其是血清樣品或血漿樣品，但該樣品通?？梢允橇硗獾纳镆后w，如唾液或尿液或可溶性組織提取物，或通過(guò)活組織穿刺法得到的液體。本發(fā)明還提供了 TSH受體的結(jié)合對(duì)應(yīng)物,例如TSH受體的抗體、或者TSH受體的抗體的片段，該結(jié)合對(duì)應(yīng)物能夠與前述的TSH受體的一個(gè)或多個(gè)表位相互反應(yīng)，尤其是TSH受體的277-296位的氨基酸片段。合適地，本發(fā)明的抗體可以是單克隆抗體(優(yōu)選)、重組抗體或多克隆抗體。本發(fā)明提供的典型的抗體，例如單克隆抗體，都是純化的形式。更特異地，本發(fā)明提供的單克隆抗體可以包括任意的單克隆抗體3C7，2B4，8E2, 18C5, 4D7, 16E5, 17D2, 3B3以及14D3，或者上述抗體的活性片段，這些單克隆抗體或者片段在實(shí)施例中以及接下來(lái)的附圖中進(jìn)行了詳細(xì)地描述。實(shí)施例中描述的諸如2B4, 8E2, 18C5, 4D7, 16E5, 17D2, 3B3以及14D3等抗體或者其活性片段優(yōu)選具有對(duì)TSH受體的高親和力，如最少約為IO8moI'因此，本發(fā)明進(jìn)一步提供了對(duì)TSH受體的一個(gè)或多個(gè)表位的親和力至少約為IO8Iiior1的單克隆抗體，該表位由TSH受體的下述氨基酸序列之一提供:TSH受體的22至91位氨基酸；或者TSH受體的246至260位氨基酸；或者更特異地，包含TSH受體的下述氨基酸序列之一:
TSH受體的36至42位氨基酸；或者TSH受體的247至260位氨基酸。本發(fā)明還提供了對(duì)TSH受體的一個(gè)或多個(gè)表位的親和力至少約為IO8Hior1的單克隆抗體，該表位由TSH受體的下述氨基酸序列之一提供:TSH受體的32至41位氨基酸；或者TSH受體的277至296位氨基酸。本發(fā)明特別優(yōu)選的實(shí)施例提供了 TSH受體的結(jié)合對(duì)應(yīng)物，該結(jié)合對(duì)應(yīng)物能夠與TSH受體結(jié)合從而刺激TSH受體，該結(jié)合對(duì)應(yīng)物不包括TSH或TSH受體的天然制備的自身抗體。優(yōu)選的結(jié)合對(duì)應(yīng)物包括抗體，尤其是單克隆或者重組抗體(優(yōu)選單克隆)，其能夠與TSH受體結(jié)合，從而刺激TSH受體。本文公開(kāi)的能夠通過(guò)這種途徑刺激TSH受體的單克隆抗體的實(shí)例包括4D7，16E5, 17D2和14D3。本發(fā)明的優(yōu)選情況提供了 TSH受體的結(jié)合對(duì)應(yīng)物，該結(jié)合對(duì)應(yīng)物能夠與TSH受體結(jié)合，從而刺激TSH受體，其包含:抗體Vh結(jié)構(gòu)域 ，其選自下述組成的組:圖10、14、18、22、42、46或50所示的Vh結(jié)構(gòu)域，包含一個(gè)或多個(gè)VhCDI^A Vh結(jié)構(gòu)域，所述Vh⑶R具有與圖10所示的Vh⑶R相對(duì)應(yīng)的氨基酸序列，包含一個(gè)或多個(gè)Vh⑶R的Vh結(jié)構(gòu)域，所述Vh CDR具有與圖14所示的Vh CDR相對(duì)應(yīng)的氨基酸序列，包含一個(gè)或多Avh⑶結(jié)構(gòu)域，所述Vh⑶R具有與圖18所示的vH⑶R相對(duì)應(yīng)的氨基酸序列，包含一個(gè)或多個(gè)Vh CDM^vh結(jié)構(gòu)域，所述Vh CDR具有與圖22所示的Vh CDR相對(duì)應(yīng)的氨基酸序列，包含一個(gè)或多個(gè)Vh⑶R的Vh結(jié)構(gòu)域，所述Vh⑶R具有與圖42所示的Vh⑶R相對(duì)應(yīng)的氨基酸序列，包含一個(gè)或多個(gè)Vh⑶R的Vh結(jié)構(gòu)域，所述Vh⑶R具有與圖46所示的Vh⑶R相對(duì)應(yīng)的氨基酸序列，包含一個(gè)或多個(gè)Vh CDR的Vh結(jié)構(gòu)域，所述Vh CDR具有與圖50所示的Vh CDR相對(duì)應(yīng)的氨基酸序列；和/或抗體\結(jié)構(gòu)域，其選自下述組成的組:圖12、16、20、24、44、48或52所示的Vl結(jié)構(gòu)域，包含一個(gè)或多個(gè)VlCDR的Vl結(jié)構(gòu)域，所述' ⑶R具有與圖12所示的' ⑶R相對(duì)應(yīng)的氨基酸序列，包含一個(gè)或多個(gè)' ⑶R的'結(jié)構(gòu)域，所述' CDR具有與圖16所示的\ CDR相對(duì)應(yīng)的氨基酸序列，包含一個(gè)或多個(gè)\⑶R的\結(jié)構(gòu)域，所述\⑶R具有與圖20所示的\⑶R相對(duì)應(yīng)的氨基酸序列，包含一個(gè)或多個(gè)' CDR的'結(jié)構(gòu)域，所述' CDR具有與圖24所示的' CDR相對(duì)應(yīng)的氨基酸序列，包含一個(gè)或多個(gè)\⑶R的\結(jié)構(gòu)域，所述\⑶R具有與圖44所示的\⑶R相對(duì)應(yīng)的氨基酸序列，包含一個(gè)或多個(gè)\⑶R的\結(jié)構(gòu)域，所述\⑶R具有與圖48所示的\⑶R相對(duì)應(yīng)的氨基酸序列，包含一個(gè)或多個(gè)\ CDR的\結(jié)構(gòu)域，所述\ CDR具有與圖52所示的\ CDR相對(duì)應(yīng)的氨基酸序列。本發(fā)明前述結(jié)合對(duì)應(yīng)物優(yōu)選包含與前述抗體'結(jié)構(gòu)域成對(duì)的前述抗體Vh結(jié)構(gòu)域，從而使提供的TSH受體的抗體結(jié)合位點(diǎn)包含Vh和\結(jié)構(gòu)域，盡管進(jìn)一步的討論說(shuō)明抗體Vh結(jié)構(gòu)域或抗體\結(jié)構(gòu)域各自獨(dú)立地用于與TSH受體結(jié)合。因此前述的結(jié)合對(duì)應(yīng)物優(yōu)選可包含前述抗體Vh結(jié)構(gòu)域而不包含抗體\結(jié)構(gòu)域。前述的結(jié)合對(duì)應(yīng)物同樣優(yōu)選可包含前述抗體\結(jié)構(gòu)域而不包含抗體Vh結(jié)構(gòu)域。相應(yīng)地，前述的結(jié)合對(duì)應(yīng)物可以包含與前述抗體\結(jié)構(gòu)域成對(duì)的抗體Vh結(jié)構(gòu)域，其提供的TSH受體的抗體結(jié)合位點(diǎn)包含Vh和\結(jié)構(gòu)域。因此本發(fā)明優(yōu)選的實(shí)施例可以包括前述的結(jié)合對(duì)應(yīng)物，其包含與圖12所示抗體'結(jié)構(gòu)域成對(duì)的圖10所示的抗體Vh結(jié)構(gòu)域，從而為T(mén)SH受體提供包含Vh和\結(jié)構(gòu)域的抗體結(jié)合位點(diǎn)；或者包括前述的結(jié)合對(duì)應(yīng)物，其包含與圖16所示抗體Vlj結(jié)構(gòu)域成對(duì)的圖14所示的抗體Vh結(jié)構(gòu)域,從而為T(mén)SH受體提供包含Vh和\結(jié)構(gòu)域的抗體結(jié)合位點(diǎn)；或者包括前述的結(jié)合對(duì)應(yīng)物，其包含與圖20所示抗體\結(jié)構(gòu)域成對(duì)的圖18所示的抗體Vh結(jié)構(gòu)域，從而為T(mén)SH受體提供包含Vh和\結(jié)構(gòu)域的抗體結(jié)合位點(diǎn)；或者包括前述的結(jié)合對(duì)應(yīng)物，其包含與圖24所示抗體\結(jié)構(gòu)域成對(duì)的圖22所示的抗體Vh結(jié)構(gòu)域，從而為T(mén)SH受體提供包含Vj^P Vli結(jié)構(gòu)域的抗體結(jié)合位點(diǎn)；或者包括前述的結(jié)合對(duì)應(yīng)物,其包含與圖44所示抗體Vli結(jié)構(gòu)域成對(duì)的圖42所示的抗體Vh結(jié)構(gòu)域，從而為T(mén)SH受體提供包含Vh和\結(jié)構(gòu)域的抗體結(jié)合位點(diǎn)；或者包括前述的結(jié)合對(duì)應(yīng)物，其包含與圖48所示抗體Vlj結(jié)構(gòu)域成對(duì)的圖46所示的抗體Vh結(jié)構(gòu)域,從而為T(mén)SH受體提供包含Vh和\結(jié)構(gòu)域的抗體結(jié)合位點(diǎn)；或者包括前述的結(jié)合對(duì)應(yīng)物，其包含與圖52所示抗體\結(jié)構(gòu)域成對(duì)的圖50所示的抗體Vh結(jié)構(gòu)域，從而為T(mén)SH受體提供包含Vh和 \結(jié)構(gòu)域的抗體結(jié)合位點(diǎn)。本發(fā)明進(jìn)一步構(gòu)想前述Vh結(jié)構(gòu)域可以與其它的、而非本文為詳述的'結(jié)構(gòu)域成對(duì)連接。本發(fā)明還進(jìn)一步構(gòu)想本文描述的\結(jié)構(gòu)域可以與其它的、而非本文為詳述的Vh結(jié)構(gòu)域成對(duì)連接。本發(fā)明的另一實(shí)施例提供了如前所述的TSH受體的結(jié)合對(duì)應(yīng)物，該結(jié)合對(duì)應(yīng)物能夠與TSH受體結(jié)合，從而刺激TSH受體，其包含:抗體Vh結(jié)構(gòu)域，其包含:包含一個(gè)或多Avh⑶R的Vh結(jié)構(gòu)域，所述Vh⑶R具有與圖10所示的Vh⑶R相對(duì)應(yīng)的氨基酸序列，或者包含一個(gè)或多個(gè)Vh CDR的Vh結(jié)構(gòu)域，所述Vh CDR具有與圖14所示的％ CDR相對(duì)應(yīng)的氨基酸序列，或者包含一個(gè)或多fVH CDR的Vh結(jié)構(gòu)域，所述Vh CDR具有與圖18所示的Vh CDR相對(duì)應(yīng)的氨基酸序列，或者包含一個(gè)或多個(gè)Vh CDR的Vh結(jié)構(gòu)域，所述VhCDR具有與圖22所示的Vh⑶R相對(duì)應(yīng)的氨基酸序列，或者包含一個(gè)或多個(gè)Vh⑶R的Vh結(jié)構(gòu)域，所述Vh CDR具有與圖42所示的Vh CDR相對(duì)應(yīng)的氨基酸序列，或者包含一個(gè)或多個(gè)Vh⑶R的Vh結(jié)構(gòu)域，所述Vh⑶R具有與圖46所示的Vh⑶R相對(duì)應(yīng)的氨基酸序列，或者包含一個(gè)或多個(gè)Vh⑶結(jié)構(gòu)域，所述Vh⑶R具有與圖50所示的Vh⑶R相對(duì)應(yīng)的氨基酸序列；和/或抗體Vl結(jié)構(gòu)域，其包含:包含一個(gè)或多個(gè)八⑶R的八結(jié)構(gòu)域，所述八⑶R具有與圖12所示的八⑶R相對(duì)應(yīng)的氨基酸序列，或者包含一個(gè)或多個(gè)\ CDR的'結(jié)構(gòu)域，所述' CDR具有與圖16所示的八CDR相對(duì)應(yīng)的氨基酸序列，或者包含一個(gè)或多個(gè)' CDR的'結(jié)構(gòu)域，所述' CDR具有與圖20所示的\ CDR相對(duì)應(yīng)的氨基酸序列，或者包含一個(gè)或多個(gè)\ CDR的\結(jié)構(gòu)域，所述\ CDR具有與圖24所示的\ CDR相對(duì)應(yīng)的氨基酸序列，或者包含一個(gè)或多個(gè)'CDR的'結(jié)構(gòu)域，所述' CDR具有與圖44所示的' CDR相對(duì)應(yīng)的氨基酸序列，或者包含一個(gè)或多個(gè)\⑶R的\結(jié)構(gòu)域，所述\⑶R具有與圖48所示的\⑶R相對(duì)應(yīng)的氨基酸序列，或者包含一個(gè)或多個(gè)' ⑶R的'結(jié)構(gòu)域，所述' ⑶R具有與圖52所示的' ⑶R相對(duì)應(yīng)的氨基酸序列。
上述的一個(gè)或多個(gè)⑶R可以選自前述的Vh和Vl結(jié)構(gòu)域并插入至合適的框架中。例如，前述的一個(gè)或多個(gè)CDR的氨基酸序列可被插入至與本文所述不同的抗體框架區(qū)域，然后該抗體插入一個(gè)或多個(gè)CDR并能夠與TSH受體結(jié)合，優(yōu)選刺激前述的TSH受體。或者，本發(fā)明的結(jié)合對(duì)應(yīng)物可以包含能夠與TSH受體結(jié)合的多肽，從而能夠刺激前述的TSH受體，并包含本文所述的一個(gè)或多個(gè)CDR的一級(jí)結(jié)構(gòu)氨基酸序列，以及任選的進(jìn)一步包括氨基酸，進(jìn)一步包括的氨基酸能夠增強(qiáng)所述的一個(gè)或多個(gè)CDR對(duì)TSH受體的結(jié)合親和力，或者不影響多肽對(duì)TSH受體的結(jié)合特性。本發(fā)明優(yōu)選的結(jié)合對(duì)應(yīng)物包括抗體。本文所用的術(shù)語(yǔ)“抗體”包括天然的、或者部分或全部合成制備得到的免疫球蛋白。該術(shù)語(yǔ)還涵蓋了具有結(jié)合結(jié)構(gòu)域的任意多肽，該結(jié)構(gòu)域?yàn)榭贵w結(jié)合結(jié)構(gòu)域或與抗體結(jié)合結(jié)構(gòu)域同源?？贵w的實(shí)例包括免疫球蛋白同種型和它們的同種亞型(isotypic subclasses)以及包含諸如Fab、scFv或類(lèi)似的抗體結(jié)合結(jié)構(gòu)域的片段。特別地，本文所述的特異的抗體片段構(gòu)成了本發(fā)明的重要方面。這樣，本發(fā)明的結(jié)合對(duì)應(yīng)物包含前述的抗體，該抗體可以包含下述片段中的任何:(i)由\、Vh和ChI結(jié)構(gòu)域組成的Fab片段；(ii)由Vh和ChI結(jié)構(gòu)域組成的Fd片段；(iii)由' 和Vh結(jié)構(gòu)域組成的Fv片段；(iv)由Vh結(jié)構(gòu)域組成的dAb片段；(v)分離的CDR區(qū)域；(vi)F(ab’)2片段,一個(gè)包含兩個(gè)相連的Fab片段的二價(jià)片段；以及(vii)單鏈Fv分子(scFv)，其中Vh結(jié)構(gòu)域和'結(jié)構(gòu)域通過(guò)肽連接子(linker)相連,從而使得兩個(gè)結(jié)構(gòu)域聯(lián)合形成抗原結(jié)合位點(diǎn)。當(dāng)本發(fā)明的結(jié)合對(duì)應(yīng)物包含抗體時(shí)，該抗體可以包含完整的抗體，其中的抗體包括可變區(qū)和恒定區(qū)，參考圖9-24或者41-52可進(jìn)一步闡述針對(duì)本發(fā)明抗體的可變區(qū)和恒定區(qū)。本發(fā)明還可包含本文所述的特定的結(jié)合對(duì)應(yīng)物、抗體、VH結(jié)構(gòu)域、'結(jié)構(gòu)域、⑶R和多肽的突變株、類(lèi)似物和衍生物，其中所述的突變株、類(lèi)似物和衍生物保留了與TSH受體結(jié)合的能力從而刺激本文前述的 TSH受體。本文前述的術(shù)語(yǔ)突變株、類(lèi)似物和衍生物進(jìn)一步詳細(xì)描述了本發(fā)明的多肽，前述這些術(shù)語(yǔ)意味著也可使用本發(fā)明特異的結(jié)合對(duì)應(yīng)物的突變株、類(lèi)似物和衍生物。本發(fā)明還進(jìn)一步提供了能夠與TSH受體結(jié)合的結(jié)合對(duì)應(yīng)物，從而刺激本文前述的TSH受體，進(jìn)一步提供的結(jié)合對(duì)應(yīng)物能與本文公開(kāi)的任何特異性結(jié)合對(duì)應(yīng)物競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合TSH受體，該結(jié)合對(duì)應(yīng)物不包含TSH或TSH受體的自身抗體。特別地，進(jìn)一步提供的結(jié)合對(duì)應(yīng)物可以包含進(jìn)一步的具有前述TSH受體表位區(qū)域結(jié)合位點(diǎn)的抗體,該進(jìn)一步的抗體能夠與TSH受體結(jié)合從而刺激如前所述的TSH受體，并能與本文公開(kāi)的任意特異性結(jié)合對(duì)應(yīng)物競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合TSH受體。本發(fā)明還提供了一種多聚核苷酸，其包括:(i)如圖25至40、或53至64所示的核苷酸序列；或上述序列的一部分，諸如圖26、28、30、32、34、36、38、40、54、56、58、60、62 或 64 所示，其編碼如圖 10、12、14、16、18、20、22、24、42、44、46、48、50或52任意所示的抗體Vh結(jié)構(gòu)域、抗體\結(jié)構(gòu)域、或CDR的氨基酸序列:；(ii)編碼本文前述的結(jié)合對(duì)應(yīng)物的核苷酸序列，或者編碼如前所述的抗體Vh結(jié)構(gòu)域、抗體\結(jié)構(gòu)域、或結(jié)合對(duì)應(yīng)物的CDR的氨基酸序列；
(iii)編碼具有如圖9至24或41至52所示氨基酸一級(jí)結(jié)構(gòu)的結(jié)合對(duì)應(yīng)物的核苷酸序列，或者編碼如圖10、12、14、16、18、20、22、24、42、44、46、48、50或52任意所示的抗體Vh結(jié)構(gòu)域、抗體\結(jié)構(gòu)域、或CDR的氨基酸序列；(iv)遺傳密碼的簡(jiǎn)并性所致的密碼子序列與⑴中的任意序列都不同的核苷酸序列；(V)包含(i)中任意序列的等位基因突變的核苷酸序列；(vi)包含選自(i)、(ii)、(iii)、(iv)或(V)任意序列的片段的核苷酸序列，尤其是包含選自(i)、(ii)、(iii)、(iv)或(V)任意序列的片段、且編碼本文前述結(jié)合對(duì)應(yīng)物的Fab片段、Fd片段、Fv片段、dAb片段、分離的CDR區(qū)域、F(ab’ ) 2片段、或scFv片段的核苷酸序列；(vii)核苷酸堿基的突變、缺失或取代所致的與(i)中的任意序列不同的核苷酸序列，其編碼前述的結(jié)合對(duì)應(yīng)物，或編碼前述的結(jié)合對(duì)應(yīng)物的抗體Vh結(jié)構(gòu)域、抗體\結(jié)構(gòu)域、或CDR的氨基酸序列。本發(fā)明的多聚核苷酸的突變株與(i)中任意多聚核苷酸序列的全部長(zhǎng)度中至少具有70%的同一性， 更高的優(yōu)選與(i)中任意的多聚核苷酸序列的全部長(zhǎng)度中至少具有80%的同一性，特別優(yōu)選與(i)中任意的多聚核苷酸序列的全部長(zhǎng)度中至少具有90%的同一性，在這些特別優(yōu)選的多聚核苷酸序列中，尤其優(yōu)選具有95%的同一性。此處所述的特定多聚核苷酸序列突變株的含義已經(jīng)在前面有詳細(xì)描述。本發(fā)明進(jìn)一步提供了一種生物功能載體系統(tǒng)，其載遞前述的多聚核苷酸，能夠?qū)⒍嗑酆塑账嵋胨拗魃锏幕蚪M。本發(fā)明還涉及以本發(fā)明的多聚核苷酸轉(zhuǎn)化的宿主細(xì)胞以及通過(guò)重組技術(shù)制備本發(fā)明的結(jié)合對(duì)應(yīng)物?？梢岳眠z傳工程方法使多聚核苷酸摻入宿主細(xì)胞并表達(dá)本發(fā)明的結(jié)合對(duì)應(yīng)物。本文前述的結(jié)合對(duì)應(yīng)物可以用于診斷和治療，并可有利地與本文前述的TSH受體的一個(gè)或多個(gè)表位區(qū)域相互反應(yīng)或結(jié)合。相應(yīng)地，本文前述的結(jié)合對(duì)應(yīng)物可被用于檢測(cè)前述自身抗體的篩選方法以及前述的診斷方法。也就是，本發(fā)明所述的結(jié)合對(duì)應(yīng)物能夠用于代替已經(jīng)描述的競(jìng)爭(zhēng)物用于檢測(cè)前述自身抗體的篩選方法以及前述的診斷方法。相似地，本發(fā)明的結(jié)合對(duì)應(yīng)物能夠用于代替已經(jīng)描述的競(jìng)爭(zhēng)物用于檢測(cè)前述自身抗體的試劑盒中。本發(fā)明還提供了一種篩選受試者體液樣品中TSH受體自身抗體的方法，所述的受試者懷疑患有、容易患有或患有與TSH受體的免疫反應(yīng)相關(guān)的自身免疫性疾病、或者受試者是該自身免疫疾病的康復(fù)者，所述方法包含:(a)從受試者中獲得所述的體液樣品；(b)將所述樣品與下述物質(zhì)接觸:(i)TSH受體的全長(zhǎng)序列、該受體的一個(gè)或多個(gè)表位或包含TSH受體的一個(gè)或多個(gè)表位的多肽，和(ii)前述的一個(gè)或多個(gè)結(jié)合對(duì)應(yīng)物；(在允許TSH受體和針對(duì)TSH受體的自身抗體相互作用的合適條件下)從而使得所述的TSH受體、所述的該受體的一個(gè)或多個(gè)表位或者所述的多肽與所述樣品中TSH受體的自身抗體、或所述的一個(gè)或多個(gè)結(jié)合對(duì)應(yīng)物相互作用；以及(c)監(jiān)測(cè)所述TSH受體、所述的該受體的一個(gè)或多個(gè)表位或者所述的多肽與所述樣品中的自身抗體的相互作用，從而提供了所述樣品中TSH受體的自身抗體存在的指征。優(yōu)選地，本發(fā)明的上述方法進(jìn)一步包括為一個(gè)或多個(gè)結(jié)合對(duì)應(yīng)物提供標(biāo)記，適宜的標(biāo)記如本文前述。本發(fā)明還提供了一種篩選受試者體液樣品中針對(duì)TSH受體的自身抗體的方法，所述的受試者懷疑患有、容易患有或患有與TSH受體的免疫反應(yīng)相關(guān)的自身免疫性疾病、或者受試者是該自身免疫疾病的康復(fù)者，所述方法包含:(a)從受試者中獲得所述的體液樣品；(b)將所述樣品與下述物質(zhì)接觸:(i)TSH受體全長(zhǎng)序列、該受體的一個(gè)或多個(gè)表位或包含TSH受體的一個(gè)或多個(gè)表位的多肽，和(ii) TSH受體的一個(gè)或多個(gè)結(jié)合成分；(在允許TSH受體與針對(duì)TSH受體的自身抗體相互作用的合適條件下)從而使得所述的TSH受體、所述 的該受體的一個(gè)或多個(gè)表位或者所述的多肽與所述樣品中的TSH受體的自身抗體、或所述的一個(gè)或多個(gè)結(jié)合成分相互作用；以及(c)監(jiān)測(cè)所述TSH受體、所述的該受體的一個(gè)或多個(gè)表位或者所述的多肽與所述樣品中的自身抗體的相互作用，從而提供了所述樣品中TSH受體的自身抗體存在的指征；其中在步驟(b)之前、或之后將所述的一個(gè)或多個(gè)結(jié)合成分直接或間接固定(immobilised)至一表面上。特異地，所述一個(gè)或多個(gè)結(jié)合成分包含本發(fā)明前述的一個(gè)或多個(gè)結(jié)合對(duì)應(yīng)物。適宜地，提供了 TSH受體、其一個(gè)或多個(gè)表位或者多肽的標(biāo)記方法。本發(fā)明還提供了一種試劑盒用來(lái)篩選受試者體液樣品中針對(duì)TSH受體的自身抗體，該受試者懷疑患有、容易患有或患有與TSH受體免疫反應(yīng)相關(guān)的自身免疫疾病、或者受試者是該自身免疫疾病的康復(fù)者，所述的試劑盒包含:(a) TSH受體全長(zhǎng)序列、該受體的一個(gè)或多個(gè)表位或包含TSH受體的一個(gè)或多個(gè)表位的多肽；(b)本文前述的一個(gè)或多個(gè)結(jié)合對(duì)應(yīng)物；(c)用來(lái)將所述受試者的體液樣品、所述TSH受體、所述該受體的一個(gè)或多個(gè)表位或所述多肽、和所述一個(gè)或多個(gè)結(jié)合對(duì)應(yīng)物相接觸，(在允許TSH受體和針對(duì)TSH受體的自身抗體相互作用的合適條件下)從而使得所述TSH受體、所述該受體的一個(gè)或多個(gè)表位或所述多肽與樣品中存在的針對(duì)TSH受體的自身抗體、或所述的一個(gè)或多個(gè)結(jié)合對(duì)于相互反應(yīng)的裝置(means);和(d)用來(lái)監(jiān)測(cè)所述TSH受體、所述該受體的一個(gè)或多個(gè)表位或所述多肽與樣品中存在的自身抗體的相互反應(yīng)，從而提供了所述樣品中TSH受體的自身抗體存在的指征的裝置。適宜地，如上所述的試劑盒進(jìn)一步包含用來(lái)對(duì)一個(gè)或多個(gè)結(jié)合對(duì)應(yīng)物進(jìn)行標(biāo)記，適宜的標(biāo)記手段如本發(fā)明前述。本發(fā)明還提供了一種試劑盒用來(lái)篩選受試者體液樣品中針對(duì)TSH受體的自身抗體，該受試者懷疑患有、容易患有或患有與TSH受體免疫反應(yīng)相關(guān)的自身免疫疾病、或者受試者是該自身免疫疾病的康復(fù)者，所述的試劑盒包含:(a) TSH受體全長(zhǎng)序列、該受體的一個(gè)或多個(gè)表位或包含TSH受體的一個(gè)或多個(gè)表位的多肽；(b) TSH受體的一個(gè)或多個(gè)結(jié)合成分；(c)用來(lái)將所述受試者的體液樣品、所述TSH受體、所述該受體的一個(gè)或多個(gè)表位或所述多肽、和所述一個(gè)或多個(gè)結(jié)合對(duì)應(yīng)物相接觸，(在允許TSH受體和針對(duì)TSH受體的自身抗體相互作用的合適條件下)從而使得所述TSH受體、所述該受體的一個(gè)或多個(gè)表位或所述多肽與所述樣品中存在的針對(duì)TSH受體的自身抗體、或所述的一個(gè)或多個(gè)結(jié)合對(duì)于相互反應(yīng)的裝置(means)；(d)在所述一個(gè)或多個(gè)結(jié)合成分與所述受試者體液樣品和所述TSH受體、所述該受體的一個(gè)或多個(gè)表位或所述多肽相接觸之前或之后，用來(lái)將所述一個(gè)或多個(gè)結(jié)合成分直接或間接固定在一表面上的裝置；和(e)用來(lái)監(jiān)測(cè)所述TSH受體、所述該受體的一個(gè)或多個(gè)表位或所述多肽與所述樣品中存在的自身抗體的相互反應(yīng)，從而提供了所述樣品中TSH受體的自身抗體存在的指征 的裝置。典型地，一個(gè)或多個(gè)結(jié)合成分包含本發(fā)明前述的一個(gè)或多個(gè)結(jié)合對(duì)應(yīng)物。適宜地，可提供對(duì)TSH受體、該受體的一個(gè)或多個(gè)表位、或者多肽的標(biāo)記手段。適宜地，前述的方法或試劑盒能夠使用本發(fā)明前述的多肽或表位。如本發(fā)明前述，在TSH受體的自身抗體存在時(shí)，TSH受體與固定的結(jié)合成分或結(jié)合對(duì)應(yīng)物之間的結(jié)合將降低。這種篩選TSH受體自身抗體的方法和試劑盒能有效減少TSH受體固定至表面時(shí)產(chǎn)生的問(wèn)題。本發(fā)明前述的結(jié)合對(duì)應(yīng)物也可用于治療。因此，本發(fā)明進(jìn)一步提供了治療方法，所述方法包含給予前述的特異性結(jié)合對(duì)應(yīng)物、包含前述的特異性結(jié)合對(duì)應(yīng)物的藥物組合物(帶有一種或多種藥學(xué)可接受載體、稀釋劑或賦形劑)，以及本發(fā)明前述的特異性結(jié)合對(duì)應(yīng)物在制備藥物或組合物、尤其是用于刺激甲狀腺組織和/或含有TSH受體的組織的藥物或組合物中的應(yīng)用。特別地，本發(fā)明的特異性結(jié)合對(duì)應(yīng)物可用于腫瘤學(xué)，尤其用于甲狀腺癌癥的診斷、處理和治療。盡管最適宜的給藥途徑通常要依靠患者的狀況和所治療的特定疾病來(lái)決定，本發(fā)明的藥物組合物包括適用于口腔、腸胃外或局部給藥的藥物組合物。盡管所用劑量要由一系列因素，包括患者的年齡、性別、待治療的特定疾病以及前述的給藥途徑來(lái)決定，但所能給予患者的本發(fā)明前述結(jié)合對(duì)應(yīng)物的精確劑量要由臨床醫(yī)生來(lái)判斷。本發(fā)明還進(jìn)一步提供了刺激甲狀腺組織和/或包含TSH受體的組織的方法，該方法包括給與需要該種刺激的病人診斷或治療有效量的本發(fā)明前述的結(jié)合對(duì)應(yīng)物。本發(fā)明還提供了前述的結(jié)合對(duì)應(yīng)物與能夠刺激甲狀腺組織和/或包含TSH受體的組織的一種或多種進(jìn)一步藥劑的聯(lián)合應(yīng)用，該結(jié)合對(duì)應(yīng)物和進(jìn)一步的藥劑可同時(shí)、單獨(dú)或順序應(yīng)用來(lái)刺激刺激甲狀腺組織和/或包含TSH受體的組織。優(yōu)選地，一種或多種進(jìn)一步的藥劑包含重組人TSH和/或一種或多種突變株、類(lèi)似物、衍生物或其片段，或者這類(lèi)片段的突變株、類(lèi)似物、或衍生物。選擇性地，一個(gè)或多個(gè)進(jìn)一步的藥劑能夠獨(dú)立與TSH受體結(jié)合 O下面提供的闡述性解釋用于理解本文使用的某些術(shù)語(yǔ)。下述解釋僅為提供便利而非對(duì)本發(fā)明做出限制。TSH受體的結(jié)合對(duì)應(yīng)物或結(jié)合成分描述了對(duì)TSH受體具有結(jié)合特異性的分子。本發(fā)明所述的結(jié)合對(duì)應(yīng)物或結(jié)合成分可以是天然的、或全部或部分人工合成制備的。這類(lèi)結(jié)合對(duì)應(yīng)物或結(jié)合成分具有與TSH受體的一個(gè)或多個(gè)表位特異性結(jié)合的結(jié)構(gòu)域或區(qū)域，因此與TSH受體的一個(gè)或多個(gè)表位具有互補(bǔ)性。C結(jié)構(gòu)域表示抗體分子中相對(duì)恒定的氨基酸序列區(qū)域。CDR表示在抗體分子重鏈和輕鏈上存在的決定簇互補(bǔ)區(qū)，表示高度可變區(qū)的序列。⑶R約為可變區(qū)的15%至20%，其代表抗體的抗原結(jié)合位點(diǎn)。FR表示骨架區(qū)，其代表未出現(xiàn)于CDR的可變輕鏈結(jié)構(gòu)域和可變重鏈結(jié)構(gòu)域的剩余部分。HC表示抗體分子的重鏈部分，其包含重鏈可變區(qū)和IgG恒定區(qū)的第一結(jié)構(gòu)域。宿主細(xì)胞是被轉(zhuǎn)化或轉(zhuǎn)染的細(xì)胞，或者能夠被外源多聚核苷酸序列轉(zhuǎn)化或轉(zhuǎn)染的細(xì)胞。同一性(IDENTITY)，如現(xiàn)有技術(shù)所知，是兩個(gè)或多個(gè)多肽序列、或兩個(gè)或多個(gè)多聚核苷酸序列之間通過(guò)序列比較得出的關(guān)系。LC表示抗體分子的輕鏈。TSH受體的刺激(如本文所述，被結(jié)合對(duì)應(yīng)物或結(jié)合成分刺激)表示結(jié)合對(duì)應(yīng)物或結(jié)合成分與TSH受體的結(jié)合能力，與TSH受體的這種結(jié)合結(jié)果可產(chǎn)生諸如生成環(huán)AMP的效果。這種刺激與TSH受體和TSH或TSH受體自身抗體的結(jié)合所產(chǎn)生的反應(yīng)相類(lèi)似，這樣，本文所述的結(jié)合對(duì)應(yīng)物或者結(jié)合成分模擬了 TSH或TSH受體自身抗體與TSH受體的結(jié)合作用。V結(jié)構(gòu)域表示抗體分子的高度可變氨基酸序列。Vh結(jié)構(gòu)域表示抗體分子重鏈的可變區(qū)域或結(jié)構(gòu)域。Vl結(jié)構(gòu)域表示抗體分子輕鏈的可變區(qū)域或結(jié)構(gòu)域。


下面將對(duì)本發(fā)明的附圖和實(shí)施例進(jìn)行闡述，這些闡述并非用于對(duì)本發(fā)明進(jìn)行限制。圖1列出了(以下述順序)人、豬、牛、貓科動(dòng)物、犬科動(dòng)物、小鼠、大鼠和綿羊的TSH受體的I至200位氨基酸。圖2列出了(以下述順序)編碼貓科動(dòng)物、牛、犬科動(dòng)物、小鼠、豬、大鼠、綿羊和人的TSH受體區(qū)域的I至300位核苷酸堿基。圖3列出了(以下述順序)人、豬、牛、貓科動(dòng)物、犬科動(dòng)物、小鼠、大鼠和綿羊的TSH受體的200至300位氨基酸。圖4列出了(以下述順序)編碼貓科動(dòng)物、牛、犬科動(dòng)物、小鼠、豬、大鼠、綿羊和人的TSH受體區(qū)域的700至899位核苷酸堿基。圖5列出了(以下述順序)人、豬、牛、貓科動(dòng)物、犬科動(dòng)物、小鼠、大鼠和綿羊的TSH受體的250至499位氨基酸。圖6列出了(以下述順序)編碼貓科動(dòng)物、牛、犬科動(dòng)物、小鼠、豬、大鼠、綿羊和人的TSH受體區(qū)域的750至1100位核苷酸堿基。圖7列出了(以下述順序)人、豬、牛、貓科動(dòng)物、犬科動(dòng)物、小鼠、大鼠和綿羊的TSH受體的350至500位氨基酸。圖8列出了(以下述順序)編碼貓科動(dòng)物、牛、犬科動(dòng)物、小鼠、豬、大鼠、綿羊和人的TSH受體區(qū)域的1100至1299位核苷酸堿基。 圖9列出了 4D7的重鏈(HC)氨基酸。圖10列出了 4D7的重鏈(HC)氨基酸，顯示可變區(qū)域或結(jié)構(gòu)域(即10至115位氨基酸)、CDR(即31至35位CDRl氨基酸、50至66位CDRII氨基酸和99至104位CDRIII氨基酸)以及恒定區(qū)域或結(jié)構(gòu)域(即116至200位氨基酸)。圖11列出了 4D7的輕鏈(LC)氨基酸。圖12列出了 4D7的輕鏈(LC)氨基酸，顯示可變區(qū)域或結(jié)構(gòu)域(即9至111位氨基酸)、CDR(即24至38位CDRl氨基酸、54至60位CDRII氨基酸和93至101位CDRIII氨基酸)以及恒定區(qū)域或結(jié)構(gòu)域(即112至211位氨基酸)。圖13列出了 16E5的重鏈(HC)氨基酸。圖14列出了 16E5的重鏈(HC)氨基酸，顯示可變區(qū)域或結(jié)構(gòu)域(即9至120位氨基酸)、CDR(即31至35位CDRl氨基酸、50至66位CDRII氨基酸和99至109位CDRIII氨基酸)以及恒定區(qū)域或結(jié)構(gòu)域(即121至205位氨基酸)。圖15列出了 16E5的輕鏈(LC)氨基酸。圖16列出了 16E5的輕鏈(LC)氨基酸，顯示可變區(qū)域或結(jié)構(gòu)域(即9至107位氨基酸)、CDR(即24至34位CDRl氨基酸、50至56位CDRII氨基酸和89至97位CDRIII氨基酸)以及恒定區(qū)域或結(jié)構(gòu)域(即108至207位氨基酸)。圖17列出了 17D2的重鏈(HC)氨基酸。圖18列出了 17D2的重鏈(HC)氨基酸，顯示可變區(qū)域或結(jié)構(gòu)域(即9至120位氨基酸)、CDR(即31至35位CDRl氨基酸、50至66位CDRII氨基酸和99至109位CDRIII氨基酸)以及恒定區(qū)域或結(jié)構(gòu)域(即121至205位氨基酸)。圖19列出了 17D2的輕鏈(LC)氨基酸。圖20列出了 17D2的輕鏈(LC)氨基酸，顯示可變區(qū)域或結(jié)構(gòu)域(即9至107位氨基酸)、CDR(即24至34位CDRl氨基酸、50至56位CDRII氨基酸和89至97位CDRIII氨基酸)以及恒定區(qū)域或結(jié)構(gòu)域(即108至207位氨基酸)。圖21列出了 14D3的重鏈(HC)氨基酸。圖22列出了 14D3的重鏈(HC)氨基酸，顯示可變區(qū)域或結(jié)構(gòu)域(即9至120位氨基酸)、CDR(即31至35位CDRl氨基酸、50至66位CDRII氨基酸和99至109位CDRIII氨基酸)以及恒定區(qū)域或結(jié)構(gòu)域(即121至205位氨基酸)。圖23列出了 14D3的輕鏈(LC)氨基酸。圖24列出了 14D3的輕鏈(LC)氨基酸，顯示可變區(qū)域或結(jié)構(gòu)域(即9至107位氨基酸)、CDR(即24至34位CDRl氨基酸、50至56位CDRII氨基酸和89至97位CDRIII氨基酸)以及恒定區(qū)域或結(jié)構(gòu)域 (即108至207位氨基酸)。
圖25列出了編碼圖9的4D7的重鏈(HC)氨基酸的核苷酸堿基。圖26列出了編碼圖9的4D7的重鏈(HC)氨基酸的核苷酸堿基，顯示編碼圖10的可變區(qū)域或結(jié)構(gòu)域、CDR和恒定區(qū)域或結(jié)構(gòu)域的核苷酸堿基。圖27列出了編碼圖11的4D7的輕鏈(LC)氨基酸的核苷酸堿基。圖28列出了編碼圖11的4D7的輕鏈(LC)氨基酸的核苷酸堿基，顯示編碼圖12的可變區(qū)域或結(jié)構(gòu)域、CDR和恒定區(qū)域或結(jié)構(gòu)域的核苷酸堿基。圖29列出了編碼圖13的16E5的重鏈(HC)氨基酸的核苷酸堿基。圖30列出了編碼圖13的16E5的重鏈(HC)氨基酸的核苷酸堿基，顯示編碼圖14的可變區(qū)域或結(jié)構(gòu)域、CDR和恒定區(qū)域或結(jié)構(gòu)域的核苷酸堿基。圖31列出了編碼圖15的16E5的輕鏈(LC)氨基酸的核苷酸堿基。圖32列出了編碼圖15的16E5的輕鏈(LC)氨基酸的核苷酸堿基，顯示編碼圖16的可變區(qū)域或結(jié)構(gòu)域、CDR和恒定區(qū)域或結(jié)構(gòu)域的核苷酸堿基。圖33列出了編碼圖17的17D2的重鏈(HC)氨基酸的核苷酸堿基。圖34列出了編碼圖17的17D2的重鏈(HC)氨基酸的核苷酸堿基，顯示編碼圖18的可變區(qū)域或結(jié)構(gòu)域、CDR和恒定區(qū)域或結(jié)構(gòu)域的核苷酸堿基。圖35列出了編碼圖19的17D2的輕鏈(LC)氨基酸的核苷酸堿基。圖36列出了編碼圖 19的17D2的輕鏈(LC)氨基酸的核苷酸堿基，顯示編碼圖20的可變區(qū)域或結(jié)構(gòu)域、CDR和恒定區(qū)域或結(jié)構(gòu)域的核苷酸堿基。圖37列出了編碼圖21的14D3的重鏈(HC)氨基酸的核苷酸堿基。圖38列出了編碼圖21的14D3的重鏈(HC)氨基酸的核苷酸堿基，顯示編碼圖22的可變區(qū)域或結(jié)構(gòu)域、CDR和恒定區(qū)域或結(jié)構(gòu)域的核苷酸堿基。圖39列出了編碼圖23的14D3的輕鏈(LC)氨基酸的核苷酸堿基。圖40列出了編碼圖23的14D3的輕鏈(LC)氨基酸的核苷酸堿基，顯示編碼圖24的可變區(qū)域或結(jié)構(gòu)域、CDR和恒定區(qū)域或結(jié)構(gòu)域的核苷酸堿基。圖41列出了 3B3的重鏈(HC)氨基酸。圖42列出了 3B3的重鏈(HC)氨基酸，顯示可變區(qū)域或結(jié)構(gòu)域(即8至112位氨基酸)、CDR(即31至35位CDRl氨基酸、50至66位CDRII氨基酸和99至101位CDRIII氨基酸)以及恒定區(qū)域或結(jié)構(gòu)域(即113至196位氨基酸)。圖43列出了 3B3的輕鏈(LC)氨基酸。圖44列出了 3B3的輕鏈(LC)氨基酸，顯示可變區(qū)域或結(jié)構(gòu)域(即9至111位氨基酸)、CDR(即24至38位CDRl氨基酸、54至60位CDRII氨基酸和93至101位CDRIII氨基酸)以及恒定區(qū)域或結(jié)構(gòu)域(即112至211位氨基酸)。圖45列出了 3C7的重鏈(HC)氨基酸。圖46列出了 3C7的重鏈(HC)氨基酸，顯示可變區(qū)域或結(jié)構(gòu)域(即10至115位氨基酸)、CDR(即31至35位CDRl氨基酸、50至66位CDRII氨基酸和99至104位CDRIII氨基酸)以及恒定區(qū)域或結(jié)構(gòu)域(即116至200位氨基酸)。圖47列出了 3C7的輕鏈(LC)氨基酸。圖48列出了 3C7的輕鏈(LC)氨基酸，顯示可變區(qū)域或結(jié)構(gòu)域(即9至111位氨基酸)、CDR(即24至38位CDRl氨基酸、54至60位CDRII氨基酸和93至101位CDRIII氨基酸)以及恒定區(qū)域或結(jié)構(gòu)域(即112至211位氨基酸)。圖49列出了 2B4的重鏈(HC)氨基酸。圖50列出了 2B4的重鏈(HC)氨基酸，顯示可變區(qū)域或結(jié)構(gòu)域(即9至122位氨基酸)、CDR(即31至35位CDRl氨基酸、50至66位CDRII氨基酸和99至111位CDRIII氨基酸)以及恒定區(qū)域或結(jié)構(gòu)域(即123至207位氨基酸)。圖51列出了 2B4的輕鏈(LC)氨基酸。圖52列出了 2B4的輕鏈(LC)氨基酸，顯示可變區(qū)域或結(jié)構(gòu)域(即9至112位氨基酸)、CDR(即24至39位CDRl氨基酸、78至82位CDRII氨基酸和94至102位CDRIII氨基酸)以及恒定區(qū)域或結(jié)構(gòu)域(即113至212位氨基酸)。圖53列出了編碼圖41的3B3的重鏈(HC)氨基酸的核苷酸堿基。圖54列出了編碼圖41的3B3的重鏈(HC)氨基酸的核苷酸堿基，顯示編碼圖42的可變區(qū)域或結(jié)構(gòu)域、CDR和恒定區(qū)域或結(jié)構(gòu)域的核苷酸堿基。圖55列出了編碼圖43的3B3的輕鏈(LC)氨基酸的核苷酸堿基。圖56列出了編碼圖43的3B3的輕鏈(LC)氨基酸的核苷酸堿基，顯示編碼圖44的可變區(qū)域或結(jié)構(gòu)域、CDR和恒定區(qū)域或結(jié)構(gòu)域的核苷酸堿基。圖57列出了編碼圖45的3C7的重鏈(HC)氨基酸的核苷酸堿基。圖58列出了編碼圖45的3C7的重鏈(HC)氨基酸的核苷酸堿基，顯示編碼圖46的可變區(qū)域或結(jié)構(gòu)域、CDR和恒定區(qū)域或結(jié)構(gòu)域的核苷酸堿基。圖59列出了編碼圖47的3C7的輕鏈(LC)氨基酸的核苷酸堿基。圖60列出了編碼圖47的3C7的輕鏈(LC)氨基酸的核苷酸堿基，顯示編碼圖48的可變區(qū)域或結(jié)構(gòu)域、CDR和恒定區(qū)域或結(jié)構(gòu)域的核苷酸堿基。圖61列出了編碼圖49的2B4的重鏈(HC)氨基酸的核苷酸堿基。圖62列出了編碼圖49的2B4的重鏈(HC)氨基酸的核苷酸堿基，顯示編碼圖50的可變區(qū)域或結(jié)構(gòu)域、CDR和恒定區(qū)域或結(jié)構(gòu)域的核苷酸堿基。圖63列出了編碼圖51的2B4的輕鏈(LC)氨基酸的核苷酸堿基。圖64列出了編碼圖51的2B4的輕鏈(LC)氨基酸的核苷酸堿基，顯示編碼圖52的可變區(qū)域或結(jié)構(gòu)域、CDR和恒定區(qū)域或結(jié)構(gòu)域的核苷酸堿基。更特異地，圖1至8闡明了下述:圖1列出了上述物種中TSH受體的I至200位氨基酸，其中包括用于本發(fā)明的下述氨基酸序列:TSH受體的22至91位氨基酸；TSH受體的32至41位氨基酸；和TSH受體的36至42位氨基酸。圖2列出了上述物種中I至300位核苷酸堿基，其中包括圖1中上述氨基酸序的編碼區(qū)域。圖3列出了 上述物種中TSH受體的200至300位氨基酸，其中包括用于本發(fā)明的下述氨基酸序列:TSH受體的246至260位氨基酸；和TSH受體的247至260位氨基酸。
圖4列出了上述物種中700至899位核苷酸堿基，其中包括圖3中上述氨基酸序的編碼區(qū)域。圖5列出了上述物種中TSH受體的250至449位氨基酸，其中包括用于本發(fā)明的下述氨基酸序列:TSH受體的260至363位氨基酸；和TSH受體的277至296位氨基酸。圖6列出了上述物種中750至1100位核苷酸堿基，其中包括圖5中上述氨基酸序的編碼區(qū)域。圖7列出了上述物種中TSH受體的350至500位氨基酸，其中包括用于本發(fā)明的下述氨基酸序列:TSH受體的380至418位氨基酸；和TSH受體的381至385位氨基酸。圖8列出了上 述物種中1100至1299位核苷酸堿基，其中包括圖7中上述氨基酸序的編碼區(qū)域。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例1(I)TSH受體的小鼠單克隆抗體的制備采用CHO細(xì)胞表達(dá)的重組、高純化成熟形式的TSH受體免疫BALB/c小鼠(Y Oda, JSanders, M Evans, A Kiddie, A Munkley, C James, T Richards, J Wills, J Furmaniak, BRees Smith^Epitope analysis of the human thyrotrophin(TSH)receptor usingmonoclonal antibodies."Thyroid200010 (12): 1051-1059.)。利用 pcDNA3.1 中克隆的全長(zhǎng)人TSHR cDNA通過(guò)DNA免疫技術(shù)制備小鼠抗體。利用標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)克隆Mabs，利用蛋白A凝膠親和色譜法從培養(yǎng)物上清中純化IgGs。Mabs與TSH受體的反應(yīng)通過(guò)如下方法進(jìn)行檢驗(yàn):(a)利用部分純化的受體進(jìn)行Western免疫印跡實(shí)驗(yàn)，(b)抑制TSH與TSH受體的結(jié)合，(C)如 YOda, J Sanders, S Roberts, M Maruyama, R Kato, M Perez, V BPeteresen, NWedlock, J Furmaniak, B ReesSmith^Binding characteristics of antibodies to theTSH receptor."Journal of Molecular Endocrinologyl99820:233-244.中所述的在體外轉(zhuǎn)錄/翻譯系統(tǒng)中制備的35S-標(biāo)記的TSH受體的免疫沉淀實(shí)驗(yàn)。(2)m1-TSH與TSH等體結(jié)合的抑制1251-TSH與TSH受體結(jié)合的抑制通過(guò)下述實(shí)驗(yàn)進(jìn)行分析:50 U L用去污劑增溶的TSH受體與50 ii L按照步驟(I)純化的Mab在室溫下預(yù)先溫育15分鐘，然后加入100 y L的1251-TSH (30, OOOcpm)，接下來(lái)在37° C溫育一小時(shí)。通過(guò)加入2mL16.5%聚乙二醇和25 y L健康供血者的血清來(lái)沉淀125I_TSH/TSH受體復(fù)合物，在4° C、1500Xg離心30分鐘，吸出受體復(fù)合物，利用公知的技術(shù)測(cè)定沉淀的放射性。MAbs termed:2B4Mab (IgG 濃度為 5 U g/mL)、8E2Mab (IgG 濃度為 I U g/mL)、和18C5Mab (IgG濃度為lmg/mL)對(duì)TSH結(jié)合的抑制分別為76%、38%、和91%。用L-半胱氨酸/木瓜蛋白酶或胃蛋白酶消化2B4Mab、8E2Mab、和18C5Mab IgGs，然后利用蛋白A柱分離Fe和Fab來(lái)制備Fab片段。
(3)利用Mabs講行表位識(shí)別Western 印跡分析法(Y Oda, J Sanders, M Evans, A Kiddie, A Munkley, CJames,T Richards,J Wills, J Furmaniak，B Rees Smith^Epitope analysis of thehuman thyrotrophin(TSH)receptor using monoclonal antibodies.〃Thyroid200010(I2):1051-1059)顯示2B4MAb與TSH受體序列氨基酸(aa) 380至418位之間的表位結(jié)合，8E2MAb與22至91位之間的表位結(jié)合，18C5MAb與246至260位之間的表位結(jié)合。釆用覆蓋這些區(qū)域的 TSH 受體妝重疊分析(Y Oda, J Sanders, M Evans, A Kiddie, A Munkley, CJames, T Richards, J Wills, J Furmaniak, B Rees Smith^Epitope analysis of the humanthyrotrophin(TSH) receptor using monoclonal antibodies.〃Thyroid200010 (12):1051-1059.)表明 2B4MAb 與 aa381 至 385 反應(yīng)、8E2MAb 與 aa36 至 42 反應(yīng)、18C5MAb 與 aa247 至260反應(yīng)。(4) m1-標(biāo)記的TSH受體的制備TSH受體的可溶性制備物通過(guò)1251-標(biāo)記的MAB (4E31)與TSH受體的C-末端反應(yīng)來(lái)標(biāo)記 125I，該方法參見(jiàn) J Sanders, Y Oda, S Roberts, A Kiddie, T Richards, J Bolton, VMcGrath, S Walters, D Jasklski, J Furmaniak, B Rees Smith〃The interaction of TSHreceptor autoantibodieswith’ZS1-1abelled TSH receptor."Journal of ClinicalEndocrinology and Metabolisml999,84(10):3797-3802。在室溫下將部分的 1251-標(biāo)記的4已31 (&13)2和可溶性TSH受體溫育15分鐘，然后將其用于步驟(5)的免疫沉淀檢測(cè)中。(5) TSH受體自身抗體(TRAb)與TSH受體的結(jié)合通過(guò)MAbs的抑制采用下述方法檢測(cè)了 MAbs對(duì)TRAb與TSH受體結(jié)合的抑制:取10 ii L步驟⑷中制備的1251-標(biāo)記的TSH受體(30，OOOcpm)與20 ii L的2B4Fab (5和10mg/mL)在室溫下預(yù)先溫育15分鐘，然后與20 y L的TRAb陽(yáng)性患者血清一起在室溫下溫育I小時(shí)。接下來(lái)加入50 ii L固態(tài)蛋白A(—種抗-人IgG試劑)，繼續(xù)在室溫下溫育I小時(shí)，然后洗滌，在4° C、1500Xg離心30分鐘，吸出沉淀，測(cè)定沉淀的放射性。利用8E2和18C5Fabs以及兩種Fabs結(jié)合到一起進(jìn)行類(lèi)似的實(shí)驗(yàn)。實(shí)施例1的結(jié)果TRAb與TSH受體結(jié)合抑制的結(jié)果如表I所示。實(shí)施例2方法(I)TSH受體的小鼠單克隆抗體的制備采用CHO細(xì)胞表達(dá)的重組、高純化成熟形式的TSH受體免疫BALB/c小鼠(Y Oda, JSanders, M Evans, A Kiddie, A Munkley, C James, T Richards, J Wills, J Furmaniak, BRees Smith^Epitope analysis of the human thyrotrophin (TSH) receptor usingmonoclonal antibodies.〃Thyroid200010 (12):1051-1059.)。利用 pRC/CM.1 中克隆的全長(zhǎng)人TSHR cDNA通過(guò)DNA免疫技術(shù)制備小鼠抗體。利用標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)克隆MAbs，利用蛋白A凝膠親和色譜法從培養(yǎng)物上清中純化IgGs。(Fab)2片段通過(guò)下述方法制備:用胃蛋白酶消化純化的Mab IgGs，然后進(jìn)行蛋白A親和柱色譜分離，該分離方法按照Y.0da, J.Sanders, S.Roberts, M.Maruyama, R.Kato,M.Perez, VB Petersen,N.Wedlock, J.Furmaniak, B.Rees Smith1998^Bindingcharacteristics of antibodies to the TSH receptor".Journal of MolecularEndocrinology20:233-244.描述的方法。Fab 片段通過(guò)下述方法制備:按照 E.Hendry, G.Taylor, F.Grennan-Jones, A.Sul I i van, N.Liddy, J.Godfrey, N.Hayakawa, M.Powe11, J.Furmaniak, B ReesSmith2001〃X_ray crystal structure of a monoclonal antibody that binds to amajor autoantigenic epitope on thyroid peroxidase.^Thyroidll (12):1091-1099.描述的方法利用木瓜蛋白酶消化純化的Mab IgGs0MAbs與TSH受體的反應(yīng)通過(guò)下述方法進(jìn)行檢驗(yàn):(a)利用部分純化的受體進(jìn)行Western免疫印跡實(shí)驗(yàn)，(b)抑制TSH與TSH受體的結(jié)合,和(c)如Y Oda, J Sanders, SRoberts, M Maruyama, R Kato, M Perez, V BPeteresen, N Wedlock, J Furmaniak, B ReesSmith^Binding characteristics of antibodies to the TSH receptor."Journal ofMolecular Endocrinologyl99820:233-244.中所述的在體外轉(zhuǎn)錄/翻譯系統(tǒng)中制備的35S-標(biāo)記的TSH受體的免疫沉淀實(shí)驗(yàn)。(2)m1-TSH與TSH等體結(jié)合的抑制(a)利用去污劑增溶的TSH R的PEG方法1251-TSH與去污劑增溶的TSH受體結(jié)合的抑制通過(guò)下述實(shí)驗(yàn)分析:取50 ii L按照上述步驟⑴純化的MAb與受體在室溫下預(yù)先溫育15分鐘，然后加入IOOy L的1251-TSH(30, OOOcpm)，接下來(lái)在37。C溫育I小時(shí)。通過(guò)加入2mL16.5%聚乙二醇和25 u L健康供血者的血清來(lái)沉淀1251-TSH和TSH受體復(fù)合物，在4° C、1500Xg離心30分鐘，吸出受體復(fù)合物，在gamma計(jì)數(shù)器中測(cè)定沉淀的放射性。(b)利用TSHR包被管的方法 在該方法中，首先用Mab諸如4E31包被塑料管，其中Mab能與TSHR的部分結(jié)合，該TSHR與TSH或TRAb的結(jié)合無(wú)關(guān)。然后加入用去污劑增溶的TSHR制備物并利用TSHR Mab進(jìn)行捕獲，則該TSHR制備物固定在管的表面，能夠與TSH或TRAb進(jìn)行結(jié)合。特別地，在塑料管(NuncMaxisorp,每管200 u L)中加入與TSHR C末端(在pH9.2的0.1M Na2CO3中的IOii g/mLF(ab)2制備物)反應(yīng)的MAb4E31，在4° C包被過(guò)夜。洗滌并后續(xù)包被(10mg/mL牛血清白蛋白)后，再次以測(cè)定緩沖液(IOmM Tris-HCl pH7.8，50mM NaCI, lmg/mL牛血清白蛋白，0.l%Triton X-100)洗滌管子。然后加入200 y L用去污劑增溶的TSHR制備物，在4° C溫育過(guò)夜，接下來(lái)進(jìn)行吸出和洗滌步驟。然后，在TSHR包被管中加入20 “起始”緩沖液(IOmM Tris-HCl pH7.8, 50mM NaCI,牛血清白蛋白 lmg/mL, 6mM NaN3, l%Triton X-100)，接下來(lái)加入100 u L純化的MAb IgG或者患者的血清，并在室溫下溫和振搖同時(shí)溫育2小時(shí)。吸出后(aspiration),用ImL測(cè)定緩沖液兩次洗漆管子,加入100 ii L的1251-TSH(80，OOOcpm),在室溫下溫育20-60分鐘并振搖。然后用ImL測(cè)定緩沖液兩次洗滌管子，吸出，并在gamma計(jì)數(shù)器中進(jìn)行計(jì)數(shù)。(3)對(duì)MAbs的甲狀腺刺激或阻斷作用的分析利用購(gòu)自Yamasa Corporation, Tokyo, Japan的試劑測(cè)定Mabs在分離的豬甲狀腺細(xì)胞中對(duì)環(huán)AMP生成的刺激(甲狀腺刺激活性)或者通過(guò)阻斷環(huán)AMP的TSH刺激而起到TSH拮抗劑的作用(阻斷作用)。此外，還利用M.Kita, L.Ahma, R.C.Marians, H.Vlase, P.Unger, P.N.Graves, T.F.Daviesl999〃Regulation and transfer of a murine model of thyrotropin receptorantibody mediated Graves’disease."Endocrinology 140:1392-1398.中描述的方法分析了在表達(dá)人TSHR的中國(guó)蒼鼠卵巢細(xì)胞(CHO)中MAbs剌激環(huán)AMP生成的能力。(4)—1~標(biāo)記的MAbs與TSHR的結(jié)合以及TRAb的作用用125I標(biāo)記純化的IgG，所述IgG來(lái)自具有甲狀腺刺激活性(表2，16E5和14D3)的MAbs中的兩個(gè)，然后利用實(shí)施例1(4)中的交連葡聚糖G-50過(guò)濾的方法分離未被標(biāo)記的
1251按照上述2b的方法用TSHR制備物包被塑料管。然后，加入100 y L待測(cè)血清(來(lái)源于健康供血者或具有甲狀腺機(jī)能亢進(jìn)癥的患者)，將管在室溫下溫育2小時(shí)同時(shí)振搖。溫育后，用測(cè)定緩沖液兩次洗滌所述管子。然后，向管中加入IOOy L的125I標(biāo)記的16E5 或 14D3IgG(30, OOOcpm，稀釋液:20mMTris_HCl pH7.3，50mM NaCI, lmg/mL 牛血清白蛋白，0.l%Triton X-100)，將管在室溫下溫育I小時(shí)同時(shí)振搖。溫育后，采用與稀釋125I標(biāo)記的MAbs相同的緩沖液兩次洗滌所得管子， 然后用gamma計(jì)數(shù)器進(jìn)行計(jì)數(shù)。(5)TSHR與MAbs包被管的結(jié)合以及TRAb的作用將用去污劑增溶的TSHR制備物(20 y L)與100 y L待測(cè)血清和20 y L起始緩沖液(上述2b中)在室溫下溫育I小時(shí)。取該混合液100 u L加入到以TSHR MAb (如上述2b中)包被的塑料管中，在室溫下溫育I小時(shí)并同時(shí)振搖。然后吸出該管，洗滌兩次(上述2b中)，加入如上述4中用125I標(biāo)記的100 u L (30, OOOcpm)的125I標(biāo)記C-末端TSHR MAb4E31F (ab) 2。再次在室溫下溫育I小時(shí)并同時(shí)振搖后，吸出管，洗滌兩次，用ga_a計(jì)數(shù)器進(jìn)行測(cè)定放射性。利用前文(KettleboroughC.A.et al"0ptimization of primers forcloning libraries of mouse immunoglobulin genes using the polymerase chainreaction."European Journal of Immunologyl99323: 206-211)所述的序列設(shè)計(jì)寡聚核苷酸引物。上游和下游引物都包括附加的5’限制性核酸內(nèi)切酶位點(diǎn)序列，以便用來(lái)克隆PCR產(chǎn)物。將RT-PCR產(chǎn)物克隆至通過(guò)Qiagen方法(Qiagen)制備的pUC18DNA中，并通過(guò)Sanger-Coulson 方法測(cè)序。實(shí)施例2的結(jié)果(I)TSHR MAbs甲狀腺刺激作用如表2和3所示。在分離的豬甲狀腺細(xì)胞中4種MAbs(16E5、14D3、17D2和4D7)能夠刺激環(huán)AMP的生成。此外當(dāng)檢測(cè)來(lái)自這些MAbs中的三種的Fab片段時(shí)，三種Fab片段都能刺激環(huán)AMP的生成(表2)。比較TRAb陽(yáng)性患者血清對(duì)MAbs的刺激具有類(lèi)似的水平(表2)。而且，具有強(qiáng)烈抑制TSH與TSHR結(jié)合能力的TSHRMAb2B4并未表現(xiàn)出甲狀腺刺激活性(表2)。另一TSHR MAb和Fab(3B3)以及Tg MAb Fab2G2都未刺激環(huán)AMP的生成(表2)。在進(jìn)一步的系列實(shí)驗(yàn)中，檢測(cè)了能夠刺激豬甲狀腺細(xì)胞的某些MABS (16E5和14D3)在表達(dá)人TSHR的CHO細(xì)胞中刺激環(huán)AMP生成的能力(表3)。得到了與豬甲狀腺細(xì)胞中類(lèi)似的結(jié)果。(2)在健康供血者血清存在情況下，1251-標(biāo)記的16E5與TSHR包被管的結(jié)合在所加入總計(jì)數(shù)的23%至35%的范圍內(nèi)變動(dòng)(表4)。在甲狀腺機(jī)能亢進(jìn)患者血清存在情況下(都為T(mén)RAb陽(yáng)性)，1251-標(biāo)記的16E5的結(jié)合能力顯著降低，在1.9%至7.5%的范圍內(nèi)變動(dòng)(表 4)。上述結(jié)果說(shuō)明甲狀腺機(jī)能亢進(jìn)患者血清具有TRAb活性，能夠抑制TSHRMAbl6E5與TSHR的結(jié)合。采用標(biāo)記的16E5的進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)如表5所示，其中比較了甲狀腺機(jī)能亢進(jìn)患者血清對(duì)于(a) 1251-標(biāo)記的16E5與TSHR包被管和(b) 1251-標(biāo)記的TSH與TSHR包被管的結(jié)合進(jìn)行了比較。還采用1251-標(biāo)記的TSHR MAbl4D3進(jìn)行了與表5類(lèi)似的實(shí)驗(yàn)，結(jié)果如表6所
/Jn o甲狀腺機(jī)能亢進(jìn)患者血清對(duì)于1251-標(biāo)記的16E5、14D3或TSH結(jié)合TSHR包被管的影響類(lèi)似于多數(shù)情況下觀察到結(jié)合強(qiáng)抑制作用(表5和6)。與甲狀腺機(jī)能亢進(jìn)患者血清相比，健康供血者血清對(duì)標(biāo)記的MAb或標(biāo)記的TSH與TSHR包被管的結(jié)合幾乎沒(méi)有作用(表5和6)。表7為含有自身抗體的血清(該自身抗體不是TSHR自身抗體)對(duì)于標(biāo)記的TSH、16E5和14D3結(jié)合TSHR包被管的影響。由表7能夠看出，包含谷氨酸脫羧酶自身抗體的血清(Dl和D2)或者包含21羥化酶自身抗體的血清(Al和A2)對(duì)TSH或MAb的結(jié)合沒(méi)有作用。然而，來(lái)源于甲狀腺機(jī)能亢進(jìn)患者的血清G42表現(xiàn)出對(duì)TSH和MAb的結(jié)合都有強(qiáng)的、劑量依賴(lài)性的抑制。(3)如圖8所示，以MAbl6E5包被的塑料管能夠與TSHR結(jié)合，這種結(jié)合被含有TSHR自身抗體的甲狀腺機(jī)能亢進(jìn)患者的血清所抑制。特別地，利用1251-標(biāo)記的TSHR MAb4E31檢測(cè)TSHR的結(jié)合顯示:(a)在健康供血者血清存在的情況下，標(biāo)記的4E31的結(jié)合在加入的總cpm的13.5%至17.8%的范圍內(nèi)變動(dòng)，而(b)在甲狀腺機(jī)能亢進(jìn)患者的血清存在情況下，標(biāo)記的MAb的結(jié)合在加入的總cpm的1.8%至4.8%的范圍內(nèi)變動(dòng)。用MAbl4D3包被的塑料管得到了類(lèi)似的結(jié)果(表9)。 表2-9的結(jié)果顯示:(a)我們已經(jīng)制備了 TSHR MAbs和MAb Fab片段，這些抗體和片段能夠刺激分離的甲狀腺細(xì)胞，刺激方法類(lèi)似于患者血清中的TRAb和TSH。(b)在檢驗(yàn)TSHR自身抗體(TRAb)時(shí)，這些MAbs能夠用于代替標(biāo)記的TSH。(c)當(dāng)MAbs包被至塑料表面時(shí)，它們能夠結(jié)合TSHR制備物。這種結(jié)合會(huì)被患者血清中的TRAb所抑制，從而提供了一種新的TRAb測(cè)試方法。(d)Mabs能夠刺激甲狀腺表明它們?cè)隗w外應(yīng)用代替TSH方面非常有用。牟施例3用TSH等體Mabs抑制mI_16E5Fab與溶件TSH等體的結(jié)合方法
1251-16E5Fab與去污劑增溶的TSH受體的結(jié)合抑制可通過(guò)如下測(cè)試方法分析:50ul前述純化的Mab IgG(100ug/ml)與受體在室溫下溫育30分鐘，然后加入IOOul的1251-16E5Fab (30，OOOcpm)，接著在室溫下溫育2小時(shí)。通過(guò)加入2mL16.5%聚乙二醇和50 y L健康供血者的血清來(lái)沉淀1251-TSH和TSH受體復(fù)合物，在4° C、1500Xg離心30分鐘，吸出受體復(fù)合物，在gamma計(jì)數(shù)器中測(cè)定沉淀的放射性。結(jié)果見(jiàn)表10。從表10可以看出，Mab4D7(它結(jié)合到表位區(qū)域的246-260位置，并刺激分離的甲狀腺細(xì)胞)能強(qiáng)烈抑制標(biāo)記的16E5Fab與TSH受體的結(jié)合(24.2%抑制)。兩個(gè)其它抗體，3C7和18C5也能強(qiáng)烈抑制16E5Fab結(jié)合(分別是17%和15.7%抑制)，并且也能結(jié)合到表位區(qū)域的246-260位。其它Mabs僅觀察到很弱或沒(méi)有抑制現(xiàn)象。這些結(jié)果說(shuō)明了表位區(qū)域246-260是與16E5結(jié)合TSH受體相關(guān)的。從表10中還能看出，其它刺激Mabs14D3和17D2能有效競(jìng)爭(zhēng)16E5結(jié)合TSH受體，表位區(qū)域246-260也可能對(duì)于14D3和17D2結(jié)合TSH受體是非常重要的。表1:用MAb Fabs抑制患者血清(K3)中的TRAb與TSH受體的結(jié)合
權(quán)利要求
1.針對(duì)TSH受體的單克隆抗體或其包含F(xiàn)ab結(jié)構(gòu)域的片段，或針對(duì)TSH受體的重組單克隆抗體或其包含F(xiàn)ab結(jié)構(gòu)域的片段，其中，所述抗體能夠與TSH受體結(jié)合從而刺激TSH受體，所述抗體或其片段與TSH受體表位結(jié)合，所述TSH受體表位包含TSH受體的246-260位氨基酸、由TSH受體的246-260位氨基酸組成，或者主要是由TSH受體的246-260位氨基酸組成；并且，在20 μ g/ml或更低的濃度下，所述抗體或其片段在環(huán)AMP甲狀腺細(xì)胞試驗(yàn)中具有>180%的甲狀腺刺激活性，所述甲狀腺刺激活性％用下述比例的100X來(lái)計(jì)算:在所述抗體或其片段存在下制得的環(huán)AMP比上在健康血液供體血清庫(kù)存在下制得的環(huán)AMP。
2.如權(quán) 利要求1所述的針對(duì)TSH受體的單克隆抗體或重組抗體或其包含F(xiàn)ab結(jié)構(gòu)域的片段，所述抗體能夠與TSH受體結(jié)合從而刺激TSH受體，其中，所述抗體包含: 抗體Vh結(jié)構(gòu)域,其選自下述組成的組: 圖10、14、18、22、42、46或50所示的Vh結(jié)構(gòu)域；包含一個(gè)或多個(gè)VhCDR的Vh結(jié)構(gòu)域，所述％⑶R具有與圖10所示的Vh⑶R相對(duì)應(yīng)的氨基酸序列；包含一個(gè)或多AVh⑶R的Vh結(jié)構(gòu)域，所述Vh⑶R具有與圖14所示的Vh⑶R相對(duì)應(yīng)的氨基酸序列；包含一個(gè)或多AVh⑶R的Vh結(jié)構(gòu)域，所述Vh CDR具有與圖18所示的Vh CDR相對(duì)應(yīng)的氨基酸序列；包含一個(gè)或多個(gè)Vh⑶R的Vh結(jié)構(gòu)域，所述Vh⑶R具有與圖22所示的Vh⑶R相對(duì)應(yīng)的氨基酸序列；包含一個(gè)或多個(gè)Vh CDI^^Vh結(jié)構(gòu)域，所述Vh CDR具有與圖42所示的Vh CDR相對(duì)應(yīng)的氨基酸序列；包含一個(gè)或多個(gè)Vh⑶R的Vh結(jié)構(gòu)域，所述Vh⑶R具有與圖46所示的Vh⑶R相對(duì)應(yīng)的氨基酸序列；包含一個(gè)或多個(gè)Vh⑶R的Vh結(jié)構(gòu)域，所述Vh⑶R具有與圖50所示的Vh⑶R相對(duì)應(yīng)的氨基酸序列；或與上述具有至少70%序列同一性的Vh結(jié)構(gòu)域； 和/或 抗體\結(jié)構(gòu)域，其選自下述組成的組: 圖12、16、20、24、44、48或52所示的\結(jié)構(gòu)域；包含一個(gè)或多個(gè)VlCDR的\結(jié)構(gòu)域，所述\⑶R具有與圖12所示的' ⑶R相對(duì)應(yīng)的氨基酸序列；包含一個(gè)或多個(gè)' ⑶R的'結(jié)構(gòu)域，所述' ⑶R具有與圖16所示的' ⑶R相對(duì)應(yīng)的氨基酸序列；包含一個(gè)或多個(gè)' ⑶R的\結(jié)構(gòu)域，所述\ CDR具有與圖20所示的\ CDR相對(duì)應(yīng)的氨基酸序列；包含一個(gè)或多個(gè)\ CDR的\結(jié)構(gòu)域，所述\ CDR具有與圖24所示的\ CDR相對(duì)應(yīng)的氨基酸序列；包含一個(gè)或多個(gè)' CDR的'結(jié)構(gòu)域，所述' CDR具有與圖44所示的' CDR相對(duì)應(yīng)的氨基酸序列；包含一個(gè)或多個(gè)\⑶R的\結(jié)構(gòu)域，所述\⑶R具有與圖48所示的\⑶R相對(duì)應(yīng)的氨基酸序列；包含一個(gè)或多個(gè)\⑶R的\結(jié)構(gòu)域，所述\⑶R具有與圖52所示的\⑶R相對(duì)應(yīng)的氨基酸序列，或與上述具有至少70%序列同一性的\結(jié)構(gòu)域。
3.如權(quán)利要求2所述的單克隆抗體或重組抗體或其片段，其中所述Vh結(jié)構(gòu)域和/或'結(jié)構(gòu)域與所示的結(jié)構(gòu)域具有至少80%的序列同一性。
4.如權(quán)利要求2所述的單克隆抗體或重組抗體或其片段，其中所述Vh結(jié)構(gòu)域和/或'結(jié)構(gòu)域與所示的結(jié)構(gòu)域具有100%的序列同一性。
5.如權(quán)利要求2-4中任一項(xiàng)所述的抗體或片段，其包含與圖12所示抗體'結(jié)構(gòu)域成對(duì)的圖10所示的抗體Vh結(jié)構(gòu)域，從而為T(mén)SH受體提供包含V1^P'結(jié)構(gòu)域的抗體結(jié)合位點(diǎn)；或者包含與圖16所示抗體Vlj結(jié)構(gòu)域成對(duì)的圖14所示的抗體Vh結(jié)構(gòu)域,從而為T(mén)SH受體提供包含Vh和\結(jié)構(gòu)域的抗體結(jié)合位點(diǎn)；或者包含與圖20所示抗體\結(jié)構(gòu)域成對(duì)的圖18所示的抗體Vh結(jié)構(gòu)域,從而為T(mén)SH受體提供包含Vh和\結(jié)構(gòu)域的抗體結(jié)合位點(diǎn)；或者包含與圖24所示抗體\結(jié)構(gòu)域成對(duì)的圖22所示的抗體Vh結(jié)構(gòu)域，從而為T(mén)SH受體提供包含Vh和Vl結(jié)構(gòu)域的抗體結(jié)合位點(diǎn)；或者包含與圖44所示抗體Vlj結(jié)構(gòu)域成對(duì)的圖42所示的抗體Vh結(jié)構(gòu)域，從而為T(mén)SH受體提供包含V1^P \結(jié)構(gòu)域的抗體結(jié)合位點(diǎn)；或者包含與圖48所示抗體\結(jié)構(gòu)域成對(duì)的圖46所示的抗體Vh結(jié)構(gòu)域，從而為T(mén)SH受體提供包含Vh和\結(jié)構(gòu)域的抗體結(jié)合位點(diǎn)；或者包含與圖52所示抗體\結(jié)構(gòu)域成對(duì)的圖50所示的抗體Vh結(jié)構(gòu)域，從而為T(mén)SH受體提供包含Vh和\結(jié)構(gòu)域的抗體結(jié)合位點(diǎn)，或上述具有至少70%序列同一性的成對(duì)結(jié)構(gòu)域。
6.如權(quán)利要求2-4中任一項(xiàng)所述的抗體或片段，其包含: 抗體Vh結(jié)構(gòu)域，其包含: 包含一個(gè)或多個(gè)Vh⑶R的Vh結(jié)構(gòu)域，所述Vh⑶R具有與圖10所示的Vh⑶R相對(duì)應(yīng)的氨基酸序列；或者包含一個(gè)或多個(gè)Vh CDR的Vh結(jié)構(gòu)域，所述Vh CDR具有與圖14所示的Vh CDR相對(duì)應(yīng)的氨基酸序列；或者包含一個(gè)或多個(gè)Vh CDR的Vh結(jié)構(gòu)域，所述Vh CDR具有與圖18所示的Vh CDR相對(duì)應(yīng)的氨基酸序列；或者包含一個(gè)或多個(gè)Vh CDR的Vh結(jié)構(gòu)域，所述VhCDR具有與圖22所示的Vh⑶R相對(duì)應(yīng)的氨基酸序列；或者包含一個(gè)或多個(gè)Vh⑶R的Vh結(jié)構(gòu)域，所述Vh CDR具 有與圖42所示的Vh CDR相對(duì)應(yīng)的氨基酸序列；或者包含一個(gè)或多個(gè)Vh⑶R的Vh結(jié)構(gòu)域，所述Vh⑶R具有與圖46所示的Vh⑶R相對(duì)應(yīng)的氨基酸序列；或者包含一個(gè)或多個(gè)Vh CDM^Vh結(jié)構(gòu)域，所述Vh CDR具有與圖50所示的Vh CDR相對(duì)應(yīng)的氨基酸序列；和/或 抗體'結(jié)構(gòu)域，其包含: 包含一個(gè)或多個(gè)' ⑶R的'結(jié)構(gòu)域，所述' ⑶R具有與圖12所示的\⑶R相對(duì)應(yīng)的氨基酸序列；或者包含一個(gè)或多個(gè)\ CDR的\結(jié)構(gòu)域，所述\ CDR具有與圖16所示的Vl CDR相對(duì)應(yīng)的氨基酸序列；或者包含一個(gè)或多個(gè)' CDR的'結(jié)構(gòu)域，所述' CDR具有與圖20所示的\ CDR相對(duì)應(yīng)的氨基酸序列；或者包含一個(gè)或多個(gè)\ CDR的\結(jié)構(gòu)域，所述Vl⑶R具有與圖24所示的\⑶R相對(duì)應(yīng)的氨基酸序列；或者包含一個(gè)或多個(gè)VfDR的\結(jié)構(gòu)域，所述' CDR具有與圖44所示的Vlj CDR相對(duì)應(yīng)的氨基酸序列；或者包含一個(gè)或多個(gè)Vl⑶R的\結(jié)構(gòu)域，所述\⑶R具有與圖48所示的\⑶R相對(duì)應(yīng)的氨基酸序列；或者包含一個(gè)或多個(gè)' CDR的'結(jié)構(gòu)域，所述' CDR具有與圖52所示的' CDR相對(duì)應(yīng)的氨基酸序列。
7.如權(quán)利要求2所述的針對(duì)TSH受體的單克隆抗體或重組抗體或其包含F(xiàn)ab結(jié)構(gòu)域的片段，其包含: 抗體Vh結(jié)構(gòu)域，其包含: 圖14所示的Vh結(jié)構(gòu)域；或圖18所示的Vh結(jié)構(gòu)域；或圖22所示的Vh結(jié)構(gòu)域；或與上述Vh結(jié)構(gòu)域具有至少70%序列同一性的Vh結(jié)構(gòu)域；和/或 抗體'結(jié)構(gòu)域，其包含: 圖16所示的\結(jié)構(gòu)域；或圖20所示的\結(jié)構(gòu)域；或圖24所示的\結(jié)構(gòu)域；或與上述Vl結(jié)構(gòu)域具有至少70%序列同一性的\結(jié)構(gòu)域。
8.如權(quán)利要求7所述的單克隆抗體或重組抗體或其片段，其包含權(quán)利要求7所述的Vh結(jié)構(gòu)域和權(quán)利要求7所述的\結(jié)構(gòu)域。
9.如權(quán)利要求7或8所述的單克隆抗體或重組抗體或其片段，其中所述Vh結(jié)構(gòu)域和/或\結(jié)構(gòu)域與權(quán)利要求7所述的結(jié)構(gòu)域具有至少80%的序列同一性。
10.如權(quán)利要求8或9所述的單克隆抗體或重組抗體或其片段，其包含與圖16所示\結(jié)構(gòu)域成對(duì)的圖14所示的抗體Vh結(jié)構(gòu)域；或包含與圖20所示\結(jié)構(gòu)域成對(duì)的圖18所示的Vh結(jié)構(gòu)域；或與圖24所示\結(jié)構(gòu)域成對(duì)的圖22所示的Vh結(jié)構(gòu)域。
11.如前述任一項(xiàng)所述的單克隆抗體或重組抗體，其為表2中所述的16E5U4D3或17D2 ;或與所述抗體具有至少70%序列同一性的抗體。
12.如權(quán)利要求11所述的抗體,其中所述序列同一性為至少80%。
13.一種多聚核苷酸，其編碼權(quán)利要求2所述的抗體或其片段的氨基酸序列，所述多聚核苷酸如圖25-40或53-64所示；或上述序列的一部分，如圖26、28、30、32、34、36、38、40、54、56、58、60、62或64所不；或在其全長(zhǎng)上與上述序列具有至少70%的序列同一性。
14.如權(quán)利要求13所述的多聚核苷酸，在其全長(zhǎng)上與權(quán)利要求13所述的序列具有至少80%的序列同一性。
15.如權(quán)利要求14所述的多聚核苷酸，在其全長(zhǎng)上與權(quán)利要求13所述的序列具有至少90%的序列同一性。
16.在得自于受試者的體液樣品中篩選針對(duì)TSH受體的自身抗體的方法，其中，所述受試者疑似患有、容易患有或患有與TSH受體免疫反應(yīng)相關(guān)的自身免疫疾病,或是所述自身免疫疾病的康復(fù)者，所述方法包含: (a)提供來(lái)自所述受試者的所述體液樣品； (b)使所述樣品接觸: (i)全長(zhǎng)的TSH受體，其一個(gè)或多個(gè)表位，或包含TSH受體的一個(gè)或多個(gè)表位的多肽，和( )權(quán)利要求1-12中任一項(xiàng)所述的一個(gè)或多個(gè)單克隆抗體或重組抗體或其片段；以允許所述TSH受體，所述的一個(gè)或多個(gè)表位或所述多肽接觸存在于所述樣品中的TSH受體自身抗體，或接觸所述的一個(gè)或多個(gè)單克隆抗體或重組抗體或其片段；和 (c)監(jiān)測(cè)所述TSH受體、所述的一個(gè)或多個(gè)表位或所述多肽與存在于所述樣品中的所述自身抗體的相互作用，從而提供了所述的TSH受體自身抗體存在于所述樣品中的指示。
17.如權(quán)利要求16所述的方法，其中所述多肽包含一個(gè)或多個(gè)的下述一級(jí)結(jié)構(gòu)構(gòu)象，由該一級(jí)結(jié)構(gòu)構(gòu)象組成，或主要由該一級(jí)結(jié)構(gòu)構(gòu)象組成: TSH受體的22-91位氨基酸； TSH受體的246-260位氨基酸； TSH受體的260-363位氨基酸；和 TSH受體的380-418位氨基酸， 其中針對(duì)TSH受體而產(chǎn)生的自身抗體和/或淋巴細(xì)胞能與其發(fā)生相互作用，但不包括全長(zhǎng)TSH受體。
18.如權(quán)利要求16所述的方法，其中所述TSH受體的一個(gè)或多個(gè)表位包含一個(gè)或多個(gè)以下序列，由一個(gè)或多個(gè)以下序列組成，或主要由一個(gè)或多個(gè)以下序列組成: TSH受體的22-91位氨基酸； TSH受體的246-260位氨基酸； TSH受體的260-363位氨基酸；和 TSH受體的380-418位氨基酸。
19.如權(quán)利要求16-18中任一項(xiàng)所述的方法，其包括為權(quán)利要求1-12中任一項(xiàng)所述的一個(gè)或多個(gè)單克隆抗體或重組抗體或其片段提供標(biāo)記物。
20.如權(quán)利要求16所述的方法，其包括: (a)提供來(lái)自所述受試者的所述體液樣品； (b)使所述樣品接觸: (i)全長(zhǎng)的TSH受體，其一個(gè)或多個(gè)表位，或包含TSH受體的一個(gè)或多個(gè)表位的多肽，和( )權(quán)利要求1-12中任一項(xiàng)所述的一個(gè)或多個(gè)單克隆抗體或重組抗體或其片段，以允許所述TSH受體，所述的一個(gè)或多個(gè)表位或所述多肽與存在于所述樣品中的TSH受體自身抗體，或與所述的一個(gè)或多個(gè)單克隆抗體或重組抗體或其片段相互作用；和 (c)監(jiān)測(cè)所述TSH受體、所述的一個(gè)或多個(gè)表位或所述多肽與存在于所述樣品中的所述自身抗體的相互作用，從而提供了所述的TSH受體自身抗體存在于所述樣品中的指示。
其中在步驟(b)之前或之后將所述的一個(gè)或多個(gè)單克隆抗體或重組抗體或其片段直接或間接固定至一表面上。
21.如權(quán)利要求20所述的方法，其中所述多肽序列包含針對(duì)TSH受體而產(chǎn)生的自身抗體和/或淋巴細(xì)胞能夠與之相互作用的TSH受體的一個(gè)或多個(gè)表位的部分或全部一級(jí)結(jié)構(gòu)構(gòu)象，由該部分或全部一級(jí)結(jié)構(gòu)構(gòu)象組成，或主要由該部分或全部一級(jí)結(jié)構(gòu)構(gòu)象組成，所述的多肽序列包含一個(gè)或多個(gè)下述的一級(jí)結(jié)構(gòu)構(gòu)象，由該一級(jí)結(jié)構(gòu)構(gòu)象組成，或者主要由該一級(jí)結(jié)構(gòu)構(gòu)象組成: TSH受體的22-91位氨基酸； TSH受體的246-260 位氨基酸； TSH受體的260-363位氨基酸；和 TSH受體的380-418位氨基酸 其中針對(duì)TSH受體而產(chǎn)生的自身抗體和/或淋巴細(xì)胞能與其發(fā)生相互作用，但不包括全長(zhǎng)TSH受體。
22.如權(quán)利要求20所述的方法，其中所述TSH受體的一個(gè)或多個(gè)表位包含一個(gè)或多個(gè)以下序列，由一個(gè)或多個(gè)以下序列組成，或主要由一個(gè)或多個(gè)以下序列組成: TSH受體的22-91位氨基酸； TSH受體的246-260位氨基酸； TSH受體的260-363位氨基酸；和 TSH受體的380-418位氨基酸。
23.如權(quán)利要求20所述的方法，其包括為所述TSH受體、所述的一個(gè)或多個(gè)表位或所述多妝提供標(biāo)記物。
24.用于篩選得自受試者的體液樣品中的針對(duì)TSH受體的自身抗體的試劑盒，其中，所述受試者疑似患有、容易患有或患有與TSH受體免疫反應(yīng)相關(guān)的自身免疫疾病,或所述自身免疫疾病的康復(fù)者，所述試劑盒包含: (a)全長(zhǎng)TSH受體、其一個(gè)或多個(gè)表位或包含TSH受體的一個(gè)或多個(gè)表位的多肽； (b)權(quán)利要求1-12中任一項(xiàng)所述的一個(gè)或多個(gè)單克隆抗體或重組抗體或其片段； (c)用于將所述受試者的體液樣品、所述TSH受體、所述的一個(gè)或多個(gè)表位或所述多肽，和所述的一個(gè)或多個(gè)單克隆抗體或重組抗體或其片段相接觸，從而允許所述TSH受體、所述的一個(gè)或多個(gè)表位或所述多肽與存在于所述樣品中的TSH受體的自身抗體、或與所述的一個(gè)或多個(gè)單克隆抗體或重組抗體或其片段相互反應(yīng)的裝置；和 (d)用于監(jiān)測(cè)所述TSH受體、所述的一個(gè)或多個(gè)表位或所述多肽與存在于所述樣品中的所述自身抗體的相互反應(yīng)，從而提供所述樣品中存在TSH受體的自身抗體的指征的裝置。
25.如權(quán)利要求24所述的試劑盒，其中所述多肽包含一個(gè)或多個(gè)的下述一級(jí)結(jié)構(gòu)構(gòu)象，由該一級(jí)結(jié)構(gòu)構(gòu)象組成，或主要由該一級(jí)結(jié)構(gòu)構(gòu)象組成: TSH受體的22-91位氨基酸； TSH受體的246-260位氨基酸； TSH受體的260-363位氨基酸；和 TSH受體的380-418位氨基酸，其中針對(duì)TSH受體而產(chǎn)生的自身抗體能與其發(fā)生相互作用，但不包括全長(zhǎng)TSH受體。
26.如權(quán)利要求24所述的試劑盒，其中所述TSH受體的一個(gè)或多個(gè)表位包含一個(gè)或多個(gè)以下序列，由一個(gè)或多個(gè)以下序列組成，或主要由一個(gè)或多個(gè)以下序列組成: TSH受體的22-91位氨基酸； TSH受體的246-260位氨基酸； TSH受體的260-363位氨基酸；和 TSH受體的380-418位氨基酸。
27.如權(quán)利要求24所述的試劑盒,其包含用于權(quán)利要求1-12中任一項(xiàng)所述的一個(gè)或多個(gè)單克隆抗體或重組抗體或其片段的標(biāo)記物。
28.如權(quán)利要求24所述的試劑盒，其中，所述試劑盒包含: (a)全長(zhǎng)TSH受體、其一個(gè)或多個(gè)表位或包含TSH受體的一個(gè)或多個(gè)表位的多肽； (b)權(quán)利要求1-12中任一項(xiàng)所述的一個(gè)或多個(gè)單克隆抗體或重組抗體或其片段； (c)用于將所述受試者的體液樣品、所述TSH受體、所述的一個(gè)或多個(gè)表位或所述多肽，和所述的一個(gè)或多個(gè)單克隆抗體或重組抗體或其片段相接觸，從而允許所述TSH受體、所述的一個(gè)或多個(gè)表位或所述多肽與存在于所述樣品中的TSH受體的自身抗體、或與所述的一個(gè)或多個(gè)單克隆抗體或重組抗體或其片段相互反應(yīng)的裝置； (d)用于在所述一個(gè)或多個(gè)單克隆抗體或重組抗體或其片段與所述受試者體液樣品和所述TSH受體、所述的一個(gè)或多個(gè)表位或所述多肽相接觸之前或之后，將所述一個(gè)或多個(gè)單克隆抗體或重組抗體或其片段直接或間接固定在一表面上的裝置；和 (e)用于監(jiān)測(cè)所述TSH受體、所述的一個(gè)或多個(gè)表位或所述多肽與存在于所述樣品中的所述自身抗體的相互反應(yīng)，從而提供所述樣品中存在TSH受體的自身抗體的指征的裝置。
29.如權(quán)利要求28所述的試劑盒，其中所述多肽包含一個(gè)或多個(gè)的下述一級(jí)結(jié)構(gòu)構(gòu)象，由該一級(jí)結(jié)構(gòu)構(gòu)象組成，或主要由該一級(jí)結(jié)構(gòu)構(gòu)象組成: TSH受體的22-91位氨基酸； TSH受體的246-260位氨基酸； TSH受體的260-363位氨基酸；和 TSH受體的380-418位氨基酸，其中針對(duì)TSH受體而產(chǎn)生的自身抗體能與其發(fā)生相互作用，但不包括全長(zhǎng)TSH受體。
30.如權(quán)利要求28所述的試劑盒，其中所述TSH受體的一個(gè)或多個(gè)表位包含一個(gè)或多個(gè)以下序列，由一個(gè)或多個(gè)以下序列組成，或主要由一個(gè)或多個(gè)以下序列組成: TSH受體的22-91位氨基酸； TSH受體的246-260位氨基酸； TSH受體的260-363位氨基酸；和 TSH受體的380-418位氨基酸。
31.如權(quán)利要求24所述的試劑盒，其包含用于所述TSH受體、所述的一個(gè)或多個(gè)表位或所述多肽的標(biāo)記物。
32.一種藥物組合物，其包含權(quán)利要求1-12中任一項(xiàng)所述的單克隆抗體或重組抗體或其片段，和一種或多種藥學(xué)上可接受的載體、稀釋劑或賦形劑。
33.權(quán)利要求1-12中任一項(xiàng)所述的單克隆抗體或重組抗體或其片段的應(yīng)用，其用于制備用于刺激甲狀腺組織和/或包含TSH受體的組織的藥物。
34.權(quán)利要求1-12中任一項(xiàng)所述的單克隆抗體或重組抗體或其片段的應(yīng)用，其用于制備治療甲狀腺癌的藥物。
35.權(quán)利要求1-12中任一項(xiàng)所述的單克隆抗體或重組抗體或其片段與能夠刺激甲狀腺組織和/或包含TSH受體組織的一種或多種進(jìn)一步的藥劑的組合，其同時(shí)、單獨(dú)或順序地用來(lái)刺激甲狀腺組織和/或包含TSH受體的組織。
36.根據(jù)權(quán)利要求35所述的組合，其中所述的一種或多種進(jìn)一步的藥劑包含重組的人TSH和/或其一種或多種的突變體、類(lèi)似物、衍生物或片段，或者是這種片段的突變體、類(lèi)似物或衍生物。
37.根據(jù)權(quán)利要求35所述的組合，其中所述的一種或多種進(jìn)一步的藥劑獨(dú)立于TSH受體結(jié)合而發(fā)揮作用。
全文摘要
本發(fā)明涉及針對(duì)TSH受體的抗體及其片段，使用所述抗體篩選針對(duì)TSH受體的自身抗體的方法，包含所述針對(duì)TSH受體的抗體試劑盒和藥物組合物，以及所述抗體在制備用于刺激甲狀腺組織和/或包含TSH受體的組織的藥物中的應(yīng)用。
文檔編號(hào)A61P35/00GK103224562SQ20131007581
公開(kāi)日2013年7月31日 申請(qǐng)日期2002年8月21日 優(yōu)先權(quán)日2001年8月23日
發(fā)明者伯納德·里斯·史密斯, 雅德維加·富爾馬尼亞克, 簡(jiǎn)·菲娜·桑德斯 申請(qǐng)人:Rsr有限公司