抗-催乳素受體抗體制劑的制作方法
【專利說明】抗-催乳素受體抗體制劑
[0001] 相關(guān)申請的交叉引用 本申請于2014年3月14日作為PCT國際專利申請?zhí)峤?，且要求享有?013年3月15 日提交的美國臨時專利申請?zhí)?1/799,629的優(yōu)先權(quán)，所述申請的完整公開內(nèi)容明確通過 引用并入本文。
[0002] 序列表提交 本申請包括題為"SEQUENCE-LISTING17207-0007W0U1"的作為txt文件的電子格 式的序列表，其于2014年3月13日生成，且具有14. 8千字節(jié)（KB)的大小。txt文件 "SEQUENCE-LISTING17207-0007TOU1 "的內(nèi)容通過引用并入本文。
[0003] 背景 本公開總體涉及廣泛濃度范圍的抗_催乳素受體抗體制劑，其實(shí)質(zhì)上是等滲的且具有 低粘度，包括可用于皮下和一般性注射施用的制劑。
[0004]催乳素（PRL)是由199個氨基酸構(gòu)成的多肽激素。PRL屬于生長激素（GH)，多肽 激素的胎盤催乳素（PL)家族，且在腦下垂體的催乳素細(xì)胞（lactotrophcells)和幾種腦 下垂體外組織（諸如淋巴細(xì)胞、乳腺上皮細(xì)胞、子宮肌層和前列腺）中進(jìn)行合成。兩種不同 的啟動子調(diào)控腦下垂體和腦下垂體外PRL合成（萬避:1051-1055 (2006))。
[0005]PRL結(jié)合至PRL受體（PRLR)，PRLR是一種屬于1型細(xì)胞因子受體超家族的單跨膜 受體你Kiers19:225-268 (1998))。PRLR以三種不同的同種型存在，這三種 同種型是可通過其細(xì)胞質(zhì)尾部的長度進(jìn)行區(qū)別的短、長和中間形式。在配體結(jié)合之后，相繼 過程導(dǎo)致PRLR活化。PRL經(jīng)由其結(jié)合位點(diǎn)1與一個PRLR分子相互作用且然后經(jīng)由其結(jié)合 位點(diǎn)2吸引第二個受體分子，導(dǎo)致PRLR的活化二聚體。
[0006] PRLR二聚體化導(dǎo)致JAK/STAT(轉(zhuǎn)錄的Janus激酶/信號轉(zhuǎn)導(dǎo)子和活化子）途徑的 明顯活化。在受體二聚體化之后，JAK(主要為JAK2)與受體結(jié)合，彼此轉(zhuǎn)磷酸化并活化。此 外，PRLR也被磷酸化且可結(jié)合至含有SH2-結(jié)構(gòu)域的蛋白，諸如STAT。受體結(jié)合的STAT隨后 被磷酸化，從受體解離且轉(zhuǎn)位至細(xì)胞核，它們在細(xì)胞核中刺激目標(biāo)基因的轉(zhuǎn)錄。此外，已經(jīng) 描述了PRLR導(dǎo)致的Ras-Raf-MAPK途徑活化和細(xì)胞質(zhì)src激酶活化（關(guān)于綜述， Reviews19: 225-268 (1998))〇
[0007] 已經(jīng)研究在良性疾病子宮內(nèi)膜異位癥的背景下PRLR-介導(dǎo)的信號傳導(dǎo)的作用。 在一項(xiàng)研究中，分析了PRLR在月經(jīng)期的中晚期增生期過程中子宮內(nèi)膜異位癥患者的異位 子宮內(nèi)膜樣品和正位子宮內(nèi)膜中的表達(dá)模式^1:5-10， 2002)。表明PRLRmRNA存在于79%所分析子宮內(nèi)膜異位癥患者的正位子宮內(nèi)膜中，而其不 存在于86%子宮內(nèi)膜異位癥患者的子宮內(nèi)膜異位病灶中。這些數(shù)據(jù)建議，在正常和子宮內(nèi) 膜異位組織之間可能的PRLR表達(dá)的差異調(diào)控。然而，從這些表達(dá)數(shù)據(jù)無法推論P(yáng)RLR的抑 制可代表一種合適的子宮內(nèi)膜異位癥治療，特別是因?yàn)闆]有發(fā)現(xiàn)PRLR在子宮內(nèi)膜異位癥 病灶中表達(dá) 81：5-10 (2002))。
[0008] 正努力開發(fā)針對催乳素受體（PRLR)的抗體（包括抗-PRLR單克隆抗體（aPRLR mAb))來阻斷PRLR功能。一種此類aPRLRmAb是IgG2抗-PRLRmAb，其正被開發(fā)用于子宮 內(nèi)膜異位癥患者的非激素治療。
[0009] 抗體可經(jīng)由靜脈內(nèi)、肌肉內(nèi)和/或皮下注射施用于患者。為了確保患者依從性，期 望肌肉內(nèi)和皮下注射劑型是等滲的且包括小注射體積（每個注射部位<2ml)。為了降低注 射體積且提供有效劑量，經(jīng)常以廣泛濃度范圍（0.l_150mg/mL，包括20mg/ml至150mg/ml范 圍內(nèi)的高濃度）來施用抗體。
[0010] 盡管液體和凍干劑型兩者均用于目前市售的抗體藥物產(chǎn)品，但凍干形式更經(jīng)常用 于具有高蛋白濃度的抗體藥物產(chǎn)品。高濃度抗體劑型可呈現(xiàn)在制劑（尤其是液體制劑）開 發(fā)中的許多挑戰(zhàn)。對于抗體濃度接近其表觀溶解度限值的制劑，可通過沉淀、膠凝和/或結(jié) 晶而發(fā)生相分離。在高蛋白濃度，因?yàn)榭扇苄院筒豢扇苄缘鞍?蛋白聚集體形成，抗體的穩(wěn) 定性可變得有問題。高濃度抗體制劑經(jīng)常是高粘度的，其呈現(xiàn)處理（諸如超濾和無菌過濾） 和注射劑量溶液的困難。且在期望用于意欲用于肌肉內(nèi)或皮下施用的制劑的高抗體濃度， 需要呈比例的高濃度的穩(wěn)定劑（諸如蔗糖和氯化鈉）以實(shí)現(xiàn)長期蛋白穩(wěn)定性。所得高張溶 液經(jīng)常因?yàn)榻M織損傷而引起注射疼痛。因此，對于高蛋白濃度制劑的穩(wěn)定性與重量摩爾滲 透壓濃度，經(jīng)常期望平衡穩(wěn)定劑的量。
[0011] 概述 本公開提供具有寬廣范圍抗-PRLR抗體濃度的液體和凍干抗-PRLR抗體制劑，其實(shí) 質(zhì)上為等張且低粘度。除了用于緩沖該制劑的有機(jī)鹽或無機(jī)鹽（諸如磷酸鹽）以外，該 抗-PRLR抗體制劑實(shí)質(zhì)上不含鹽。
[0012] 本文呈現(xiàn)的抗-PRLR抗體制劑在約pH5. 5至約pH6. 5的pH含有約OmM至約30mM 磷酸鹽，諸如例如磷酸鈉和/或磷酸鉀；約50ppm至約200ppm非離子型表面活性劑，諸如例 如聚山梨醇酯（吐溫?) 80和/或聚山梨醇酯（吐溫?) 20 ;約88mM至約292mM的糖或糖醇， 諸如例如甘露醇、右旋糖、葡萄糖、海藻糖和/或蔗糖；約OmM至約50mM精氨酸；約OmM至約 50mM賴氨酸；約OmM至約270mM甘氨酸或丙氨酸；約OmM至約10mM甲硫氨酸；和約0.lmg/ ml至約150mg/ml的抗-PRLR抗體，包括aPRLR-特異性IgG2單克隆抗體（mAb)。
[0013] 除了用于緩沖制劑的有機(jī)鹽或無機(jī)鹽（諸如磷酸鹽）以外，每種本文公開的抗體 制劑實(shí)質(zhì)上不含鹽，所述抗體制劑容許添加替代穩(wěn)定劑來維持制劑的等滲（即范圍為約 240mmol/kg至約380mmol/kg的重量摩爾滲透壓濃度），其由此促進(jìn)更高程度的患者依從 性。
[0014] 每種本文公開的抗體制劑在22°C-23°C下具有范圍為約1至約8mPa-S的低粘度， 其促進(jìn)處理的簡易度，諸如例如改善的超濾和無菌過濾，以及通過注射器針頭在施用過程 中的抗體制劑的注射。
[0015] 本文公開的制劑以液體形式或凍干形式在高蛋白濃度下穩(wěn)定抗體，尤其是 抗-PRLR抗體（包括抗-PRLRIgG2抗體）。
[0016] 各個實(shí)施方案的描述 如上所述，本公開提供抗-PRLR抗體制劑，其以液體形式或以凍干形式在期望的儲存 條件下穩(wěn)定廣泛范圍濃度的抗-PRLR抗體。本文所述的所述制劑包括一種或多種藥學(xué)可接 受的賦形劑或穩(wěn)定劑，且在適當(dāng)pH下包含在緩沖介質(zhì)中且實(shí)質(zhì)上與生理液等滲。對于全身 施用，注射是一種可能的施用途徑，包括肌肉內(nèi)、靜脈內(nèi)、腹膜內(nèi)和皮下注射。
[0017] 因?yàn)樗麄兊牡驼扯龋疚墓_的抗-PRLR抗體制劑可經(jīng)由（例如）超濾和無菌過 濾進(jìn)行方便處理且可經(jīng)由注射（包括靜脈內(nèi)和皮下注射兩者）而施用于患者。而且，因?yàn)?本文公開的抗-PRLR抗體制劑實(shí)質(zhì)上是等滲的，所以其降低組織損傷或其他不利生理影響 且由此實(shí)現(xiàn)有利的患者耐受性且增加的患者依從性。
[0018] 本文所述制劑的特征在于除了用于緩沖該制劑的有機(jī)鹽或無機(jī)鹽（諸如磷酸鹽） 以外，實(shí)質(zhì)上不存在添加鹽，其提供增加其他穩(wěn)定劑（諸如蔗糖）濃度的靈活性，同時維持 制劑的重量摩爾滲透壓濃度以改善體內(nèi)耐受性且因而增加患者依從性。而且，本文描述的 制劑的低粘度容許方便處理（包括超濾和無菌過濾）以及通過針頭注射藥物產(chǎn)品溶液。
[0019] 為了解釋本說明書的目的，將應(yīng)用以下定義。在下文所列任一定義與任何其他文 件（包括通過引用并入本文的任何文件）中的該詞語的使用沖突的情況下，除非明確表明 相反意義（例如原先使用該術(shù)語的文件中），否則，出于解釋本說明書和其相關(guān)權(quán)利要求的 目的，應(yīng)當(dāng)以下文所述定義為準(zhǔn)。
[0020] 只要適當(dāng)，以單數(shù)使用的術(shù)語也將包括復(fù)數(shù)，且反之亦然。除非另有指明或者使 用"一個/種或多個/種"明顯不當(dāng)，否則使用"一個/種（a) "在本文意指"一個/種或 多個/種"。除非另有指明，否則使用"或"意指"和/或"。"包含（comprise、comprises、 comprising) "、"包括（include、includes、including) "是可互換的且不欲為限制性的。術(shù) 語"諸如（suchas)"、"例如（forexample)"和"例如（e.g.)"也不欲為限制性的。例如， 術(shù)語"包括"應(yīng)當(dāng)意指"包括，但不限于"。此外，當(dāng)一個或多個實(shí)施方案的描述使用術(shù)語"包 含"，本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)理解在一些特定情況下，一個或多個實(shí)施方案可使用語言"基本上 由...組成"和/或"由...組成"來替代描述。
[0021] 如本文所使用，術(shù)語"粘度"是指諸如在當(dāng)通過注射器針頭進(jìn)行注射時施用于患者 的過程中，液體制劑的流動阻力。粘度測量可通過錐板技術(shù)使用設(shè)定在定義溫