一種花青素脂質(zhì)體的制備方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種新的花青素脂質(zhì)體的制備方法，它解決了游離花青素穩(wěn)定性差、生物可利用度低的問(wèn)題。該方法基于花青素穩(wěn)定性受pH值影響大的特點(diǎn)，采用了pH梯度結(jié)合逆向蒸發(fā)的方法首先得到花青素脂質(zhì)體的混懸液，再通過(guò)擠壓過(guò)膜或循環(huán)高壓均質(zhì)，以獲得不同粒徑范圍的花青素脂質(zhì)體。由于脂質(zhì)體混懸液不易保存，在脂質(zhì)體的制備過(guò)程中加入凍干保護(hù)劑，將混懸液在-65℃下預(yù)冷凍后在冷凍干燥機(jī)中凍干，得到花青素脂質(zhì)體的凍干粉。采用本方法制成的花青素脂質(zhì)體包埋率高達(dá)85.88％，根據(jù)處理方法不同，可獲得粒徑范圍100～234nm的脂質(zhì)體。凍干復(fù)溶后的包埋率可達(dá)82.5％。采用脂質(zhì)體包埋花青素，可提高花青素在體內(nèi)的穩(wěn)定性和生物可利用度。
【專利說(shuō)明】一種花青素脂質(zhì)體的制備方法
一、【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及天然抗氧化劑花青素的脂質(zhì)體的制備方法。
二、【背景技術(shù)】
[0002]花青素在自然界中的分布廣泛，已發(fā)現(xiàn)存在于自然界中的花青素有600多種，大量體外研究表明，花青素具有比維生素E等常見(jiàn)的抗氧化劑更高的抗氧化能力，較強(qiáng)的抗炎，抗菌及抑制癌細(xì)胞生長(zhǎng)能力，因此被認(rèn)為可以用于降低由氧化性損傷所引起的慢性疾病，如心血病、腫瘤、神經(jīng)退性疾病、糖尿病的患病風(fēng)險(xiǎn)的作用，這些作用引起了藥學(xué)、營(yíng)養(yǎng)學(xué)及食品學(xué)界的廣泛關(guān)注和研究。
[0003]然而，相比較其它植物黃酮，花青素穩(wěn)定性差，對(duì)溫度、pH、光、金屬離子等外在因素敏感，尤其受PH值的影響很大，花青素一般在pHl?2以下以2 —苯基苯并吡喃型陽(yáng)離子的結(jié)構(gòu)穩(wěn)定存在，隨著PH值的增加，其主體結(jié)構(gòu)逐漸過(guò)渡到查爾酮、醌型堿的結(jié)構(gòu)，穩(wěn)定性也迅速減小，容易被氧化降解。此外，近年來(lái)對(duì)花青素體內(nèi)生物可利用度的研究結(jié)果也不容樂(lè)觀，可能原因有二，一是花青素在生理?xiàng)l件下不穩(wěn)定，二是其較強(qiáng)親水性及較大分子量導(dǎo)致其不易被胃腸道吸收。穩(wěn)定性差和生物可利用率差嚴(yán)重影響了花青素的廣泛應(yīng)用，隨著近年來(lái)人們對(duì)花青素在功能食品、保健食品的應(yīng)用，期望解決這個(gè)問(wèn)題的心情也越來(lái)越迫切。
[0004]朱樹(shù)華等將紫薯·花青素與甘薯、小麥和玉米淀粉混合碾磨，再載入明膠膠囊制備得到了紫薯花青素膠囊，但該發(fā)明未說(shuō)明中花青素在體內(nèi)的穩(wěn)定性和生物可利用度。如何在提高花青素的穩(wěn)定性同時(shí)提高其生物可利用度一直是個(gè)難題。
[0005]脂質(zhì)體是一種磷脂在水相中形成的具有類似生物膜結(jié)構(gòu)的雙分子層結(jié)構(gòu)的小囊，最早是由英國(guó)學(xué)者Bangham在1965年將磷脂分散在水中進(jìn)行電鏡觀察時(shí)發(fā)現(xiàn)的。1972年Gregoriadis和Ryman提出用脂質(zhì)體作為β -半乳糖苷酶載體治療糖原累積疾病后,此后人們開(kāi)始研究應(yīng)用脂質(zhì)體作為不穩(wěn)定的藥物的包埋使其穩(wěn)定化和通過(guò)脂質(zhì)體載體控制藥物釋放。脂質(zhì)體包埋技術(shù)較為成熟，部分脂質(zhì)體藥物已有臨床應(yīng)用。制備脂質(zhì)體常用的方法有手搖法、超聲法、凍干再水化法、表面活性劑去除法、冷凍熔融法、逆向蒸發(fā)法和PH梯度法等。逆相蒸發(fā)法由于適用于包埋水溶性物質(zhì)且可制得大單室脂質(zhì)體的特點(diǎn)，成為包埋黃酮類化合物最常用的方法之一。鑒于一般的脂質(zhì)體在生理?xiàng)l件(即PH中性)下會(huì)比較穩(wěn)定，而花青素在PH < 2時(shí)比較穩(wěn)定，本發(fā)明采用pH梯度法、逆向蒸發(fā)法兩者相結(jié)合的方法制備獲得花青素脂質(zhì)體混懸液，大大提高了花青素的穩(wěn)定性，同時(shí)采用加入凍干保護(hù)劑進(jìn)行冷凍干燥，制備得到了花青素脂質(zhì)體的凍干粉，便于保存和作為食品、醫(yī)藥保健品和化妝品的原料進(jìn)行使用。
三、
【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]技術(shù)問(wèn)題
[0007]本發(fā)明的目的是為了解決游離花青素存在的穩(wěn)定性差及生物可利用率差的問(wèn)題，提供了一種花青素脂質(zhì)體的制備方法。
[0008]技術(shù)方案
[0009]本發(fā)明的制備花青素脂質(zhì)體的方法是通過(guò)以下步驟實(shí)現(xiàn)的:
[0010](I)成膜:按摩爾比為1:1?5:1的比例稱取一定量的磷脂和膽固醇置于梨形燒瓶中，并按1:1?10:1的比例加入氯仿或乙醚等有機(jī)溶劑溶解，并在10°c?35°C下通過(guò)減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去有機(jī)溶劑，在瓶?jī)?nèi)壁上形成一層均勻的淺黃色膜脂；
[0011](2)花青素酸性溶液的配置:將花青素與花青素穩(wěn)定劑按重量比為20:5-20:1的比例混合，加入PH2的磷酸緩沖溶液溶解。
[0012](3)超聲波處理:向形成脂膜的梨形燒瓶中重新加入一定量的乙醚等有機(jī)溶劑將膜脂溶解，再按磷脂與花青素的重量比為10:1-50:1加入花青素酸性磷酸鹽緩沖溶液，并震蕩混合，得混合液；將_混合液短時(shí)間歇超聲處理3?lOmin，使其形成外觀均勻，且在20min內(nèi)不發(fā)生分層現(xiàn)象的乳狀液；
·[0013](4)逆向蒸發(fā):上述乳狀液置于梨形瓶中，并在15°C?35°C的水浴中，減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)直至有機(jī)溶劑去除后形成的凝膠半固態(tài)脂質(zhì)體從瓶底脫落；
[0014](5)水合:向通過(guò)逆向蒸發(fā)得到的脂質(zhì)體中加入一定體積的pH為7的磷酸鹽緩沖液，室溫下震蕩5?IOmin后得粗脂質(zhì)體混懸液。
[0015](6)粒徑控制:將粗脂質(zhì)體擠壓通過(guò)0.45 μ m、0.25 μ m或0.10 μ m等不同孔徑的
濾膜，或循環(huán)高壓均質(zhì)，以獲得不同粒徑范圍的花青素脂質(zhì)體。
[0016](7)冷凍干燥:在上述脂質(zhì)體懸浮液中按3_20g / IOOml加入凍干保護(hù)劑，然后放入_65°C下預(yù)冷凍24小時(shí)后用冷凍干燥劑進(jìn)行冷凍干燥，得到花青素脂質(zhì)體的凍干粉。
[0017]有益效果
[0018](I)脂質(zhì)體具有提高芯材穩(wěn)定性，控制芯材釋放，屏蔽不良味道與氣味的作用，本發(fā)明采用PH梯度結(jié)合逆相蒸發(fā)法制備花青素脂質(zhì)體，將花青素包埋在內(nèi)水相中，降低了花青素受外界環(huán)境影響的敏感性，使花青素更加穩(wěn)定。
[0019](2)脂質(zhì)體具有靶向性和生物相容性，有利于人體吸收利用，本發(fā)明采用脂質(zhì)體包埋花青素可有效地提高花青素的生物可利用率。
[0020](3)本發(fā)明采用pH梯度結(jié)合逆相蒸發(fā)法制備花青素脂質(zhì)體，得到了包封率高達(dá)85.88%，平均粒徑為234nm的花青素脂質(zhì)體，實(shí)現(xiàn)了在提高花青素穩(wěn)定性同時(shí)改善其生物可利用率的技術(shù)難題，并且該發(fā)明制備工藝簡(jiǎn)單，具有廣泛的應(yīng)用前景。
[0021 ] (4)通過(guò)加入保護(hù)劑后進(jìn)行冷凍干燥，得到花青素脂質(zhì)體的凍干粉，易于保存運(yùn)輸以及作為食品、功能保健品和化妝品的原料使用。
四、【專利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0022]圖1是應(yīng)用pH梯度結(jié)合逆相蒸發(fā)法制備出的花青素脂質(zhì)體懸浮液；
[0023]圖2是擠壓過(guò)0.45 μ m的膜后的花青素脂質(zhì)體的粒徑分布曲線；
[0024]圖3是擠壓過(guò)0.20 μ m的膜后的花青素脂質(zhì)體的粒徑分布曲線；
[0025]圖4是擠壓過(guò)0.10 μ m的膜的花青素脂質(zhì)體的粒徑分布曲線。
[0026]發(fā)明的【具體實(shí)施方式】
[0027]實(shí)施例1:[0028](I)稱取0.0600g的大豆卵磷脂和0.0lOOg的膽固醇置于梨形燒瓶中，量取12mL的氯仿加入其中將磷脂和膽固醇溶解，25°C旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)蒸去氯仿，直至瓶?jī)?nèi)壁上形成一層均勻的淺黃色膜脂；
[0029](2)花青素溶液的制備:將2mg從黑米麩皮中提取的花青素粉末、0.2mg抗壞血酸溶解在2.0ml pH為2.0的磷酸緩沖溶液中；
[0030](3)向梨形燒瓶中加入12mL乙醚將(I)所制得的膜脂溶解，然后將上述花青素磷酸緩沖液在震蕩下緩慢加入，得混合液，將該混合液短時(shí)間歇超聲處理5min，使其形成外觀均勻的乳狀液；
[0031](4)將上述乳狀液在15°C下減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去有機(jī)相，直至形成凝膠狀的半固體從瓶底脫落，得到混懸液；
[0032](5)向(4)的混懸液中加入50mLpH為7的磷酸鹽緩沖液，并震蕩5min后得粗脂質(zhì)體，粗脂質(zhì)體過(guò)0.45μ m的濾膜，得到包封率為83.48%，平均粒徑為221nm的花青素脂質(zhì)體。
[0033](6)在(5)的脂質(zhì)體混懸液中加入海藻糖5g，并在_65°C下預(yù)冷凍24小時(shí)，然后用冷凍干燥機(jī)冷凍，得到·花青素脂質(zhì)體粉末。
[0034]實(shí)施例2:
[0035](I)稱取0.1200g的大豆卵磷脂和0.0180g的膽固醇置于梨形燒瓶中，量取26mL的氯仿加入其中將磷脂和膽固醇溶解，25°C旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)蒸去氯仿，直至瓶?jī)?nèi)壁上形成一層均勻的淺黃色膜脂；
[0036](2)花青素溶液的制備:將4mg從黑米麩皮中提取的花青素粉末、0.2mg水溶性維生素E溶解在8.0ml pH為2.0的磷酸緩沖溶液中；
[0037](3)向梨形燒瓶中加入26mL乙醚將(I)所制得的膜脂溶解，然后將上述花青素磷酸緩沖液在震蕩下緩慢加入，得混合液，將該混合液短時(shí)間歇超聲處理5min，使其形成外觀均勻的乳狀液；
[0038](4)將上述乳狀液在25°C下減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去有機(jī)相，直至形成凝膠狀的半固體從瓶底脫落，得到混懸液；
[0039](5)向(4)的混懸液中加入IOOmLpH為7的磷酸鹽緩沖液，并震蕩5min后得粗脂質(zhì)體，粗脂質(zhì)體過(guò)0.2 μ m的濾膜，得到包封率為76.21%，平均粒徑為187nm的花青素脂質(zhì)體。
[0040](6)在(5)所制備的脂質(zhì)體混懸液中加入海藻糖3g，并在_65°C下預(yù)冷凍24小時(shí)，然后用冷凍干燥機(jī)冷凍，得到花青素脂質(zhì)體粉末。
[0041]實(shí)施例3:
[0042](I)稱取0.1800g的大豆卵磷脂和0.0300g的膽固醇置于梨形燒瓶中，量取40mL的氯仿加入其中將磷脂和膽固醇溶解，30°C旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)蒸去氯仿，直至瓶?jī)?nèi)壁上形成一層均勻的淺黃色膜脂；
[0043](2)花青素溶液的制備:將6mg從黑米麩皮中提取的花青素粉末、1.2mg抗壞血酸溶解在12ml pH為2.0的磷酸緩沖溶液中；
[0044](3)向梨形燒瓶中加入40mL乙醚將(I)所制得的膜脂溶解，然后將上述花青素磷酸緩沖液在震蕩下緩慢加入，得混合液，將該混合液短時(shí)間間歇超聲處理5min，使其形成外觀均勻的乳狀液；
[0045](4)將上述乳狀液在30°C下減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去有機(jī)相，直至形成凝膠狀的半固體從瓶底脫落，得到混懸液；
[0046](5)向(4)的混懸液中加入150mLpH為7的磷酸鹽緩沖液，并震蕩5min后得粗脂質(zhì)體，粗脂質(zhì)體經(jīng)循環(huán)高壓均質(zhì)處理，得到包封率為70.02%，平均粒徑為136 nm的花青素脂質(zhì)體。
[0047](6)在(5)所制備的脂質(zhì)體混懸液中加入海藻糖5g，并在_65°C下預(yù)冷凍24小時(shí)，然后用冷凍干燥機(jī)冷凍 ，得到花青素脂質(zhì)體粉末。
【權(quán)利要求】
1.一種花青素脂質(zhì)體的制備方法，其特征在于應(yīng)用PH梯度結(jié)合逆相蒸發(fā)法，并通過(guò)擠壓過(guò)膜或循環(huán)高壓均質(zhì)處理，得到不同粒徑分布的脂質(zhì)體。其制備通過(guò)以下步驟和工藝條件實(shí)現(xiàn): (1)成膜:稱取一定量的磷脂和膽固醇，用適量的有機(jī)溶劑溶解，并在溫度為15°c?35°C下減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)緩慢除去有機(jī)溶劑，直至瓶?jī)?nèi)壁上形成一層均勻的淺黃色膜脂； (2)超聲波處理:向梨形燒瓶中重新加入有機(jī)溶劑將膜脂溶解，再加入酸性的含有穩(wěn)定劑的花青素(pH = 2.0)溶液震蕩混合；將該混合液短時(shí)間間歇超聲處理，使其形成外觀均一的乳狀液； (3)減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā):將梨形瓶置于25°C?35°C的水浴中，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)直至凝膠從瓶底脫落； (4)水合:向(3)中的燒瓶里加pH7.0的磷酸鹽緩沖液，室溫下震蕩后得到內(nèi)、外水相具有PH梯度差的脂質(zhì)體粗混懸液； (5)粒徑控制:將上述脂質(zhì)體初混懸液依次擠壓通過(guò)0.45 μ m、0.25 μ m、0.1Oym的濾膜，或用高壓均質(zhì)機(jī)均質(zhì)，得到不同粒徑分布(120nm?230nm)的脂質(zhì)體。 (6)冷凍干燥:將在上述脂質(zhì)體混懸液加入保護(hù)劑，經(jīng)預(yù)冷凍后進(jìn)行冷凍干燥，得到花青素脂質(zhì)體的凍干粉。
2.根據(jù)權(quán)利要求1 所述的花青素脂質(zhì)體制備方法，其中所說(shuō)的磷脂包括豆磷脂、蛋磷脂及其它可用于食品藥品的磷脂中的一種或幾種。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的花青素脂質(zhì)體制備方法，其中所使用的有機(jī)溶劑可以是乙醚，氯仿等弱極性，與水不混溶的溶劑。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的花青素脂質(zhì)體制備方法，含穩(wěn)定劑花青素酸性溶液的制備中使用的穩(wěn)定劑為抗壞血酸、維生素E、小分子酚酸等具有生物活性的花青素穩(wěn)定劑，花青素溶液的配制采用PH2的磷酸緩沖液。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的花青素脂質(zhì)體制備方法，凍干保護(hù)劑包括下列物質(zhì)的一種或多種:海藻糖、蔗糖、乳糖、麥芽糖等二糖或棉子糖等其它寡聚糖，氯化鈉，磷酸鹽。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的花青素脂質(zhì)體制備方法，其特征(I)在于通過(guò)將磷脂與膽固醇溶液混合并用有機(jī)溶劑溶解，再通過(guò)緩慢減壓蒸發(fā)，首先制成一層膜。磷脂與膽固醇的摩爾比為1:1?1:5。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的花青素脂質(zhì)體制備方法，其特征(2)在于花青素溶于pH為2的含花青素穩(wěn)定劑的酸性緩沖溶液中，使得制成的花青素脂質(zhì)體所處內(nèi)水相為酸性，從而保持了花青素原有的結(jié)構(gòu)和具有足夠的穩(wěn)定性?；ㄇ嗨嘏c穩(wěn)定劑的重量比為20:1?20:5。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的花青素脂質(zhì)體制備方法，其特征(3)在于磷脂與花青素的質(zhì)量比為10:1?50:1。
9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的花青素脂質(zhì)體制備方法，其特征(4)加入pH7.0的磷酸緩沖液水合，凍干保護(hù)劑可以溶在該緩沖溶液中，也可以在形成脂質(zhì)體混懸液后加入。凍干保護(hù)劑的加入量為2?30g / 100ml。
10.根據(jù)權(quán)利要求1所述的花青素脂質(zhì)體制備方法，其特征(4)通過(guò)擠壓過(guò)膜或循環(huán)高壓均質(zhì)，形成不同粒徑分布范圍的花青素脂質(zhì)體。
11.根據(jù)權(quán)利要求1所述的花青素脂質(zhì)體制備方法，其特征(5)經(jīng)過(guò)預(yù)冷凍、冷凍干燥，得到花青素脂質(zhì)體的凍干粉。該凍干粉易于保存，可作為功能保健品、藥物和化妝品的原料使用 。
【文檔編號(hào)】A61K8/49GK103432013SQ201310413928
【公開(kāi)日】2013年12月11日 申請(qǐng)日期:2013年9月12日 優(yōu)先權(quán)日:2013年9月12日
【發(fā)明者】劉琴, 牛文慧, 張薇娜, 胡秋輝 申請(qǐng)人:南京財(cái)經(jīng)大學(xué)