重組靈芝免疫調節(jié)蛋白在制備治療帕金森病藥物中的應用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了重組靈芝免疫調節(jié)蛋白（rLZ-8）在制備治療帕金森病藥物中的應用。通過在體動物模型實驗表明，重組靈芝免疫調節(jié)蛋白能夠改善帕金森動物模型的行為學障礙，對帕金森動物模型的腦組織多巴胺神經元細胞有一定的神經保護作用，可用于預防和治療帕金森病。
【專利說明】重組靈芝免疫調節(jié)蛋白在制備治療帕金森病藥物中的應用
【技術領域】
[0001]本發(fā)明涉及的重組靈芝免疫調節(jié)蛋白是由基因重組技術，以巴斯德畢赤酵母為表達載體，深度發(fā)酵表達的重組靈芝免疫調節(jié)蛋白在制備治療帕金森病藥物中的應用，尤其涉及重組靈芝免疫調節(jié)蛋白在治療帕金森病方面的用途，屬于生物制藥工程領域。
【背景技術】
[0002]帕金森病(Parkinson’ s disease, PD)是一種常見于中老年人的第二大神經退行性疾病，為老年人兩大慢性殺手之一。隨著老齡化社會的來臨，ro患病率正在世界范圍內逐年增高，據世界帕金森病協會資料顯示，全球現有超過400萬帕金森病患者。我國目前約有帕金森病患者200萬，居全球第一，而且每年還要新增約10萬患者。由此帕金森病已經成為我國乃至世界各國面臨的重大醫(yī)學和社會問題。
[0003]帕金森病的特征性病理變化是中腦黑質致密部多巴胺(DA)能神經元的變性死亡，殘存神經元胞衆(zhòng)內嗜伊紅路易小體(Lewy body, LB)形成，以及紋狀體DA遞質含量減少。H)主要有四大癥狀:靜止性震顫、肌強直、動作緩慢、姿勢平衡障礙。近年來發(fā)現H)還出現認知功能下降、情緒障礙等非運動癥狀。引起ro病理改變的確切病因目前尚未清楚。許多研究提示ro的發(fā)生是多因素共同作用的結果，如:環(huán)境因素、基因突變、年齡老化、線粒體功能障礙、氧化應激、免疫炎性、興奮性氨基酸毒性、凋亡、泛素蛋白酶體系統功能障礙等，這些發(fā)病因素在動物模型和ro患者研究中均己得到有力證實。
[0004]在治療方面從60年代開始使用左旋多巴到現在神經保護藥物及外科手術方法的不斷問世也正在使帕金森 病患者的痛苦逐漸減少。但目前并沒有能從根本上控制ro病情進展的藥物或治療方法，而且現有的各種療法都有其局限性。因此還需要進一步對ro的發(fā)病機制進行更深入的研究，并不斷探索更加有效的ro治療藥物，并對ro不同時期機體與抗帕金森藥物之間的相互作用進行更深入的探索。
[0005]靈芝免疫調節(jié)蛋白(ImmunoregulatoryProtein of Ganoderma lucidium, LZ-8)是1989年Kino等從靈芝菌絲體提取物中分離和純化的小分子蛋白質，命名為LZ-8，并測定其氨基酸順序和免疫生理活性。蛋白質測序表明LZ-8由110個氨基酸殘基組成，氨基端乙?；?，分子量為12.4KD，等電點為4.4。靈芝免疫調節(jié)蛋白的主要功能在于它可以促進末梢淋巴細胞和脾臟細胞的增生，誘導動物和人體的巨噬細胞分泌多種細胞因子進而防御及消除病原體的侵害，維護機體的健康。
[0006]PD發(fā)生后，細胞免疫、體液免疫的變化，小膠質細胞、星形膠質細胞活性的改變，以及各種細胞因子水平的變化，均可導致ro嚴重程度的變化。很多研究也證明，使用抗炎類藥物，可能對黑質多巴胺神經元有保護作用。本發(fā)明的積極效果在于首次公開了重組靈芝免疫調節(jié)蛋白rLZ-8對帕金森病的治療作用，其不僅能在小鼠模型體內具有抗帕金森病作用，并且無副作用，對應用重組靈芝免疫調節(jié)蛋白研制抗帕金森病藥物有一定的積極作用。

【發(fā)明內容】
[0007]本發(fā)明所述的重組靈芝免疫調節(jié)蛋白是由基因重組技術，以巴斯德畢赤酵母為表達載體，發(fā)酵表達的重組靈芝免疫調節(jié)蛋白rLZ-8，本發(fā)明主要內容是通過大量的實驗表明rLZ-8在制備治療帕金森病中的應用具體
【發(fā)明內容】
如下:
本發(fā)明人通過大量的在體動物帕金森病模型實驗，通過爬桿實驗、懸掛實驗、轉棒實驗3方面考察了由MPTP所致的小鼠行為學障礙，經過連續(xù)治療后得到rLZ-8能夠有效治療和改善由MPTP所致的小鼠行為學障礙；采用免疫組化法檢測酪氨酸氫化酶(TH)陽性細胞數量，來考察rLZ-8對MPTP所致的小鼠多巴胺能神經元損傷修復效果，實驗結果表明MPTP模型組的TH陽性細胞數量明顯較少，殘存神經元多萎縮，rLZ-8組黑質致密部的TH陽性細胞形態(tài)基本正常，結構完整，數目明顯多于MPTP組。
[0008]在rLZ-8抑制MPTP所致的小鼠腦內氧化應激增強以及對主要臟器指數的影響的實驗中，考察了小鼠腦組織中SOD、MDA、GSH-Px含量以及小鼠的體重變化和主要臟器指數，結果表明，在sod含量方面，與正常對照組相比，ro模型組sod含量顯著降低；與?模型組相比，rLZ-8高、中、低劑量組和美多芭組SOD含量顯著增高，在MDA含量方面，與正常對照組相比，H)模型組MDA含量顯著增高；與PD模型組相比，rLZ-8高、中劑量組和美多芭組MDA含量顯著降低，在GSH-Px含量方面，與正常對照組相比，PD模型組GSH-PX含量顯著降低；與?模型組相比，rLZ-8中、低劑量組GSH-PX含量顯著增高，體重變化方面，在實驗過程中，小鼠體重呈緩慢增長趨勢。rLZ-8組和H)模型組給予MPTP后體重有所下降，隨后恢復正常增長。在主要臟器系數變化方面，心臟指數:rLZ-8高劑量組心臟指數顯著降低，與正常對照組、rLZ-8低劑量組和H)模型相比具有顯著性差異，其余各組之間無顯著性差異。肝臟指數:各實驗組之間無顯著性差異。脾臟指數:陽性藥組和H)模型脾臟指數升高，與正常對照組相比具有顯著性差異，其余各組之間無顯著性差異。肺臟指數:陽性藥組肺指數升高，與正常對照組相比具有顯著性差異，其余各組之間無顯著性差異。腎臟指數:陽性藥組腎臟指數升高，與正常對照組和ro模型相比具有顯著性差異。實驗總結發(fā)現rLZ-8對ro動物模型的行為學障礙具有治療和改善作用，對DA能神經元損傷有一定的神經保護效應，并初步研究推測，rLZ-8具有降低中腦脂質過氧化反應、抑制小膠質細胞和星形膠質細胞激活等功效。
[0009]本發(fā)明具有有益之處在于:安全性高，可長期服用。在目前階段，帕金森病通常是不可逆的神經退行性疾病，病因復雜。為了保持患者病情不繼續(xù)惡化，病人用藥周期較長。重組靈芝免疫調節(jié)蛋白作為一種蛋白質類藥物，其高安全性可以保證病人長期用藥的需要。
[0010]說明書【專利附圖】

【附圖說明】
圖1各組小鼠爬桿實驗掉頭時間測定結果。
[0011]圖注:各組小鼠rLZ-8給藥第21天爬桿實驗掉頭時間測定結果。與正常對照組相比，ttp〈0.05,與PD模型組相比*ρ<0.05。
[0012]圖2各組小鼠爬桿實驗爬桿總時間測定結果。
[0013]圖注:各組小鼠rLZ-8給藥第21天爬桿實驗爬桿總時間測定結果。與正常對照組相比，βρ<0.防；與PD模型組相比，*ρ<0.05。
[0014]圖3各組小鼠懸掛時間得分測定結果。
[0015]圖注:各組小鼠rLZ-8給藥第21天懸掛時間得分測定結果。與正常對照組相比，*ρ〈0.01 ;與模型組相比/Kft 05, #p<0.01。
[0016]圖4各組小鼠懸掛情況得分測定結果。
[0017]圖注:各組小鼠rLZ-8給藥第17天懸掛情況得分測定結果。與正常對照組相*p<0.05 ;與模型組相比，up<0.05。
[0018]圖5各組小鼠轉棒實驗第一次掉落時間測定結果(16rpm)。
[0019]圖注:各組小鼠rLZ-8給藥第21天轉棒實驗第一次掉落時間測定結果(16rpm)。與正常對照組相比，* P<0.05 ；與模型組相比#Ρ<0.05。
[0020]圖6各組小鼠轉棒實驗第一次掉落時間測定結果(20rpm)。
[0021]圖注:各組小鼠rLZ-8給藥第22天轉棒實驗第一次掉落時間測定結果(20rpm)。與正常對照組相比，*Ρ<0.防；與模型組相比，βρ<0.防；與rlz-8中、低劑量組相比，Δρ<0.05。
[0022]圖7小鼠黑質致密部TH免疫組化染色結果。
[0023]圖注:Α正常對照組；B PD模型組；C美多芭組；D rLZ-8低劑量組；E rLZ-8中劑量組；F rLZ-8高劑量組。
[0024]圖8小鼠腦組織SOD含量檢測結果。
[0025]圖注:小鼠腦組織SOD含量檢測結果。與正常對照組相比，兮OOl ;與模型組相VC,mp<0.01, ###p<0.001。
[0026]圖9各組小鼠腦組織MDA含量測定結果。
[0027]圖注:各組小鼠腦組織MDA含量測定結果。與正常對照組相比，**ρ<0.05，*p<0.0Ol ;與模型組相比，up<0.05。
[0028]圖10各組小鼠腦組織GSH-PX含量測定結果。
[0029]圖注:各組小鼠腦組織GSH-PX含量測定結果。與正常對照組相比*p<0.0Ol ；與模型組相比.Ρ〈0.0Ol ；與rlz-8低劑量組相比§ §p<0.0Ol ；與rlz_8高劑量組相比ΔΔρ<0.0Ol。
[0030]圖11各組小鼠體重變化結果
圖12各組小鼠各臟器器官指數測定結果
【具體實施方式】
[0031]實施例1 rLZ-8能改善MPTP所致的小鼠行為學障礙 I實驗材料
rLZ-8 (由吉林大學鉆智基因工程藥物研究所提供)，MPTP (Sigma)，美多芭(羅氏)。
[0032]2儀器設備
ZB-200型疲勞轉棒儀(成都泰盟科技有限公司)，小鼠爬桿架，小鼠懸掛線 3實驗動物
健康靈活C57BL/6小鼠，雄性，6-8周齡，體重20±2g，SPF級。購自北京華阜康生物科技股份有限公司，動物許可證編號:SCXK京2009-0004。在吉林大學SPF級條件下飼養(yǎng)。實驗期間控制室溫在(20±2) °C，12小時交替照明，小鼠自由飲水、取食。
[0033]動物于給藥前進行爬桿實驗、轉棒實驗和懸掛實驗訓練，選取訓練合格的小鼠60只隨機分為6組，每組10只。[0034]4實驗方法
4.1實驗分組及給藥
小鼠60只隨機分為6組，每組10只。正常對照組:每天腹腔注射生理鹽水2次，連續(xù)21天，其中第10-14天，每天還需腹腔注射生理鹽水I次。H)模型組:每天腹腔注射生理鹽水2次,連續(xù)21天,其中第10-14天，每天還需腹腔注射30mg/kg體重的MPTP,每天給藥I次。陽性藥組:每天灌胃給予120mg/kg體重的美多芭，連續(xù)21天，其中第10-14天，每天還需腹腔注射30mg/kg體重的MPTP，每天給藥I次。rLZ_8低、中、高劑量組:分別腹腔注射60 μ g/kg、100 μ g/kg、160 μ g/kg體重的rLZ_8,每天2次,連續(xù)21天,其中第10_14天，每天還需腹腔注射30mg/kg體重的MPTP,每天給藥I次。
[0035]4.2爬桿實驗
MPTP每次注射后2h及MPTP第5次注射1、3、7天后進行爬桿實驗測試。將一直徑為3 cm的泡沫小球固定于一根長50 cm、粗1.3 cm的金屬桿頂端,金屬桿上纏上醫(yī)用膠帶以防打滑，然后將被測小鼠頭向上放到球頂，開始計時，分別記錄小鼠掉頭至頭沖下向下爬的時間及小鼠爬完桿長的全長所需時間，若小鼠中途滑下或掉落，則記為最大爬下時間60s。
[0036]4.3懸掛實驗
MPTP每次注射后2h及MPTP第5次注射1、3、7天后進行懸掛實驗測試。將受試小鼠雙前肢懸掛于距地面36.5 cm水平放置的電線上，上方加蓋防止小鼠翻坐其上。如小鼠用兩后爪抓住電線則記3分，如用一后爪抓住電線則記2分，如果小鼠兩后爪均抓不住電線則記I分，小鼠跌落記為O分；并記錄小鼠的懸掛時間，將懸掛時間按下述標準評分:0~4s評O分，5~9s評I分，10~14s評2分，15~19s評3分，20~24s評4分，25~29s評5分，超過30s評6分。最后計算得分情況，每只小鼠測量3次，取平均值。
[0037]4.4轉棒實驗
MPTP每次注射后2h及MPTP第5次注射1、3、7天后進行轉棒實驗測試。將小鼠置于疲勞轉棒測試儀上，給予30s的適應時間，然后啟動測試儀，使小鼠在5rpm的轉棒上爬行90s。然后將轉棒儀轉速調為16rpm，開始記時，小鼠從轉棒跌落下來時可以被紅外裝置所監(jiān)測，自動停止記時并顯示小鼠在轉桿上運動的時間。小鼠跌落后及時將小鼠重新放置于棒上，限時3min，記錄小鼠第一次從棒上跌落的時間(潛伏期)及小鼠從棒上掉落的次數。然后將轉棒儀轉速調為20rmp,限時IOmin,記錄小鼠第一次從棒上跌落的時間及小鼠從棒上掉落的次數。每只小鼠測定3次，每次間隔30 min，取平均值并記錄。
[0038]5實驗結果
5.1各組小鼠爬桿實驗測定結果
MPTP第5次給藥7天后，小鼠掉頭時間延長，爬桿時動作遲緩，四肢爬桿頻率下降，個別小鼠出現單肢或一側肢體抓力減弱，后肢滑行現象。與正常對照組相比，模型組的掉頭時間和爬桿總時間顯著延長0幻，與模型組相比，rLZ-8高、中、低劑量組和美多芭組掉頭時間、爬桿總時間縮短，具有顯著性差異ip〈0.05)。結果見圖1-2。
[0039]5.2各組小鼠懸掛實驗測定結果
MPTP第5次給藥7天后，分別測定懸掛實驗的懸掛時間得分和懸掛情況得分，結果顯示:與正常對照組相比，模型組的懸掛時間得分和懸掛情況得分顯著降低(p<0.05~);與模型組相比，美多芭組和rLZ-8低、中、高劑量組的懸掛時間得分和懸掛情況得分顯著增高ip<0.05)，結果圖3、圖4。
[0040]5.3各組小鼠轉棒實驗測定結果
5.3.1各組小鼠轉棒實驗的潛伏期測定結果
MPTP第5次給藥7天后，轉棒儀轉速為16rpm時，與正常對照組相比，H)模型組的第一次掉落時間顯著降低(ρ〈0.05、;與模型組相比，rLZ-8高、中、低劑量組和美多芭組第一次掉落時間顯著增高(p<0.防)，結果見圖5。
[0041]MPTP第5次給藥8天后，轉棒儀轉速為20rpm時，與正常對照組相比，H)模型組的第一次掉落時間顯著降低(ρ〈0.05、;與模型組相比，rLZ-8高劑量組和美多芭組第一次掉落時間顯著增高(ρ〈0.05、;rLZ-8各劑量組之間相比，rLZ-8高劑量組第一次掉落時間顯著高于rLZ-8中、低劑量組(ρ<0.05)。結果見圖6。
[0042]實施例2 rLZ-8能改善MPTP所致的小鼠多巴胺能神經元損傷，
I實驗材料
rLZ-8 (由吉林大學鉆智基因工程藥物研究中心)，MPTP (批號:20111016)，美多芭(羅氏)，兔抗小鼠酪氨酸羥化酶(TH)抗體、兔抗小鼠膠質纖維酸性蛋白(GFAP)抗體、兔抗小鼠離子鈣接頭蛋白(Iba-1)抗體、SP免疫組化檢測試劑盒(上述抗體均來自北京博奧森生物技術有限公司)，DAB顯色試劑盒(北京中杉金橋生物技術有限公司)。
[0043]2儀器設備
BMJ-1型生物組織包埋機(天津航空機電公司)、RM2245型組織切片機(LEICA)、生物顯微鏡(重慶光電儀器有限公司)
3實驗動物 同實施例1 4實驗方法
4.1實驗分組及給藥
小鼠60只隨機分為6組，每組10只。正常對照組:每天腹腔注射生理鹽水2次，連續(xù)21天，其中第10-14天，每天還需腹腔注射生理鹽水I次。H)模型組:每天腹腔注射生理鹽水2次,連續(xù)21天,其中第10-14天，每天還需腹腔注射30mg/kg體重的MPTP,每天給藥I次。陽性藥組:每天灌胃給予120mg/kg體重的美多芭，連續(xù)21天，其中第10-14天，每天還需腹腔注射30mg/kg體重的MPTP，每天給藥I次。rLZ_8低、中、高劑量組:分別腹腔注射60 μ g/kg、100 μ g/kg、160 μ g/kg體重的rLZ_8,每天2次,連續(xù)21天,其中第10_14天，每天還需腹腔注射30mg/kg體重的MPTP,每天給藥I次。
[0044]4.2免疫組化法檢測酪氨酸氫化酶(TH)陽性細胞
MPTP末次給藥7天后，每組取10只小鼠經心臟灌注固定后，取腦，常規(guī)制備4 μ m厚黑質致密部(SNpc)和紋狀體區(qū)(ST)連續(xù)冠狀切片。并行免疫組化染色，即切片常規(guī)脫蠟水化后，在0.01M枸櫞酸鈉緩沖液中進行抗原修復，加3% H2O2去離子水孵育20min以封閉內源性過氧化物酶活性，然后于封閉液中孵育20min。分別加入兔抗小鼠TH抗體(PBS 1:100稀釋)、兔抗小鼠GFAP抗體(PBS 1:100稀釋)、兔抗小鼠Iba-1抗體(PBS 1:100稀釋)，4° C下孵育過夜。然后與生物素標記的二抗室溫孵育15min，滴加SABC復合物，室溫孵育15min。最后，使用DAB試劑盒顯色，蘇木素復染，常規(guī)梯度酒精脫水，二甲苯透明，中性樹膠封片。[0045]5實驗結果
5.1 TH免疫組化染色結果
酪氨酸輕化酶(Tyrosine hydroxylase, TH),是存在于DA能神經元內特異的標記,是合成DA的限速酶，主要表達于神經元胞體。小鼠腦黑質致密部TH免疫組化染色顯示，與正常對照組相比，MPTP模型組的TH陽性細胞數量明顯較少，殘存神經元多萎縮，rLZ-8組黑質致密部的TH陽性細胞形態(tài)基本正常，結構完整，數目明顯多于MPTP組，結果見圖7。
[0046]實施例3 rLZ-8能抑制MPTP所致的小鼠腦內氧化應激增強以及對主要臟器指數的影響 I實驗材料
rLZ-8 (由吉林大學鉆智基因工程藥物研究中心)，MPTP (批號:20111016)，美多芭(羅氏)，總蛋白定量測試盒，超氧化物歧化酶(SOD)測試盒，丙二醛(MDA)測試盒，谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-PX)測試盒，一氧化氮測試盒(硝酸還原酶法)，乙酰膽堿酯酶測試盒，超微量ATP酶測試盒(上述試劑盒均購于南京建成生物工程研究所)。
[0047]2儀器設備
低溫離心機(5810R)、數顯恒溫循環(huán)水箱(國華HH-42型)、752型紫外光柵分光光度計(山東高密分析儀器廠)。
[0048]3實驗動物 同實施例1
4實驗方法
4.1實驗分組及給藥
小鼠60只隨機分為6組，每組10只。正常對照組:每天腹腔注射生理鹽水2次，連續(xù)21天，其中第10-14天，每天還需腹腔注射生理鹽水I次。H)模型組:每天腹腔注射生理鹽水2次,連續(xù)21天,其中第10-14天，每天還需腹腔注射30mg/kg體重的MPTP,每天給藥I次。陽性藥組:每天灌胃給予120mg/kg體重的美多芭，連續(xù)21天，其中第10-14天，每天還需腹腔注射30mg/kg體重的MPTP，每天給藥I次。rLZ_8低、中、高劑量組:分別腹腔注射60 μ g/kg、100 μ g/kg、160 μ g/kg體重的rLZ_8,每天2次,連續(xù)21天,其中第10_14天，每天還需腹腔注射30mg/kg體重的MPTP,每天給藥I次。
[0049]4.2小鼠腦組織SOD含量檢測
MPTP末次給藥7天后，每組取10只小鼠，脫頸處死，冰上取出腦組織，經視交叉處冠狀切開，向后取約3 mm厚腦組織，左右切開，取左側組織按w/v( 1:9)加入9倍的生理鹽水，玻璃勻漿器勻漿，3000rpm 4°C離心15分鐘，分離上清液。按試劑盒說明書上的方法檢測SOD含量，采用黃嘌呤氧化酶法，分光光度計550nm處測量各管吸光度值。
[0050]4.3小鼠腦組織 MDA含量檢測
取按步驟4.2制得的組織勻漿上清液，按試劑盒說明書上的方法檢測MDA含量，采用硫代巴比妥酸法，分光光度計532nm處測量各管吸光度值。
[0051 ] 4.4小鼠腦組織GSH-Px含量檢測
取按步驟4.2制得的組織勻漿上清液，按試劑盒說明書上的方法檢測GSH-Px含量，采用二硫代二硝基苯甲酸法，分光光度計412nm處測量各管吸光度值。
[0052]4.5小鼠體重測定每天稱量并記錄小鼠的體重。
[0053]4.6小鼠各臟器指數測定
取小鼠心、肝、脾、肺、腎，稱重，按公式計算臟器指數。臟器指數(mg/10g)=臟器重量/體重X 100。
[0054]5實驗結果
5.1各組小鼠SOD含量測定結果
MPTP第5次給藥7天后，與正常對照組相比，ro模型組SOD含量顯著降低(ρ<0.001)；與ro模型組相比，rLZ-8高、中、低劑量組和美多芭組SOD含量顯著增高ip〈0.001);與美多芭組相比，rLZ-8高、中、低劑量組無顯著性差異，結果見圖8。
[0055]5.2各組小鼠MDA含量測定結果
MPTP第5次給藥7天后，與正常對照組相比，ro模型組MDA含量顯著增高(p<0.001)；與ro模型組相比，rLZ-8高、中劑量組和美多芭組MDA含量顯著降低(ρ<0.05)，但rLZ_8中劑量和美多芭組仍顯著高于正常對照組(ρ<0.05) ;rLZ-8低劑量組與H)模型組相比也有所降低，但無統計學差異。結果見圖9。
[0056]5.3各組小鼠GSH-PX含量測定結果
MPTP第5次給藥7天后，與正常對照組相比，ro模型組GSH-PX含量顯著降低ip<0.001);與ro模型組相比，rLZ-8中、低劑量組GSH-PX含量顯著增高(ρ<0.001)，但rLZ-8低劑量組GSH-PX含量仍顯著低于正常對照組ip<0.001) ；rLZ-8各劑量組之間相t匕，rLZ-8中、低劑量組GSH-PX含量顯著高于rLZ_8高劑量組(ρ<0.001)，rLZ-8中劑量組GSH-PX含量顯著高于rLZ-8低劑量組(ρ〈0.001)。結果見圖10。
[0057]5.4各組小鼠實驗期間的體重變化結果
實驗過程中，小鼠體重呈緩慢增長趨勢。rLZ-8組和H)模型組給予MPTP后體重有所下降，隨后恢復正常增長。結果見圖11。
[0058]5.5各組小鼠的主要臟器系數變化結果
心臟指數=MPTP第5次給藥7天后，rLZ-8高劑量組心臟指數顯著降低，與正常對照組、rLZ-8低劑量組和H)模型相比具有顯著性差異iP〈0.，其余各組之間無顯著性差異。
[0059]肝臟指數:各實驗組之間無顯著性差異。
[0060]脾臟指數:MPTP第5次給藥7天后，陽性藥組和H)模型脾臟指數升高，與正常對照組相比具有顯著性差異(Ρ<0.0幻，其余各組之間無顯著性差異。
[0061]肺臟指數:MPTP第5次給藥7天后，陽性藥組肺指數升高，與正常對照組相比具有顯著性差異其余各組之間無顯著性差異。
[0062]腎臟指數:MPTP第5次給藥7天后，陽性藥組腎臟指數升高，與正常對照組和H)模型相比具有顯著性差異其余各組之間無顯著性差異。結果見圖12。
【權利要求】
1.重組靈芝免疫調節(jié)蛋白在制備治療帕金森病藥物中的應用。
2.如權利要求1所述的藥物，其特征在于該藥物是由重組靈芝免疫調節(jié)蛋白rLZ-8和任選的藥學可接受的輔劑組成，其特征在于將其制備成注射液、凍干粉針劑、片劑、膠囊劑、丸劑、水劑、口服液、散劑、糊劑、顆粒劑、貼片或膏劑。
3.如權利要求1所述的應用，其特征在于所述的藥物可以通過口服和非腸道給藥，口服藥包括口服液、 片劑、丸劑和膠囊；非腸道包括外用藥和注射劑。
【文檔編號】A61P25/16GK103536901SQ201310513961
【公開日】2014年1月29日 申請日期:2013年10月25日 優(yōu)先權日:2013年10月25日
【發(fā)明者】孫非, 梁重陽, 張喜田 申請人:張喜田, 孫非