一種多藥自聚復(fù)合納米粒子、其制備方法和應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種多藥自聚復(fù)合納米粒子、其制備方法和應(yīng)用，所述多藥自聚復(fù)合納米粒子由至少一種疏水性藥物分子和至少一種水溶性藥物分子復(fù)合而成；其是通過將所述疏水性藥物分子溶解于良溶劑中得到疏水性藥物分子溶液，然后先后或同時(shí)將所述疏水性藥物分子溶液和水溶性藥物分子溶液加入所述疏水性藥物分子的不良溶劑中，并經(jīng)加熱磁力攪拌和超聲處理得到的。所述多藥自聚復(fù)合納米粒子不含載體、具有高載藥量，不存在載體帶來的潛在毒副作用；其制備方法操作簡單，能廣泛應(yīng)用，所得納米藥物尺寸均一，具有協(xié)同治療作用。
【專利說明】一種多藥自聚復(fù)合納米粒子、其制備方法和應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及藥物納米粒子【技術(shù)領(lǐng)域】，尤其涉及一種多藥自聚復(fù)合納米粒子、其制備方法和應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002]癌癥已成為威脅人類健康的重大威脅之一，有效的治療癌癥已經(jīng)是科學(xué)研究中的當(dāng)務(wù)之急。化學(xué)療法是用可以殺死癌細(xì)胞的藥物治療癌癥，也是目前最常見的癌癥治療方法。臨床常用的化療藥物的腫瘤細(xì)胞殺傷機(jī)制并不相同，通常為了提高療效，降低耐藥性，醫(yī)生的治療方案中會(huì)選擇不同的化療藥物聯(lián)合使用，兩種或以上的藥物會(huì)產(chǎn)生協(xié)同作用，可以獲得更好的治療效果。因此多種藥物聯(lián)合治療，是治療癌癥最為有效的方法。
[0003]由于目前用于癌癥治療的大多數(shù)化療藥物顯示出低的水溶性、有限的穩(wěn)定性、快速地血液清除和缺乏選擇性，藥物進(jìn)入機(jī)體后不僅分布于腫瘤組織也分布在正常組織，在殺傷腫瘤細(xì)胞的同時(shí)也殺傷了正常細(xì)胞，從而導(dǎo)致療效低、毒副作用強(qiáng)。因此，增強(qiáng)化療藥物的抗腫瘤效果并減少其毒副作用已成為臨床目前亟待解決的問題，開發(fā)更好的藥物傳輸系統(tǒng)對(duì)于腫瘤的治療已經(jīng)迫在眉睫。
[0004]近年來，納米技術(shù)的出現(xiàn)，為癌癥的治療找到了新的途徑。隨著納米技術(shù)的不斷發(fā)展，各種新型的納米級(jí)的藥物載體層出不窮，制備工藝逐步完善，劑型逐步改善，大量的研究證明利用納米載體包載藥物或者連接藥物，不僅大大的增加了藥物的水溶性和穩(wěn)定性，延長藥物在血液循環(huán)中的時(shí)間，增加藥物的生物利用度，還能夠提高藥物治療指數(shù)、降低毒性、減小副作用。
[0005]盡管藥物載體具有很多優(yōu)勢，然而，藥物納米載體僅僅作為藥物傳輸工具，并不具有腫瘤殺傷作用，載體材料所存在的潛在毒副作用很難被研究清楚，所以其臨床應(yīng)用受到很大限制。而且由于納米載體的`引入，極大地降低了載藥量，增加了額外的代謝負(fù)擔(dān)，增加了藥物制劑的成本，帶來了更多的尚未明了的潛在安全性問題。
[0006]隨著癌癥診療業(yè)的不斷發(fā)展，本領(lǐng)域需要在不使用藥物載體的情況下，制備高載藥量、納米尺寸的具有協(xié)同治療作用的多藥組合納米粒子。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007]本發(fā)明的目的在于提供一種不含載體、具有高載藥量的多藥自聚復(fù)合納米粒子及其制備方法和應(yīng)用，該多藥自聚復(fù)合納米粒子不存在載體帶來的潛在毒副作用，該方法操作簡單，能廣泛應(yīng)用，其原料均為SFDA批準(zhǔn)，所得納米藥物尺寸均一，具有協(xié)同治療作用。
[0008]為實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的目的，本發(fā)明的提供以下技術(shù)方案:
[0009]在第一方面，本發(fā)明提供一種多藥自聚復(fù)合納米粒子，由至少一種疏水性藥物分子和至少一種水溶性藥物分子復(fù)合而成；其是通過將所述疏水性藥物分子溶解于良溶劑中得到疏水性藥物分子溶液，然后先后或同時(shí)將所述疏水性藥物分子溶液和水溶性藥物分子溶液加入所述疏水性藥物分子的不良溶劑中，并經(jīng)加熱磁力攪拌和超聲處理得到的。[0010]優(yōu)選地，所述多藥自聚復(fù)合納米粒子呈球形或近似球形，其平均粒徑為100_500nm,例如 llOnm、120nm、130nm、140nm、150nm、180nm、190nm、210nm、220nm、230nm、250nm、280nm、320nm、350nm、380nm、400nm、420nm、450nm 或 480nm,優(yōu)選 150-400nm,更優(yōu)選200_300nm。
[0011]所謂“近似球形”是指所述疏水性藥物納米顆粒的形狀接近球形，比如呈橢球形、部分隆起或凹陷的球形、部分隆起或凹陷的橢球形等?？傊?，任何并非完全規(guī)則但整體上大體呈球形的形狀都是本發(fā)明所說的“近似球形”。
[0012]本發(fā)明中，疏水性藥物分子不受限制，可以是任何對(duì)特定疾病(比如腫瘤、糖尿病或心血管疾病等)具有預(yù)防、治療或改善作用的疏水性藥物分子，而且這種疏水性藥物分子在臨床治療上有被制備成納米粒子的需要。
[0013]優(yōu)選地，所述疏水性藥物分子為疏水性抗癌藥物分子，用于癌癥治療。
[0014]更優(yōu)選地，所述疏水性抗癌藥物分子為紫杉醇、多西紫杉醇、喜樹堿、10-羥基喜樹堿、秋水仙堿、長春新堿、甲氨蝶呤、他莫西芬、替尼泊苷、順鉬和6-巰基嘌呤中的一種或多種。所謂“多種”是指兩種以上，其典型但非限定性的例子有:紫杉醇和多西紫杉醇，紫杉醇和喜樹堿，紫杉醇和10-羥基喜樹堿，紫杉醇和秋水仙堿，紫杉醇和長春新堿，紫杉醇和甲氨蝶呤，紫杉醇和他莫西芬，紫杉醇和替尼泊苷，多西紫杉醇和喜樹堿，多西紫杉醇和10-羥基喜樹堿，多西紫杉醇和秋水仙堿，多西紫杉醇和長春新堿，多西紫杉醇和甲氨蝶呤，多西紫杉醇和他莫西芬，10-羥基喜樹堿和秋水仙堿，10-羥基喜樹堿和長春新堿，10-羥基喜樹堿和甲氨蝶呤，10-羥基喜樹堿和他莫西芬，10-羥基喜樹堿和替尼泊苷，10-羥基喜樹堿和順鉬，10-羥基喜樹堿和6-巰基嘌呤，秋水仙堿和長春新堿，長春新堿和甲氨蝶呤，甲氨蝶呤和他莫西芬，他莫西芬和替尼泊苷，替尼泊苷和順鉬，順鉬和6-巰基嘌呤，紫杉醇、多西紫杉醇和喜樹堿，多西紫杉醇、喜樹堿和10-羥基喜樹堿，喜樹堿、10-羥基喜樹堿和秋水仙堿，10-羥基喜樹堿、秋水 仙堿和長春新堿，秋水仙堿、長春新堿和甲氨蝶呤，長春新堿、甲氨蝶呤和他莫西芬，甲氨蝶呤、他莫西芬和替尼泊苷，他莫西芬、替尼泊苷和順鉬，替尼泊苷、順鉬和6-巰基嘌呤，以及紫杉醇、多西紫杉醇、喜樹堿和10-羥基喜樹堿，等等。
[0015]本發(fā)明中，水溶性藥物分子不受限制，可以是任何對(duì)特定疾病(比如腫瘤、糖尿病或心血管疾病等)具有預(yù)防、治療或改善作用的水溶性藥物分子，而且這種水溶性藥物分子在臨床治療上有被制備成納米粒子的需要。
[0016]優(yōu)選地，所述水溶性藥物分子為水溶性抗癌藥物分子，用于癌癥治療。
[0017]優(yōu)選地，所述水溶性抗癌藥物分子為鹽酸阿霉素、鹽酸柔紅霉素、鹽酸表阿霉素、鹽酸阿柔比星、鹽酸佐柔比星、鹽酸米托蒽醌和5-氟尿嘧啶中的一種或多種。所謂“多種”是指兩種以上，其典型但非限定性的例子有:鹽酸阿霉素和鹽酸米托蒽醌，鹽酸阿霉素和5-氟尿嘧啶，鹽酸阿霉素和鹽酸表阿霉素，鹽酸米托蒽醌和5-氟尿嘧啶，鹽酸阿霉素和鹽酸柔紅霉素，鹽酸阿霉素和鹽酸阿柔比星，鹽酸阿霉素和鹽酸佐柔比星，鹽酸阿霉素、鹽酸米托蒽醌和5-氟尿嘧啶，鹽酸阿霉素、鹽酸柔紅霉素和5-氟尿嘧啶，等等。
[0018]本發(fā)明中，所述疏水性抗癌藥物分子與所述水溶性抗癌藥物分子的比例不受限制，只要按照一定比例能夠形成多藥自聚復(fù)合納米粒子即可。
[0019]優(yōu)選地，所述疏水性抗癌藥物分子與所述水溶性抗癌藥物分子的摩爾比為1:(1-10)，例如 1:1、1:2、1:3、1:4、1:5、1:6、1:7、1:8、1:9 或 1:10。[0020]所謂“良溶劑”即對(duì)溶質(zhì)(疏水性藥物分子)具有較強(qiáng)溶解能力的溶劑，比如根據(jù)Flory-Krigboum稀溶液理論，良溶劑是指與溶質(zhì)相互作用參數(shù)小于0.5的溶劑。
[0021 ] 本發(fā)明中，所述良溶劑優(yōu)選為有機(jī)溶劑。
[0022]優(yōu)選地，所述有機(jī)溶劑為乙醇、甲醇、氯仿、丙醇、異丙醇、N，N-二甲基甲酰胺、二甲基亞砜、二氯甲烷、丙酮和四氫呋喃中的一種或多種的混合。所謂“多種的混合”是指兩種以上的混合，其典型但非限定性的例子有:乙醇和甲醇的混合，乙醇和丙醇的混合，乙醇和異丙醇的混合，氯仿和N，N- 二甲基甲酰胺的混合，N, N- 二甲基甲酰胺和二甲基亞砜的混合，二甲基亞砜和二氯甲烷的混合，二氯甲烷和丙酮的混合，丙酮和四氫呋喃的混合，乙醇、甲醇和丙醇的混合，甲醇、丙醇和異丙醇的混合，N，N-二甲基甲酰胺、二甲基亞砜、二氯甲烷和丙酮的混合，等等。
[0023]所謂“不良溶劑”即對(duì)溶質(zhì)(疏水性藥物分子)具有較弱或不具有溶解能力的溶劑，比如根據(jù)Flory-Krigboum稀溶液理論,不良溶劑是指與溶質(zhì)相互作用參數(shù)大于0.5的溶劑。
[0024]優(yōu)選地，所述不良溶劑為磷酸鹽緩沖液、水、生理鹽水和葡萄糖溶液中的一種或多種的混合。所謂“多種的混合”是指兩種以上的混合，其典型但非限定性的例子有:磷酸鹽緩沖液和生理鹽水的混合，磷酸鹽緩沖液和葡萄糖溶液的混合，生理鹽水和葡萄糖溶液的混合，磷酸鹽緩沖液、生理鹽水和葡萄糖溶液的混合，等等。
[0025]本發(fā)明中，所述良溶劑與所述不良溶劑互溶，所述良溶劑與所述不良溶劑的體積比優(yōu)選為 1:(5-30)，例如 1:6、1:8、1:12,1:15、1:18、1:21、1:25、1:28 或 1:29，優(yōu)選 I:(10-25)。
[0026]在第二方面，本發(fā)明提供一種如第一方面所述的多藥自聚復(fù)合納米粒子的制備方法，所述方法包括:
[0027]( I)將疏水性藥物分子溶解于良溶劑中得到疏水性藥物分子溶液；
[0028](2)然后，Ca)將所述疏水性藥物分子溶液加入所述疏水性藥物分子的不良溶劑中，加熱磁力攪拌并靜置，獲得納米纖維懸浮液，再將水溶性藥物分子溶液加入所述納米纖維懸浮液中；或(b)同時(shí)將所述疏水性藥物分子溶液和水溶性藥物分子溶液加入所述疏水性藥物分子的不良溶劑中；
[0029](3)加熱磁力攪拌并超聲處理后靜置，即得所述多藥自聚復(fù)合納米粒子。
[0030]優(yōu)選地，所述步驟(1)中的疏水性藥物分子為疏水性抗癌藥物分子。
[0031]優(yōu)選地，所述疏水性抗癌藥物分子為紫杉醇、多西紫杉醇、喜樹堿、10-羥基喜樹堿、秋水仙堿、長春新堿、甲氨蝶呤、他莫西芬、替尼泊苷、順鉬和6-巰基嘌呤中的一種或多種。其中“多種”的含義及實(shí)例如上所述，不再贅述。
[0032]優(yōu)選地，所述步驟(1)中的良溶劑為有機(jī)溶劑。
[0033]優(yōu)選地，所述有機(jī)溶劑為乙醇、甲醇、氯仿、丙醇、異丙醇、N，N-二甲基甲酰胺、二甲基亞砜、二氯甲烷、丙酮和四氫呋喃中的一種或多種的混合。其中“多種的混合”的含義及實(shí)例如上所述，不再贅述。
[0034]優(yōu)選地，所述步驟(2)中的不良溶劑為磷酸鹽緩沖液、水、生理鹽水和葡萄糖溶液中的一種或多種的混合。其中“多種的混合”的含義及實(shí)例如上所述，不再贅述。
[0035]優(yōu)選地，所述良溶劑與所述不良溶劑互溶，所述良溶劑與所述不良溶劑的體積比為 1:(5-30),例如 1:6、1:8、1:12,1:15、1:18、1:21、1:25、1:28 或 1:29，優(yōu)選 1:(10-25)。
[0036]優(yōu)選地，所述步驟(2)中的水溶性藥物分子為水溶性抗癌藥物分子。
[0037]優(yōu)選地，所述水溶性抗癌藥物分子為鹽酸阿霉素、鹽酸柔紅霉素、鹽酸表阿霉素、鹽酸阿柔比星、鹽酸佐柔比星、鹽酸米托蒽醌和5-氟尿嘧啶中的一種或多種。其中“多種”的含義及實(shí)例如上所述，不再贅述。
[0038]優(yōu)選地，所述步驟(2)中的疏水性抗癌藥物分子與所述水溶性抗癌藥物分子的摩爾比為 1:(1-10),例如 1:1、1:2、1:3、1:4、1:5、1:6、1:7、1:8、1:9 或 1:10。
[0039]優(yōu)選地，所述步驟(2)中的加熱溫度為40_90°C，例如45 °C、48°C、52 °C、54°C、58°C、6(TC、65t:、68t:、72t:、75t:、78t:、8(rC、8rC、84t:、87t:或 89°C。
[0040]優(yōu)選地,所述步驟(2)中的磁力攪拌時(shí)間為5min以上，例如6min、8min、lOmin、12min、15min、17min、19min、22min、25min、27min、30min、40min 或 60min,優(yōu)選 5_30mino
[0041]優(yōu)選地，所述步驟(3)中的加熱溫度為40_90°C，例如45°C、48°C、52°C、54°C、58°C、6(TC、65t:、68t:、72t:、75t:、78t:、8(rC、8rC、84t:、87t:或 89°C。
[0042]優(yōu)選地，所述步驟(3)中的磁力攪拌時(shí)間為0.5_2h，例如0.6h、0.7h、0.8h、0.9h、lh、l.2h、l.5h、l.7h、l.8h 或 1.9h。
[0043]優(yōu)選地,所述步驟(3)中的磁力攪拌速度為500-1200rpm,例如550rpm、600rpm、650rpm、700rpm、800rpm、900rpm、lOOOrpm、1050rpm>IlOOrpm 或 1150rpm。
[0044]優(yōu)選地,所述步驟(3)中的超聲處理時(shí)間為15_35min,例如16min、18min、20min、25min、27min、29min、31min 或 33min。
[0045]優(yōu)選地，所述步驟(3 )之后進(jìn)行:
[0046](4)通過超濾離心去除游離的藥物分子，然后用去離子水重新溶解濾膜上的多藥自聚復(fù)合納米粒子。離心速度可以是5000_10000g,例如7500g ;離心時(shí)間可以是10_30min,例如20min。
[0047]優(yōu)選地，所述多藥自聚復(fù)合納米粒子呈球形或近似球形，其平均粒徑為100-500nm，優(yōu)選 150_400nm，更優(yōu)選 200_300nm。
[0048]在本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選技術(shù)方案中，所述方法包括:
[0049]( 1 ’)將疏水性抗癌藥物分子溶解于良溶劑中得到疏水性抗癌藥物分子溶液；
[0050](2’ )然后，將所述疏水性抗癌藥物分子溶液加入所述疏水性抗癌藥物分子的不良溶劑中，其中所述良溶劑與所述不良溶劑的體積比為1:(5-30);在溫度40-90°C下，磁力攪拌5min以上之后靜置，獲得納米纖維懸浮液；再將水溶性抗癌藥物分子溶液加入所述納米纖維懸浮液中，其中所述疏水性抗癌藥物分子與所述水溶性抗癌藥物分子的摩爾比為1:(1-10)；
[0051](3’)在溫度40-90°C下，磁力攪拌0.5_2h并超聲處理15_35min后靜置，即得所述多藥自聚復(fù)合納米粒子；
[0052](4’ )通過超濾離心去除游離的藥物分子，然后用去離子水重新溶解濾膜上的多藥自聚復(fù)合納米粒子。
[0053]在本發(fā)明的另一個(gè)優(yōu)選技術(shù)方案中，所述方法包括:
[0054](1’ ’)將疏水性抗癌藥物分子溶解于良溶劑中得到疏水性抗癌藥物分子溶液；[0055](2’ ’)同時(shí)將所述疏水性抗癌藥物分子溶液和水溶性抗癌藥物分子溶液加入所述疏水性抗癌藥物分子的不良溶劑中，其中所述良溶劑與所述不良溶劑的體積比為1:(5-30)，所述疏水性抗癌藥物分子與所述水溶性抗癌藥物分子的摩爾比為1:(1-10)；
[0056](3，’ )在溫度40-90°C下，磁力攪拌0.5_2h并超聲處理15_35min后靜置，即得所述多藥自聚復(fù)合納米粒子；
[0057](4’’)通過超濾離心去除游離的藥物分子，然后用去離子水重新溶解濾膜上的多藥自聚復(fù)合納米粒子。
[0058]在第三方面，本發(fā)明提供如第一方面所述的多藥自聚復(fù)合納米粒子在制備用于治療腫瘤的藥物中的應(yīng)用。
[0059]本發(fā)明的多藥自聚復(fù)合納米粒子不含載體，因此提高了其載藥量，載藥量達(dá)到100%，并且不存在載體帶來的潛在毒副作用，成本較低；其包括多種具有不同作用機(jī)制的疏水性藥物分子和水溶性藥物分子，因此具有較好的協(xié)同治療作用，對(duì)多藥耐藥性細(xì)胞有明顯增強(qiáng)的殺傷能力；其穩(wěn)定性和生物利用度高。
[0060]此外，通過對(duì)反應(yīng)條件和方法的控制，得到的多藥自聚復(fù)合納米粒子在體內(nèi)具有EPR效應(yīng)(Enhanced Permeability and Retention),有益于提高藥物療效；10-羥基喜樹堿和鹽酸阿霉素在紫外光激發(fā)下均有熒光發(fā)射現(xiàn)象，通過其自身熒光性質(zhì)，易于實(shí)現(xiàn)其胞內(nèi)成像；本發(fā)明所用的原料均為SFDA批準(zhǔn)可用；制備方法反應(yīng)過程溫和、無雜質(zhì)且樣品純度高；制備方法具有普適性，對(duì)一系列抗癌藥物均適用；制備方法簡單易行、可重復(fù)性好，因此極具應(yīng)用價(jià)值。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0061]圖1為本發(fā)明實(shí)施例1制備得到的10-羥基喜樹堿/阿霉素雙藥自聚復(fù)合納米粒子的掃描電鏡(SEM)圖。`
[0062]圖2為本發(fā)明實(shí)施例1制備得到的10-羥基喜樹堿/阿霉素雙藥自聚復(fù)合納米粒子的粒徑分布圖。
[0063]圖3為本發(fā)明實(shí)施例1制備得到的10-羥基喜樹堿/阿霉素雙藥自聚復(fù)合納米粒子與對(duì)照組(單純阿霉素組、單純10-羥基喜樹堿組、阿霉素和10-羥基喜樹堿共混組)的細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)結(jié)果，其中圖3a為以阿霉素濃度為參照的細(xì)胞存活率/藥物濃度曲線，圖3b為以10-羥基喜樹堿為參照的細(xì)胞存活率/藥物濃度曲線。
【具體實(shí)施方式】
[0064]下面將結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明的實(shí)施方案進(jìn)行詳細(xì)描述。本領(lǐng)域技術(shù)人員將會(huì)理解，以下實(shí)施例僅為本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施例，以便于更好地理解本發(fā)明，因而不應(yīng)視為限定本發(fā)明的范圍。對(duì)于本領(lǐng)域的技術(shù)人員來說，本發(fā)明可以有各種更改和變化，凡在本發(fā)明的精神和原則之內(nèi)，所作的任何修改、等同替換或改進(jìn)等，均應(yīng)包含在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。下述實(shí)施例中的實(shí)驗(yàn)方法，如無特殊說明，均為常規(guī)方法；所用的實(shí)驗(yàn)材料，如無特殊說明，均為自常規(guī)生化試劑廠商購買得到的。
[0065]實(shí)施例1
[0066]首先，本實(shí)施例描述多藥自聚復(fù)合納米粒子的制備方法，方法如下:[0067]1)將疏水性抗癌藥物分子制備成前驅(qū)納米纖維懸浮液:將100 μ L0.5mmol/L的10-羥基喜樹堿的乙醇溶液滴加到lmL50°C水浴的去離子水中，磁力攪拌5min后靜置，獲得前驅(qū)納米纖維懸浮液。
[0068]2)將20 μ L5mmol/L的鹽酸阿霉素水溶液滴加到前驅(qū)納米纖維懸浮液中，鹽酸阿霉素與10-羥基喜樹堿的摩爾比為2:1,50°C水浴攪拌Ih后,超聲分散30min。
[0069]3)還優(yōu)選去除游離藥物，其方法是通過7500g超濾離心20min，然后用去離子水重新溶解濾膜上的藥物納米粒子。
[0070]本實(shí)施例制備的多藥自聚復(fù)合納米粒子通過日立公司的Hitachi S4800掃描電鏡和突光光譜(美國Perkin Elmer Instruments公司的LS55突光分光光度計(jì))進(jìn)行藥物納米粒子的表征，并用細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)來驗(yàn)證本發(fā)明的有效性。本發(fā)明實(shí)施例1制備得到的10-羥基喜樹堿/阿霉素雙藥自聚復(fù)合納米粒子的掃描電鏡(SEM)圖如圖1所示；其粒徑分布如圖2所示，其平均粒徑為217nm。
[0071]其次，本實(shí)施例通過如下方法對(duì)10-羥基喜樹堿/阿霉素雙藥自聚復(fù)合納米粒子對(duì)腫瘤細(xì)胞的毒性作用進(jìn)行驗(yàn)證。
[0072]所得雙藥自聚復(fù)合納米粒子用噻唑藍(lán)法(MTT)測定了人乳腺癌細(xì)胞的細(xì)胞活力(參考《細(xì)胞培養(yǎng)》，司徒鎮(zhèn)強(qiáng)，世界圖書出版公司，1996年)。將雙藥自聚復(fù)合納米粒子溶于改良 Eagle 低糖細(xì)胞培養(yǎng)基(Dulbecco，s modification of Eagle’s medium, DMEM)配制成1-50 μ M不同的濃度，每孔100 μ L加入于接種96孔板后過夜的人乳腺癌細(xì)胞，培養(yǎng)24h，然后棄去培養(yǎng)基并每孔100 μ L加入含有0.5mg/mL噻唑藍(lán)的無血清DMEM培養(yǎng)基37°C處理4h，之后棄去培養(yǎng)基，每孔加入150 μ L 二甲基亞砜(DMSO)溶解生成的紫色甲瓚，最后與酶標(biāo)儀讀取570nm處的紫外吸收，對(duì)比對(duì)照組的吸光度，計(jì)算出每種處理對(duì)應(yīng)的細(xì)胞活力。按上述方法進(jìn)行對(duì)照組實(shí)驗(yàn)，對(duì)照組I為單純鹽酸阿霉素的DMEM不同濃度溶液，對(duì)照組2為單純10-羥基喜樹堿的DMEM不同濃度溶液，對(duì)照組3為10-羥基喜樹堿和阿霉素共混的DMEM不同濃度溶液。通過以上細(xì)胞活力測試及比較，如圖3所示，得到了確定的10-羥基喜樹堿/阿霉素雙藥自聚復(fù)合納米粒子協(xié)同殺傷效力強(qiáng)于單純的鹽酸阿霉素和單純的10-羥基喜樹堿以及雙藥物理共混組聯(lián)合給藥。
[0073]實(shí)施例2
[0074]本實(shí)施例描述多藥自聚復(fù)合納米粒子的制備方法與實(shí)施例1不同，但也能實(shí)現(xiàn)10-羥基喜樹堿/阿霉素雙藥自聚復(fù)合納米粒子的制備，方法如下:
[0075]將20 μ L5mmol/L鹽酸阿霉素水溶液和100 μ L0.5mmol/L10-羥基喜樹堿的乙醇溶液(鹽酸阿霉素與10-羥基喜樹堿的摩爾比為2:1)同時(shí)滴加到lmL50°C水浴的去離子水中，磁力攪拌Ih后，超聲分散30min。
[0076]還優(yōu)選去除游離藥物，其方法是通過7500g超濾離心20min，然后用去離子水重新溶解濾膜上的藥物納米粒子。
[0077]本實(shí)施例制備的多藥自聚復(fù)合納米粒子通過掃描電鏡、熒光光譜、共聚焦顯微鏡等進(jìn)行藥物納米粒子的表征，并用細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)來驗(yàn)證本發(fā)明的有效性。其結(jié)果與實(shí)施例1相似，雙藥自聚復(fù)合納米粒子協(xié)同殺傷效力強(qiáng)于單純的鹽酸阿霉素和單純的10-羥基喜樹堿以及雙藥物理共混組聯(lián)合給藥。
[0078]實(shí)施例3[0079]本實(shí)施例描述多藥自聚復(fù)合納米粒子的制備方法與實(shí)施例1不完全相同，其中改變藥物溶劑和反應(yīng)條件也可實(shí)現(xiàn)?ο-羥基喜樹堿/阿霉素雙藥自聚復(fù)合納米粒子的制備，方法如下:
[0080]I)將疏水性抗癌藥物分子制備成前驅(qū)納米纖維懸浮液:將100 μ L0.5mmol/L的10-羥基喜樹堿的二甲基亞砜(DMSO)溶液滴加到lmL60°C水浴的去離子水中，磁力攪拌20min后靜置，獲得前驅(qū)納米纖維懸浮液。
[0081]2)將20 μ L10mmol/L的鹽酸阿霉素水溶液滴加到前驅(qū)納米纖維懸浮液中，阿霉素與10-羥基喜樹堿摩爾比為4:1，60°C水浴攪拌0.5h后，超聲分散20min。
[0082]3)還優(yōu)選去除游離藥物，其方法是通過7500g超濾離心20min，然后用去離子水重新溶解濾膜上的藥物納米粒子。
[0083]本實(shí)施例制備的多藥自聚復(fù)合納米粒子通過掃描電鏡、熒光光譜、共聚焦顯微鏡等進(jìn)行藥物納米粒子的表征，并用細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)來驗(yàn)證本發(fā)明的有效性。其結(jié)果與實(shí)施例1相似，雙藥自聚復(fù)合納米粒子協(xié)同殺傷效力強(qiáng)于單純的鹽酸阿霉素和單純的10-羥基喜樹堿以及雙藥物理共混組聯(lián)合給藥。
[0084]實(shí)施例4
[0085]本實(shí)施例描述多藥 自聚復(fù)合納米粒子的制備方法，方法如下:
[0086]I)將疏水性抗癌藥物分子制備成前驅(qū)納米纖維懸浮液:將50 μ Llmmol/L的紫杉醇的二甲基亞砜(DMSO)溶液滴加到lmL50°C水浴的去離子水中，磁力攪拌5min后靜置，獲得前驅(qū)納米纖維懸浮液。
[0087]2)將20 μ L10mmol/L鹽酸阿霉素水溶液滴加到前驅(qū)納米纖維懸浮液中，阿霉素與紫杉醇摩爾比為4:1，50°C水浴攪拌Ih后，超聲分散30min。
[0088]3)還優(yōu)選去除游離藥物，其方法是通過7500g超濾離心20min，然后用去離子水重新溶解濾膜上的藥物納米粒子。
[0089]本發(fā)明可以通過掃描電鏡、熒光光譜、共聚焦顯微鏡等進(jìn)行藥物納米粒子的表征，并用細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)來驗(yàn)證本發(fā)明的有效性。
[0090]本實(shí)施例制備的多藥自聚復(fù)合納米粒子通過掃描電鏡、熒光光譜、共聚焦顯微鏡等進(jìn)行藥物納米粒子的表征，并用細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)來驗(yàn)證本發(fā)明的有效性。其結(jié)果與實(shí)施例1相似，雙藥自聚復(fù)合納米粒子協(xié)同殺傷效力強(qiáng)于單純的鹽酸阿霉素和單純的紫杉醇以及雙藥物理共混組聯(lián)合給藥。
[0091]實(shí)施例5
[0092]本實(shí)施例描述多藥自聚復(fù)合納米粒子的制備方法，方法如下:
[0093]I)將疏水性抗癌藥物分子制備成前驅(qū)納米纖維懸浮液:將100 μ L0.2mmol/L的甲氨蝶呤的二甲基亞砜(DMSO)溶液滴加到lmL50°C水浴的去離子水中，磁力攪拌5min后靜置，獲得前驅(qū)納米纖維懸浮液。
[0094]2)將20 μ L10mmol/L的鹽酸阿霉素水溶液滴加到前驅(qū)納米纖維懸浮液中，阿霉素與甲氨蝶呤摩爾比為10:1，50°C水浴攪拌Ih后，超聲分散30min。
[0095]3)還優(yōu)選去除游離藥物，其方法是通過7500g超濾離心20min，然后用去離子水重新溶解濾膜上的藥物納米粒子。
[0096]本實(shí)施例制備的多藥自聚復(fù)合納米粒子通過掃描電鏡、熒光光譜、共聚焦顯微鏡等進(jìn)行藥物納米粒子的表征，并用細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)來驗(yàn)證本發(fā)明的有效性。其結(jié)果與實(shí)施例1相似，雙藥自聚復(fù)合納米粒子協(xié)同殺傷效力強(qiáng)于單純的鹽酸阿霉素和單純的甲氨蝶呤以及雙藥物理共混組聯(lián)合給藥。
[0097]實(shí)施例6
[0098]本實(shí)施例描述多藥自聚復(fù)合納米粒子的制備方法，方法如下:
[0099]I)將疏水性抗癌藥物分子制備成前驅(qū)納米纖維懸浮液:將100 μ Llmmol/L的10-羥基喜樹堿的乙醇溶液滴加到lmL50°C水浴的去離子水中，磁力攪拌5min后靜置，獲得前驅(qū)納米纖維懸浮液。
[0100]2)將100 μ Llmmol/L的5_氟尿嘧啶水溶液滴加到前驅(qū)納米纖維懸浮液中，5-氟尿嘧啶與10-羥基喜樹堿摩爾比為10:1，50°C水浴攪拌Ih后，超聲分散30min。
[0101]3)還優(yōu)選去除游離藥物，其方法是通過7500g超濾離心20min，然后用去離子水重新溶解濾膜上的藥物納米粒子。
[0102]本實(shí)施例制備的多藥自聚復(fù)合納米粒子通過掃描電鏡、熒光光譜、共聚焦顯微鏡等進(jìn)行藥物納米粒子的表征，并用細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)來驗(yàn)證本發(fā)明的有效性。其結(jié)果與實(shí)施例1相似，雙藥自聚復(fù)合納米粒子協(xié)同殺傷效力強(qiáng)于單純的5-氟尿嘧啶和單純的10-羥基喜樹堿以及雙藥物理共混組聯(lián)合給藥。
[0103] 申請人:聲明，本發(fā)明通過上述實(shí)施例來說明本發(fā)明的詳細(xì)特征以及詳細(xì)方法，但本發(fā)明并不局限于上述詳細(xì)特征以及詳細(xì)方法，即不意味著本發(fā)明必須依賴上述詳細(xì)特征以及詳細(xì)方法才能實(shí)施。所屬【技術(shù)領(lǐng)域】的技術(shù)人員應(yīng)該明了，對(duì)本發(fā)明的任何改進(jìn)，對(duì)本發(fā)明選用組分的等效替換及輔助成分的添加、具體方式的選擇等，均落在本發(fā)明的保護(hù)范圍和公開范圍之內(nèi)。`
【權(quán)利要求】
1.一種多藥自聚復(fù)合納米粒子,其特征在于,所述多藥自聚復(fù)合納米粒子由至少一種疏水性藥物分子和至少一種水溶性藥物分子復(fù)合而成；其是通過將所述疏水性藥物分子溶解于良溶劑中得到疏水性藥物分子溶液，然后先后或同時(shí)將所述疏水性藥物分子溶液和水溶性藥物分子溶液加入所述疏水性藥物分子的不良溶劑中，并經(jīng)加熱磁力攪拌和超聲處理得到的； 優(yōu)選地，所述多藥自聚復(fù)合納米粒子呈球形或近似球形，其平均粒徑為100-500nm，優(yōu)選 150-400nm，更優(yōu)選 200-300nm。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的多藥自聚復(fù)合納米粒子，其特征在于，所述疏水性藥物分子為疏水性抗癌藥物分子； 優(yōu)選地，所述疏水性抗癌藥物分子為紫杉醇、多西紫杉醇、喜樹堿、10-羥基喜樹堿、秋水仙堿、長春新堿、甲氨蝶呤、他莫西芬、替尼泊苷、順鉬和6-巰基嘌呤中的一種或多種； 優(yōu)選地，所述水溶性藥物分子為水溶性抗癌藥物分子； 優(yōu)選地，所述水溶性抗癌藥物分子為鹽酸阿霉素、鹽酸柔紅霉素、鹽酸表阿霉素、鹽酸阿柔比星、鹽酸佐柔比星、鹽酸米托蒽醌和5-氟尿嘧啶中的一種或多種； 優(yōu)選地，所述疏水性抗癌藥物分子與所述水溶性抗癌藥物分子的摩爾比為1: (1-10)。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的多藥自聚復(fù)合納米粒子，其特征在于，所述良溶劑為有機(jī)溶劑； 優(yōu)選地，所述有機(jī)溶劑為乙醇、甲醇、氯仿、丙醇、異丙醇、N，N-二甲基甲酰胺、二甲基亞砜、二氯甲烷、丙酮和四氫呋喃中的一種或多種的混合； 優(yōu)選地，所述不良溶劑為磷酸鹽緩沖液、水、生理鹽水和葡萄糖溶液中的一種或多種的混合； 優(yōu)選地，所述良溶劑與所述不良溶劑互溶，所述良溶劑與所述不良溶劑的體積比為1:(5-30)、優(yōu)選 1:(10-25)。
4.一種如權(quán)利要求1-3任一項(xiàng)所述的多藥自聚復(fù)合納米粒子的制備方法，其特征在于，所述方法包括: (1)將疏水性藥物分子溶解于良溶劑中得到疏水性藥物分子溶液； (2)然后，Ca)將所述疏水性藥物分子溶液加入所述疏水性藥物分子的不良溶劑中，加熱磁力攪拌并靜置，獲得納米纖維懸浮液，再將水溶性藥物分子溶液加入所述納米纖維懸浮液中；或6)同時(shí)將所述疏水性藥物分子溶液和水溶性藥物分子溶液加入所述疏水性藥物分子的不良溶劑中； (3)加熱磁力攪拌并超聲處理后靜置，即得所述多藥自聚復(fù)合納米粒子。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于，所述步驟(1)中的疏水性藥物分子為疏水性抗癌藥物分子； 優(yōu)選地，所述疏水性抗癌藥物分子為紫杉醇、多西紫杉醇、喜樹堿、10-羥基喜樹堿、秋水仙堿、長春新堿、甲氨蝶呤、他莫西芬、替尼泊苷、順鉬和6-巰基嘌呤中的一種或多種； 優(yōu)選地，所述步驟(1)中的良溶劑為有機(jī)溶劑； 優(yōu)選地，所述有機(jī)溶劑為乙醇、甲醇、氯仿、丙醇、異丙醇、N，N-二甲基甲酰胺、二甲基亞砜、二氯甲烷、丙酮和四氫呋喃中的一 種或多種的混合。
6.根據(jù)權(quán)利要求4或5所述的方法，其特征在于，所述步驟(2)中的不良溶劑為磷酸鹽緩沖液、水、生理鹽水和葡萄糖溶液中的一種或多種的混合； 優(yōu)選地，所述良溶劑與所述不良溶劑互溶，所述良溶劑與所述不良溶劑的體積比為1:(5-30)、優(yōu)選 1:(10-25)； 優(yōu)選地，所述步驟(2)中的水溶性藥物分子為水溶性抗癌藥物分子； 優(yōu)選地，所述水溶性抗癌藥物分子為鹽酸阿霉素、鹽酸柔紅霉素、鹽酸表阿霉素、鹽酸阿柔比星、鹽酸佐柔比星、鹽酸米托蒽醌和5-氟尿嘧啶中的一種或多種； 優(yōu)選地，所述步驟(2)中的疏水性抗癌藥物分子與所述水溶性抗癌藥物分子的摩爾比為 1:(1-10)； 優(yōu)選地，所述步驟(2)中的加熱溫度為40-90°C ； 優(yōu)選地，所述步驟(2)中的磁力攪拌時(shí)間為5min以上、優(yōu)選5_30min。
7.根據(jù)權(quán)利要求4-6任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，所述步驟(3)中的加熱溫度為40-90 0C ； 優(yōu)選地，所述步驟(3)中的磁力攪拌時(shí)間為0.5-2h ； 優(yōu)選地，所述步驟(3)中的磁力攪拌速度為500-1200rpm ； 優(yōu)選地，所述步驟(3)中的超聲處理時(shí)間為15-35min ； 優(yōu)選地，所述步驟(3)之后進(jìn)行: (4)通過超濾離心去除游離的藥物分子，然后用去離子水重新溶解濾膜上的多藥自聚復(fù)合納米粒子； 優(yōu)選地，所述多藥自聚復(fù)合納米粒子呈球形或近似球形，其平均粒徑為100-500nm，優(yōu)選 150-400nm，更優(yōu)選 200-300nm。
8.根據(jù)權(quán)利要求4-7任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，所述方法包括: 0-)將疏水性抗癌藥物分子溶解于良溶劑中得到疏水性抗癌藥物分子溶液； (2’)然后，將所述疏水性抗癌藥物分子溶液加入所述疏水性抗癌藥物分子的不良溶劑中，其中所述良溶劑與所述不良溶劑的體積比為1:(5-30);在溫度40-90°C下，磁力攪拌5min以上之后靜置，獲得納米纖維懸浮液；再將水溶性抗癌藥物分子溶液加入所述納米纖維懸浮液中，其中所述疏水性抗癌藥物分子與所述水溶性抗癌藥物分子的摩爾比為1:(1-10)； (3’)在溫度40-90°C下，磁力攪拌0.5-2h并超聲處理15_35min后靜置，即得所述多藥自聚復(fù)合納米粒子； (4’)通過超濾離心去除游離的藥物分子，然后用去離子水重新溶解濾膜上的多藥自聚復(fù)合納米粒子。
9.根據(jù)權(quán)利要求4-7任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，所述方法包括: (I’ ’)將疏水性抗癌藥物分子溶解于良溶劑中得到疏水性抗癌藥物分子溶液； (2’ ’)同時(shí)將所述疏水性抗癌藥物分子溶液和水溶性抗癌藥物分子溶液加入所述疏水性抗癌藥物分子的不良溶劑中，其中所述良溶劑與所述不良溶劑的體積比為1: (5-30)，所述疏水性抗癌藥物分子與所述水溶性抗癌藥物分子的摩爾比為1:(1-10)； (3’ ’)在溫度40-90°C下，磁力攪拌0.5-2h并超聲處理15_35min后靜置，即得所述多藥自聚復(fù)合納米粒子； (4’’)通過超濾離心去除游離的藥物分子，然后用去離子水重新溶解濾膜上的多藥自聚復(fù)合納米粒子。
10.如權(quán)利要求1-3任一項(xiàng)所述的多藥自聚復(fù)合納米粒子在制備用于治療腫瘤的藥物中的應(yīng)用。`
【文檔編號(hào)】A61K45/06GK103550777SQ201310533322
【公開日】2014年2月5日 申請日期:2013年10月31日 優(yōu)先權(quán)日:2013年10月31日
【發(fā)明者】梁興杰, 陳飛, 趙元元 申請人:國家納米科學(xué)中心