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      用于治療風(fēng)濕骨病的中藥組方及中成藥的制備方法和應(yīng)用的制作方法

      文檔序號(hào):1267969閱讀:963來源:國知局
      用于治療風(fēng)濕骨病的中藥組方及中成藥的制備方法和應(yīng)用的制作方法
      【專利摘要】本發(fā)明用于治療風(fēng)濕骨病的中藥組方,各活性部位的質(zhì)量百分比為:甘草皂苷40%~60%;甘草黃酮10%~20%;麻黃生物堿5%~20%;川牛膝皂苷5%~20%;馬錢子生物堿5%~10%。根據(jù)該中藥組方制備中成藥的方法包含以下步驟:⑴制備甘草皂苷;⑵制備甘草黃酮;⑶制備麻黃生物堿;⑷制備川牛膝皂苷;⑸制備馬錢子生物堿;⑹配制活性部位組方;⑺制作用于治療風(fēng)濕骨病的中成藥;所述中成藥包括膠囊、軟膠囊、片劑。根據(jù)本發(fā)明的中藥組方制備的用于治療風(fēng)濕骨病的中成藥能在鎮(zhèn)痛抗炎、活血祛瘀和補(bǔ)中益氣增強(qiáng)免疫力以及治療寒濕淤阻經(jīng)絡(luò)所致的風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、關(guān)節(jié)痛中進(jìn)行應(yīng)用。
      【專利說明】用于治療風(fēng)濕骨病的中藥組方及中成藥的制備方法和應(yīng)用
      【技術(shù)領(lǐng)域】
      [0001]本發(fā)明屬于中醫(yī)藥領(lǐng)域,涉及中藥的成藥,具體地涉及一種用于治療風(fēng)濕骨病的中藥組方及中藥成藥(以下簡稱“中成藥”)的制備方法和應(yīng)用。
      【背景技術(shù)】
      [0002]風(fēng)濕性疾病,俗稱“風(fēng)濕病”,系風(fēng)、寒、濕、創(chuàng)傷侵入人體,形成痹毒并附于人體骨骼,從而損傷骨骼和與骨骼相關(guān)的硬組織,致使肌、韌帶、滑囊、筋膜的營養(yǎng)供給不良而導(dǎo)致的一類疾病。在該類疾病中,99%為風(fēng)濕骨病,它是現(xiàn)今最為常見的慢性骨病之一。早在古時(shí)中醫(yī)對(duì)該疾病就有相關(guān)描述。風(fēng)濕屬于中醫(yī)“痹癥”的范疇,在《素問?痹論》中就有“風(fēng)寒濕三氣雜至,合而為痹”之說,它從中醫(yī)角度闡明了該疾病的發(fā)病機(jī)理是為陽氣不足、腠理不密、風(fēng)寒濕邪入侵等所致。近代醫(yī)學(xué)研究也發(fā)現(xiàn),風(fēng)濕骨病的發(fā)病與寒冷、潮濕、疲勞、營養(yǎng)不良、創(chuàng)傷、精神等因素密切相關(guān)。
      [0003]目前,治療風(fēng)濕骨病多以非手術(shù)治療為主,常用非留體類抗炎鎮(zhèn)痛藥物治療以控制急性發(fā)作。自1899年阿司匹林問世以來,已有100余種非留體抗炎鎮(zhèn)痛藥(NSAIDs)用于臨床,他們巳成為治療風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(RA)、骨關(guān)節(jié)炎(OA)以及各種輕到中度疼痛的一線用藥,其中不少巳成為非處方藥。根據(jù)藥物對(duì)環(huán)氧化酶(COX)選擇性的不同,將COX抑制劑分為四類:①C0X-1特異性抑制劑,如小劑量阿司匹林。②COX非特異性抑制劑,如布洛芬、萘普生、吲哚美辛、大劑量阿司匹林等。③C0X-2傾向性抑制劑,如吡羅昔康、伊索昔康、美洛昔康等。④C0X-2特異性抑制劑,如塞來昔布、羅非昔布、伐地昔布。長期以來,上述藥物的療效已得到充分肯定,但是長期用藥的安全性令人擔(dān)憂。所述藥物的毒副作用相對(duì)明顯,患者難以長期耐受。因此,尋求有效理想的風(fēng)濕治療藥物已成為近些年藥物研究的熱點(diǎn)。在中醫(yī)藥領(lǐng)域,用中藥治療風(fēng)濕痹癥已有悠久的歷史。傳統(tǒng)的治療風(fēng)濕骨病的中成藥有風(fēng)濕馬錢片、通絡(luò)止痛膠囊、益腎蠲痹丸、虎骨丸、血痹大易方、腰痛寧膠囊等。其中,風(fēng)濕馬錢片的藥物組成為馬錢子粉、僵蠶(炒)、乳香(炒)、沒藥(炒)、全蝎、牛膝、蒼術(shù)、麻黃、甘草等9味藥材。通絡(luò)止痛膠囊的藥物組成為防己、苦杏仁、黃柏、蠶砂、百部、薏苡仁、法半夏、連翹、滑石粉、通草、苦參、甘草等12味藥材。益腎蠲痹丸的藥物組成為地黃、當(dāng)歸、淫羊藿、骨碎補(bǔ)、蜂房、全蝎、蜈蚣等7味藥材?;⒐峭璧乃幬锝M成為乳香、沒藥(各另研)、赤芍藥、熟地黃、當(dāng)歸、虎脛骨(酥炙黃、狗骨代)、血竭等7味藥材。血痹大易方的藥物組成為山藥、牛膝、澤瀉、地膚子、白術(shù)、干漆、蠐螬、狗脊、車前子、茵陳、山茱萸、干地黃、天雄等13味藥材。腰痛寧膠囊的藥物組成有馬錢子粉、土鱉蟲、川牛膝、甘草、麻黃、乳香(醋制)、沒藥(醋制)、全蝎、僵蠶(麩炒)、麩炒蒼術(shù)等10味藥材。
      [0004]近些年來,用于治療風(fēng)濕骨病的新型中藥的專利層出不窮:中國專利CN201110382506.X公開了由龍爪葉、穿山甲、吳茱萸、雄黃、白花蛇、當(dāng)歸、骨碎補(bǔ)、石菖蒲、絡(luò)石藤、威靈仙、淫羊藿、路路通、大黃、蜈蚣、全蝎、丁香和過江龍共計(jì)17種藥物組成的“一種治療風(fēng)濕和類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的藥物組合物”。中國專利文獻(xiàn)CN01114363.0公開了一種由制馬錢子、制川烏、制草烏、制鰲甲、宣木瓜、川牛膝和紅花共計(jì)7種藥物組成的“馬錢子風(fēng)濕散”。中國專利CN200610031135.X公開了一種由水蛭、秦艽、金銀花和魚腥草共計(jì)4種藥物組成的“治療類風(fēng)濕病的中藥注射液”。中國專利CN98112207.8公開了由乳香、沒藥、威靈仙、木鱉子、柳枝、蓖麻油、蜂蠟共計(jì)7種藥物等配制而成的“風(fēng)濕貼”。中國專利CN200410010720.2公開了一種主要由木香、桃仁、丹皮、赤芍、延胡索、半夏、茯苓、大黃、柴胡、荊芥、白術(shù)、知母、黨參、熟地、防風(fēng)、伸筋草、透骨草、乳香、沒藥、甘草共計(jì)20種藥物組成的“治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的中藥通絡(luò)制劑”。
      [0005]上述已有中成藥及發(fā)明專利中所含藥物種類繁多、成分復(fù)雜,其質(zhì)量可控性差、安全隱患大、服用劑量大。并且采用的藥材是全粉入藥,含有很多非有效物質(zhì),其中某些藥物存在毒副作用,不宜長期服用。因此,人們一直在努力改善抗風(fēng)濕骨病中成藥的藥物組成,探索這些藥物的作用機(jī)理。希望能提出組方簡單、質(zhì)量可控性強(qiáng)、毒副作用和服用劑量小的治療風(fēng)濕骨病的新型中藥。
      [0006]中藥中的同類活性成分組群稱為活性部位,可按照其分子結(jié)構(gòu)的基本構(gòu)架分為生物堿類、黃酮類、皂苷類、揮發(fā)油類等等。中藥復(fù)方中的不同活性部位相互間的協(xié)同及拮抗作用是中藥發(fā)揮藥效的物質(zhì)基礎(chǔ)。因此,通過總結(jié)中醫(yī)驗(yàn)方及中醫(yī)配伍準(zhǔn)則,設(shè)計(jì)合理的中藥活性部位組成的中藥組方有望研制出功效顯著、毒副作用和服用劑量小的治療風(fēng)濕骨病藥物。

      【發(fā)明內(nèi)容】

      [0007]本發(fā)明的目的在于發(fā)展中藥的成藥,提供一種用于治療風(fēng)濕骨病的中藥組方。所述組方以甘草皂苷為君藥,含有馬錢子生物堿、麻黃生物堿、甘草黃酮和川牛膝皂苷,具有補(bǔ)腎健脾、散風(fēng)祛濕、消炎止痛的功效。本發(fā)明的第二目的在于,根據(jù)所述用于治療風(fēng)濕骨病的中藥組方提供一種用于治療風(fēng)濕骨病的中成藥的制備方法。本發(fā)明的第三目的在于提供所述用于治療風(fēng)濕骨病的中成藥的應(yīng)用。
      [0008]為實(shí)現(xiàn)上述目的,本發(fā)明采取了以下技術(shù)方案。
      [0009]一種用于治療風(fēng)濕骨病的中藥`組方,其特征是,各活性部位的質(zhì)量百分比為:
      甘草皂苷 40%~60% ;
      甘草黃麗 10%~20% ;
      麻黃生物堿 5%~20% ;
      川牛膝皂苷 5%~20%;
      馬錢子生物堿5%~10%。
      [0010]進(jìn)一步,用于治療風(fēng)濕骨病的中藥組方,各活性部位的質(zhì)量百分比為:
      甘草皂苷 54% ;
      甘草黃酮 18% ;
      麻黃生物堿 12% ;
      川牛膝皂苷 9%;
      馬錢子生物堿7%。
      [0011]本發(fā)明用于治療風(fēng)濕骨病的中藥組方以甘草皂苷為君藥,其占各原料成分的近一半或一半以上。甘草是豆科甘草屬植物,其根和根莖是最常用的中藥。甘草味甘、性平、無毒,主治五臟六腑寒熱邪氣,堅(jiān)筋骨,長肌肉,倍氣力,解毒,久服能輕身延年。甘草含有多種化學(xué)成分,主要成分為甘草酸、甘草黃酮。所述甘草酸又稱甘草皂苷,具有抗炎、抗病毒和保肝解毒及增強(qiáng)免疫功能等作用。多數(shù)報(bào)道認(rèn)為,甘草皂苷的抗炎機(jī)理與抑制前列腺素等介質(zhì)的作用有關(guān)。甘草酸可能通過對(duì)花生四烯酸水解所需的磷脂酶A2的抑制來實(shí)現(xiàn)抑制前列腺素的合成與釋放。另據(jù)日本學(xué)者TaKagi的報(bào)導(dǎo),將我國東北甘草除去甘草甜素后得到一種黃酮類成分,命名為FMlOO (商品名為Aspallon),具有抗實(shí)驗(yàn)消化性潰瘍的作用及抗炎作用,已開發(fā)有成藥上市。
      [0012] 所述甘草黃酮是甘草中的重要活性部位之一,主要存在于甘草根表皮以內(nèi)的部分。前蘇聯(lián)學(xué)者在研究中發(fā)現(xiàn)了甘草黃酮具有較強(qiáng)的消炎和抗變態(tài)作用,比磺胺和抗生素的藥效要好。日本學(xué)者小菅卓夫等人也相繼從甘草中分離得到了有抗炎活性的黃酮類成分Liquiritin,其作用機(jī)理可能與對(duì)透明質(zhì)酸酶的活性和對(duì)組胺釋放的抑制作用有關(guān)。
      [0013]本發(fā)明的中藥組方中含有川牛膝皂苷。所述川牛膝皂苷活性部位的苷元為齊墩果酸,屬于五環(huán)三萜類化合物,是中藥川牛膝的主要活性成分。現(xiàn)代藥理研究發(fā)現(xiàn):從川牛膝中提取的皂苷對(duì)大鼠蛋清性關(guān)節(jié)炎有促進(jìn)炎性腫脹消退的明顯作用;可有效降低大鼠全血粘度、紅細(xì)胞壓積、紅細(xì)胞聚集指數(shù),具有明顯的活血化瘀的作用;此外還具有消炎止痛的功效。
      [0014]本發(fā)明的中藥組方中還含有兩種生物堿:馬錢子生物堿和麻黃生物堿。其中,馬錢子生物堿為馬錢子的主要活性部位,是一種吲哚類生物堿,含量約為3%~5%。近代藥理實(shí)驗(yàn)表明:馬錢子生物堿具有顯著的鎮(zhèn)痛、鎮(zhèn)靜的作用。小鼠扭體、小鼠熱板及小鼠肌肉注射模型均證實(shí):馬錢子生物堿有顯著的鎮(zhèn)痛作用且其鎮(zhèn)痛作用與M膽堿受體有一定的聯(lián)系。所述麻黃生物堿與馬錢子生物堿的作用相似,其中的麻黃堿可通過作用于a 1-受體來提高中樞性痛覺閾值從而達(dá)到鎮(zhèn)痛的作用。因此,以甘草皂苷為主,輔以馬錢子生物堿及麻黃生物堿,可以增強(qiáng)本發(fā)明的中藥組方的鎮(zhèn)痛作用,使其在治療風(fēng)濕骨病時(shí)表現(xiàn)出理想的治療療效。
      [0015]為實(shí)現(xiàn)上述第二目的,本發(fā)明采取了以下技術(shù)方案。
      [0016]一種根據(jù)所述中藥組方制備用于治療風(fēng)濕骨病的中成藥的方法,其特征是,包含以下步驟:
      (1)制備甘草皂苷
      取甘草粉以氨性乙醇超聲提取兩次;過濾,旋蒸,離心;過HZ-816大孔樹脂柱,收集乙醇洗脫液;旋蒸至干,干燥,稱重;
      所述甘草提取物中甘草皂苷的質(zhì)量百分比為50%~95% ;
      (2)制備甘草黃酮
      取甘草藥材進(jìn)行粉碎,用乙醇回流提??;離心、濃縮并脫色;先過DlOl大孔樹脂柱,濃縮后過HZ915聚酰胺樹脂柱;醇液減壓濃縮干燥,稱重;
      所述甘草提取物中甘草黃酮的質(zhì)量百分比為20%~80% ;
      (3)制備麻黃生物堿
      稱取麻黃藥材進(jìn)行粉碎,用乙醇回流提取;過濾,離心,減壓濃縮;旋蒸至干,稱重,制得麻黃生物堿;
      所述麻黃提取物中麻黃堿的質(zhì)量百分比為20%~70% ;
      (4)制備川牛膝皂苷取川牛膝藥材進(jìn)行粉碎,用乙醇回流提取兩次;過濾離心提取,旋蒸至浸膏;用去離子水溶解,過HZ-816大孔樹脂柱,重復(fù)上樣一次,收集乙醇的洗脫液;醇液旋蒸,干燥,稱重;所述川牛膝提取物中川牛膝皂苷的質(zhì)量百分比為5%~30% ;
      (5)制備馬錢子生物堿
      稱取馬錢子藥材進(jìn)行粉碎,用乙醇回流提??;過濾,離心,減壓濃縮;旋蒸至干,稱重,制得馬錢子生物堿;
      所述馬錢子提取物中馬錢子堿的質(zhì)量百分比為40%~95% ;
      (6)配制活性部位質(zhì)量百分比
      將步驟(1)- (5)制備的甘草皂苷、甘草黃酮、麻黃生物堿、川牛膝皂苷和馬錢子生物堿按下述活性部位質(zhì)量百分比進(jìn)行配制:
      甘草皂苷 40%~60% ;
      甘草黃麗 10%~20% ;
      麻黃生物堿 5%~20% ;
      川牛膝皂苷 5%~20%;
      馬錢子生物堿5%~10% ;
      (7)制作用于治療風(fēng)濕骨病 的中藥成藥
      將步驟(6)配制的活性部位混合物制備成膠囊、軟膠囊和片劑。
      [0017]進(jìn)一步,將步驟(1)~步驟(5)制備的甘草皂苷、甘草黃酮、麻黃生物堿、川牛膝皂苷和馬錢子生物堿按下述活性部位質(zhì)量百分比進(jìn)行配制:
      甘草皂苷 54% ;
      甘草黃酮 18% ;
      麻黃生物堿 12% ;
      川牛膝皂苷 9%;
      馬錢子生物堿7%。
      [0018]為實(shí)現(xiàn)上述第三目的,本發(fā)明采取了以下技術(shù)方案。
      [0019]根據(jù)本發(fā)明的中藥組方制備的用于治療風(fēng)濕骨病的中成藥在鎮(zhèn)痛抗炎、活血祛瘀和補(bǔ)中益氣、增強(qiáng)免疫力中的應(yīng)用,所述中成藥具有去濕除寒、補(bǔ)腎健脾、活血通絡(luò)的功效。
      [0020]進(jìn)一步,所述用于治療風(fēng)濕骨病的中成藥在治療風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎以及關(guān)節(jié)痛中的應(yīng)用。
      [0021 ] 本發(fā)明的積極效果是:
      (I)按照“標(biāo)本兼治”的原則,采用補(bǔ)腎健脾、通絡(luò)止痛的治療方案,在甘草皂苷抗炎、抗病毒和保肝解毒及增強(qiáng)免疫功能基礎(chǔ)上,輔以一種黃酮(甘草黃酮)及一種皂苷(川牛膝皂苷),兩種生物堿(馬錢子生物堿和麻黃生物堿),在多個(gè)體外細(xì)胞模型中表現(xiàn)出有顯著的療效。
      [0022](2)根據(jù)本發(fā)明的中藥組方制備的用于治療風(fēng)濕骨病的中成藥的藥效經(jīng)體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)結(jié)果證實(shí):各濃度的藥物均表現(xiàn)出顯著的免疫、抗炎及活血作用;該組方對(duì)小鼠巨噬細(xì)胞生成PGE2有明顯的抑制作用,對(duì)小鼠脾淋巴細(xì)胞分泌IL-2水平具有明顯的促進(jìn)作用;對(duì)小鼠巨噬細(xì)胞產(chǎn)生IL-6和TNF- a亦有促進(jìn)作用;對(duì)IL_1 ^誘導(dǎo)的大鼠軟骨細(xì)胞有顯著的增殖作用,對(duì)該細(xì)胞的損傷有明顯的修復(fù)作用。此外,所述中成藥具有顯著的活血祛瘀作用,能有效的增強(qiáng)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞釋放NO的能力。
      [0023](3)根據(jù)本發(fā)明的中藥組方制備的用于治療風(fēng)濕骨病的中成藥的藥效經(jīng)體外動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果證實(shí):該藥物可顯著抑制佐劑性關(guān)節(jié)炎大鼠的急性足爪腫脹和繼發(fā)性足腫脹,提示該中藥活性部位具有防治佐劑性關(guān)節(jié)炎的作用。
      [0024](4)綜上所述,根據(jù)本發(fā)明的中藥組方制備的用于治療風(fēng)濕骨病的中成藥在鎮(zhèn)痛抗炎、活血祛瘀和補(bǔ)中益氣增強(qiáng)免疫力等方面均有明顯作用,對(duì)風(fēng)濕骨病有良好療效。
      【具體實(shí)施方式】
      [0025]以下繼續(xù)介紹本發(fā)明用于治療風(fēng)濕骨病的中藥組方的【具體實(shí)施方式】,通過12個(gè)實(shí)施例來分析、檢查和驗(yàn)證根據(jù)本發(fā)明的中藥組方制備的用于治療風(fēng)濕骨病的中成藥的作用和功能。但是,本發(fā)明的實(shí)施不限于以下的實(shí)施方式。
      [0026]實(shí)施例1
      一種用于治療風(fēng)濕骨病的中藥組方,各活性部位的配方質(zhì)量百分比如下:
      甘草皂苷 54% ;
      甘草黃酮 18% ;
      麻黃生物堿 12 %;
      川牛膝皂苷 9%;
      馬錢子生物堿7%。
      [0027]根據(jù)本發(fā)明的中藥組方`制備用于治療風(fēng)濕骨病的中成藥的方法,包含以下步驟:
      (I)制備甘草皂苷
      ①取甘草粉以0.5%氨性70%乙醇(以下所涉及到的試劑百分含量均為質(zhì)量百分含量)超聲提取兩次,每次I小時(shí);
      ②過濾離心提取,旋蒸至約300mL,加去離子水,靜置過夜,離心;
      ③過HZ-816大孔樹脂柱(依次使用1200mL去離子水,600mL30%乙醇,600mL50%乙醇,600mL70%乙醇洗脫),收集70%乙醇洗脫液;
      ④醇液旋蒸至干,干燥,稱重,通過高效液相色譜以單一標(biāo)準(zhǔn)品為衡量標(biāo)準(zhǔn),測定甘草皂苷的含量為82.0%。
      [0028](2)制備甘草黃酮
      ①取甘草,粉碎后用乙醇回流提取2.5小時(shí);
      ②將提取液離心、濃縮并脫色;
      ③先過DlOl大孔樹脂柱(用乙醇洗脫),將洗脫液減壓濃縮;后過HZ915聚酰胺樹脂柱(乙醇洗脫);
      ④醇液減壓濃縮干燥,分別獲得甘草藥材的總黃酮提取物,通過高效液相色譜以單一標(biāo)準(zhǔn)品為衡量標(biāo)準(zhǔn),測得甘草黃酮的含量為69.94%。
      [0029](3)制備麻黃生物堿
      稱取麻黃藥材進(jìn)行粉碎,用乙醇回流提取;將提取液過濾,濾液在4000r/min轉(zhuǎn)速下離心5min后取上清液減壓旋蒸濃縮;定容后減壓旋蒸至干,制得麻黃生物堿,測得其生物堿含量為42.0%。
      [0030](4)制備川牛膝皂苷①取川牛膝藥材進(jìn)行粉碎,以8倍量濃度為80%的乙醇回流提取兩次,提取時(shí)間分別為第一次3小時(shí),第二次2小時(shí);
      ②過濾離心提取,旋蒸至浸膏;
      ③用去離子水溶解,以2mL/min上HZ-816大孔樹脂柱,重復(fù)上樣一次:分別以4倍量濃度為10%的乙醇及濃度為95%的乙醇分別洗脫,收集95%乙醇的洗脫液;
      ④醇液旋蒸,獲得川牛膝皂苷,用香草醛-冰醋酸比色法測得其皂苷含量為13.88%。
      [0031](5)制備馬錢子生物堿
      稱取馬錢子藥材進(jìn)行粉碎,用乙醇回流提取;將提取液過濾,濾液在4000r/min轉(zhuǎn)速下離心5min后取上清液減壓旋蒸濃縮;定容后減壓旋蒸至干,制得馬錢子生物堿,測得其生物堿含量為88.7%。
      [0032](6)配制活性部位質(zhì)量百分比
      將步驟(1)- (5)制備的 甘草皂苷、甘草黃酮、麻黃生物堿、川牛膝皂苷和馬錢子生物堿按用于治療風(fēng)濕骨病的中藥組方進(jìn)行配制,各活性部位的質(zhì)量百分比為:
      甘草皂苷 54% ;
      甘草黃酮 18% ;
      麻黃生物堿 12 %;
      川牛膝皂苷 9%;
      馬錢子生物堿7%。
      [0033](7)制作用于治療風(fēng)濕骨病的中藥成藥
      將步驟(6)配制的活性部位制備成膠囊、軟膠囊和片劑。
      [0034]實(shí)施例2
      根據(jù)本發(fā)明的中藥組方制備用于治療風(fēng)濕骨病的中藥成藥的方法,包含以下步驟:
      制備方法和步驟基本同實(shí)施例1,與實(shí)施例1所不同的是:
      將步驟(1)- (5)制備的甘草皂苷、甘草黃酮、麻黃生物堿、川牛膝皂苷和馬錢子生物堿按用于治療風(fēng)濕骨病的中藥組方進(jìn)行配制,各活性部位的質(zhì)量百分比為:
      甘草皂苷40% ;
      甘草黃酮10% ;
      麻黃生物堿 20% ;
      川牛膝皂苷 20%;
      馬錢子生物堿10%。
      [0035]實(shí)施例3
      根據(jù)本發(fā)明的中藥組方制備用于治療風(fēng)濕骨病的中藥成藥的方法,包含以下步驟:
      制備方法和步驟基本同實(shí)施例1,與實(shí)施例1所不同的是:
      將步驟(1)- (5)制備的甘草皂苷、甘草黃酮、麻黃生物堿、川牛膝皂苷和馬錢子生物堿按用于治療風(fēng)濕骨病的中藥組方進(jìn)行配制,各活性部位的質(zhì)量百分比為:
      甘草皂苷60% ;
      甘草黃酮20% ;
      麻黃生物堿 10% ;
      川牛膝皂苷 5%;馬錢子生物堿5%。
      [0036]實(shí)施例4
      根據(jù)本發(fā)明的中藥組方制備的用于治療風(fēng)濕骨病的中藥成藥對(duì)風(fēng)濕骨病治療作用的動(dòng)物實(shí)驗(yàn):了解本發(fā)明的用于治療風(fēng)濕骨病的中藥組方IL-! IH秀導(dǎo)的大鼠軟骨細(xì)胞增殖的影響。
      [0037](I)受試藥物:根據(jù)本發(fā)明的中藥組方制備的用于治療風(fēng)濕骨病的中藥成藥。
      [0038](2 )受試動(dòng)物:SD大鼠,6只,7日齡,雌雄各半。
      [0039](3)實(shí)驗(yàn)方法
      取7日齡SD大鼠脫頸處死,浸泡于酒精質(zhì)量百分含量為95%的酒精數(shù)分鐘后取出,取出股骨頭、肩關(guān)節(jié)及膝關(guān)節(jié)軟骨組織,用PBS (磷酸鹽緩沖液)沖洗數(shù)次,加入少量PBS剪碎,用0.2%的II型膠原酶37°C消化,移取上清液作為單個(gè)細(xì)胞懸液接種于培養(yǎng)皿中培養(yǎng),隔天換液。
      [0040]待細(xì)胞基本長滿后傳代培養(yǎng),傳至第2代時(shí),調(diào)整細(xì)胞濃度為I X 107/L,接種于96孔培養(yǎng)板內(nèi)用于實(shí)驗(yàn)。每孔接種200丨i L細(xì)胞懸液,接種24 h后將培養(yǎng)孔分為空白對(duì)照組、IL-1 P對(duì)照組、受試樣品組、陽性對(duì)照組,每樣3復(fù)孔,分別更換相應(yīng)的培養(yǎng)液:
      ①空白對(duì)照組:換DMEM(含5%FBS, 0.02%吐溫-80);
      ②模型組:換DMEM (含 10 P g/L的IL-1 B,0.02% 吐溫-80 及 5% FBS);
      ③受試藥物及陽性對(duì)照組:換DMEM(含10n g/L的IL-1 0,0.02%吐溫-80,5% FBS及各濃度藥物或陽性藥);
      將各組放入培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)48h用于細(xì)胞增殖檢測。去除原有細(xì)胞培養(yǎng)基,每孔加A 100 U L全培養(yǎng)基及10 Ii L CCK8溶液重懸,繼續(xù)孵育,于給藥后3h置于酶標(biāo)儀450 nm波長下測定每孔的光密度值(0D值),對(duì)受試樣品促增殖作用進(jìn)行分析。
      [0041](4)實(shí)驗(yàn)結(jié)果
      受試藥物對(duì)IL-1M秀導(dǎo)的大鼠骨關(guān)節(jié)炎軟骨細(xì)胞的增殖影響見表1。
      [0042]表1.受試藥物對(duì)IL-1 I】誘導(dǎo)的大鼠骨關(guān)節(jié)炎軟骨細(xì)胞的增殖影響(0.D.)
      【權(quán)利要求】
      1.用于治療風(fēng)濕骨病的中藥組方,其特征在于,各活性部位的質(zhì)量百分比為: 甘草皂苷 40%~60% ; 甘草黃麗 10%~20% ; 麻黃生物堿 10%~20% ; 川牛膝皂苷 5%~20%; 馬錢子生物堿5%~10%。
      2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于治療風(fēng)濕骨病的中藥組方,其特征在于,所述各活性部位的質(zhì)量百分比為: 甘草皂苷 54% ; 甘草黃酮 18% ; 麻黃生物堿 12% ; 川牛膝皂苷 9%; 馬錢子生物堿7%。
      3.一種根據(jù)權(quán)利要求1所述的中藥組方制備用于治療風(fēng)濕骨病的中成藥的方法,其特征在于,包含以下步驟: (1)制備甘草皂苷 取甘草粉以氨性乙醇超聲提取兩次;過濾,旋蒸,離心;過HZ-816大孔樹脂柱,收集乙醇洗脫液;旋蒸至干,干燥,稱重; 所述甘草提取物中甘草皂苷的質(zhì)量百分比為50%~95% ; (2)制備甘草黃酮 取甘草藥材進(jìn)行粉碎,用乙醇回流提?。浑x心、濃縮并脫色;先過DlOl大孔樹脂柱,濃縮后過HZ915聚酰胺樹脂柱;醇液減壓濃縮干燥,稱重; 所述甘草提取物中甘草黃酮的質(zhì)量百分比為20%~80% ; (3)制備麻黃生物堿 稱取麻黃藥材進(jìn)行粉碎,用乙醇回流提??;過濾,離心,減壓濃縮;旋蒸至干,稱重,制得麻黃生物堿; 所述麻黃提取物中麻黃堿的質(zhì)量百分比為20%~70% ; (4)制備川牛膝皂苷 取川牛膝藥材進(jìn)行粉碎,用乙醇回流提取兩次;過濾離心提取,旋蒸至浸膏;用去離子水溶解,過HZ-816大孔樹脂柱,重復(fù)上樣一次,收集乙醇的洗脫液;醇液旋蒸,干燥,稱重;所述川牛膝提取物中川牛膝皂苷的質(zhì)量百分比為5%~30% ; (5)制備馬錢子生物堿 稱取馬錢子藥材進(jìn)行粉碎,用乙醇回流提??;過濾,離心,減壓濃縮;旋蒸至干,稱重,制得馬錢子生物堿; 所述馬錢子提取物中馬錢子堿的質(zhì)量百分比為40%~95% ; (6)配制活性部位質(zhì)量百分比 將步驟(1)- (5)制備的甘草皂苷、甘草黃酮、麻黃生物堿、川牛膝皂苷和馬錢子生物堿按下述活性部位質(zhì)量百分比進(jìn)行配制: 甘草皂苷 40%~60% ;甘草黃麗 10%~20% ; 麻黃生物堿 10%~20% ; 川牛膝皂苷 5%~20%; 馬錢子生物堿5%~10% ; (7)制作用于治療風(fēng)濕骨病的中成藥 將步驟(6)配制的活性部位混合物制備成膠囊、軟膠囊和片劑。
      4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的制備用于治療風(fēng)濕骨病的中成藥的方法,其特征在于,將步驟(1)-步驟(5)制備的甘草皂苷、甘草黃酮、麻黃生物堿、川牛膝皂苷和馬錢子生物堿按下述活性部位質(zhì)量百分比進(jìn)行配制: 甘草皂苷 54% ; 甘草黃酮 18% ; 麻黃生物堿 12% ; 川牛膝皂苷 9%; 馬錢子生物堿7%。
      5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的中藥組方制備的用于治療風(fēng)濕骨病的中成藥在鎮(zhèn)痛抗炎、活血祛瘀和補(bǔ)中益氣、增強(qiáng)免疫力中的應(yīng)用。
      6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的中藥組方制備的用于治療風(fēng)濕骨病的中成藥在治療風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎以及關(guān)節(jié)痛中的應(yīng)用。
      【文檔編號(hào)】A61K31/352GK103585275SQ201310540299
      【公開日】2014年2月19日 申請(qǐng)日期:2013年11月5日 優(yōu)先權(quán)日:2013年11月5日
      【發(fā)明者】倪力軍, 張立國, 吳婷婷, 趙雯雯, 歐陽霄雯, 徐曉玲, 郭燕子, 薛志斌, 何婉瑛, 潘潔文, 鄭帥, 趙麗麗, 馬東升 申請(qǐng)人:華東理工大學(xué)
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