控制納米藥物載體粒徑的方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種控制納米藥物載體粒徑的方法，該方法簡便且生產(chǎn)可行性強(qiáng)，并提高載藥量?？刂萍{米藥物載體粒徑的方法是通過調(diào)節(jié)制備過程中兩相混合時非水相和水相的比例來控制粒徑，并結(jié)合采用超濾設(shè)備濃縮物料，將非水相和水相的比例恢復(fù)至目標(biāo)比例。本方法制備的多種載藥脂質(zhì)體粒徑較小、載藥量和包封率高且便于工業(yè)化生產(chǎn)，為納米藥物載體的質(zhì)量控制提供了一種新的解決方案，同時也加快了脂質(zhì)體、納米粒和膠束等新型制劑的研發(fā)步伐。
【專利說明】控制納米藥物載體粒徑的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及生物醫(yī)藥【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及一種控制納米藥物載體粒徑的方法。
技術(shù)背景
[0002]納米藥物載體通常是指粒徑在KTlOOOnm的一類新型載體，通常由天然或合成高分子材料制成，如脂質(zhì)體、乳劑、固體脂質(zhì)納米粒、納米囊、納米球、聚合物膠束等。主要特點是可提高藥物的溶解性和穩(wěn)定性，改善藥物性質(zhì)和靶向性，延長藥物作用時間，增加療效，降低毒副反應(yīng)等。
[0003]體內(nèi)有些組織中的毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞間是不連續(xù)的，這些不連續(xù)內(nèi)皮細(xì)胞連接存在一些窗口結(jié)構(gòu)，而這些窗口結(jié)構(gòu)有助于納米顆粒通過內(nèi)皮細(xì)胞進(jìn)入這些組織，從而實現(xiàn)納米顆粒在組織中的吸收。體內(nèi)具有不連續(xù)內(nèi)皮細(xì)胞結(jié)構(gòu)的組織主要有肝臟、脾臟、骨髓等，這些組織被稱為網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)“RES”。網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)正是真菌感染的入侵和繁殖地帶，因而很多抗真菌藥物也是基于此解剖結(jié)構(gòu)設(shè)計以納米顆粒作為藥物載體，達(dá)到向感染組織靶向用藥的目的。另外，肝臟、脾臟和骨髓等組織中富含的巨噬細(xì)胞也是納米顆粒容易在這些組織中聚集的主要原因。此外,人體中如腫瘤組織等病變組織也往往具有不連續(xù)的內(nèi)皮細(xì)胞結(jié)構(gòu)，這有助于提高藥物在病變組織的滲透和滯留，同樣很多抗腫瘤藥物也是基于此解剖結(jié)構(gòu)設(shè)計以納米顆粒作為藥物載體，達(dá)到向腫瘤組織靶向用藥的目的。納米顆粒的大小將很大程度影響納米顆粒通過這種不連續(xù)內(nèi)皮結(jié)構(gòu)，也將影響納米顆粒在生物利用度和藥物利用效率。納米顆粒的粒徑大小是影響納米顆粒體內(nèi)分布與藥物動力學(xué)的主要因素。[0004]2007年，孫維彤[1]等報道小鼠口服530、320、180 nm的托氟啶脂質(zhì)體后的相對生物利用度分別為160.5%, 221.6%和260.3%。結(jié)論為:脂質(zhì)體粒徑對促進(jìn)托氟啶的口服吸收有顯著影響，口服吸收生物利用度隨脂質(zhì)體粒徑的減小而增大。
[0005]2008年，李春雷[2]等研究了 60、85、IOOnm三種粒徑的米托蒽醌脂質(zhì)體對體外釋放、體內(nèi)毒性和療效的影響。結(jié)果表明，粒度越小，釋放越快，療效越好，毒性無顯著差異。
[0006]綜上可知，粒徑對體內(nèi)行為確實有顯著影響，且由上述報道可知粒徑越小，越有助于吸收和釋放，療效越顯著。因而粒徑的控制主要是如何減小粒徑。
[0007]脂質(zhì)體(liposome)是一種人工膜。在水中磷脂分子親水頭部插入水中,脂質(zhì)體疏水尾部伸向空氣，攪動后形成雙層脂分子的球形脂質(zhì)體，直徑25~1000nm不等。脂質(zhì)體用于制備藥物中，將藥物包封于類脂質(zhì)雙分子層內(nèi)而形成的微型泡囊體，利用脂質(zhì)體可以和細(xì)胞膜融合的特點，將藥物送入細(xì)胞內(nèi)部。
[0008]現(xiàn)有的減小粒徑的方法主要有超聲、高速剪切、高壓均質(zhì)、擠壓或者噴霧干燥或冷凍干燥脂質(zhì)有機(jī)溶劑等，但是以上幾種方法存在其不可避免的缺點。
[0009]首先，超聲，無法工業(yè)化，而且實驗室可重復(fù)性差；其次，高速剪切可以減小粒徑，但是工業(yè)化提供的高速剪切還不能達(dá)到所需要的粒徑，而且不均勻，粒徑分布寬，降低穩(wěn)定性；再者，通過高壓均質(zhì)可以降低粒徑，高壓均質(zhì)瞬間，均值閥附近的溫度可以達(dá)到250°C，這個溫度對熱敏性藥物和磷脂均有一定的影響，會造成高溫氧化，高溫水解速率增加，增加了有關(guān)物質(zhì)的含量，從而對安全性有一定影響。最后，擠壓是國外實驗室最常用的一種模式，也是一種最理想的模式，但對于一些相變溫度較高的脂質(zhì)膜材，即使高壓也無法過膜，且平面過濾容易膜堵，頻繁換膜易于污染。另外，噴霧干燥脂質(zhì)有機(jī)溶劑雖不失為一種理想模式，但國內(nèi)設(shè)備目前還無法滿足大生產(chǎn)的要求。冷凍干燥脂質(zhì)有機(jī)溶劑又對有機(jī)溶劑種類有限制,且成本高。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0010]為了彌補(bǔ)現(xiàn)有技術(shù)中的不足，本發(fā)明目的在于提供一種控制納米藥物載體粒徑的方法。
[0011]本發(fā)明目的通過下述技術(shù)方案實現(xiàn):一種控制納米藥物載體粒徑的方法，納米藥物載體的粒徑在10~1000nm,包括非水相和水相,至少包括下述步驟:
第一，當(dāng)設(shè)定非水相:水相為1:1時，控制制備過程中所述的非水相和水相兩相混合時的體積比為1:n，得到混合均質(zhì)物料，其中，10>η>1 ；
第二，采用超濾設(shè)備濃縮物料、結(jié)合低壓均質(zhì)，使得非水相:水相的混合比為1:1 ；
第三，過濾除菌后測定粒徑；
其中，對于被動載藥，所述的非水相是制備過程中分散體系中的分散相，包括脂質(zhì)體中的脂質(zhì)膜、脂質(zhì)粉末或者乳劑中的油相；所述的水相是制備過程中的分散介質(zhì)，包括水或者緩沖體系，其中含有PH調(diào)節(jié)劑、滲透壓調(diào)節(jié)劑、凍干保護(hù)劑、抗氧劑中的一種或多種；所述的非水相和水相的混合比為重量比、體積比或重量體積比。
[0012]本發(fā)明通過控制兩相混合時非水相和水相的比例來控制粒徑，采用適宜截留分子量的超濾設(shè)備濃縮物料，使其恢復(fù)至處方比例，然后結(jié)合低壓均質(zhì)獲得小粒徑的納米藥物載體，其中，通過采用超濾等手段還可清除游離藥物。
[0013]本發(fā)明方法易于將納米藥物載體為粒徑控制到100~150nm,甚至30~80 nm。
[0014]本發(fā)明的關(guān)鍵在于η的取值，需要根據(jù)目標(biāo)粒徑，結(jié)合處方和工藝篩選，η值過小，無法達(dá)到控制粒徑的目的，即使高壓均質(zhì)仍無法減小粒徑；η值過大，物料總體積過大，限制批量大小，加大處理難度。且η值達(dá)到一定程度時，特定產(chǎn)品的粒徑不會隨著η值的繼續(xù)增大而減小。
[0015]在上述方案基礎(chǔ)上，所述的納米藥物載體為粒徑在1(T200 nm的脂質(zhì)體、乳劑、固體脂質(zhì)納米粒、納米囊、納米球、聚合物膠束等。
[0016]對于被動載藥脂質(zhì)體，所述的非水相按照處方量制備，由藥物、脂質(zhì)膜材、膽固醇以及脂溶性添加劑中的一種或幾種組成，經(jīng)有機(jī)溶劑溶解、混勻，最終旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去有機(jī)溶劑，以脂質(zhì)膜或者脂質(zhì)粉末的形式存在；所述的水相即水化介質(zhì)為水或含藥水溶液，按照處方量的η倍制備，包括添加有緩沖鹽的緩沖體系、pH調(diào)節(jié)劑、滲透壓調(diào)節(jié)劑、凍干保護(hù)劑、抗氧劑；將所述的水相加入非水相中，充分水化膨脹，形成多層脂質(zhì)體，結(jié)合剪切、均質(zhì)和/或擠壓減小粒徑；采用超濾濃縮，將非水相和水相的比例恢復(fù)至1:1。以η為2~4倍為佳。
[0017]所述的緩沖鹽的緩沖體系，如磷酸緩沖鹽、醋酸緩沖鹽、檸檬酸緩沖鹽或Tris緩沖鹽等。
[0018]在上述方案基礎(chǔ)上，對于主動載藥脂質(zhì)體，所述的非水相按照處方量制備，由脂質(zhì)膜材、膽固醇以及脂溶性添加劑中的一種或幾種組成，經(jīng)適宜的有機(jī)溶劑溶解、混勻，最終除去有機(jī)溶劑，以脂質(zhì)膜或脂質(zhì)粉末的形式存在；所述的水相即內(nèi)水相，包括:藥物、含緩沖鹽的緩沖體系、PH調(diào)節(jié)劑、滲透壓調(diào)節(jié)劑、凍干保護(hù)劑、抗氧劑，所述的內(nèi)水相按照處方量的n倍制備；將水相加入非水相中，充分水化膨脹，形成多層脂質(zhì)體，結(jié)合剪切、均質(zhì)和/或擠壓減小粒徑，獲得空白脂質(zhì)體；采用超濾濃縮，恢復(fù)至處方量比例，如:將非水相和水相的比例恢復(fù)至1:1 ;利用層析柱或超濾設(shè)備將空白脂質(zhì)體小球的外圍置換成外水相，建立內(nèi)外跨膜梯度，向空白脂質(zhì)體溶液中加入適當(dāng)濃度的(按處方量)待包封的藥物溶液，孵育載藥。最后，過濾除菌，灌裝，加塞，壓蓋；或者過濾除菌，灌裝，半加塞，凍干，加塞，壓蓋。以n在4~6倍為佳。
[0019]即所述的內(nèi)水相一般是含有藥物的具有一定pH值和離子濃度的緩沖體系，如磷酸緩沖鹽、醋酸緩沖鹽、檸檬酸緩沖鹽或Tris緩沖鹽等，其中可以含有pH調(diào)節(jié)劑、滲透壓調(diào)節(jié)劑、凍干保護(hù)劑、抗氧劑等。
[0020]在上述方案基礎(chǔ)上，所述乳劑的非水相即油相由藥物，長鏈油、中鏈油、脂溶性乳化劑、脂溶性添加劑中的一種或幾種組成，溶解、混勻，以粘稠液體的形式存在，非水相以處方量制備；所述乳劑的水相即一般是具有一定PH調(diào)節(jié)劑、滲透壓調(diào)節(jié)劑的水體系，其中包含凍干保護(hù)劑、抗氧劑、矯味劑中的一種或多種，水相以處方量的n倍制備；以1:n比例在一定條件下混合油水兩相，形成粒徑較大的初乳；對所述的初乳進(jìn)一步剪切、均質(zhì)，然后采用超濾設(shè)備濃縮，恢復(fù)至處方比例1:1 ;然后灌裝、加塞、壓蓋、終端滅菌，或者過濾除菌、灌裝、加塞、壓蓋，或者過濾除菌、灌裝、半加塞、凍干、加塞、壓蓋。
[0021]在上述方案基礎(chǔ)上，所述的超濾設(shè)備中采用的超濾膜包的材質(zhì)可以是纖維素、聚醚砜或聚偏二氟乙烯等。材質(zhì)的選擇應(yīng)當(dāng)考慮物料與材質(zhì)的相容性，吸附程度等。
[0022]在上述方案基礎(chǔ)上，采用超濾設(shè)備濃縮物料，超濾膜包的截留分子量是I~1000Κ，截留分子量的選擇以在截留納米顆粒的前提下獲得較大的透過端流速為宜。
[0023]本發(fā)明的優(yōu)越性在于:易于將粒徑控制到100~150nm,甚至30~80 nm。避免高壓操作，均質(zhì)壓力和均質(zhì)次數(shù)減少，避免由于長時間均質(zhì)產(chǎn)生的局部高溫導(dǎo)致有關(guān)物質(zhì)增加，有助于減小安全隱患。目前脂質(zhì)體無法終端滅菌，高溫改變藥物和磷脂性質(zhì)，加速氧化水解，只能無菌操作結(jié)合過濾除菌，而粒徑的減小有助于過濾除菌。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0024]附圖1至4，為實施例1兩相比例分別為1:1、1:2、1:4、1:6粒徑圖，其中，圖1為兩相比例1:1，平均粒徑292 nm；? 2為兩相比例1: 2，平均粒徑134nm ；圖3為兩相比例1: 4，平均粒徑62 nm ;圖4為兩相比例1: 6，平均粒徑53 nm ；
附圖5至8，為實施例2兩相比例分別為1: 1、1: 2、1: 3、1:4粒徑圖，其中，圖5為兩相比m 1:1,平均粒徑190 nm；? 6為兩相比例1: 2，平均粒徑=125 nm；? 7為兩相比例1:1，平均粒徑102 nm ;圖8為兩相比例1:2,平均粒徑=84 nm。
【具體實施方式】
[0025]一種控制納米藥物載體粒徑的方法，納米藥物載體的粒徑在10~lOOOnm，包括非水相和水相，至少包括下述步驟:
第一，當(dāng)設(shè)定非水相:水相為1:1時，控制制備過程中所述的非水相和水相兩相混合時的體積比為1:n，得到混合均質(zhì)物料，其中，10>η>1 ；
第二，采用超濾設(shè)備濃縮物料、結(jié)合低壓均質(zhì)，使得非水相:水相的混合比為1:1 ； 第三，過濾除菌后測定粒徑；其中，
對于被動載藥，所述的非水相是制備過程中分散體系中的分散相，包括脂質(zhì)體中的脂質(zhì)膜、脂質(zhì)粉末或者乳劑中的油相；所述的水相是制備過程中的分散介質(zhì)，包括水或者緩沖體系，其中含有PH調(diào)節(jié)劑、滲透壓調(diào)節(jié)劑、凍干保護(hù)劑、抗氧劑中的一種或多種；
所述的非水相和水相的混合比為重量比、體積比或重量體積比。
[0026]下面實施例用于進(jìn)一步說明本發(fā)明，但并不以任何形式限制本發(fā)明所涉及的內(nèi)容。
[0027]實施例1:兩性霉素B脂質(zhì)體，為主動載藥脂質(zhì)體,非水相和水相的混合比為體積比。
【權(quán)利要求】
1.一種控制納米藥物載體粒徑的方法,納米藥物載體的粒徑在10~lOOOnm，包括非水相和水相，至少包括下述步驟: 第一，當(dāng)設(shè)定非水相:水相為1:1時，控制制備過程中所述的非水相和水相兩相混合時的體積比為1:n，得到混合均質(zhì)物料，其中，10>η>1 ； 第二，采用超濾設(shè)備濃縮物料、結(jié)合低壓均質(zhì)，使得非水相:水相的混合比為1:1 ； 第三，過濾除菌后測定粒徑； 其中，對于被動載藥，所述的非水相是制備過程中分散體系中的分散相，包括脂質(zhì)體中的脂質(zhì)膜、脂質(zhì)粉末或者乳劑中的油相；所述的水相是制備過程中的分散介質(zhì)，包括水或者緩沖體系，其中含有PH調(diào)節(jié)劑、滲透壓調(diào)節(jié)劑、凍干保護(hù)劑、抗氧劑中的一種或多種； 所述的非水相和水相的混合比為重量比、體積比或重量體積比。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的控制納米藥物載體粒徑的方法，其特征在于:所述的納米藥物載體為粒徑在1(T200 nm的脂質(zhì)體、乳劑、固體脂質(zhì)納米粒、納米囊、納米球、聚合物膠束。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的控制納米藥物載體粒徑的方法，其特征在于:對于被動載藥脂質(zhì)體，所述的非水相按照處方量制備，由藥物、脂質(zhì)膜材、膽固醇以及脂溶性添加劑中的一種或幾種組成，經(jīng)有機(jī)溶劑溶解、混勻，最終旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去有機(jī)溶劑，以脂質(zhì)膜或者脂質(zhì)粉末的形式存在；所述的水相即水化介質(zhì)為水或含藥水溶液，按照處方量的η倍制備，包括添加有緩沖鹽的緩沖體系、PH調(diào)節(jié)劑、滲透壓調(diào)節(jié)劑、凍干保護(hù)劑、抗氧劑；將所述的水相加入非水相中，充分水化膨脹，形成多層脂質(zhì)體，結(jié)合剪切、均質(zhì)和/或擠壓減小粒徑；采用超濾濃縮，將非水相和水相的比例恢復(fù)至1:1。
4.根據(jù)權(quán)利要求4所述的控制納米藥物載體粒徑的方法，其特征在于:所述的η為2~4。
5.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的控制納米藥物載體粒徑的方法，其特征在于:對于主動載藥脂質(zhì)體，所述的非水相按照處方量制備，由脂質(zhì)膜材、膽固醇以及脂溶性添加劑中的一種或幾種組成，經(jīng)有機(jī)溶劑溶解、混勻，除去有機(jī)溶劑，以脂質(zhì)膜或者脂質(zhì)粉末的形式存在；所述的水相即內(nèi)水相，包括:藥物、含緩沖鹽的緩沖體系、PH調(diào)節(jié)劑、滲透壓調(diào)節(jié)劑、凍干保護(hù)劑、抗氧劑，所述的內(nèi)水相按照處方量的η倍制備；將水相加入非水相中，充分水化膨脹，形成多層脂質(zhì)體，結(jié)合剪切、均質(zhì)和/或擠壓減小粒徑，獲得空白脂質(zhì)體；采用超濾濃縮，將非水相和水相的比例恢復(fù)至1:1 ;利用層析柱或超濾設(shè)備將空白脂質(zhì)體小球的外圍置換成外水相，建立內(nèi)外跨膜梯度，向空白脂質(zhì)體溶液中加入待包封的藥物溶液，孵育載藥。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的控制納米藥物載體粒徑的方法，其特征在于:所述的η為4~6。
7.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的控制納米藥物載體粒徑的方法，其特征在于:所述乳劑的非水相即油相由藥物，長鏈油、中鏈油、脂溶性乳化劑、脂溶性添加劑中的一種或幾種組成，溶解、混勻，以粘稠液體的形式存在，非水相以處方量制備；所述乳劑的水相即是包括pH調(diào)節(jié)劑、滲透壓調(diào)節(jié)劑的水體系，其中還包含凍干保護(hù)劑、抗氧劑、矯味劑中的一種或多種，水相以處方量的η倍制備；以1:η體積比混合油水兩相，形成粒徑較大的初乳；對所述的初乳進(jìn)一步剪切、均質(zhì)，然后采用超濾設(shè)備濃縮，恢復(fù)至處方比例1:1 ;然后灌裝、加塞、壓蓋、終端滅菌，或者過濾除菌、灌裝、加塞、壓蓋，或者過濾除菌、灌裝、半加塞、凍干、加塞、壓蓋。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的控制納米藥物載體粒徑的方法，其特征在于:所述的超濾設(shè)備中采用的超濾膜包的材質(zhì)為纖維素、聚醚砜或聚偏二氟乙烯。
9.根據(jù)權(quán)利要求1或8所述的控制納米藥物載體粒徑的方法，其特征在于:采用超濾設(shè)備濃縮物料 ，超濾膜包的截留分子量是I~1000K。
【文檔編號】A61K9/14GK103735510SQ201310733419
【公開日】2014年4月23日 申請日期:2013年12月27日 優(yōu)先權(quán)日:2013年12月27日
【發(fā)明者】鄭玉林, 陳玉雙 申請人:上海新亞藥業(yè)有限公司