一種殺菌液的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及到一種可治療牛皮癬等多種皮膚病的殺菌液，采用的生物原料有海紅、海螺、牡蠣、蛤殼、柳樹菇、蜈蚣。本制劑可殺滅多種皮膚病菌,特別對頑固性牛皮癬,還有濕疹、腋臭、灰指甲、疥癬、瘙癢、植物性過敏等都有良好治療效果且無任何毒副作用。具有高效、快捷、復(fù)發(fā)率低等特點，采用患處低濃度藥液清洗、高濃度藥液擦拭的雙管齊下的療法。它既省錢又療效快，治療非常簡單方便。本發(fā)明不含任何無機(jī)化學(xué)添加劑而只用水做浸出劑,是一種綠色藥物。
【專利說明】一種殺菌液
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明是涉及一種治療皮膚病殺菌液。
【背景技術(shù)】
[0002]牛皮癬(銀屑病)是一種常見的易反復(fù)發(fā)作的皮膚頑癥，我國屬高發(fā)區(qū)，并較難治愈。此病雖然不危及生命，但卻使患者皮肉搔癢、鱗屑脫落，甚至血痕斑斑，既影響患者的美觀，又給患者的精神和身體帶來不可言喻的痛苦，許多患者因得不到及時有效的治療，使病情拖延日久，身體衰弱，引起各種并發(fā)癥，影響心、肝、腎等功能，有的還把病遺傳給后代。
[0003]對于牛皮癬，目前國內(nèi)多采用中西醫(yī)結(jié)合的方法進(jìn)行治療，如煎中藥湯洗，外抹藥膏藥水、睡眠療 法、放血療法、注射等等；國外還有采用激素治療等，上述各種治療方法雖有一定的療效，可是見效快復(fù)發(fā)也快，并且有一定的副作用。
[0004]多功能牛皮癬殺菌液CN200310105020，本發(fā)明涉及到一種可治療牛皮癬等多種皮膚病的殺菌液，即多功能牛皮癬殺菌液。長期以來象牛皮癬之類的許多皮膚病一直缺乏較好的藥物，療效差而多有反復(fù)性。本發(fā)明采用多種生物為原料制成生物制劑的辦法取得良好效果，此即多功能牛皮癬殺菌液。采用的生物原料有海紅、海螺、牡蠣、蛤殼、柳樹菇、蜈蚣。本制劑可殺滅多種皮膚病菌，特別對頑固性牛皮癬，還有濕疹、腋臭、灰指甲、疥癬、瘙癢、植物性過敏等都有良好治療效果且無任何毒副作用。本發(fā)明不含任何無機(jī)化學(xué)添加劑而只用水做浸出劑，是一種綠色藥物。
[0005]透骨草民間用全草入藥，治感冒、跌打損傷，外用治毒瘡、濕疹、疥瘡。根及葉的鮮汁或水煎液對菜粉蝶、家蠅和三帶喙庫蚊的幼蟲有強(qiáng)烈的毒性。根含透骨草素(phrymarolin)及透骨草醇乙酸酯(leptostachyol acetate),后者為殺蟲成分。民間用全草煎水消滅蠅蛆和菜青蟲。
[0006]山茱萸(學(xué)名:Cornus officinalis),山茱萸科落葉灌木或小喬木。其成熟果實為中藥，別名山萸肉、藥棗、棗皮、蜀酸棗、肉棗、薯棗、雞足、實棗、萸肉、藥棗、天木籽、山芋肉、實棗兒；山茱萸味酸、澀性，微溫。歸肝、腎經(jīng)。補(bǔ)益肝腎，澀精固脫。用于眩暈耳鳴，腰膝酸痛，陽痿遺精，遺尿尿頻，崩漏帶下，大汗虛脫，內(nèi)熱消渴，為固澀藥.
【發(fā)明內(nèi)容】
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[0007]本發(fā)明的目的在于提供一種針對真菌感染的皮膚病具有高效、快捷、復(fù)發(fā)率低等特點的殺菌液藥劑，采用患處低濃度藥液清洗、高濃度藥液擦拭的雙管齊下的療法。它既省錢又療效快，治療非常簡單方便。
[0008]本發(fā)明所述殺菌液的重量份數(shù)組成如下:
[0009]天麻粉3-6份，山茱萸提取物5-10份，透骨草提取物6-12份，枯草芽孢桿菌發(fā)酵液提取物15-25份，黃芩提取物1-9份，含氯化氫36% — 38%的濃鹽酸8_13份，碘酒1_3份，水9-25份；
[0010]所述透骨草提取物制備方法如下:[0011]稱取透骨草；將其粉碎至粒徑為2毫米以下，然后于容器中均勻混合并添加3-6倍重量的水，控制溫度70°C _90°C保持2-4h，添加混合物料2-3倍重量的乙醇和丙醇的混合物，控制溫度至60°C _78°C保持3-4h，過濾；濾液真空濃縮后冷凍干燥獲得透骨草提取物。
[0012]所述乙醇和丙醇的質(zhì)量比例為1:1-1.3 ;乙醇濃度為95% ;丙醇濃度為100% ；
[0013]所述山茱萸提取物的制備方法如下:
[0014]將山茱萸粉碎至粒徑為2毫米以下置于容器中，添加3-6倍重量的水，控制溫度400C _60°C保持2-4h，控制溫度至65°C _75°C保持3_5h，添加混合物料2_3倍重量的乙醇和甲醇的混合物，控制溫度至30°C _40°C保持3-8h，過濾；濾液真空濃縮后冷凍干燥獲得山茱萸提取物。
[0015]所述乙醇和甲醇的質(zhì)量比例為1:2，乙醇濃度85-95%。甲醇濃度100%.[0016]所述黃芩提取物制備方法如下:
[0017]稱取黃芪；將其粉碎至粒徑為2毫米以下，然后置于容器中添加3-6倍重量的水，控制溫度75°C~80°C保持2~4h，然后降溫至45-60°C，加入混合酶制劑進(jìn)行酶解，用乳酸調(diào)節(jié)pH值為5.5-6.8，酶解2-4h，最后添加混合物料0.5_3倍重量的乙醇和丙醇的混合物，控制溫度至60°C~78°C保持3~4h，過濾；濾液真空濃縮后冷凍干燥獲得黃芪提取物。
[0018]所述混合酶制劑添加量為混合物料總重量的5_10%。
[0019]所述混合酶制劑的重量份數(shù)組成為:內(nèi)葡聚糖酶10-20份，外葡聚糖酶10-20份，β-葡萄糖苷酶10-15份，木聚糖酶15-20份，β -淀粉酶10-15份，中性蛋白酶10-15 份。
[0020]所述枯草芽孢桿菌發(fā)酵液提取物制備方法如下:
[0021]所述菌株具體為枯草芽孢`桿菌(Bacillus subtilis)突變株HYX-008。該菌株已于2013年7月15日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(簡稱CGMCC，地址為:中國北京市朝陽區(qū)北辰西路I號院3號)，保藏號為CGMCC7926。
[0022]菌種特征如下:
[0023]1.菌體細(xì)胞呈直桿狀、芽孢中生或近端生的革蘭氏陽性。
[0024]2.菌落特征為白色圓形，隆起，表面光滑，不透明，濕潤，挑起粘連。
[0025]3.能夠利用多種糖類，如葡萄糖、半乳糖、木糖、纖維二糖、棉籽糖等；產(chǎn)淀粉酶、蛋白酶、能夠水解明膠，V.P、甲基紅陽性。
[0026]4.最適培養(yǎng)溫度37 °C，最適ρΗ7.0。
[0027]所述枯草芽孢桿菌發(fā)酵液提取物是枯草芽孢桿菌發(fā)酵液中含有的抑菌物質(zhì)，所述抑菌物質(zhì)可以有效抑制牛皮癬的復(fù)發(fā)。1-2%濃度的抑菌物質(zhì)溶液可以有效抑制牛皮癬的復(fù)發(fā)。
[0028]從發(fā)酵液中提取抑菌物質(zhì)的方法為有機(jī)溶劑沉淀法:
[0029]首先將發(fā)酵液高速離心，溫度0-4°C，轉(zhuǎn)速為7000轉(zhuǎn)/分鐘，離心十分鐘，保留上清液；上清液中加入等體積有機(jī)溶劑(甲醇:乙醇=1:3)，充分溶解后置于三口燒瓶中，水浴控制溫度50攝氏度，攪拌速度為40rpm，時間為4小時，收集有機(jī)相，采用真空蒸餾法除去有機(jī)溶劑。蒸餾溫度45-65°C，蒸餾20分鐘，將有機(jī)溶劑去除。收集沉淀物質(zhì)即得。
[0030]本菌種分類地位如下:細(xì)菌域(Bacteria);厚壁菌門(Firmicutes);芽孢桿菌綱(Bacillales)；芽孢桿菌目(Bacillaceae)；芽孢桿菌科(Bacillus)；芽孢桿菌屬(Bacillus);枯草芽抱桿菌種(Bacillus subtilis)。
[0031]所述殺菌液的制備方法如下:
[0032]將上述幾種物質(zhì)按照比例混合均勻，灌裝，殺菌包裝即可。
[0033]有益效果:
[0034]1、藥物滲透性極佳，殺菌面深而廣；藥物化解能力極強(qiáng)，真菌入侵產(chǎn)生的毒素，瞬間就被解除；達(dá)到聞效、聞速。
[0035]2、操作雖然嚴(yán)格，但是治療簡單，在專業(yè)人員指導(dǎo)下易于掌握。
[0036]3、藥物廉價，使用時只要極少的藥量，治療一個部位僅需0.5-lg，病人經(jīng)濟(jì)實惠。
[0037]4、沒有任何毒性，且治愈率很高。
[0038]5、本發(fā)明產(chǎn)品采用中藥材有效提取成分和枯草芽孢桿菌發(fā)酵提取物，進(jìn)行有機(jī)組合，組合產(chǎn)物對治療常見牛皮癬等皮膚病療效顯著。
【具體實施方式】
[0039] 下面的實施例可以使本領(lǐng)域技術(shù)人員更全面地理解本發(fā)明，但不以任何方式限制本發(fā)明。
[0040]菌株具體為枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)突變株，保藏號為CGMCC7926。
[0041]所述菌株由酸性土壤分離的野生菌L1002經(jīng)反復(fù)的紫外誘變及亞硝基胍誘變篩選獲得，特性是產(chǎn)耐高溫α -淀粉酶的酶活力高，耐熱、耐酸性強(qiáng)。
[0042]本發(fā)明所制備的耐高溫α -淀粉酶酶活力為30000-35000u/ml ;適用溫度范圍為105-115°C，最適反應(yīng)溫度110°C，在110°C酶活完全穩(wěn)定；適用反應(yīng)pH值范圍為3.0-7.0，在PH值為3.0時酶活完全穩(wěn)定，最適反應(yīng)pH值為4.2。
[0043]本發(fā)明所獲得菌株在調(diào)整條件進(jìn)行發(fā)酵時，意外發(fā)現(xiàn)發(fā)酵液提取物中含有高效殺菌物質(zhì)，殺菌物質(zhì)具有良好的預(yù)防和治療牛皮癬皮膚病的效果，發(fā)明人進(jìn)而利用本發(fā)明開發(fā)了此款產(chǎn)品。
[0044]實施例1:
[0045]殺菌液的重量份數(shù)組成如下:
[0046]天麻粉5份，山茱萸提取物8份，透骨草提取物10份，枯草芽孢桿菌發(fā)酵液提取物20份，黃芩提取物5份，含氯化氫36% — 38%的濃鹽酸10份，碘酒2份，水20份；
[0047]所述透骨草提取物制備方法如下:
[0048]稱取透骨草；將其粉碎至粒徑為2毫米以下，然后于容器中均勻混合并添加5倍重量的水，控制溫度80°C保持3h，添加混合物料3倍重量乙醇和丙醇的混合物，控制溫度至75°C保持3h，過濾；濾液真空濃縮后冷凍干燥獲得。
[0049]所述乙醇和丙醇的質(zhì)量比例為1:1 ;乙醇濃度為95% ;丙醇濃度為100% ；
[0050]所述山茱萸提取物的制備方法如下:
[0051 ] 將粉碎至粒徑為2毫米以下山茱萸置于容器中，添加5倍重量的水，控制溫度50°C保持3h，控制溫度至70°C保持4h，添加混合物料3倍重量乙醇和甲醇的混合物，控制溫度至35°C保持5h，過濾；濾液真空濃縮后冷凍干燥獲得山茱萸提取物。
[0052]所述乙醇和甲醇的質(zhì)量比例為1:2，乙醇濃度85%，甲醇濃度100%。
[0053]黃芩提取物制備方法如下:[0054]稱取黃芪；將其粉碎至粒徑為2毫米以下，然后于容器中添加5倍重量的水，控制溫度75°C保持3h，然后降溫至55°C，加入混合酶制劑進(jìn)行酶解，用乳酸調(diào)節(jié)pH值為6，酶解3h，最后添加混合物料2倍重量乙醇和丙醇的混合物，控制溫度至70°C保持3h，過濾；濾液真空濃縮后冷凍干燥獲得。
[0055]所述混合酶添加量為混合物料總重量的6%。
[0056]所述混合酶的重量份數(shù)組成為:內(nèi)葡聚糖酶13份，外葡聚糖酶15份，β -葡萄糖苷酶12份，木聚糖酶16份，β -淀粉酶12份，中性蛋白酶12份。
[0057]枯草芽孢桿菌發(fā)酵液提取物制備方法如下:
[0058]菌株具體為枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)。該菌株已于2013年7月15日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(簡稱CGMCC，地址為:中國北京市朝陽區(qū)北辰西路I號院3號)，保藏號為CGMCC7926。
[0059](I)菌種活化
[0060]將保存完好的枯草芽孢桿菌的斜面菌種接種于斜面培養(yǎng)基，40°C培養(yǎng)30h進(jìn)行菌種活化，如此活化2-3次；
[0061]所述斜面培養(yǎng)基組成為:牛肉膏6g,氯化鈉IOg,蛋白胨15g,葡萄糖3g,瓊脂18g,蒸懼水 1000mL, pH 值 6,121°C滅菌 20min ；
[0062](2)液體種子 擴(kuò)大培養(yǎng)
[0063]①一級種子培養(yǎng):將步驟(1)活化后的斜面菌種1-2環(huán)接入500毫升搖瓶中，培養(yǎng)基裝量100毫升，旋轉(zhuǎn)式搖床180轉(zhuǎn)/分，培養(yǎng)溫度40°C，培養(yǎng)時間12h ；
[0064]②二級種子培養(yǎng):將一級種子按照10%的接種量接入500毫升二級種子搖瓶中，培養(yǎng)條件與一級種子相同；
[0065]③三級種子培養(yǎng):將二級種子以10%接種量接入5000毫升三級種子搖瓶中，培養(yǎng)基裝量1000毫升，旋轉(zhuǎn)式搖床100轉(zhuǎn)/分，培養(yǎng)溫度40°C，培養(yǎng)時間12h ；
[0066]④一級種子罐培養(yǎng):將三級種子以10%接種量接入總?cè)莘e為150L的一級種子罐，發(fā)酵培養(yǎng)基裝量100L，培養(yǎng)溫度40°C，攪拌速度300rpm，通風(fēng)量(V/V) 1:1,罐壓0.05Mpa，培養(yǎng)時間15h ；
[0067]所述一級、二級、三級種子培養(yǎng)基重量組成為:
[0068]酵母粉0.3%，葡萄糖1.5%，蛋白胨0.3%，牛肉膏0.5%，磷酸氫二鉀0.8%，硫酸鈣Ig,氯化鎂2g,檸檬酸鈉lg，不足部分純凈水補(bǔ)足，pH值5,121°C滅菌30min。
[0069]所述種子罐培養(yǎng)基重量組成為:
[0070]麥芽糊精10%，酵母粉0.4%，蛋白胨0.3%，玉米漿0.4%，磷酸氫二鉀1.0%，硫酸鎂
0.08%，檸檬酸鈉0.3%，不足部分純凈水補(bǔ)足，pH值6，121°C滅菌30min。
[0071]所述種子罐發(fā)酵液菌體濃度為7.0x108個/ml ；
[0072](3)發(fā)酵罐發(fā)酵
[0073]將步驟(2)中一級種子罐發(fā)酵液以6%接種量接入發(fā)酵罐，培養(yǎng)溫度36°C，攪拌速度300r/m，通風(fēng)量(V/V) 1:2，培養(yǎng)時間36h。
[0074]溶解氧控制:通過調(diào)整攪拌轉(zhuǎn)速及通風(fēng)量，控制溶解氧20% ；
[0075]PH控制:通過補(bǔ)氨水或稀磷酸，控制發(fā)酵過程中pH值保持在5 ；
[0076]補(bǔ)料控制:當(dāng)發(fā)酵液中的還原糖含量降至3mg/ml時,開始添加補(bǔ)料培養(yǎng)基,補(bǔ)料量以維持發(fā)酵液還原糖含量為4mg/ml ；
[0077]放罐標(biāo)準(zhǔn):40%菌體衰老自溶。
[0078]所述發(fā)酵培養(yǎng)基組成為:麥芽糊精100g，玉米粉50g，豆餅粉25g，透骨草10g，黃芩20g，酵母粉6g，玉米漿3g，硫酸銨2g，磷酸氫二鉀lg，磷酸二氫鉀lg，檸檬酸鈉3g，消泡劑
0.1g,純凈水 1000mL，pH 值 6，121°C滅菌 20min ；
[0079]所述補(bǔ)料培養(yǎng)基重量組成為:麥芽糊精25%，玉米粉15%，豆粉20%，不足部分純凈水補(bǔ)足，pH值6,121°C滅菌30min。
[0080]所述發(fā)酵培養(yǎng)基的調(diào)配方法為:
[0081]按比例準(zhǔn)確稱取原料，將原料中的純凈水、玉米粉、豆餅粉投入配料罐中，調(diào)節(jié)PH值6，加入中溫淀粉酶(3u/g玉米粉)與高溫淀粉酶(30u/g玉米粉)，同時邊攪拌邊升溫至70°C保溫15min，然后緩慢升溫至90°C保溫30min進(jìn)行液化，最后加入其它原料，攪拌均勻，調(diào)初始pH6,121°C滅菌30min備用。
[0082]從發(fā)酵液中提取抑菌物質(zhì)方法為有機(jī)溶劑沉淀法:
[0083]首先將發(fā)酵液高速離心，溫度2°C，轉(zhuǎn)速為7000轉(zhuǎn)/分鐘，離心十分鐘，保留上清液；上清液中加入等體積有機(jī)溶劑(甲醇:乙醇=1:3)，充分溶解后置于三口燒瓶中，水浴控制溫度50攝氏度，攪拌速度為40rpm，時間為4小時，收集有機(jī)相，采用真空蒸餾法除去有機(jī)溶劑。蒸餾溫度55°C，蒸餾20分鐘，將有機(jī)溶劑去除。收集沉淀物質(zhì)即得。
[0084]所述殺菌液的制備方法如下:將上述幾種物質(zhì)按照比例混合均勻，灌裝，殺菌包裝即可。
[0085]實施例2:
[0086]殺菌液的重量份數(shù)組成如下:
[0087]天麻粉3份，山茱萸提取物8份，透骨草提取物6份，枯草芽孢桿菌發(fā)酵液提取物25份，黃芩提取物9份，含氯化氫36%的濃鹽酸8份，碘酒3份，水21份。
[0088]實施例4:實驗效果
[0089]實例:治療牛皮癬
[0090]2007年浙江松陽縣齋坦鄉(xiāng)花橋頭村的周玉法，年齡28歲。觀察到的病情，左面項頸連肩部附近，約有10平方厘米的表面，有銀白色燥皮屑脫落，時間有8年了。里面發(fā)癢，十分難受。一搔才知皮下紅腫發(fā)炎。右面項頸連肩部附近約有10多平方厘米的表面，跟左面不同，卻是一片黑色，撕開少量的黑皮，皮下也紅腫發(fā)炎，不堪忍受?；颊哒f到鄉(xiāng)衛(wèi)生院、縣醫(yī)院求醫(yī)多年均無效。
[0091]診斷:屬于重癥牛皮癬。①先用防蔓延抗復(fù)發(fā)的清洗液擦洗一次。②由于患者年輕力壯，承受力強(qiáng)，病歷也較長。為了高速治病，清洗隔10分鐘，馬上用此高檔殺菌液對患部擦拭5— 7秒鐘。 值得提醒的是:取藥棉時必須十分小心，先用鑷子夾住I立方厘米大小的棉球，打開瓶口，即插入藥劑中，然后拉至瓶口稍稍揉壓，濕度如同酒精棉。先蓋好瓶口，再到患部擦拭?？炻悦脶樧邉拥乃俣葹闇?zhǔn)。第二次施藥中間隔2天。以此類推，左頸患部治療4次，右頸患部也治療4次，一共8次。幾年了，周玉法頸部安然無恙，一直在松陽縣城做工。
[0092]采用此方法用本發(fā)明產(chǎn)品先后治愈100多例此類病人。
【權(quán)利要求】
1.殺菌液，重量份數(shù)組成如下:天麻粉3-6份，山茱萸提取物5-10份，透骨草提取物.6-12份，枯草芽孢桿菌發(fā)酵液提取物15-25份，黃芩提取物1-9份，含氯化氫36% — 38%的濃鹽酸8-13份，碘酒1-3份，水9-25份； 所述枯草芽孢桿菌發(fā)酵液提取物制備方法如下: 所述菌株具體為枯草芽抱桿菌(Bacillus subtilis) CGMCC7926。 從發(fā)酵液中提取抑菌物質(zhì)的方法為有機(jī)溶劑沉淀法: 首先將發(fā)酵液高速離心，溫度0-4°C，轉(zhuǎn)速為7000轉(zhuǎn)/分鐘，離心十分鐘，保留上清液；上清液中加入等體積有機(jī)溶劑(甲醇:乙醇=1:3)，充分溶解后置于三口燒瓶中，水浴控制溫度50攝氏度，攪拌速度為40rpm，時間為4小時，收集有機(jī)相，采用真空蒸餾法除去有機(jī)溶劑。蒸餾溫度45-65°C，蒸餾20分鐘，將有機(jī)溶劑去除。收集沉淀物質(zhì)即得。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述殺菌液，其特征在于所述透骨草提取物制備方法如下: 稱取透骨草；將其粉碎至粒徑為2毫米以下，然后于容器中均勻混合并添加3-6倍重量的水，控制溫度70°C _90°C保持2-4h，添加混合物料2-3倍重量的乙醇和丙醇的混合物，控制溫度至60°C _78°C保持3-4h，過濾；濾液真空濃縮后冷凍干燥獲得透骨草提取物。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述殺菌液，其特征在于所述山茱萸提取物的制備方法如下: 將山茱萸粉碎至粒徑為2毫米以下置于容器中，添加3-6倍重量的水，控制溫度.400C _60°C保持2-4h，控制溫度至65°C _75°C保持3_5h，添加混合物料2_3倍重量的乙醇和甲醇的混合物，控制溫 度至30°C _40°C保持3-8h，過濾；濾液真空濃縮后冷凍干燥獲得山茱萸提取物。 所述乙醇和甲醇的質(zhì)量比例為1:2，乙醇濃度85-95%。甲醇濃度100%.
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述殺菌液，其特征在于所述黃芩提取物制備方法如下: 稱取黃芪；將其粉碎至粒徑為2毫米以下，然后置于容器中添加3-6倍重量的水，控制溫度75°C~80°C保持2~4h，然后降溫至45-60°C，加入混合酶制劑進(jìn)行酶解，用乳酸調(diào)節(jié)pH值為5.5-6.8，酶解2-4h，最后添加混合物料0.5-3倍重量的乙醇和丙醇的混合物，控制溫度至60°C~78°C保持3~4h，過濾；濾液真空濃縮后冷凍干燥獲得黃芪提取物。 所述混合酶制劑添加量為混合物料總重量的5-10%。 所述混合酶制劑的重量份數(shù)組成為:內(nèi)β -葡聚糖酶10-20份,外β-葡聚糖酶10-20份，葡萄糖苷酶10-15份，木聚糖酶15-20份，β-淀粉酶10-15份，中性蛋白酶10-15份。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述殺菌液，其特征在于所述殺菌液的制備方法如下: 將上述幾種物質(zhì)按照比例混合均勻，灌裝，殺菌包裝即可。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述殺菌液，其特征在于所述殺菌液的重量份數(shù)組成如下: 天麻粉5份，山茱萸提取物8份，透骨草提取物10份，枯草芽孢桿菌發(fā)酵液提取物20份，黃芩提取物5份，含氯化氫36% — 38%的濃鹽酸10份，碘酒2份，水20份。
7.根據(jù)權(quán)利要求1或6所述殺菌液，其特征在于所述枯草芽孢桿菌發(fā)酵液提取物制備方法如下:
菌株 CGMCC7926 ； (I)菌種活化 將保存完好的枯草芽孢桿菌的斜面菌種接種于斜面培養(yǎng)基，40°C培養(yǎng)30h進(jìn)行菌種活化,如此活化2-3次； 所述斜面培養(yǎng)基組成為:牛肉膏6g,氯化鈉IOg,蛋白胨15g,葡萄糖3g,瓊脂18g,蒸懼水 1000mL, pH 值 6，121°C滅菌 20min ； (2)液體種子擴(kuò)大培養(yǎng) ①一級種子培養(yǎng):將步驟(1)活化后的斜面菌種1-2環(huán)接入500毫升搖瓶中，培養(yǎng)基裝量100毫升，旋轉(zhuǎn)式搖床180轉(zhuǎn)/分，培養(yǎng)溫度40°C，培養(yǎng)時間12h ； ②二級種子培養(yǎng):將一級種子按照10%的接種量接入500毫升二級種子搖瓶中，培養(yǎng)條件與一級種子相同； ③三級種子培養(yǎng):將二級種子以10%接種量接入5000毫升三級種子搖瓶中，培養(yǎng)基裝量1000毫升，旋轉(zhuǎn)式搖床100轉(zhuǎn)/分，培養(yǎng)溫度40°C，培養(yǎng)時間12h ； ④一級種子罐培養(yǎng):將三級種子以10%接種量接入總?cè)莘e為150L的一級種子罐，發(fā)酵培養(yǎng)基裝量100L，培養(yǎng)溫度40°C，攪拌速度300rpm，通風(fēng)量(V/V)l:l，罐壓0.05Mpa，培養(yǎng)時間15h ； 所述一級、二級、三級種子培養(yǎng)基重量組成為: 酵母粉0.3%，葡萄糖1.5%，蛋白胨0.3%，牛肉膏0.5%，磷酸氫二鉀0.8%，硫酸鈣Ig,氯化鎂2g，檸檬酸鈉lg，不足部分純凈水補(bǔ)足，pH值5，121°C滅菌30min。 所述種子罐培養(yǎng)基重量組成為: 麥芽糊精10%，酵母粉0.4%，蛋白胨0.3%，玉米漿0.4%，磷酸氫二鉀1.0%，硫酸鎂.0.08%，檸檬酸鈉0.3%，不足部分純凈水補(bǔ)足，pH值6，121°C滅菌30min。 所述種子罐發(fā)酵液菌體濃度為7.0x108個/ml ； (3)發(fā)酵罐發(fā)酵 將步驟(2)中一級種子罐發(fā)酵液以6%接種量接入發(fā)酵罐，培養(yǎng)溫度36°C，攪拌速度.300r/m，通風(fēng)量(V/V) 1:2，培養(yǎng)時間36h。 溶解氧控制:通過調(diào)整攪拌轉(zhuǎn)速及通風(fēng)量，控制溶解氧20% ； PH控制:通過補(bǔ)氨水或稀磷酸，控制發(fā)酵過程中pH值保持在5 ； 補(bǔ)料控制:當(dāng)發(fā)酵液中的還原糖含量降至3mg/ml時，開始添加補(bǔ)料培養(yǎng)基，補(bǔ)料量以維持發(fā)酵液還原糖含量為4mg/ml ； 放罐標(biāo)準(zhǔn):40%菌體衰老自溶。 從發(fā)酵液中提取抑菌物質(zhì)方法為有機(jī)溶劑沉淀法: 首先將發(fā)酵液高速離心，溫度2°C，轉(zhuǎn)速為7000轉(zhuǎn)/分鐘，離心十分鐘，保留上清液；上清液中加入等體積有機(jī)溶劑(甲醇:乙醇=1:3)，充分溶解后置于三口燒瓶中，水浴控制溫度50攝氏度，攪拌速度為40rpm，時間為4小時，收集有機(jī)相，采用真空蒸餾法除去有機(jī)溶劑。蒸餾溫度55°C，蒸餾20分鐘，將有機(jī)溶劑去除。收集沉淀物質(zhì)即得。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述殺菌液，其特征在于所述殺菌液的重量份數(shù)組成如下: 天麻粉3份，山茱萸提取物8份，透骨草提取物6份，枯草芽孢桿菌發(fā)酵液提取物25份，黃芩提取物9份，含氯化氫36%的濃鹽酸8份，碘酒3份，水21份。
【文檔編號】A61K33/18GK103735873SQ201310741752
【公開日】2014年4月23日 申請日期:2013年12月28日 優(yōu)先權(quán)日:2013年12月28日
【發(fā)明者】邵素英, 孔日祥 申請人:邵素英