使用與羧胺三唑乳清酸鹽的適時組合療法增強細胞毒性藥物敏感性的方法及組合物的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及使用與羧胺三唑乳清酸鹽的組合療法通過靶向在腫瘤微環(huán)境中誘導(dǎo)的導(dǎo)致耐藥性的細胞毒性藥物的干擾機制來增強它們的敏感性。用羧三唑乳清酸鹽滴定特定劑量的細胞毒性藥物以改善細胞毒性藥物的敏感性和抗癌活性。
【專利說明】使用與羧胺三唑乳清酸鹽的適時組合療法增強細胞毒性藥 物敏感性的方法及組合物
[0001] 其他申請的交叉引用
[0002] 本申請是2010年9月3日提交的第12/807, 415號美國專利申請?zhí)柕牟糠盅永m(xù)申 請，而該申請又為2009年9月4日提交的第12/584,448號美國專利申請?zhí)柕牟糠盅永m(xù)申 請，它們的全部內(nèi)容通過引用并入本文。 發(fā)明領(lǐng)域
[0003] 本發(fā)明涉及采用與羧胺三唑乳清酸鹽（CT0)的組合療法，通過靶向腫瘤微環(huán)境中 細胞毒性藥物的初始機制來增強惡性腫瘤中細胞毒性化學(xué)治療和生物藥物（統(tǒng)稱為"細胞 毒性"藥物）的敏感性和/或耐藥性的后續(xù)發(fā)展。更具體地，本發(fā)明涉及與多靶向小分子 CT0組合的特異性細胞毒性藥物的方法和組合物，其用于改善細胞毒性藥物的敏感性、調(diào)節(jié) 由腫瘤微環(huán)境中細胞毒性藥物誘導(dǎo)的機制并防止或降低耐藥性的發(fā)展，由此導(dǎo)致細胞毒性 藥物效能的增強。此類精心設(shè)計的包括滴定量的細胞毒性藥物和CT0的組合療法實現(xiàn)最大 效能，而無需依靠與嚴重毒性有關(guān)的劑量密集策略。這樣的組合治療系統(tǒng)會改善患者的生 活質(zhì)量。
[0004] 發(fā)明背景
[0005] 如今，在大多數(shù)癌癥患者的治療過程期間有時會使用細胞毒性藥物。細胞毒性藥 物可以治療一些原發(fā)癌和轉(zhuǎn)移癌，并在許多類型的癌癥中有效降低腫瘤體積、治療癥狀及 甚至延長壽命。癌癥患者中細胞毒性藥物的起始劑量是基于食品藥品監(jiān)督管理局對抗癌藥 非臨床評價（ICHS9)的指南所要求的、體外不同腫瘤細胞系和體內(nèi)動物腫瘤模型中的治療 劑量的臨床前評價。實驗性異種移植腫瘤模型中，劑量反應(yīng)曲線通常在線性階段較陡，并當 腫瘤處于劑量反應(yīng)曲線的線性階段時劑量降低，在觀察到抗腫瘤活性降低之前通常會導(dǎo)致 有效治療腫瘤的能力損失。盡管異種移植模型可能不代表人類惡性腫瘤的理想模型，但一 般原則已用于臨床情況。這樣的在劑量中的經(jīng)驗性修改代表了對患有藥物敏感性腫瘤的、 接受佐劑或晚期疾病設(shè)定的化學(xué)治療的患者治療失效的主要原因。
[0006] 對接受細胞毒性藥物的、患有藥物敏感性腫瘤的患者治療失效的另一原因是細胞 毒性藥物對腫瘤微環(huán)境的效應(yīng)，因為化學(xué)治療可引起能夠干擾其對腫瘤本身的抗腫瘤活性 的機制。本發(fā)明所提供的方法包括CT0以調(diào)節(jié)微環(huán)境中由細胞毒性藥物誘導(dǎo)的早期和后期 的變化，從而最小化對其抗腫瘤活性的干擾以改善化學(xué)治療的敏感性，從而實現(xiàn)治療成功。 更具體地，選擇CT0作為組合靶向藥物以控制腫瘤微環(huán)境中誘導(dǎo)的干擾細胞毒性藥物的敏 感性和效能的幾種機制。
[0007] 由于在20世紀50年代和20世紀60年代中出現(xiàn)產(chǎn)生用于患有幾種類型的實體瘤 和惡性血液病的患者的有療效的治療策略的化學(xué)治療，因此對能夠?qū)е履退幮缘倪z傳改變 的理解已提供了創(chuàng)新的治療策略；但不幸的是，在此之前，在確定實現(xiàn)治療成功所需的敏感 性和有效劑量方面，這些研究沒有考慮到化學(xué)治療對腫瘤微環(huán)境的早期效應(yīng)。本發(fā)明提供 了方法，其用于i)評價細胞毒性藥物對特定腫瘤類型的微環(huán)境的效應(yīng)，ii)鑒別調(diào)節(jié)抗癌 活性或干擾抗癌活性的機制，iii)選擇最小化或防止干擾抗癌活性的機制的組合藥物，例 如CTO, iv)確定細胞毒性藥物和與CTO的組合化學(xué)治療之間的藥效相互作用，以及v)確定 細胞毒性藥物和CTO的最佳組合以實現(xiàn)最大效能和最小毒性。
[0008] 換言之，本發(fā)明提供了用于確定細胞毒性化學(xué)治療的有效劑量的方法，該化學(xué)治 療基于通過使其與羧胺三唑乳清酸鹽（CT0)(-種羧胺三唑（CAI)的乳清酸鹽）結(jié)合以增 強其敏感性。CAI是受體操縱性鈣通道介導(dǎo)的鈣流入的抑制劑，并在一些人類癌細胞系（包 括人成膠質(zhì)細胞瘤細胞）中顯示出具有抗增殖和防侵入作用（Ge等，2000)。通過中斷作 為第二信使的鈣代謝作用，CAI可以抑制鈣敏感性信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，包括花生四烯酸及其代 謝產(chǎn)物的釋放；一氧化氮的釋放；肌醇磷酸鹽的生成；和酪氨酸磷酸化（Ge等，2000 ;Kohn 等，1992)。CAI抑制細胞蛋白STATS和CrkL的磷酸化，并通過下調(diào)bcr-abl來誘導(dǎo)耐甲磺 酸伊馬替尼的慢性骨髓性白血病細胞的凋亡（Alessandro等，2008)。CT0靶向腫瘤以及腫 瘤的微環(huán)境及可以誘導(dǎo)耐藥性或干擾抗腫瘤活性的機制。
[0009] 基于對細胞毒性化學(xué)治療對腫瘤微環(huán)境的效應(yīng)的動力學(xué)和程度的理解，組合治療 的時機和持續(xù)時間可以確定為細胞毒性藥物化學(xué)治療的開始或治療方案期間的各個階段。 目前指導(dǎo)化學(xué)治療細胞毒性藥物及其劑量的選擇的原則不會考慮它們對腫瘤微環(huán)境的影 響。因此，所選的治療癌癥的劑量可能包括額外的量以克服微環(huán)境中的早期干擾，并因此可 能需要重新評價以實現(xiàn)最佳的治療成功。
[0010]目前，所建立的細胞毒性藥物的給藥方案沒有把這種干擾納入細胞毒性藥物敏感 性的因素，因此導(dǎo)致所用劑量的增加。劑量密集策略用來實現(xiàn)腫瘤收縮，但是這會在癌癥患 者中引起嚴重的毒性并不利地影響他們的生活質(zhì)量。亟需防止或降低這種敏感性干擾，而 不使用劑量密集方案。本發(fā)明提供了用于開發(fā)利用正在使用的現(xiàn)有藥物的新藥物治療方案 或者用于開發(fā)設(shè)計細胞毒性藥物和CT0組合的新藥的示例，適用于最大化藥物敏感性以實 現(xiàn)治療成功而非采用劑量密集方法。
[0011] 使用細胞毒性藥物的化學(xué)治療目前用于四種主要臨床情況：1)用于沒有其他有 效治療辦法的重病或癌癥的初級誘導(dǎo)治療，2)用于呈現(xiàn)局限性疾病的患者的新輔助治療， 對于所述患者而言局部形式的治療如外科手術(shù)和/或輻射是不夠的，3)用于局部治療方 法（包括外科手術(shù)和/或放射療法）的輔佐治療，和4)直接滴注至聚藥位點（sanctuary site)或通過身體直接受癌影響的特定區(qū)域的位點定向灌注。醫(yī)生癌癥化學(xué)治療藥品手冊， 編輯E. Chu，V. T. DeVita，Jr，2010。本發(fā)明提供了用于在以上四種臨床情況的每種情況中開 發(fā)新藥治療方案以提高一些細胞毒性藥物的敏感性的示例。
[0012] 根據(jù)本發(fā)明的方法，1)必須鑒別腫瘤是否對特定細胞毒性藥物有反應(yīng)，2)鑒別腫 瘤微環(huán)境中可能潛在干擾抗癌活性的分子靶標的特性（profile)，和3)選擇最合適的細胞 毒性藥物和靶向化學(xué)治療的組合方案，例如細胞毒性藥物和CT0。目前與使用治療癌癥的細 胞毒性藥物有關(guān)的問題是由于干擾抗癌活性的分子靶標不可控而導(dǎo)致的所需劑量高、對正 常細胞的毒性、缺乏選擇性和敏感性、免疫抑制和耐藥性。
[0013] 耐藥性也可以由變得對藥物有抗性的惡性細胞引起，并且很多細胞機制可能涉及 改變藥物代謝、細胞對藥物的滲透性或加速藥物消除、改變抑制酶的特異性、或擴增涉及對 化學(xué)治療或生物療法的抗性的某些基因。這是在如上所述的多次藥物暴露之后所觀察到 的。
[0014] 例如，編碼二氫葉酸還原酶的基因的擴增與對甲氨喋呤的抗性有關(guān)，而編碼胸核 苷酸合酶的基因的擴增與對使用5-氟吡啶的治療的抗性有關(guān)。
[0015] 替莫唑胺的治療益處取決于其烷基化/甲基化DNA的能力，最通常發(fā)生在鳥嘌呤 殘基的N-7或0-6位置。這種甲基化作用破壞DNA并觸發(fā)腫瘤細胞的死亡。然而，一些腫 瘤細胞能夠修復(fù)這種類型的DNA破壞，因此通過表達0-6-甲基鳥嘌呤-DNA甲基轉(zhuǎn)移酶 (MSMT)或0-6-烷基鳥嘌呤-DNA烷基轉(zhuǎn)移酶（AGT或AGAT)來消除替莫唑胺的療效。在一 些腫瘤中，MGMT/AGT基因的表觀遺傳沉默防止了這種酶的合成，因此這樣的腫瘤對替莫唑 胺的殺滅敏感。相反，腦腫瘤中MGMT蛋白的存在預(yù)示對替莫唑胺的反應(yīng)差,且這些患者沒 有獲得什么益處。但是對替莫唑胺的抗性也與其他因素有關(guān)。在GBM患者中，腫瘤起先對 替莫唑胺有反應(yīng)，之后，即使增加劑量，幾個療程之后腫瘤也變成難治的。這表明其他干擾 因素可能會降低替莫唑胺對癌細胞的敏感性。
[0016] 因此，需要理解替莫唑胺抗性的機制可能與其他機制有關(guān)，因為它是少數(shù)穿過血 腦屏障的藥物之一，并用于治療惡性膠質(zhì)瘤和多形性成膠質(zhì)細胞瘤，但在幾個療程之后變 出現(xiàn)耐藥性。
[0017] 存在一些證據(jù)，S卩，由阿霉素誘導(dǎo)的腫瘤微環(huán)境的改變可能妨礙其遞送至腫瘤靶 標，因此阿霉素和CT0的組合方案可以提供保持阿霉素敏感性的解決方法。
[0018] 一些情況中，對藥物的抗性可能與腫瘤微環(huán)境中干擾細胞毒性藥物的敏感性和效 能的分子（例如細胞因子、鈣通道信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、分子信號轉(zhuǎn)導(dǎo)）的產(chǎn)量增加有關(guān)。因此，即使 最合理設(shè)想的藥物分子也可能失效，這歸因于其意欲靶標下游的突變性變化或腫瘤絕不允 許藥物到達其靶標或觸發(fā)針對藥物分子的反饋機制的代謝特征。
[0019] 因此，癌癥藥物療法和發(fā)展需要合理的方法，其依賴于使用細胞毒性藥物的腫瘤 縮小的經(jīng)驗性證據(jù)、了解腫瘤微環(huán)境中化學(xué)治療的實時作用機制、限定針對生物化學(xué)和分 子靶標的新的導(dǎo)向結(jié)構(gòu)并使細胞毒性藥物最佳運行。本發(fā)明滿足這種的需求并且還提供 了額外的優(yōu)勢。本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)有區(qū)別，因為沒有一個現(xiàn)有技術(shù)解決了防止和/或降低 細胞毒性藥物在腫瘤微環(huán)境中的影響的問題，所述影響干擾治療早期的敏感性，然后更持 久的生化變化于治療后期引發(fā)耐藥性。本發(fā)明提供了與CT0的適時組合療法，其靶向早期 干擾并因此保持或增強了細胞毒性藥物的敏感性，由此避免增加劑量來獲得最佳效能的需 求。
[0020] 誘導(dǎo)由CT0控制的一些分子靶標的細胞毒性藥物與適當組合劑量和方案的CT0之 組合由此為新的成功的癌癥治療方案提供了更有效和更低毒性的示例，這也是本發(fā)明的主 要目標。上述參考的相關(guān)主題通過明確引用并入本文。
[0021] 發(fā)明概述
[0022] 本發(fā)明通過提供用于鑒別目前使用的細胞毒性藥物或潛在的新候選物并且當與 最佳劑量的羧胺三唑乳清酸鹽（CT0)組合使用時確定每種藥物的最佳治療劑量的方法，旨 在克服現(xiàn)有技術(shù)中固有的缺陷。組合療法改進了細胞毒性藥物對腫瘤細胞的敏感性，降低 了腫瘤微環(huán)境和腫瘤細胞中干擾和耐藥性的發(fā)展，并增強了細胞毒性藥物的效能。
[0023] 本發(fā)明提供了通過靶向腫瘤微環(huán)境以抑制對細胞毒性藥物和CT0組合的適時組 合療法的藥物干擾和耐藥性來增強細胞毒性藥物敏感性的方法和組合物。
[0024] 本發(fā)明提供了用于開發(fā)基于臨床前研究和臨床研究的藥物治療方案的示例，其用 于提供i)病理類別的腫瘤對特定化學(xué)治療藥物的反應(yīng)的先驗知識，ii)對藥物的細胞毒 性活性的細胞、生化和分子靶標的理解以及對腫瘤微環(huán)境中和耐藥性腫瘤細胞中的抗性 機制的理解，和iii)對藥物的藥物代謝動力學(xué)和藥效行為的認知和正常器官毒性的模式 (pattern)〇
[0025] 本發(fā)明提供了設(shè)計細胞毒性藥物和靶向化學(xué)治療（例如CTO)的適當組合方案的 示例，所述靶向化學(xué)治療靶向細胞毒性藥物的腫瘤微環(huán)境中的細胞、生化和分子靶標，從而 使組合方案增強細胞毒性藥物的敏感性并防止和/或降低耐藥性的發(fā)展。
[0026] 本發(fā)明提供了對開發(fā)組合藥物方案的方法的改變，其通過要求在正常嚙齒動物及 腫瘤模型的臨床前研究中測試不同劑量的細胞毒性藥物和靶向腫瘤微環(huán)境中負反饋的靶 向化學(xué)治療（CT0)。目前，這樣的組合基于從臨床前研究和臨床研究中使用單個藥物進行 的研究而獲得的歷史數(shù)據(jù)，而這樣的現(xiàn)有技術(shù)忽略了藥物之間的藥效和藥代動力學(xué)相互作 用，因此使患者置于藥物副作用的風險中。當使用細胞毒性藥物的劑量密集策略時必須忍 受嚴重毒性的患者十分需要該方法。
[0027] 本發(fā)明的另一實施方案是開發(fā)組合方案，其使用生物治療劑和靶向化學(xué)治療劑 (例如CT0)以靶向由腫瘤微環(huán)境中生物制品誘導(dǎo)的負反饋，由此保持生物制品針對腫瘤細 胞的敏感性和效能。
[0028] 鑒于現(xiàn)有技術(shù)的上述情形，本發(fā)明提供了在臨床前研究中藥物組合的組合設(shè)計， 該臨床前研究提供了在正常與荷瘤模型中組合方案的不同組合的關(guān)于毒性的可靠信息。換 言之，本發(fā)明將會降低在患者中最初的用藥方案發(fā)展的風險并避免對患者的風險。
[0029] 本發(fā)明的目的是提供用于設(shè)計一種或多種細胞毒性藥物和一種或多種靶向化學(xué) 治療藥物（例如CT0)的最佳組合的組合物的方法，其用于增加細胞毒性藥物的敏感性、增 強治療效果并通過采用最佳且通常較低的劑量來降低長期的毒性。換言之，本發(fā)明通過適 時組合策略提供劑量稀釋的示例。亟需這樣的通過稀釋化學(xué)治療劑量來改善患者生活質(zhì)量 的策略。
[0030] 當一些細胞毒性藥物與CT0結(jié)合時，在細胞毒性藥物的敏感性和效能方面，上述 的這樣的方法已經(jīng)產(chǎn)生了出乎預(yù)料的對所述一些細胞毒性藥物的重要發(fā)現(xiàn)。更重要的是， 發(fā)現(xiàn)將更低劑量的預(yù)先配置治療劑量的細胞毒性藥物與CT0組合，實際上導(dǎo)致更高的效 能。與目前使用的劑量密集策略相比，這種劑量稀釋組合策略滿足了對降低耐藥性、增加敏 感性、提高效能并降低毒性的需求。本發(fā)明提供的重要且新穎的方法不僅使用更低劑量的 預(yù)先設(shè)定的治療劑量獲得更好的效能，而且還獲得相關(guān)的毒性降低。
[0031] 附圖簡述
[0032] 圖1示出SC植入LOX MVI人黑色素瘤對使用不同劑量CT0的治療的反應(yīng)。
[0033] 圖2示出SC植入LOX IMVI人黑色素瘤對使用不同劑量替莫唑胺的治療的反應(yīng)。
[0034] 圖3示出SC植入LOX MVI人黑色素瘤對使用不同劑量CT0和高劑量替莫唑胺 (90mg/kg/劑）的治療的反應(yīng)。
[0035] 圖4示出SC植入LOX MVI人黑色素瘤對使用不同劑量CT0和低劑量替莫唑胺 (60mg/kg/劑）的治療的反應(yīng)。
[0036] 發(fā)明詳述
[0037] 本發(fā)明是通過評價腫瘤微環(huán)境中細胞毒性藥物的細胞、生化和分子靶標以及通過 利用與癌細胞對細胞毒性藥物抗性有關(guān)的一些關(guān)鍵基因組和表型的變化而實現(xiàn)的。本發(fā)明 提供了用于以下的示例，i)選擇用于特定癌癥的細胞毒性藥物，ii)評價該試劑在體外或 體內(nèi)的腫瘤微環(huán)境中對細胞、生化和分子靶標的作用，iii)選擇抑制腫瘤微環(huán)境中誘導(dǎo)的 靶標的組合化學(xué)治療來抑制或防止靶標的抗性，用于在非腫瘤小鼠的臨床前毒理學(xué)研究和 效能研究中用滴定法測量細胞毒性藥物和靶向化學(xué)治療（例如CTO)的不同組合，和iv)建 立其的人類起始劑量。
[0038] 這種用于開發(fā)治療方案的示例的目標是為實現(xiàn)最大效能和最小藥物相關(guān)毒性而 選擇的兩種或更多種藥物的最優(yōu)組合。這樣的用于開發(fā)癌癥治療方案的方法遲來已久，并 且亟需該方法來確保成功的治療以及通過防止細胞毒性癌癥藥物的過量給藥而確?；颊?的安全。
[0039] 一@癌癥中化學(xué)治療給藥方案影響耐藥件發(fā)展
[0040] 耐藥性是在癌癥的治療中化學(xué)治療失效的主要原因，并對絕大多數(shù)患有轉(zhuǎn)移性晚 期癌癥的患者的死亡負有責任。患者最初對化學(xué)治療反應(yīng)良好。然而，癌細胞具有顯著可 塑性，并且已表明多個化學(xué)治療周期挑選出固有抗性或治療過程中已發(fā)展出抗性的腫瘤細 胞，最終，疾病變得不可醫(yī)治。
[0041] 腫瘤微環(huán)塏中化學(xué)治療的干擾和抗件
[0042] 耐藥性可以由腫瘤微環(huán)境和癌細胞中的分子因素引起。諸如缺氧區(qū)、不規(guī)則血 流和供給、細胞外基質(zhì)、腫瘤內(nèi)高密度的細胞、高間隙液壓（high intersticial fluid pressure)的問題可以產(chǎn)生藥理的和物理的屏障，化學(xué)治療藥物不能擴散通過這些屏障并 到達腫瘤?；蛘撸毎に幬锪鞒鲞\載體的上調(diào)可以阻礙藥物遞送至腫瘤細胞。MDR1基因 的產(chǎn)物，P-糖蛋白（P-gp)是導(dǎo)致癌多重耐藥性的關(guān)鍵分子。越來越多的證據(jù)表明骨髓源 性細胞（BMDC)促成腫瘤的生長、血管生成和轉(zhuǎn)移。重要地，在對細胞毒性化學(xué)治療的急性 反應(yīng)中，幾種類型的BMDC迅速調(diào)動在腫瘤中。這些來自化學(xué)治療處理的小鼠的BMDC和血 漿通過誘導(dǎo)基質(zhì)金屬蛋白酶-9 (MMP9)和上皮-至-間質(zhì)轉(zhuǎn)變而促進腫瘤細胞中的轉(zhuǎn)移特 性。在靜脈注射Lewis肺癌細胞的小鼠中，使用紫杉醇（細胞毒素劑）的治療以能被MMP9 抑制劑阻斷的方式促進轉(zhuǎn)移。因此，通過使用紫杉醇和MMP9抑制劑的組合方案對MMP9進 行抑制可以抑制轉(zhuǎn)移。
[0043] 類似地，一些血管生成療法已顯示出反常地增強血管功能。使用抗體靶向VEGF受 體導(dǎo)致血管功能的暫時改善，稱為"血管正?；?，并且與降低的腫瘤缺氧和增加的放射敏 感性有關(guān)。然而，這種反應(yīng)的短暫性使其難以轉(zhuǎn)化為臨床實踐。VEGF的過表達與致癌信號 轉(zhuǎn)導(dǎo)有關(guān)，并且VEGF誘導(dǎo)可以被通過磷酸肌醇-3激酶（PI3K)通路的RAS信號轉(zhuǎn)導(dǎo)而觸發(fā)。 特別地，由PI3激酶產(chǎn)生的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)在癌細胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)中起主要作用。因此，與抗VEGF (例 如CT0)的組合療法可以防止血管改善并改善抗血管生成療法。類似地，具有化學(xué)治療細胞 毒素的PI3激酶抑制劑（如CT0)可以改善細胞毒素向腫瘤的遞送并提高效能。CT0通過抑 制PI2至PI3的轉(zhuǎn)換而抑制PI3激酶活性。此外，CT0是鈣信號轉(zhuǎn)導(dǎo)和通道的抑制劑，其在 垂直靶向PI3激酶以及癌細胞增殖中是重要的。CT0是惡性黑色素瘤細胞生長所需的VEGF 的抑制劑。然而，使用VEGF阻斷劑（如貝伐單抗或Aflibercept?)的靶向治療作為單一 療法未能降低腫瘤負荷且它們與細胞毒性藥物的組合在黑色素瘤的治療中也已失效。
[0044] 由分子因素產(chǎn)牛的化學(xué)治療干擾和抗件
[0045] 當已對治療反應(yīng)的癌突然開始生長時，化學(xué)治療抗性發(fā)生。換言之，癌細胞對化學(xué) 治療的作用有抗性。這將需要改變藥物或增加劑量。在分子水平的化學(xué)治療抗性有幾種可 能原因。沒有被化學(xué)治療殺死的一些癌細胞變異且變得耐藥。一旦它們倍增，其會對化學(xué) 治療更有抗性。另一原因是基因擴增。一個癌細胞可產(chǎn)生成百個特定基因的拷貝，這觸發(fā) 了使化學(xué)治療藥物無效的蛋白質(zhì)的過度產(chǎn)生。又一原因是癌細胞可能會使用P-糖蛋白從 細胞汲出藥物，或者由于運輸藥物穿過細胞壁的蛋白停止工作，癌細胞停止攝取藥物。又一 原因是癌細胞發(fā)展出鈍化藥物的機制或修補由藥物引發(fā)的DNA破壞。換言之，當治療癌癥 時，最好的武器是藥物敏感性和化學(xué)治療抗性方面的最小可能的干擾。
[0046] 黑色素瘤是高度血管腫瘤，其中VEGF與黑色素瘤患者的發(fā)病機理和預(yù)后不良有 關(guān)。黑色素瘤中的分子不均一性使得難以保持BRAF抑制劑的反應(yīng)，并且建議PI3激酶可以 限制BRAF突變體黑色素瘤保持對BRAF抑制劑的敏感程度。
[0047] -些藥物本身是有毒的，但當與其他試劑組合使用時它們的毒性可能加強，該組 合可能與單獨組分的毒性總和相比毒性更強。與化學(xué)治療有關(guān)的組織損壞能夠激活旁分泌 促存活分泌進程的想法建議抑制由IL-6激活的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路可能會加強常規(guī)化學(xué)治療細 胞毒性的療效。
[0048] 顯現(xiàn)耐藥件的化學(xué)治療細朐毒件藥物的實例
[0049] 替莫唑胺是已經(jīng)用于治療IV級星形細胞瘤（一種侵略性腦瘤，也稱多形性成膠質(zhì) 細胞瘤）的口服烷基化劑。其也用于治療成人和兒童中的黑色素瘤（一種皮膚癌形式）、 III級多形性成膠質(zhì)細胞瘤和少突神經(jīng)膠質(zhì)瘤及惡性膠質(zhì)瘤。實驗室研究和臨床試驗正在 調(diào)查其是否可能會通過使替莫唑胺與其他試劑組合而進一步增強其抗癌效力。
[0050] 本發(fā)明提供了進一步改善替莫唑胺抗腫瘤活性的方法和組合物。特別地，本發(fā)明 提供了替莫唑胺和CT0的組合治療方案以增強敏感性和抗腫瘤活性。
[0051] 更具體地，將組合方案設(shè)計成首先用滴定法測量非腫瘤鼠中的兩種藥物以確定組 合的耐受劑量范圍。
[0052] 示例中的下一步是在腫瘤鼠中使用耐受劑量并評價用于實現(xiàn)治療效果的最有效 的組合。
[0053] 本發(fā)明描述了非常出乎預(yù)料且新穎的結(jié)果，其表明當使用更低劑量的細胞毒性藥 物和更低劑量的CT0時觀察到最好的組合治療效果。與公開的文獻和實際的臨床實踐相 反，本發(fā)明描述了基于劑量稀釋以實現(xiàn)最大治療效果的方法和組合物。
[0054] 本發(fā)明的目的是通過使用細胞毒性藥物與CT0的組合方案來降低細胞毒性藥物 在腫瘤微環(huán)境中引起的干擾，CT0是具有多功能靶標的小分子，其中的一些涉及細胞毒性藥 物敏感性的損失和耐藥性的發(fā)展，如以下詳細例示的。 實施例
[0055] 實施例1. if常小鼠中纟目合治療的滴定
[0056] 第一個實驗的目的是評價雌性無胸腺NCr-nu/nu小鼠對5-氨基-1-(4-(4-氯苯 甲?；?3, 5-二氯芐基）-1，2, 3-三唑-4-羧酰胺乳清酸鹽（CT0)與選自由替莫唑胺、 5-FU、甲氨喋呤、阿霉素和柔紅霉素的細胞毒性化學(xué)治療劑的組合治療的耐受性。
[0057] 聚乙二醇（PEG400, MW400)購自 Aldrich Chemistry。去離子水購自 LabChem, Inc.。Klucel(輕丙基纖維素）購自Aldrich。鹽水（生理鹽水溶液，僅用于動 物）購自 Nova-Teck, Inc.。Tween80(T80,聚山梨醇酯 80)購自 Fisher Scientific。在收 到CT0(MW580· 76)時于室溫下避光保存。CTO在40% PEG400的去離子水中以5L 3mg/mL 的濃度一周配置一次（在1和8天）。每天治療時制備替莫峻胺? (替莫唑胺，Schering Co.，20mg/膠囊），通過添加幾滴T80至粉末，并隨后在鹽水中加入0. 3% Klucel以得到 4. 5mg/mL的濃度。
[0058] 研究由四組構(gòu)成，每組5只小鼠，第1天共25只小鼠。組1的動物用CT0與替莫唑 胺的組合治療，CT0的劑量為513mg/kg/劑，每天一次，連續(xù)14天（Q1DX 14,第1-14天）， 替莫唑胺以90mg/kg/劑的劑量給藥，每四天一次，共三次治療（Q4DX3,第1、5和9天）。 組2的動物用CT0與替莫唑胺的組合治療，CT0按照Q1DX 14時間表劑量為342mg/kg/劑， 替莫唑胺以90mg/kg/劑的劑量按照Q4DX3時間表給藥。組3的動物用CT0與替莫唑胺的 組合治療，CT0按照Q1DX 14時間表劑量為513mg/kg/劑，替莫唑胺以60mg/kg/劑的劑量 按照Q4DX 3時間表給藥。組4的動物用CT0與替莫唑胺的組合治療，CT0按照Q1DX 14時 間表劑量為342mg/kg/劑，替莫唑胺以60mg/kg/劑的劑量按照Q4DX3時間表給藥。個體 體重示于表1中。
[0059] 表1-平均體重（g)
[0060]
【權(quán)利要求】
1. 提高對化學(xué)治療藥物的敏感性的方法，所述方法包括： 給予足夠量的所述化學(xué)治療藥物， 鑒別腫瘤微環(huán)境中誘導(dǎo)的可干擾抗癌活性的機制， 選擇靶向在所述腫瘤微環(huán)境中干擾所述抗癌活性的所述機制的組合藥物， 測量所述化學(xué)治療藥物和所述組合藥物之間的藥效相互作用以選擇給藥時間和最佳 組合劑量方案，以及 給予所述組合劑量方案以實現(xiàn)最大效能、微環(huán)境中的最小干擾或?qū)φ＜毎淖钚《?性。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中以足夠量選擇性地與所述化學(xué)治療藥物一起給予 的所述組合藥物是羧胺三唑乳清酸鹽。
3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其中以足夠量選擇性地與羧胺三唑乳清酸鹽一起給予 的所述化學(xué)治療藥物是替莫唑胺。
4. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其中以足夠量選擇性地與羧胺三唑乳清酸鹽一起給予 的所述化學(xué)治療藥物是甲磺酸伊馬替尼。
5. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其中以足夠量選擇性地與羧胺三唑乳清酸鹽一起給予 的所述化學(xué)治療藥物是鹽酸阿霉素。
6. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其中以足夠量選擇性地與羧胺三唑乳清酸鹽一起給予 的所述化學(xué)治療藥物是甲氨喋呤。
7. 提高對化學(xué)治療藥物的敏感性的方法，所述方法包括： 給予不同劑量的所述化學(xué)治療藥物以確定正常動物中的最大耐受劑量， 鑒別由所述化學(xué)治療劑誘導(dǎo)的干擾化學(xué)治療活性的機制， 選擇靶向干擾所述化學(xué)治療活性的所述機制的組合藥物， 向所述不同劑量的所述化學(xué)治療藥物進一步給予不同劑量的所述組合藥物， 測量所述化學(xué)治療藥物和所述組合藥物之間的藥效相互作用以選擇正常動物耐受的 組合劑量方案，以及 在植有腫瘤的動物中測試所選的所述組合劑量方案以實現(xiàn)最大抗腫瘤活性和對正常 細胞的最小毒性。
8. 根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其中所選的所述組合方案代表了實現(xiàn)最大抗腫瘤活性 的所述化學(xué)治療藥物的劑量和所述組合藥物的劑量。
9. 組合方案的藥物組合物，其包含實現(xiàn)最大抗腫瘤活性的足夠量的化學(xué)治療藥物和足 夠量的組合藥物。
10. 根據(jù)權(quán)利要求9所述的藥物組合物，其中所述化學(xué)治療藥物是替莫唑胺，并且所述 組合藥物是羧胺三唑乳清酸鹽。
【文檔編號】A61K31/505GK104125829SQ201380010220
【公開日】2014年10月29日 申請日期:2013年2月19日 優(yōu)先權(quán)日:2012年2月21日
【發(fā)明者】拉希達·A·卡馬利 申請人:巧妙療法股份有限公司