地榆素在藥物中的用途
【專利摘要】本發(fā)明提供地榆素在制備具有保護骨髓細(xì)胞作用的藥物中的用途。在一種具體的實施方式中，所述地榆素為地榆素含量為100%的化合物。在另一種【具體實施方式】中，所述地榆素為含地榆素0.05～3wt%的混合物，優(yōu)選含地榆素1～2wt%的混合物。在該發(fā)明中，優(yōu)選所述混合物中還包含兒茶素和原花青素B2中的至少一種。本發(fā)明提供的地榆素能保護骨髓造血干細(xì)胞，緩解放療或化療藥物引起的小鼠骨髓DNA抑制，還能夠升高白細(xì)胞數(shù)量。
【專利說明】地榆素在藥物中的用途
[0001]本申請是申請?zhí)枮?01180038931.5的分案申請，母案申請日為2011年9月14日，母案的發(fā)明名稱為一種地榆鞣質(zhì)提取物及其制備方法和用途。
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0002]本發(fā)明涉及地榆素在藥物中的用途。
【背景技術(shù)】
[0003]骨髓抑制，是指骨髓中的血細(xì)胞前體的活性下降。血液里的紅細(xì)胞和白細(xì)胞都源于骨髓中的造血干 細(xì)胞。血液里的血細(xì)胞壽命短，常常需要不斷補充。為了達到及時補充的目的，作為血細(xì)胞前體的干細(xì)胞必須快速分裂?；瘜W(xué)治療和放射治療以及許多其它抗腫瘤治療方法，都是針對快速分裂的細(xì)胞，因而常常導(dǎo)致正常骨髓細(xì)胞抑制，引起患者骨髓造血功能障礙，使得患者體內(nèi)紅細(xì)胞、白細(xì)胞、血小板等降低，從而導(dǎo)致貧血、出血、免疫機制下降等現(xiàn)象。
[0004]白細(xì)胞減少癥，為常見血液病，它是指外周血液中白細(xì)胞持續(xù)低于4 X 109/L。白細(xì)胞是人體防御細(xì)菌入侵的巡邏兵。白細(xì)胞數(shù)減少，就會削弱人體抗菌能力，容易受感染。特別是放、化療、感染患者、風(fēng)濕病科系統(tǒng)性紅斑狼瘡等使用免疫抑制劑、傳染病科使用抗結(jié)核藥物利福平等均能引起的外周血白細(xì)胞的減少，從而削弱人體抗菌能力，導(dǎo)致免疫力下降等不良反應(yīng)。目前，白細(xì)胞減少癥主要分為原因不明性和繼發(fā)性兩種，前者多見，而后者多是由放療、化療、感染、免疫因素等引起的骨髓損傷而造成。
[0005]白細(xì)胞減少癥和骨髓抑制都存在白細(xì)胞減少這一顯著現(xiàn)象，但是，在用藥時還是存在一定差異，目前，某些具有升白作用的藥物，并不具有骨髓保護的作用，如rhG-CSF具有較強的升白作用，但其對骨髓細(xì)胞的損害作用不可忽視。因此，尋找能夠升高白細(xì)胞濃度并能有效保護骨髓細(xì)胞的藥物顯得十分必要。
[0006]地偷為薔薇科植物地偷Sanguisorba officinalis L.或長葉地偷Sanguisorbadofficinalis L.var.1ongifolia(Bert.)Yu et Li的干燥根，具有涼血止血、解毒斂瘡之功效。地榆藥材中含有大量的鞣質(zhì)類成分(約20%左右)，除此之外，還含有皂苷、黃酮等化合物。當(dāng)前對地榆的大多數(shù)研究都圍繞地榆皂苷進行，普遍認(rèn)為地榆升高白細(xì)胞作用以及骨髓保護作用的有效成分為地榆皂苷，國內(nèi)對地榆升白作用的物質(zhì)基礎(chǔ)研究認(rèn)為，地榆皂苷是促進小鼠骨髓細(xì)胞體外增殖的主要活性部位，地榆皂苷也能升高骨髓抑制小鼠的白細(xì)胞、紅細(xì)胞以及血小板數(shù)量，而地榆鞣質(zhì)和地榆黃酮不能促進骨髓細(xì)胞增殖，反而在高濃度下會產(chǎn)生骨髓抑制作用(高小平等，地榆促造血作用的有效部位篩選，中國天然藥物，2006年4卷2期)。
[0007]目前，對地榆鞣質(zhì)的藥效研究較為少見，國外有文獻報道稱，地榆鞣質(zhì)具有抗癌作用[Bastow kF.Bort LD.Fukushrma Y et al.1nhibition of DNA topoisomerases bysanguim H_6，a cytotoxic dimeric ella—gitan—ton from sanguisorba officinalis.Planta Med, 1993; 59 (3):240-245.]。對地榆鞣質(zhì)的提取也有部分報道，如高小平等，采用70%含水丙酮對地榆進行提取，得到的提取物中鞣質(zhì)含量為43.86%(中國天然藥物，2006年4卷2期)；由于該方法是采用丙酮提取，未經(jīng)過分離，得到提取物中除含有鞣質(zhì)外，還含有皂苷類成分，其中皂苷含量經(jīng)檢測約占15% ;王滿力等，也采用氧化鋁柱來對地榆鞣質(zhì)和地榆皂苷進行分離，最終將兩者分離開(貴州工學(xué)院學(xué)報，1993年22卷2期)。
[0008]目前尚未見將地榆素應(yīng)用于骨髓保護以及治療白細(xì)胞減少癥的相關(guān)報道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0009]本發(fā)明提供地榆素在制備具有保護骨髓細(xì)胞作用的藥物中的用途。
[0010]在一種具體的實施方式中，所述地榆素為地榆素含量為100%的化合物。
[0011]在本發(fā)明另一種【具體實施方式】中，所述地榆素為含地榆素0.05~3wt%的混合物，優(yōu)選含地榆素I~2wt%的混合物。在該發(fā)明中，優(yōu)選所述混合物中還包含兒茶素和原花青素B2中的至少一種，更優(yōu)選所述混合物中還包含兒茶素和原花青素B2。
[0012]在一個具體實施例中，所述混合物中兒茶素的含量為I~5wt%，優(yōu)選為2~5wt%，所述混合物中原花青素B2的含量為0.05~1.5wt%，優(yōu)選為0.05~0.4wt%。
[0013]在上述實施方式中，具體地，所述藥物是預(yù)防和/或治療由放療或化療引起的抑制正常骨髓細(xì)胞的藥物?；蛘呤?，所述藥物是預(yù)防和/或治療由放療或化療引起的貧血、白細(xì)胞減少癥或血小板減少癥的藥物。
[0014]本發(fā)明還提供地榆素在制備治療白細(xì)胞減少癥的藥物中的用途。 [0015]本發(fā)明還提供一種預(yù)防和/或治療骨髓細(xì)胞抑制或白細(xì)胞減少癥的藥物組合物，它是由有效量的地榆素加入藥學(xué)上可接受的輔料或輔助性成分制備成藥學(xué)上常用的制劑，優(yōu)選所述制劑為口服制劑。
[0016]本發(fā)明的目的在于提供一種地榆鞣質(zhì)提取物；本發(fā)明的另一目的是提供該地榆鞣質(zhì)提取物，地榆鞣質(zhì)中含有的化合物的新用途。
[0017]本發(fā)明提供了一種地榆鞣質(zhì)提取物，該提取物中含有鞣質(zhì)的重量百分含量為35%-98.5%w/w ;提取物中地榆總皂苷含量< 10%w/w和地榆皂苷I的含量< 5%w/w。
[0018]優(yōu)選地，一種地榆鞣質(zhì)提取物，該提取物中含有鞣質(zhì)的重量百分含量為35%-98.5%w/w ;提取物中地榆總皂苷含量< 10%w/w和地榆皂苷I的含量< 5%w/w。
[0019]進一步優(yōu)選地，該提取物中，鞣質(zhì)的重量百分含量為50%~98.5%。更進一步地，鞣質(zhì)的重量百分含量為55%~98.5%。
[0020]進一步優(yōu)選地，該提取物中，提取物中地榆總皂苷含量< 7.2%w/w、地榆皂苷I的含量< 4.9%w/w。更進一步優(yōu)選地，提取物中地榆總皂苷含量< 0.001%w/w、地榆皂苷I的含量< 0.0001%w/w。
[0021]進一步地，地榆鞣質(zhì)中含有地榆素、兒茶素、原花青素B2，其占該提取物中重量百分含量為地榆素0.05%-3.0%w/w,兒茶素1.0%-5.0%w/w,原花青素B2 0.05%-l.5%w/w。進一步優(yōu)選地，其占該提取物中重量百分含量為地榆素1.0%-2.0%w/w,兒茶素2.0%-4.0%w/w,原花青素 B2 0.05%-0.4%w/w。
[0022]更進一步地，該提取物中，鞣質(zhì)的重量百分含量為62%~98.5%。
[0023]其中，該提取物來源于薔薇科植物地榆Sanguisorba officinalis L.或長葉地榆Sanguisorba officinalis L.var.1ongifolia(Bert.)Yu et Li 的干燥根。[0024]其中，該提取物是由下述方法制備而成:
[0025](I)提取:取地榆藥材粉碎成粗粉，用水、乙醇、含水乙醇、丙酮或含水丙酮提取后，濾過，濃縮，得濃縮液；
[0026](2)純化:取濃縮液，再經(jīng)鞣質(zhì)的常規(guī)分離方法處理后，即得地榆鞣質(zhì)提取物。
[0027]其中，所述鞣質(zhì)的常規(guī)分離方法包括色譜法、蛋白質(zhì)沉淀法、溶劑法、或上述方法的結(jié)合。
[0028]進一步地，所述色譜法為吸附色譜，優(yōu)選使用凝膠、大孔吸附樹脂。
[0029]進一步地，所述蛋白質(zhì)沉淀法，優(yōu)選采用明膠進行沉淀。
[0030]進一步地，所述溶劑法，是指將含濃縮液的水溶液脫脂處理后，再用乙酸乙酯提取，即得地榆鞣質(zhì)提取物；
[0031]或?qū)饪s液溶于乙醇和乙酸乙酯中，加乙醚或石油醚沉淀析出地榆鞣質(zhì)提取物。
[0032]更進一步地，該提取物是由下述方法制備而成:
[0033](I)提取:取地榆藥材粉碎成粗粉，用水、乙醇、10%_90%的含水乙醇、丙酮或50-90%的含水丙酮提取后，濾過，濃縮，得濃縮液；
[0034](2)純化:取濃縮 液，采用大孔吸附樹脂進行吸附除雜，先用水洗脫至無色，再用10%乙醇洗脫，最后用60%乙醇洗脫，收集60%乙醇洗脫液，干燥，即得地榆鞣質(zhì)提取物；或，
[0035]取濃縮液，脫脂后，用乙酸乙酯萃取，即得地榆鞣質(zhì)提取物。
[0036]優(yōu)選地，所述的含水乙醇的濃度為70% ;含水丙酮的濃度為70%。
[0037]其中，所述大孔吸附樹脂為非極性樹脂或低極性樹脂，優(yōu)選DA-20UD-10ULSA-20、HP-10或AB-8型大孔吸附樹脂。
[0038]本發(fā)明還提供了上述地榆鞣質(zhì)提取物的制備方法，它包括如下操作步驟:
[0039](I)提取:取地榆藥材粉碎成粗粉，用水、乙醇、含水乙醇、丙酮或含水丙酮提取后，濾過，濃縮，得濃縮液；
[0040](2)純化:取濃縮液，再經(jīng)鞣質(zhì)的常規(guī)分離方法處理后，即得地榆鞣質(zhì)提取物。
[0041]其中，所述鞣質(zhì)的常規(guī)分離方法包括色譜法、蛋白質(zhì)沉淀法、溶劑法、或上述方法的結(jié)合。
[0042]進一步地，所述色譜法為吸附色譜，優(yōu)選使用凝膠、大孔吸附樹脂。
[0043]進一步地，所述蛋白質(zhì)沉淀法，優(yōu)選采用明膠進行沉淀。
[0044]進一步地，所述溶劑法，是指將含濃縮液的水溶液脫脂處理后，再用乙酸乙酯提取，即得地榆鞣質(zhì)提取物；
[0045]或?qū)饪s液溶于乙醇和乙酸乙酯中，加乙醚或石油醚沉淀析出地榆鞣質(zhì)提取物。
[0046]更進一步地，該提取物是由下述方法制備而成:
[0047](I)提取:取地榆藥材粉碎成粗粉，用水、乙醇、10%_90%的含水乙醇、丙酮或50-90%的含水丙酮提取后，濾過，濃縮，得濃縮液；
[0048](2)純化:取濃縮液，采用大孔吸附樹脂進行吸附除雜，先用水洗脫至無色，再用10%乙醇洗脫，最后用60%乙醇洗脫，收集60%乙醇洗脫液，干燥，即得地榆鞣質(zhì)提取物；或，
[0049]取濃縮液，脫脂后，用乙酸乙酯萃取，即得地榆鞣質(zhì)提取物。
[0050]優(yōu)選地，所述的含水乙醇的濃度為70% ;含水丙酮的濃度為70%。
[0051]其中，所述大孔吸附樹脂為非極性樹脂或低極性樹脂，優(yōu)選DA-201、D-101、LSA-20、HP-1O或AB-8型大孔吸附樹脂。
[0052]本發(fā)明還提供了上述地榆鞣質(zhì)提取物在制備具有骨髓保護作用的藥物中的用途。
[0053]其中，所述的藥物是預(yù)防或/和治療骨髓抑制的藥物。
[0054]進一步地，所述的藥物是預(yù)防或/和治療由放療、化療引起的正常骨髓細(xì)胞抑制的藥物。
[0055]更進一步地，所述的藥物是預(yù)防或/和治療放療或化療引起的貧血、白細(xì)胞或血小板減少癥的藥物，優(yōu)選為預(yù)防或/和治療放療、化療引起的白細(xì)胞減少癥的藥物。
[0056]本發(fā)明還提供了上述地榆鞣質(zhì)提取物在制備治療白細(xì)胞減少癥的藥物中的用途。
[0057]本發(fā)明還提供了地榆素、原花青素B2在制備具有骨髓保護作用的藥物中的用途。
[0058]其中，所述的藥物是預(yù)防或/和治療骨髓抑制的藥物。
[0059]進一步地，所述的藥物是預(yù)防或/和治療由放療、化療引起的正常骨髓細(xì)胞抑制的藥物。
[0060]更進一步地，所述的藥物是預(yù)防或/和治療放療或化療引起的貧血、白細(xì)胞或血小板減少癥的藥物，優(yōu)選為預(yù)防或/和治療放療、化療引起的白細(xì)胞減少癥的藥物。
[0061]本發(fā)明還提供了地榆素、原花青素B2在制備治療白細(xì)胞減少癥的藥物中的用途。
[0062]本發(fā)明還提供了一種預(yù)防或治療骨髓抑制、白細(xì)胞減少癥的藥物組合物，它是由有效量的地榆素、原花青素B2或上述的地榆鞣質(zhì)提取物為活性成分，加入藥學(xué)上可接受的輔料或輔助性成分制備成藥學(xué)上常用的制劑。
[0063]其中，所述的制劑為口服制劑。
[0064]本發(fā)明還提供了腫瘤化療藥物與上述的地榆鞣質(zhì)提取物在制備抗腫瘤的聯(lián)合用藥物中的用途。
[0065]其中，所述的腫瘤化療藥物為烷化劑類抗腫瘤藥。
[0066]進一步地，所述的腫瘤化療藥物為環(huán)磷酰胺。
[0067]本發(fā)明還提供了一種抗腫瘤藥物組合物，它是由有效量的腫瘤化療藥物和上述的地榆鞣質(zhì)提取物為活性成分，加上藥學(xué)上可接受的輔料制備而成的制劑。
[0068]其中，所述的腫瘤化療藥物為烷化劑類抗腫瘤藥。
[0069]進一步地，所述的腫瘤化療藥物為環(huán)磷酰胺。
[0070] 本發(fā)明地榆鞣質(zhì)提取物中活性成分為地榆鞣質(zhì)，具有保護骨髓造血干細(xì)胞的作用，其對化學(xué)物質(zhì)和輻射引起的小鼠骨髓DNA抑制有顯著保護作用，為臨床緩解因放療、化療引起的正常骨髓細(xì)胞的抑制提供一種新的用藥選擇。此外，地榆鞣質(zhì)還能夠升高白細(xì)胞，具有明顯的升白作用。本發(fā)明地榆鞣質(zhì)提取物與化療藥物聯(lián)合使用時，不但增強了對腫瘤的療效，還可以保護骨髓細(xì)胞和全血細(xì)胞，降低或避免化療藥物對骨髓細(xì)胞和全血細(xì)胞的損傷。因此，在采用放療、化療方法治療癌癥前、后，或在治療過程中，均可以采用放、化療手段與本發(fā)明地榆鞣質(zhì)提取物聯(lián)合治療的方法，以便減輕或避免放、化療對患者骨髓細(xì)胞以及白細(xì)胞帶來的損害。
【具體實施方式】
[0071]1、本發(fā)明中地榆鞣質(zhì)含量測定:
[0072]照《中國藥典》2010年版一部附錄X B鞣質(zhì)含量測定項下:[0073]本實驗應(yīng)避光操作。
[0074]對照品溶液的制備:精密稱取沒食子酸對照品50mg，置100mL棕色量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，精密量取5ml，置50ml棕色量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，即得(每1ml中含沒食子酸0.05mg)。
[0075]標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備:精密量取對照品溶液0.5ml、1.0ml、2.0ml、3.0ml、4.0ml、
5.0ml，分別置25ml棕色量瓶中，各加入磷鑰鎢酸試液1ml，再分別加水11.50ml、11ml、IOml、9ml、8ml、7ml，用29%碳酸鈉溶液稀釋至刻度，搖勻，放置30分鐘以相應(yīng)的試劑為空白，照紫外-可見光光度法(附錄V A)，在760nm的波長處測定吸光度，以吸光度為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
[0076]供試品溶液的制備:取提取物粉末約0.lg，精密稱定，置250ml棕色量瓶中，加水150ml，放置過夜，超聲處理10分鐘，放冷，用水稀釋至刻度，搖勻，靜置(使固體物沉淀)，濾過，棄去初濾液50ml，精密量取濾20ml，置100mL棕色量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，SP得。
[0077]測定法
[0078]總酚:精密量取供試品溶液2ml，置25ml棕色量瓶中，照標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備項下的方法，自“加入磷鑰鎢酸試液1ml”起，加水10ml，依法測定吸光度，從標(biāo)準(zhǔn)曲線讀出供試品溶液中沒食子酸的量(mg)，計算，即得。
[0079]不被吸附的多酚: 精密量取供試品溶液25ml，加至已盛有酪素0.6g的100mL具塞錐形瓶中,密塞,置30°C水浴中報溫I小時，時時振搖，取出，放冷，搖勻，濾過，棄去初濾液，精密量取續(xù)濾液2ml，置25ml棕色量瓶中，照標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備項下的方法，自“加入磷鎢酸試液Iml ”起，加水IOml，依法測定吸光度，從標(biāo)準(zhǔn)曲線中讀出供試品溶液中沒食子酸的量(mg),計算，即得。
[0080]按下式計算鞣質(zhì)的含量:鞣質(zhì)含量=總酚量一不被吸附的多酚量。
[0081]2、地榆素、兒茶素、原花青素B2的含量測定方法見參照文獻:地榆多酚的組分分析及功能研究，劉海英，陜西師范大學(xué)，2009年。具體測定方法為:
[0082]2.1.儀器與試驗材料
[0083]2.1.1 儀器
[0084]Agilentl200高效液相色譜儀(Agilentl200 二極管陣列檢測器；四元泵在線脫氣系統(tǒng);Agilentl200色譜工作站)(美國安捷倫科技有限公司)；
[0085]Mettler AE240十萬分之一電子分析天平(德國Mettler公司)；
[0086]FAl 104萬分之一電子分析天平(上海天平儀器廠)；
[0087]KQ3200型超聲清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)。
[0088]2.1.2 試藥
[0089]原花青素B2 (純度:HPLC ^ 99%)；
[0090]兒茶素(純度:HPLC≤99%)；
[0091 ] 地榆素(純度:HPLC≤99%)；
[0092]甲醇為色譜純,水為重蒸水(自制)，其它試劑均為分析純。
[0093]2.1.3地榆鞣質(zhì)提取物
[0094]取實施例的方法制備的地榆鞣質(zhì)提取物。[0095]2.2.供試品溶液制備
[0096]取地榆鞣質(zhì)提取物約lg，精密稱定置IOOmL容量瓶中，加水90mL，超聲處理(功率250W，頻率20KHz) 30min，取出，放冷，加水定容至刻度，濾過，即得。
[0097]2.3.色譜條件的研究
[0098]2.3.1檢測波長的選擇
[0099]為了保證圖譜的最大信息量化，盡可能多地反映地榆組分全貌，采用甲醇:磷酸緩沖鹽二元梯度洗脫，將成分大致分開，柱溫30°C。利用二極管陣列檢測器(DAD)采集各色譜成分在195nm~400nm光譜區(qū)的所有色譜光譜信息，比較了各考察波長下的色譜圖中各峰的吸收情況，在265nm下各峰吸收值較大,且基線表現(xiàn)平穩(wěn)。所以最終確定265nm作為檢測波長。
[0100]2.3.2色譜條件
[0101]試驗過程中采用了幾種流動相進行試驗，以確定最佳流動相，見表1。
[0102]表1流動相和洗脫程序
[0103]
【權(quán)利要求】
1.地榆素在制備具有保護骨髓細(xì)胞作用的藥物中的用途。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用途，其特征在于，所述地榆素為地榆素含量為100%的化合物。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用途，其特征在于，所述地榆素為含地榆素0.05~3wt%的混合物，優(yōu)選含地榆素I~2wt%的混合物。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的用途，其特征在于，所述混合物中還包含兒茶素和原花青素B2中的至少一種，優(yōu)選所述混合物中還包含兒茶素和原花青素B2。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的用途，其特征在于，所述混合物中兒茶素的含量為I~5wt%，優(yōu)選為2~5wt%，所述混合物中原花青素B2的含量為0.05~1.5wt%,優(yōu)選為0.05~0.4wt%。
6.根據(jù)權(quán)利要求1~5中任意一項所述的用途，其特征在于，所述藥物是預(yù)防和/或治療由放療或化療引起的抑制正常骨髓細(xì)胞的藥物。
7.根據(jù)權(quán)利要求1~5中任意一項所述的用途，其特征在于，所述藥物是預(yù)防和/或治療由放療或化療引起的貧血、白細(xì)胞減少癥或血小板減少癥的藥物。
8.地榆素在制備治療白細(xì)胞減少癥的藥物中的用途。
9.一種預(yù)防和/或治療骨髓細(xì)胞抑制或白細(xì)胞減少癥的藥物組合物，它是由有效量的地榆素加入藥學(xué)上可接受的輔料或輔助性成分制備成藥學(xué)上常用的制劑。
10.根據(jù)權(quán)利要9所述的藥物組合物，其特征在于，所述制劑為口服制劑。
【文檔編號】A61P35/00GK103948710SQ201410032898
【公開日】2014年7月30日 申請日期:2011年9月14日 優(yōu)先權(quán)日:2010年9月14日
【發(fā)明者】王達賓, 蘇柘僮, 楊明, 楊勝, 鄒文銓 申請人:成都科爾醫(yī)藥技術(shù)有限公司