經(jīng)皮給予用疫苗組合物的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及經(jīng)皮給予用疫苗組合物。提供包含細胞免疫誘導(dǎo)促進劑、且通過經(jīng)皮給予而發(fā)揮高的細胞免疫誘導(dǎo)效果的疫苗組合物，所述細胞免疫誘導(dǎo)促進劑在利用抗原的經(jīng)皮給予來進行的細胞免疫誘導(dǎo)中能夠相對于各種抗原普遍地使用。本發(fā)明提供一種疫苗組合物，其特征在于，其為包含抗原且用于細胞免疫誘導(dǎo)的經(jīng)皮給予用疫苗組合物，給予了該組合物的免疫評價用動物模型的Th1細胞比率為10%以上。
【專利說明】經(jīng)皮給予用疫苗組合物
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001 ] 本發(fā)明涉及用于經(jīng)皮細胞免疫誘導(dǎo)的疫苗組合物。
【背景技術(shù)】
[0002]通常廣泛使用的疫苗為了誘導(dǎo)免疫而給予微生物或病毒等病原體或其一部分。除此之外，還有癌癥疫苗，其目的在于使細胞免疫系統(tǒng)識別癌細胞特異性抗原，從而通過免疫體系誘導(dǎo)對癌細胞的特異性攻擊，其用作癌癥治療手段之一。
[0003]通常，微生物、病毒由于其尺寸的原因，其侵入會被皮膚阻止，因此，疫苗需要侵入式地給予到體內(nèi)。因而，免疫通常使用注射。但是，注射存在如下的問題:疼痛、恐懼心理、注射傷痕及注射傷痕發(fā)展而成的疤痕、只有醫(yī)療工作者才能進行注射、免疫效果高的皮內(nèi)注射的給予手藝難、存在醫(yī)療工作者的針扎感染事故的風(fēng)險、進行反復(fù)給予時需要經(jīng)常去醫(yī)院而成為患者的生活負擔(dān)、產(chǎn)生注射針等需要特殊廢棄的醫(yī)療廢棄物等問題，因此，其并不能說是最佳的給予途徑。
[0004]作為疫苗的給予途徑，皮下或皮內(nèi)注射是最一般的，除此以外，也嘗試了利用各種各樣的給予途徑例如經(jīng)皮給予(專利文獻I及非專利文獻I)、頰部給予、鼻腔給予、舌下給予等(非專利文獻2、專利 文獻2以及專利文獻3)的免疫誘導(dǎo)。
[0005]作為利用注射來進行的免疫中通常使用的佐劑，實際使用氫氧化鋁、磷酸鋁、氯化鋁這樣的鋁鹽；MF59、AS03這樣的包含角鯊烯的乳液等，除了這些之外，還廣泛研究了鞭毛成分、核酸、細胞因子、陽離子聚合物、多肽等。作為在注射以外的途徑例如利用經(jīng)皮給予、經(jīng)粘膜給予來進行的免疫中進行研究的佐劑，可列舉出氫氧化鋁、磷酸鋁、氯化鋁這樣的鋁鹽；霍亂毒素、大腸桿菌不耐熱腸毒素這樣的毒素類等，但尚未投入使用。它們基本上都用作為了預(yù)防由病毒、細菌等引發(fā)的感染癥而誘導(dǎo)使抗體產(chǎn)生的體液免疫的佐劑。另一方面，僅在細胞免疫誘導(dǎo)范疇內(nèi)，對注射而言，研究了弗氏佐劑、Montanide、GM-CSF、IL-2、IL-12、IFN-Y,但尚未投入使用，就經(jīng)皮給予、粘膜給予而言，霍亂毒素、大腸桿菌不耐熱腸毒素這樣的毒素類、核酸類也處于僅存在少量報告的程度。
[0006]現(xiàn)有技術(shù)文獻
[0007]專利文獻
[0008]專利文獻1:美國專利申請公開US2008/0193487號
[0009]專利文獻2:日本特表2002-531415號公報
[0010]專利文獻3:美國專利申請公開US2008/0112974號
[0011]專利文獻4:日本特表平7-505883號公報
[0012]專利文獻5:日本特表2007-529531號公報
[0013]非專利文獻
[0014]非專利文獻1:Hosoi Akihiro et al., Cancer Research, 68, 3941-3949 (2008)
[0015]非專利文獻2:Zhengrong Cui et al.,Pharmaceutical Research,Vol.19,N0.7,947-953 (2002)
【發(fā)明內(nèi)容】

[0016]發(fā)明要解決的問題
[0017]作為解決與注射相關(guān)的各種問題點的一個手段，考慮了經(jīng)皮給予。但是，基本上尚未報告有能夠在利用抗原的經(jīng)皮給予來進行的細胞免疫誘導(dǎo)中使用的有效的細胞免疫誘導(dǎo)促進劑，經(jīng)皮給予與注射相比有可能無法獲得充分的細胞免疫誘導(dǎo)效果。
[0018]因而，本發(fā)明的目的在于，提供通過經(jīng)皮給予而發(fā)揮高的細胞免疫誘導(dǎo)效果的疫苗組合物。
_9] 用于解決問題的方案
[0020]本發(fā)明提供包含細胞免疫誘導(dǎo)促進劑、且通過經(jīng)皮給予而發(fā)揮高的細胞免疫誘導(dǎo)效果的疫苗組合物，所述細胞免疫誘導(dǎo)促進劑在利用抗原的經(jīng)皮給予來進行的細胞免疫誘導(dǎo)中能夠相對于各種抗原普遍地使用。
[0021]在本發(fā)明的一個實施方式中，本發(fā)明人等在參與細胞免疫的各種細胞之中，著眼于輔助性T細胞、尤其是Thl細胞數(shù)與Th2細胞數(shù)的平衡。
[0022]在利用經(jīng)皮給予來進行的免疫誘導(dǎo)中，為了增加抗原的滲透性，通常通過例如膠帶粘貼來除去角質(zhì)層等進行皮膚的前處理。但是，本發(fā)明人等發(fā)現(xiàn):由于這樣的前處理對皮膚的刺激，Th2細胞相對于Thl細胞和Th2細胞的總計的比例增加、細胞免疫誘導(dǎo)效果減弱，另一方面，在對皮膚的刺激小的條件下，Thl細胞相對于Thl細胞和Th2細胞的總計的比例高、細胞免疫誘導(dǎo)效果高 。進而，通過添加使Thl細胞增加的添加物，Thl細胞的比例提高至對皮膚的刺激小的條件的情況以上，細胞免疫誘導(dǎo)效果提高。即發(fā)現(xiàn)了:在對象的Thl細胞與Th2細胞的平衡中，通過使Thl細胞比率增加，期望的抗原通過經(jīng)皮給予能夠獲得高的細胞免疫誘導(dǎo)效果。進而發(fā)現(xiàn):通過本發(fā)明的疫苗組合物的經(jīng)皮給予，能夠獲得與注射給予相比更強的細胞免疫誘導(dǎo)效果。
[0023]在本發(fā)明的一個實施方式中，利用抗原的經(jīng)皮給予來進行的細胞免疫誘導(dǎo)通過將抗原與特定的細胞免疫誘導(dǎo)促進劑共同使用而得以增強。具體而言，通過在經(jīng)皮給予用疫苗組合物中使用選自由TLR配體、環(huán)狀二核苷酸、輔助肽、免疫調(diào)節(jié)低分子藥物組成的組中的I種以上細胞免疫誘導(dǎo)促進劑，能夠在經(jīng)皮給予中獲得高的細胞免疫誘導(dǎo)效果。
[0024]在本發(fā)明的一個實施方式中，利用抗原的經(jīng)皮給予來進行的細胞免疫誘導(dǎo)通過在低刺激條件下給予抗原而得以增強。具體而言，通過在選擇作為給予經(jīng)皮給予用疫苗組合物前的皮膚刺激評價用動物模型的皮膚的狀態(tài)的指標的、經(jīng)皮水分散發(fā)量(TEWL)(g/h*m2)為50以下的低刺激狀態(tài)的基礎(chǔ)上，給予經(jīng)皮給予用疫苗組合物，能夠獲得高的細胞免疫誘導(dǎo)效果。另外，通過將經(jīng)皮給予用疫苗組合物的皮膚刺激特性設(shè)為結(jié)束向皮膚刺激評價用動物模型給予該組合物時的該動物模型的皮膚內(nèi)TSLP水平(pg/mg蛋白質(zhì))為10000以下的低刺激特性，也能夠獲得高的細胞免疫誘導(dǎo)效果。
[0025]在本發(fā)明的一個實施方式中，Thl細胞與Th2細胞的平衡通過將抗原與特定的細胞免疫誘導(dǎo)促進劑共同使用來控制。具體而言，通過在經(jīng)皮給予用疫苗組合物中使用選自由TLR配體、環(huán)狀二核苷酸、輔助肽、免疫調(diào)節(jié)低分子藥物組成的組中的I種以上細胞免疫誘導(dǎo)促進劑，可以增加Thl細胞/ (Thl細胞+ Th2細胞)之比，其結(jié)果，在經(jīng)皮給予中能夠獲得高的細胞免疫誘導(dǎo)效果。[0026]另外，在本發(fā)明的一個實施方式中，通過在低刺激條件下給予本發(fā)明的疫苗組合物也能夠控制Thl細胞與Th2細胞的平衡。具體而言，通過在選擇作為給予經(jīng)皮給予用疫苗組合物前的皮膚刺激評價用動物模型的皮膚的狀態(tài)的指標的、經(jīng)皮水分散發(fā)量(TEWL) (g/h.m2)為50以下的低刺激狀態(tài)的基礎(chǔ)上，給予經(jīng)皮給予用疫苗組合物，能夠增加Thl細胞/ (Thl細胞+Th2細胞)之比，其結(jié)果，能夠獲得高的細胞免疫誘導(dǎo)效果。另外，通過將經(jīng)皮給予用疫苗組合物的皮膚刺激特性設(shè)為給予結(jié)束時的皮膚內(nèi)TSLP水平(pg/mg蛋白質(zhì))為10000以下的低刺激特性，也能夠增加Thl細胞/ (Thl細胞+ Th2細胞)之比，其結(jié)果，能夠獲得高的細胞免疫誘導(dǎo)效果。
[0027]因此，本發(fā)明提供以下列舉的實施方式:
[0028](I) 一種疫苗組合物，其特征在于，其為包含抗原且用于細胞免疫誘導(dǎo)的經(jīng)皮給予用疫苗組合物，給予了該組合物的免疫評價用動物模型的Thl細胞比率為10%以上；
[0029](2) 一種疫苗組合物，其為用于細胞免疫誘導(dǎo)的經(jīng)皮給予用疫苗組合物，該組合物包含抗原、以及選自由TLR配體、環(huán)狀二核苷酸、輔助肽以及免疫調(diào)節(jié)低分子藥物組成的組中的I種以上細胞免疫誘導(dǎo)促進劑；
[0030](3 )根據(jù)(I)或(2 )所述的疫苗組合物，其中，該組合物通過包含選自由TLR配體、環(huán)狀二核苷酸、輔助肽以及免疫調(diào)節(jié)低分子藥物組成的組中的I種以上細胞免疫誘導(dǎo)促進劑，免疫評價用動物模型的Thi細胞比率為10%以上；
[0031](4)根據(jù)(2)或(3)所述的疫苗組合物，其中，細胞免疫誘導(dǎo)促進劑為TLR配體；
[0032](5)根據(jù)(2)或(3 )所述的疫苗組合物，其中，細胞免疫誘導(dǎo)促進劑為環(huán)狀二核苷酸；
[0033](6)根據(jù)(2)或(3)所述的疫苗組合物，其中，細胞免疫誘導(dǎo)促進劑為免疫調(diào)節(jié)低分子藥物；
[0034](7)根據(jù)(2)或(3)所述的疫苗組合物，其中，細胞免疫誘導(dǎo)促進劑為輔助肽；
[0035](8)根據(jù)(2)或(3)所述的疫苗組合物，其中，細胞免疫誘導(dǎo)促進劑為選自由TLR配體、環(huán)狀二核苷酸以及免疫調(diào)節(jié)低分子藥物組成的組中的I種以上與輔助肽的組合；
[0036](9)根據(jù)(I)~(8)中任一項所述的疫苗組合物，其在低刺激條件下進行給予；
[0037]( 10)根據(jù)(9)所述的疫苗組合物，其中，低刺激條件是皮膚刺激評價用動物模型的給予前的經(jīng)皮水分散發(fā)量(TEWL)為50g/h.m2以下的條件；
[0038](11)根據(jù)(9)或(10)所述的疫苗組合物，其中，低刺激條件是皮膚刺激評價用動物模型的給予結(jié)束時的皮膚內(nèi)TSLP水平為10000pg/mg蛋白質(zhì)以下的條件；以及
[0039](12)根據(jù)(I)~(11)中任一項所述的疫苗組合物，其中，抗原為選自由生存素2B肽和/或經(jīng)改變的生存素2B肽、GPC3肽和/或經(jīng)改變的GPC3肽、HER2/neu_A24肽和/或經(jīng)改變的HER2/neu_A24肽、MAGE3_A24肽和/或經(jīng)改變的MAGE3_A24肽、IPEP87肽和/或經(jīng)改變的IPEP87肽、PRl肽和/或經(jīng)改變的PRl肽、HER2/neu_A02肽和/或經(jīng)改變的HER2/neu_A02肽、MAGE3_A02肽和/或經(jīng)改變的MAGE3_A02肽、HBVenv肽和/或經(jīng)改變的HBVenv肽、以及MUCl肽和/或經(jīng)改變的MUCl肽組成的組中的肽。
[0040]在其它的實施方式中，本發(fā)明的疫苗組合物可以用于疾病的治療或預(yù)防。因此，本發(fā)明還提供以下列舉的實施方式:
[0041](13)—種癌癥的治療或預(yù)防方法，其包括將對治療有效的量的(i)癌抗原、以及(ii)選自由TLR配體、環(huán)狀二核苷酸、輔助肽以及免疫調(diào)節(jié)低分子藥物組成的組中的I種以上細胞免疫誘導(dǎo)促進劑經(jīng)皮給予到對象；
[0042](14)根據(jù)(13)所述的方法，其中，癌抗原為選自由生存素2B肽和/或經(jīng)改變的生存素2B肽、GPC3肽和/或經(jīng)改變的GPC3肽、HER2/neu_A24肽和/或經(jīng)改變的HER2/neu_A24肽、MAGE3_A24肽和/或經(jīng)改變的MAGE3_A24肽、PRl肽和/或經(jīng)改變的PRl肽、HER2/neu_A02肽和/或經(jīng)改變的HER2/neu_A02肽、MAGE3_A02肽和/或經(jīng)改變的MAGE3_A02肽、以及MUCl肽和/或經(jīng)改變的MUCl肽組成的組中的癌抗原肽；
[0043](15) 一種病毒性疾病的治療或預(yù)防方法，其包括將對治療有效的量的(i)病毒抗原、以及(ii)選自由TLR配體、環(huán)狀二核苷酸、輔助肽以及免疫調(diào)節(jié)低分子藥物組成的組中的I種以上細胞免疫誘導(dǎo)促進劑經(jīng)皮給予到對象；以及
[0044](16)根據(jù)(15)所述的方法，其中，病毒抗原為選自由IPEP87肽和/或經(jīng)改變的IPEP87肽以及HBVenv肽和/或經(jīng)改變的HBVenv肽組成的組中的肽。
[0045]在其它的實施方式中，本發(fā)明還提供TLR配體、環(huán)狀二核苷酸、輔助肽、免疫調(diào)節(jié)低分子藥物或它們的2種以上的組合作為抗原的經(jīng)皮給予用細胞免疫誘導(dǎo)促進劑的應(yīng)用。因而，本發(fā)明還提供以下的實施方式:
[0046](17) TLR配體、環(huán)狀二核苷酸、輔助肽、免疫調(diào)節(jié)低分子藥物或它們的2種以上的組合在利用抗原的經(jīng)皮給予來進行的細胞免疫誘導(dǎo)中作為細胞免疫誘導(dǎo)促進劑的應(yīng)用。 [0047]另外，本發(fā)明還提供以下記載的實施方式:
[0048](18) —種細胞免疫誘導(dǎo)方法，其包括將抗原以及選自由TLR配體、環(huán)狀二核苷酸、輔助肽以及免疫調(diào)節(jié)低分子藥物組成的組中的I種以上細胞免疫誘導(dǎo)促進劑經(jīng)皮給予至對象；
[0049](19) TLR配體、環(huán)狀二核苷酸、輔助肽、免疫調(diào)節(jié)低分子藥物或它們的2種以上的組合在促進利用抗原的經(jīng)皮給予來進行的細胞免疫誘導(dǎo)中的應(yīng)用；
[0050](20)抗原與選自由TLR配體、環(huán)狀二核苷酸、輔助肽以及免疫調(diào)節(jié)低分子藥物組成的組中的I種以上細胞免疫誘導(dǎo)促進劑的組合在利用抗原的經(jīng)皮給予來進行的細胞免疫誘導(dǎo)中的應(yīng)用；
[0051](21) (i)癌抗原與(ii)選自由TLR配體、環(huán)狀二核苷酸、輔助肽以及免疫調(diào)節(jié)低分子藥物組成的組中的I種以上細胞免疫誘導(dǎo)促進劑的組合在癌癥的治療或預(yù)防中的應(yīng)用，該組合進行經(jīng)皮給予；
[0052](22) (i)病毒抗原與(ii)選自由TLR配體、環(huán)狀二核苷酸、輔助肽以及免疫調(diào)節(jié)低分子藥物組成的組中的I種以上細胞免疫誘導(dǎo)促進劑的組合在病毒性疾病的治療或預(yù)防中的應(yīng)用，該組合進行經(jīng)皮給予；
[0053](23)抗原、以及選自由TLR配體、環(huán)狀二核苷酸、輔助肽以及免疫調(diào)節(jié)低分子藥物組成的組中的I種以上細胞免疫誘導(dǎo)促進劑在用于誘導(dǎo)細胞免疫的經(jīng)皮給予用疫苗組合物的制造中的應(yīng)用；
[0054](24) (i)癌抗原、以及(ii)選自由TLR配體、環(huán)狀二核苷酸、輔助肽以及免疫調(diào)節(jié)低分子藥物組成的組中的I種以上細胞免疫誘導(dǎo)促進劑在用于癌癥的治療或預(yù)防的經(jīng)皮給予用疫苗組合物的制造中的應(yīng)用；以及
[0055](25) (i)病毒抗原、以及(ii)選自由TLR配體、環(huán)狀二核苷酸、輔助肽以及免疫調(diào)節(jié)低分子藥物組成的組中的I種以上細胞免疫誘導(dǎo)促進劑在用于病毒性疾病的治療或預(yù)防的經(jīng)皮給予用疫苗組合物的制造中的應(yīng)用。
[0056]發(fā)明的效果
[0057]本發(fā)明的疫苗組合物由于能夠經(jīng)皮給予而具有以下優(yōu)點:優(yōu)異的依從性，例如非侵入式給予、無痛、不產(chǎn)生對注射的恐懼、因給予方便而患者可以自行給予、還可以避免醫(yī)務(wù)工作者的針扎感染事故的風(fēng)險、能夠減少反復(fù)給予時的去醫(yī)院的頻率而有助于提高患者的生活品質(zhì)、不產(chǎn)生注射針這樣的需要特殊廢棄的醫(yī)療廢棄物。另外，為巴布劑、帶狀制劑(tapes)等貼劑形態(tài)時，具有能夠可靠地給予規(guī)定的給予量、能夠任意地控制藥物釋放速度、并且給予時不會附著在其它部位的優(yōu)點。進而，貼劑可以容易地貼附/撕除，因此，還具有在產(chǎn)生副作用時等自應(yīng)用部位除去貼劑從而患者自己便能立即終止給予的優(yōu)點。進而，本發(fā)明的疫苗組 合物還具有與單獨給予抗原相比效能顯著提高的優(yōu)點。進而，本發(fā)明的疫苗組合物的經(jīng)皮給予還具有與注射給予相比能夠誘導(dǎo)更強的免疫的優(yōu)點。
【具體實施方式】
[0058]為了更容易理解本發(fā)明，定義本說明書中使用的術(shù)語。未進行定義的術(shù)語只要沒有上下文不同的啟示就表示本領(lǐng)域技術(shù)人員、尤其是醫(yī)學(xué)、藥學(xué)、免疫學(xué)、細胞生物學(xué)、生物化學(xué)、高分子化學(xué)等領(lǐng)域的從業(yè)者所通常理解的意思。
[0059]1.定義
[0060]在本說明書中使用時，術(shù)語“抗原”是指能夠誘導(dǎo)免疫應(yīng)答的所有物質(zhì)，例如可列舉出蛋白質(zhì)、肽等。在要求抗原的皮膚滲透性的經(jīng)皮給予中，優(yōu)選使用分子量小的抗原，例如可以使用由約8~約12個氨基酸構(gòu)成的肽。在本發(fā)明中，例如將以下記載的生存素2B肽、GPC3 肽、HER2/neu_A24 肽、MAGE3_A24 肽、IPEP87 肽、PRl 肽、HER2/neu_A02 肽、MAGE3_A02肽、HBVenv肽、HER2/neu E75肽、MUCl肽等用作抗原。在一個實施方式中，本發(fā)明的疫苗組合物中使用的抗原不包括選自由癌疫苗用途的HER2/neu E75肽、癌疫苗用途的經(jīng)改變的HER2/neu E75肽、癌疫苗用途的WTl肽、以及癌疫苗用途的經(jīng)改變的WTl肽組成的組中的I種以上肽。
[0061]在本說明書中使用時，術(shù)語“生存素2B肽”是指由序列Ala Tyr Ala Cys Asn ThrSer Thr Leu (序列號I)構(gòu)成的、來源于癌基因產(chǎn)物生存素的肽。
[0062]在本說明書中使用時，術(shù)語“GPC3肽”是指由序列Glu Tyr He Leu Ser Leu GluGlu Leu (序列號2)構(gòu)成的、來源于癌基因產(chǎn)物GPC3的肽。
[0063]在本說明書中使用時，術(shù)語“HER2/neu_A24肽”是指由序列Thr Tyr Leu Pro ThrAsn Ala Ser Leu (序列號3)構(gòu)成的、來源于癌基因產(chǎn)物HER2/neu的HLA-A24限制性肽。
[0064]在本說明書中使用時，術(shù)語“MAGE3_A24肽”是指由序列l(wèi)ie Met Pro Lys Ala GlyLeu Leu Ile (序列號4)構(gòu)成的、來源于癌基因產(chǎn)物MAGE3的HLA-A24限制性肽。
[0065]在本說明書中使用時，術(shù)語“IPEP87肽”是指由序列Asp Leu Met Gly Tyr IlePro Ala Val (序列號5)構(gòu)成的、來源于丙型肝炎病毒(HCV)蛋白質(zhì)的肽。
[0066]在本說明書中使用時，術(shù)語“PR1肽”是指由序列Val Leu Gln Glu Leu Asn ValThr Val (序列號6)構(gòu)成的、來源于癌基因產(chǎn)物蛋白酶-3的肽。
[0067]在本說明書中使用時，術(shù)語“HER2/neu_A02肽”是指由序列Lys Val Phe Gly SerLeu Ala Phe Val (序列號7)構(gòu)成的、來源于癌基因產(chǎn)物HER2/neu的HLA-A02限制性肽。
[0068]在本說明書中使用時，術(shù)語“MAGE3_A02肽”是指由序列Lys Val Ala Glu He ValHis Phe Leu (序列號8)構(gòu)成的、來源于癌基因產(chǎn)物MAGE3的HLA-A02限制性肽。
[0069]在本說明書中使用時，術(shù)語“HBVenv肽”是指由序列Trp Leu Ser Leu Leu ValPro Phe Val (序列號9)構(gòu)成的、來源于乙型肝炎病毒(HBV)蛋白質(zhì)的肽。
[0070]在本說明書中使用時，術(shù)語“HER2/neu E75肽”是指由序列Lys He Phe Gly SerLeu Ala Phe Leu (序列號10)構(gòu)成的、來源于癌基因HER2/neu的產(chǎn)物(HER2蛋白質(zhì))的肽。
[0071]在本說明書中使用時，術(shù)語“MUC1肽”是指由序列Ser Thr Ala Pro Pro Val HisAsn Val (序列號11)構(gòu)成的、來源于在多個癌細胞上高度表達的糖蛋白即MUCl蛋白的肽。
[0072]在本說 明書中使用時，術(shù)語“WT1肽”是指由癌基因WTl (Wilm’s腫瘤)的產(chǎn)物WTl蛋白片段化而得到的、由約8~約15個、優(yōu)選約8~約12個氨基酸構(gòu)成的部分肽，其中包括Db 126肽、Db235肽(均記載在日本專利第4422903號公報中)等。另外，W02000/06602中公開的WTl產(chǎn)物的部分肽、W02005/095598中記載的來源于WTl的HLA-A26結(jié)合性癌抗原肽、W02007/097358 中記載的 HLA-A * 3303 限制性 WTl 肽、及 W02008/081701 中記載的 HLA-A* 1101限制性WTl肽也包含在本說明書的“WT1肽”中。
[0073]在本說明書中使用時，術(shù)語“經(jīng)改變的XX肽”(XX為任意肽的名稱)是指XX肽的全部或一部分氨基酸通過置換、修飾等而被改變了的肽。
[0074]經(jīng)改變的XX肽包括例如:
[0075](a)由在XX肽的氨基酸序列中置換、缺失或附加I個~數(shù)個、例如I個、2個、3個、4個或5個氨基酸而得到的氨基酸序列構(gòu)成的肽；及
[0076](b)由在XX肽的氨基酸序列中全部或一部分氨基酸、例如I個或多個、例如I個、2個、3個、4個、5個、6個、7個、8個、9個或10個氨基酸經(jīng)過修飾而得到的氨基酸序列構(gòu)成的肽。
[0077]作為經(jīng)改變的XX肽可以具有的氨基酸的“修飾”，并不限定于此，例如可以列舉出乙酰化、甲基化等烷基化、糖基化、羥基化、羧基化、醛化、磷酸化、磺?；⒓柞；?、豆蘧酰化、棕櫚?；?、硬脂?；@樣的脂肪鏈附加修飾、辛?；Ⅴセ?、酰胺化、脫酰胺化、胱氨酸修飾、谷胱甘肽修飾、巰基乙酸修飾這樣的二硫鍵形成修飾、糖化、泛素化、琥珀酰亞胺形成、谷酰化、異戊二烯化等。經(jīng)改變的XX肽也可以包含組合I個以上氨基酸的置換、缺失或附加、和I個以上氨基酸的修飾。
[0078]在優(yōu)選的實施方式中，本發(fā)明的經(jīng)皮給予用疫苗組合物所含有的抗原為選自由生存素2B肽和/或經(jīng)改變的生存素2B肽、GPC3肽和/或經(jīng)改變的GPC3肽、HER2/neu_A24肽和/或經(jīng)改變的HER2/neu_A24肽、MAGE3_A24肽和/或經(jīng)改變的MAGE3_A24肽、IPEP87肽和/或經(jīng)改變的IPEP87肽、PRl肽和/或經(jīng)改變的PRl肽、HER2/neu_A02肽和/或經(jīng)改變的HER2/neu_A02肽、MAGE3_A02肽和/或經(jīng)改變的MAGE3_A02肽、HBVenv肽和/或經(jīng)改變的HBVenv肽、以及MUCl肽和/或經(jīng)改變的MUCl肽組成的組中的肽。另外，作為抗原可以使用HER2/neu E75肽和/或經(jīng)改變的HER2/neu E75肽。
[0079]上述列舉的肽可以為游離形態(tài)或藥理學(xué)上容許的任意的鹽形態(tài)，例如酸鹽(醋酸鹽、TFA鹽、鹽酸鹽、硫酸鹽、磷酸鹽、乳酸鹽、酒石酸鹽、馬來酸鹽、富馬酸鹽、草酸鹽、氫溴酸鹽、琥珀酸鹽、硝酸鹽、蘋果酸鹽、檸檬酸鹽、油酸鹽、棕櫚酸鹽、丙酸鹽、甲酸鹽、苯甲酸鹽、苦味酸鹽、苯磺酸鹽、十二烷基硫酸鹽、甲磺酸鹽、對甲苯磺酸鹽、戊二酸鹽、各種氨基酸鹽等)、金屬鹽(堿金屬鹽(例如鈉鹽、鉀鹽)、堿土金屬鹽(例如鈣鹽、鎂鹽)、鋁鹽等)、胺鹽(三乙胺鹽、芐胺鹽、二乙醇胺鹽、叔丁胺鹽、二環(huán)己胺鹽、精氨酸鹽、二甲基銨鹽、銨鹽等)的形態(tài)。優(yōu)選的藥理學(xué)上容許的鹽為醋酸鹽或TFA鹽。本發(fā)明中能夠用作抗原的上述肽可以使用利用公知的方法來合成或生產(chǎn)、并進行分離及精制而得到的肽。
[0080]在本說明書中使用時，術(shù)語“Thl細胞”以及“Th2細胞”分別是指I型輔助性T細胞以及2型輔助性T細胞。
[0081]在本說明書中使用時，術(shù)語“Thl細胞比率”是指通過以下式子算出的、Thl細胞數(shù)相對于Thl細胞數(shù)與Th2細胞數(shù)的總計的比率(百分比)。
[0082][數(shù)學(xué)式I]
[0083]Thl細胞比率(％)=[Thl細胞數(shù)/ (Thl細胞數(shù)+Th2細胞數(shù))]XlOO
[0084]Thl細胞數(shù)和Th2細胞數(shù)可以通過使用了免疫評價用動物模型的免疫誘導(dǎo)實驗和ELISP0T 方法(IFN- Y , IL-4)來測定。
[0085]在本發(fā)明的一個實施方式中，本發(fā)明的疫苗組合物的特征在于，給予了該組合物的免疫評價用動物模型的Thl細胞比率大于10%。給予了本發(fā)明的疫苗組合物的免疫評價用動物模型的Thl細胞比率例如可以為10%以上、15%以上、20%以上、25%以上、30%以上、35%以上、40%以上、45%以上、50%以上、55%以上、60%以上、65%以上、70%以上、75%以上或80%以上。在包含HLA -A ~k 24型MHC限制性I類肽的疫苗組合物的情況下，用作為免疫評價用動物模型的BALB/c小鼠進行評價時，給予該組合物后的Thl細胞比率優(yōu)選為10%以上、例如15%以上、20%以上、 或25%以上，更優(yōu)選為30%以上、例如35%以上、40%以上、或45%以上，進一步優(yōu)選為50%以上、例如55%以上、60%以上、65%以上、70%以上、75%以上或80%以上。在包含HLA-A * 02型MHC限制性I類肽的疫苗組合物的情況下，用作為免疫評價用動物模型的、能評價利用HLA-A * 02型MHC拘束性肽來進行的細胞免疫誘導(dǎo)的轉(zhuǎn)基因小鼠進行評價時，給予該組合物后的Thl細胞比率優(yōu)選為10%以上、例如15%以上、20%以上、或25%以上，更優(yōu)選為30%以上、例如35%以上、40%以上、或45%以上，進一步優(yōu)選為50%以上、例如55%以上、60%以上、65%以上、70%以上、75%以上或80%以上。在最優(yōu)選的實施方式中，就給予了本發(fā)明的疫苗組合物的免疫評價用動物模型的Thl細胞比率而言，包含HLA-A女24型MHC限制性I類肽的疫苗組合物在用BALB/c小鼠進行評價時為10%以上，包含HLA-A* 02型MHC限制性I類肽的疫苗組合物在用能評價基于HLA-A * 02型MHC拘束性肽的細胞免疫誘導(dǎo)的轉(zhuǎn)基因小鼠進行評價時為50%以上。
[0086]就在免疫評價用動物模型中會實現(xiàn)10%以上的Thl細胞比率的本發(fā)明的疫苗組合物而言，通過將其給予至期望的對象、例如人等，能夠增加該對象的Thl細胞比率，發(fā)揮高的細胞免疫誘導(dǎo)效果。
[0087]在一個優(yōu)選的實施方式中，免疫評價用動物模型的10%以上的Thl細胞比率通過給予含有抗原以及選自由TLR配體、環(huán)狀二核苷酸、輔助肽、免疫調(diào)節(jié)低分子藥物組成的組中的I種以上細胞免疫誘導(dǎo)促進劑的疫苗組合物來實現(xiàn)。
[0088]給予了本發(fā)明的疫苗組合物的免疫評價用動物模型的Thl細胞比率自該組合物的最終給予起6日后進行測定。用于測定Thl細胞比率的樣品為免疫評價用動物模型的脾臟。[0089]在本說明書中使用時，術(shù)語“細胞免疫誘導(dǎo)促進劑”是指能夠使一同給予的抗原的誘導(dǎo)細胞免疫的效率與沒有給予其時的效率相比得到改善的所有物質(zhì)，不受促進細胞免疫誘導(dǎo)的作用機制限定，是指本申請說明書中特定的物質(zhì)。
[0090]在本說明書中使用時，術(shù)語“TLR配體”是指Toll樣受體(TLR)的配體，例如包括TLRl~9的配體。作為TLR配體，可列舉出TLR1/2配體、TLR2/6配體、TLR2及Dectinl配體、TLR3配體、TLR4配體、TLR5配體、TLR7和/或TLR8配體、TLR9配體等。本發(fā)明的優(yōu)選的實施方式中，TLR配體為TLR1/2配體、TLR2及Dectinl配體、TLR3配體、TLR4配體、TLR7和/或TLR8配體、和/或TLR9配體。
[0091]在本說明書中使用時，術(shù)語“TLR1/2配體”是指Toll樣受體(TLR) I及Toll樣受體(TLR) 2的異質(zhì)二聚體的配體，例如包括來源于細菌的細胞壁的三?；鞍准捌潲}，它們也可以是提取物、生成物或合成品，但并不限定于它們。
[0092]本發(fā)明的優(yōu)選的實施方式中，TLR1/2配體為Pam3CSK4。Pam3CSK4具有式
[0093]
【權(quán)利要求】
1.一種疫苗組合物，其特征在于，其為包含抗原且用于細胞免疫誘導(dǎo)的經(jīng)皮給予用疫苗組合物，給予了該組合物的免疫評價用動物模型的Thl細胞比率為10%以上。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的疫苗組合物,其中，該組合物通過包含選自由TLR配體、環(huán)狀二核苷酸、輔助肽以及免疫調(diào)節(jié)低分子藥物組成的組中的I種以上細胞免疫誘導(dǎo)促進劑，免疫評價用動物模型的Thl細胞比率為10%以上。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的疫苗組合物，其中，細胞免疫誘導(dǎo)促進劑為輔助肽。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的疫苗組合物，其中，細胞免疫誘導(dǎo)促進劑為選自由TLR配體、環(huán)狀二核苷酸以及免疫調(diào)節(jié)低分子藥物組成的組中的I種以上與輔助肽的組合。
5.根據(jù)權(quán)利要求1~4中任一項所述的疫苗組合物，其在低刺激條件下進行給予。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的疫苗組合物，其中，低刺激條件是皮膚刺激評價用動物模型的該組合物的給予前的經(jīng)皮水分散發(fā)量即TEWL為50g/h.m2以下的條件。
7.根據(jù)權(quán)利要求5或6的疫苗組合物，其中，低刺激條件是皮膚刺激評價用動物模型的該組合物的給予結(jié)束時的皮膚內(nèi)胸腺基質(zhì)淋巴細胞生成素即TSLP水平為10000pg/mg蛋白質(zhì)以下的條件。
8.根據(jù)權(quán)利要求1~7中任一項所述的疫苗組合物，其中，抗原為選自由生存素2B肽和/或經(jīng)改變的生存素2B肽、GPC3肽和/或經(jīng)改變的GPC3肽、HER2/neu_A24肽和/或經(jīng)改變的HER2/neu_A24肽、MAGE3_A24肽和/或經(jīng)改變的MAGE3_A24肽、IPEP87肽和/或經(jīng)改變的IPEP87肽、PRl肽和/或 經(jīng)改變的PRl肽、HER2/neu_A02肽和/或經(jīng)改變的HER2/neu_A02肽、MAGE3_A02肽和/或經(jīng)改變的MAGE3_A02肽、HBVenv肽和/或經(jīng)改變的HBVenv肽、以及MUCl肽和/或經(jīng)改變的MUCl肽組成的組中的肽。
【文檔編號】A61P35/00GK103961306SQ201410042823
【公開日】2014年8月6日 申請日期:2014年1月29日 優(yōu)先權(quán)日:2013年2月5日
【發(fā)明者】宍戶卓矢, 大久保勝之, 淺利大介, 岡崎有道, 前田佳己, 松下恭平, 李文婧, 堀光彥, 杉山治夫 申請人:日東電工株式會社