一種含人參的植物組合物提取方法和應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明提供一種含人參的植物組合物提取方法，由人參75g、生地黃150g、熟地黃150g、酒炙山茱萸150g、山藥300g、澤瀉150g、牡丹皮150g、茯苓150g、麥冬150g、天冬150g作為原料藥制成，采用微波提取方法制備而成，使得含量有很大提高，用量減少，本發(fā)明還提供了含人參的植物組合物在制備抑制大鼠腎上腺嗜鉻細(xì)胞瘤PC-12細(xì)胞增殖藥物中的應(yīng)用。
【專利說(shuō)明】一種含人參的植物組合物提取方法和應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及中藥制劑【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及一種含人參的植物組合物提取方法及應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002]含人參的植物組合物由人參75g、生地黃150g、熟地黃150g、酒炙山茱萸150g、山藥300g、澤瀉150g、牡丹皮150g、茯苓150g、麥冬150g、天冬150g作為原料藥制成，收載于衛(wèi)生部標(biāo)準(zhǔn)(WS3-B-0010-89)，目前的提取方法是以上十味，粉碎成細(xì)粉，過(guò)篩，混勻。每100g粉末加煉蜜80~100g，制成大蜜丸，即得，能滋陰益氣，固本培元。用于陰虛氣弱，虛勞咳嗽，心悸氣短，骨蒸潮熱，腰酸耳鳴，遺精盜汗，大便干燥。
[0003]現(xiàn)有技術(shù)中，尚未有含人參的植物組合物在提取制備方面采用微波技術(shù)的報(bào)道，而采用打粉的方法，工藝粗糙、落后，雜質(zhì)多，導(dǎo)致患者用量過(guò)大，不方便服用，嚴(yán)重影響了本品在臨床上應(yīng)用。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]發(fā)明目的:為了解決上述問(wèn)題，本發(fā)明的目的在于提供一種含人參的植物組合物提取方法。
[0005]本發(fā)明的另一個(gè)目的在于提供一種含人參的植物組合物在制備抑制大鼠腎上腺嗜鉻細(xì)胞瘤PC-12細(xì)胞增殖藥物中的應(yīng)用。
[0006]技術(shù)方案:本發(fā)明的目的是通過(guò)如下的方案實(shí)現(xiàn)的:
[0007]一種含人參的植物組合物提取方法，植物組合物由人參75g、生地黃150g、熟地黃150g、酒炙山茱萸150g、山藥300g、澤瀉150g、牡丹皮150g、茯苓150g、麥冬150g、天冬150g作為原料藥制成，制備方法由下列步驟組成:取上述原料藥，粉碎，加入2L的70%乙醇，投入微波萃取裝置中進(jìn)行微波萃取，萃取功率為400-600W,萃取2次,每次4-8分鐘,合并萃取液，濃縮，加到DlOl大孔吸附樹脂柱上，50%乙醇洗脫，收集5倍量柱體積洗脫液，減壓回收乙醇，濃縮并干燥，得微波提取物，加常規(guī)輔料制備成丸劑，每丸4.5g。
[0008]上述一種含人參的植物組合物提取方法，制備方法中微波萃取功率為500W，每次萃取6分鐘。
[0009]一種含人參的植物組合物在制備抑制大鼠腎上腺嗜鉻細(xì)胞瘤PC-12細(xì)胞增殖藥物中的應(yīng)用，含人參的植物組合物由人參75g、生地黃150g、熟地黃150g、酒炙山茱萸150g、山藥300g、澤瀉150g、牡丹皮150g、茯苓150g、麥冬150g、天冬150g作為原料藥制成，制備方法由下列步驟組成:取上述原料藥，粉碎，加入2L的70%乙醇，投入微波萃取裝置中進(jìn)行微波萃取，萃取功率為400-600W，萃取2次，每次4-8分鐘，合并萃取液，濃縮，加到DlOl大孔吸附樹脂柱上，50%乙醇洗脫，收集5倍量柱體積洗脫液，減壓回收乙醇，濃縮并干燥，得微波提取物，加常規(guī)輔料制備成丸劑。
[0010]上述一種含人參的植物組合物在制備抑制大鼠腎上腺嗜鉻細(xì)胞瘤PC-12細(xì)胞增殖藥物中的應(yīng)用，制備方法中所述微波萃取功率為500W，每次萃取6分鐘。
[0011]現(xiàn)有技術(shù)中，含人參的植物組合物每丸9g，每次I丸，一日2次，采用本發(fā)明制備成的含人參的植物組合物每丸4.5g，但含有的藥材量是原來(lái)的2倍，因此每次僅需I丸，一日服用2次，在具有更多活性成分的條件下大大減少了服用量，本發(fā)明以生地黃、熟地黃、酒炙山茱萸滋陰為君藥，人參、山藥益氣為臣藥，澤瀉、牡丹皮、茯苓、麥冬、天冬固本培元為佐使藥，共同達(dá)到滋陰益氣，固本培元的作用。
【具體實(shí)施方式】
[0012]以下通過(guò)實(shí)施例形式，對(duì)本發(fā)明的上述內(nèi)容再作進(jìn)一步的詳細(xì)說(shuō)明，但不應(yīng)將此理解為本發(fā)明上述主題的范圍僅限于以下的實(shí)例，凡基于本發(fā)明上述內(nèi)容所實(shí)現(xiàn)的技術(shù)均屬于本發(fā)明的范圍。
[0013]實(shí)施例1
[0014]取人參75g、生地黃150g、熟地黃150g、酒炙山茱萸150g、山藥300g、澤瀉150g、牡丹皮150g、茯苓150g、麥冬150g、天冬150g，粉碎，加入2L的70%乙醇，投入微波萃取裝置中進(jìn)行微波萃取，萃取功率為400-600W，萃取2次，每次4-8分鐘，合并萃取液，濃縮，加到DlOl大孔吸附樹脂柱上，50%乙醇洗脫，收集5倍量柱體積洗脫液，減壓回收乙醇，濃縮并干燥，得微波提取物，加常規(guī)輔料制備成丸劑，每片4.5g。
[0015]實(shí)施例2
[0016]取人參75g、生地黃150g、熟地黃150g、酒炙山茱萸150g、山藥300g、澤瀉150g、牡丹皮150g、茯苓150g、麥冬150g、天冬150g，粉碎，加入2L的70%乙醇，投入微波萃取裝置中進(jìn)行微波萃取，萃取功率為400-600W，萃取2次，每次4-8分鐘，合并萃取液，濃縮，加到DlOl大孔吸附樹脂柱上，50%乙醇洗脫，收集5倍量柱體積洗脫液，減壓回收乙醇，濃縮并干燥，得微波提取物，加常規(guī)輔料制備成丸劑。
[0017]實(shí)施例3
[0018]取人參75g、生地黃150g、熟地黃150g、酒炙山茱萸150g、山藥300g、澤瀉150g、牡丹皮150g、茯苓150g、麥冬150g、天冬150g，粉碎，加入2L的70%乙醇，投入微波萃取裝置中進(jìn)行微波萃取，萃取功率為400-600W，萃取2次，每次4-8分鐘，合并萃取液，濃縮，加到DlOl大孔吸附樹脂柱上，50%乙醇洗脫，收集5倍量柱體積洗脫液，減壓回收乙醇，濃縮并干燥，得微波提取物，加常規(guī)輔料制備成丸劑。
[0019]本發(fā)明中藥材均為藥典品種。
[0020]實(shí)施例4:含人參的植物組合物抑制大鼠腎上腺嗜鉻細(xì)胞瘤PC-12細(xì)胞增殖的實(shí)驗(yàn)研究資料
[0021]I實(shí)驗(yàn)材料
[0022]1.1實(shí)驗(yàn)用細(xì)胞株
[0023]大鼠腎上腺嗜鉻細(xì)胞瘤PC-12細(xì)胞，南京醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心實(shí)驗(yàn)室細(xì)胞庫(kù)，DMEM+10%FBS常規(guī)培養(yǎng)。
[0024]1.2實(shí)驗(yàn)藥物`
[0025]研究藥物:本發(fā)明含人參的植物組合物:按實(shí)施例1方法制備。
[0026]藥液儲(chǔ)液:稱取IOOmg含人參的植物組合物，溶于5ml無(wú)水乙醇中，0.2 μ m濾器過(guò)濾，500 μ I doff管分裝，-20°c存儲(chǔ)，同時(shí)0.2 μ m濾器過(guò)濾無(wú)水乙醇以備對(duì)照組之用。
[0027]1.3實(shí)驗(yàn)試劑
[0028]DMEM (GIBC0 公司 Cat.N0.12100-061Lot.N0.758137);胎牛血清(浙江天杭生物科技有限公司Lot.N0.100419)；NaHC03 (上海久億化學(xué)試劑有限公司Cat.N0.11810_033Lot.N0.1088387)；Trypsin (AMRESC0 公司批號(hào):2010/04)；EDTA (AMRESC0 公司批號(hào):2009/10);Penicillin G Sodium Salt(AMRESC0 公司批號(hào):2010242);Str 印 tomycin Su I fat e( AMRE SCO公司批號(hào):2010382);無(wú)水乙醇(南京化學(xué)試劑有限公司批號(hào):080310182);MTT(Biosharp批號(hào):0793) ;PBS (實(shí)驗(yàn)室自配)；
[0029]1.4實(shí)驗(yàn)器材
[0030]萊卡倒置顯微鏡(德國(guó)Leica型號(hào):DM1L);可見-紫外光微孔板檢測(cè)儀(美國(guó)MD公司型號(hào):SPECTRA MAX190) ；C02培養(yǎng)箱(FORMA型號(hào):3111);超凈臺(tái)(蘇凈集團(tuán)安泰公司制造型號(hào):SW-CJ-ZFD);純水儀(美國(guó)Spring公司型號(hào):S/N020579);精密移液器(法國(guó)吉爾森公司型號(hào):P2);電子天平(德國(guó)賽多利斯有限公司型號(hào):BT323S);全自動(dòng)高壓滅菌鍋(日本SANYO公司型號(hào):MLS-3020);臺(tái)式電熱鼓風(fēng)干燥箱(上海精密實(shí)驗(yàn)設(shè)備公司型號(hào):DHG9123A);冰箱(西門子公司型號(hào):KG18V21TI);液氮罐(CBS型號(hào):2001);低速離心機(jī)(上海安亭科學(xué)儀器廠型號(hào):ΚΑ-1000) ;0.2μπι濾器(MILLIP0RE型號(hào):SLGP033RB) ; IOcm培養(yǎng)皿(NEST公司)、96孔培養(yǎng)板(NEST公司)；細(xì)胞計(jì)數(shù)板；離心管、移液管、Tips若干。
[0031]2實(shí)驗(yàn)方法
[0032]I)大鼠腎上腺嗜鉻細(xì)胞瘤PC-12細(xì)胞用DMEM+10%FBS于37°C、5%C02進(jìn)行常規(guī)培養(yǎng)(IOcm培養(yǎng)皿)，當(dāng)細(xì)胞生長(zhǎng)至對(duì)數(shù)期時(shí)，收集細(xì)胞，棄去培養(yǎng)液，PBS輕洗3遍，加入3ml0.25%胰蛋白酶-0.04%EDTA, 37°C消化2min后，向其中加入5ml完全培養(yǎng)基中和反應(yīng)，吹打細(xì)胞后將其轉(zhuǎn)入離 心管中，1000rpm離心5min，調(diào)整細(xì)胞懸液濃度3X 104個(gè)/ml。
[0033]2)將細(xì)胞種入96孔培養(yǎng)板中，每孔加入細(xì)胞懸液180 μ I,培養(yǎng)板放入細(xì)胞培養(yǎng)箱中(37 °C，5%C02 )常規(guī)培養(yǎng)。
[0034]3)根據(jù)細(xì)胞生長(zhǎng)情況，一般長(zhǎng)至50%_70%，加入含人參的植物組合物溶液，繼續(xù)培養(yǎng) 24h。
[0035]4) 24h 后加入 20 μ I MTT 溶液(5mg/ml，即 0.5%MTT)，繼續(xù)培養(yǎng) 4h。
[0036]5) 4h后扣板法倒去上清，用吸水紙輕輕拍干，每孔加入200 μ I 二甲基亞砜，置搖床上低速振蕩lOmin，使結(jié)晶物充分溶解。在酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀490nm處測(cè)量各孔的吸光值。
[0037]6)同時(shí)設(shè)置本底(不加細(xì)胞，只加培養(yǎng)液)，對(duì)照孔(細(xì)胞、相同濃度的藥物溶解介質(zhì)、培養(yǎng)液、MTT、二甲基亞砜)，每組設(shè)定6個(gè)復(fù)孔。
[0038]7)結(jié)果以藥物對(duì)細(xì)胞的抑制率表示:
[0039]細(xì)胞增值抑制率(％)=(對(duì)照孔OD值-給藥孔OD值)/對(duì)照孔OD值X 100%。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。
[0040]3統(tǒng)計(jì)處理
[0041]采用Microsoft Excel2003軟件中的相關(guān)分析和Student t檢驗(yàn)，數(shù)據(jù)以mean+ S.D.表不。
[0042]4實(shí)驗(yàn)結(jié)果
[0043]MTT法實(shí)驗(yàn)后統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示，與對(duì)照組比較，當(dāng)劑量達(dá)到5mg/ml時(shí)，對(duì)大鼠腎上腺嗜鉻細(xì)胞瘤PC-12細(xì)胞增殖抑制有差異(P〈0.05)，劑量在10mg/ml時(shí)該差異具有顯著性(Ρ〈0.01)，當(dāng)劑量達(dá)到15-20mg/ml時(shí)有極顯著性差異(Ρ〈0.001)。
[0044]表1含人參的植物組合物對(duì)大鼠腎上腺嗜鉻細(xì)胞瘤PC-12細(xì)胞增殖抑制影響研究
[0045]
【權(quán)利要求】
1.一種含人參的植物組合物提取方法，其特征在于植物組合物由人參75g、生地黃150g、熟地黃150g、酒炙山茱萸150g、山藥300g、澤瀉150g、牡丹皮150g、茯苓150g、麥冬150g、天冬150g作為原料藥制成,制備方法由下列步驟組成:取上述原料藥,粉碎,加入2L的70%乙醇，投入微波萃取裝置中進(jìn)行微波萃取，萃取功率為400-600W，萃取2次，每次4_8分鐘，合并萃取液，濃縮，加到DlOl大孔吸附樹脂柱上，50%乙醇洗脫，收集5倍量柱體積洗脫液，減壓回收乙醇，濃縮并干燥，得微波提取物，加常規(guī)輔料制備成丸劑，每丸4.5g。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述一種含人參的植物組合物提取方法，其特征在于制備方法中微波萃取功率為500W，每次萃取6分鐘。
3.一種含人參的植物組合物在制備抑制大鼠腎上腺嗜鉻細(xì)胞瘤PC-12細(xì)胞增殖藥物中的應(yīng)用，其特征在于含人參的植物組合物由人參75g、生地黃150g、熟地黃150g、酒炙山茱萸150g、山藥300g、澤瀉150g、牡丹皮150g、茯苓150g、麥冬150g、天冬150g作為原料藥制成，制備方法由下列步驟組成:取上述原料藥，粉碎，加入2L的70%乙醇，投入微波萃取裝置中進(jìn)行微波萃取，萃取功率為400-600W，萃取2次，每次4-8分鐘，合并萃取液，濃縮，加到DlOl大孔吸附樹脂柱上，50%乙醇洗脫，收集5倍量柱體積洗脫液，減壓回收乙醇，濃縮并干燥，得微波提取物，加常規(guī)輔料制備成丸劑。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述 一種含人參的植物組合物在制備抑制大鼠腎上腺嗜鉻細(xì)胞瘤PC-12細(xì)胞增殖藥物中的應(yīng)用，其特征在于制備方法中所述微波萃取功率為500W，每次萃取6分鐘。
【文檔編號(hào)】A61K36/8968GK103816368SQ201410091162
【公開日】2014年5月28日 申請(qǐng)日期:2014年3月12日 優(yōu)先權(quán)日:2014年3月12日
【發(fā)明者】李正梅 申請(qǐng)人:李正梅