一種用于治療婦女陰道炎的抗菌肽凍干制劑及制備方法
【專利摘要】本發(fā)明提供一種治療婦女陰道炎的凍干制劑，包括抗菌肽凍干粉和抗菌肽基本液，所述抗菌肽凍干粉包括如下按照總質(zhì)量百分?jǐn)?shù)計的組分：抗菌肽人β防御素0.1%-8%、低分子肝素鈉0.01%-0.2%、穩(wěn)定劑1%-15%，所述抗菌肽基本液包括如下按總質(zhì)量百分?jǐn)?shù)計的組分：透明質(zhì)酸0.01%-0.4%，甲基丙二醇0.5%-4%，蜂蜜提取物0.5%-5%，PCA鈉0.5%-5%，溶解蛋白酶0.5%-5%，1,2己二醇0.3%-0.7%，燕麥β葡聚糖1.5%-6%，大豆異黃酮1%-5%，余量為去離子水或注射用水。本發(fā)明的抗菌肽凍干制劑具有廣譜抗菌活性，對細(xì)菌、真菌、病毒、原蟲和癌細(xì)胞等具有很強(qiáng)的殺傷作用，甚至能提高免疫力，加速傷口愈合過程，治療療效顯著，不反彈，無任何副作用。
【專利說明】一種用于治療婦女陰道炎的抗菌肽凍干制劑及制備方法 【技術(shù)領(lǐng)域】
[〇〇〇1] 本發(fā)明涉及醫(yī)學(xué)領(lǐng)域，尤其涉及一種治療婦女陰道炎的抗菌肽凍干制劑及其制備 方法。
[0002] 【背景技術(shù)】
[0003] 在女性生殖道內(nèi)廣泛分布著人防御素，與女性天然免疫的防御機(jī)制有密切關(guān)系。 對保證女性生殖系統(tǒng)在正常狀態(tài)下維持生殖健康，抵抗各種外源病菌感染起重要的作用。 正常情況下，女性陰道內(nèi)存在多種微生物，這些微生物維持生殖道生理狀態(tài)而不致發(fā)生感 染，除了宮頸黏液栓屏障、陰道酸堿度等自凈作用外，子宮內(nèi)膜、宮頸、陰道廣泛分布的防御 素也同樣起到重要作用。
[0004] 現(xiàn)今社會由于環(huán)境污染和生活節(jié)奏加快等諸多原因，婦科疾病的患病率越來越 高，年齡范圍在逐步擴(kuò)大，從未成年人到老年人不等且有逐年上升的趨勢。雖說目前市場上 治療疾病的藥物很多，但普遍的藥物治療效果卻不顯著，而且基本上都會出現(xiàn)治療不徹底 及出現(xiàn)反彈現(xiàn)象。給患者的生活，工作造成了諸多不便，更是給她們的身心健康帶來極大的 影響，然而現(xiàn)在很多藥物都產(chǎn)生了細(xì)菌耐藥問題。
[0005]
【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 為了解決以上技術(shù)問題，本發(fā)明提供一種抗菌肽人源防御素。這種防御素不僅是 新型高效的抗菌多肽，而且能調(diào)節(jié)機(jī)體免疫應(yīng)答和炎癥反應(yīng)，調(diào)節(jié)組織創(chuàng)傷修復(fù)，具有特殊 的生物學(xué)作用及天然免疫原性，其抗腫瘤、抗病毒、無耐藥性等特點，對治療女性生殖系統(tǒng) 感染及腫瘤等疾病有著顯著的療效作用。
[0007] -種治療婦女陰道炎的凍干制劑，所述抗菌肽凍干粉包括如下按照總質(zhì)量百分?jǐn)?shù) 計的組分：抗菌肽人β防御素〇. 1 %-8%、低分子肝素鈉0.01 %-0.2%、穩(wěn)定劑1 %-15%， 所述抗菌肽基本液包括如下按總質(zhì)量百分?jǐn)?shù)計的組分：透明質(zhì)酸〇. 01% -〇. 4%，甲基丙二 醇0. 5% -4%，蜂蜜提取物0. 5% -5%，PCA鈉0. 5% -5%，溶解蛋白酶0. 5% _5%，1，2己 二醇0. 3 % -0. 7 %，燕麥β葡聚糖1. 5 % -6 %，大豆異黃酮1 % -5 %，余量為去離子水或注 射用水。
[0008] 其中，透明質(zhì)酸的ΗΑ分子量為150萬-250萬。
[0009] 本發(fā)明治療婦女陰道炎抗菌肽凍干制劑各組分的具體功效和相關(guān)原理為： 抗菌肽（人β防御素）具有廣譜抗菌活性，對細(xì)菌、真菌、病毒、原蟲和癌細(xì)胞等具有 很強(qiáng)的殺傷作用，基于β-防御素的殺菌作用，可將其作為"超級"抗生素，發(fā)揮其強(qiáng)效的抗 多種微生物感染的作用，甚至能提高免疫力，加速傷口愈合過程。
[〇〇1〇] 低分子肝素不僅有抗血栓作用，還有抗炎和抗過敏作用，可增加皮膚血管的通透 性，改善局部血液循環(huán)，有利于營養(yǎng)供給和代謝廢物的排泄，有良好的保健和養(yǎng)護(hù)作用。
[0011] 優(yōu)選的，所述抗菌肽人β防御素采用人β防御素-1、人β防御素_2、人β防御 素-3、人β防御素-4中的一種或幾種。
[0012] 優(yōu)選的，所述穩(wěn)定劑采用凍干保護(hù)劑、抗氧化劑和酸堿調(diào)整劑的一種或多種。
[0013] 優(yōu)選的，所述凍干保護(hù)劑采用甘油、蔗糖、海藻糖、肌醇、葡聚糖、乳糖、聚乙烯吡咯 烷酮、甘氨酸中的一種或幾種。
[0014] 優(yōu)選的，所述抗氧化劑采用維生素D、維生素Ε、維生素C、氨基酸、卵磷脂、蛋白質(zhì) 水解物、硫代硫酸鈉、抗壞血酸鈉蛋白質(zhì)水解物中的一種或幾種。
[0015] 優(yōu)選的，所述酸堿調(diào)整劑采用碳酸鈉、磷酸、EDTA、檸檬酸鉀、酒石酸、山梨酸、 氨基酸中的一種或幾種。
[0016] 優(yōu)選的，所述酸堿調(diào)整劑的摩爾濃度為2-30mmol/L。
[0017] 本發(fā)明還提供一種治療婦女陰道炎凍干制劑的制備方法，包括如下步驟： 步驟A:采用注射級用水將抗菌肽凍干粉中各原料溶解混勻，過濾除菌后分裝于洗凈 的西林瓶中，半加塞置于真空冷凍干燥機(jī)中，真空冷凍干燥15_35h，直至水分升華干燥完 全，真空條件下壓塞密封后扎蓋包裝，得到治療婦女陰道炎凍干粉； 步驟B:使用注射級用水或去離子水將抗菌肽凍干粉中各原料溶解混勻，過濾除菌后 分裝、扎蓋，得到治療婦女陰道炎的基本液； 步驟C:將步驟A所得到的抗菌肽凍干粉與步驟B所得到的基本液混合。
[0018] 優(yōu)選的，所述步驟B中，所述真空冷凍干燥的工藝條件為：對制品進(jìn)行預(yù)凍，使其 溫度降至-50°C，降溫時間為4-8h，抽真空至0. 3mbar，加熱升華干燥，干燥時間為15-25h， 直至制品中的水分升華完全。
[0019] 優(yōu)選的，步驟A中，濾膜的直徑為0. 22μm。
[0020] 本發(fā)明治療婦女陰道炎的試用方法為：將本發(fā)明的抗菌肽凍干粉和抗菌肽基本液 混合溶解后，用于清洗外陰或使用器具導(dǎo)入陰道沖洗。
[0021] 本發(fā)明提供一種通過基因工程技術(shù)從大腸桿菌中提取抗菌肽人β防御素，經(jīng)過 真空冷凍干燥技術(shù)制作而成的一款抗菌肽凍干制劑，可用于預(yù)防、治療婦科炎癥，且具有明 顯功效，不復(fù)發(fā)功能。
[0022] 本發(fā)明治療婦女陰道炎可用于細(xì)菌性、霉菌性、滴蟲性、真菌性所引起的陰道炎、 外陰瘙癢、異味具有很強(qiáng)的消炎止癢殺菌等療效作用，保護(hù)婦女們的身心健康。
[0023] 與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有如下有益效果： 本發(fā)明是通過基因工程技術(shù)從大腸桿菌中提取抗菌肽人β防御素，經(jīng)過真空冷凍干 燥技術(shù)制作而成的一款抗菌肽凍干制劑。本發(fā)明的抗菌肽凍干制劑具有廣譜抗菌活性，對 細(xì)菌、真菌、病毒、原蟲和癌細(xì)胞等具有很強(qiáng)的殺傷作用，甚至能提高免疫力，加速傷口愈合 過程，治療療效顯著，不反彈，無任何副作用。同時利用真空冷凍干燥技術(shù)，在除去產(chǎn)品中絕 大部分水分的同時也保護(hù)了所添加活性物質(zhì)的穩(wěn)定性，受污染的機(jī)會減小，這不僅方便了 運輸還延長了制品的保存期限。
[0024] 【具體實施方式】
[0025] 下面對本發(fā)明的較優(yōu)的實施例作進(jìn)一步的詳細(xì)說明： 實施例1 凍干粉配置為：稱取50g抗菌肽人β防御素、5g低分子肝素鈉、600g穩(wěn)定劑，加入 10000ml注射級用水，混合均勻后過濾除菌，于3. 2ml灌裝于西林瓶中半加塞后放入真空冷 凍干燥機(jī)上凍干15h。真空冷凍干燥的工藝條件為：對制品進(jìn)行預(yù)凍，使其溫度降至-50°C， 降溫時間為4h，抽真空至0. 3mbar，加熱升華干燥，干燥時間為15h，直至制品中的水分升華 完全。
[0026] 其中穩(wěn)定劑配方為：200g甘氨酸、300g蛋白質(zhì)水解物、100g(10mM)磷酸。
[0027] 本發(fā)明基本液的配置為： 基本液配方： 透明質(zhì)酸 5g 甲朵丙:mu:醇 50g 蜂蜜提取物 50g PCA 鈉 50g 溶解蛋I-1丨_ 50g 1,2 己.......醇 6% 燕麥β葡聚糖 60g 大豆奸黃_ 60g 剩余量為注射用水10000ml"
[0028] 上述配方溶解后過濾除菌，按15ml/瓶進(jìn)行灌裝、乳蓋。使用時，將本發(fā)明的抗菌 肽凍干粉和抗菌肽基本液混合溶解后，用于清洗外陰或使用器具導(dǎo)入陰道沖洗。
[0029] 實施例2 本發(fā)明凍干粉配置為： 稱取80g抗菌肽人β防御素、8g低分子肝素鈉、500g穩(wěn)定劑，加入10000ml注射級用 水，混合均勻后過濾除菌，于3. 2ml灌裝于西林瓶中半加塞后放入真空冷凍干燥機(jī)上凍干 25h。真空冷凍干燥的工藝條件為：對制品進(jìn)行預(yù)凍，使其溫度降至-50°C，降溫時間為6h， 抽真空至0. 3mbar，加熱升華干燥，干燥時間為20h，直至制品中的水分升華完全。
[0030] 其中穩(wěn)定劑配方為：150g海藻糖、200g硫代硫酸鈉、150g(15mM)碳酸鈉 本實施例中基本液的配置為： 基本液配方： 透明廣酸 26.47g 錄蜜提取物 211.76g PCA鈉 317.64g 溶解----?Ι? 317.64g l，2'd.:醉 52,94g 燕麥0葡聚糖 2ll.76g 人Μ異歲211.76g去離?-水lMOOml,,
[0031] 上述配方溶解后過濾除菌，按15ml/瓶進(jìn)行灌裝、乳蓋。使用時，將本發(fā)明的抗菌 肽凍干粉和抗菌肽基本液混合溶解后，用于清洗外陰或使用器具導(dǎo)入陰道沖洗。
[0032] 實施例3 本發(fā)明凍干粉配置為： 稱取l〇〇g抗菌肽、5g低分子肝素鈉、500g穩(wěn)定劑，加入10000ml注射級用水，混合均 勻后過濾除菌，于3. 2ml灌裝于西林瓶中半加塞后放入真空冷凍干燥機(jī)上凍干35h。真空 冷凍干燥的工藝條件為：對制品進(jìn)行預(yù)凍，使其溫度降至-50°C，降溫時間為8h，抽真空至 0. 3mbar，加熱升華干燥，干燥時間為25h，直至制品中的水分升華完全。
[0033] 其中穩(wěn)定劑配方為：200g蔗糖、200g維生素D、100g(10mM)檸檬酸鉀 本實施例基本液的配置為： 基本液配方： 透明質(zhì)酸 31.95g 甲基內(nèi).：酵 266.25g 蜂密提取物 372.75g PCA鈉 213g 溶解蛋Π酶 319.5g 燕龍β簡聚糖 372.75g 人-Λ/,if黃 _ 426g 注射丨?水WOOOmL
[0034] 上述配方溶解后過濾除菌，按15ml/瓶進(jìn)行灌裝、乳蓋。使用時，將本發(fā)明的抗菌 肽凍干粉和抗菌肽基本液混合溶解后，用于清洗外陰或用使器具導(dǎo)入陰道沖洗。
[0035] 本發(fā)明實施例中所使用到的原料、儀器、設(shè)備及輔助工具均可從市場上購得。
[0036] 本發(fā)明的抗菌肽制劑實驗方案及結(jié)果如下： 1.平板涂布抑菌試驗 將金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、銅綠假單胞桿菌培養(yǎng)在營養(yǎng)肉汁液體培養(yǎng)基中，于 37°C搖床培養(yǎng)16. 5h;白色念珠菌培養(yǎng)在改良馬丁液體培養(yǎng)基中，于28°C培養(yǎng)16. 5h以上， 收集細(xì)胞并將用于測試中。
[0037] 將本發(fā)明的凍干粉及基本液溶解后，向96孔板中加入190ul，未加本發(fā)明成品的 為空白對照，再分別取l〇ul菌懸液加入上述各孔，然后將96孔板放入28°C培養(yǎng)3h。
[0038] 取出96孔板，分別從各孔中取lOOul菌液用PB溶液稀釋濃度為1X1(Γ5,然后取 lOOul涂布到對應(yīng)編號平板，于37°C培養(yǎng)24h，白色念珠菌于28°C培養(yǎng)48h，并對所產(chǎn)生的菌 落進(jìn)行計數(shù)。
[0039] 表1-1實施例1所得到的產(chǎn)品通過平板涂布法抑菌實驗結(jié)果
【權(quán)利要求】
1. 一種治療婦女陰道炎的凍干制劑，其特征在于，包括抗菌肽凍干粉和抗菌肽基本液， 所述抗菌肽凍干粉包括如下按照總質(zhì)量百分?jǐn)?shù)計的組分：抗菌肽人β防御素0. 1%-8%、低 分子肝素鈉〇. 〇1%_〇. 2%、穩(wěn)定劑1%-15%，所述抗菌肽基本液包括如下按總質(zhì)量百分?jǐn)?shù)計的 組分：透明質(zhì)酸0. 〇1%_〇. 4%，甲基丙二醇0. 5%-4%，蜂蜜提取物0. 5%-5%，PCA鈉0. 5%-5%，溶 解蛋白酶〇. 5%-5%，1，2己二醇0. 3%-0. 7%，燕麥β葡聚糖1. 5%-6%，大豆異黃酮1%-5%，余量 為去離子水或注射用水。
2. 如權(quán)利要求1所述的治療婦女陰道炎凍干制劑，其特征在于所述抗菌肽人β防御素 米用人β防御素_1、人β防御素_2、人β防御素-3和人β防御素-4中的一種或幾種。
3. 如權(quán)利要求1所述的治療婦女陰道炎凍干制劑，其特征在于，所述穩(wěn)定劑采用凍干 保護(hù)劑、抗氧化劑和酸堿調(diào)整劑的一種或多種。
4. 如權(quán)利要求1所述的治療婦女陰道炎凍干制劑，其特征在于，所述凍干保護(hù)劑采用 甘油、蔗糖、海藻糖、肌醇、葡聚糖、乳糖、聚乙烯吡咯烷酮和甘氨酸中的一種或幾種。
5. 如權(quán)利要求1所述的治療婦女陰道炎凍干制劑，其特征在于，所述抗氧化劑采用維 生素D、維生素Ε、維生素C、氨基酸、卵磷脂、蛋白質(zhì)水解物、硫代硫酸鈉、抗壞血酸鈉和蛋白 質(zhì)水解物中的一種或幾種。
6. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的治療婦女陰道炎凍干制劑，其特征在于，所述酸堿調(diào)整劑采 用碳酸鈉、磷酸、EDTA、檸檬酸鉀、酒石酸、山梨酸、氨基酸中的一種或幾種。
7. 如權(quán)利要求3所述的治療婦女陰道炎凍干制劑，其特征在于，所述酸堿調(diào)整劑的摩 爾濃度為2_30mmol/L。
8. 如權(quán)利要求1所述治療婦女陰道炎凍干制劑的制備方法，其特征在于，包括如下步 驟： 步驟A:采用注射級用水將抗菌肽凍干粉中各原料溶解混勻，過濾除菌后分裝于洗凈 的西林瓶中，半加塞置于真空冷凍干燥機(jī)中，真空冷凍干燥15_35h，直至水分升華干燥完 全，真空條件下壓塞密封后扎蓋包裝，得到治療婦女陰道炎的抗菌肽凍干粉； 步驟B:使用注射級用水或去離子水將抗菌肽凍干粉中各原料溶解混勻，過濾除菌后 分裝、扎蓋，得到治療婦女陰道炎的基本液； 步驟C:將步驟A所得到的抗菌肽凍干粉與步驟B所得到的基本液混合。
9. 如權(quán)利要求8所述的方法，其特征在于，所述步驟B中，所述真空冷凍干燥的工藝條 件為：對制品進(jìn)行預(yù)凍，使其溫度降至_5〇°C，降溫時間為4-8h，抽真空至0. 3mbar，加熱升 華干燥，干燥時間為15_25h，直至制品中的水分升華完全。
10. 如權(quán)利要求8所述的方法，其特征在于，步驟A中，濾膜的直徑為0. 22Mm。
【文檔編號】A61K38/00GK104043098SQ201410225375
【公開日】2014年9月17日 申請日期:2014年5月26日 優(yōu)先權(quán)日:2014年4月4日
【發(fā)明者】張晏, 萬宇, 余少娜, 陳凡 申請人:廣州舒泰生物技術(shù)有限公司