富含半乳糖脂的植物萃取物及其用途
【專利摘要】本發(fā)明公開一種富含半乳糖脂的植物萃取物，該植物萃取物是將一植物樣品經(jīng)一系列溶劑萃取而得，其中該植物樣品是選自于由：白鳳菜、大苞水竹葉及昭和草所組成的群組。本發(fā)明亦提供一種醫(yī)療、保健或營養(yǎng)添加用的組合物，可用于預(yù)防或治療猛爆性肝炎、用于預(yù)防或治療敗血癥及其相關(guān)適應(yīng)癥，并且本發(fā)明亦提供一種用于美白的組合物。這些組合物皆包含有效量的植物萃取物或其純化物作為其生物活性成分。
【專利說明】富含半乳糖脂的植物萃取物及其用途

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種半乳糖脂的植物萃取物，特別是指一種自昭和草、白鳳菜或大苞 水竹葉萃取獲得的植物萃取物。本發(fā)明亦關(guān)于該植物萃取物用于制造預(yù)防或治療猛爆性肝 炎、敗血癥及其相關(guān)適應(yīng)癥的醫(yī)藥組合物以及美白劑的用途。

【背景技術(shù)】
[0002] 近年來，研究顯示許多源自植物的天然成分（植物性化合物）具有各式療效，以下 以昭和草、白鳳菜以及大苞水竹葉等三種臺(tái)灣常見植物進(jìn)行介紹。
[0003] 昭和草（Crassocephalum rabens S. Moore，簡稱CR)是臺(tái)灣常見的一種野菜，繁殖 力及適應(yīng)力驚人。昭和草屬菊科（Asteraceae)昭和草屬，味道有如茼蒿，全年皆可采集，尤 其未開花之前采摘味道鮮美。目前已知藥用上的功效為解熱，健胃，消腫，治腹痛。
[0004] 白鳳菜（Gynura divaricata subsp. Formosana,,簡稱 GD)又名白紅菜，是菊科 (Asteraceae)菊三七草屬（Gynura)的藥用植物，為臺(tái)灣特有種植物，分布在臺(tái)灣濱海地 區(qū)，偶見于低海拔山區(qū)。白鳳菜的嫩莖葉是可以食用的，宣稱有消炎、解熱、解毒、利尿、降血 壓等功效。
[0005] 大荀水竹葉（Murdannia bracteata (C. B. Clarke) J. K. Morton ex D. Y. Hong,簡稱 MB)為鴨妬草科（Commelinaceae)水竹葉屬的多年生草本植物，多生長在山谷溪邊、山谷水 邊及沙地上。大苞水竹葉具有藥用價(jià)值，常用于化痰、治療痔瘡、頸部淋巴結(jié)的慢性感染疾 病和毛囊、皮脂腺或汗腺的急性化膿性感染疾病。
[0006] 然而，目前研究對(duì)于上述三種植物中的活性成分及其作用機(jī)制的了解仍然有限， 且并無任何文獻(xiàn)資料或?qū)＠鞍冈?jīng)揭示，可以從上述三種植物得到具有治療或預(yù)防肝 炎、敗血癥等適應(yīng)癥、并具美白功效的萃取產(chǎn)物或經(jīng)純化的化合物。
[0007] 另一方面，大量存在于自然界的半乳糖脂為所謂的糖甘油脂 (glycoglycerolipid)，其結(jié)構(gòu)為甘油的sn-Ι及sn-2位置分別酯化有兩個(gè)脂肪酸，而sn-3 位置則連接一至四個(gè)半乳糖。已知許多天然或合成的糖甘油脂具有特定生物活性，包括抗 病毒、抗腫瘤、抗發(fā)炎及抑制免疫等活性。然而，此類化合物對(duì)其他適應(yīng)癥的功效及生物活 性的分子機(jī)制尚未明了。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0008] 鑒于上述現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明的發(fā)明目的是提供一種富含半乳糖脂的植物萃 取物。該植物萃取物是將一植物樣品以水或一低級(jí)醇類萃取，再以一低級(jí)酯類分配萃取以 得一低級(jí)酯類萃取物，并進(jìn)一步以一醇類沖提液沖提該低級(jí)酯類萃取物，以得一富含半乳 糖脂的溶份，其中該植物樣品是選自于由：白鳳菜、大苞水竹葉及昭和草所組成的群組，且 醇類沖提液中醇類占該沖提液的體積百分比為5%?20%。
[0009] 于一實(shí)施例中，低級(jí)醇類可為甲醇或乙醇。
[0010] 于一實(shí)施例中，低級(jí)酯類可為乙酸乙酯。
[0011] 于一實(shí)施例中，上述的植物萃取物可進(jìn)一步包含一中的植物萃取物圖譜，例如：植 物萃取物自白鳳菜萃得時(shí)，可進(jìn)一步包含一白鳳菜化學(xué)指紋圖譜。而自大苞水竹葉萃得時(shí)， 亦可進(jìn)一步包含一大苞水竹葉化學(xué)指紋圖譜。
[0012] 于一具體實(shí)施例中，該醇類沖提液中醇類占比例約為5%?15%，于另一具體實(shí) 施樣態(tài)中，該醇類沖提液中醇類占比例約為5 %?10 %。于又一具體實(shí)施樣態(tài)中，用于昭和 草的醇類沖提液中醇類占比例可約為10?15%。
[0013] 于一實(shí)施例中，醇類沖提液可包含：甲醇和二氯甲烷、甲醇和水、甲醇和乙氰或甲 醇和丙酮。
[0014] 于一具體實(shí)施例中，甲醇沖提液中二氯甲烷和甲醇的比例為9:1。前述比例的甲醇 沖提液可用于沖提，例如：自白鳳菜而得的一低級(jí)酯類萃取物。
[0015] 于一具體實(shí)施例中，甲醇沖提液中二氯甲烷和甲醇的比例為12:1。前述比例的甲 醇沖提液可用于沖提，例如：自大苞水竹葉而得的一低級(jí)酯類萃取物。
[0016] 于一實(shí)施例中，富含半乳糖脂的溶份可進(jìn)一步以一逆向高效液相層析法 (Reversed phase HPLC)加以純化，以得一生物活性溶份。
[0017] 于一實(shí)施例中，該生物溶份可包含，但不限于，如圖3所示的一昭和草高效液相層 析圖譜。
[0018] 于一實(shí)施例中，該富含半乳糖脂的溶份可以一醇類沖提液沖提，以得該生物活性 溶份，其中該醇類沖提液中醇類占該沖提液的體積百分比為100%?70%。
[0019] 于一實(shí)施例中，該富含半乳糖脂的溶份可為一富含1，2-二-O-α -次亞麻油酰 基-3-0- β -半乳糖批喃糖基 _sn_ 甘油（1，2, -Di_〇- α -linolenoyl-3-O- β -galactopyra nosyl-sn-glycerol，dLGG)的溶份。
[0020] 本發(fā)明的另一目的在于提供一種用于預(yù)防或治療猛爆性肝炎的醫(yī)藥、保健或營養(yǎng) 添加用的組合物，包含：
[0021] 預(yù)防或治療上有效量的一生物活性成分，其是為上述的植物萃取物或其純化物； 以及
[0022] -醫(yī)藥、保健或食品上可接受的載劑。
[0023] 于一實(shí)施例中，純化物可為dLGG。
[0024] 本發(fā)明的又一目的在于提供一種用于預(yù)防或治療敗血癥及其相關(guān)適應(yīng)癥之醫(yī)藥、 保健或營養(yǎng)添加用的組合物，包含：
[0025] 預(yù)防或治療上有效量的一生物活性成分，其是為上述的植物萃取物或其純化物； 以及
[0026] -醫(yī)藥、保健或食品上可接受的載劑。
[0027] 于一實(shí)施例中，純化物可為dLGG。
[0028] 于一實(shí)施例中，相關(guān)適應(yīng)癥可為敗血癥誘發(fā)的急性腎損傷，但不僅限于此。
[0029] 本發(fā)明的再一目的在于提供一種用于美白的組合物，包含：
[0030] 有效量的一生物活性成分，其是為上述的植物萃取物或其純化物；以及
[0031] 一醫(yī)藥、保健或食品上可接受的載劑。
[0032] 于一實(shí)施例中，純化物可為dLGG。
[0033] 本發(fā)明的有益效果在于：
[0034] 本發(fā)明制備的富含半乳糖脂的植物萃取物或其純化產(chǎn)物dLGG，對(duì)以LPS/D-GalN 誘發(fā)小鼠的急性猛爆性肝炎具有治療以及預(yù)防的效果；可預(yù)防對(duì)小鼠使用LPS而導(dǎo)致的敗 血癥誘發(fā)腎損傷；可有效降低由LPS所造成的小鼠肝臟、肺臟以及腎臟損傷；可減緩因氧氣 消耗和缺氧環(huán)境造成的器官損傷，能調(diào)節(jié)發(fā)炎性脂質(zhì)媒介物維持在一恒定狀態(tài)；可作為針 對(duì)LPS誘發(fā)敗血癥的預(yù)防性或治療性藥劑；抑制MITF與酪胺酸酶表達(dá)，以阻止B16黑色素 瘤細(xì)胞中黑色素生成作用，可作為新一代的皮膚美白劑。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0035] 圖1顯示白鳳菜中富含半乳糖脂溶份（GDE)的化學(xué)指紋圖譜。dLGG經(jīng)測定為該溶 份的主要成分，其中：
[0036] (A)為生物活性溶份⑶E的總離子層析圖。
[0037] (B)為溶份⑶E中五種主要單半乳糖苷二酰基甘油化合物的APCI-MS數(shù)據(jù)，其顯現(xiàn) 出對(duì)應(yīng)于二酰基甘油、單酰基甘油及脂肪酸基團(tuán)的Na+加合物（[M+Na]+)及離子片段的m/ Zo
[0038] (C)為⑶E中單半乳糖苷二?；视统煞郑?-5)的化學(xué)結(jié)構(gòu)。
[0039] 圖2顯示大苞水竹葉中富含半乳糖脂溶份（MBE)的化學(xué)指紋圖譜。dLGG經(jīng)測定為 該溶份的主成分，其中：
[0040] (A)為生物活性溶份MBE的總離子層析圖。
[0041] (B)為溶份MBE中五種主要單半乳糖苷二?；视突衔锏腁PCI-MS數(shù)據(jù)，其顯現(xiàn) 出對(duì)應(yīng)于二?；视汀熙；视图爸舅峄鶊F(tuán)之Na+加合物（[M+Na]+)及離子片段的m/ Zo
[0042] (C)為顯示MBE中單半乳糖苷二?；视统煞郑?-7)的化學(xué)結(jié)構(gòu)。
[0043] 圖3顯示昭和草的乙酸乙酯溶份（CR-EA)的高效液相層析圖譜（HPLC)。
[0044] 圖4顯示大苞水竹葉（MBE)以及白鳳菜（⑶E)萃得的富含dLGG半乳糖脂溶份，對(duì) 于由LPS/D-GalN誘發(fā)小鼠的肝損傷及急性猛爆性肝炎的功效數(shù)據(jù)。實(shí)驗(yàn)證實(shí)大苞水竹葉 (MBE)以及白鳳菜（GDE)萃得的富含dLGG半乳糖脂溶份對(duì)減緩由LPS/D-GalN誘發(fā)小鼠的 肝損傷及急性猛爆性肝炎是有效的，其中：
[0045] (A)顯示在由左至右分別為：載劑（vehicle，以全-號(hào)表示）、經(jīng)LPS/D-GalN刺 激的小鼠（以LPS/D-GalN+表示）、經(jīng)LPS/D-GalN刺激的小鼠以保肝藥SM治療（LPS/ D-GalN+、Post-SM+表示）、經(jīng)LPS/D-GalN刺激的小鼠以植物萃取物MBE治療（LPS/ D-GalN+、Post-MBE+表示）、經(jīng)LPS/D-GalN刺激的小鼠以植物萃取物⑶E治療（LPS/ D_GalN+、Post_GDE+表不）等組別中，丙胺酸轉(zhuǎn)胺酶（alanine aminotransferase, ALT) 在血清中的含量。以每治療組別6只小鼠的試驗(yàn)結(jié)果的平均值土平均標(biāo)準(zhǔn)誤（Standard Error of Mean，SEM)呈現(xiàn)數(shù)據(jù)。不同字母呈現(xiàn)受試組別的顯著差異（P〈0. 05)。圖示中+號(hào) 代表有施予某特定藥物，-號(hào)代表某未施予特定藥物。
[0046] (B)顯示健康小鼠與未治療或經(jīng)治療小鼠的肝臟切片的H&E染色及組織結(jié)構(gòu)圖式 與結(jié)果。
[0047] 圖5顯示dLGG作為治療劑對(duì)LPS/D-GalN誘發(fā)小鼠的急性猛爆性肝炎的效果，其 中：
[0048] (A)顯示由左至右分別為：在載劑（vehicle，以全-號(hào)表示）、經(jīng)LPS/D-GalN刺 激的小鼠（以LPS/D-GalN+表示）、經(jīng)LPS/D-GalN刺激的小鼠以SM治療（LPS/D-GalN+、 Post-SM+表示）、經(jīng) LPS/D-GalN 刺激的小鼠以 dLGG 治療（LPS/D-GalN+、Post-dLGG+表示） 等各組別中，在血清中天門冬酸轉(zhuǎn)胺酶（aspartate aminotransferase, AST)及ALT的含量。 以每治療組別6只小鼠的試驗(yàn)結(jié)果的平均值土平均標(biāo)準(zhǔn)誤呈現(xiàn)數(shù)據(jù)。不同字母呈現(xiàn)受試 組別的顯著差異（P〈〇. 05)。
[0049] (B)顯示健康小鼠與未治療或經(jīng)治療小鼠的肝臟切片的H&E染色及組織學(xué)結(jié)果。
[0050] (C)顯示肝組織的雕亡細(xì)胞（TUNEL)測試結(jié)果。為呈現(xiàn)健康，損傷以及個(gè)自治療組 別的代表影像。呈現(xiàn)褐色的細(xì)胞為TUNEL陽性的雕亡細(xì)胞。
[0051] 圖6顯示CR-EA、dLGG以及辛維司?。╯imvastatin, simva),對(duì)LPS誘發(fā)小鼠的發(fā) 炎現(xiàn)象以及敗血癥的預(yù)防以及治療效果。在不同治療組別中，血清中IL_6(A)及TNF-α (B) 的含量。以平均值土平均標(biāo)準(zhǔn)誤呈現(xiàn)（η = 4)數(shù)據(jù)。不同字母顯示不同組間的顯著差異 (P〈0.05，AN0VA)。（C)顯示肝臟切片的巨噬細(xì)胞（F4/80)免疫組織學(xué)法染色結(jié)果，呈現(xiàn)巨噬 細(xì)胞的浸潤現(xiàn)象。由測定F4/80陽性細(xì)胞的平均強(qiáng)度以作為治療與未治療組別間的量化比 較。此圖為呈現(xiàn)代表影像。
[0052] 圖7顯示CR-EA、dLGG以及辛維司?。╯imvastatin, simva),對(duì)LPS誘發(fā)小鼠的發(fā) 炎現(xiàn)象以及敗血癥的預(yù)防以及治療效果。在不同治療組別中，AST(A)andALT(B)在血清中 的含量，以平均值土平均標(biāo)準(zhǔn)誤呈現(xiàn)（η = 4)數(shù)據(jù)。不同字母顯示不同組間的顯著差異 (Ρ〈0. 05, AN0VA)。（C)為顯示經(jīng)Η&Ε-染色的肝臟切片，其呈現(xiàn)正常小鼠與LPS刺激小鼠的 不同治療組別中的肝臟組織形態(tài)學(xué)結(jié)果以及紅血球與發(fā)炎細(xì)胞浸潤現(xiàn)象。此圖為呈現(xiàn)代表 影像。
[0053] 圖8顯示CR-EA、dLGG以及辛維司汀（simvastatin, simva),對(duì)LPS誘發(fā)小鼠的發(fā) 炎現(xiàn)象以及敗血癥的預(yù)防以及治療效果，其中：
[0054] ㈧顯示經(jīng)H&E-染色的腎臟切片，其呈現(xiàn)在正常或經(jīng)LPS刺激小鼠的不同治療組 別中的腎臟組織學(xué)結(jié)果。
[0055] (B)顯示腎臟切片的巨噬細(xì)胞（F4/80)免疫組織學(xué)法染色結(jié)果，其呈現(xiàn)巨噬細(xì)胞 的腎臟浸潤現(xiàn)象。由測定F4/80陽性細(xì)胞的平均強(qiáng)度以作為治療與未治療組別間的量化比 較。此圖為呈現(xiàn)代表影像。
[0056] 圖9顯示CR_EA、dLGG以及辛維司?。╯imvastatin, simva),對(duì)LPS造成幾種肝臟 組織的蛋白質(zhì)過度表達(dá)有減緩的作用。這些蛋白質(zhì)參與誘發(fā)缺氧以及產(chǎn)生發(fā)炎與敗血癥相 關(guān)脂質(zhì)介質(zhì)有關(guān)，其中：
[0057] (A)顯示 LPS 造成的 HIF-1 α(缺氧誘發(fā)因子-la, hypoxia inducible factor-1 α )增加表達(dá)量可因 CR-EA、dLGG以及控制組藥物simva的處理治療而減緩。
[0058] (B)證實(shí)由CR-EA、dLGG及simva治療而降低PPAR- δ表達(dá)量。
[0059] (C)HIF-la以及PPAR-δ表達(dá)量的平均強(qiáng)度圖示，作為治療組別間的量化比較。
[0060] 圖10顯示昭和草EA溶份或由其分離的單一化合物dLGG的去色素效果，其中：
[0061] (A)顯示以50 μ g/mL的曲酸（KA)、源自全沸水粗萃取物（CR-W-EA)或全乙醇粗萃 取物（CR-Et-EA)的EA溶份各25 μ g/mL或50 μ g/mL處理B16黑色素瘤細(xì)胞72h后外觀顏 色比較圖。
[0062] (B)顯示以45 μ M dLGG處理B16黑色素瘤細(xì)胞12-48h，并比較去色效果。
[0063] (C)顯示西方墨點(diǎn)法分析以載劑（控制組）或45 μ M dLGG處理后與黑色素生成相 關(guān)蛋白小目艮癥相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子（microphthalmia-associated transcription factor, MITF) 以及酪胺酸酶在B16細(xì)胞中的表達(dá)。

【具體實(shí)施方式】
[0064] 本申請(qǐng)中所用的"有效量、預(yù)防上有效量及/或治療上有效量"一詞是指欲產(chǎn)生所 求特定效果、預(yù)防及/或治療效果所需活性成分（萃取物或化合物）的量（以其在組合物中 所占重量百分比表示）。于本發(fā)明所屬【技術(shù)領(lǐng)域】中具有通常知識(shí)者當(dāng)了解，該有效量可能因 欲引起特定效果、預(yù)防及/或治療的疾病種類及投藥方式等因素而有所不同。一般而言，活 性成分在組合物中的量可占該組合物重量的約1%至約100%，較佳為約30%至約100%。 [0065] 本文中所用的"醫(yī)藥、保健或食品上可接受的載劑"一詞包含任何標(biāo)準(zhǔn)的醫(yī)藥、保 健或食品載劑。所謂的載劑可為固態(tài)或液態(tài)，取決于醫(yī)藥、營養(yǎng)添加或保健組合物所需的劑 型。固態(tài)載劑的實(shí)例包括乳糖、蔗糖、明膠及瓊脂。液態(tài)載劑的實(shí)例包括生理鹽水、緩沖生 理鹽水、水、甘油及乙醇。
[0066] 本申請(qǐng)中所用的"純化物"一詞包含將一原料或粗產(chǎn)物（例如：本案的植物萃取 物）進(jìn)行任何純化步驟純化的一經(jīng)純化產(chǎn)物。
[0067] 本發(fā)明的實(shí)施例依下列例子詳細(xì)描述，但不限于此。本發(fā)明的上述及其他目的、特 征及優(yōu)點(diǎn)將因以下敘述及后附圖式而變得更加清楚。
[0068] 一、材料及方法
[0069] 1.試劑與抗體
[0070] 自 Sigma Chemical Co. (St. Louis, M0)購得 D-半乳糖胺 N(D_galactosamine N,簡稱 D-GalN)、脂多醣（lipopolysaccharide,簡稱 LPS)、水飛薊素（silymarin)、 辛維司?。╯imvastatin)、曲酸（kojic acid,簡稱KA)以及二甲亞諷（dimethyl sulfoxide, DMS0)。使用預(yù)染的蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)液（Bioman, Taipei, Taiwan)評(píng)估 SDS-PAGE 的分子量標(biāo)準(zhǔn)液。本發(fā)明的實(shí)施例中亦使用抗酪胺酸酶、黑色素生成相關(guān)蛋白小眼癥相 關(guān)轉(zhuǎn)錄因子(Microphthalmia-associated transcription factor, MITF) (Santa Cruz Biotechnology)的初級(jí)抗體以及F4/80抗體（eBioscience)。重組小鼠的TNF-α以及 用于小鼠 TNF- a 及 IL-6ELISA 套組來自 R&D Systems, Inc. (Minneapolis, MN)。使用 購自Randox Laboratories (UK)的商業(yè)套組測定血清中的天門冬酸轉(zhuǎn)胺酶（aspartate aminotransferase, AST)以及丙胺酸轉(zhuǎn)胺酶（alanine aminotransferase, ALT)的活性。所 有其他化學(xué)物以及溶劑皆為試驗(yàn)級(jí)或高效液相層析使用等級(jí)。
[0071] 2.細(xì)胞培養(yǎng)
[0072] B16黑色素瘤細(xì)胞株系得自美國菌種保存中心（ATCC，Manassas，VA)，并生長于 RPMI1640培養(yǎng)基（Gibco/BRL)，其添加有10 %經(jīng)熱去活化的胎牛血清、100單位/mL盤尼西 林、及100 μ g/mL鏈霉素，該細(xì)胞株培養(yǎng)于37°C下，濕度5%的C02培養(yǎng)箱中。
[0073] 3.去色測試
[0074] 將B16黑色素瘤細(xì)胞以1 X 105細(xì)胞/孔的初始密度接種于10cm培養(yǎng)盤中，并在 與上述細(xì)胞培養(yǎng)相同的條件下培養(yǎng)。接種12h后，以載劑DMS0、曲酸（KA)、CR的水萃及乙 醇粗萃取物的乙酸乙酯（EA)溶份（Hou et al.，2007)處理細(xì)胞72小時(shí)后以離心方式收取 細(xì)胞，并目視評(píng)估所收集細(xì)胞的顏色。在另一組實(shí)驗(yàn)中，單一化合物dLGG的去色素效果以 相同程序處理細(xì)胞但在不同時(shí)間點(diǎn)觀察與評(píng)估。
[0075] 4.動(dòng)物
[0076] 雌性C57BL/6J小鼠或雌性ICR小鼠（4周大）由國家實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心（臺(tái)北，臺(tái)灣） 所提供。將動(dòng)物飼養(yǎng)于12小時(shí)光/暗周期，22±2°C下，并以標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)用飼料及蒸餾水任其 自由進(jìn)食。本發(fā)明的實(shí)施例是依據(jù)機(jī)構(gòu)制定的操作指南進(jìn)行，并經(jīng)臺(tái)灣中研院的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 照護(hù)及使用委員會(huì)批準(zhǔn)。
[0077] 5.植物萃取物與dLGG的制備
[0078] 依據(jù) Hou et al (2007) (Cancer Research67, 6907-6915)所公開的操作方法稍加修 改，以制備昭和草（CR)、大苞水竹葉（MB)以及白鳳菜（GD)的萃取物。于室溫下以2-3倍重 量比的95%乙醇萃取約15. 0公斤的新鮮全草。使用乙酸乙酯分配（partitioned)全乙醇 粗萃取物（Total ethanolic extract)，產(chǎn)生乙酸乙酯（EA)溶份（GD:8. 6kg ;MB:8. 9kg)。進(jìn) 一步使用以二氯甲烷-甲醇沖提（沖提比例：白鳳菜中甲醇/二氯甲烷為1/9 ;大苞水竹葉 中甲醇/二氯甲烷為1/12 ;昭和草中甲醇/二氯甲烷為1/9)、的硅膠管柱分離GD及MB的 EA溶份，個(gè)別產(chǎn)生10組次溶份（subfractions)。對(duì)于⑶，經(jīng)測試篩選后使用以95 %乙醇沖 提的Diaion HP-20凝膠管柱進(jìn)一步純化次組份7 (817g)，得到一富含單半乳糖苷二?；?油的溶份（稱為⑶E，253. 3g)。對(duì)于MB，經(jīng)測試篩選后，是使用以95%乙醇沖提的Diaion HP-20凝膠管柱進(jìn)一步純化次組份6 (1. 06kg)(稱為MBE，360. lg)。
[0079] 使用RP-HPLC/APCI-M測定上述富含溶份的化學(xué)指紋圖譜。使用 BrukerADVANCE500AV NMR 光譜儀進(jìn)行1Η 及 13C 核磁共振（nuclear magnetic resonance, NMR)，并使用 ThermoFinnigan/LCQ Advantage (Waltham)質(zhì)譜儀在陽離子模式 下進(jìn)行大氣壓化學(xué)電離質(zhì)譜分析（APCI/MS)，來進(jìn)行化合物結(jié)構(gòu)的確認(rèn)。
[0080] 接著，以下列管柱與沖提條件進(jìn)行逆相HPLC(RP-HPLC)得到昭和草乙酸乙酯溶份 (CR-EA)及其化學(xué)圖譜：RP-HPLC 半制備型管柱（Phenomenex5ym，C18,250 X 4.6臟）、以 98%甲醇、lmL/min流速進(jìn)行等位沖提（isocratic elution)。在HPLC圖譜呈現(xiàn)的dLGG是 作為生物活性EA溶份中的指標(biāo)化合物。
[0081] ⑶E或MBE的富含半乳糖脂溶份可進(jìn)一步使用相同操作程序得到⑶E或MBE的 HPLC圖譜（以二氯甲烷-甲醇沖提液進(jìn)行沖提，其中甲醇/二氯甲烷之比例約為9/1至 8/2。）
[0082] 6.測試dLGG或含dLGG的植物萃取物對(duì)LPS/D-GalN誘發(fā)小鼠急性猛爆性肝炎的 保護(hù)效果
[0083] 觀察在LPS/D-GalN誘發(fā)的猛爆性肝炎中，自昭和草分離的化合物dLGG之活 體內(nèi)保肝效果，并與保肝藥水飛薊素（SM)比較。將小鼠任意分為4組（每組η = 6) 以進(jìn)行下列試驗(yàn)：載劑；LPS/D-GalN ;50mg/kg水飛薊素（Post_SM50);以及10mg/kg dLGG(post-dLGGlO)，全部以腹腔注射（intraperitoneally，i.p.)方式進(jìn)行。在小鼠經(jīng)前 述的500ng LPS及含25mg D-GalN的250 μ L食鹽水處理1小時(shí)后（Huang et al·，2012)，施 予dLGG及水飛薊素。此外，另兩組小鼠動(dòng)物，則在LPS/D-GalN刺激之前，先以dLGG或SM進(jìn) 行處理連續(xù)3天，以測試dLGG對(duì)LPS/D-GalN誘發(fā)的猛爆性肝炎的預(yù)防效果。LPS/D-GalN 注射后8h，以眼窩采血技術(shù)（retro-orbital bleeding)收集血液樣品，接著犧牲所有小鼠， 收集血液樣品與肝組織。
[0084] 7.測試dLGG或含dLGG的植物萃取物對(duì)以LPS誘發(fā)小鼠敗血癥的保護(hù)或治療效果
[0085] 通過由誘發(fā)急性發(fā)炎以及使用LPS的敗血性休克來評(píng)估dLGG或含dLGG的昭和 草萃取物的療效，并使用辛維司?。╯imvastatin，Simva)作為正控制組。將小鼠任意分 成不同的處理組別：載劑；l〇mg/kg LPS ;10mg/kg辛維司?。⊿imvalO) ;10mg/kg昭和草EA 萃取物（CR-EA10) ;50mg/kg 昭和草 EAextract (CR-EA50) ;5mg/kg dLGG (dLGG5) ;25mg/kg dLGG (dLGG25)。植物成分或控制組藥物均在施予LPS-小時(shí)前注射處理。另一組動(dòng)物是單 獨(dú)以25mg/kg dLGG處理（dLGG25only)。在24h后犧牲所有組別。在犧牲前立即以眼窩采 血技術(shù)（retro-orbital bleeding)收集血液樣品。并立即收集器官組織。
[0086] 8.組織學(xué)及免疫組織化學(xué)法
[0087] 于10%福馬林緩沖液中將肝臟、肺臟及腎臟組織固定，接著將其包埋于石蠟中。 經(jīng)石錯(cuò)包埋的樣品經(jīng)切片（8-μπι)并經(jīng)蘇木紫-伊紅（hematoxylin&eosin,簡稱H&E) 染色。此外，加熱固定經(jīng)石蠟包埋的肝臟與肺臟切片（4-μπι厚），并使用二甲苯去石蠟， 及乙醇再水合，最后以蒸餾水加以清洗。最后浸泡于含目標(biāo)抗原修復(fù)液的Decloaking Chamber(Biocare Medical)中修復(fù)抗原。
[0088] 原位（in situ)偵測雕亡細(xì)胞的方法是依據(jù)供應(yīng)商的操作程序（Chemicon)進(jìn)行， 原理是利用末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶作用于核苷酸序列，造成在脫氧尿苷三磷酸位置形成切 口 并進(jìn)行末端標(biāo)記（terminal deoxynucleotidyl transferase - mediated dUTP nick end labeling, TUNEL)。最后使用 AxioVision 軟件（Carl Zeiss Microlmaging, Inc.)來分析有 標(biāo)記上的TUNEL-陽性細(xì)胞的數(shù)目。
[0089] 肝臟、肺臟及腎臟組織的免疫組織化學(xué)染色步驟是將樣品置放于含F(xiàn)4/80初級(jí)抗 體溶液中過夜。接著清洗后，使用標(biāo)示熒光的二級(jí)抗體反應(yīng)液中進(jìn)行樣品組織。巨噬細(xì)胞浸 潤現(xiàn)象（陽性 F4/80 染色細(xì)胞）則使用 AxioVision 軟件（Carl Zeiss Microlmaging, Inc.) 擷取熒光影像與分析。
[0090] 9.西方墨點(diǎn)法
[0091] 各小鼠肝組織（0. lg)，加入適量玻璃珠，以均質(zhì)機(jī)（MM301, Retsch, Haan, Germany) 將其均質(zhì)化2分鐘，添加0. 4mL的胞溶緩沖液萃取，并在4°C以15, 000 X g離心30分（Shyur et al.，2008)。收集上清液，樣品蛋白質(zhì)總量的濃度是以DC蛋白質(zhì)測試套組（Bio-Rad)加 以測定。蛋白質(zhì)利用5% -20%梯度SDS-PAGE電泳分離之后，進(jìn)行電泳轉(zhuǎn)漬，轉(zhuǎn)漬膜再以抗 特定蛋白質(zhì)的單株抗體進(jìn)行免疫染色，最后以增強(qiáng)化學(xué)熒光試劑（ECL，Ame rsham)呈色。
[0092] 細(xì)胞蛋白質(zhì)是參照前人發(fā)表的方法（Chiang et al.，2005)制備。以Bradford法 (Bio-Rad)測量蛋白質(zhì)含量。
[0093] 10.血清中AST及ALT活性的測量
[0094] 受試小鼠的血液樣品在4 °C以l，400Xg離心15分，分離血清。使用購 自Randox Laboratories (UK)的商業(yè)套組測定血清中的天門冬酸轉(zhuǎn)胺酶（aspartate aminotransferase, AST)以及丙胺酸轉(zhuǎn)胺酶（alanine aminotransferase, ALT)的活性。
[0095] 11.血清中IL-6及TNF-α活性的測量
[0096] 使用購自eBioscience的商業(yè)套組測定小鼠血清的介白素（interleukin, IL-6) 以及腫瘤壞死因子 _ α (tumor necrosis factor-alpha, TNF- α )含量。
[0097] 12.統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
[0098] 所有數(shù)據(jù)以平均值土平均標(biāo)準(zhǔn)誤（Standard Error of Mean, SEM)表示。以AN0VA 比較差異。不同字母顯示處理組間的差異；P〈〇. 05即被認(rèn)為在統(tǒng)計(jì)學(xué)上具有顯著性。
[0099] 二、結(jié)果
[0100] 白鳳菜、大苞水竹葉、昭和草等三種食用或藥用植物的化學(xué)指紋圖譜
[0101] 使用 RP-HPLC/ 大氣壓化學(xué)電離質(zhì)譜儀（atmospheric chemical ionization-mass spectrometry, ACPI-MS)建立生物活性溶份（⑶E及MBE)的化學(xué)指紋圖譜，并鑒定存于⑶E 及MBE的富含半乳糖脂溶份的所有單半乳糖苷二酰基甘油成分。1，2-二-0- α -次亞麻 油醜基 _3-〇_ β -半乳糖批喃糖基 _sn_ 甘油（1，2, di-〇_ a -linolenoyl_3-〇- β -galacto pyranosyl-sn-glycerol，dLGG)經(jīng)鑒定為白鳳菜（參見圖1)、大荀水竹葉（參見圖2)的主 要成分。昭和草乙酸乙酯溶份（CR-EA)的化學(xué)圖譜（參見圖3)是以逆相HPLC(RP-HPLC)得 至IJ，在HPLC圖譜呈現(xiàn)的dLGG是作為昭和草具生物活性EA溶份（CR-EA)中的指標(biāo)化合物。
[0102] 圖1A及圖2A分別顯不在GDE及MBE的總離子層析圖（total ion chromatogram) 中的化合物峰值分布。發(fā)現(xiàn)具脂肪酸基團(tuán)的GDE有五種半乳糖脂，辨識(shí)出其結(jié)構(gòu)組成 為 18:3/18:3 (dLGG)、18:4/18:4(1)、18:4/18:3(2)、18:2/18:3(4)、16:0/18:3(5)。 同 時(shí)，MBE中七種半乳糖脂化合物的脂肪酸基團(tuán)，辨識(shí)出其結(jié)構(gòu)組成為18:3/18:3(dLGG)、 18:4/18:4(1)、18:4/18:3(2)、18:2/18:3(4)、16:0/18:3(5)、18:1/18:3(6)以及 16:0/18:2(7)。并未進(jìn)一步確認(rèn)于化合物2、4、5、6及7的2個(gè)脂肪酸基團(tuán)的sn位置。
[0103] 圖1B及圖2B是表列顯示ACPI-MS中對(duì)應(yīng)于二酰基甘油、單?；视图爸舅峄?團(tuán)的Na+加合物（[M+Na]+)及離子片段的m/z，而圖1C及圖2C是分別顯示GDE及MBE溶份 中單半乳糖苷二酰基甘油的化學(xué)結(jié)構(gòu)。主要且具活性的成份化合物dLGG的含量分別為： 88.1% (白鳳菜）以及78.9% (大苞水竹葉）。經(jīng)測定發(fā)現(xiàn)昭和草的生物活性溶份中dLGG 含量為65. 7% (Hou et al.，2007)。以dLGG作為本發(fā)明中自三種醫(yī)藥用植物萃得的富含半 乳糖脂溶份的指標(biāo)化合物所發(fā)展出的化學(xué)指紋圖譜方法，可用以確保批次制備上述生物活 性溶份的一致性，并可用于作為例行品質(zhì)確保的操作程序。
[0104] 2. dLGG作為對(duì)以LPS/D-GalN誘發(fā)小鼠的急性猛爆性肝炎的治療劑
[0105] 猛爆性肝衰竭（Fulminant hepatic failure, FHF)為急性肝衰竭的同義詞，是與導(dǎo) 致肝功能的快速病變的肝疾病有關(guān)，通常會(huì)造成毀壞性的后果（Sass and Shakil，2005)。此 為會(huì)威脅到生命的一種疾病，迄今原位肝臟移植為唯一的治療方法（Russo&Parola, 2011)。
[0106] LPS/D-GalN誘發(fā)小鼠產(chǎn)生急性猛爆性肝炎只動(dòng)物模式，可有效模擬在臨床上觀察 到的FHF階段式的反應(yīng)，因此廣泛被使用于相關(guān)研究（Kosai et al，1999)。本發(fā)明以此模 式評(píng)估dLGG ( -種自昭和草、白鳳菜以及大苞水竹葉分離的生物活性成分）以及富含dLGG 的半乳糖脂溶份GDE及MBE在肝損傷上的療效。
[0107] 與此同時(shí)，使用一自市面購得的保肝藥水飛薊素（silymarin，SM)作為對(duì) 照組。小鼠在注射LPS/D-GalN-小時(shí)之后，以腹腔注射（i.p.)方式施予載劑控制 組0. 5 % DMS0、dLGG (10mg/kg)及SM (50mg/kg)。收集不同組別的小鼠血清以測量 天門冬酸轉(zhuǎn)胺酶（aspartate aminotransferase, AST)以及丙胺酸轉(zhuǎn)胺酶（alanine aminotransferase, ALT)，兩種肝損傷或功能異常的臨床指標(biāo)的活性。
[0108] 如圖4與圖5所示，是顯示自富含半乳糖脂溶份⑶E、MBE以及純化合物dLGG的活 性的評(píng)估結(jié)果。圖4A顯示⑶E、MBE與保肝藥SM可有效降低LPS/D-GalN -刺激小鼠所增 加兩倍的血清中ALT含量。
[0109] 如圖4B所示，以H&E染色進(jìn)行的組織病理學(xué)檢驗(yàn)的呈現(xiàn)結(jié)果，可觀察到因 LPS/ D-GalN-刺激小鼠中有發(fā)炎細(xì)胞進(jìn)入肝小葉的浸潤、組織破壞及肝組織中的紅血球內(nèi)流 (erythrocyte influx)等現(xiàn)象，在處理組中顯著地減少。
[0110] 如圖5A所示，在誘發(fā)猛爆性肝炎后，以dLGG處哩，可如同保肝藥SM的效果，可明 顯抑制（?2.4倍）小鼠體內(nèi)因1^5/1)-63以所誘發(fā)的血清中451'41^的增加量。此外，如 圖5B所示，LPS/D-GalN刺激小鼠后的肝臟，相較于載劑控制組，呈現(xiàn)發(fā)炎細(xì)胞進(jìn)入肝小葉 的浸潤、組織破壞及肝組織中的紅血球內(nèi)流（erythrocyte influx)等現(xiàn)象，該些現(xiàn)象是通 過由dLGG及SM兩種治療方式而減緩。而且，dLGG治療亦顯著降低經(jīng)LPS/D-GalN造成小 鼠肝組織中雕亡細(xì)胞（TUNEL陽性染色的細(xì)胞）的數(shù)量。
[0111] 除此之外，在小鼠預(yù)處理dLGG (1或10mg/kg) lh后，再施于LPS/D-GalN誘導(dǎo)肝病 變，dLGG的保護(hù)效果一樣顯著（數(shù)據(jù)未呈現(xiàn)）。這些結(jié)果證實(shí)dLGG對(duì)以LPS/D-GalN誘發(fā) 小鼠的急性猛爆性肝炎具有治療以及預(yù)防的效果。
[0112] 3.富含半乳糖脂的昭和草萃取物與dLGG對(duì)LPS誘發(fā)小鼠之發(fā)炎現(xiàn)象以及敗血癥 的預(yù)防以及治療效果
[0113] 急性發(fā)炎會(huì)造成包括敗血癥的嚴(yán)重全身性反應(yīng)，敗血癥為一種會(huì)造成快速器官衰 竭并死亡的復(fù)雜適應(yīng)癥。急性腎損傷（Acute kidney injury, AKI)為一種常見的威脅生命 的疾病，過去三十年來約有45%的致死率，而在約半數(shù)嚴(yán)重AKI患者中是因敗血癥所造成。 (Uchino et al. , 2005 ；Yasuda et al. , 2006)
[0114] 內(nèi)毒素為一種葛蘭氏陰性細(xì)菌的外膜成份，可誘發(fā)一連串的發(fā)炎級(jí)聯(lián)反應(yīng)并 參與敗血癥的病理機(jī)制。由LPS輸液/注射建構(gòu)的發(fā)炎模式已廣泛應(yīng)用于敗血癥研究 (Doi et al.，2009)。在本發(fā)明的實(shí)施例中，使用LPS在C57BL/6J小鼠中誘發(fā)急性發(fā)炎及 敗血性休克，并通過由肝臟、腎臟及肺臟的病理生理比較、測定發(fā)炎性細(xì)胞激素（IL-6及 TNF-α)和ALT及AST(為肝損傷及肝毒性的指標(biāo)）在血清之含量，并比較處理組別間參 與誘發(fā)缺氧以及產(chǎn)生發(fā)炎性脂質(zhì)介質(zhì)的蛋白質(zhì)：缺氧誘發(fā)因子-1 a (hypoxia inducible factor-1 α，HIF-1 α )及脂小體增生活化受體 δ (peroxisome-proliferator activating receptor δ，PPAR- δ )的表達(dá)程度，來觀察并評(píng)估dLGG (5及25mg/kg體重）及CR-EA (10及 50mg/kg體重）萃取物的治療及預(yù)防效果。
[0115] 在施予LPS-小時(shí)之前，先對(duì)控制組施予0. 5% DMS0、正控制組施予10mg/kg辛 維司汀以及dLGG和CR-EA。臨床藥物辛維司汀為一種HMG-CoA還原酶抑制劑，臨床上對(duì)于 心血管、腦血管以及急性和慢性腎疾病有效（Epstein et al·，2005 ;Nissen et al·，2005 ; Almog, et al·，2004)。史塔丁類藥物療法（Statin therapy，Statin 為 HMG-CoA 還原酶抑 制劑藥物類別，辛維司汀為該類藥物的一種）亦對(duì)預(yù)防人類和動(dòng)物的敗血癥和敗血癥誘 發(fā)的急性腎損傷有效（Yasuda et al.，2006)。此外，一組小鼠是在無 LPS刺激下，僅投予 dLGG(25mg/kg)。在LPS處理24h后犧牲所有小鼠。收集小鼠血清，測量和比較IL-6及 TNF- α的濃度以及AST及ALT的含量。
[0116] 圖6 (A及B)和圖7 (A及B)顯示，分別以高劑量CR-EA和dLGG處理，再以LPS刺激 的小鼠群組中，其血清中促發(fā)炎細(xì)胞激素之含量顯著降低，其中：IL_6經(jīng)CR-EA和dLGG治 療分別顯著降低2. 6及3. 5倍；TNF- α分別降低2. 0和3. 0倍；ALT分別降低1. 75和2. 3 倍；AST分別降低1. 3和1. 8倍。
[0117] 如圖7C所示，由在不同處理群組間的H&E染色所進(jìn)行的組織學(xué)比較顯示：LPS刺 激是誘發(fā)小鼠肝臟中發(fā)炎細(xì)胞或紅血球的浸潤現(xiàn)象。圖8A顯示，CR-EA和dLGG前處理預(yù) 防敗血癥誘發(fā)的急性腎損傷的效果。以H&E染色結(jié)果，觀察到有腎皮質(zhì)損傷、腎小管細(xì)胞的 空泡性退化和巨噬細(xì)胞浸潤的現(xiàn)象。已有報(bào)導(dǎo)指出辛維司汀對(duì)小鼠使用盲腸連結(jié)與刺孔 手術(shù)之?dāng)⊙Y誘發(fā)的急性腎損傷及死亡有改善的效果（Yasuda et al.，2006)。在本發(fā)明的 實(shí)施例中，圖5A，可觀察到辛維司汀可預(yù)防對(duì)小鼠使用LPS而導(dǎo)致的敗血癥誘發(fā)腎損傷，而 CR-EA或dLGG處理組中，觀察到相同顯著的預(yù)防效果。這些效果可在與載劑控制組小鼠只 有相似的腎臟組織染色結(jié)果而獲得結(jié)論。F4/80免疫組織染色結(jié)果顯示：相對(duì)于載劑控制 組，以CR-EA或dLGG處理會(huì)顯著減少LPS造成的腎臟（圖8C)中巨噬細(xì)胞活化與浸潤的現(xiàn) 象。正控制組（SimvalO)與CR-EA或dLGG處理組相比，亦顯示出相似結(jié)果。此外，LPS刺 激后，再以25mg/kg劑量的dLGG進(jìn)行后治療亦可有效降低由LPS所造成的小鼠肝臟、肺臟 以及腎臟損傷（數(shù)據(jù)未示）。
[0118] 圖9進(jìn)一步證實(shí)，以CR-EA及dLGG預(yù)處理會(huì)負(fù)調(diào)控兩種主要參與發(fā)炎媒介物形成 以及誘發(fā)缺氧現(xiàn)象的蛋白質(zhì)，PPAR-δ以及HIF-la的表達(dá)。這些結(jié)果暗示：CR-EA及dLGG 可減緩因氧氣消耗和缺氧環(huán)境造成的器官損傷，以及可能會(huì)調(diào)節(jié)發(fā)炎性脂質(zhì)媒介物維持在 一恒定狀態(tài)。
[0119] 圖6至圖9顯示，單獨(dú)僅以dLGG處理小鼠，血清中IL-6、TNF_ a、AST以及ALT的 含量、器官組織（如：肝臟以及腎臟）的病理評(píng)估、和數(shù)種蛋白質(zhì)指標(biāo)的表達(dá)量與載劑處理 小鼠相比所呈現(xiàn)的結(jié)果皆相似，在肺臟分析的結(jié)果與現(xiàn)象亦相同（結(jié)果未示）。這些結(jié)果表 示dLGG對(duì)小鼠不會(huì)造成任何傷害。
[0120] 總結(jié)來說，這些結(jié)果表示昭和草萃取物和dLGG有潛力作為針對(duì)LPS誘發(fā)敗血癥的 預(yù)防性或治療性藥劑。
[0121] 4.以dLGG及CR-EA萃取物進(jìn)行B16細(xì)胞的去色素作用
[0122] 皮膚為身體最大的器官，總是處在內(nèi)部和外部因子的影響下。皮膚藉由經(jīng)常性或 內(nèi)生性色素形成型態(tài)（constitutive pigmentation pattern)因應(yīng)那些刺激反應(yīng)。黑色素， 為一種色素，負(fù)責(zé)膚色并預(yù)防皮膚因環(huán)境（如：UV)或其他因子（藥物或化學(xué)物）誘發(fā)皮 膚色素沉著或受到損傷。黑色素是于黑色素細(xì)胞中通過黑色素生成反應(yīng)（melanogenesis) 而生成（Costin and Hearing, 2007)。酵素酪胺酸酶對(duì)哺乳動(dòng)物產(chǎn)生黑色素而言是必要 的（Hearing and Tsukamoto, 1991)。小眼癥相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子（Microphthalmia-associated transcription factor, MITF)參與黑色素細(xì)胞分化、色素沉著、增生及存活的調(diào)控，亦為轉(zhuǎn) 錄出黑色素生成酵素或蛋白質(zhì)基因（例如：酪胺酸酶、酪胺酸酶相關(guān)蛋白1及蛋白2)的主 要轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子（Yasumoto et al.，1997 ;Hasegawa et al.，2010)。
[0123] 使用一種含高量色素的B16黑色素瘤細(xì)胞作為研究化合物去色素效果的實(shí)驗(yàn)?zāi)?式始至70年代（Bang et al·，2013 ;Wrathall et al·，1973)。于本發(fā)明的實(shí)施例中，是使用 昭和草的全沸水粗萃取物（CR-W-EA)或全乙醇粗萃取物（CR-Et-EA)的EA溶份處理后，直 接觀察其對(duì)B16細(xì)胞的去色素能力。分別使用KA及DMS0作為正控制組以及載劑控制組。
[0124] 圖10(A)顯示CR-Et-EA相較于載劑控制組，對(duì)于B16黑色素瘤細(xì)胞的去色素作用 具有劑量依存（dose-dependent)的效果。進(jìn)一步評(píng)估自CR-Et-EA純化的單一化合物dLGG 在不同時(shí)點(diǎn)的去色素效果。圖10(B)顯示dLGG(45 μ Μ)與載劑控制組相較，以一時(shí)間依存 方式（time-dependent manner)呈現(xiàn)對(duì)于Β16黑色素瘤細(xì)胞具有顯著的去色素活性。
[0125] 進(jìn)一步研究dLGG的去色素效果的分子作用機(jī)制。進(jìn)行西方墨點(diǎn)法以檢驗(yàn)dLGG對(duì) 酪胺酸酶與MITF表達(dá)的效果。如圖10(C)所示，dLGG確實(shí)能抑制黑色素生成相關(guān)蛋白質(zhì)， MITF與酪胺酸酶的表達(dá)。該等數(shù)據(jù)表明dLGG抑制MITF與酪胺酸酶表達(dá)，以阻止B16黑色 素瘤細(xì)胞中黑色素生成作用，證實(shí)dLGG可作為新一代的皮膚美白劑。
[0126] 所屬領(lǐng)域之技術(shù)人員當(dāng)可了解，在不違背本發(fā)明精神下，依據(jù)本案實(shí)施例所能進(jìn) 行的各種變化。因此，顯見所列的實(shí)施例并非用以限制本發(fā)明，而是企圖在所附申請(qǐng)專利范 圍的定義下，涵蓋于本發(fā)明的精神與范疇中所做的修改。
【權(quán)利要求】
1. 一種富含半乳糖脂的植物萃取物，該植物萃取物是將一植物樣品以水或一低級(jí)醇 類萃取，再以一低級(jí)酯類分配萃取以得一低級(jí)酯類萃取物，并進(jìn)一步以一醇類沖提液沖提 該低級(jí)酯類萃取物，以得一富含半乳糖脂的溶份，其中該植物樣品是選自由：白鳳菜、大苞 水竹葉以及昭和草所組成群組，且醇類沖提液中醇類占該沖提液的體積百分比為5%? 20%。
2. 如權(quán)利要求1所述的植物萃取物，其特征在于，所述低級(jí)醇類為甲醇或乙醇。
3. 如權(quán)利要求1所述的植物萃取物，其特征在于，所述低級(jí)酯類為乙酸乙酯。
4. 如權(quán)利要求1所述的植物萃取物，其特征在于，其是包含一如圖1所示的白鳳菜化學(xué) 指紋圖譜。
5. 如權(quán)利要求1所述的植物萃取物，其特征在于，其是包含一如圖2所示的大苞水竹葉 化學(xué)指紋圖譜。
6. 如權(quán)利要求1所述的植物萃取物，其特征在于，所述醇類沖提液包含：二氯甲烷和甲 醇、甲醇和水、甲醇和乙氰或甲醇和丙酮。
7. 如權(quán)利要求6所述的植物萃取物，其特征在于，該甲醇沖提液中二氯甲烷和甲醇的 比例為9:1。
8. 如權(quán)利要求7所述的植物萃取物，其特征在于，該甲醇沖提液是用于沖提自白鳳菜 而得的一低級(jí)酯類萃取物。
9. 如權(quán)利要求6所述的植物萃取物，其特征在于，該甲醇沖提液中二氯甲烷和甲醇的 比例為12:1。
10. 如權(quán)利要求9所述的植物萃取物，其特征在于，該甲醇沖提液是用于沖提自大苞水 竹葉而得的一低級(jí)酯類萃取物。
11. 如權(quán)利要求1所述的植物萃取物，其特征在于，所述富含半乳糖脂的溶份是進(jìn)一步 以一逆向高效液相層析法（Reversed phase HPLC)加以純化，以得一生物活性溶份。
12. 如權(quán)利要求11所述的植物萃取物，其特征在于，所述生物活性溶份是包含如圖3所 示的一昭和草高效液相層析圖譜。
13. 如權(quán)利要求11所述的植物萃取物，其特征在于，所述富含半乳糖脂的溶份是以一 醇類沖提液沖提，以得該生物活性溶份，其中該醇類沖提液中醇類占該沖提液的體積百分 比為100%?70%。
14. 如權(quán)利要求1所述的植物萃取物，其特征在于，所述富含半乳糖脂的溶份為一富含 1，2-二-Ο- α -次亞麻油?；?3-0- β -半乳糖吡喃糖基-sn-甘油（1，2, di-O- a -linolen oyl-3-Ο-β -galactopyranosyl-sn-glycerol, dLGG)的溶份。
15. -種用于預(yù)防或治療猛爆性肝炎的醫(yī)藥、保健或營養(yǎng)添加用的組合物，包含： 預(yù)防或治療上有效量的一生物活性成分，其是為如權(quán)利要求1至14任一項(xiàng)所述的植物 萃取物或其純化物；以及 一醫(yī)藥、保健或食品上可接受的載劑。
16. 如權(quán)利要求15所述的組合物，其特征在于，所述純化物為dLGG。
17. -種用于預(yù)防或治療敗血癥及其相關(guān)適應(yīng)癥的醫(yī)藥、保健或營養(yǎng)添加用的組合物， 包含： 預(yù)防或治療上有效量的一生物活性成分，其為如權(quán)利要求1至14任一項(xiàng)所述的植物萃 取物或其純化物；以及 一醫(yī)藥、保健或食品上可接受的載劑。
18. 如權(quán)利要求17所述的組合物，其特征在于，所述純化物為dLGG。
19. 如權(quán)利要求17所述的組合物，其特征在于，所述相關(guān)適應(yīng)癥是指敗血癥誘發(fā)的急 性腎損傷。
20. -種用于美白的組合物，包含： 有效量的一生物活性成分，其是為如權(quán)利要求1至14任一項(xiàng)所述的植物萃取物或其純 化物；以及 一醫(yī)藥、保健或食品上可接受的載劑。
21. 如權(quán)利要求20所述的組合物，其特征在于，所述純化物為dLGG。
【文檔編號(hào)】A61P13/12GK104208114SQ201410239259
【公開日】2014年12月17日 申請(qǐng)日期:2014年5月30日 優(yōu)先權(quán)日:2013年6月4日
【發(fā)明者】徐麗芬, 馮家華, 瑪亞 申請(qǐng)人:中央研究院