一種尿酸酶復(fù)合過氧化氫酶脂質(zhì)體及其制備方法
【專利摘要】本發(fā)明屬于藥物制劑領(lǐng)域。本發(fā)明涉及尿酸酶復(fù)合過氧化氫酶脂質(zhì)體及其制備方法。本發(fā)明制備得到的尿酸酶復(fù)合過氧化氫酶脂質(zhì)體可以實(shí)現(xiàn)增加藥物尿酸酶貯存穩(wěn)定性，提高藥物尿酸酶的活性，同時(shí)降低過氧化氫的濃度。
【專利說明】一種尿酸酶復(fù)合過氧化氫酶脂質(zhì)體及其制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于醫(yī)藥制劑領(lǐng)域，涉及尿酸酶復(fù)合過氧化氫酶脂質(zhì)體及其制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002]高尿酸血癥是嘌呤代謝紊亂導(dǎo)致尿酸生成過多或腎臟排泄障礙所致。人體缺乏尿酸酶，可以運(yùn)用外源性的尿酸酶來治療高尿酸血癥。尿酸酶以分子氧為受體催化尿酸分解為尿囊素、CO2和H2O2，尿囊素能通過腎臟直接排出體外，但是過氧化氫具有細(xì)胞毒性。而過氧化氫酶能催化過氧化氫生成氧氣和水。將尿酸酶和過氧化氫酶合用不僅能降低尿酸酶分解尿酸產(chǎn)生的過氧化氫的毒副作用，而且還能為尿酸酶分解尿酸提供氧氣。但是尿酸酶和過氧化氫酶自身存在半衰期短、穩(wěn)定性差、易被酶降解及口服難以吸收等缺點(diǎn)。為了克服這些問題，將脂質(zhì)體(Liposomes)作為尿酸酶和過氧化氫酶的載體。脂質(zhì)體的雙分子層結(jié)構(gòu)具有良好與生物膜的相似性，又可達(dá)到控制藥物釋放的目的，同時(shí)具有良好的給藥靶向性等特點(diǎn)，從而提高藥物的治療指數(shù)，減少藥物的治療劑量和降低藥物的毒性。本發(fā)明制備得到的尿酸酶復(fù)合過氧化氫酶脂質(zhì)體(Uricase and catalase liposomes, UCLP),可增加尿酸酶的貯存穩(wěn)定性和尿酸酶的體內(nèi)活性，同時(shí)降低副產(chǎn)物過氧化氫的濃度。為了減少給藥次數(shù)，提高患者的順應(yīng)性，增加尿酸酶的貯存穩(wěn)定性和尿酸酶的體內(nèi)活性，保持較長(zhǎng)時(shí)間的有效血藥濃度，同時(shí)降低副產(chǎn)物過氧化氫的濃度，有必要研制尿酸酶復(fù)合過氧化氫酶脂質(zhì)體。
[0003]經(jīng)查詢專利及文獻(xiàn)，目前尚無尿酸酶復(fù)合過氧化氫酶脂質(zhì)體的任何研究報(bào)道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供尿酸酶復(fù)合過氧化氫酶脂質(zhì)體及其制備方法。尿酸酶復(fù)合過氧化氫酶脂質(zhì)體具有貯存穩(wěn)定性好，體內(nèi)尿酸酶活性高和過氧化氫濃度低等優(yōu)點(diǎn)。本發(fā)明制備得到的尿酸酶復(fù)合過氧化氫酶脂質(zhì)體可用于治療高尿酸血癥。本發(fā)明制備得到的尿酸酶復(fù)合過氧化氫酶脂質(zhì)體能克服游離尿酸酶半衰期短、穩(wěn)定性差、易被酶降解及口服難以吸收等缺點(diǎn)；其貯存穩(wěn)定性比游離尿酸酶和單一尿酸酶脂質(zhì)體好，靜脈注射后體內(nèi)降尿酸能力更強(qiáng)和體內(nèi)過氧化氫濃度更低等優(yōu)點(diǎn)。本發(fā)明制備得到的尿酸酶復(fù)合過氧化氫酶脂質(zhì)體可緩慢釋放尿酸酶，保持較長(zhǎng)時(shí)間的有效血藥濃度，可以減少給藥次數(shù)，提高患者的順應(yīng)性，降低峰濃度過高引起的副作用。本發(fā)明提供的尿酸酶復(fù)合過氧化氫酶脂質(zhì)體制備工藝簡(jiǎn)單，成本較低，易于控制，易于工業(yè)化生產(chǎn)。 [0005]本發(fā)明提供的尿酸酶復(fù)合過氧化氫酶脂質(zhì)體，其特征在:制劑中尿酸酶含量為
0.2-0.8U/mL、過氧化氫酶含量為100-1000U/mL，制劑中其余組分重量百分比為:磷脂1_3份，膽固醇1-3份，其中使用的緩沖液4種分別為:硼酸-硼砂緩沖液、Tris緩沖液、Tricine緩沖液Bicine緩沖液，緩沖液pH8~9，緩沖液離子強(qiáng)度25_150mM。本發(fā)明提供的尿酸酶復(fù)合過氧化氫酶脂質(zhì)體，可以采用逆向蒸發(fā)法制備，步驟如下:稱取磷脂、膽固醇溶于三氯甲烷，待其充分溶解，在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上揮干氯仿，即得均勻的薄膜；取適量乙醚將薄膜溶解，然后加入含有尿酸酶和過氧化氫酶的緩沖液，再超聲直至形成帶乳光的均勻分散體系，旋轉(zhuǎn)揮干乙醚，即得。
[0006]本發(fā)明提供的尿酸酶復(fù)合過氧化氫酶脂質(zhì)體的貯存穩(wěn)定性比游離尿酸酶和單一尿酸酶脂質(zhì)體的穩(wěn)定性好(圖1)。本發(fā)明提供的尿酸酶復(fù)合過氧化氫酶脂質(zhì)體的藥效實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明尿酸酶復(fù)合過氧化氫酶脂質(zhì)體在治療高尿酸血癥方面比游離尿酸酶和單一尿酸酶脂質(zhì)體的效果好(圖2)，同時(shí)能降低尿酸酶分解尿酸產(chǎn)生的過氧化氫濃度(圖3)。
[0007]本專利不同于通常研究報(bào)道的單一尿酸酶脂質(zhì)體的配方。本發(fā)明首次在單一尿酸酶脂質(zhì)體的配方中加入了過氧化氫酶，使尿酸酶和過氧化氫酶同時(shí)包載于脂質(zhì)體內(nèi)。將用本發(fā)明制備得到的尿酸酶復(fù)合過氧化氫酶脂質(zhì)體靜脈注射入體內(nèi)后，體內(nèi)降尿酸能力比游離尿酸酶和單一尿酸酶脂質(zhì)體明顯。分析原因可能如下:尿酸酶催化尿酸時(shí)需要氧氣，而過氧化氫酶分解過氧化氫會(huì)產(chǎn)生氧氣，不僅能降低過氧化氫的濃度，使反應(yīng)向正向進(jìn)行，而且還能為尿酸酶分解尿酸提供氧氣，形成一個(gè)循環(huán)反應(yīng)體系。本發(fā)明制備得到的尿酸酶復(fù)合過氧化氫酶脂質(zhì)體比較于單一尿酸酶脂質(zhì)體，由于加入過氧化氫酶，使得過氧化氫濃度降低，繼而降低了由過氧化氫引起的毒副作用。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0008]圖1為本發(fā)明制得的尿酸酶復(fù)合過氧化氫酶脂質(zhì)體的貯存穩(wěn)定性
[0009]試驗(yàn)條件:分別將游離尿酸酶、尿酸酶脂質(zhì)體和尿酸酶復(fù)合過氧化氫酶脂質(zhì)體樣品放置于4°C的冰箱中，分別于第0，1，2，4，7，10，14，20，28天時(shí)測(cè)定樣品溶液中的尿酸酶的活性。[0010]圖2為本發(fā)明制得的尿酸酶復(fù)合過氧化氫酶脂質(zhì)體治療高尿酸血癥時(shí)體內(nèi)尿酸濃度
[0011]試驗(yàn)條件:建立高尿酸血癥模型后，立即分別給予游離尿酸酶、單一尿酸酶脂質(zhì)體和尿酸酶復(fù)合過氧化氫酶脂質(zhì)體治療，然后用尿酸試劑盒測(cè)定血清中尿酸濃度。
[0012]圖3為本發(fā)明制得的尿酸酶復(fù)合過氧化氫酶脂質(zhì)體治療高尿酸血癥時(shí)體內(nèi)過氧化氫濃度
[0013]試驗(yàn)條件:建立高尿酸血癥模型后，立即分別給予游離尿酸酶、單一尿酸酶脂質(zhì)體和尿酸酶復(fù)合過氧化氫酶脂質(zhì)體治療，然后用過氧化氫試劑盒測(cè)定血清中過氧化氫濃度。
【具體實(shí)施方式】
[0014]為了進(jìn)一步說明本發(fā)明及其優(yōu)點(diǎn)，給出了下列特定的實(shí)施例，應(yīng)理解這些實(shí)施例僅有于具體說明而不是作為本發(fā)明范圍的限制。
[0015]實(shí)施例1:
[0016]配方中含有的各組分的重量組成比為:尿酸酶含量為0.25U/mL、過氧化氫酶含量為100U/mL，制劑中其余組分重量百分比為:磷脂1.1份，膽固醇1份，三氯甲烷IOmL和乙醚10mL，使用的緩沖液為硼酸-硼砂緩沖液，緩沖液pH8.0,緩沖液離子強(qiáng)度25mM，緩沖液IOmL0
[0017]制備方法包括下列步驟:稱取磷脂、膽固醇溶于三氯甲烷，待其充分溶解，在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上揮干氯仿，即得均勻的薄膜；取適量乙醚將薄膜溶解，然后加入含有尿酸酶和過氧化氫酶的緩沖液，再超聲直至形成帶乳光的均勻分散體系，旋轉(zhuǎn)揮干乙醚，即得。
[0018]實(shí)施例2:
[0019]配方中含有的各組分的重量組成比為:尿酸酶含量為0.5U/mL、過氧化氫酶含量為500U/mL，制劑中其余組分重量百分比為:磷脂2份，膽固醇2.3份，三氯甲烷30mL和乙醚30mL，使用的緩沖液為硼酸-硼砂緩沖液，緩沖液pH8.5，緩沖液離子強(qiáng)度90mM，緩沖液20mLo
[0020]制備方法基本同實(shí)施例1。
[0021]實(shí)施例3:
[0022]配方中含有的各組分的重量組成比為:尿酸酶含量為0.75U/mL、過氧化氫酶含量為900U/mL，制劑中其余組分重量百分比為:磷脂2.8份，膽固醇3份，三氯甲烷12mL和乙醚9mL，使用的緩沖液為硼酸-硼砂緩沖液，緩沖液pH9.0,緩沖液離子強(qiáng)度140mM，緩沖液IOmL0
[0023]制備方法基本同實(shí)施例1。
[0024]實(shí)施例4:
[0025]配方中含有的各組分的重量組成比為:尿酸酶含量為0.24U/mL、過氧化氫酶含量為550U/mL，制劑中其余組分重量百分比為:磷脂1.2份，膽固醇2.2份，三氯甲烷24mL和乙醚15mL，其中使用的緩沖液為硼酸-硼砂緩沖液，緩沖液pH8.1，緩沖液離子強(qiáng)度IOOmM,緩沖液IOmL0
[0026]制備方法基本同實(shí)施例1。
[0027]實(shí)施例5:
[0028]配方中含有的各組分的重量組成比為:尿酸酶含量為0.49U/mL、過氧化氫酶含量為950U/mL，制劑中其余組分重量百分比為:磷脂2份，膽固醇3份，三氯甲烷23mL和乙醚15mL,使用的緩沖液為Bicine緩沖液，緩沖液pH8.6，緩沖液離子強(qiáng)度150mM，緩沖液15mL。
[0029]制備方法基本同實(shí)施例1。
[0030]實(shí)施例6:
[0031]配方中含有的各組分的重量組成比為:尿酸酶含量為0.5U/mL、過氧化氫酶含量為200U/mL，制劑中其余組分重量百分比為:磷脂2.2份，膽固醇1.3份，三氯甲烷30mL和乙醚30mL，使用的緩沖液為硼酸-硼砂緩沖液，緩沖液pH8.5，緩沖液離子強(qiáng)度50mM，緩沖液20mLo
[0032]制備方法基本同實(shí)施例1。
[0033]實(shí)施例7:
[0034]配方中含有的各組分的重量組成比為:尿酸酶含量為0.78U/mL、過氧化氫酶含量為800U/mL，制劑中其余組分重量百分比為:磷脂1.1份，膽固醇1.1份，三氯甲烷IOmL和乙醚10mL，使用的緩沖液為Bicine緩沖液，緩沖液pH8.5，緩沖液離子強(qiáng)度IlOmM,緩沖液IOmL0
[0035]制備方法基本同實(shí)施例1。
[0036]實(shí)施例8:
[0037]配方中含有的各組分的重量組成比為:尿酸酶含量為0.5U/mL、過氧化氫酶含量為850U/mL，制劑中其余組分重量百分比為:磷脂1.1份，膽固醇1.2份，三氯甲烷20mL和乙醚20mL，使用的緩沖液為Tris緩沖液，緩沖液pH8.9，緩沖液離子強(qiáng)度145mM，緩沖液10mL。
[0038]制備方法基本同實(shí)施例1。
[0039]實(shí)施例9:
[0040]配方中含有的各組分的重量組成比為:尿酸酶含量為0.3U/mL、過氧化氫酶含量為300U/mL，制劑中其余組分重量百分比為:磷脂2.1份，膽固醇2.2份，三氯甲烷IOmL和乙醚30mL，使用的緩沖液為硼酸-硼砂緩沖液，緩沖液pH9，緩沖液離子強(qiáng)度150mM，緩沖液IOmL0
[0041]制備方法基本同實(shí)施例1。
[0042]實(shí)施例10:
[0043]配方中含有的各組分的重量組成比為:尿酸酶含量為0.74U/mL、過氧化氫酶含量為1000U/mL，制劑中其余組分重量百分比為:磷脂2份，膽固醇2.3份，三氯甲烷30mL和乙醚10mL，其中使用 的緩沖液為Bicine緩沖液，緩沖液pH8，緩沖液離子強(qiáng)度55mM，緩沖液20mLo
[0044]制備方法基本同實(shí)施例1。
[0045]實(shí)施例11:
[0046]配方中含有的各組分的重量組成比為:尿酸酶含量為0.5U/mL、過氧化氫酶含量為500U/mL，制劑中其余組分重量百分比為:磷脂2.7份，膽固醇3份，三氯甲烷12mL和乙醚30mL，其中使用的緩沖液為Tricine緩沖液，緩沖液pH8.5，緩沖液離子強(qiáng)度lOOmM，緩沖液 20mL。
[0047]制備方法基本同實(shí)施例1。
[0048]實(shí)施例12:
[0049]配方中含有的各組分的重量組成比為:尿酸酶含量為0.5U/mL、過氧化氫酶含量為600U/mL，制劑中其余組分重量百分比為:磷脂2.8份，膽固醇2.9份，三氯甲烷SmL和乙醚20mL，其中使用的緩沖液為Bicine緩沖液，緩沖液pH8.1，緩沖液離子強(qiáng)度35mM，緩沖液20mLo
[0050]制備方法基本同實(shí)施例1。
【權(quán)利要求】
1.一種尿酸酶復(fù)合過氧化氫酶脂質(zhì)體，其特征在于:制劑中尿酸酶含量為0.2-0.8U/mL,過氧化氫酶含量為100-1000U/mL，制備制劑所用的緩沖液pH為8~9，離子強(qiáng)度為25~150mM，其余組分重量配比為:磷脂成分為I~3份，膽固醇為I~3份。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的尿酸酶復(fù)合過氧化氫酶脂質(zhì)體，其特征在于制備制劑所用的緩沖液是硼酸-硼砂緩沖液、Tris緩沖液、Bicine緩沖液，離子強(qiáng)度為25~150mM，pH值范圍在8~9。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的尿酸酶復(fù)合過氧化氫酶脂質(zhì)體的制備方法，其特征在于該方法包括下列步驟:稱取磷脂、膽固醇溶于三氯甲烷，待其充分溶解，在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上揮干氯仿，即得均勻的薄膜；取乙醚將薄膜溶解，然后加入含有尿酸酶和過氧化氫酶的緩沖液，再超聲直至形成帶乳光的均勻分散體系，旋轉(zhuǎn)揮干乙醚，即得。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的尿酸酶復(fù)合過氧化氫酶脂質(zhì)體，其特征在于:平均粒徑小于I μ m,比較于天然尿酸酶和單一尿酸酶脂質(zhì)體，尿酸酶復(fù)合過氧化氫酶脂質(zhì)體中尿酸酶貯存穩(wěn)定性增加，尿酸 酶體內(nèi)催化活性增加，分解尿酸時(shí)產(chǎn)生的過氧化氫含量降低。
【文檔編號(hào)】A61K38/44GK103977396SQ201410242161
【公開日】2014年8月13日 申請(qǐng)日期:2014年5月26日 優(yōu)先權(quán)日:2014年5月26日
【發(fā)明者】張景勍, 周云莉, 張敉, 胡雪原, 何丹, 張永紅 申請(qǐng)人:重慶醫(yī)科大學(xué)