一種植酸酶耐溫能力的測定方法
【技術領域】
[0001] 本發(fā)明屬于植酸酶性能檢測技術領域，特別涉及一種植酸酶耐溫能力測定方法。
【背景技術】
[0002] 植酸酶是催化植酸及其鹽類水解為肌醇與磷酸(鹽）的一類酶的總稱，屬磷酸單酯 水解酶。植酸酶具有特殊的空間結構，能夠依次分離植酸分子中的磷，將植酸(鹽)降解為肌 醇和無機磷，同時釋放出與植酸(鹽）結合的其它營養(yǎng)物質。植酸酶在飼料中的運用非常廣 泛，幾乎所有的飼料中均添加了植酸酶。以全年飼料總產量為1. 2億噸計算，植酸酶的用量 至少達1. 2萬噸。但是植酸酶的應用也存在一些問題： 1) 由于植酸酶在飼料中的添加量較小（每噸飼料添加100克左右），經高溫制粒后植 酸酶的損失或殘留無法準確衡量； 2) 絕大部分植酸酶生產廠家都宣稱自己的植酸酶能耐受高溫，但均不能提供有力證據(jù) 和有效方法來驗證植酸酶的耐溫能力。
[0003] 因此，植酸酶的耐溫能力的評定成為一項非常重要的工作。
[0004] 中國專利CN101493418公開了一種添加在飼料中植酸酶的微量測定方法，可以對 飼料中的植酸酶的含量進行較為準確和微量的測定，但是其存在以下缺點：1)該方法測定 的是飼料中的植酸酶含量，但是其無法直接衡量植酸酶的耐溫能力；2)檢測設備要求高，檢 測過程復雜，不易操作。

【發(fā)明內容】

[0005] 本發(fā)明的目的是提供一種植酸酶耐溫能力的測定方法，可以直接對植酸酶的耐溫 能力高低作出判斷，且簡單易操作。
[0006] 本發(fā)明采用的技術方案如下： 一種植酸酶耐溫能力的測定方法，在同一飼料中，添加相同活性的不同植酸酶，在同樣 的條件下進行高溫制粒，然后進行發(fā)酵，測定發(fā)酵前后飼料中的無機磷含量差，無機磷含量 差的高低對應于相應植酸酶耐溫能力的高低。
[0007] 優(yōu)選的，所述的發(fā)酵溫度為20-45°C。
[0008] 優(yōu)選的，發(fā)酵的PH值為2-8。
[0009] 優(yōu)選的，發(fā)酵時在飼料中加入一定量的水，飼料與水的質量比例為1 :1-1. 1。
[0010] 優(yōu)選的，發(fā)酵時間為3-5h。
[0011] 具體的，測定步驟如下： 1) 在相同飼料配方中加入同樣活性的不同植酸酶進行高溫制粒，得到含不同植酸酶的 若干飼料樣本； 2) 對每一飼料樣本取樣品兩份X和Y ; 3) 用常規(guī)檢測方法測定每一飼料樣本的X樣品的無機磷含量； 4) 對每一飼料樣本的Y樣品進行發(fā)酵，條件如下：在37°C，PH值為5. 0,含水量50%條 件下發(fā)酵3-5個小時； 5) 測定發(fā)酵后Y樣品中的無機磷含量； 6) 比較每一飼料樣本的樣品X和Y的無機磷含量差；兩個樣品無機磷含量差值越大， 則該樣品對應的飼料樣本中相應填加的植酸酶耐溫能力越好。
[0012] 當然，樣品X和樣品Y的取樣量和取樣規(guī)則都要保持一致。
[0013] 優(yōu)選的，添加植酸酶時可按照10-1000克/噸全價料進行添加；所述的飼料高溫制 粒的溫度范圍一般在60-120°C。
[0014] 本發(fā)明提供了一種簡易的判定植酸酶耐溫能力高低的方法。由于植酸酶的基本作 用是把飼料中的有機磷轉化為無機磷，因此本發(fā)明利用這一點，將添加相同活性的植酸酶 經高溫制粒后的飼料經體外發(fā)酵（模擬消化）后，測飼料發(fā)酵后的無機磷含量的方式，含量 越高說明植酸酶的耐溫能力越強。
[0015] 與【背景技術】中提到的專利CN101493418相比，本申請有以下區(qū)別和優(yōu)勢： 1) 本質不同：本申請本質是測定經高溫制粒后植酸酶對有機磷的降解能力，直接反應 出植酸酶的耐高溫能力，這樣可以判斷出植酸酶在經高溫制粒后在飼料中的殘留量，起到 對植酸酶添加時選擇的一個指導，從而減少高溫制粒后植酸酶的損失；而對比專利只是起 到測定飼料中植酸酶的含量的作用，與本申請要解決的問題并不相同； 2) 可操作性不同：本申請對于一般的飼料企業(yè)都是非常方便操作的，而對比專利對檢 測設備的要求高，制備標準溶液的過程復雜，增加了檢測的成本和不便； 3) 準確性不同：本申請對植酸酶耐溫能力的衡量直接、準確，而對比專利由于受飼料中 磷的影響、濃縮設備、測定結果間接反映耐溫能力等因素的影響而導致結果的準確性較差。
【具體實施方式】
[0016] 以下以具體實施例來說明本發(fā)明的技術方案，但本發(fā)明的保護范圍不限于此： 一種植酸酶耐溫能力的測定方法，測定步驟如下： 1) 在相同飼料配方中加入同樣活性的不同植酸酶進行高溫制粒，得到含不同植酸酶的 若干飼料樣本； 2) 對每一飼料樣本取樣品兩份X和Y ; 3) 用常規(guī)檢測方法測定每一飼料樣本的X樣品的無機磷含量； 4) 對每一飼料樣本的Y樣品進行發(fā)酵，條件如下：在37°C，PH值為5. 0,含水量50%條 件下發(fā)酵4個小時； 5) 測定發(fā)酵后Y樣品中的無機磷含量； 6) 比較每一飼料樣本的樣品X和Y的無機磷含量差；兩個樣品無機磷含量差值越大， 則該樣品對應的飼料樣本中相應填加的植酸酶耐溫能力越好。
[0017] 采用上述方法評定下述A. B. C. D四個植酸酶樣品的耐溫能力。
[0018] 其中，所采用的飼料為肉小鴨料，A.B.C.D四種植酸酶的酶活分別為5518U/ 克.5437U/克.6018U/克.5872U/克，植酸酶的添加量均為100克/噸飼料。樣品X和Y 的量為100克，制粒溫度為87°C。
[0019] 本發(fā)明中無機磷的測定方法無特別指定，在本實施例中采用的是先將飼料樣品用 鹽酸和硝酸處理，使無機磷浸提出來，再對濾液進行測定獲得無機磷含量的方法。具體可參 考"飼料中無機磷和有機磷的測定方法"（鐘國清，《飼料工業(yè)》03年第24卷第7期)。
[0020] 根據(jù)本發(fā)明方法，據(jù)無機磷差值進行比較，耐溫能力的大小分別為： 植酸酶B組〉植酸酶D組〉植酸酶C組〉植酸酶A組。
[0021] 驗證： 將A. B. C. D四種植酸酶按100克/噸飼料分別添加在實施例中相同飼料中在相同條件 下進行高溫制粒，制粒后用"飼料中植酸酶的微量測定"（即專利CN101493418的方法)方法 測定其顆粒飼料中植酸酶的酶活，根據(jù)測定值判斷這四種植酸酶的耐溫性能與本專利的方 法相比較。
[0022] 根據(jù)酶活保留率，可判斷出這四種植酸酶的耐溫能力的大小為： 植酸酶B組〉植酸酶D組〉植酸酶C組〉植酸酶A組。
[0023] 結論與本發(fā)明一致，但是本發(fā)明方法簡單易測，結論直接、準確。
【主權項】
1. 一種植酸酶耐溫能力的測定方法，其特征在于，在同一飼料中，添加相同活性的不 同植酸酶，在同樣的條件下進行高溫制粒，然后進行發(fā)酵，測定發(fā)酵前后飼料中的無機磷含 量差，無機磷含量差的高低對應于相應植酸酶耐溫能力的高低。2. 如權利要求1所述的植酸酶耐溫能力的測定方法，其特征在于，所述的發(fā)酵溫度為 20-45。。。3. 如權利要求2所述的植酸酶耐溫能力的測定方法，其特征在于，發(fā)酵的PH值為 2· 0_8· 0〇4. 如權利要求3所述的植酸酶耐溫能力的測定方法，其特征在于，發(fā)酵時在飼料中加 入一定量的水，飼料與水的質量比例為1 :1-1. 1。5. 如權利要求4所述的植酸酶耐溫能力的測定方法，其特征在于，發(fā)酵時間為3-5h。6. 如權利要求1-5任一所述的植酸酶耐溫能力的測定方法，其特征在于，測定步驟如 下： 1) 在相同飼料配方中加入同樣活性的不同植酸酶進行高溫制粒，得到含不同植酸酶的 若干飼料樣本； 2) 對每一飼料樣本取樣品兩份X和Y ; 3) 用常規(guī)檢測方法測定每一飼料樣本的X樣品的無機磷含量； 4) 對每一飼料樣本的Y樣品進行發(fā)酵，條件如下：在37°C，PH值為5. 0,含水量50%條 件下發(fā)酵3-5個小時； 5) 測定發(fā)酵后Y樣品中的無機磷含量； 6) 比較每一飼料樣本的樣品X和Y的無機磷含量差；兩個樣品無機磷含量差值越大， 則該樣品對應的飼料樣本中相應填加的植酸酶耐溫能力越好。
【專利摘要】本發(fā)明屬于植酸酶性能檢測技術領域，特別涉及一種植酸酶耐溫能力測定方法。在同一飼料中，添加相同活性的不同植酸酶，在同樣的條件下進行高溫制粒，然后進行發(fā)酵，測定發(fā)酵前后飼料中的無機磷含量差，無機磷含量差的高低對應于相應植酸酶耐溫能力的高低。本發(fā)明方法可以直接對植酸酶的耐溫能力高低作出準確判斷，簡單易操作。
【IPC分類】C12Q1/44
【公開號】CN105567785
【申請?zhí)枴緾N201410523673
【發(fā)明人】顏鵬飛
【申請人】顏鵬飛
【公開日】2016年5月11日
【申請日】2014年10月8日