硫酸化寡聚糖衍生物的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及多元硫酸化寡聚糖衍生物化合物，其作為硫酸乙酰肝素-結(jié)合蛋白和類肝素酶的抑制劑具有活性；制備所述化合物的方法；包含所述化合物的組合物，以及所述化合物及其組合物用于對(duì)哺乳動(dòng)物受試者進(jìn)行抗血管生成、抗轉(zhuǎn)移、抗炎、抗微生物、抗凝血和/或抗血栓形成的治療、降低血液的甘油三酯水平以及抑制心血管疾病的用途。
【專利說明】硫酸化寡聚糖衍生物
[0001] 本申請是中國專利申請?zhí)?00580006833. 8 (PCT/AU2005/000314)，申請日為2005 年3月4日發(fā)明名稱為"硫酸化寡聚糖衍生物"的分案申請。

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0002] 本發(fā)明在此的描述涉及具有作為硫酸乙酰肝素-結(jié)合蛋白和類肝素酶的抑制劑 活性的化合物。具體地，本發(fā)明涉及硫酸化寡聚糖衍生物，盡管本發(fā)明的范圍不是必然地被 限制于此。具體地，本發(fā)明涉及多元硫酸化寡聚糖衍生物，所述衍生化優(yōu)選在單糖單元還原 端的C-1上和/或非還原端的C-6上。本發(fā)明還涉及制備所述化合物的方法，包含所述化 合物的組合物，以及所述化合物及其組合物對(duì)哺乳動(dòng)物受試者進(jìn)行抗血管生成、抗轉(zhuǎn)移、抗 炎、抗微生物、抗凝血和/或抗血栓形成的治療的用途。所述化合物及其組合物還具有在哺 乳動(dòng)物受試者中降低血液甘油三酯水平以及抑制心血管疾病的作用。當(dāng)將其對(duì)哺乳動(dòng)物受 試者進(jìn)行給藥時(shí)，所述化合物還對(duì)預(yù)防上述病癥具有作用。

【背景技術(shù)】
[0003] 已知的硫酸化寡聚糖試劑PI-88[1，2](參見下面的化合物1)已經(jīng)被證明是有價(jià) 值的腫瘤生長和轉(zhuǎn)移抑制劑[1，3]并且正在癌癥病人中進(jìn)行II期臨床試驗(yàn)[4]。PI-88通 過抑制血管生成生長因子（具體地是FGF-UFGF-2和VEGF)以及它們的受體與硫酸乙酰肝 素的相互作用來發(fā)揮抗血管生成作用[1，5]。另外，PI-88是一種類肝素酶的有效抑制劑， 該酶是一種分解蛋白聚糖的硫酸乙酰肝素側(cè)鏈的糖苷酶，該蛋白聚糖是腫瘤細(xì)胞周圍的細(xì) 胞外基質(zhì)（ECM)和基底膜的主要成分[1，2]。已經(jīng)將類肝素酶與血管緊密地聯(lián)系起來：它 能夠從所述ECM中釋放活性硫酸乙酰肝素-結(jié)合的血管生成生長因子并且與所述ECM的降 解以及隨后的與新血管的生長相聯(lián)系的組織重塑有關(guān)[6]。所述的通過類肝素酶的ECM的 降解在所述腫瘤細(xì)胞的擴(kuò)散（轉(zhuǎn)移）中也是決定性的，該腫瘤細(xì)胞的擴(kuò)散（轉(zhuǎn)移）是通過 允許它們進(jìn)入血流并且固定在遠(yuǎn)處的，在那里它們能夠形成次生瘤[6, 7]。
[0004] 除它的抗血管生成作用之外，PI-88通過以下來抑制凝血系統(tǒng)：（i)抑制在固有途 徑中的蛋白酶，（ii)刺激組織因子途徑抑制物（TFPI)的釋放，以及（iii)活化肝素輔因子 Π -介導(dǎo)的凝血酶的抑制。然而，PI-88不與AT III相互作用并且因此顯示無抗-Xa或AT III-介導(dǎo)的抗-Ila的活性[8, 9]。在猴子的體內(nèi)研究中表明低劑量的PI-88促進(jìn)完全硫 酸乙酰肝素結(jié)合的TFPI從血管細(xì)胞壁釋放[9]。除了其在凝血方面的影響，TFPI最近被證 明是一種抗血管生成劑[10]和轉(zhuǎn)移抑制劑[11]。PI-88還顯示出阻滯血管平滑肌細(xì)胞增 殖以及內(nèi)膜增厚[12]，抑制細(xì)胞的單純皰疹病毒（HSV)感染以及HSV-1及HSV-2的細(xì)胞向 細(xì)胞的傳播[13]，以及抑制在被動(dòng)埃曼腎炎（passive Heymann nephritis)中的蛋白尿征
[14]。
[0005] PI-88是一種高度硫酸化、大小范圍為二-至己糖的單磷酸化甘露糖寡聚糖 的混合物[15, 16]。通過完全磺化[2, 16]所述寡聚糖磷酸鹽部分（2)(參見在本段之 后的式I)制得PI-88,該寡聚糖磷酸鹽部分⑵是通過溫和的、酸催化水解所述酵母 Pichia(Hansenula)holstii NRRL Y-2448的細(xì)胞外磷酸甘露聚糖獲得的[17，18]。所述主 要組分分別地是五-和四糖磷酸鹽3(?60%)以及4(?30%)，同時(shí)剩余的10 %是由二-、 三-和己糖磷酸鹽（5-7)以及四糖基胺（tetrasaccharylamine，未示出）組成的[15, 16]。
[0006] 式 I
[0007]

【權(quán)利要求】
1. 一種通式化合物： X-tYln-Z-UR1 其中： X、Y和Z每個(gè)是單糖單元，其具有通過單或多鍵與X、Y和Z的每個(gè)非連接的碳結(jié)合的 基團(tuán)UR，除具有通過單或多鍵結(jié)合的UR1的單糖Z的碳-1之外； η是0-6的整數(shù)； 每個(gè)U獨(dú)立地是C、N、S或0或者它們的高氧化態(tài)，包括CO、COO、NO、N02、S (0)、S (0) 0 ; 每個(gè)R獨(dú)立地是S03M或Η，其中Μ是任何藥學(xué)上可接受的陽離子或者是任何烷基、芳基、 ?；⒎减；⑼榛酋；⒎蓟酋；EG、PEG衍生物、Η或基團(tuán)
其中獨(dú)立地在每個(gè)ΑΒ基團(tuán)中，Α是0或ΝΗ，并且Β是Η或Μ，其中Μ是如上所定義的， 或烷基、芳基或任何其它合適的基團(tuán)； R1是S03M、H、烷基、芳基、?；?、芳?；⑼榛酋；⒎蓟酋；EG或PEG衍生物，或 者R1與U -起是N3或取代的三唑或衍生物，或者取代的四唑或衍生物，或者取代的芳基或 衍生物，或者取代的雜芳基或衍生物； 條件是當(dāng)所有的UR1和UR基團(tuán)是0S03M或0H(除所述單糖X的環(huán)外亞甲基基團(tuán)以外） 時(shí)，所述單糖X的環(huán)外亞甲基基團(tuán)不能是〇P〇3M2基團(tuán)。
2. -種通式化合物： 其中： η是0-6的整數(shù)； U是C、N、S或0或者它們的高氧化態(tài)，包括CO、COO、NO、N02、S (0)、S (0) 0 ; 每個(gè)R獨(dú)立地是S03M或Η，其中Μ是任何藥學(xué)上可接受的陽離子或者是任何烷基、芳基、 ?；⒎减；⑼榛酋；⒎蓟酋；EG、PEG衍生物、Η或基團(tuán)
其中獨(dú)立地在每個(gè)ΑΒ基團(tuán)中，Α是0或ΝΗ，并且Β是Η或Μ，其中Μ是如上所定義的， 或烷基、芳基或任何其它合適的基團(tuán)； R1是S03M、H、烷基、芳基、酰基、芳?；?、烷基磺?；⒎蓟酋；?、PEG或PEG衍生物，或 者R1與U -起是N3或取代的三唑或衍生物，或者取代的四唑或衍生物，或者取代的芳基或 衍生物，或者取代的雜芳基或衍生物； 條件是當(dāng)R1和所有的R基團(tuán)是S03M或0H(除所述非還原D-甘露糖的C-6上的R基團(tuán) 以外）時(shí)，所述非還原D-甘露糖的C-6上的R基團(tuán)不能是P0具基團(tuán)。
3. 權(quán)利要求1或權(quán)利要求2的化合物，其中Μ是鈉。
4. 權(quán)利要求1或權(quán)利要求2的化合物，其中η是3。
5. 權(quán)利要求1或權(quán)利要求2的化合物，其中R1是正辛基。
6. 權(quán)利要求1或權(quán)利要求2的化合物，其中至少50%的R基團(tuán)含有S03M。
7. 權(quán)利要求1或權(quán)利要求2的化合物，其中70至100%的R基團(tuán)含有S03M。
8. 根據(jù)權(quán)利要求1的化合物，其中所述化合物是如以上所描述的PG500、PG501、PG502、 PG503、PG504、PG506、PG507、PG508、PG509、PG510、PG511、PG512、PG513、PG514。
9. 一種用于預(yù)防或治療哺乳動(dòng)物受試者的由血管生成、轉(zhuǎn)移、炎癥、凝血/血栓、升高 的血液甘油三酯水平、微生物感染和/或心血管疾病產(chǎn)生的病癥的藥物或獸藥組合物，所 述組合物包含至少一種根據(jù)權(quán)利要求1或權(quán)利要求2的化合物以及用于所述至少一種化合 物的藥學(xué)或獸醫(yī)學(xué)上可接受的載體或稀釋劑。
10. 根據(jù)權(quán)利要求9所述的組合物，其進(jìn)一步包含藥學(xué)或獸醫(yī)學(xué)上可接受的賦形劑、緩 沖劑、穩(wěn)定劑、等滲化試劑、防腐劑或抗氧化劑。
11. 根據(jù)權(quán)利要求所述9的組合物，其中所述化合物以酯、游離酸或堿、水合物或前藥 的形式存在。
12. 根據(jù)權(quán)利要求1或權(quán)利要求2的化合物在制備用于預(yù)防或治療哺乳動(dòng)物受試者的 由血管生成、轉(zhuǎn)移、炎癥、凝血/血栓、升高的血液甘油三酯水平、微生物感染和/或心血管 疾病產(chǎn)生的病癥的藥物中的應(yīng)用。
13. 根據(jù)權(quán)利要求12的應(yīng)用，其中所述哺乳動(dòng)物受試者是人類受試者。
14. 一種用于預(yù)防或治療哺乳動(dòng)物受試者的由血管生成、轉(zhuǎn)移、炎癥、凝血/血栓、升高 的血液甘油三酯水平、微生物感染和/或心血管疾病產(chǎn)生的病癥的方法，所述方法包括向 所述受試者以有效量的至少一種根據(jù)權(quán)利要求1或權(quán)利要求2的化合物或包含所述至少一 種化合物的組合物給藥。
15. 根據(jù)權(quán)利要求14的方法，其中所述哺乳動(dòng)物受試者是人類受試者。
16. 根據(jù)權(quán)利要求14的方法，其中由血管生成產(chǎn)生的所述病癥是增生性視網(wǎng)膜病或由 實(shí)體瘤生長的血管生成。
17. 根據(jù)權(quán)利要求14的方法，其中由炎癥產(chǎn)生的所述病癥是類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、多發(fā)性 硬化、炎癥性腸病、同種異體移植排斥或慢性哮喘。
18. 根據(jù)權(quán)利要求14的方法，其中由凝血和/或血栓產(chǎn)生的所述病癥是深度靜脈血栓 形成、肺栓塞、血栓性中風(fēng)、外周動(dòng)脈血栓形成、不穩(wěn)定性心絞痛或心肌梗塞。
19. 一種用于制備根據(jù)權(quán)利要求1的化合物的方法，所述方法包括： i) 活化被保護(hù)的寡聚糖以及將所述被活化的寡聚糖與供體化合物縮合； ii) 將從步驟（i)得到的所述糖甙脫保護(hù)；以及 iii) 任選地衍生化所述的脫保護(hù)的糖甙。
20. 根據(jù)權(quán)利要求19的方法，其中步驟（i)中的所述的活化是通過路易斯酸。
21. 權(quán)利要求19的方法，其中所述寡聚糖的非還原的碳是磷酸化的。
【文檔編號(hào)】A61K31/702GK104119404SQ201410353750
【公開日】2014年10月29日 申請日期:2005年3月4日 優(yōu)先權(quán)日:2004年3月4日
【發(fā)明者】V·費(fèi)爾羅, J·K·法爾威瑟, T·卡洛麗, 劉立功 申請人:普羅吉恩制藥有限公司