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      月桂酸修飾sod的應用方法

      文檔序號:1316825閱讀:638來源:國知局
      月桂酸修飾sod的應用方法
      【專利摘要】本發(fā)明涉及一種月桂酸修飾SOD的應用方法,主要解決現(xiàn)有技術中存在有毒物質(zhì)摻入、SOD室溫下長期放置失去活性(失活時間短、半衰期短)而實際應用的關鍵是保存SOD的活性、目前尚無用于職業(yè)性皮膚病的先例等問題。本發(fā)明通過采用一種月桂酸修飾SOD的應用方法,用于職業(yè)性皮膚病防治,月桂酸修飾SOD的制備主要包括以下步驟:(1)月桂酸和氯化亞砜在50~140℃下反應,然后穩(wěn)定回流,通過減壓蒸餾收集到124~127℃的餾分,即為活化月桂酸修飾劑;(2)將牛血SOD溶于緩沖液中,加入活化月桂酸修飾劑,攪拌反應后急冷終止反應,得到月桂酸修飾SOD產(chǎn)品的技術方案較好地解決了上述問題,可用于職業(yè)性皮膚病防治中。
      【專利說明】月桂酸修飾SOD的應用方法

      【技術領域】
      [0001] 本發(fā)明涉及一種月桂酸修飾S0D的應用方法。

      【背景技術】
      [0002] 超氧化物歧化酶(Superoxide Dismutase,簡稱S0D)是一類廣泛存在于生物 體內(nèi)的金屬酶,是催化超氧陰離子自由基(〇 · 2_)歧化反應的酶類,是超氧陰離子自由基 (0 · 2_)的清除劑,也是一種具有重要臨床應用價值的藥用酶,它能治療被超氧陰離子自由 基(〇·2_)傷害的有關疾病。臨床上用于治療氧自由基誘發(fā)的腫瘤,炎癥,缺血-再灌注損 傷,氧中毒、帕金斯綜合癥,老年癡呆癥,類風濕關節(jié)炎、衰老、多種皮膚病等。
      [0003] 天然的S0D存在著半衰期短、穩(wěn)定性較差、長期存放失活、遇熱失活、具有免疫原 性等問題。上述問題國內(nèi)外均主要通過對S0D進行化學修飾解決。主要修飾劑為聚乙二醇、 多糖類物質(zhì)、小分子脂肪酸等,但大分子修飾的S0D不易透過皮膚與細胞膜。
      [0004] 閻家麒等(閻家麒,謝文正,月桂酸修飾超氧化物歧化酶的制備及其性質(zhì)研究, 生物化學與生物物理進展,1994,21 (2) :154-157)報道采用月桂酸修飾牛血S0D的方法,采 用氯化亞砜作為活化劑,使用了催化劑吡啶DMF活化月桂酸,活性回收率為93%,修飾率為 80 %。但吡啶屬于有毒類物質(zhì),體系中盡量不要引入這種物質(zhì)。
      [0005] 目前,尚未見修飾S0D應用于職業(yè)性皮膚病防治的報道。采用S0D防治職業(yè)性皮 膚病必須解決S0D長期放置、耐熱、易于透過皮膚等問題,且修飾劑及修飾過程采用的催化 劑等必須無毒。本發(fā)明有針對性的解決了該問題。


      【發(fā)明內(nèi)容】

      [0006] 本發(fā)明所要解決的技術問題是現(xiàn)有技術中存在有毒物質(zhì)摻入、長期放置活性短、 耐熱性差的問題,提供一種新的月桂酸修飾S0D的應用方法。該方法用于職業(yè)性皮膚病防 治中,具有制備過程無有毒物質(zhì)摻入、耐熱性好、長期放置活性長的優(yōu)點。
      [0007] 為解決上述問題,本發(fā)明采用的技術方案如下:一種月桂酸修飾S0D的應用方法, 用于職業(yè)性皮膚病防治中,所述月桂酸修飾S0D的制備主要包括以下步驟:(1)活化月桂酸 修飾劑的合成:月桂酸和氯化亞砜在50?140°C下反應,待至少80%的月桂酸轉(zhuǎn)化后穩(wěn)定 回流,然后通過減壓蒸餾收集到124?127°C的餾分,即為活化月桂酸修飾劑;(2)月桂酸修 飾S0D的制備:將牛血S0D溶于緩沖液中,配制成S0D溶液,加入活化月桂酸修飾劑,在30? 50°C下攪拌反應后急冷終止反應,得到月桂酸修飾S0D產(chǎn)品。
      [0008] 上述技術方案中,優(yōu)選地,所述月桂酸在50?60°C水浴中溶化后加入氯化亞砜, 在65?135°C下反應,待90%月桂酸已轉(zhuǎn)化后,再穩(wěn)定回流0. 5?2. 5h。
      [0009] 上述技術方案中,優(yōu)選地,步驟(1)中通過減壓蒸餾,蒸去多余的未反應物,然后 繼續(xù)蒸餾,收集110?134°C餾分,通過蒸餾在110?134°C餾分,棄去140°C以上餾分,再重 蒸餾,進一步提取124?127°C的餾分,得到活化月桂酸。
      [0010] 上述技術方案中,優(yōu)選地,所述緩沖液為磷酸氫鉀或四硼酸鈉中的至少一種。 toon] 上述技術方案中,優(yōu)選地,所述步驟(1)中制備的活化月桂酸修飾劑待用時需放 置于冰箱中。
      [0012] 上述技術方案中,優(yōu)選地,所述步驟(2)中的S0D溶液中的S0D濃度為2?5mg/ ml,加入活化月桂酸修飾劑,在35?45°C下攪拌反應0. 5?1. 5小時后急冷終止反應。
      [0013] 上述技術方案中,優(yōu)選地,所述步驟(2)中的活化月桂酸修飾劑與S0D的重量比為 1 ?20 :1。
      [0014] 上述技術方案中,優(yōu)選地,所述步驟(2)中用冷水浴終止反應;步驟(1)的反應壓 力為常壓,步驟(2)的反應壓力以表壓計為常壓。
      [0015] 上述技術方案中,優(yōu)選地,所述月桂酸修飾S0D用于皮膚的護膚、防曬中。
      [0016] 本專利所述的月桂酸修飾S0D的制備過程沒有采用有毒的催化劑,制備的月桂酸 修飾S0D比活達到2950U/mg,修飾率為80% (采用三硝基苯磺酸TNBS法測定),月桂酸修 飾S0D溶液在20°C條件下,酶活性至少可保存2. 5年,用于職業(yè)性皮膚病防治中,具有較好 的技術效果。
      [0017] 下面通過實施例對本發(fā)明作進一步的闡述,但不僅限于本實施例。

      【具體實施方式】
      [0018] 【實施例1】
      [0019] (1)活化月桂酸修飾劑的合成
      [0020] 取月桂酸,在50°C水浴中溶化,加入氯化亞砜,月桂酸與氯化亞砜的重量比為5 : 1,反應壓力為常壓,滴加氯化亞砜速率控制在2. 5小時滴加25%的總量,反應溫度為65°C, 待90%月桂酸已轉(zhuǎn)化后,再穩(wěn)定回流1小時。然后減壓蒸餾,蒸去多余的未反應物質(zhì)。然后 繼續(xù)蒸餾,收集110?134°C餾分,餾出速度0. 7?0. 8滴/秒。共需40分鐘,留下140°C 以上的餾分,棄去。再重蒸餾110?134°C餾分兩次,收集124?127°C餾分,得到高純的活 化月桂酸修飾劑,置冰箱中保存待用。
      [0021] (2)月桂酸修飾S0D的制備
      [0022] 將牛血S0D溶于緩沖液中,配制成3. 17mg/ml S0D溶液,緩沖液為磷酸氫鉀,按 S0D :活化月桂酸修飾劑=1 :6. 1的重量比加入活化月桂酸,在39°C水浴中攪拌1小時,反 應壓力為常壓,用冷水浴終止反應。用TNBS法測定修飾率。
      [0023] 制備得到月桂酸修飾S0D比活為2950U/mg,修飾率為80%,月桂酸修飾S0D溶液 在20°C條件下,酶活性至少可保存2. 5年,并有很好的耐熱性。
      [0024] 月桂酸修飾S0D膏劑在青島染料廠分散藍車間使用。分散藍作業(yè)工人主要接觸蒽 醌及其衍生物,此類化學物質(zhì)對工人的主要危害表現(xiàn)在皮膚上。接觸的其它毒物為濃硫酸、 濃硝酸、燒堿、亞硫酸鈉、溴素、苯酚等。應用結(jié)果表明,使用月桂酸修飾S0D的112人中,未 發(fā)現(xiàn)一例全身或局部不良反應,接觸性皮炎有效率達71. 4%,色素沉著有效率為41. 7%, 對于預防和治療職業(yè)性因素引起的皮膚損害具有較好效果。
      [0025] 【實施例2】
      [0026] (1)活化月桂酸修飾劑的合成
      [0027] 取月桂酸,在60°C水浴中溶化,加入氯化亞砜,月桂酸與氯化亞砜的重量比為 7 :1,反應壓力為常壓,滴加氯化亞砜速率控制在2. 5小時滴加25%的總量,反應溫度為 135°C,待80%月桂酸已轉(zhuǎn)化后,再穩(wěn)定回流2. 5小時。然后減壓蒸餾,蒸去多余的未反應物 質(zhì)。然后繼續(xù)蒸餾,收集110?134°C餾分,餾出速度0.7?0.8滴/秒。共需35分鐘,留 下140°C以上的餾分,棄去。再重蒸餾110?134°C餾分兩次,收集124?127°C餾分,得到 高純的活化月桂酸修飾劑,置冰箱中保存待用。
      [0028] (2)月桂酸修飾S0D的制備
      [0029] 將牛血S0D溶于緩沖液中,配制成2. lmg/ml S0D溶液,緩沖液為四硼酸鈉,按S0D : 活化月桂酸修飾劑=1 :8. 4的重量比加入活化月桂酸,在35°C水浴中攪拌1. 5小時,反應 壓力為常壓,用冷水浴終止反應。用TNBS法測定修飾率。
      [0030] 制備得到月桂酸修飾S0D比活為2910U/mg,修飾率為81 %,月桂酸修飾S0D溶液 在20°C條件下,酶活性至少可保存2. 5年,并有很好的耐熱性。
      [0031] 將制備的月桂酸修飾S0D膏劑用于皮膚的護膚、防曬中。應用結(jié)果表明,使用月桂 酸修飾S0D的112人中,未發(fā)現(xiàn)一例全身或局部不良反應,月桂酸修飾S0D是超氧陰離子自 由基(〇 · 2_)的清除劑,月桂酸修飾S0D膏劑對于預防皮膚損害具有較好效果。
      【權利要求】
      1. 一種月桂酸修飾SOD的應用方法,用于職業(yè)性皮膚病防治中,所述月桂酸修飾SOD的 制備主要包括以下步驟:(1)活化月桂酸修飾劑的合成:月桂酸和氯化亞砜在50?140°C 下反應,待至少80%的月桂酸轉(zhuǎn)化后穩(wěn)定回流,然后通過減壓蒸餾收集到124?127°C的餾 分,即為活化月桂酸修飾劑;(2)月桂酸修飾SOD的制備:將牛血SOD溶于緩沖液中,配制成 SOD溶液,加入活化月桂酸修飾劑,在30?50°C下攪拌反應后急冷終止反應,得到月桂酸修 飾SOD產(chǎn)品。
      2. 根據(jù)權利要求1所述月桂酸修飾SOD的應用方法,其特征在于所述月桂酸在50? 60°C水浴中溶化后加入氯化亞砜,在65?135°C下反應,待90%月桂酸已轉(zhuǎn)化后,再穩(wěn)定回 流 0. 5 ?2. 5h。
      3. 根據(jù)權利要求1所述月桂酸修飾SOD的應用方法,其特征在于步驟(1)中通過減 壓蒸餾,蒸去多余的未反應物,然后繼續(xù)蒸餾,收集110?134°C餾分,通過蒸餾在110? 134°C餾分中進一步提取124?127°C的餾分,得到活化月桂酸。
      4. 根據(jù)權利要求1所述月桂酸修飾SOD的應用方法,其特征在于所述緩沖液為磷酸氫 鉀或四硼酸鈉中的至少一種。
      5. 根據(jù)權利要求1所述月桂酸修飾SOD的應用方法,其特征在于所述步驟(1)中制備 的活化月桂酸修飾劑待用時需放置于冰箱中。
      6. 根據(jù)權利要求1所述月桂酸修飾SOD的應用方法,其特征在于所述步驟(2)中的SOD 溶液中的SOD濃度為2?5mg/ml,加入活化月桂酸修飾劑,在35?45°C下攪拌反應0. 5? 1. 5小時后急冷終止反應。
      7. 根據(jù)權利要求1所述月桂酸修飾SOD的應用方法,其特征在于所述步驟(2)中的活 化月桂酸修飾劑與SOD的重量比為1?20 :1。
      8. 根據(jù)權利要求1所述月桂酸修飾SOD的應用方法,其特征在于所述步驟(2)中用冷 水浴終止反應;步驟(1)的反應壓力為常壓,步驟(2)的反應壓力為常壓。
      9. 根據(jù)權利要求2所述月桂酸修飾SOD的應用方法,其特征在于加入的月桂酸與氯化 亞砜的重量比為1?10 :1。
      10. 根據(jù)權利要求1所述月桂酸修飾SOD的應用方法,其特征在于所述月桂酸修飾SOD 用于皮膚的護膚、防曬中。
      【文檔編號】A61K38/44GK104152421SQ201410395092
      【公開日】2014年11月19日 申請日期:2014年8月12日 優(yōu)先權日:2014年5月30日
      【發(fā)明者】巫志鵬, 高艷霞, 葛春濤, 王建偉 申請人:中國石油化工股份有限公司, 中國石油化工股份有限公司青島安全工程研究院
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