一種羧甲基茯苓多糖的制備方法及其新用途
【專利摘要】本發(fā)明提供了一種羧甲基茯苓多糖的制備方法及其新用途。該方法在對茯苓多糖進行羧甲基化修飾的工藝中，通過改變反應(yīng)介質(zhì)的組成及比例，調(diào)節(jié)反應(yīng)溫度，同時采用催化劑技術(shù)，顯著提高了茯苓多糖羧甲基化效率，提高了原輔料的利用率，節(jié)約了成本。與此同時，利用本發(fā)明所提供的羧甲基茯苓多糖在制備畜禽免疫增強劑中的新用途可以顯著提升畜、禽在應(yīng)對病原微生物時的免疫力，提升疫苗免疫效力；利用本發(fā)明所提供的羧甲基茯苓多糖作為飼料添加劑的新用途可以有效提升畜禽產(chǎn)肉性能。
【專利說明】一種羧甲基茯苓多糖的制備方法及其新用途

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及天然藥物化學(xué)【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及一種羧甲基茯苓多糖的制備方法及 其新用途。

【背景技術(shù)】
[0002] 獲茶[Poria cocos (Schw. )Wolf]是一種食藥用真菌，是中藥"四君八珍"之一，具 有利水滲濕，健脾寧心之功效，現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究更進一步證明茯苓具有抗腫瘤、利水消腫、增 強免疫、鎮(zhèn)定安神和抑菌等多種作用。茯苓中含有多種化學(xué)成分，其中最主要的是茯苓多 糖，其含量可達獲茶干重的84%。獲茶多糖分子量分布較廣，大分子量的可達100萬道爾 頓，小分子量的在5000?9000道爾頓之間均有分布。茯苓多糖易溶于中、強堿溶液中，難 溶于水，其主體結(jié)構(gòu)為0-(1-3)結(jié)合的葡萄糖線性結(jié)構(gòu)，同時還具有0-(1-6)結(jié)合的葡萄 糖基支鏈的結(jié)構(gòu)?，F(xiàn)代科學(xué)研究表明，未經(jīng)化學(xué)改性的茯苓多糖沒有抗腫瘤活性及免疫增 強的功能，茯苓多糖在水溶液中的提取率不超過1 %，大部分被當(dāng)成藥渣棄去，造成嚴重的 浪費。
[0003] 化學(xué)改性已成為提高天然多糖生物活性的重要手段：引入合適的離子基團能 夠顯著改善水溶性，同時通過改變多糖在水溶液中的鏈構(gòu)象提高其活性；不同的取代基 團、取代位置和取代度對多糖衍生物的活性有重要影響，其活性的高低與引入的不同取 代離子基團、取代度、取代位、水溶性、分子量和鏈的構(gòu)象有關(guān)。茯苓多糖難溶于水，為了 改善其水溶性，提高生物活性，充分發(fā)揮其生理功效，可以采用硫酸酯化（Sulfation)、 羧甲基化（Carboxymethylation)、輕乙基化（Hydroxyeth-ylation)、輕丙基化 (Hydroxypropylation)及甲基化（Methylation)等半合成衍生化方法對獲茶多糖進行化 學(xué)改性來增大其溶解度、提高生物活性，取代程度越高，在水中的溶解度就越大，生物利用 度越高，生物活性則越強。
[0004]Gamuro等人（1971年）采用異丙醇與水為介質(zhì)，在液固相振蕩條件下合成制取 羧甲基茯苓多糖，因需大型振蕩設(shè)備，難以進行工業(yè)化生產(chǎn)，且需要大量的有機溶劑（如乙 醚，甲醇、異丙酮、醋酸和乙醇）對羧甲基茯苓多糖進行后處理及純化，不僅生產(chǎn)成本較高， 還造成環(huán)境污染。
[0005] 20世紀八九十年代以來，國內(nèi)研究者如石清東、陳春霞、張金漭等人均以乙醇與水 的混合液為介質(zhì)，采用液固相攪拌條件下取代制取羧甲基茯苓多糖。雖然在設(shè)備和反應(yīng)介 質(zhì)上有了很大的提升，但是反應(yīng)的持續(xù)時間過長，一般都需要四五十個小時，效率低下。
[0006] 同時，目前關(guān)于羧甲基茯苓多糖的應(yīng)用研究，僅涉及人藥的抗腫瘤應(yīng)用，對于其他 功效及應(yīng)用未見相關(guān)報道。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0007] 本發(fā)明旨在針對現(xiàn)有技術(shù)的技術(shù)缺陷，提供一種制備羧甲基茯苓多糖的方法，以 實現(xiàn)提高茯苓多糖羧甲基化效率、縮短反應(yīng)時間，所獲得產(chǎn)物的取代度更高、水溶性更好等 技術(shù)目的。
[0008] 同時本發(fā)明旨在挖掘羧甲基茯苓多糖其他功效特征，進而拓展其新用途。
[0009] 為實現(xiàn)以上技術(shù)目的，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案：
[0010] 一種制備羧甲基茯苓多糖的方法，其特征在于包括以下步驟：
[0011] 1)取茯苓菌核進行干燥、粉碎，得到茯苓微粉；
[0012] 2)取醇類溶劑和水混合，得到水醇混合液；
[0013] 3)向步驟2)得到的水醇混合液中加入步驟1)得到的茯苓微粉、第一NaOH，充分 攪拌，得到茯苓多糖提取液；
[0014] 4)取第二NaOH加入到氯乙酸中反應(yīng)，得到氯乙酸堿化液；
[0015] 5)將步驟4)得到的氯乙酸堿化液加入到步驟3)得到的茯苓多糖提取液中，再加 入催化劑，充分反應(yīng)，而后調(diào)溶液pH至中性，收集固相；
[0016] 上述催化劑選自聚乙二醇、鏈狀聚乙二醇二烷基醚、芐基三乙基氯化銨、四丁基溴 化銨的其中一種或幾種的組合。
[0017] 優(yōu)選的，步驟5)所述反應(yīng)是在攪拌條件下進行的。
[0018] 優(yōu)選的，步驟5)所述催化劑的用量是所述茯苓微粉用量的10?20% (w/w)。
[0019] 優(yōu)選的，步驟5)所述反應(yīng)的溫度為50?80°C，更優(yōu)的為65?75°C。
[0020] 優(yōu)選的，步驟5)所述反應(yīng)的時間為3?6h，更優(yōu)的為4?5h。
[0021] 優(yōu)選的，步驟3)具體為：先向步驟2)得到的水醇混合液中加入步驟1)得到的茯 苓微粉，攪拌均勻，而后再加入第一NaOH，充分攪拌，得到茯苓多糖提取液。
[0022] 優(yōu)選的，所述第一NaOH、第二NaOH二者總量與所述茯苓微粉用量的比值為（0.3? 0. 5) : 1 (w/w)。進一步優(yōu)選的：所述第一NaOH與茯苓微粉用量的比值為（0. 12?0. 2) : 1 ; 所述第二NaOH與茯苓微粉用量的比值為（0. 18?0. 3) : 1。
[0023] 優(yōu)選的，所述茯苓微粉與所述氯乙酸的用量比值為3. 8?4. 762 (w/w)。
[0024] 優(yōu)選的，所述茯苓微粉、第一NaOH、第二NaOH、氯乙酸總量與所述水醇混合液用量 的比值為1:(4?8) (w/w)。
[0025] 優(yōu)選的，所述水醇混合液中水與醇類溶劑的用量比值為1:(4?19) (v/v)。
[0026] 優(yōu)選的，所述醇類溶劑選自異丙醇、乙醇、乙二醇、丙醇、丙三醇、苯甲醇的任一種 或幾種的組合。
[0027] 優(yōu)選的，步驟3)所述的充分攪拌是攪拌1?5h，更優(yōu)的為2?3h。
[0028] 優(yōu)選的，步驟4)所述反應(yīng)的時間為1?5h，更優(yōu)的為2?3h。
[0029] 優(yōu)選的，還包括步驟6)，所述步驟6)為：對步驟5)得到的固相用無水乙醇充分洗 漆，收集固相，干燥。
[0030] 同時本發(fā)明提供了羧甲基茯苓多糖在制備畜禽免疫增強劑中的應(yīng)用；所述免疫增 強劑包括以口服或注射等方式施加的用于改善畜禽免疫力的物質(zhì)，也包括以疫苗佐劑形式 存在的用于提升疫苗注射后機體免疫效果的物質(zhì)。
[0031] 同時本發(fā)明提供了羧甲基茯苓多糖作為畜禽飼料添加劑的應(yīng)用。
[0032] 同時本發(fā)明提供了羧甲基茯苓多糖在制備疫苗免疫增強劑中的應(yīng)用，在此基礎(chǔ)上 可以進行如下優(yōu)選：所述疫苗為豬偽狂犬病疫苗；所述疫苗為馬立克氏病疫苗。
[0033] 本發(fā)明對茯苓多糖進行了羧甲基化修飾，通過改變反應(yīng)介質(zhì)的組成及比例，調(diào)節(jié) 反應(yīng)溫度，同時采用催化劑技術(shù)，顯著提高了茯苓多糖羧甲基化效率，提高了原輔料的利用 率，節(jié)約了成本。本發(fā)明選用中藥茯苓為原料制備羧甲基茯苓多糖，茯苓藥材資源豐富，在 南方各省均有分布，故價格低廉。本方法易于操作、工業(yè)上易于放大，利用本方法制備的羧 甲基茯苓多糖取代度高，水溶性好，反應(yīng)時間短，消耗水和有機溶劑少，反應(yīng)工藝較簡單，安 全系數(shù)高。
[0034] 本發(fā)明在研究中發(fā)現(xiàn)參加反應(yīng)的堿液應(yīng)當(dāng)是非K0H的強堿，因為若選用K0H則在 后續(xù)純化過程中會出現(xiàn)因難以去除殘留K0H而無法保證產(chǎn)品質(zhì)量的問題，進而選用NaOH用 于反應(yīng)。對催化劑的選擇充分考慮了多種方案，最終選定了上述四種催化劑用于反應(yīng)，上述 催化劑的作用包括增溶、助溶或相轉(zhuǎn)移催化等。在優(yōu)選技術(shù)方案中：具體限定催化劑的加入 量或反應(yīng)條件是綜合考量實驗效果而得到的較佳條件。具體限定兩次NaOH各自加入量是 在大量實驗基礎(chǔ)上確定的，通過上述優(yōu)選的加入量可以對產(chǎn)率起到進一步的提升效果。
[0035] 與此同時，利用本發(fā)明所提供的羧甲基茯苓多糖在制備畜禽免疫增強劑中的新用 途可以顯著提升禽、畜在應(yīng)對病原微生物時的免疫力，提升疫苗免疫效力；利用本發(fā)明所提 供的羧甲基茯苓多糖作為飼料添加劑的新用途可以有效提升畜禽產(chǎn)肉性能。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0036] 圖1是本發(fā)明實施例15飼喂含CMP的飼料對肉仔雞整體增重效率的影響圖；
[0037] 圖2是本發(fā)明實施例15飼喂含CMP的飼料對肉仔雞日增重效率的影響圖；
[0038] 圖3是本發(fā)明實施例15飼喂含CMP的飼料對肉仔雞日采食量的影響圖；
[0039] 圖4是本發(fā)明實施例15飼喂含CMP的飼料對肉仔雞料肉比的影響圖。

【具體實施方式】
[0040] 以下將對本發(fā)明的【具體實施方式】進行詳細描述。為了避免過多不必要的細節(jié)，在 以下實施例中對屬于公知的結(jié)構(gòu)或功能將不進行詳細描述。
[0041] 以下實施例中所使用的近似性語言可用于定量表述，表明在不改變基本功能的情 況下可允許數(shù)量有一定的變動。因此，用"大約"、"左右"等語言所修正的數(shù)值不限于該準 確數(shù)值本身。在一些實施例中，"大約"表示允許其修正的數(shù)值在正負百分之十（10%)的 范圍內(nèi)變化，比如，"大約100"表示的可以是90到110之間的任何數(shù)值。此外，在"大約第 一數(shù)值到第二數(shù)值"的表述中，大約同時修正第一和第二數(shù)值兩個數(shù)值。在某些情況下，近 似性語言可能與測量儀器的精度有關(guān)。
[0042]除有定義外，以下實施例中所用的技術(shù)和科學(xué)術(shù)語具有與本發(fā)明所屬領(lǐng)域技術(shù)人 員普遍理解的相同含義。以下實施例中所用的術(shù)語"第一"、"第二"等并不表示任何順序、 數(shù)量或重要性，而僅用于區(qū)別一種成分和另一種成分。
[0043]實施例1(羧甲基茯苓多糖的制備方法）
[0044]一種制備羧甲基茯苓多糖的方法，具體包括以下步驟：
[0045]取1000g茯苓菌核進行干燥、粉碎，得茯苓微粉；向6L，80%的苯甲醇溶液中加入 茯苓微粉，攪拌均勻，加入150g氫氧化鈉，攪拌lh，得茯苓多糖提取液；將150g氫氧化鈉加 入到氯乙酸中反應(yīng)lh，得氯乙酸堿化液；將氯乙酸堿化液加入到茯苓多糖提取液中，向反 應(yīng)液中加入l〇〇g聚乙二醇，在50°C下充分攪拌3h進行取代反應(yīng)，反應(yīng)結(jié)束后，調(diào)溶液至中 性，過濾收集沉淀，并用無水乙醇充分洗滌三次，過濾干燥，即得羧甲基茯苓多糖。
[0046] 實施例2 (羧甲基茯苓多糖的制備方法）
[0047] -種制備羧甲基茯苓多糖的方法，具體包括以下步驟：
[0048] 取1000g茯苓菌核進行干燥、粉碎，得茯苓微粉；向13. 7L，95%的丙三醇溶液中加 入茯苓微粉，攪拌均勻，加入250g氫氧化鈉，攪拌5h，得茯苓多糖提取液；將250g氫氧化鈉 加入到氯乙酸中反應(yīng)5h，得氯乙酸堿化液；將氯乙酸堿化液加入到茯苓多糖提取液中，向 反應(yīng)液中加入200g芐基三乙基氯化銨，在80°C下充分攪拌6h進行取代反應(yīng)，反應(yīng)結(jié)束后， 調(diào)溶液至中性，過濾收集沉淀，并用無水乙醇充分洗滌三次，過濾干燥，即得羧甲基茯苓多 糖。
[0049] 實施例3 (羧甲基茯苓多糖的制備方法）
[0050] -種制備羧甲基茯苓多糖的方法，具體包括以下步驟：
[0051] 取l〇〇〇g茯苓菌核進行干燥、粉碎，得茯苓微粉；向10L，85%的丙醇溶液中加入茯 苓微粉，攪拌均勻，加入200g氫氧化鈉，攪拌3h，得茯苓多糖提取液；將200g氫氧化鈉加入 到氯乙酸中反應(yīng)3h，得氯乙酸堿化液；將氯乙酸堿化液加入到茯苓多糖提取液中，向反應(yīng) 液中加入150g鏈狀聚乙二醇二烷基醚，在65°C下充分攪拌4. 5h進行取代反應(yīng)，反應(yīng)結(jié)束 后，調(diào)溶液至中性，過濾收集沉淀，并用無水乙醇充分洗滌三次，過濾干燥，即得羧甲基茯苓 多糖。
[0052] 實施例4(羧甲基茯苓多糖的制備方法）
[0053] -種制備羧甲基茯苓多糖的方法，具體包括以下步驟：
[0054] 取1000g茯苓菌核進行干燥、粉碎，得茯苓微粉；向8L，90 %的乙二醇溶液中加入 茯苓微粉，攪拌均勻，加入200g氫氧化鈉，攪拌2h，得茯苓多糖提取液；將200g氫氧化鈉加 入到氯乙酸中反應(yīng)2h，得氯乙酸堿化液；將氯乙酸堿化液加入到茯苓多糖提取液中，向反 應(yīng)液中加入120g聚乙二醇，在75°C下充分攪拌4h進行取代反應(yīng)，反應(yīng)結(jié)束后，調(diào)溶液至中 性，過濾收集沉淀，并用無水乙醇充分洗滌三次，過濾干燥，即得羧甲基茯苓多糖。
[0055] 實施例5 (羧甲基茯苓多糖的制備方法）
[0056] -種制備羧甲基茯苓多糖的方法，具體包括以下步驟：
[0057] 1)取茯苓菌核進行干燥、粉碎，得到茯苓微粉；
[0058]2)取醇類溶劑與水以ll:l(v/v)混合，得到水醇混合液；
[0059] 3)向步驟2)得到的水醇混合液中加入步驟1)得到的茯苓微粉、第一NaOH，攪拌 3h，得到茯苓多糖提取液；
[0060] 4)取第二NaOH加入到氯乙酸中反應(yīng)3h，得到氯乙酸堿化液，所述氯乙酸的用量滿 足以下條件：茯苓微粉與氯乙酸的用量比值為4(w/w);
[0061] 5)將步驟4)得到的氯乙酸堿化液加入到步驟3)得到的茯苓多糖提取液中，再加 入催化劑，充分反應(yīng)，而后調(diào)溶液pH至7. 5,收集固相；
[0062] 上述第一NaOH、第二NaOH二者總量與所述茯苓微粉用量的比值為0.4:1 (w/w);
[0063] 上述茯苓微粉、第一NaOH、第二NaOH、氯乙酸總量與所述水醇混合液用量的比值 為 1:6(w/w);
[0064] 上述催化劑為四丁基溴化銨。
[0065] 實施例6(羧甲基茯苓多糖的制備方法）
[0066] 一種制備羧甲基茯苓多糖的方法，具體包括以下步驟：
[0067] 1)取茯苓菌核進行干燥、粉碎，得到茯苓微粉；
[0068] 2)取醇類溶劑與水以ll:l(v/v)混合，得到水醇混合液；
[0069] 3)向步驟2)得到的水醇混合液中加入步驟1)得到的茯苓微粉、第一NaOH，攪拌 3h，得到茯苓多糖提取液；
[0070] 4)取第二NaOH加入到氯乙酸中反應(yīng)3h，得到氯乙酸堿化液，所述氯乙酸的用量滿 足以下條件：茯苓微粉與氯乙酸的用量比值為4(w/w);
[0071] 5)將步驟4)得到的氯乙酸堿化液加入到步驟3)得到的茯苓多糖提取液中，再加 入催化劑，充分反應(yīng)，而后調(diào)溶液pH至7. 5,收集固相；
[0072] 上述第一NaOH、第二NaOH二者總量與所述茯苓微粉用量的比值為0.4:1 (w/w);
[0073] 上述茯苓微粉、第一NaOH、第二NaOH、氯乙酸總量與所述水醇混合液用量的比值 為 1:6(w/w);
[0074] 上述催化劑為四丁基溴化銨和聚乙二醇的組合。
[0075] 在此基礎(chǔ)上，步驟5)所述催化劑的用量是所述茯苓微粉用量的15% (w/w)。
[0076] 步驟5)所述反應(yīng)的溫度為65°C。
[0077] 步驟5)所述反應(yīng)的時間為4. 5h。
[0078] 步驟3)第一NaOH與所述茯苓微粉用量的比值為0.16:1 (w/w)。
[0079] 步驟4)第二NaOH與所述茯苓微粉用量的比值為0.24:1 (w/w)。
[0080] 步驟3)具體為：先向步驟2)得到的水醇混合液中加入步驟1)得到的茯苓微粉， 攪拌均勻，而后再加入第一NaOH，充分攪拌，得到茯苓多糖提取液。
[0081] 所述醇類溶劑選自異丙醇、乙二醇的組合。
[0082] 還包括步驟6)，所述步驟6)為：對步驟5)得到的固相用無水乙醇充分洗滌，收集 固相，干燥。
[0083] 實施例7(羧甲基茯苓多糖的制備方法）
[0084] 一種制備羧甲基茯苓多糖的方法，具體包括以下步驟：
[0085]1)取茯苓菌核進行干燥、粉碎，得到茯苓微粉；
[0086] 2)取醇類溶劑與水以4:1 (v/v)混合，得到水醇混合液；
[0087] 3)向步驟2)得到的水醇混合液中加入步驟1)得到的茯苓微粉、第一NaOH，攪拌 lh，得到茯苓多糖提取液；
[0088] 4)取第二NaOH加入到氯乙酸中反應(yīng)lh，得到氯乙酸堿化液，所述氯乙酸的用量滿 足以下條件：茯苓微粉與氯乙酸的用量比值為3. 8 (w/w);
[0089] 5)將步驟4)得到的氯乙酸堿化液加入到步驟3)得到的茯苓多糖提取液中，再加 入催化劑，充分反應(yīng)，而后調(diào)溶液pH至7,收集固相；
[0090] 上述第一NaOH、第二NaOH二者總量與所述茯苓微粉用量的比值為0.3:1 (w/w);
[0091] 上述茯苓微粉、第一NaOH、第二NaOH、氯乙酸總量與所述水醇混合液用量的比值 為 1:4(w/w);
[0092] 上述催化劑為鏈狀聚乙二醇二烷基醚。
[0093] 步驟5)所述催化劑的用量是所述茯苓微粉用量的10% (w/w)。
[0094] 步驟5)所述反應(yīng)的溫度為50°C。
[0095]步驟5)所述反應(yīng)的時間為3h。
[0096] 步驟3)第一NaOH與所述茯苓微粉用量的比值為0. 12:1 (w/w)。
[0097] 步驟4)第二NaOH與所述茯苓微粉用量的比值為0.18:1 (w/w)。
[0098] 步驟3)具體為：先向步驟2)得到的水醇混合液中加入步驟1)得到的茯苓微粉， 攪拌均勻，而后再加入第一NaOH，充分攪拌，得到茯苓多糖提取液。
[0099] 所述醇類溶劑選自苯甲醇。
[0100] 實施例8(羧甲基茯苓多糖的制備方法）
[0101] -種制備羧甲基茯苓多糖的方法，具體包括以下步驟：
[0102] 1)取茯苓菌核進行干燥、粉碎，得到茯苓微粉；
[0103] 2)取醇類溶劑與水以19:1 (v/v)混合，得到水醇混合液；
[0104] 3)向步驟2)得到的水醇混合液中加入步驟1)得到的茯苓微粉、第一NaOH，攪拌 5h，得到茯苓多糖提取液；
[0105] 4)取第二NaOH加入到氯乙酸中反應(yīng)5h，得到氯乙酸堿化液，所述氯乙酸的用量滿 足以下條件：茯苓微粉與氯乙酸的用量比值為4. 762 (w/w);
[0106] 5)將步驟4)得到的氯乙酸堿化液加入到步驟3)得到的茯苓多糖提取液中，再加 入催化劑，充分反應(yīng)，而后調(diào)溶液pH至6. 5,收集固相；
[0107] 上述第一NaOH、第二NaOH二者總量與所述茯苓微粉用量的比值為0.5:1 (w/w);
[0108] 上述茯苓微粉、第一NaOH、第二NaOH、氯乙酸總量與所述水醇混合液用量的比值 為 1:8(w/w);
[0109] 上述催化劑選自四丁基溴化銨和芐基三乙基氯化銨的組合。
[0110] 步驟5)所述催化劑的用量是所述茯苓微粉用量的20% (w/w)。
[0111] 步驟5)所述反應(yīng)的溫度為80°C。
[0112] 步驟5)所述反應(yīng)的時間為6h。
[0113] 步驟3)第一NaOH與所述茯苓微粉用量的比值為0? 2:1 (w/w)。
[0114] 步驟4)第二NaOH與所述茯苓微粉用量的比值為0? 3:1 (w/w)。
[0115] 所述醇類溶劑選自異丙醇、乙醇、乙二醇、丙醇、丙三醇、苯甲醇的組合。
[0116] 以上實施例1?8方法制備的羧甲基茯苓多糖產(chǎn)率及含量如表1所示：
[0117] 表1實施例1?8方法制備的羧甲基茯苓多糖產(chǎn)率及含量
[0118]
[0119]

【權(quán)利要求】
1. 一種制備羧甲基茯苓多糖的方法，其特征在于包括以下步驟： 1) 取茯苓菌核進行干燥、粉碎，得到茯苓微粉； 2) 取醇類溶劑與水以（4?19) :l(v/v)混合，得到水醇混合液； 3) 向步驟2)得到的水醇混合液中加入步驟1)得到的茯苓微粉、第一 NaOH，攪拌1? 5h，得到茯苓多糖提取液； 4) 取第二NaOH加入到氯乙酸中反應(yīng)1?5h，得到氯乙酸堿化液，所述氯乙酸的用量滿 足以下條件：茯苓微粉與氯乙酸的用量比值為3. 8?4. 762 (w/w); 5) 將步驟4)得到的氯乙酸堿化液加入到步驟3)得到的茯苓多糖提取液中，再加入催 化劑，充分反應(yīng)，而后調(diào)溶液pH至中性，收集固相； 上述第一 NaOH、第二NaOH二者總量與所述茯苓微粉用量的比值為（0. 3?0. 5) : 1 (w/ w)； 上述茯苓微粉、第一 NaOH、第二NaOH、氯乙酸總量與所述水醇混合液用量的比值為 1: (4 ?8) (w/w); 上述催化劑選自聚乙二醇、鏈狀聚乙二醇二烷基醚、芐基三乙基氯化銨、四丁基溴化銨 的其中一種或幾種的組合。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種制備羧甲基茯苓多糖的方法，其特征在于步驟5)所述催 化劑的用量是所述茯苓微粉用量的10?20% (w/w)。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種制備羧甲基茯苓多糖的方法，其特征在于步驟5)所述反 應(yīng)的條件為：在50?80°C下反應(yīng)3?6h。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種制備羧甲基茯苓多糖的方法，其特征在于所述第一NaOH 與茯苓微粉用量的比值為（〇. 12?0. 2) : 1。
5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種制備羧甲基茯苓多糖的方法，其特征在于所述第二NaOH 與茯苓微粉用量的比值為（〇. 18?0. 3) : 1。
6. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種制備羧甲基茯苓多糖的方法，其特征在于步驟3)具體 為：先向步驟2)得到的水醇混合液中加入步驟1)得到的茯苓微粉，攪拌均勻，而后再加入 第一 NaOH，充分攪拌，得到茯苓多糖提取液。
7. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種制備羧甲基茯苓多糖的方法，其特征在于所述醇類溶劑 選自異丙醇、乙醇、乙二醇、丙醇、丙三醇、苯甲醇的任一種或幾種的組合。
8. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種制備羧甲基茯苓多糖的方法，其特征在于還包括步驟 6)，所述步驟6)為：對步驟5)得到的固相用無水乙醇充分洗滌，收集固相，干燥。
9. 羧甲基茯苓多糖在制備畜禽免疫增強劑中的應(yīng)用。
10. 羧甲基茯苓多糖作為畜禽飼料添加劑的應(yīng)用。
11. 羧甲基茯苓多糖在制備疫苗免疫增強劑中的應(yīng)用。
12. 根據(jù)權(quán)利要求11所述的應(yīng)用，其特征在于所述疫苗為豬偽狂犬病疫苗。
13. 根據(jù)權(quán)利要求11所述的應(yīng)用，其特征在于所述疫苗為馬立克氏病疫苗。
【文檔編號】A61K39/245GK104387482SQ201410603964
【公開日】2015年3月4日 申請日期:2014年10月30日 優(yōu)先權(quán)日:2014年10月30日
【發(fā)明者】彭江寧, 趙越超, 夏雪林, 劉拓, 劉愛玲, 李旭東 申請人:瑞普（天津）生物藥業(yè)有限公司