6-巰基嘌呤在制備抑制腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移和擴(kuò)散的藥物中的應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開6-巰基嘌呤在制備抑制腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移和擴(kuò)散的藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明利用6-巰基嘌呤制備的藥物對(duì)腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移能力進(jìn)行抑制，6-巰基嘌呤為低毒藥物，可在腫瘤擴(kuò)散過(guò)程中起到較大的阻斷作用，與此同時(shí)再采用其他相關(guān)腫瘤藥物進(jìn)行治療，可以大量減少正常細(xì)胞的死亡量；而現(xiàn)有的腫瘤藥物多為細(xì)胞毒藥物，在殺死腫瘤細(xì)胞的同時(shí)大量正常細(xì)胞也一起死亡。
【專利說(shuō)明】6-巰基嘌昤在制備抑制腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移和擴(kuò)散的藥物中的 應(yīng)用

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及6-巰基嘌呤在制藥領(lǐng)域新的用途，具體涉及6-巰基嘌呤在制備抑制 腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移和擴(kuò)散的藥物中的應(yīng)用。

【背景技術(shù)】
[0002] 6-巰基嘌呤是一種抗腫瘤藥，用于急性白血病效果較好，對(duì)慢性粒細(xì)胞白血病也 有效；用于絨毛膜上皮癌和惡性葡萄胎。另外對(duì)惡性淋巴瘤、多發(fā)性骨髓瘤也有一定療效。
[0003] 6-MP的化學(xué)結(jié)構(gòu)與次黃嘌呤相似，唯一不同的是分子中6位C上由巰基取代了羥 基。6-MP通過(guò)競(jìng)爭(zhēng)性抑制次黃嘌呤-鳥嘌呤磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶，使PRPP分子中的磷酸核糖不 能向鳥嘌呤及次黃嘌呤轉(zhuǎn)移，阻斷嘌呤核苷酸的補(bǔ)救合成途徑。6-MP可在體內(nèi)經(jīng)磷酸核糖 化而生成6-MP核苷酸，并以這種形式抑制MP轉(zhuǎn)變?yōu)锳MP及GMP的反應(yīng)。由于6-MP核苷 酸結(jié)構(gòu)與頂P相似，還可以反饋抑制PRPP酰胺轉(zhuǎn)移酶而干擾磷酸核糖胺的形成，從而阻斷 嘌呤核苷酸的從頭合成。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 發(fā)明目的：本發(fā)明目的在于提供一種6-巰基嘌呤在制備抑制腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移和擴(kuò) 散的藥物中的應(yīng)用。
[0005] 技術(shù)方案：6_巰基嘌呤在制備抑制腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移和擴(kuò)散的藥物中的應(yīng)用。
[0006] 優(yōu)選地，所述腫瘤細(xì)胞為結(jié)腸癌細(xì)胞。
[0007] 優(yōu)選地，其中6-巰基嘌呤的濃度為5?10uM。
[0008] 發(fā)明人通過(guò)細(xì)胞層面的實(shí)驗(yàn)研宄發(fā)現(xiàn)，6-巰基嘌呤對(duì)腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移能力有一定 的抑制作用。目前針對(duì)現(xiàn)有的適應(yīng)癥一般給藥途徑為口服，白血?。嚎诜好咳彰壳Э梭w重 1. 5?3mg，分2?3次服，絨毛膜上皮癌：口服：每日每千克體重6mg。
[0009] 本發(fā)明需要在現(xiàn)有的細(xì)胞層面實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)上根據(jù)新的適應(yīng)癥療效以及后續(xù)相關(guān)實(shí) 驗(yàn)設(shè)計(jì)確定新的臨床給藥方法及劑量。
[0010] 本發(fā)明通過(guò)將腫瘤細(xì)胞采集培養(yǎng)后，再利用藥物刺激細(xì)胞，觀察細(xì)胞形態(tài)、并定量 分析細(xì)胞層的面積，即細(xì)胞能夠與其他細(xì)胞接觸的面積，從而判斷腫瘤細(xì)胞的擴(kuò)散能力。細(xì) 胞層面積越大越有利于與其他細(xì)胞形成連接。細(xì)胞迀移需要內(nèi)外因素的配合。外部的因素 指的是細(xì)胞外的信號(hào)分子。內(nèi)部因素則指細(xì)胞的信號(hào)傳導(dǎo)系統(tǒng)和執(zhí)行運(yùn)動(dòng)的細(xì)胞骨架和分 子馬達(dá)，還有參與粘著斑形成的各種分子。細(xì)胞外信號(hào)結(jié)合胞膜受體完成其使命后，需要 細(xì)胞內(nèi)信號(hào)分子接力，將運(yùn)動(dòng)信息進(jìn)一步傳給細(xì)胞迀移的執(zhí)行單位一一細(xì)胞骨架和分子馬 達(dá)。種類繁多的細(xì)胞內(nèi)信號(hào)分子會(huì)相互作用，影響后述這兩種分子的分布，結(jié)構(gòu)和活性，達(dá) 到精細(xì)調(diào)整細(xì)胞運(yùn)動(dòng)的目的。由此可見，腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移，與細(xì)胞本身以及細(xì)胞之間的關(guān)系 緊密。
[0011] 癌細(xì)胞與其同源正常組織相比，細(xì)胞間的粘著性降低，故癌細(xì)胞在體內(nèi)容易分散 和轉(zhuǎn)移。在正常細(xì)胞外被中的纖粘連蛋白是一種細(xì)胞外粘著糖蛋白，它增強(qiáng)了細(xì)胞與細(xì)胞 外基質(zhì)間的粘著。癌細(xì)胞的纖粘連蛋白顯著減少或缺失，鈣粘蛋白合成發(fā)生障礙，從而破 壞了細(xì)胞與基質(zhì)之間和細(xì)胞與細(xì)胞之間的粘著，因此癌細(xì)胞具有易于侵潤(rùn)組織和轉(zhuǎn)移的屬 性。癌細(xì)胞的面積的增大增強(qiáng)了各個(gè)細(xì)胞之間的接觸面積更利于相互之間的粘連和附著。
[0012] 雖然腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移是由多種因素共同形成導(dǎo)致的，但是以細(xì)胞層的面積，即細(xì) 胞能夠與其他細(xì)胞接觸的面積作為細(xì)胞轉(zhuǎn)移能力大小的依據(jù)，以此作為細(xì)胞間連接強(qiáng)度的 測(cè)定的方法，具有成本低廉、操作簡(jiǎn)便、結(jié)果易判的優(yōu)點(diǎn)，其表現(xiàn)出來(lái)的細(xì)胞面積增大是最 容易直接觀察辨別的，主要就是通過(guò)加藥刺激后對(duì)細(xì)胞間連接分子Ε-cadherin蛋白質(zhì)進(jìn) 行免疫染色，繼而進(jìn)行定量測(cè)定。細(xì)胞層面積越大越有利于與其他細(xì)胞形成連接。
[0013] 本發(fā)明以為6-巰基嘌呤為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，評(píng)估考量其在抑制腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移的能力評(píng) 價(jià)。具體以藥物刺激前后細(xì)胞面積的變化為主要依據(jù)。
[0014] 有益效果：1、本發(fā)明利用6-巰基嘌呤制備的藥物對(duì)腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移能力進(jìn)行抑 制，6-巰基嘌呤為低毒藥物，可在腫瘤擴(kuò)散過(guò)程中起到較大的阻斷作用，與此同時(shí)再采用其 他相關(guān)腫瘤藥物進(jìn)行治療，可以大量減少正常細(xì)胞的死亡量；而現(xiàn)有的腫瘤藥物多為細(xì)胞 毒藥物，在殺死腫瘤細(xì)胞的同時(shí)大量正常細(xì)胞也一起死亡；2、本發(fā)明所使用的6-巰基嘌呤 為成藥庫(kù)的現(xiàn)有藥物化合物，研發(fā)周期與新藥研發(fā)的周期相比可明顯減少。

【專利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0015] 圖1為0. 5uM濃度6-巰基嘌呤處理后的結(jié)腸癌細(xì)胞圖；
[0016] 圖2為IuM濃度6-巰基嘌呤處理后的結(jié)腸癌細(xì)胞圖；
[0017] 圖3為5uM濃度6-巰基嘌呤處理后的結(jié)腸癌細(xì)胞圖；
[0018] 圖4為IOuM濃度6-巰基嘌呤處理后的結(jié)腸癌細(xì)胞圖；
[0019] 圖5為50uM濃度6-巰基嘌呤處理后的結(jié)腸癌細(xì)胞圖；
[0020] 圖6為陽(yáng)性對(duì)照組，由IOuM濃度nocodazole處理后的結(jié)腸癌細(xì)胞圖；
[0021] 圖7為陰性對(duì)照組。

【具體實(shí)施方式】
[0022] 下面通過(guò)附圖對(duì)本發(fā)明技術(shù)方案進(jìn)行詳細(xì)說(shuō)明，但是本發(fā)明的保護(hù)范圍不局限于 所述實(shí)施例。
[0023] 實(shí)施例1 :6_巰基嘌呤在制備抑制結(jié)腸癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移和擴(kuò)散的藥物中的應(yīng)用。具體 實(shí)驗(yàn)方案如下：
[0024] 1、實(shí)驗(yàn)材料
[0025] 本發(fā)明實(shí)驗(yàn)階段采用的是結(jié)腸癌細(xì)胞（HT29)，陽(yáng)性對(duì)照采用的藥物是 nocodazole (實(shí)驗(yàn)濃度為IOuM)。陰性對(duì)照組沒(méi)有經(jīng)過(guò)任何處理。
[0026] 其中實(shí)驗(yàn)采用6-巰基嘌呤化合物C5H4N4S, CAS NO.為 6112-76-1，50-44-2 [anhydrous]，濃度分別為 50uM，10uM，5uM，luM，0. 5uM。
[0027] 2、實(shí)驗(yàn)方法
[0028] 對(duì)培養(yǎng)24小時(shí)的結(jié)腸癌細(xì)胞（細(xì)胞密度：105)進(jìn)行藥物刺激2小時(shí)處理：
[0029] (1)將培養(yǎng)皿中狀態(tài)較好的結(jié)腸癌細(xì)胞離心，加入適量培養(yǎng)液制成細(xì)胞懸浮液；
[0030] (2)取細(xì)胞懸液計(jì)數(shù)，按照IO5的密度加入24孔盤中，放入37°C的CO 2培養(yǎng)箱中培 養(yǎng)；
[0031] (3) 24小時(shí)后，換液，培養(yǎng)液中加入相應(yīng)量的6-巰基嘌呤化合物配置到實(shí)驗(yàn)所需 濃度，以及陽(yáng)性對(duì)照藥物，然后繼續(xù)培養(yǎng)2小時(shí)；
[0032] (4)培養(yǎng)2小時(shí)后將細(xì)胞于2%的PFA溶液下37°C固定10分鐘，再進(jìn)行熒光染色。
[0033] 3、實(shí)驗(yàn)結(jié)果處理
[0034] 對(duì)熒光染色后的結(jié)腸癌細(xì)胞觀察，將觀察的圖片用Image J處理并計(jì)算其細(xì)胞面 積在加藥前后的數(shù)據(jù)，Ratio是實(shí)驗(yàn)組與陰性對(duì)照組的比值。結(jié)果見表1。
[0035] 表1 6-巰基嘌呤對(duì)HT29細(xì)胞刺激2小時(shí)后的面積大小
[0036]

【權(quán)利要求】
1. 6-巰基嘌呤在制備抑制腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移和擴(kuò)散的藥物中的應(yīng)用。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其中腫瘤細(xì)胞為結(jié)腸癌細(xì)胞。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其中6-巰基嘌呤的濃度為5~10uM。
【文檔編號(hào)】A61K31/52GK104490890SQ201410660486
【公開日】2015年4月8日 申請(qǐng)日期:2014年11月18日 優(yōu)先權(quán)日:2014年11月18日
【發(fā)明者】高煒煒, 湯繼玉 申請(qǐng)人:高煒煒