本發(fā)明涉及中藥技術(shù)領(lǐng)域，具體地說(shuō)，是一種益氣活血、利濕化濁的中藥復(fù)方制劑，此外，本發(fā)明還涉及該中藥復(fù)方制劑的醫(yī)藥用途。
背景技術(shù)：
糖尿病是一種慢性代謝紊亂性疾病.可造成機(jī)體多種器官的慢性損傷、功能障礙和衰竭等。2010年中國(guó)14個(gè)省市近5萬(wàn)人的流行病學(xué)資料顯示，全人群糖尿病患病率為9.7％，城市的發(fā)病率高于農(nóng)村，其中2型糖尿病約占95.0％。糖尿病并發(fā)癥主要有微血管并發(fā)癥和大血管并發(fā)癥兩大類，糖尿病腎病(DN)是糖尿病最常見(jiàn)、最嚴(yán)重的慢性微血管并發(fā)癥之一，也是糖尿病患者致殘、致死的重要原因。在美國(guó)，DN占慢性腎衰竭病因的第一位，其中45％的DN患者需接受腎臟替代治療。雖然我國(guó)導(dǎo)致慢性腎衰竭的主要病因是原發(fā)性腎小球腎炎，但隨著糖尿病發(fā)病率的不斷升高，糖尿病腎病將成為終末期腎病的重要原因，因此延緩或阻止DN的發(fā)展，對(duì)改善病人的生活質(zhì)量、減輕患者的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)至關(guān)重要。
目前，早期癥狀并不明顯，腎臟僅發(fā)生代償性增大，無(wú)病理組織學(xué)改變，腎小球?yàn)V過(guò)率增加，出現(xiàn)微量或少量的蛋白尿，因此不易被發(fā)現(xiàn)。一旦患者出現(xiàn)典型的臨床癥狀時(shí)，患者腎臟病變已不能逆轉(zhuǎn)，治療只能改善癥狀和減少患者的病痛，不能阻斷病程的發(fā)展。西醫(yī)針對(duì)DN的治療以控制血糖、血壓等對(duì)癥支持治療為主，缺乏特異性治療手段，這亦成為西醫(yī)治療糖尿病腎病的瓶頸。
糖尿病腎病屬中醫(yī)“消渴”、“水腫”、“關(guān)格”等范疇，其起病特點(diǎn)為起病隱匿、發(fā)展緩慢。中醫(yī)學(xué)認(rèn)為，脾腎兩虛夾血瘀，夾雜濕濁內(nèi)生、氣陰兩虛貫穿DN始終，陰虛為本，燥熱為標(biāo)。初期以燥熱為主，病程日久，陰傷氣耗，氣陰兩虛。消渴日久，腎元虧虛，氣陰兩傷。因此，臨床治療應(yīng)以益氣活血、利濕化濁以培本為主要治法。
中國(guó)專利公開(kāi)號(hào)CN104147316A公開(kāi)了一種治療糖尿病腎病的中藥組合物，其由以下重量份的原料藥制成：生黃芪10-50份、雞血藤10-50份、熟地10-50份、山藥5-20份、山萸肉5-20份、芡實(shí)5-30份、金櫻子5-20份、制水蛭1-5份、熟軍2-15份、翻白草5-30份、茯苓10-50份、車前子10-50份，及其制備方法和用于制備治療糖尿病腎病的藥物中的用途。中國(guó)專利公開(kāi)號(hào)CN 103316101A公開(kāi)了一種治療糖尿病腎病的中藥及其制備方法，由下述重量配比的中藥材制備而成：胡蘆巴6～15份、黃芪6～15份、淫羊藿3～8份、補(bǔ)骨脂3～8份、山茱萸3～8份、大黃1～5份、肉桂3～8份、黃連2～6份。但是關(guān)于一種益氣活血、利濕化濁、原料價(jià)廉、制備簡(jiǎn)便且治療糖尿病腎病療效顯著的中藥復(fù)方制劑，目前還未見(jiàn)報(bào)道。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
本發(fā)明的目的是針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)中的不足，提供一種益氣活血、利濕化濁的中藥復(fù)方制劑。
本發(fā)明的第二個(gè)目的是，提供一種益氣活血、利濕化濁的中藥復(fù)方制劑的用于制備治療糖尿病性腎病藥物的應(yīng)用。
為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采取的技術(shù)方案是：一種益氣活血、利濕化濁的中藥復(fù)方制劑，由以下重量份的原料藥制成：澤蘭1～30份、黃芪1～50份、生蒲黃1～30份、蒼術(shù)1～30份、虎杖1～30份、土茯苓1～30份、水蛭1～15份、川牛膝1～30份、懷牛膝1～30份、綿萆薢1～30份。
優(yōu)選的，由以下重量份的原料藥制成：澤蘭1～20份、黃芪1～30份、生蒲黃1～20份、蒼術(shù)1～20份、虎杖1～20份、土茯苓1～20份、水蛭1～10份、川牛膝1～20份、懷牛膝1～20份、綿萆薢1～20份。
更優(yōu)選的，由以下重量份的原料藥制成：澤蘭15份、黃芪24份、生蒲黃15份、蒼術(shù)15份、虎杖15份、土茯苓15份、水蛭6份、川牛膝15份、懷牛膝15份、綿萆薢15份。
為實(shí)現(xiàn)上述第二個(gè)目的，本發(fā)明采取的技術(shù)方案是：所述的益氣活血、利濕化濁的中藥復(fù)方制劑在制備治療糖尿病性腎病藥物中的應(yīng)用。
所述的藥物還包括藥學(xué)上允許的輔料。
所述的藥物為湯劑、片劑、膠囊劑、顆粒劑、合劑、口服液或糖漿劑。
本發(fā)明優(yōu)點(diǎn)在于：
本發(fā)明的中藥復(fù)方制劑，其配伍符合中藥“君臣佐使”原則，具有益氣活血、利濕化濁的功效，同時(shí)具有原料系常用中藥，原料價(jià)廉，制備簡(jiǎn)便，使用方便的優(yōu)勢(shì)，經(jīng)多年臨床應(yīng)用和藥理研究，對(duì)治療糖尿病腎病具有顯著的療效。鑒于該病發(fā)病人數(shù)眾多，且本發(fā)明中藥復(fù)方制劑具有無(wú)毒、可長(zhǎng)期服用的特點(diǎn)，具有廣闊的市場(chǎng)前景。
具體實(shí)施方式
下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明提供的具體實(shí)施方式作詳細(xì)說(shuō)明。這些實(shí)施例應(yīng)理解為僅用于說(shuō)明本發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的保護(hù)范圍。在閱讀了本發(fā)明記載的內(nèi)容之后，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以對(duì)本發(fā)明作各種改動(dòng)或修改，這些等效變化和修飾同樣落入本發(fā)明權(quán)利要求所限定的范圍。
本發(fā)明提供的中藥復(fù)方制劑的原料配比系發(fā)明人結(jié)合中醫(yī)辨證組方，經(jīng)長(zhǎng)期臨床實(shí)踐摸索得出，各組分的用量以下述比例具有較好療效：澤蘭1～30份、黃芪1～50份、生蒲黃1～30份、蒼術(shù)1～30份、虎杖1～30份、土茯苓1～30份、水蛭1～15份、川牛膝1～30份、懷牛膝1～30份、綿萆薢1～30份。優(yōu)選為澤蘭1～20份、黃芪1～30份、生蒲黃1～20份、蒼術(shù)1～20份、虎杖1～20份、土茯苓1～20份、水蛭1～10份、川牛膝1～20份、懷牛膝1～20份、綿萆薢1～20份。最優(yōu)選為澤蘭15份、黃芪24份、生蒲黃15份、蒼術(shù)15份、虎杖15份、土茯苓15份、水蛭6份、川牛膝15份、懷牛膝15份、綿萆薢15份。
本發(fā)明所述的中藥復(fù)方制劑，輔以常用藥用輔料，可采用本領(lǐng)域常規(guī)制備方法制備成藥劑學(xué)上所說(shuō)的湯劑、片劑、膠囊劑、顆粒劑、合劑、口服液或糖漿劑等常見(jiàn)劑型。
實(shí)施例1
分別稱取澤蘭1500g、黃芪2400g、生蒲黃1500g、蒼術(shù)1500g、虎杖1500g、土茯苓1500g、水蛭600g、川牛膝1500g、懷牛膝1500g、綿萆薢1500g，用水回流提取3次(100L，1小時(shí)；80L，1小時(shí)；80L，1小時(shí))，合并提取液，濃縮，烘干，粉碎，此提取物直接可以包裝、沖服。
實(shí)施例2
分別稱取澤蘭500g、黃芪1600g、生蒲黃1000g、蒼術(shù)1000g、虎杖2000g、土茯苓1000g、水蛭600g、川牛膝1000g、懷牛膝1000g、綿萆薢600g，用水回流提取3次(100L，1小時(shí)；80L，1小時(shí)；80L，1小時(shí))，合并提取液，濃縮，烘干，粉碎，此提取物直接可以包裝、沖服。
實(shí)施例3
分別稱取澤蘭500g、黃芪4000g、生蒲黃500g、蒼術(shù)2000g、虎杖600g、土茯苓3000g、水蛭300g、川牛膝500g、懷牛膝2000g、綿萆薢200g，用水回流提取3次(100L，1小時(shí)；80L，1小時(shí)；80L，1小時(shí))，合并提取液，濃縮，烘干，粉碎，此提取物直接可以包裝、沖服。
實(shí)施例4
分別稱取澤蘭3000g、黃芪2000g、生蒲黃1200g、蒼術(shù)500g、虎杖800g、土茯苓200g、水蛭1000g、川牛膝2000g、懷牛膝400g、綿萆薢3000g，用水回流提取3次(100L，1小時(shí)；80L，1小時(shí)；80L，1小時(shí))，合并提取液，濃縮，烘干，粉碎，此提取物直接可以包裝、沖服。
實(shí)施例5
分別稱取澤蘭800g、黃芪200g、生蒲黃2000g、蒼術(shù)250g、虎杖500g、土茯苓250g、水蛭150g、川牛膝2000g、懷牛膝600g、綿萆薢500g，用水回流提取3次(100L，1小時(shí)；80L，1小時(shí)；80L，1小時(shí))，合并提取液，濃縮，烘干，粉碎，此提取物直接可以包裝、沖服。
實(shí)施例6
分別稱取澤蘭1000g、黃芪5000g、生蒲黃3000g、蒼術(shù)3000g、虎杖6000g、土茯苓300g、水蛭1800g、川牛膝3000g、懷牛膝3000g、綿萆薢2000g，用水回流提取3次(100L，1小時(shí)；80L，1小時(shí)；80L，1小時(shí))，合并提取液，濃縮，烘干，粉碎，此提取物直接可以包裝、沖服。
實(shí)施例7 顆粒劑的制作
按實(shí)施例1-6任一所述的方法制備的提取物150g，加糊精300g，混勻，加入適量60％乙醇制成軟材，過(guò)24目篩制粒，50℃干燥2小時(shí)，干燥顆粒過(guò)30目篩整粒，分裝，即得。
實(shí)施例8 片劑/膠囊劑的制作
按上述配比將提取物、微晶纖維素、淀粉混勻，加入適量60％乙醇制成軟材，過(guò)24目篩制粒，50℃干燥2小時(shí)，干燥顆粒過(guò)30目篩整粒，加入硬脂酸鎂，混勻，壓片或填充裝膠囊，即得。
實(shí)施例9 合劑/口服液/糖漿劑的制作
采用實(shí)施例1-6任一所述的方法制備的提取液，濃縮，加適當(dāng)制藥輔料(白糖、蜂蜜、苯甲丙酸或羥苯乙酯等)，制成合劑、口服液或糖漿劑。
實(shí)施例10 湯劑的制作
稱取實(shí)施例1-6任一所述的原料藥，采用中藥湯劑常規(guī)的制作方法，加水煎煮成湯劑。
實(shí)施例11 本發(fā)明中藥復(fù)方制劑的藥理作用研究
實(shí)驗(yàn)一中藥復(fù)方對(duì)糖尿病腎病大鼠腎小管間質(zhì)性損害的影響
1.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
健康雄性Wistar大鼠65只，清潔級(jí)，體重180g～200g，購(gòu)于中國(guó)科學(xué)院上海實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，動(dòng)物合格證號(hào)：[SCXK(滬)2007-0005]，自由進(jìn)食和飲水。
2.實(shí)驗(yàn)藥物
實(shí)驗(yàn)藥物為本發(fā)明實(shí)施例1制備的中藥復(fù)方制劑；鏈脲佐菌素(STZ)購(gòu)自Sigma公司，為1％枸櫞酸濃度緩沖液，批號(hào)：091104l；鹽酸貝那普利片，Novartis公司產(chǎn)品，為5％混懸液；兔抗大鼠轉(zhuǎn)移生長(zhǎng)因子TGF-β1抗體購(gòu)自Sigma公司，批號(hào)：02980；兔抗大鼠晚期糖基化終末產(chǎn)物特異性受體抗體RAGE抗體購(gòu)自Santa Cruz生物技術(shù)公司，批號(hào)：KT0081。
3.儀器與設(shè)備
低溫超速離心機(jī)(Optima XPN系列，美國(guó)貝克曼庫(kù)爾特有限公司)；低溫冰箱(BCD-252K型，新飛牌)；石蠟切片機(jī)(CUT4062型，德國(guó)SLEE)；石蠟包埋機(jī)(MPS P2型，德國(guó)SLEE)；病理組織烘烤儀(TEC-2500型，澳大利亞郝思琳)；光學(xué)顯微鏡及顯微攝像系統(tǒng)(OLYMPUS公司生產(chǎn))。
4.動(dòng)物分組及糖尿病腎病大鼠模型的建立
(1)動(dòng)物分組及模型建立：取10只大鼠作為空白對(duì)照組，其余55只大鼠喂養(yǎng)高糖高脂飼料(含豬油10％，蔗糖20％，膽固醇2.5，膽酸鈉1％，基礎(chǔ)飼料66.5％)喂養(yǎng)4周。大鼠禁食不禁飲12h，一次性腹腔注射STZ 30mg/kg(溶解于1％枸椽酸緩沖液中，pH值為4.5)，隨即腹腔注射50％葡萄糖5mL。對(duì)照組腹腔內(nèi)注射等量枸緣酸緩沖液。注射后48h進(jìn)行尾靜脈采血，血糖儀測(cè)定全血血糖(BG)>16.7mmol/L為糖尿病模型制作成功標(biāo)準(zhǔn)。本研究共51只大鼠成功建立糖尿病模型，隨機(jī)分為模型組10只，中藥復(fù)方制劑高劑量組11只，中劑量組10只，低劑量組10只，陽(yáng)性對(duì)照組10只。各組均繼續(xù)給予高脂高糖飼料，4周后發(fā)展為糖尿病腎病模型，再進(jìn)行各自干預(yù)措施。
5.干預(yù)方法
模型組及治療組皮下注射甘精胰島素2u，每日1次；對(duì)照組皮下注射等 量生理鹽水。所有大鼠自由飲水，并繼續(xù)給予高脂高糖飼料。高劑量組予中藥復(fù)方制劑混懸液32.4g/kg，即每公斤體重15g混合生藥量；中劑量組予中藥復(fù)方制劑混懸16.2g/kg，低劑量組予中藥復(fù)方制劑混懸液8.1g/kg。陽(yáng)性對(duì)照組予鹽酸貝那普利4mg/kg混懸液灌胃。第8周末稱量大鼠的體重，腹主動(dòng)脈取血約6mL，檢測(cè)各項(xiàng)指標(biāo)。取右腎稱重，用于計(jì)算腎重/體重比(即腎臟肥大指數(shù))。取左腎沿正中剖開(kāi)，置于10％甲醛溶液中固定，送病理檢測(cè)。
6.觀察指標(biāo)
(1)觀察實(shí)驗(yàn)藥物對(duì)糖尿病腎病模型大鼠體重、腎重、腎重/體重的影響。
(2)觀察實(shí)驗(yàn)藥物對(duì)糖尿病腎病模型大鼠血糖、糖化血糖蛋白(HbA1c)、肌酐(Cr)、尿素氮(BUN)，尿β2微球蛋白(β2-MG)，尿微量白蛋白(ULA)
(3)觀察實(shí)驗(yàn)藥物對(duì)糖尿病腎病模型大鼠腎臟病理的影響。具體方法為：腎組織10％甲醛固定，石蠟包埋，組織切片，脫蠟，蘇木精/伊紅HE染色，放大400倍光鏡下觀察。
(4)免疫組化法測(cè)定腎組織腎小管間質(zhì)TGF-β1、晚期糖基化終產(chǎn)物受體(RAGE)的表達(dá)。在顯微鏡×400條件下隨機(jī)選擇10個(gè)腎小管區(qū)域?yàn)橹鞯囊曇?，?yáng)性細(xì)胞率：≤5％記0分，6％-25％記1分，26％-50％記2分，51％-75％記3分，＞75％記4分；染色強(qiáng)度計(jì)分：無(wú)著色記0分，淺黃色記1分，黃褐色記2分，深褐色記3分。計(jì)算陽(yáng)性細(xì)胞率與染色強(qiáng)度的乘積，得出陽(yáng)性指數(shù)(Positive Index，PI)。
7.實(shí)驗(yàn)結(jié)果
(1)實(shí)驗(yàn)藥物對(duì)糖尿病腎病模型大鼠體重體重、腎重、腎重/體重的影響
大鼠造模后，與空白對(duì)照組比較，各造模組大鼠體重下降明顯；早期多動(dòng)、敏感、好打斗，后期遲純、皮毛疏松無(wú)光澤，小便量多，進(jìn)食量、飲水量明顯增加。8周末模型組大鼠體重較空白對(duì)照組下降明顯，中藥組及陽(yáng)性對(duì)照組體重較模型組增加，仍較空白對(duì)照組有所下降。中、高劑量組較低劑量組有所增加，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。模型組腎重/體重比較空白對(duì)照組及各中藥組顯著增高，各中藥組、陽(yáng)性對(duì)照組較空白對(duì)照組仍有所升高，高劑量組較陽(yáng)性對(duì)照組有所下降，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。說(shuō)明中藥復(fù)方制劑具有升高糖尿病大鼠體重、降低腎臟重量增大狀態(tài)的作用。見(jiàn)表1。
表1 各組大鼠體重、腎重比較
注：與空白對(duì)照組比較，*P＜0.05；與模型組比較，△P＜0.05。
(2)觀察實(shí)驗(yàn)藥物對(duì)糖尿病腎病模型大鼠理化指標(biāo)的作用。血糖、糖化血糖蛋白(HbA1c)、肌酐(Cr)、尿素氮(BUN)，尿β2微球蛋白(β2-MG)，尿微量白蛋白(ULA)
模型組大鼠較空白組血糖升高明顯，陽(yáng)性對(duì)照組對(duì)血糖有輕微下降作用，但不明顯；各中藥組血糖較模型組及陽(yáng)性對(duì)照組下降，且隨劑量的增加血糖逐漸下降，高劑量組血糖較陽(yáng)性對(duì)照組下降明顯(P＜0.05)；模型組大鼠HbA1c較空白對(duì)照組升高，陽(yáng)性對(duì)照組與模型組相比下降不明顯，各中藥組HbA1c隨劑量增加而下降。說(shuō)明本發(fā)明藥物對(duì)糖尿病腎病大鼠血糖有下調(diào)作用。模型組大鼠BUN及Cr均較空白對(duì)照組升高。陽(yáng)性對(duì)照組未能較模型組明顯降低，說(shuō)明鹽酸貝那普利未能有效降低糖尿病腎病大鼠Cr及BUN。中、高中藥組BUN、Cr均模型組降低，且中、高劑量組較陽(yáng)性對(duì)照組BUN、Cr降低明顯。說(shuō)明本發(fā)明藥物對(duì)糖尿病腎病大鼠腎功能下降有治療作用，中、高劑量?jī)?yōu)于洛汀新。模型組大鼠β2-MG、ULA均較空白對(duì)照組明顯升高，說(shuō)明模型組大鼠存在腎小管功能下降。各中藥組及陽(yáng)性對(duì)照組β2-MG、ULA均較模型組下降，各中藥組隨劑量增大β2-MG、ULA下降程度越大，但與陽(yáng)性對(duì)照組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。說(shuō)明本發(fā)明中藥具有降低尿微量白蛋白及尿β2微球蛋白，對(duì)糖尿病腎病大鼠腎小管功能障礙具有治療作用。見(jiàn)表2、表3。
表2 各組大鼠血糖、HbA1c、BUN比較
注：與空白對(duì)照組比較，*P＜0.05；與模型組比較，△P＜0.05；與陽(yáng)性對(duì)照組比較，#P＜0.05。
表3 各組大鼠Cr、β2-MG、ULA比較
注：與空白對(duì)照組比較，*P＜0.05；與模型組比較，△P＜0.05；與陽(yáng)性對(duì)照組比較，#P＜0.05。
(3)觀察實(shí)驗(yàn)藥物對(duì)糖尿病腎病模型大鼠腎臟病理的影響
光鏡檢查：空白對(duì)照組大鼠腎小球結(jié)構(gòu)清晰，基底膜完整，腎小管上皮細(xì)胞均排列整齊，未示缺失；模型組大鼠腎小球肥大，系膜區(qū)顯著增寬，可見(jiàn)系膜細(xì)胞增生，腎小管上皮細(xì)胞腫脹脫落，呈空泡樣變性；陽(yáng)性對(duì)照組及低劑量組大鼠腎小球內(nèi)可見(jiàn)紅細(xì)胞淤積的情況，上皮細(xì)胞空泡樣變性，腎小管可見(jiàn)上皮細(xì)胞脫落：中藥組大鼠腎小球內(nèi)紅細(xì)胞淤積減少，腎小管上皮細(xì)胞脫落較模型組明顯減少，小管內(nèi)蛋白管型較模型組明顯減少。
(4)免疫組化法測(cè)定腎組織腎小管間質(zhì)TGF-β1、晚期糖基化終產(chǎn)物受體(RAGE)的表達(dá)
TGF-β1在空白組腎小管上皮及間質(zhì)表達(dá)較少，模型組表達(dá)明顯，呈黃褐色及深褐色；各中藥組及陽(yáng)性對(duì)照組均呈淺黃色或黃褐色，較模型組表達(dá)減少，高劑量組較模型組較少明顯，但各中藥組及陽(yáng)性對(duì)照組之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。RAGE在空白組腎小管上皮及間質(zhì)表達(dá)較少，模型組顏色呈深褐色；各中藥組及陽(yáng)性對(duì)照組均呈淺黃色或黃褐色，較模型組表達(dá)減少，中藥組隨劑量增加RAGE表達(dá)減少，但各中藥組及陽(yáng)性對(duì)照組之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。免疫組化結(jié)果說(shuō)明本發(fā)明中藥能夠減少糖尿病腎病大鼠腎小管組織TGF-β1及RAGE表達(dá)。見(jiàn)表4。
表4 各組大鼠免疫組化TGF-β1、RAGE表達(dá)
注：與空白對(duì)照組比較，*P＜0.05，**P＜0.01；與模型組比較，△P＜0.05，△△P＜0.01。
實(shí)驗(yàn)二(中藥復(fù)方對(duì)糖尿病腎病大鼠腎足突細(xì)胞的影響)
1.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：同實(shí)驗(yàn)一。
2.實(shí)驗(yàn)藥物及試劑：
實(shí)驗(yàn)藥物為本發(fā)明實(shí)施例1制備的中藥復(fù)方制劑；
大鼠α3β1整合素ELISA試劑盒(美國(guó)Santa Cruz，CSB-EQ027530RA)兔抗大鼠nephrin抗體(武漢博士德生物工程有限公司，BA1669)兔抗大鼠podocin抗體(武漢博士德生物工程有限公司，CA2170)
3.儀器與設(shè)備
低溫超速離心機(jī)(Optima XPN系列，美國(guó)貝克曼庫(kù)爾特有限公司)；低溫冰箱(BCD-252K型，新飛牌)；石蠟切片機(jī)(CUT4062型，德國(guó)SLEE)；石蠟包埋機(jī)(MPS P2型，德國(guó)SLEE)；病理組織烘烤儀(TEC-2500型，澳大利亞郝思琳)；光學(xué)顯微鏡及顯微攝像系統(tǒng)(OLYMPUS公司生產(chǎn))；酶標(biāo)儀(352型，Labsystems Multiskan MS，芬蘭生產(chǎn))；隔水式恒溫培養(yǎng)箱(GNP-9080型，國(guó)產(chǎn))；JEM-1230透射電子顯微鏡(日本電子株式會(huì)社生產(chǎn))；圖像采用Miaspro圖像分析系統(tǒng)進(jìn)行分析。
4.動(dòng)物分組及糖尿病腎病大鼠模型的建立。
(1)動(dòng)物分組：同實(shí)驗(yàn)一；
(2)模型制備：同實(shí)驗(yàn)一。
5.干預(yù)方法
同實(shí)驗(yàn)一。
6.觀察指標(biāo)
(1)觀察各組大鼠足突細(xì)胞狀態(tài)：足突細(xì)胞數(shù)、足突寬度及融合率、基底膜厚度變化
腎組織觀察。腎組織10％甲醛固定，經(jīng)包埋、切片、脫蠟、蘇木精/伊紅HE染色，于放大400倍光鏡下觀察。每只大鼠各取2張切片，觀察20個(gè)視野。透射電鏡：將1mm3大小腎皮質(zhì)組織固定，Epon 812包埋，切片鉛鈾雙重染色后，透射電鏡觀察。
(2)觀察各組大鼠免疫組化nephrin及podocin蛋白表達(dá)：石蠟切片置于烘箱中，加熱2h；脫蠟：切片用二甲苯浸泡脫蠟，25min；水化：100％、95％、80％、70％梯度酒精水化，PBS沖洗3次，各5min；阻斷：3％H2O2(去離子 水)孵育20min，PBS沖洗3次，各5min；抗原修復(fù)：切片用pH6.0的0.01mol/L檸檬酸鈉抗原修復(fù)液，煮沸15min，保溫15min，室溫自然冷卻，PBS沖洗3次，各5min；封閉：滴加山羊血清，37℃孵育30min；加一抗，4℃，孵育過(guò)夜；PBS沖洗3次，各5min；加二抗，37℃孵育30min；PBS沖洗3次，各5min；顯色：DAB顯色5min(DAB，TB，30％H2O2)；復(fù)染：蘇木素復(fù)染45s，自來(lái)水流動(dòng)沖洗5min；分化：鹽酸酒精分化1s,流水沖洗15min；脫水：梯度酒精浸潤(rùn)；透明：二甲苯浸潤(rùn)；封片：滴入中性樹(shù)脂；每只動(dòng)物標(biāo)本經(jīng)nephrin、podocin染色后各取2張切片，在顯微鏡×400條件下隨機(jī)選擇10個(gè)視野，陽(yáng)性細(xì)胞率：≤5％記0分，6％-25％記1分，26％-50％記2分，51％-75％記3分，＞75％記4分；染色強(qiáng)度計(jì)分：無(wú)著色記0分，淺黃色記1分，黃褐色記2分，深褐色記3分。計(jì)算陽(yáng)性細(xì)胞率與染色強(qiáng)度的乘積，得出陽(yáng)性指數(shù)(Positive Index，PI)。
(3)觀察各組大鼠α3β1整合素ELISA檢測(cè)表達(dá)：標(biāo)準(zhǔn)品稀釋，將ELISA試劑盒中原倍標(biāo)準(zhǔn)品稀釋成相應(yīng)要求的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液。設(shè)孔：在酶標(biāo)包被板上設(shè)空白對(duì)照孔：不加血清樣品及酶標(biāo)試劑；標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照孔：加標(biāo)準(zhǔn)品50μl；樣品孔：先加稀釋液40μl，再加血清樣品10μl，血清樣品最終稀釋度為1:5；溫育：在酶標(biāo)包被板上蓋封板膜，輕晃至均勻，于37℃條件下溫育，30min；配液：用蒸餾水將濃縮洗滌液稀釋30倍后備用；洗滌：去封板膜，棄孔內(nèi)液體后干燥，加洗滌劑，靜置30s，棄液，重復(fù)5次，用吸水紙干燥；加酶：除空白對(duì)照孔外，各孔加酶標(biāo)試劑50μl；溫育，洗滌；顯色：各孔加入顯色劑A、顯色劑B各50μl，輕晃至均勻，室溫避光顯色15min；終止：各孔加終止液50μl，反應(yīng)終止后由藍(lán)色變?yōu)辄S色；讀取OD值：15min內(nèi)，將空白孔調(diào)零，以波長(zhǎng)450nm依序測(cè)量各孔的吸光度(OD值)。根據(jù)5個(gè)標(biāo)準(zhǔn)孔的已知濃度和OD值，進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)曲線分析后繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得出直線回歸方程。按照個(gè)樣品孔的OD值代入方程，按稀釋倍數(shù)換算出樣本血清該指標(biāo)濃度含量，以(表示，ng/L)。
7.實(shí)驗(yàn)結(jié)果
(1)觀察各組大鼠足突細(xì)胞狀態(tài)：足突細(xì)胞數(shù)、足突寬度及融合率、基底膜厚度變化
透射電鏡檢查：空白對(duì)照組大鼠腎小球足突分布均勻，足突間裂孔膜結(jié)構(gòu)清晰；模型組大鼠腎小球基底膜較空白組增厚，腎小球系膜區(qū)增寬，系膜細(xì)胞 及基質(zhì)彌漫增寬，足突腫脹，局部裂孔膜減少或消失；低劑量組及陽(yáng)性對(duì)照組病變相對(duì)較輕，系膜區(qū)增寬減輕，足突融合及裂孔膜破壞較輕；中、高劑量組病變最輕，基底膜增厚不顯著，足突損傷輕微。
電鏡測(cè)量顯示，模型組足突較空白對(duì)照組明顯增大，說(shuō)明模型組足突腫脹融合明顯；各中藥組及陽(yáng)性對(duì)照組均較模型組下降；各中藥組隨劑量增加足突寬度降低，高劑量組較陽(yáng)性對(duì)照組足突寬度顯著降低。說(shuō)明本發(fā)明中藥能夠減輕糖尿病腎病大鼠足突腫脹狀態(tài)，降低足突寬度，高劑量時(shí)療效優(yōu)于洛汀新。
模型組足突融合率較空白組顯著升高，各中藥組及陽(yáng)性對(duì)照組足突融合率均較模型組下降，高劑量組較陽(yáng)性對(duì)照組下降明顯。說(shuō)明本發(fā)明中藥能夠減輕糖尿病大鼠足突融合狀態(tài)，且高劑量時(shí)作用優(yōu)于洛汀新。
模型組基底膜厚度較空白對(duì)照組明顯增厚，說(shuō)明基底膜處于炎癥增生的彌漫性增寬狀態(tài)。各中藥組及陽(yáng)性對(duì)照組基底膜厚度均有所下降，各中藥組隨劑量增加基底膜厚度下降明顯，高劑量組基底膜厚度顯著低于陽(yáng)性對(duì)照組。說(shuō)明本發(fā)明中藥能夠降低糖尿病腎病大鼠基底膜厚度，減輕基底膜彌漫性擇增厚狀態(tài)。見(jiàn)表5。
表5 各組大鼠足突及基底膜情況比較
注：與空白對(duì)照組比較，*P＜0.05；與模型組比較，△P＜0.05；與陽(yáng)性對(duì)照組比較，#P＜0.05。
(2)觀察各組大鼠免疫組化nephrin及podocin蛋白表達(dá)
模型組較空白對(duì)照組nephrin蛋白表達(dá)顯著下降，說(shuō)明糖尿病腎病大鼠足突破壞，所表達(dá)的nephrin蛋白表達(dá)下降。各中藥組及陽(yáng)性對(duì)照組較模型組nephrin蛋白表達(dá)上升，中、高劑量組較陽(yáng)性對(duì)照組nephrin蛋白上升明顯。說(shuō)明本發(fā)明中藥可以改善糖尿病腎病大鼠足突破壞狀態(tài)，且中、高劑量時(shí)作用優(yōu)于洛汀新。模型組較空白對(duì)照組podocin蛋白表達(dá)顯著下降，說(shuō)明糖尿病腎病大鼠足突破壞，所表達(dá)的podocin蛋白表達(dá)下降。各中藥組及陽(yáng)性對(duì)照組較模型組nephrin蛋白表達(dá)上升，高劑量中藥組較陽(yáng)性對(duì)照組升高明顯。說(shuō)明本發(fā) 明中藥可以改善糖尿病腎病大鼠足突破壞狀態(tài)，且高劑量時(shí)作用優(yōu)于洛汀新。見(jiàn)表6。
表6 各組大鼠nephrin及podocin蛋白表達(dá)
注：與空白對(duì)照組比較，*P＜0.05，**P＜0.01；與模型組比較，△P＜0.05，△△P＜0.01；與陽(yáng)性對(duì)照組比較，##P＜0.01。
(3)觀察各組大鼠α3β1整合素的ELISA檢測(cè)表達(dá)
模型組大鼠α3整合素較空白對(duì)照組顯著降低；各中藥組及陽(yáng)性對(duì)照組較模型組有所升高，中、高劑量組均升高顯著；高劑量組較陽(yáng)性對(duì)照組有升高趨勢(shì)，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。說(shuō)明本發(fā)明中藥能夠上調(diào)糖尿病腎病大鼠血清α3整合素表達(dá)，減少足細(xì)胞脫落。模型組大鼠β1整合素較空白對(duì)照組顯著降低；各中藥組及陽(yáng)性對(duì)照組較模型組有所升高，中、高劑量組均升高顯著；高劑量組較陽(yáng)性對(duì)照組有升高趨勢(shì)，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。說(shuō)明本發(fā)明中藥能夠上調(diào)β1整合素表達(dá)，減少足細(xì)胞脫落。見(jiàn)表7。
表7 各組大鼠nephrin及podocin蛋白表達(dá)
注：與空白對(duì)照組比較，*P＜0.05；與模型組比較，△P＜0.05；與陽(yáng)性對(duì)照組比較，#P＜0.05。
實(shí)施例12
陳某，女，65歲，2013年5月2日初診。10年前無(wú)明顯誘因出現(xiàn)多飲、多尿、多食，即去某三甲醫(yī)院就診，多次查空腹血糖在9.0mmol/L～11.8mmol/L之間波動(dòng)，尿蛋白(-)，診斷為2型糖尿病，服用二甲雙胍、達(dá)美康等口服降糖藥，血糖控制不穩(wěn)定，常有波動(dòng)。3月前因勞累過(guò)度，覺(jué)全身乏力，頭暈 目眩，口干唇燥，雙下肢浮腫。就診于當(dāng)?shù)蒯t(yī)院，檢查，尿糖(3+)，尿蛋白(3+)，24小時(shí)尿蛋白定量4.5g，空腹血糖11.8mmol/L，Cr135.6/μmol/L，BUN 9.6mmol/L，白蛋白23.3g/L，診斷為糖尿病腎?、羝?，經(jīng)西醫(yī)治療后效果不佳，故來(lái)我院門(mén)診求治。尿液檢查尿糖(3+)，尿蛋白(3+)，24小時(shí)尿蛋白定量6.5g/L，空腹血糖12.6mmol/L，Cr142.6μmol/L，血尿素氮7.8mmol/L，白蛋白25.5g/L，總蛋白53.5g/L。患者面色灰暗，雙下肢可凹陷性浮腫，舌質(zhì)淡胖，苔膩，脈沉澀，血壓146/82mmHg。證屬脾虛濕阻，絡(luò)脈瘀滯，治以益氣活血、利濕化濁，藥用黃芪24g、澤蘭15g、蒼術(shù)15g、生蒲黃15g、虎杖15g、土茯苓15g、水蛭6g、川牛膝15g、懷牛膝15g、綿萆薢10g，同時(shí)囑患者按時(shí)服用拜唐蘋(píng)50mg，tid，po；洛汀新l0mg，qd，po。隨證加減治療3個(gè)月以后，繼續(xù)服用本發(fā)明中藥復(fù)方顆粒劑治療，每次用量相當(dāng)于生藥50g，每日3次，共4周，測(cè)尿糖(+)，尿蛋白(+)，24小時(shí)尿蛋白定量1.8g，空腹血糖9.6mmol/L，Cr:121.7μmol/L，BUN6.6mmol/L，白蛋白38.5g/L，患者一般情況明顯好轉(zhuǎn)，雙下肢浮腫消退，病情穩(wěn)定，于門(mén)診繼續(xù)服藥觀察。
實(shí)施例13
郭某，男，52歲，2014年3月19日初診?；颊?年前體檢查空腹血糖7.4mmol/L，后于龍華醫(yī)院行OGTT試驗(yàn)，確診2型糖尿病。服用二甲雙胍、諾和龍、拜唐蘋(píng)等藥物，規(guī)律性差，未嚴(yán)格按醫(yī)囑控制飲食。1月前于我院體檢查空腹血糖8.2mmol/L，餐后2小時(shí)血糖12.4mmol/L，總膽固醇6.2mmol/L，血壓142/87mmHg，尿蛋白(+)；后于腎內(nèi)科查24小時(shí)尿微量白蛋白402mg?，F(xiàn)乏力、腰酸、汗多、大便溏、舌淡苔薄膩、舌下絡(luò)瘀、脈沉滑。治以益氣活血、利濕化濁。藥用澤蘭15g、黃芪24g、生蒲黃15g、蒼術(shù)15g、虎杖30g、土茯苓15g、水蛭9g、川牛膝15g、懷牛膝15g、綿萆薢10g、炒白術(shù)15g、車前子30g，予諾和靈30R 25u、20u控制血糖，服藥一周后腹瀉消失，大便成形，上方去炒白術(shù)15g、車前子30g，繼以澤蘭15g、黃芪24g、生蒲黃15g、蒼術(shù)15g、虎杖30g、土茯苓15g、水蛭9g、川牛膝15g、懷牛膝15g、綿萆薢10g，服用2個(gè)月后查24小時(shí)尿微量白蛋白315mg，后繼續(xù)服用本發(fā)明中藥復(fù)方顆粒劑治療，每次用量相當(dāng)于生藥50克，每日2次，共2個(gè)月，復(fù)查24小時(shí)尿微量白蛋白145mg，總膽固醇4.7mmol/L。
實(shí)施例14 不同中藥復(fù)方對(duì)糖尿病腎病大鼠腎足突細(xì)胞的影響
1.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：同實(shí)施例11實(shí)驗(yàn)二。
2.實(shí)驗(yàn)藥物及試劑：
本發(fā)明的中藥復(fù)方制劑：本發(fā)明實(shí)施例1制備的中藥復(fù)方制劑；
中藥對(duì)照一：分別稱取澤瀉1500g、黃芪2400g、生蒲黃1500g、白術(shù)1500g、丹參1500g、金銀花1500g、水蛭600g、川牛膝1500g、懷牛膝1500g、綿萆薢1500g，用水回流提取3次(100L，1小時(shí)；80L，1小時(shí)；80L，1小時(shí))，合并提取液，濃縮，烘干，粉碎，即得。
中藥對(duì)照二：分別稱取澤蘭1500g、黃芪2400g、生蒲黃1500g、蒼術(shù)1500g、虎杖1500g、土茯苓1500g、水蛭600g、川牛膝1500g、懷牛膝1500g、綿萆薢1500g，車前子1500g，當(dāng)歸1500g，甘草1500g，用水回流提取3次(100L，1小時(shí)；80L，1小時(shí)；80L，1小時(shí))，合并提取液，濃縮，烘干，粉碎，即得。
3.儀器與設(shè)備：同實(shí)施例11實(shí)驗(yàn)二。
4.動(dòng)物分組及糖尿病腎病大鼠模型的建立。
(1)動(dòng)物分組及模型建立：取10只大鼠作為空白對(duì)照組，其余55只大鼠喂養(yǎng)高糖高脂飼料(含豬油10％，蔗糖20％，膽固醇2.5，膽酸鈉1％，基礎(chǔ)飼料66.5％)喂養(yǎng)4周。大鼠禁食不禁飲12h，一次性腹腔注射STZ 30mg/kg(溶解于1％枸椽酸緩沖液中，pH值為4.5)，隨即腹腔注射50％葡萄糖5mL。對(duì)照組腹腔內(nèi)注射等量枸緣酸緩沖液。注射后48h進(jìn)行尾靜脈采血，血糖儀測(cè)定全血血糖(BG)>16.7mmol/L為糖尿病模型制作成功標(biāo)準(zhǔn)。共50只大鼠建立糖尿病模型，隨機(jī)分為模型組10只，本發(fā)明中藥復(fù)方制劑組10只，中藥對(duì)照一組10只，中藥對(duì)照二組10只，西藥對(duì)照組10只。各組均繼續(xù)給予高脂高糖飼料，4周后發(fā)展為糖尿病腎病模型，再進(jìn)行各自干預(yù)措施。
5.干預(yù)方法
模型組及治療組皮下注射甘精胰島素2u，每日1次。所有大鼠自由飲水，并繼續(xù)給予高脂高糖飼料。本發(fā)明中藥復(fù)方制劑組予中藥復(fù)方制劑混懸液，每公斤體重15g混合生藥量；中藥對(duì)照一組予中藥對(duì)照一的中藥復(fù)方混懸液，每公斤體重15g混合生藥量；中藥對(duì)照二組予中藥對(duì)照二的中藥復(fù)方混懸液，每公斤體重15g混合生藥量；西藥對(duì)照組予鹽酸貝那普利4mg/kg混懸液灌胃。第8周末稱量大鼠的體重，腹主動(dòng)脈取血約6mL，檢測(cè)各項(xiàng)指標(biāo)。取右腎稱重，用于計(jì)算腎重/體重比(即腎臟肥大指數(shù))。取左腎沿正中剖開(kāi)，置于10％甲醛溶液中固定，送病理檢測(cè)。
6.觀察指標(biāo)：同實(shí)施例11實(shí)驗(yàn)二。
7.實(shí)驗(yàn)結(jié)果
(1)觀察各組大鼠足突細(xì)胞狀態(tài)：足突細(xì)胞數(shù)、足突寬度及融合率、基底膜厚度變化
透射電鏡檢查：空白對(duì)照組大鼠腎小球足突分布均勻，足突間裂孔膜結(jié)構(gòu)清晰；模型組大鼠腎小球基底膜較空白組增厚，腎小球系膜區(qū)增寬，系膜細(xì)胞及基質(zhì)彌漫增寬，足突腫脹，局部裂孔膜減少或消失；西藥對(duì)照組、中藥對(duì)照一組和中藥對(duì)照二組病變相對(duì)較輕，系膜區(qū)增寬減輕，足突融合及裂孔膜破壞較輕；本發(fā)明中藥復(fù)方制劑組病變最輕，基底膜增厚不顯著，足突損傷輕微。
電鏡測(cè)量顯示，模型組足突較空白對(duì)照組明顯增大，說(shuō)明模型組足突腫脹融合明顯；西藥對(duì)照組和各中藥組均較模型組下降；但中藥對(duì)照一組和中藥對(duì)照二組與西藥對(duì)照組相比無(wú)顯著差異。本發(fā)明中藥復(fù)方制劑組較西藥對(duì)照組足突寬度顯著降低。說(shuō)明本發(fā)明中藥能夠減輕糖尿病腎病大鼠足突腫脹狀態(tài)，降低足突寬度，療效顯著優(yōu)于洛汀新、中藥對(duì)照一和中藥對(duì)照二。
模型組足突融合率較空白組顯著升高，西藥對(duì)照組和各中藥組足突融合率均較模型組下降，但中藥對(duì)照一組和中藥對(duì)照二組與西藥對(duì)照組相比無(wú)顯著差異。本發(fā)明組較西藥對(duì)照組下降明顯。說(shuō)明本發(fā)明中藥能夠減輕糖尿病大鼠足突融合狀態(tài)，且作用優(yōu)于洛汀新、中藥對(duì)照一和中藥對(duì)照二。
模型組基底膜厚度較空白對(duì)照組明顯增厚，說(shuō)明基底膜處于炎癥增生的彌漫性增寬狀態(tài)。西藥對(duì)照組和各中藥組基底膜厚度均有所下降，中藥對(duì)照一組和中藥對(duì)照二組與西藥對(duì)照組相比無(wú)顯著差異。本發(fā)明組基底膜厚度顯著低于西藥對(duì)照組、中藥對(duì)照一組和中藥對(duì)照二組。說(shuō)明本發(fā)明中藥能夠降低糖尿病腎病大鼠基底膜厚度，減輕基底膜彌漫性擇增厚狀態(tài)。見(jiàn)表8。
表8 各組大鼠足突及基底膜情況比較
注：與空白對(duì)照組比較，*P＜0.05；與模型組比較，△P＜0.05；與西藥對(duì)照組比較，#P＜0.05。
(2)觀察各組大鼠免疫組化nephrin及podocin蛋白表達(dá)
模型組較空白對(duì)照組nephrin蛋白表達(dá)顯著下降，說(shuō)明糖尿病腎病大鼠足突破壞，所表達(dá)的nephrin蛋白表達(dá)下降。各中藥組及陽(yáng)性對(duì)照組較模型組nephrin蛋白表達(dá)上升，中藥對(duì)照一組和中藥對(duì)照二組與西藥對(duì)照組相比無(wú)顯著差異，本發(fā)明組較西藥對(duì)照組nephrin蛋白上升明顯。說(shuō)明本發(fā)明中藥可以改善糖尿病腎病大鼠足突破壞狀態(tài)，作用優(yōu)于洛汀新、中藥對(duì)照一和中藥對(duì)照二。
模型組較空白對(duì)照組podocin蛋白表達(dá)顯著下降，說(shuō)明糖尿病腎病大鼠足突破壞，所表達(dá)的podocin蛋白表達(dá)下降。各中藥組及陽(yáng)性對(duì)照組較模型組nephrin蛋白表達(dá)上升，中藥對(duì)照一組和中藥對(duì)照二組與西藥對(duì)照組相比無(wú)顯著差異，本發(fā)明組較西藥對(duì)照組升高明顯。說(shuō)明本發(fā)明中藥可以改善糖尿病腎病大鼠足突破壞狀態(tài)，且作用優(yōu)于洛汀新、中藥對(duì)照一和中藥對(duì)照二。見(jiàn)表9。
表9 各組大鼠nephrin及podocin蛋白表達(dá)
注：與空白對(duì)照組比較，*P＜0.05，**P＜0.01；與模型組比較，△P＜0.05，△△P＜0.01；與陽(yáng)性對(duì)照組比較，##P＜0.01。
本發(fā)明的中藥復(fù)方由澤蘭、黃芪、生蒲黃、蒼術(shù)、虎杖、土茯苓、水蛭、川牛膝、懷牛膝、綿萆薢組方，系在多年臨床實(shí)踐基礎(chǔ)上，以傳統(tǒng)中醫(yī)理論為指導(dǎo)，精心選藥組方而成。方中黃芪味甘性微溫，歸心、肺、脾、腎經(jīng)，功能益氣行血、利水消腫、托毒化濁；澤蘭味苦辛性微溫，歸肝、脾經(jīng)，能活血化瘀、行水消腫、解毒消癰，兩藥相合，一入氣分，一入血分，共奏益氣活血、利水解毒化濁之功效，為方中君藥。蒼術(shù)味辛苦性溫，歸胃、肝、脾經(jīng)，具有燥濕健脾之功效，《本草綱目》載：“治濕痰留飲，或挾瘀血成窠囊”；蒲黃味甘微辛性平，歸心、肝、脾經(jīng)，功能止血、祛瘀、利尿，兩者相輔相成，助君藥益氣健脾、活血利水，共為臣藥。虎杖味苦酸性微寒，歸肝膽經(jīng)，能活血散瘀、清熱利濕解毒；水蛭味咸苦性平，歸肝經(jīng)，長(zhǎng)于破血逐瘀、通經(jīng)消癥；土茯苓甘淡平，歸肝脾胃經(jīng)，擅清熱除濕、泄?jié)峤舛?；綿萆薢味苦辛平，歸腎、胃經(jīng)，能利濕化濁，四者共為佐藥。川、懷牛膝，味甘苦性平，歸肝腎經(jīng)，功 擅活血祛瘀、滋補(bǔ)肝腎、引血下行?！端幤坊x》載：牛膝，味甘能補(bǔ)，帶澀能斂，兼苦直下，用之入腎。蓋腎主閉藏，澀精斂血，引諸藥下行，兩藥共為引藥?；⒄?、土茯苓、水蛭、川牛膝、懷牛膝活血利濕化濁，加強(qiáng)君藥活血祛濕的功效，使邪有出路。諸藥合用，活血利濕化濁以治標(biāo)，益氣以培本，共奏益氣活血、利濕化濁之功。
以上所述僅是本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方式，應(yīng)當(dāng)指出，對(duì)于本技術(shù)領(lǐng)域的普通技術(shù)人員，在不脫離本發(fā)明方法的前提下，還可以做出若干改進(jìn)和補(bǔ)充，這些改進(jìn)和補(bǔ)充也應(yīng)視為本發(fā)明的保護(hù)范圍。