本發(fā)明涉及醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及是一種粉刺錦雞兒提取物及其制備與在預(yù)防或治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎藥物中的應(yīng)用。

背景技術(shù)：

風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(RA)是當(dāng)前危害人類健康的最重要疾病之一，被稱為“不死的癌癥”。RA是一種以多關(guān)節(jié)受累、滑膜炎癥、骨與軟骨破壞等為主要特征的慢性全身性自身免疫炎性疾病，其發(fā)病機(jī)理至今尚未完全闡明，普遍認(rèn)為與遺傳、感染和免疫調(diào)節(jié)等因素紊亂密切相關(guān)(Imboden JB.The immunopathogenesis of rheumatoid arthritis.Annu Rev Pathol Mech Dis 2009,4:417-434.)。我國RA的患病率約0.3％-0.4％，約有400萬患者，病程5-10年致殘率為60％，晚期90％患者喪失社會勞動力和生活自理能力，是成人勞動力喪生的主要原因之一(Dai SM,Han XH,Zhao DB,Shi YQ,Liu Y,Meng JM.Prevalence of rheumatic symptoms,rheumatoid arthritis,ankylosing spondylitis,and gout in Shanghai,China:a COPCORD study.J Rheumatol 2003,30:2245-2251.)，因此造成了很多家庭問題以及巨大的社會負(fù)擔(dān)?，F(xiàn)行治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的方法主要有手術(shù)治療、化學(xué)藥物治療和細(xì)胞因子類生物制劑的治療。一般認(rèn)為外科手術(shù)只適用于晚期畸形病例，且費(fèi)用昂貴，對機(jī)體創(chuàng)傷較大；化學(xué)藥物如非甾體抗炎藥、抗風(fēng)濕藥和糖皮質(zhì)激素等的長期應(yīng)用會引起胃腸道不適、骨髓抑制、肝損傷、高血壓等嚴(yán)重的不良反應(yīng)；生物制劑在干預(yù)病變細(xì)胞的同時(shí)，對正常細(xì)胞也同樣會產(chǎn)生一定的作用，干擾機(jī)體的固有免疫和適應(yīng)性免疫，從而產(chǎn)生較大的毒性和破壞機(jī)體防御作用的風(fēng)險(xiǎn)(1.張義浜,劉志敏,熊凌霜.類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎發(fā)病機(jī)制及其治療方法研究進(jìn)展.細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志,2005,21(增刊):88-94.2.Doan T,Massarotti E.Rheumatoid Arthritis:An Overview of New and Emerging Therapies.J Clin Pharmacol 2005,45:751-762.)。因此，尋求高效低毒的防治RA的藥物仍是世界醫(yī)學(xué)界面臨的一項(xiàng)艱巨任務(wù)和難題。

粉刺錦雞兒Caragana pruinosa為豆科(Leguminosae)錦雞兒屬 (Caragana Fabr.)植物，產(chǎn)新疆(昭蘇、喀什)，生于干山坡(潘蘭,賈新岳,石明輝,賈曉光,力瓦衣丁·買合蘇提,鄭承劍,陳剛.新疆產(chǎn)四種錦雞兒的民族植物學(xué)調(diào)查.中國現(xiàn)代中藥,2013,7:578-579.)。粉刺錦雞兒的根具有活血祛風(fēng)，利尿消腫的功效(中國藥材公司.《中國中藥資源志要》,科學(xué)出版社,1994,559.)，但有關(guān)粉刺錦雞兒化學(xué)成分及藥理作用未見報(bào)道。

至今也未見粉刺錦雞兒提取物用于治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎方面的報(bào)道。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的在于提供一種粉刺錦雞兒提取物及其制備方法；本發(fā)明的另一目的在于提供一種粉刺錦雞兒提取物新的醫(yī)藥用途。

本發(fā)明的第一方面，提供了一種粉刺錦雞兒提取物，所述的粉刺錦雞兒提取物的制備方法為：

將粉刺錦雞兒根粉碎后，投入提取罐，用40～90％的乙醇加熱提取2～3次，每次溶媒用量約為生藥量的8～10倍，每次提取時(shí)間為1～2小時(shí)，合并提取液后濃縮至干，得粉刺錦雞兒總浸膏；將粉刺錦雞兒總浸膏溶于水后上樣大孔吸附樹脂，收集30～80％乙醇洗脫部分，濃縮干燥，即得粉刺錦雞兒提取物。

較優(yōu)的，所述的大孔樹脂是AB-8、D-101、ZTC-1、HPD-100或DA201。

較優(yōu)的，所述的乙醇熱提是80℃溫度下進(jìn)行回流提取。

較優(yōu)的，用80％的乙醇(體積濃度)回流提取2～3次。

較優(yōu)的，每次溶媒用量約為生藥量的10倍，每次提取時(shí)間為2小時(shí)。

本發(fā)明提供了根據(jù)上述制備方法得到的粉刺錦雞兒提取物。

本發(fā)明的第二方面，提供了上述的粉刺錦雞兒提取物在制備預(yù)防或治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎藥物或食品中的應(yīng)用。

所述的藥物為：粉刺錦雞兒提取物作為唯一活性成份，或包含粉刺錦雞兒提取物的藥物組合物。

所述藥物中，粉刺錦雞兒提取物的含量為0.1-99wt％，優(yōu)選含量為0.5-90wt％。

所述的藥物組合物可以和藥劑學(xué)上的常規(guī)藥用輔料制成藥物制劑。

所述的藥物制劑可以是片劑、顆粒劑、分散片、膠囊劑、軟膠囊劑、滴丸、注射劑、粉針劑，或氣霧劑等。

本發(fā)明采用類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎動物模型(Trentham DE,Townes AS,Kang AH.Autoimmunity to type II collagen an experimental model of arthritis.J Exp Med1977,146:857–868；Viji V,Kavitha SK,Helen A.Bacopa monniera(L.)Wettst inhibits type II collagen-induced arthritis in rats.Phytother Res 2010,24:1377–1383)，觀察本發(fā)明提供的粉刺錦雞兒提取物灌胃給藥的治療作用。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，本發(fā)明的粉刺錦雞兒提取物可顯著降低RA大鼠關(guān)節(jié)炎指數(shù)，下調(diào)大鼠血清中炎性細(xì)胞因子白介素1β(IL-1β)、白介素6(IL-6)、腫瘤壞死因子(TNF-α)和C反應(yīng)蛋白水平，上調(diào)白介素10(IL-10)水平，提示粉刺錦雞兒提取物具有良好的抗RA活性。

本發(fā)明尋找到了安全有效的防治RA藥物。

附圖說明

圖1粉刺錦雞兒提取物對II型膠原誘導(dǎo)RA模型大鼠足關(guān)節(jié)炎指數(shù)的影響(*vs模型組，p<0.05；**vs模型組，p<0.01)。

圖2粉刺錦雞兒提取物對II型膠原誘導(dǎo)RA模型大鼠血清中細(xì)胞因子水平的影響(mean±SD,n＝10)(*vs模型組，p<0.05；**vs模型組，p<0.01)；其中A為IL-1β，B為IL-6，C為IL-10，D為TNF-α，E為C反應(yīng)蛋白(CRP)；NG：空白組；MG：模型組；MTG：甲氨蝶呤組；LCG：低劑量組；MCG：中劑量組；HCG：高劑量組。

具體實(shí)施方式

現(xiàn)結(jié)合實(shí)施例，對本發(fā)明作詳細(xì)描述，但本發(fā)明的實(shí)施不僅限于此。

本實(shí)施例所用的粉刺錦雞兒Caragana pruinosa為豆科(Leguminosae)錦雞兒屬(Caragana Fabr.)植物，植物采集于新疆烏恰縣，取根曬干備用。

實(shí)施例1：粉刺錦雞兒提取物的制備

將粉刺錦雞兒根粉碎后，投入提取罐，用80％的乙醇80℃回流提取3次，每次溶媒用量約為生藥量的10倍，每次提取時(shí)間為2小時(shí)，合并提取液后濃縮至干，得粉刺錦雞兒總浸膏，將總浸膏溶于水后上樣AB-8大孔吸附樹脂，收集30～80％乙醇洗脫部分，濃縮干燥得粉刺錦雞兒提取物。

實(shí)施例2：粉刺錦雞兒提取物的抗類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)

2.1實(shí)驗(yàn)材料

成年雄性180～220g SD大鼠(第二軍醫(yī)大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心提供)60只，大鼠血清TNF-α、IL-1的ELISA試劑盒(美國Sigma公司)。主要儀器：足趾容積測量儀(YLS-7A，山東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院設(shè)備站)、酶標(biāo)儀(BIO-RAD 550)、離心機(jī)(Labofuge 400R,Heraeus公司)、電子天平(FA 110A型，上海精密科學(xué)儀器有限公司)。

2.2實(shí)驗(yàn)造模及給藥

實(shí)驗(yàn)前將60只大鼠稱重，按體質(zhì)量隨機(jī)分為6組，每組10只，自由飲食、進(jìn)水。分為空白組、模型組、陽性藥組和粉刺錦雞兒提取物組?？瞻捉M：不予任何處理；模型組：將牛II型膠原蛋白醋酸溶液與等容量的弗氏不完全佐劑混合，充分乳化。第0天，SD大鼠尾根進(jìn)行皮內(nèi)注射(1mg/ml)，每只0.1ml；7日后，加強(qiáng)免疫，大鼠尾根用0.1ml/只溶液注射作為激發(fā)注射，第15日左右造成RA動物模型；陽性藥組：甲氨蝶呤，1.0mg/kg,灌胃給藥，每周3次；粉刺錦雞兒提取物組：自造模成功之日起，給予粉刺錦雞兒提取物，分為高、中、低三個(gè)劑量組，灌胃給藥，每日1次，劑量為1.2g/kg、2.4g/kg、和4.8g/kg(生藥量)，連續(xù)給藥40d。

2.3觀察指標(biāo)

(1)對大鼠關(guān)節(jié)腫脹程度進(jìn)行關(guān)節(jié)炎指數(shù)評分，每5天評分一次。

(2)在實(shí)驗(yàn)結(jié)束次日，大鼠尾部靜脈取血，置冰浴30min后，以2000r/min離心15min，取上清，用ELISA法測定兩組大鼠血清中TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-10、C反應(yīng)蛋白水平，按試劑盒說明書進(jìn)行操作。

2.4實(shí)驗(yàn)結(jié)果

采用SPSS14.0對兩組數(shù)據(jù)進(jìn)行兩樣本t檢驗(yàn)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，P<0.05時(shí)認(rèn)為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

(1)大鼠關(guān)節(jié)炎指數(shù)評分

如圖1所示，給藥第40天，粉刺錦雞兒高、中、低劑量組足關(guān)節(jié)炎指數(shù)分別為3.7±0.7、4.2±0.6、4.9±0.3，模型組足關(guān)節(jié)炎指數(shù)為5.9±0.4，提示粉刺錦雞兒提取物可顯著降低II型膠原誘導(dǎo)的RA大鼠足關(guān)節(jié)炎指數(shù)，與模型組相比存在顯著性差異，表明粉刺錦雞兒提取物對大鼠類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎模型有較好的治療作用。

(2)血清學(xué)指標(biāo)

如圖2所示，模型組大鼠血清中TNF-α、IL-1β、IL-6、C反應(yīng)蛋白和IL-10 的水平分別為381.4ng/L、93.2ng/L、194.5ng/L、7.8mg/L和29.1ng/L。與模型組相比，粉刺錦雞兒提取物高劑量組能顯著降低血清中TNF-α(180.1ng/L)、IL-1β(46.6ng/L)、IL-6(120.1ng/L)和C反應(yīng)蛋白(5.5mg/L)的水平，升高IL-10水平(62.2ng/L)，說明粉刺錦雞兒提取物灌胃給藥能顯著降低類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎動物模型血清中的關(guān)鍵促炎細(xì)胞因子水平并升高抗炎因子水平，可有效緩解RA大鼠的炎癥反應(yīng)。

鑒于上述藥效實(shí)驗(yàn)結(jié)果，本發(fā)明公開的粉刺錦雞兒提取物具有顯著抗類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎活性，因此可用于制備抗類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎藥物或食品。

以上已對本發(fā)明創(chuàng)造的較佳實(shí)施例進(jìn)行了具體說明，但本發(fā)明創(chuàng)造并不限于所述實(shí)施例，熟悉本領(lǐng)域的技術(shù)人員在不違背本發(fā)明創(chuàng)造精神的前提下還可作出種種的等同的變型或替換，這些等同的變型或替換均包含在本申請權(quán)利要求所限定的范圍內(nèi)。