本申請(qǐng)涉及煙草添加劑領(lǐng)域，具體講，涉及一種水果香味提取物的制備方法及其應(yīng)用。
背景技術(shù)：
卷煙增香保潤(rùn)是促進(jìn)中式卷煙持續(xù)健康發(fā)展的關(guān)鍵技術(shù)，對(duì)于提升中式卷煙品質(zhì)、增強(qiáng)市場(chǎng)競(jìng)爭(zhēng)力具有重要意義。改善卷煙產(chǎn)品的香氣特性和舒適性，凸顯品牌風(fēng)格，一直以來是卷煙制造業(yè)孜孜以求的努力方向。在報(bào)道的研究中，大多水果類提取物都是較好的煙用香精香料的香原料，將其添加到卷煙煙絲中可以起到增甜、增香的效果，但會(huì)帶來刺激、殘留及煙氣粗糙等不利效應(yīng)。
為此，特提出本申請(qǐng)。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
本申請(qǐng)的首要發(fā)明目的在于提出一種水果香味提取物的制備方法。
本申請(qǐng)的第二發(fā)明目的在于提出該制備方法的應(yīng)用。
為了完成本申請(qǐng)的目的，采用的技術(shù)方案為：
本申請(qǐng)涉及一種水果香味提取物的制備方法，所述制備方法制備包括以下步驟：
(1)將水果原料粉碎，然后用乙醇回流提取，過濾取濾渣；
(2)在所述濾渣中加入5～10倍重量的水，然后再加入復(fù)合酶進(jìn)行水解，所述復(fù)合酶中含有蛋白酶和糖類水解酶，所述糖類水解酶選自纖維素酶、果膠酶、葡萄糖苷酶、葡聚糖酶中的至少一種，蛋白酶與糖類水解酶的質(zhì)量比為1：15～60；
(3)將水解產(chǎn)物經(jīng)提純和濃縮即得所述植物果實(shí)香味提取物。
優(yōu)選的，所述水果原料為脫水水果或脂類的質(zhì)量百分含量大于0.25％的新鮮水果；優(yōu)選的，所述脫水水果選自桑葚干，所述新鮮水果選自沙棘果。
優(yōu)選的，所述復(fù)合酶中含有蛋白酶、果膠酶和葡萄糖苷酶；優(yōu)選的，蛋白酶和果膠酶的質(zhì)量比為1：1～8。
優(yōu)選的，所述復(fù)合酶中還含有纖維素酶和葡聚糖酶中的至少一種，優(yōu)選的，纖維素酶和葡聚糖酶中的至少一種與蛋白酶的質(zhì)量比為2.5～4：1。
優(yōu)選的，在步驟(1)中，所述回流提取為采用乙醇回流提取2～8小時(shí)，乙醇的體積百分比濃度為10％～95％。
優(yōu)選的，在步驟(2)中，所述復(fù)合酶的添加量為粉碎后水果原料的干物質(zhì)重量的0.01％～1.5％。
優(yōu)選的，在步驟(2)中，所述水解時(shí)的溫度為30～80℃，所述水解的時(shí)間為2～48小時(shí)。
優(yōu)選的，在步驟(3)中，所述提純的方法為醇沉，優(yōu)選的，醇沉的條件為：將水解后的產(chǎn)物過濾得濾液，加入所述濾液體積1～6倍的乙醇，然后在-10℃～5℃溫度下靜置8～24小時(shí)，其中，乙醇的體積百分比濃度為10％～95％。
優(yōu)選的，在步驟(3)中，所述濃縮的方法為減壓濃縮，優(yōu)選的，減壓濃縮的壓力為-0.1～-0.08MPa，減壓濃縮時(shí)的溫度為38～47℃。
本申請(qǐng)還涉及上述方法制備得到的水果香味提取物在卷煙中的應(yīng)用，優(yōu)選的，所述水果香味提取物添加于煙絲、卷煙紙、濾棒中的至少一種；更優(yōu)選的，所述水果香味提取物添加于煙絲中時(shí)的質(zhì)量百分比含量為0.01％～0.5％，所述水果香味提取物添加于卷煙紙時(shí)的質(zhì)量百分比含量為0.05％～1.0％，所述水果香味提取物添加于濾棒時(shí)的質(zhì)量百分比含量為0.02％～2％。
本申請(qǐng)的技術(shù)方案至少具有以下有益的效果：
本申請(qǐng)通過采用特定的生物酶對(duì)水果進(jìn)行酶解，充分發(fā)揮酶的專一、高效、溫和及活性可調(diào)節(jié)等性能，從而可達(dá)到破壁、提質(zhì)及除雜的效果，有效地快速破壁、促進(jìn)大分子物質(zhì)轉(zhuǎn)化并祛除雜質(zhì)，可提高提取物的純度和產(chǎn)率。
本申請(qǐng)?jiān)诿附馇安捎靡掖蓟亓鞒チ怂械闹愇镔|(zhì)，如水果表面的果蠟、水果內(nèi)所含的脂類物質(zhì)等。由于果蠟和油脂在燃燒過程會(huì)釋放出刺激性氣味，因此，本申請(qǐng)通過先乙醇回流再酶解的工藝可進(jìn)一步提高其應(yīng)用于香煙后的綜合指標(biāo)。
本申請(qǐng)的制備方法制備得到的水果香味提取物可豐富煙香，增加甜感，并卷煙感官保潤(rùn)，采用《卷煙感官舒適性評(píng)價(jià)方法》(YC/T 496-2014)規(guī)定的方法及指標(biāo)進(jìn)行評(píng)價(jià)，采用本申請(qǐng)制備方法制備得到的水果香味提取物添加于香煙后，其綜合評(píng)價(jià)指標(biāo)良好。
本申請(qǐng)的制備工藝簡(jiǎn)單，應(yīng)用范圍廣，適于大規(guī)模推廣使用。
具體實(shí)施方式
下面結(jié)合具體實(shí)施例，進(jìn)一步闡述本申請(qǐng)。應(yīng)理解，這些實(shí)施例僅用于說明本申請(qǐng)而不用于限制本申請(qǐng)的范圍。
本申請(qǐng)涉及一種水果香味提取物的制備方法，具體講，本申請(qǐng)中的水果可選自脫水水果或脂類的質(zhì)量百分含量大于0.25％的新鮮水果。本申請(qǐng)中的脫水水果包括自然干制和人工脫水兩類，人工脫水包括熱風(fēng)干制、微波干制、紅外線及遠(yuǎn)紅外線干制、冷凍真空干制等。
脫水水果為原料具有成本低、不受季節(jié)控制等優(yōu)勢(shì)。桑椹的營(yíng)養(yǎng)豐富，并且中醫(yī)還認(rèn)為桑椹具有補(bǔ)益肝腎，滋陰養(yǎng)血，息風(fēng)的功效。由于桑葚不易保存，因此常制備成脫水水果進(jìn)行保存。因此在本申請(qǐng)中，脫水水果優(yōu)選桑葚。
某些水果中的脂類物質(zhì)含量較為豐富，這些水果往往具有與一般水果不同的風(fēng)味和功效。本申請(qǐng)的制備方法優(yōu)選脂類物質(zhì)的質(zhì)量百分含量大于0.25％的新鮮水果，這是由于，如果脂類物質(zhì)含量過低，則其對(duì)提取物在用于卷煙后的影響不大，不需要采用本申請(qǐng)的先乙醇回流再酶解的工藝。而當(dāng)脂類物質(zhì)的質(zhì)量百分含量大于0.25％后，如果不將其去除，會(huì)大大影響提取物的用于卷煙后的品質(zhì)，產(chǎn)生刺激性氣味。例如，沙棘果富含多種維生素、有機(jī)酸、黃酮及微量元素，具有很高的營(yíng)養(yǎng)和藥用價(jià)值，其脂類物質(zhì)含量一般為0.26％～2.9％。因此在本申請(qǐng)中，新鮮水果優(yōu)選沙棘果。
本申請(qǐng)的制備方法制備包括以下步驟：
首先，將水果粉碎，然后用乙醇回流提取，過濾取濾渣；回流提取為采用10％～95％乙醇回流提取2～8小時(shí)，從而可除去水果表面的果蠟、水果內(nèi)所含的脂類物質(zhì)等。申請(qǐng)采用乙醇回流的方法不僅能提取目標(biāo)產(chǎn)物，還可以對(duì)酶起到滅活的作用。因此，本申請(qǐng)中不再需要專門設(shè)置加熱滅酶的步驟，從而簡(jiǎn)化了生產(chǎn)工藝。
其次，在濾渣中加入5～10倍重量的水，然后再加入復(fù)合酶進(jìn)行水解；本申請(qǐng)的復(fù)合酶中含有蛋白酶和糖類水解酶；在本申請(qǐng)中的糖類水解酶是指將雙糖或者多糖進(jìn)行水解的酶；具體選自纖維素酶、果膠酶、葡萄糖苷酶、葡聚糖酶中的至少一種；在本申請(qǐng)的復(fù)合酶條件下，不僅將水果中的糖類物質(zhì)如果膠、纖維素、半纖維素、木質(zhì)素等物質(zhì)分解，還可將水果中的蛋白質(zhì)成分水解成多肽及游離氨基酸成分，當(dāng)水果香味提取物應(yīng)用于卷煙時(shí)，可增加其水果的甜潤(rùn)感，減少煙氣的焦灼感和粗糙感，降低刺激和殘留。并且由于脂類物質(zhì)的去除，可使酶解更加充分。
在本申請(qǐng)中，蛋白酶與糖類水解酶的質(zhì)量比為1：15～60；優(yōu)選的，蛋白酶與糖類水解酶的質(zhì)量比為1：16～55。本申請(qǐng)通過實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，在本申請(qǐng)比例范圍內(nèi)的復(fù)合酶在水解新鮮水果后，所獲得的水果香味提取物應(yīng)用于卷煙后可豐富煙香、增加甜感和潤(rùn)感，使綜合感官感受最佳。
作為本申請(qǐng)制備方法的一種改進(jìn)，復(fù)合酶中含有蛋白酶、果膠酶和葡萄糖苷酶。其中，葡萄糖苷酶是糖苷水解酶大家族中的一大類酶，主要功能為水解葡萄糖苷鍵，釋放出葡萄糖作為產(chǎn)物；果膠酶是指分解果膠質(zhì)的酶類。
作為本申請(qǐng)制備方法的一種改進(jìn)，蛋白酶和果膠酶的質(zhì)量比為1：1～8。
作為本申請(qǐng)制備方法的一種改進(jìn)，復(fù)合酶中還含有纖維素酶和葡聚糖酶中的至少一種，以進(jìn)一步增加酶解的效果。
作為本申請(qǐng)制備方法的一種改進(jìn)，纖維素酶和葡聚糖酶中的至少一種與蛋白酶的質(zhì)量比為2.5～4：1。在該范圍內(nèi)，可將水果內(nèi)的糖類物質(zhì)進(jìn)一步充分水解，并最大限度保留其香味物質(zhì)。
作為本申請(qǐng)制備方法的一種改進(jìn)，復(fù)合酶的添加量為粉碎后水果原料的干物質(zhì)重量的0.01％～1.5％，優(yōu)選為0.3～1.5％。如果添加量過小則酶解反應(yīng)不能充分完成，反應(yīng)不完全，如果添加量過大不僅造成酶原料的浪費(fèi)，并且，酶本身也是一種蛋白質(zhì)，添加的蛋白質(zhì)過多也會(huì)影響吸味品質(zhì)。因此，本申請(qǐng)中對(duì)各種酶的含量和比例均進(jìn)行了深入研究，最終確定本比例可將水果酶解至吸味品質(zhì)最佳。
作為本申請(qǐng)制備方法的一種改進(jìn)，水解時(shí)的溫度為30～80℃，優(yōu)選為40～60℃；水解的時(shí)間為2～48小時(shí)，優(yōu)選為4～24小時(shí)。
最后，本申請(qǐng)將水解產(chǎn)物經(jīng)提純和濃縮即得水果香味提取物。
作為本申請(qǐng)制備方法的一種改進(jìn)，提純的方法為醇沉。
作為本申請(qǐng)制備方法的一種改進(jìn)，醇沉的條件為：將水解后的產(chǎn)物過濾得濾液，加入濾液體積1～6倍的乙醇，然后在-10℃～5℃溫度下靜置8～24小時(shí)，其中，乙醇的體積百分比濃度為10％～95％。采用該范圍內(nèi)的醇沉條件可進(jìn)一步提高提取物的產(chǎn)率。
作為本申請(qǐng)制備方法的一種改進(jìn)，濃縮的方法為減壓濃縮。
作為本申請(qǐng)制備方法的一種改進(jìn)，減壓濃縮的壓力為-0.1～-0.08MPa，減壓濃縮時(shí)的溫度為38～47℃。本申請(qǐng)采用了低溫減壓濃縮，從而可最大限度保留提取物的香味。
本申請(qǐng)還涉及該制備方法所制備得到的水果香味提取物在卷煙中的應(yīng)用。
優(yōu)選的，水果香味提取物添加于煙絲、卷煙紙、濾棒中的至少一種；水果香味提取物添加于煙絲中，可實(shí)現(xiàn)對(duì)卷煙感官保潤(rùn)、豐富煙香、增加甜感，最大限度降低了刺激、殘留，煙氣粗糙等負(fù)面效應(yīng)。水果香味提取物添加于卷煙紙和/或?yàn)V棒中時(shí)，由于未經(jīng)與煙絲混合，因此消費(fèi)者在未點(diǎn)燃香煙前就可嗅到卷煙紙和/或?yàn)V棒中的果香，從而增加了消費(fèi)者的感官體驗(yàn)。
進(jìn)一步優(yōu)選的，水果香味提取物添加于煙絲中時(shí)的質(zhì)量百分比含量為0.01％～0.5％，添加于卷煙紙時(shí)的質(zhì)量百分比含量為0.05％～1.0％，添加于濾棒時(shí)的質(zhì)量百分比含量為0.02％～2％。如果添加量過低，則保潤(rùn)效果及香煙中的甜香感不足，如果添加量過大，對(duì)保潤(rùn)效果無進(jìn)一步增強(qiáng)的趨勢(shì)，并且還會(huì)對(duì)香煙的口味帶來一些影響。
下面以桑葚干和新鮮沙棘果為例，詳細(xì)描述本申請(qǐng)的技術(shù)方案。
本申請(qǐng)涉及一種桑葚提取物的制備方法，包括以下步驟：
首先，將桑葚干粉碎，并過40～50目，加入乙醇回流提取2～8小時(shí)；乙醇的體積百分比濃度為10～95％；所加入乙醇的重量為桑葚干粉末的2～5倍；優(yōu)選的，乙醇的體積百分比濃度為50～70％；提取時(shí)間為4～6小時(shí)。
其次，在桑葚濾渣中加入5～10倍重量的水，然后再加入復(fù)合酶進(jìn)行水解；復(fù)合酶中含有蛋白酶和糖類水解酶；蛋白酶與糖類水解酶的質(zhì)量比為1：15～60；優(yōu)選的，蛋白酶與糖類水解酶的質(zhì)量比為1：20～40。本申請(qǐng)通過實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，在本申請(qǐng)比例范圍內(nèi)的復(fù)合酶在水解桑葚后，所獲得的桑葚提取物應(yīng)用于卷煙后可豐富煙香、增加甜感和潤(rùn)感，使綜合感官感受最佳。
優(yōu)選的，復(fù)合酶中含有蛋白酶、果膠酶和葡萄糖苷酶。更優(yōu)選的，蛋白酶和果膠酶的質(zhì)量比為1：1～8，并進(jìn)一步優(yōu)選1：5～8。其中，所使用蛋白酶的酶活為5萬(wàn)U/g，所采用果膠酶酶活為50U/g，葡萄糖苷酶酶活為10萬(wàn)U/ml。
優(yōu)選的，復(fù)合酶中還含有纖維素酶和葡聚糖酶中的至少一種，以進(jìn)一步增加酶解的效果。所使用纖維素酶的酶活為1.5萬(wàn)U/g，所采用葡聚糖酶的酶活為200U/g。
優(yōu)選的，纖維素酶和葡聚糖酶中的至少一種與蛋白酶的質(zhì)量比為2.5～4：1，優(yōu)選3～4：1。
優(yōu)選的，復(fù)合酶的添加量為粉碎后桑葚干中干物質(zhì)重量的0.01％～1.0％，優(yōu)選為0.1～1.0％。
優(yōu)選的，水解時(shí)的溫度為30～60℃，優(yōu)選為40～50℃；水解的時(shí)間為4～24小時(shí)，優(yōu)選為4～6小時(shí)。
最后，本申請(qǐng)將水解產(chǎn)物經(jīng)提純和濃縮即得桑葚提取物。
其中，提純的方法為醇沉，醇沉的條件為：將水解后的產(chǎn)物過濾得濾液，加入濾液體積3～6倍的乙醇，然后在-10℃～5℃溫度下靜置12～24小時(shí)，乙醇的體積百分比濃度為90％～95％。
其中，濃縮的方法為減壓濃縮，減壓濃縮的壓力為-0.1～-0.08MPa，減壓濃縮時(shí)的溫度為38～47℃，當(dāng)濃縮液的比重為1.000±0.005g/cm3時(shí)，停止?jié)饪s，即得本申請(qǐng)的桑葚提取物。桑葚提取物的產(chǎn)率為粉碎后桑葚中干物質(zhì)重量的2～5％。
本申請(qǐng)還涉及一種沙棘果提取物的制備方法，包括以下步驟：
首先，將新鮮沙棘果粉碎，加入乙醇回流提取2～8小時(shí)；乙醇的體積百分比濃度為10～95％；所加入乙醇的重量為沙棘果干重的2～5倍；優(yōu)選的，乙醇的體積百分比濃度為40～60％；提取時(shí)間為4～6小時(shí)。
其次，在沙棘果濾渣中加入5～10倍重量的水，然后再加入復(fù)合酶進(jìn)行水解；復(fù)合酶中含有蛋白酶和糖類水解酶；蛋白酶與糖類水解酶的質(zhì)量比為1：16～60；優(yōu)選的，蛋白酶與糖類水解酶的質(zhì)量比為1：16～45。本申請(qǐng)通過實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，在本申請(qǐng)比例范圍內(nèi)的復(fù)合酶在水解沙棘果后，所獲得的沙棘果提取物應(yīng)用于卷煙后可豐富煙香、增加甜感和潤(rùn)感，使綜合感官感受最佳。
優(yōu)選的，復(fù)合酶中含有蛋白酶、果膠酶和葡萄糖苷酶。更優(yōu)選的，蛋白酶和果膠酶的質(zhì)量比為1：1～8，并進(jìn)一步優(yōu)選1：1～7。其中，所使用蛋白酶的酶活為5×104U/g，所采用果膠酶酶活為50U/g，葡萄糖苷酶酶活為105U/ml。
優(yōu)選的，復(fù)合酶中還含有纖維素酶和葡聚糖酶中的至少一種，以進(jìn)一步增加酶解的效果。所使用纖維素酶的酶活為1.5×104U/g，所采用葡聚糖酶的酶活為200U/g。
優(yōu)選的，纖維素酶和葡聚糖酶中的至少一種與蛋白酶的質(zhì)量比為2～4：1，優(yōu)選2～3：1。
優(yōu)選的，復(fù)合酶的添加量為粉碎后沙棘果中干物質(zhì)重量的0.01％～1.0％，優(yōu)選為0.1～1.0％。
優(yōu)選的，水解時(shí)的溫度為30～60℃，優(yōu)選為40～50℃；水解的時(shí)間為4～24小時(shí)，優(yōu)選為4～8小時(shí)。
最后，本申請(qǐng)將水解產(chǎn)物經(jīng)提純和濃縮即得沙棘果提取物。
其中，提純的方法為醇沉，醇沉的條件為：將水解后的產(chǎn)物過濾得濾液，加入濾液體積3～6倍的乙醇，然后在-10℃～5℃溫度下靜置12～24小時(shí)，乙醇的體積百分比濃度為90％～95％。
其中，濃縮的方法為減壓濃縮，減壓濃縮的壓力為-0.1～-0.08MPa，減壓濃縮時(shí)的溫度為38～47℃。當(dāng)濃縮液的比重為1.000±0.005g/cm3時(shí)，停止?jié)饪s，即得本申請(qǐng)的沙棘果提取物。沙棘果提取物的產(chǎn)率為粉碎后沙棘果中干物質(zhì)重量的2～5％。
除上述公開的沙棘果和桑葚外，本申請(qǐng)的制備工藝還可用于其它水果的提取，限于篇幅不再贅述。
實(shí)施例1
(1)將沙棘果風(fēng)凈后，用粉碎機(jī)粉碎至50目，稱取100克沙棘粉末置于250mL圓底燒瓶中，用2倍量的40％乙醇回流提取6小時(shí)，過濾后，保留濾渣備用；
(2)在沙棘果濾渣中加入5倍重量的水，然后再加入蛋白酶0.03g、果膠酶0.04g、葡萄糖苷酶1.2g、纖維素酶0.08g后，將圓底燒瓶置于40±1C°水浴鍋中，攪拌反應(yīng)8小時(shí)；所使用蛋白酶的酶活為5×104U/g，果膠酶酶活為50U/g，葡萄糖苷酶酶活為105U/ml，纖維素酶的酶活為1.5×104U/g；
(3)待冷卻后，過濾，取濾液；
(4)加入60g95％乙醇，于-5℃條件下，自然沉降10小時(shí)；
(5)過濾，取濾液，將濾液在壓力為-0.09±0.01MPa，溫度為40±2℃條件下進(jìn)行減壓濃縮，使?jié)饪s液比重達(dá)到1.000±0.005g/cm3，即為酶解反應(yīng)型煙用沙棘提取物A。沙棘提取物的產(chǎn)率為沙棘漿料中干物質(zhì)重量的4.3％。
實(shí)施例2
(1)將沙棘果風(fēng)凈后，用粉碎機(jī)粉碎至60目，稱取100克沙棘果漿置于250mL圓底燒瓶中；用2倍量的60％乙醇回流提取4小時(shí)，過濾后，保留濾渣備用；
(2)在沙棘果濾渣中加入10倍重量的水，然后再按100g沙棘果漿中的干物質(zhì)重加入蛋白酶0.03g、果膠酶0.2g、葡萄糖苷酶0.2g、葡聚糖酶0.08g后，將圓底燒瓶置于50±1C°水浴鍋中，攪拌反應(yīng)4小時(shí)；所使用蛋白酶的酶活為5×104U/g，果膠酶酶活為50U/g，葡萄糖苷酶酶活為105U/ml，葡聚糖酶的酶活為200U/g；
(3)待冷卻后，過濾，取濾液；
(4)加入80g90％乙醇，于-5℃條件下，自然沉降24小時(shí)；
(5)過濾，取濾液，將濾液在壓力為-0.10±0.01MPa，溫度為45±2℃條件下進(jìn)行減壓濃縮，使?jié)饪s液比重達(dá)到1.000±0.005g/cm3，即為酶解反應(yīng)型煙用沙棘提取物B。沙棘提取物的產(chǎn)率為沙棘漿料中干物質(zhì)重量的4.4％。
實(shí)施例3
(1)將桑椹干風(fēng)凈后，粉碎至40目，稱取100克桑椹粉末置于250mL圓底燒瓶中，用2倍量的50％乙醇回流提取4小時(shí)，過濾后，保留濾渣備用；
(2)在桑椹濾渣中加入6倍重量的水，然后再加入蛋白酶0.02g、果膠酶0.15g、葡萄糖苷酶0.24g、葡聚糖酶0.06g后，將圓底燒瓶置于50±1C°水浴鍋中，攪拌反應(yīng)4小時(shí)；所使用蛋白酶的酶活為5×104U/g，果膠酶酶活為50U/g，葡萄糖苷酶酶活為105U/ml，葡聚糖酶的酶活為200U/g；
(3)待冷卻后，過濾，取濾液；
(4)加入80g95％乙醇，于-5℃條件下，自然沉降12小時(shí)；
(5)過濾，取濾液，將濾液在壓力為-0.10±0.01MPa，溫度為40±2℃條件下進(jìn)行減壓濃縮，使?jié)饪s液比重達(dá)到1.000±0.005g/cm3，即為酶解反應(yīng)型煙用桑椹提取物C。桑葚提取物的產(chǎn)率為桑葚漿料中干物質(zhì)重量的4.5％。
實(shí)施例4
(1)將桑椹干風(fēng)凈后，粉碎至60目，稱取100克桑椹粉末置于250mL圓底燒瓶中，用2倍量的60％乙醇回流提取6小時(shí)，過濾后，保留濾渣備用；
(2)在桑椹濾渣中加入8倍重量的水，然后再加入蛋白酶0.02g、果膠酶0.15g、葡萄糖苷酶0.20g、葡聚糖酶0.08g后，將圓底燒瓶置于50±經(jīng)濟(jì)1C°水浴鍋中，攪拌反應(yīng)6小時(shí)；所使用蛋白酶的酶活為5×104U/g，果膠酶酶活為50U/g，葡萄糖苷酶酶活為105U/ml，葡聚糖酶的酶活為200U/g；
(3)待冷卻后，過濾，取濾液；
(4)加入80g90％乙醇，于-5℃條件下，自然沉降24小時(shí)；
(5)過濾，取濾液，將濾液在壓力為-0.10±0.01MPa，溫度為45±2℃條件下進(jìn)行減壓濃縮，使?jié)饪s液比重達(dá)到1.000±0.005g/cm3，即為酶解反應(yīng)型煙用桑椹提取物D。桑葚提取物的產(chǎn)率為桑葚漿料中干物質(zhì)重量的4.3％。
實(shí)驗(yàn)例1
將實(shí)施例1和2制備得到的沙棘提取物A和B，分別加入煙絲中、涂布到卷煙紙上和添加到濾棒中，添加比例詳見表1，空白對(duì)照分別加入相同份量的蒸餾水(編號(hào)分別為CK11、CK22、CK33)。由具有感官評(píng)價(jià)資質(zhì)的卷煙感官評(píng)價(jià)專家(9人)盲評(píng)，依據(jù)卷煙感官保潤(rùn)的行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)(卷煙感官舒適性評(píng)價(jià)方法YC/T 496-2014)進(jìn)行評(píng)吸。評(píng)吸結(jié)果請(qǐng)見表2。
表1提取物使用比例及編號(hào)
表2感官評(píng)價(jià)效果
實(shí)驗(yàn)例2
將實(shí)施例3、4制備得到的桑葚提取物A和B，分別加入煙絲中、涂布到卷煙紙上和添加到濾棒中，添加比例詳見表3，空白對(duì)照分別加入相同份量的蒸餾水(編號(hào)分別為CK11、CK22、CK33)。由具有感官評(píng)價(jià)資質(zhì)的卷煙感官評(píng)價(jià)專家(9人)盲評(píng)，依據(jù)卷煙感官保潤(rùn)的行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)(卷煙感官舒適性評(píng)價(jià)方法YC/T 496-2014)進(jìn)行評(píng)吸。評(píng)吸結(jié)果請(qǐng)見表4。
表3提取物使用比例及編號(hào)
表4感官評(píng)價(jià)效果
綜合以上分析可知，采用本申請(qǐng)方法制備的酶解反應(yīng)型煙用提取物在卷煙感官保潤(rùn)、提高卷煙舒適性方面效果明顯。
對(duì)比例1：
采用與實(shí)施例1中同一批次的水果原料進(jìn)行如下對(duì)比實(shí)驗(yàn)：
按照實(shí)施例1的方法制備沙棘果提取物，區(qū)別僅在于不添加蛋白酶，制備得到的沙棘果提取物AD1；
按照實(shí)施例1的方法制備沙棘果提取物，區(qū)別僅在于僅添加蛋白酶，制備得到的沙棘果提取物AD2；
按照實(shí)施例1的方法制備沙棘果提取物，區(qū)別僅在于復(fù)合酶的組成為：蛋白酶0.03g、果膠酶0.3g；制備得到的沙棘果提取物AD3；
按照實(shí)施例1的方法制備沙棘果提取物，區(qū)別僅在于復(fù)合酶的組成為：蛋白酶0.03g、果膠酶0.015g、葡萄糖苷酶0.4g；制備得到的沙棘果提取物AD4；
按照實(shí)施例1的方法制備沙棘果提取物，區(qū)別僅在于復(fù)合酶的組成為：蛋白酶0.03g、果膠酶0.3g、纖維素酶0.03g；制備得到的沙棘果提取物AD5；
按照實(shí)施例1的方法制備沙棘果提取物，區(qū)別僅在于復(fù)合酶的組成為：蛋白酶0.03g、果膠酶0.15g、葡萄糖苷酶0.15g，制備得到的沙棘果提取物AD6。
將上述對(duì)比例制備得到的沙棘果提取物AD1～AD6，分別加入煙絲中，添加比例同實(shí)驗(yàn)例1，空白對(duì)照分別加入相同份量的蒸餾水，編號(hào)為CK11。由具有感官評(píng)價(jià)資質(zhì)的卷煙感官評(píng)價(jià)專家(9人)盲評(píng)，依據(jù)卷煙感官保潤(rùn)的行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)(卷煙感官舒適性評(píng)價(jià)方法YC/T 496-2014)進(jìn)行評(píng)吸。評(píng)吸結(jié)果請(qǐng)見表5。
表5：
對(duì)比例2：
采用與實(shí)施例3中同一批次的水果原料進(jìn)行如下對(duì)比實(shí)驗(yàn)：
按照實(shí)施例3的方法制備桑葚提取物，區(qū)別僅在于不添加蛋白酶，制備得到的桑葚提取物CD1；
按照實(shí)施例1的方法制備桑葚提取物，區(qū)別僅在于僅添加蛋白酶，制備得到的桑葚提取物CD2；
按照實(shí)施例1的方法制備桑葚提取物，區(qū)別僅在于復(fù)合酶的組成為：蛋白酶0.02g、果膠酶0.2g；制備得到的桑葚提取物CD3；
按照實(shí)施例1的方法制備桑葚提取物，區(qū)別僅在于復(fù)合酶的組成為：蛋白酶0.02g、果膠酶0.08g、葡聚糖酶0.12g；制備得到的桑葚提取物CD4；
按照實(shí)施例1的方法制備桑葚提取物，區(qū)別僅在于復(fù)合酶的組成為：蛋白酶0.02g、果膠酶0.18g、葡聚糖酶0.1g；制備得到的桑葚提取物CD5；
按照實(shí)施例1的方法制備桑葚提取物，區(qū)別僅在于復(fù)合酶的組成為：蛋白酶0.02g、果膠酶0.18g、葡萄糖苷酶0.1g；制備得到的桑葚提取物CD6。
將上述對(duì)比例制備得到的桑葚提取物CD1～CD6，分別加入煙絲中，添加比例同實(shí)驗(yàn)例1，空白對(duì)照分別加入相同份量的蒸餾水，編號(hào)為CK11。由具有感官評(píng)價(jià)資質(zhì)的卷煙感官評(píng)價(jià)專家(9人)盲評(píng)，依據(jù)卷煙感官保潤(rùn)的行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)(卷煙感官舒適性評(píng)價(jià)方法YC/T 496-2014)進(jìn)行評(píng)吸。評(píng)吸結(jié)果請(qǐng)見表6。
表6：
根據(jù)上述吸評(píng)結(jié)果可知，本申請(qǐng)制備工藝下得到的桑葚提取物，其吸評(píng)效果最佳，而對(duì)比例中改變本申請(qǐng)的工藝參數(shù)，均對(duì)吸評(píng)效果帶來不良影響，影響卷煙感官保潤(rùn)、舒適性方面的效果。
對(duì)比例3
采用與實(shí)施例1中同一批次的水果原料進(jìn)行如下對(duì)比實(shí)驗(yàn)：
按照實(shí)施例1的方法制備沙棘果提取物，區(qū)別僅在于：在步驟1中，不進(jìn)行回流提取，制備得到的沙棘果提取物AD7；
按照實(shí)施例1的方法制備沙棘果提取物，區(qū)別僅在于：在步驟2中，酶解時(shí)間為24小時(shí)，制備得到的沙棘果提取物AD8；
按照實(shí)施例1的方法制備沙棘果提取物，區(qū)別僅在于：在步驟2中，酶解溫度為60℃，制備得到的沙棘果提取物AD9；
按照實(shí)施例1的方法制備沙棘果提取物，區(qū)別僅在于：在步驟4中，乙醇的濃度為50％，制備得到的沙棘果提取物AD10；
按照實(shí)施例1的方法制備沙棘果提取物，區(qū)別僅在于：在步驟5中，減壓濃縮的溫度為50℃，制備得到的沙棘果提取物AD11。
將上述對(duì)比例制備得到的沙棘果提取物AD7～AD11，并計(jì)算沙棘果提取物收率。分別加入煙絲中，添加比例同實(shí)驗(yàn)例1，空白對(duì)照分別加入相同份量的蒸餾水，編號(hào)為CK11。由具有感官評(píng)價(jià)資質(zhì)的卷煙感官評(píng)價(jià)專家(9人)盲評(píng)，依據(jù)卷煙感官保潤(rùn)的行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)(卷煙感官舒適性評(píng)價(jià)方法YC/T 496-2014)進(jìn)行評(píng)吸。評(píng)吸結(jié)果請(qǐng)見表7。
表7：
根據(jù)上述吸評(píng)結(jié)果和收率可知，本申請(qǐng)制備工藝下得到的桑葚提取物，不僅吸評(píng)效果最佳，還可保證產(chǎn)率，從而提高企業(yè)利潤(rùn)，具有重要的商業(yè)價(jià)值。而對(duì)比例中改變本申請(qǐng)的工藝參數(shù)，不僅對(duì)吸評(píng)效果帶來不良影響，還造成產(chǎn)率的降低。
本申請(qǐng)雖然以較佳實(shí)施例公開如上，但并不是用來限定權(quán)利要求，任何本領(lǐng)域技術(shù)人員在不脫離本申請(qǐng)構(gòu)思的前提下，都可以做出若干可能的變動(dòng)和修改，因此本申請(qǐng)的保護(hù)范圍應(yīng)當(dāng)以本申請(qǐng)權(quán)利要求所界定的范圍為準(zhǔn)。