本發(fā)明涉及一種石菖蒲提取物及其制備方法和應(yīng)用。

背景技術(shù)：

石菖蒲是中藥中為數(shù)不多的幾味芳香開竅藥之一，其常用于醒腦開竅，改善學(xué)習(xí)記憶的中藥配方中。據(jù)文獻(xiàn)記載，石菖蒲的主要藥效學(xué)作用包括：①.對中樞神經(jīng)系統(tǒng)的影響：鎮(zhèn)靜催眠、抗驚厥、益智健腦；②.對心血管系統(tǒng)的影響：抑制血小板聚集、增強(qiáng)血小板變形能力、抗心率失常、減慢心率；③.對消化系統(tǒng)的影響：抑制胃腸肌電活動；④.對免疫功能的影響：提高正常小鼠血清IgG含量、胸腺重量、血清補(bǔ)體C3含量以及巨嗜細(xì)胞的吞噬功能等。石菖蒲與中樞神經(jīng)系統(tǒng)有關(guān)的藥理藥效研究報道有：①.水提液主要興奮中腦和大腦，而揮發(fā)油既興奮脊髓、又有抑制中腦和大腦的作用；②.去油煎劑、總揮發(fā)油和α、β-細(xì)辛醚都對小鼠的學(xué)習(xí)記憶有改善作用；③.水煎液有一定的抗抑郁作用；④.可以明顯提高膽堿乙?；D(zhuǎn)移酶的活性，促進(jìn)乙酰膽堿的合成，這可能是石菖蒲改善學(xué)習(xí)記憶作用的環(huán)節(jié)之一。因此，很有必要對石菖蒲進(jìn)行深入研究，以期開發(fā)為臨床有效的中樞神經(jīng)系統(tǒng)的治療藥物。在專利一種石菖蒲提取物、含其藥物組合物及其制備方法和應(yīng)用(授權(quán)公告號：CN101785816B)和一種石菖蒲提取物及其制備方法和應(yīng)用(授權(quán)公告號：CN101721567B)中研究了石菖蒲經(jīng)過水提醇沉后所得沉淀的藥用效果，但是均未提及醇沉后所得上清液的醫(yī)用價值。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供了一種石菖蒲提取物及其制備方法和應(yīng)用。本方法制得的石菖蒲提取物具有顯著的改善學(xué)習(xí)和記憶能力的效果。

本發(fā)明提供了一種石菖蒲提取物的制備方法，其包含如下步驟：將經(jīng)水 提醇沉的石菖蒲藥材提取物的上清液，用大孔吸附樹脂吸附，洗脫樹脂，得洗脫液，即可。

其中，所述的石菖蒲藥材為本領(lǐng)域常規(guī)用來制備石菖蒲提取物的石菖蒲藥材。所述水提醇沉的方法和條件可參照本領(lǐng)域常規(guī)提取石菖蒲提取物的方法和條件。較佳地，將石菖蒲藥材和水混合提取后，收集提取液；向所述提取液中加醇類溶劑，沉降，收集上清液，即為本發(fā)明所述的經(jīng)水提醇沉的石菖蒲藥材提取物的上清液。本發(fā)明特別優(yōu)選以下條件：在所述水提的過程中，水的用量較佳地為石菖蒲質(zhì)量的6～10倍，更佳地為6～8倍，最佳地為8倍；所述的水提的提取溫度較佳地為90℃～100℃；所述的水提的提取時間較佳地為30～120分鐘，更佳地為60～120分鐘；所述的水提的提取次數(shù)較佳地為1～4次，更佳地為2～3次，最佳地為3次。

較佳地，在所述的醇沉之前，將提取液按本領(lǐng)域常規(guī)的濃縮方法進(jìn)行濃縮，如減壓濃縮；較佳地，將所述的提取液濃縮至1mL/1g石菖蒲藥材～2mL/1g石菖蒲藥材為止，更佳地濃縮至1mL/1g石菖蒲藥材，收集濃縮液。

在所述的醇沉的過程中，所述的醇類溶劑為本領(lǐng)域常規(guī)的石菖蒲水提醇沉所用醇類溶劑，較佳地為乙醇；所述的乙醇較佳地為95％乙醇，百分?jǐn)?shù)為體積百分?jǐn)?shù)；所述的醇類溶劑的加入量較佳地為在所述的醇類溶劑與所述的濃縮液的混合溶液中，加入至含有65～80％的醇類溶劑，更佳地為含有65～75％的醇類溶劑，百分?jǐn)?shù)均為體積百分?jǐn)?shù)；所述的沉降的時間較佳地為加入醇類溶劑后沉降8～12小時；所述的上清液的收集方法可參照本領(lǐng)域常規(guī)方法，如：離心收集上清液。

在本發(fā)明所述的石菖蒲提取物的制備方法中，較佳地，將所述的上清液濃縮至干并和水混合溶解后，再用大孔吸附樹脂吸附。所述的濃縮可按本領(lǐng)域常規(guī)的濃縮方法進(jìn)行操作，如減壓濃縮；所述的水的用量為0.2mL/1g石菖蒲藥材～0.5mL/1g石菖蒲藥材。

所述的用大孔吸附樹脂吸附可參照本領(lǐng)域常規(guī)的樹脂吸附方法，本發(fā)明特別優(yōu)選以下條件：所述的大孔吸附樹脂較佳地為D101大孔吸附樹脂，更 佳地為D101大孔吸附樹脂柱；所述的D101大孔吸附樹脂柱的徑高比較佳地為1:4～1:12，更佳地為1:8～1:12；所述的用大孔吸附樹脂吸附的上樣流速較佳地為1～2BV/h，更佳地為1～1.5BV/h。所述的大孔吸附樹脂的用量較佳地為0.5mL樹脂/1g石菖蒲藥材～1mL樹脂/1g石菖蒲藥材，更佳地為0.6mL樹脂/1g石菖蒲藥材。

所述洗脫樹脂的方法和條件可參照本領(lǐng)域常規(guī)樹脂洗脫的方法和條件，較佳地，用樹脂洗脫劑洗脫吸附后的大孔吸附樹脂，收集樹脂洗脫液，即可。本發(fā)明特別優(yōu)選以下條件：所述的樹脂洗脫劑較佳地為水，所述樹脂洗脫劑的用量較佳地為4～6倍樹脂體積，更佳地為5倍樹脂體積。

本發(fā)明所述的石菖蒲提取物制備方法較佳地還包括活性炭吸附步驟：將所述樹脂洗脫液用活性炭吸附，洗脫活性炭，收集活性炭洗脫液，干燥，即可。

較佳地，在所述的樹脂洗脫液用活性炭吸附之前，將所述的樹脂洗脫液按本領(lǐng)域常規(guī)的濃縮方法進(jìn)行濃縮，如減壓濃縮。較佳地，將樹脂洗脫液濃縮至0.2mL/1g石菖蒲藥材～0.5mL/1g石菖蒲藥材為止。

所述的用活性炭吸附的方法和條件可參照本領(lǐng)域常規(guī)活性炭吸附的方法，本發(fā)明優(yōu)選以下條件：所述的活性炭較佳地為活性炭柱，徑高比較佳地為1:4～1:12，更佳地為1:8～1:12；所述的活性炭吸附的上樣流速較佳地為1～2BV/h，更佳地為1～1.5BV/h?；钚蕴康挠昧枯^佳地為0.5mL活性炭/1g石菖蒲藥材～1mL活性炭/1g石菖蒲藥材，更佳地為0.6mL活性炭/1g石菖蒲藥材。

所述的洗脫活性炭的方法和條件可參照本領(lǐng)域常規(guī)洗脫活性炭的方法和條件，較佳地，用不同活性炭洗脫劑依次洗脫吸附后的活性炭，收集活性炭洗脫液，即可。本發(fā)明特別優(yōu)選以下條件：所述的不同活性炭洗脫劑較佳地為水和乙醇水溶液；所述的乙醇水溶液較佳地為體積分?jǐn)?shù)為30％的乙醇水溶液；所述的洗脫活性炭較佳地用所述的水洗脫活性炭后再用所述的乙醇水溶液洗脫活性炭；所述的水的用量較佳地為3～5倍活性炭體積，更佳地為4 倍活性炭體積；所述的乙醇水溶液的用量較佳地為3～5倍活性炭體積，更佳地為4倍活性炭體積；所述的收集活性炭洗脫液較佳地收集30％乙醇水溶液的活性炭洗脫液。

所述的干燥可按本領(lǐng)域常規(guī)干燥方法操作，較佳地為減壓濃縮后干燥。

在不違背本領(lǐng)域常識的基礎(chǔ)上，上述各優(yōu)選條件，可任意組合，即得本發(fā)明各較佳實例。

本發(fā)明提供了采用上述石菖蒲提取物制備方法制得的石菖蒲提取物。

本發(fā)明涉及上述石菖蒲提取物在制備用于提高學(xué)習(xí)和記憶能力的藥物、食品或保健品中的應(yīng)用。

本發(fā)明進(jìn)一步涉及上述石菖蒲提取物在制備用于預(yù)防和治療老年癡呆癥藥物中的應(yīng)用。

本發(fā)明所用試劑和原料均市售可得。

本發(fā)明的積極進(jìn)步效果在于：本發(fā)明從石菖蒲水提醇沉后的上清液中獲得了一種石菖蒲提取物，該提取物具有顯著的改善學(xué)習(xí)和記憶能力的效果，為制備提高學(xué)習(xí)和記憶能力的藥物、食品和保健品，以及治療老年癡呆癥藥物提供了新途徑。

本發(fā)明提供的石菖蒲提取物的制備工藝，還可以增加活性炭的吸附作用，提高了石菖蒲提取物的得率，更適合于工業(yè)化大生產(chǎn)。

具體實施方式

下面通過實施例的方式進(jìn)一步說明本發(fā)明，但并不因此將本發(fā)明限制在所述的實施例范圍之中。下列實施例中未注明具體條件的實驗方法，按照常規(guī)方法和條件，或按照商品說明書選擇。

實施例1 石菖蒲提取物的制備

取石菖蒲藥材3.0kg，加入6倍量水，100℃下提取1小時，提取3次，過濾合并提取液，60℃減壓濃縮至約3L，即濃縮至約1mL/g藥材，加入95％乙醇至乙醇濃度為70％，沉降8h，離心取上清液，濃縮至無醇味，離心取 上清液，濃縮至干，并加1000mL水使溶解，溶液上D101大孔吸附樹脂，樹脂用量為0.6mL樹脂/1g石菖蒲藥材，即1800mL樹脂，柱徑高比為1:8，上樣流速為1.0BV/h，上樣結(jié)束后，用5BV去離子水洗脫樹脂柱，收集水洗脫液，60℃減壓濃縮至約600mL，冷卻后上活性炭，活性炭柱用量為0.6mL活性炭/1g石菖蒲藥材，即1800mL活性炭柱，柱徑高比為1:8，上樣流速為1.0BV/h。上樣結(jié)束后，先用4BV的去離子水洗脫活性炭柱，棄去水洗脫液，再用4BV的30％乙醇洗脫活性炭柱，收集30％乙醇洗脫液，60℃減壓濃縮，干燥，即得樣品20.62g，得率約0.69％。

實施例2 石菖蒲提取物的制備

取石菖蒲藥材5.0kg，加入8倍量水，100℃下提取1小時，提取3次，過濾合并提取液，60℃減壓濃縮至約5L，即濃縮至1mL/1g藥材，加入95％乙醇至乙醇濃度為70％，沉降12h，離心取上清液，濃縮至無醇味，離心取上清液，濃縮至干，并加1500mL水使溶解，溶液上D101大孔吸附樹脂，樹脂用量為0.6mL樹脂/1g石菖蒲藥材，即3000mL樹脂柱，柱徑高比為1:8，上樣流速為1.0BV/h，上樣結(jié)束后，用5BV去離子水洗脫樹脂柱，收集水洗脫液，60℃減壓濃縮至約1000mL，冷卻后上活性炭，活性炭柱用量為0.6mL活性炭/1g石菖蒲藥材，即3000mL，柱徑高比為1:8，上樣流速為1.0BV/h。上樣結(jié)束后，先用4BV的去離子水洗脫活性炭柱，棄去水洗脫液，再用4BV的30％乙醇洗脫活性炭柱，收集30％乙醇洗脫液，60℃減壓濃縮，干燥，即得樣品68.03g，得率約1.36％。

實施例3 石菖蒲提取物的制備

取石菖蒲藥材5.0kg，加入10倍量水，95℃下提取0.5小時，提取4次，過濾合并提取液，60℃減壓濃縮至約10L，即濃縮至2mL/1g藥材，加入95％乙醇至乙醇濃度為65％，沉降12h，離心取上清液，濃縮至無醇味，離心取上清液，濃縮至干，并加2500mL水使溶解，溶液上D101大孔吸附樹脂，樹脂用量為1mL樹脂/1g石菖蒲藥材，即5000mL樹脂柱，柱徑高比為1:4，上樣流速為2.0BV/h，上樣結(jié)束后，用4BV去離子水洗脫樹脂柱，收集水洗 脫液，60℃減壓濃縮至約2500mL，冷卻后上活性炭，活性炭柱用量為1mL活性炭/1g石菖蒲藥材，即5000mL，柱徑高比為1:4，上樣流速為2.0BV/h。上樣結(jié)束后，先用3BV的去離子水洗脫活性炭柱，棄去水洗脫液，再用3BV的30％乙醇洗脫活性炭柱，收集30％乙醇洗脫液，60℃減壓濃縮，干燥，即得樣品55.26g，得率約1.11％。

實施例4 石菖蒲提取物的制備

取石菖蒲藥材3.0kg，加入10倍量水，90℃下提取2小時，提取1次，過濾合并提取液，60℃減壓濃縮至約6L，即濃縮至2mL/1g藥材，加入95％乙醇至乙醇濃度為80％，沉降10h，離心取上清液，濃縮至無醇味，離心取上清液，濃縮至干，并加900mL水使溶解，溶液上D101大孔吸附樹脂，樹脂用量為0.5mL樹脂/1g石菖蒲藥材，即1500mL樹脂柱，柱徑高比為1:12，上樣流速為1.5BV/h，上樣結(jié)束后，用6BV去離子水洗脫樹脂柱，收集水洗脫液，60℃減壓濃縮至約900mL，冷卻后上活性炭，活性炭柱用量為0.5mL活性炭/1g石菖蒲藥材，即1500mL，柱徑高比為1:12，上樣流速為1.5BV/h。上樣結(jié)束后，先用5BV的去離子水洗脫活性炭柱，棄去水洗脫液，再用5BV的30％乙醇洗脫活性炭柱，收集30％乙醇洗脫液，60℃減壓濃縮，干燥，即得樣品29.18g，得率約0.97％。

實施例5 石菖蒲提取物的制備

取石菖蒲藥材3.0kg，加入6倍量水，100℃下提取2小時，提取2次，過濾合并提取液，60℃減壓濃縮至約3L，即濃縮至1mL/1g藥材，加入95％乙醇至乙醇濃度為75％，沉降12h，離心取上清液，濃縮至無醇味，離心取上清液，濃縮至干，并加600mL水使溶解，溶液上D101大孔吸附樹脂，樹脂用量為0.7mL樹脂/1g石菖蒲藥材，即2100mL樹脂柱，柱徑高比為1:8，上樣流速為1BV/h，上樣結(jié)束后，用5BV去離子水洗脫樹脂柱，收集水洗脫液，60℃減壓濃縮至約1000mL，冷卻后上活性炭，活性炭柱用量為0.7mL活性炭/1g石菖蒲藥材，即2100mL，柱徑高比為1:8，上樣流速為1BV/h。上樣結(jié)束后，先用5BV的去離子水洗脫活性炭柱，棄去水洗脫液，再用5BV 的30％乙醇洗脫活性炭柱，收集30％乙醇洗脫液，60℃減壓濃縮，干燥，即得樣品30.09g，得率約1.00％。

效果實施例1石菖蒲提取物對東莨菪堿所致小鼠記憶獲得障礙的影響

采用記憶獲得障礙模型分別研究實施例1和實施例2制得的石菖蒲提取物對動物記憶障礙的改善作用。實施例1和實施例2制得的石菖蒲提取物分別簡稱為SCPd-1和SCPd-2。

實驗動物采用小鼠。記憶獲得障礙藥理實驗方法：動物經(jīng)口灌胃給藥，陰性對照組和模型組小鼠給予飲用水，多奈哌齊組給予多奈哌齊1.6mg/kg，SCPd-1高劑量組和低劑量組石菖蒲提取物分別給予5g生藥/kg和2.5g生藥/kg的石菖蒲提取物SCPd-1，SCPd-2高劑量組、中劑量和低劑量組分別給予7g生藥/kg、5g生藥/kg和2.5g生藥/kg的石菖蒲提取物SCPd-2，連續(xù)給藥兩周。除陰性對照組外其他組別的小鼠最后一次給藥后1小時，腹腔注射東莨菪堿3mg/kg。30min后，將所有組別小鼠放入跳臺儀內(nèi)適應(yīng)5min。然后通電，動物受到電擊后的正常反應(yīng)是跳回平臺以躲避傷害性刺激，多數(shù)動物可能再次或多次跳至銅柵上，受到電擊后又迅速跳回平臺，如此訓(xùn)練5min。24小時后重測，記錄受電擊的動物數(shù)，第一次跳下平臺的潛伏期和5min內(nèi)的錯誤總數(shù)。

石菖蒲提取物SCPd-1結(jié)果如表1所示，SCPd-2的結(jié)果如表2所示.由表1和表2數(shù)據(jù)可見，石菖蒲提取物SCPd-1和SCPd-2都有明顯的改善小鼠學(xué)習(xí)的作用。

表1.SCPd-1對東莨菪堿所致小鼠記憶獲得障礙的影響(n＝10，)

*P＜0.05，**P＜0.01與模型組相比

表2.SCPd-2對東莨菪堿所致小鼠記憶獲得障礙的影響(n＝10，)

*P＜0.05，**P＜0.01與模型組相比

效果實施例2石菖蒲提取物對乙醇所致小鼠記憶再現(xiàn)障礙的影響

采用記憶再現(xiàn)障礙模型分別研究實施例1和實施例2制得的石菖蒲提取物對動物記憶障礙的改善作用。實施例1和實施例2制得的石菖蒲提取物分別簡稱為SCPd-1和SCPd-2。

記憶再現(xiàn)障礙藥理實驗方法：動物經(jīng)口灌胃給藥，陰性對照組和第模型組小鼠給予飲用水，多奈哌齊組給予多奈哌齊1.6mg/kg，SCPd-1高劑量組 和低劑量組石菖蒲提取物分別給予5g生藥/kg和2.5g生藥/kg的石菖蒲提取物SCPd-1，SCPd-2高劑量組、中劑量和低劑量組分別給予7g生藥/kg、5g生藥/kg和2.5g生藥/kg的石菖蒲提取物SCPd-2，連續(xù)給藥兩周。末次給藥后1小時，所有組別的小鼠分別以避暗法訓(xùn)練一次。將小鼠放入避暗箱內(nèi)，背朝洞口放入明室，同時啟動計時器，動物穿過洞口進(jìn)入暗室受到電擊，計時自動停止。取出小鼠，記錄每鼠從放入明室至進(jìn)入暗室遇到電擊所需的時間，此即潛伏期。24小時后進(jìn)行測試，測試前30min，除陰性對照組外其他組別的小鼠口服給予45％的乙醇溶液(0.1mL/10g)。記錄動物由明室進(jìn)入暗室的潛伏期和5min內(nèi)的電擊次數(shù)(錯誤次數(shù))。

石菖蒲提取物SCPd-1結(jié)果如表3所示，SCPd-2的結(jié)果如表4所示。由表3和表4數(shù)據(jù)可見，石菖蒲提取物SCPd-1和SCPd-2都有明顯的改善小鼠記憶的作用。

表3.SCPd-1對乙醇所致小鼠記憶再現(xiàn)障礙的影響(n＝10，)

*P＜0.05，**P＜0.01與模型組相比

表4.SCPd-2對乙醇所致小鼠記憶再現(xiàn)障礙的影響(n＝10，)

*P＜0.05，**P＜0.01與模型組相比

將本發(fā)明制備的石菖蒲提取物與與授權(quán)專利一種石菖蒲提取物、含其藥物組合物及其制備方法和應(yīng)用(授權(quán)公告號：CN101785816B)中制備的石菖蒲提取物進(jìn)行比較，結(jié)果如對比例1和對比例2所示。

對比例1所述授權(quán)專利的石菖蒲提取物對東莨菪堿所致小鼠記憶獲得障礙的影響

所述授權(quán)專利效果實施例的實驗方法和步驟參照本發(fā)明的效果實施例，不同之處在于，用石杉堿甲替換本發(fā)明使用的多奈哌齊，并且錯誤次數(shù)的統(tǒng)計時間為3min。其實驗結(jié)果如表5所示。

表5.SCP-3對東莨菪堿所致小鼠記憶獲得障礙的影響

^##P<0.01，與空白對照組相比

*P<0.05，**P<0.01，與模型組相比

結(jié)合表1、表2和表5中的數(shù)據(jù)可知，用藥量超過2.5g生藥/kg的SCPd-1、SCPd-2和SCP-3在小鼠記憶獲得障礙的實驗中均有效。特別地，在5min內(nèi)的錯誤總次數(shù)方面，與相應(yīng)的模型組數(shù)據(jù)相比可知，本發(fā)明的提取物均具有明顯區(qū)別，具有顯著的藥效。

對比例2所述授權(quán)專利的石菖蒲提取物對乙醇所致小鼠記憶再現(xiàn)障礙的影響

所述授權(quán)專利效果實施例的實驗方法和步驟參照本發(fā)明的效果實施例，不同之處在于，用石杉堿甲替換本發(fā)明使用的多奈哌齊。其實驗結(jié)果如表6所示。

表6.SCP-3對乙醇所致小鼠記憶再現(xiàn)障礙的影響

^##P<0.01,與空白對照組相比

*P<0.05，**P<0.01，與模型組相比

結(jié)合表3、表4和表6中數(shù)據(jù)可知，用藥量超過5g生藥/kg的SCPd-1、 SCPd-2和SCP-3在小鼠記憶再現(xiàn)障礙的實驗中均有效。特別地，在5min內(nèi)的錯誤總次數(shù)方面，與相應(yīng)的模型組數(shù)據(jù)相比可知，本發(fā)明提取物SCPd-2在2.5g生藥/kg時的數(shù)據(jù)有明顯區(qū)別，具有顯著的藥效。