技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及天然藥物化學技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種神秘果葉提取物及其在制備具有降血糖或降血脂作用的藥物或保健品中的應(yīng)用。

背景技術(shù)：

神秘果，其拉丁學名為Synsepalum dulcificum Daniell，是典型熱帶常綠灌木，

原產(chǎn)地在西非、加納、剛果一帶。20世紀60年代，周恩來總理到西非訪問時，

加納共和國把神秘果作為國禮送給周總理。此后，神秘果開始在我國栽培。

雖然有公開說明神秘果葉子用來泡茶或做菜能調(diào)整高血糖、高血壓、保護心臟、美顏瘦身、排毒通便、控制尿酸、減輕痛風痛證、且能解酒。但尚無利用中藥現(xiàn)代化技術(shù)制備有效部位的報道，本領(lǐng)域技術(shù)人員對于神秘果葉中的降血糖、降血脂的有效部位以及有效成分還不明確，以及如何制備具有很好降血糖、降血脂效果的有效部位仍需研究探索。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是，為了克服現(xiàn)有技術(shù)對神秘果葉有效部位的開發(fā)不足，提供一種神秘果葉提取物。該提取物具有非常顯著的降血糖以及降血脂作用，可以用于制備具有降血糖或降血脂作用的藥物或保健品。

本發(fā)明所要解決的上述技術(shù)問題，通過以下技術(shù)方案予以實現(xiàn)：

一種神秘果葉提取物，采用超臨界二氧化碳萃取方法提取得到，所述超臨界二氧化碳萃取方法為：將神秘果葉粉碎，置于超臨界二氧化碳萃取儀中，控制超臨界二氧化碳萃取儀中的壓力為20~40兆帕，溫度為30~50℃，流速為20~30升/小時，提取時間為1～4 小時。

優(yōu)選地，所述超臨界二氧化碳萃取方法為：將神秘果葉粉碎，置于超臨界二氧化碳萃取儀中，控制超臨界二氧化碳萃取儀中的壓力為35兆帕，溫度為48℃，流速為25升/小時，提取時間為2小時。

優(yōu)選地，所述超臨界二氧化碳萃取方法中加入了提攜劑。

更優(yōu)選地，所述提攜劑是乙醇。

為了得到具有更好的降血糖以及降血脂效果的有效部位，所述的神秘果葉經(jīng)超臨界二氧化碳萃取方法提取后，再大孔吸附樹脂柱層析法富集。

更優(yōu)選地，所述的大孔吸附樹脂柱層析法包含如下步驟：首先將神秘果葉經(jīng)超臨界二氧化碳萃取方法提取后得到的提取物上大孔吸附樹脂柱，然后用體積分數(shù)為30~50%的乙醇洗脫，再用體積分數(shù)為70%~95%的乙醇洗脫，收集體積分數(shù)為70%~95%的乙醇洗脫部位，濃縮、干燥即得所述提取物。

最優(yōu)選地，所述的大孔吸附樹脂柱層析法包含如下步驟：首先將神秘果葉經(jīng)超臨界二氧化碳萃取方法提取后得到的提取物上大孔吸附樹脂柱，然后用體積分數(shù)為45%的乙醇洗脫，再用體積分數(shù)為80%的乙醇洗脫，收集體積分數(shù)為80%的乙醇洗脫部位，濃縮、干燥即得所述提取物。

上述神秘果葉提取物，在制備具有降血糖或降血脂作用的藥物中的應(yīng)用。

上述神秘果葉提取物，在制備具有降血糖或降血脂作用的保健品中的應(yīng)用。

有益效果：本發(fā)明提供了一種利用中藥現(xiàn)代化技術(shù)制備得到的一種全新的神秘果葉提取物，實施例中的實驗數(shù)據(jù)顯示，其具有非常顯著的降血脂以及降血糖作用。

具體實施方式

以下結(jié)合具體實施例來進一步解釋本發(fā)明，但實施例對本發(fā)明不做任何形式的限定。

實施例1

稱取1Kg干燥的神秘果葉粉碎，過60目篩，置于超臨界CO2 萃取儀中，控制超臨界二氧化碳萃取儀中的壓力為35兆帕，溫度為48℃，流速為25升/小時，提取時間為2小時，得神秘果葉臨界CO2 萃取物80.2g。

實施例2

稱取1Kg干燥的神秘果葉粉碎，過60目篩，置于超臨界CO2 萃取儀中，控制超臨界二氧化碳萃取儀中的壓力為35兆帕，溫度為48℃，流速為25升/小時，加入體積分數(shù)為95%的乙醇作為提攜劑，提取時間為2小時，得神秘果葉臨界CO2 萃取物89.7g。

實施例3

稱取1Kg干燥的神秘果葉粉碎，過60目篩，置于超臨界CO2 萃取儀中，控制超臨界二氧化碳萃取儀中的壓力為40兆帕，溫度為50℃，流速為30升/小時，加入體積分數(shù)為95%的乙醇作為提攜劑，提取時間為2小時，得神秘果葉臨界CO2 萃取物84.4g。

實施例4

稱取實施例1 中所得的萃取物40g，溶于體積分數(shù)為95％的乙醇中，超聲波脫氣后，加入D101大孔樹脂柱中，先用體積分數(shù)為45％的乙醇洗脫柱子至流出液無色，再用體積分數(shù)為80％的乙醇水溶液洗脫柱子至流出液無色，收集體積分數(shù)為80％的乙醇水溶液洗脫所得的流份，濃縮干燥得神秘果葉提取物18.5g。

實施例5

稱取實施例1中所得的萃取物40g，溶于體積分數(shù)為95％的乙醇中，超聲波脫氣后，加入D101大孔樹脂柱中，先用體積分數(shù)為30％的乙醇洗脫柱子至流出液無色，再用體積分數(shù)為95％的乙醇水溶液洗脫柱子至流出液無色，收集體積分數(shù)為95％的乙醇水溶液洗脫所得的流份，濃縮干燥得神秘果葉提取物29.3g。

實施例6

稱取實施例1中所得的萃取物40g，溶于體積分數(shù)為95％的乙醇中，超聲波脫氣后，加入D101大孔樹脂柱中，先用體積分數(shù)為50％的乙醇洗脫柱子至流出液無色，再用體積分數(shù)為70％的乙醇水溶液洗脫柱子至流出液無色，收集體積分數(shù)為70％的乙醇水溶液洗脫所得的流份，濃縮干燥得神秘果葉提取物13.7g。

實施例7 降血脂實驗

取SD大鼠90只，雌雄各半，分為正常組(喂普通飼料)、高脂飼料組、實驗組1（實施例1制備得到的提取物）、實驗組2（實施例2制備得到的提取物）、實驗組3（實施例3制備得到的提取物）、實驗組4（實施例4制備得到的提取物）、實驗組5（實施例5制備得到的提取物）、實驗組6（實施例6制備得到的提取物） 、陽性對照組（洛伐他?。┟拷M各為10只，高脂飼料組、實驗組、以及陽性對照組喂養(yǎng)高脂飼料，另外實驗組同時每天按20mg/kg的量喂相應(yīng)實施例制備得到的提取物，陽性對照組每天按3mg/kg的量喂洛伐他汀。

按組別喂養(yǎng)各組大鼠，自由飲水，連續(xù)給藥35天后，處死動物，腹腔靜脈取血，測定血脂。用酶法、沉淀法測定在全自動生化分析儀上測定血清總膽固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白膽固醇和低密度脂蛋白膽固醇含量。實驗結(jié)果如表1所示。

從表1中可以看出，高脂飼料組大鼠血清的TC，TG 和LDL-C 濃度均顯著高于正常飼料組(P <0.01)，HDL-C濃度低于正常飼料組 (P <0.05)說明建模成功。

實驗組1~3大鼠的血清TC，TG 和LDL-C濃度均明顯低于高脂飼料組(P <0.01)；HDL-C的濃度明顯高于高脂飼料組(P <0.05)，說明經(jīng)超臨界萃取得到的神秘果葉提取物具有明顯的降血脂作用。從表1中還可以看出，實驗組4~6大鼠的血清TC，TG 和LDL-C濃度降低得更為明顯，與陽性對照藥洛伐他汀相當，可以應(yīng)用與降血壓的藥物或保健品中。這也說明神秘果葉在經(jīng)超臨界萃取后再通過大孔樹脂柱層析技術(shù)后得到的神秘果葉提取物的降血脂效果進一步提高，效果更顯著。此外，從表1中還可以看出，本發(fā)明提取物的用量為20mg/kg，相比提取物來說，用量相當少了，說明本發(fā)明提取得到了神秘果葉具有降血脂作用的精華部位。

實施例8 降血糖實驗

取80只小鼠(7周齡雄性ICR小鼠)，體重22-25g，除10只作為正常對照組外，其余小鼠均腹腔注射100mg/kg鏈脲佐菌素溶液，72小時后測血糖值，11.1mmol/L 以上者進行實驗，隨機分為5組，即：模型組和實驗組1（實施例1制備得到的提取物）、實驗組2（實施例2制備得到的提取物）、實驗組3（實施例3制備得到的提取物）、實驗組4（實施例4制備得到的提取物）、實驗組5（實施例5制備得到的提取物）、實驗組6（實施例6制備得到的提取物）。每組10只，每天灌胃給藥1次（實驗組每天給藥劑量為20mg/kg），連續(xù)給藥30d，每7d稱體重1次，根據(jù)體重調(diào)整給藥量；分別于第10，20，30d 末次灌胃2h后(禁食12h)，小鼠尾部取血測血糖值。正常對照組及模型對照組灌胃給予等量生理鹽水(10ml/kg)。實驗結(jié)果如表2所述：

從表2中可以看出，模型組小鼠與正常對照組相比，血糖水平明顯升高，說明鏈脲佐菌素造成糖尿病小鼠模型成功。實施例1~3制備的提取物在給藥第10d后小鼠體內(nèi)的血糖含量顯著降低，在給藥后20d和30d后，血糖含量進一步降低。說明實施例1~3制備的提取物具有顯著的降血糖效果。實施例4~6所述的提取物是在實施例1~3經(jīng)二氧化碳超臨界萃取的基礎(chǔ)上進一步用大孔樹脂柱層析技術(shù)精制得到的提取物，從表2數(shù)據(jù)可以看出，其降血糖效果較實施例1~3制備的得到的提取物進一步提高。此外，從表2中還可以看出，本發(fā)明提取物的用量為20mg/kg，相比提取物來說，用量相當少了，說明本發(fā)明提取得到了神秘果葉具有降血糖作用的精華部位。