本申請(qǐng)要求2014年3月17日提交的美國申請(qǐng)系列No.61/954,352的優(yōu)先杈。上述申請(qǐng)的全部內(nèi)容以引用的方式并入本文。
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及施用一種c-Met抑制劑N-(4-{[6，7-雙(甲基氧基)喹啉-4-基]氧基}苯基)-N′-(4-氟苯基)環(huán)丙烷-1，1-二甲酰胺(卡博替尼)及其代謝物的各種藥物制劑以實(shí)現(xiàn)期望的藥代動(dòng)力學(xué)和藥效動(dòng)力學(xué)效果。背景傳統(tǒng)上，癌癥治療方面的顯著改進(jìn)與識(shí)別出通過新型機(jī)制起作用的治療劑相關(guān)聯(lián)。在癌癥治療方面可以利用的一種機(jī)制是調(diào)節(jié)蛋白激酶活性，因?yàn)橥ㄟ^蛋白激酶激活的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)負(fù)責(zé)腫瘤細(xì)胞的許多特性。蛋白激酶信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)在例如甲狀腺癌、胃癌、頭頸癌、肺癌、乳腺癌、前列腺癌和結(jié)直腸癌中以及在腦腫瘤細(xì)胞的生長和增殖中具有特別相關(guān)性。蛋白激酶可以被分類為受體型或非受體型。受體型酪氨酸激酶由大量具有不同生物活性的跨膜受體組成。關(guān)于受體型酪氨酸激酶的詳細(xì)討論，參見Plowman等人，DN&P7(6)：334-339，1994。由于蛋白激酶及其配體在各種細(xì)胞活動(dòng)中發(fā)揮關(guān)鍵作用，因此蛋白激酶的酶活性的失調(diào)可導(dǎo)致細(xì)胞特性改變，如與癌癥相關(guān)聯(lián)的不受控制的細(xì)胞生長。除了腫瘤學(xué)指征之外，在許多其它病理疾病中也牽涉了改變的激酶信號(hào)傳導(dǎo)，包括例如免疫病癥、心血管疾病、炎性疾病和變性疾病。因此，蛋白激酶是小分子藥物研發(fā)的有吸引力的靶標(biāo)。關(guān)于抗血管生成活性和抗增殖活性的小分子調(diào)節(jié)的特別有吸引力的靶標(biāo)包括受體型酪氨酸激酶Ret、c-Met和VEGFR2。激酶c-Met是包括Met、Ron和Sea的異源二聚受體酪氨酸激酶(RTK)亞家族的原型成員。c-Met的內(nèi)源性配體是肝細(xì)胞生長因子(HGF)，一種有效的血管生成誘導(dǎo)物。結(jié)合c-Met的是肝細(xì)胞生長因子(HGF)，即一種有效的血管生成誘導(dǎo)物。HGF對(duì)c-Met的結(jié)合經(jīng)由自磷酸化誘導(dǎo)受體的活化，導(dǎo)致受體依賴性信號(hào)傳導(dǎo)增加，這促進(jìn)了細(xì)胞生長和侵襲。已顯示抗-HGF抗體或HGF拮抗劑抑制體內(nèi)腫瘤轉(zhuǎn)移(參見Maulik等人，Cytokine&GrowthFactorReviews，2002，13，41-59)。已表明c-Met、VEGFR2和/或Ret在很多種腫瘤類型上過表達(dá)，包括乳腺癌、結(jié)腸癌、腎癌、肺癌、鱗狀細(xì)胞骨髓性白血病、血管瘤、黑素瘤和星形細(xì)胞腫瘤(其包括膠質(zhì)母細(xì)胞瘤、巨細(xì)胞膠質(zhì)母細(xì)胞瘤、膠質(zhì)肉瘤和帶有少突膠質(zhì)細(xì)胞組分的膠質(zhì)母細(xì)胞瘤)。Ret蛋白是具有酪氨酸激酶活性的跨膜受體。Ret在甲狀腺髓樣癌的大多數(shù)家族形式中突變。這些突變激活Ret的激酶功能，并將其轉(zhuǎn)化成致瘤形式。因此，特異性抑制、調(diào)控和/或調(diào)節(jié)激酶(特別是包括上述的Ret、c-Met和VEGFR2)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的小分子化合物作為治療或預(yù)防與異常細(xì)胞增殖和血管生成相關(guān)聯(lián)的疾病狀態(tài)的手段是特別可取的。一種這樣的小分子是XL184，別稱為N-(4-{[6，7-雙(甲基氧基)喹啉-4-基]氧基}苯基)-N′-(4-氟苯基)環(huán)丙烷-1，1-二甲酰胺，即卡博替尼，以及作為COMETRIQTM(卡博替尼的S-蘋果酸鹽)。卡博替尼具有以下的化學(xué)結(jié)構(gòu)：在2012年11月，卡博替尼在美國獲得監(jiān)管部門批準(zhǔn)用于治療漸進(jìn)轉(zhuǎn)移性甲狀腺髓樣癌?？ú┨婺岬钠渌R床試驗(yàn)正在進(jìn)行中。WO2005/030140(以引用方式并入本文)描述了卡博替尼的合成(實(shí)施例48)，并且還公開了該分子抑制、調(diào)控和/或調(diào)節(jié)激酶的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的治療活性(測定，表4，條目289)。實(shí)施例48在WO2005/030140的第[0353]段落。仍然需要鑒定用于卡博替尼治療癌癥的藥物制劑和給藥方案。發(fā)明概述本發(fā)明滿足這些及其它需求，本發(fā)明涉及一種c-Met抑制劑N-(4-{[6，7-雙(甲基氧基)喹啉-4-基]氧基}苯基)-N′-(4-氟苯基)環(huán)丙烷-1，1-二甲酰胺(卡博替尼)及其代謝物的各種藥物制劑，用以實(shí)現(xiàn)期望的藥代動(dòng)力學(xué)和藥效動(dòng)力學(xué)效果。在一方面，本發(fā)明涉及包含生理有效量的卡博替尼的藥物制劑，其中對(duì)選定的人受試者組口服施用所述藥物制劑在所述選定的人受試者組中產(chǎn)生：按照遞送的每個(gè)140mg卡博替尼劑量為至少60,000ng·h/mL的平均卡博替尼血漿曲線下面積(平均AUC)；按照遞送的每個(gè)140mg卡博替尼劑量為至少1000ng/mL的平均最大卡博替尼血漿濃度(平均C最大)；和至少0.25的AUC(卡博替尼)與卡博替尼加上測定的卡博替尼代謝物的總和的AUC之比：AUC(卡博替尼)/AUC(卡博替尼+測定的代謝物)；其中測量AUC是從時(shí)間零到最后可測量的濃度的時(shí)間。在另一方面，本發(fā)明涉及包含生理有效量的卡博替尼的藥物制劑，其中對(duì)選定的人受試者組口服施用所述藥物制劑在所述選定的人受試者組中產(chǎn)生：對(duì)于每日一次遞送的包含100mg卡博替尼的制劑為至少35,000ng·h/mL的卡博替尼的穩(wěn)態(tài)曲線下面積(平均AUC)；按照遞送的每個(gè)100mg卡博替尼劑量為至少2400ng/mL的平均最大卡博替尼血漿濃度(平均C最大)；按照遞送的每個(gè)100mg卡博替尼劑量為至少1100ng/mL的平均最小卡博替尼血漿濃度(平均C最大)；和至少0.35的AUC(卡博替尼)與卡博替尼加上測定的卡博替尼代謝物的總和的AUC之比：AUC(卡博替尼)/AUC(卡博替尼+測定的代謝物)；其中在第22天測量AUC。在進(jìn)一步的方面中，本發(fā)明涉及在人類患者中治療癌癥的方法，包括以使得能實(shí)現(xiàn)如下的速率對(duì)所述患者口服施用包含生理有效量的卡博替尼的藥物制劑：按照遞送的每個(gè)140mg卡博替尼劑量為至少60,000ng·h/mL的平均卡博替尼血漿曲線下面積(平均AUC)；按照遞送的每個(gè)140mg卡博替尼劑量為至少1000ng/mL的平均最大卡博替尼血漿濃度(平均C最大)；和至少0.25的AUC(卡博替尼)與卡博替尼加上測定的卡博替尼代謝物的總和的AUC之比：AUC(卡博替尼)/AUC(卡博替尼+測定的代謝物)；其中測量AUC是從時(shí)間零到最后可測量的濃度的時(shí)間。在另一方面，本發(fā)明涉及在人類患者中治療癌癥的方法，包括以使得能實(shí)現(xiàn)如下的速率對(duì)所述患者口服施用包含生理有效量的卡博替尼的藥物制劑：對(duì)于每日一次遞送的包含100mg卡博替尼的制劑為至少35,000ng·h/mL的卡博替尼的穩(wěn)態(tài)曲線下面積(平均AUC)；按照遞送的每個(gè)100mg卡博替尼劑量為至少2400ng/mL的平均最大卡博替尼血漿濃度(平均C最大)；按照遞送的每個(gè)100mg卡博替尼劑量為至少1100ng/mL的平均最小卡博替尼血漿濃度(平均C最大)；和至少0.35的AUC(卡博替尼)與卡博替尼加上測定的卡博替尼代謝物的總和的AUC之比：AUC(卡博替尼)/AUC(卡博替尼+測定的代謝物)；其中在第22天測量AUC。在這些方面中，“代謝物”是指式Ia的化合物具有以下屬性中的一種或多種：a)R1或R2之一是H、SO3H或葡萄糖醛酸部分，且另一者是Me；b)R3是OH或OSO3H；c)R4是O-，條件是當(dāng)R4是O-時(shí)，N是N+；d)R5是OH或OSO3H；且e)R6是OH或OSO3H?！按x物”還指式Ib的化合物其中：a)R1或R2是Me；或者R1或R2之一是H、SO3H或葡萄糖醛酸部分，且另一者是Me；b)R3是H、OH或OSO3H；c)R4不存在或者是O-，條件是當(dāng)R4是O-時(shí)，N是N+；且d)R6是H或Me?！按x物”還指式Ic的化合物其中：a)R5是OH或OSO3H；且b)R6是OH或OSO3H；且c)R7是H、SO3H或葡萄糖醛酸部分。具體地，代謝物包括：其中GA是葡萄糖醛酸部分，如在例如中。具體實(shí)施方式本文中描述的代謝物在下文中可以被稱為“人體代謝物”?？ú┨婺岬娜梭w代謝物包括在根據(jù)關(guān)于給藥和監(jiān)測的臨床方案攝取或施加卡博替尼之后形成在人受試者身體中的卡博替尼的代謝物，包括本文中描述的那些。在各種實(shí)施方案中，該術(shù)語包括體內(nèi)形成的分子物質(zhì)，無論該物質(zhì)是否甚至在特定的試驗(yàn)中被檢測到或分析過。還可預(yù)期一些代謝物是特定的個(gè)體所特有的，這反映了不同的基因構(gòu)成和各種酶的存在及活性，包括參與代謝的細(xì)胞色素P450和UGT酶。因此，人體代謝物涵蓋在人身體中形成的所有這類代謝物。一些人體代謝物描述在方案1中。這些人體代謝物是在卡博替尼的臨床研究期間通過特別是由人血漿、尿和糞便的代謝譜分析鑒定出來的，卡博替尼在方案1中出現(xiàn)為化合物I。方案1本文中描述的卡博替尼代謝物，包括方案1中描述的那些，是自身體組織和體液分離的，和/或根據(jù)技術(shù)人員可用的方法合成制備的。對(duì)組織和體液樣品可進(jìn)行多種分離過程以提供用于進(jìn)一步分析的樣品，如核磁共振、氣相色譜(GC)、液相色譜(LC)和質(zhì)譜法。在這類樣品中，代謝物包含在基本上缺少任何其它代謝物存在的組合物中?？赏ㄟ^物理方法對(duì)存在的代謝物進(jìn)行定量，如由放射性同位素測量核衰變、測量折射率、火焰離子化、離子化和磁場中的偏轉(zhuǎn)、紫外(UV吸收)等?？梢园淳哂邢喈?dāng)純凈程度的結(jié)晶或溶液形式提供人體代謝物。有機(jī)合成路線可供制備相對(duì)純的形式的化合物，例如純度80％或更高、90％或更高、95％或更高或者99％或更高。可實(shí)施重結(jié)晶及其它純化方法以提供基本上100％純的化合物。這類合成方法及純化技術(shù)是本領(lǐng)域中已知的?？梢园椿旧霞兊男问教峁┐x物?！盎旧霞儭北硎敬x物純度足夠FDA許可，并且基本上不含污染物或其它物質(zhì)?；蛘?，“基本上純”表示雜質(zhì)的水平不會(huì)不利地或不可接受地在安全性、有效性、穩(wěn)定性及其它所需性質(zhì)方面影響化合物的性質(zhì)。方案1中描述的分離的代謝物包括：其中GA是葡萄糖醛酸。更具體地，代謝物包括：特別地，分離的代謝物是或其藥學(xué)上可接受的鹽。特別地，分離的代謝物是或其藥學(xué)上可接受的鹽。特別地，分離的代謝物是或其藥學(xué)上可接受的鹽。特別地，分離的代謝物是或其藥學(xué)上可接受的鹽。特別地，分離的代謝物是或其藥學(xué)上可接受的鹽。特別地，分離的代謝物是或其藥學(xué)上可接受的鹽。特別地，分離的代謝物是或其藥學(xué)上可接受的鹽。特別地，分離的代謝物是或其藥學(xué)上可接受的鹽。本發(fā)明中預(yù)期的藥物制劑可選自以下之一：成分(％w/w)卡博替尼25.0-33.3微晶纖維素適量羥丙基纖維素3泊洛沙姆0-3交聯(lián)羧甲纖維素鈉6.0膠體二氧化硅0.5硬脂酸鎂0.5-1.0總計(jì)100成分％w/w卡博替尼12.67MCC51.52乳糖25.76羥丙基纖維素3.0交聯(lián)羧甲纖維素鈉6.0膠體二氧化硅0.3硬脂酸鎂0.75總計(jì)100成分mg/單位劑量卡博替尼25硅化微晶纖維素196.75交聯(lián)羧甲纖維素鈉12.5羥乙酸淀粉鈉12.5氣相法二氧化硅0.75硬脂酸2.5總填充重量250mg/單位劑量成分50mg卡博替尼63.35微晶纖維素95.39交聯(lián)羧甲纖維素鈉9.05羥乙酸淀粉鈉9.05氣相法二氧化硅0.54硬脂酸3.62總填充重量181.00mg/單位劑量成分60mg卡博替尼73.95微晶纖維素114.36交聯(lián)羧甲纖維素鈉10.85羥乙酸淀粉鈉10.85氣相法二氧化硅0.65硬脂酸4.34總填充重量217.00本發(fā)明還涉及藥物制劑，其包含一種或多種抑制CMet或具有其它有益屬性的卡博替尼分離的代謝物。分離的代謝物選自：或其藥學(xué)上可接受的鹽，以及至少一種藥學(xué)上可接受的載體。當(dāng)如本文所述施用藥物制劑時(shí)，其可用于治療癌癥。在典型的實(shí)施方案中，施用是口服的，每日一次，但也可根據(jù)情況需要進(jìn)行調(diào)整。可組合含有不同量的卡博替尼的片劑或膠囊以實(shí)現(xiàn)所需的劑量。例如，140mg卡博替尼劑量將需要施用一個(gè)含有80mg卡博替尼的片劑或膠囊和三個(gè)含有20mg卡博替尼的片劑或膠囊。140mg卡博替尼劑量將需要施用一個(gè)含有80mg卡博替尼的片劑或膠囊和一個(gè)含有20mg卡博替尼的片劑或膠囊。因此，在進(jìn)一步的方面中，本發(fā)明涉及在人類患者中治療癌癥的方法，包括以使得能實(shí)現(xiàn)如下的速率對(duì)所述患者口服施用包含生理有效量的卡博替尼的藥物制劑：按照遞送的每個(gè)140mg卡博替尼劑量為至少60,000ng·h/mL的平均卡博替尼血漿曲線下面積(平均AUC)；按照遞送的每個(gè)140mg卡博替尼劑量為至少1000ng/mL的平均最大卡博替尼血漿濃度(平均C最大)；和至少0.25的AUC(卡博替尼)與卡博替尼加上測定的卡博替尼代謝物的總和的AUC之比：AUC(卡博替尼)/AUC(卡博替尼+測定的代謝物)；其中測量AUC是從時(shí)間零到最后可測量的濃度的時(shí)間。在另一方面，本發(fā)明涉及在人類患者中治療癌癥的方法，包括以使得能實(shí)現(xiàn)如下的速率對(duì)所述患者口服施用包含生理有效量的卡博替尼的藥物制劑：對(duì)于每日一次遞送的包含100mg卡博替尼的制劑為至少35,000ng·h/mL的卡博替尼的穩(wěn)態(tài)曲線下面積(平均AUC)；按照遞送的每個(gè)100mg卡博替尼劑量為至少2400ng/mL的平均最大卡博替尼血漿濃度(平均C最大)；按照遞送的每個(gè)100mg卡博替尼劑量為至少1100ng/mL的平均最小卡博替尼血漿濃度(平均C最大)；和至少0.35的AUC(卡博替尼)與卡博替尼加上測定的卡博替尼代謝物的總和的AUC之比：AUC(卡博替尼)/AUC(卡博替尼+測定的代謝物)；其中在第22天測量AUC?！鞍┌Y”包括的腫瘤類型諸如包括以下的腫瘤類型：乳腺癌、結(jié)腸癌、腎癌、肺癌、鱗狀細(xì)胞骨髓性白血病、血管瘤、黑素瘤、星形細(xì)胞瘤和膠質(zhì)母細(xì)胞瘤以及其它細(xì)胞增殖性疾病狀態(tài)，包括但不限于：心臟：肉瘤(血管肉瘤、纖維肉瘤、橫紋肌肉瘤、脂肪肉瘤)、粘液瘤、橫紋肌瘤、纖維瘤、脂肪瘤和畸胎瘤；肺：支氣管癌(鱗狀細(xì)胞、未分化小細(xì)胞、未分化大細(xì)胞、腺癌)、肺泡(細(xì)支氣管)癌、支氣管腺瘤、肉瘤、淋巴瘤、軟骨錯(cuò)構(gòu)瘤、間皮瘤(inesothelioma)；胃腸道：食管(鱗狀細(xì)胞癌、腺癌、平滑肌肉瘤、淋巴瘤)、胃(癌、淋巴瘤、平滑肌肉瘤)、胰腺(導(dǎo)管腺癌、胰島瘤、胰高血糖素瘤、胃泌素瘤、類癌瘤、血管活性腸肽瘤)、小腸(腺癌、淋巴瘤、類癌瘤、卡波氏肉瘤、平滑肌瘤、血管瘤、脂肪瘤、神經(jīng)纖維瘤、纖維瘤)、大腸(腺癌、管狀腺瘤、絨毛狀腺瘤、錯(cuò)構(gòu)瘤，平滑肌瘤)；泌尿生殖道：腎(腺癌、成腎細(xì)胞瘤[腎母細(xì)胞瘤]、淋巴瘤、白血病、腎細(xì)胞癌)、膀胱和尿道(鱗狀細(xì)胞癌、移行細(xì)胞癌、腺癌)、前列腺(腺癌、肉瘤、前列腺的小細(xì)胞癌)、睪丸(精原細(xì)胞瘤、畸胎瘤、胚胎癌、畸胎癌、絨毛膜癌、肉瘤、間質(zhì)細(xì)胞癌、纖維瘤、纖維腺瘤、腺瘤樣腫瘤、脂肪瘤)；肝：肝癌(肝細(xì)胞癌)、膽管癌、肝母細(xì)胞瘤、血管肉瘤、肝細(xì)胞腺瘤、血管瘤；骨：骨原性肉瘤(骨肉瘤)、纖維肉瘤、惡性纖維組織細(xì)胞瘤、軟骨肉瘤、尤因氏肉瘤、惡性淋巴瘤(網(wǎng)狀細(xì)胞肉瘤)、惡性巨細(xì)胞瘤脊索瘤、骨軟骨瘤(骨軟骨外生骨疣)、良性軟骨瘤、成軟骨細(xì)胞瘤、軟骨粘液樣纖維瘤、骨樣骨瘤和巨細(xì)胞瘤；神經(jīng)系統(tǒng)：顱骨(骨瘤、血管瘤、肉茅腫瘤、黃瘤、畸形性骨炎)、腦膜(腦膜瘤、腦膜肉瘤、神經(jīng)膠質(zhì)過多)、腦(星形細(xì)胞瘤、髓母細(xì)胞瘤、膠質(zhì)瘤、室管膜瘤、生殖細(xì)胞瘤[松果體瘤]、多形性膠質(zhì)母細(xì)胞瘤、少突神經(jīng)膠質(zhì)瘤、神經(jīng)鞘瘤、視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤、先天性腫瘤)、脊髓神經(jīng)纖維瘤、腦膜瘤、膠質(zhì)瘤、肉瘤)；婦科：子宮(子宮內(nèi)膜癌)、宮頸(宮頸癌、腫瘤前期宮頸非典型增生)、卵巢(卵巢癌[漿液性囊腺癌、粘液性囊腺癌、未分類癌]、顆粒-卵泡膜細(xì)胞瘤、塞托利-萊迪希細(xì)胞瘤、無性細(xì)胞瘤、惡性畸胎瘤)、外陰(鱗狀細(xì)胞癌、上皮內(nèi)癌、腺癌、纖維肉瘤、黑素瘤)、陰道(透明細(xì)胞癌、鱗狀細(xì)胞癌、葡萄狀肉瘤(胚胎性橫紋肌肉瘤]、輸卵管(癌)；血液系統(tǒng)：血液(骨髓性白血病[急性和慢性]、急性成淋巴細(xì)胞性白血病、慢性淋巴細(xì)胞性白血病、骨髓增生性疾病、多發(fā)性骨髓瘤、骨髓增生異常綜合征)、霍奇金病、非霍奇金淋巴瘤[惡性淋巴瘤]；皮膚：惡性黑素瘤、基底細(xì)胞癌、鱗狀細(xì)胞癌、卡波氏肉瘤、發(fā)育不良痣、脂肪瘤、血管瘤、皮膚纖維瘤、瘢痕瘤、銀屑??；和腎上腺：神經(jīng)母細(xì)胞瘤；以及甲狀腺的癌癥，包括甲狀腺髓樣癌。因此，如本文所提供的術(shù)語“癌細(xì)胞”包括受上文確定的條件中的任一者侵害的細(xì)胞。在一個(gè)實(shí)施方案中，癌癥選自卵巢癌、前列腺癌、肺癌、甲狀腺髓樣癌、肝癌、胃腸癌、胰腺癌、骨癌、血液癌、皮膚癌、腎癌、乳腺癌、結(jié)腸癌和輸卵管癌。在另一實(shí)施方案中，所述疾病或病癥是卵巢癌。在另一實(shí)施方案中，所述疾病或病癥是前列腺癌。在另一實(shí)施方案中，所述疾病或病癥是肺癌。在另一實(shí)施方案中，所述疾病或病癥是甲狀腺髓樣癌。在另一實(shí)施方案中，所述疾病或病癥是肝癌。在另一實(shí)施方案中，所述疾病或病癥是胃腸癌。在另一實(shí)施方案中，所述疾病或病癥是胰腺癌。在另一實(shí)施方案中，所述疾病或病癥是骨癌。在另一實(shí)施方案中，所述疾病或病癥是血液癌。在另一實(shí)施方案中，所述疾病或病癥是皮膚癌。在另一實(shí)施方案中，所述疾病或病癥是腎癌。在另一實(shí)施方案中，所述疾病或病癥是乳腺癌。在另一實(shí)施方案中，所述疾病或病癥是結(jié)腸癌。在另一實(shí)施方案中，所述疾病或病癥是輸卵管癌。在另一實(shí)施方案中，所述疾病或病癥是肝癌，其中所述肝癌是肝細(xì)胞癌、膽管癌、肝母細(xì)胞瘤、血管肉瘤、肝細(xì)胞腺瘤或血管瘤。在另一實(shí)施方案中，所述疾病或病癥是胃腸癌，其中所述胃腸癌是食道的癌癥，其是鱗狀細(xì)胞癌、腺癌或平滑肌肉瘤；胃的癌癥，其是癌或淋巴瘤；胰腺的癌癥，其是導(dǎo)管腺癌、胰島瘤、胰高血糖素瘤、胃泌素瘤、類癌瘤或血管活性腸肽瘤；小腸的癌癥，其是腺癌、淋巴瘤、類癌瘤、卡波氏肉瘤、平滑肌瘤、血管瘤、脂肪瘤，或大腸的癌癥，其是腺癌、管狀腺瘤、絨毛狀腺瘤、錯(cuò)構(gòu)瘤或平滑肌瘤。在另一實(shí)施方案中，所述疾病或病癥是胰腺的癌癥，其中所述胰腺的癌癥是導(dǎo)管腺癌、胰島瘤、胰高血糖素瘤、胃泌素瘤、類癌瘤或血管活性腸肽瘤。在另一實(shí)施方案中，所述疾病或病癥是骨癌，其中所述骨癌是骨肉瘤、纖維肉瘤、惡性纖維組織細(xì)胞瘤、軟骨肉瘤、尤因氏肉瘤、惡性網(wǎng)狀細(xì)胞肉瘤、多發(fā)性骨髓瘤、惡性巨細(xì)胞瘤脊索瘤、骨軟骨外生骨疣、成軟骨細(xì)胞瘤、軟骨粘液樣纖維瘤或骨樣骨瘤。在另一實(shí)施方案中，所述疾病或病癥是血液癌，其中所述血液癌是骨髓性白血病、急性成淋巴細(xì)胞性白血病、慢性淋巴細(xì)胞性白血病、骨髓增生性疾病、多發(fā)性骨髓瘤或骨髓增生異常綜合征。在另一實(shí)施方案中，所述疾病或病癥是皮膚癌，其中所述皮膚癌是惡性黑素瘤、基底細(xì)胞癌、鱗狀細(xì)胞癌或卡波氏肉瘤。在另一實(shí)施方案中，所述疾病或病癥是腎腫瘤或腎細(xì)胞癌。在另一實(shí)施方案中，所述疾病或病癥是乳腺癌。在另一實(shí)施方案中，所述疾病或病癥是結(jié)腸癌腫瘤。在另一實(shí)施方案中，所述疾病或病癥是輸卵管癌。分離的代謝物的制備可根據(jù)技術(shù)人員可用的方法制出本文公開的分離的代謝物。例如，如方案2中描述的那樣，可采用肽化學(xué)方法由相應(yīng)的胺和羧酸制出酚C-1和C-2。多種工藝和試劑可用于實(shí)現(xiàn)這類轉(zhuǎn)化，并且它們比如在Tetrahedron61(2005)10827-10852中有所描述。代表性的實(shí)例描述于方案2中，其中活化劑是亞硫酰氯、草酰氯等。相應(yīng)的酰氯分別與化合物A或B反應(yīng)，得到酚C-1或C-2。酚C-1或C-2與諸如氯磺酸或三氧化硫-三甲胺復(fù)合物的硫酸化劑在諸如三乙胺、堿金屬氫氧化物等的堿的存在下進(jìn)行后續(xù)反應(yīng)可分別得到相應(yīng)的硫酸氫鹽2b或2a。方案2根據(jù)方案3制備化合物A。使用芐基鹵等(BnX，其中X是Cl、Br或I、甲磺酸根(OMs)、三氟甲磺酸根(OTf)或甲苯磺酸根(OTs))芐化A-1得到芐基保護(hù)的A-2。使用硝酸和硫酸的混合物硝化A-2得到A-3?？刹捎弥T如鐵和乙酸銨的標(biāo)準(zhǔn)硝基還原條件來實(shí)現(xiàn)將A-3中的硝基還原成胺A-4。用甲酸乙酯和諸如甲醇鈉的醇鹽環(huán)化A-4得到A-5。使用氧氯化磷將A-5轉(zhuǎn)化成相應(yīng)的氯化物得到A-6。A-6與4-氨基苯酚反應(yīng)得到A-7，其用甲磺酸去保護(hù)，得到化合物A。方案3類似地，根據(jù)方案4制備化合物B。B-1去甲基化得到B-2。使用芐基鹵等(BnX，其中X是Cl、Br或I、甲磺酸根(OMs)、三氟甲磺酸根(OTf)或甲苯磺酸根(OTs))芐化B-2。使用硝酸和硫酸的混合物硝化B-3得到B-4?？刹捎弥T如鐵和乙酸銨的標(biāo)準(zhǔn)硝基還原條件來實(shí)現(xiàn)將B-4中的硝基還原成胺B-5。用甲酸乙酯和諸如甲醇鈉的醇鹽環(huán)化B-5得到B-6。使用氧氯化磷將B-6轉(zhuǎn)化成相應(yīng)的氯化物得到B-7。B-7與4-氨基苯酚反應(yīng)得到B-8，其用甲磺酸去保護(hù)，得到化合物B。方案4可類似地由化合物7制備酚13和16，化合物7的合成公開在WO2005/030140中(作為實(shí)施例73)。因此，在方案5中，7與2-氨基-5-氟苯酚(CAS登記號(hào)53981-24-1)偶聯(lián)得到(化合物13)。7與5-氨基-2-氟苯酚(CAS登記號(hào)100367-48-4)偶聯(lián)得到(化合物16)。方案5使用例如硫酸化劑(如三氧化硫三甲胺復(fù)合物)在強(qiáng)氫氧化物(如氫氧化鉀、氫氧化鈉等)的存在下或者使用氯磺酸在胺堿(如三乙胺)的存在下可以很容易地將酚13和16轉(zhuǎn)化成方案1中描述的相應(yīng)的硫酸鹽9和12?？赏ㄟ^采用與WO2005/030140中公開用于實(shí)施例43的制備類似的方法制備酚15a和15b。在方案6中，酚C(WO2005/030140中的實(shí)施例38)與三氟甲磺酸鹽D(WO2005/030140中的實(shí)施例33)或氯化物A-6(WO2005/030140中的實(shí)施例32)偶聯(lián)得到E，然后將其在Pd-催化的氫解條件下脫保護(hù)，得到化合物15。類似地，酚C與三氟甲磺酸鹽F或氯化物B-7反應(yīng)得到G，其經(jīng)歷O-芐基脫保護(hù)得到化合物15b。方案6可通過卡博替尼與氧化劑(比如過氧化物、過酸等)反應(yīng)來制備N-氧化物19。在一個(gè)實(shí)施方案中，氧化劑是四水合過硼酸鈉。以下非限制性實(shí)施例旨在說明本發(fā)明。實(shí)施方案實(shí)施方案1。一種藥物制劑，其包含生理有效量的卡博替尼，其中對(duì)選定的人受試者組口服施用所述組合物在所述選定的人受試者組中產(chǎn)生：按照遞送的每個(gè)140mg卡博替尼劑量為至少60,000ng·h/mL的平均卡博替尼血漿曲線下面積(平均AUC)；按照遞送的每個(gè)140mg卡博替尼劑量為至少1000ng/mL的平均最大卡博替尼血漿濃度(平均C最大)；和至少0.25的AUC(卡博替尼)與卡博替尼加上測定的卡博替尼代謝物的總和的AUC之比：AUC(卡博替尼)/AUC(卡博替尼+測定的代謝物)；其中測量AUC是從時(shí)間零到最后可測量的濃度的時(shí)間。實(shí)施方案2。一種藥物制劑，其包含生理有效量的卡博替尼，其中對(duì)選定的人受試者組口服施用所述藥物制劑在所述選定的人受試者組中產(chǎn)生：對(duì)于每日一次遞送的包含100mg卡博替尼的制劑為至少35,000ng·h/mL的卡博替尼的穩(wěn)態(tài)曲線下面積(平均AUC)；按照遞送的每個(gè)100mg卡博替尼劑量為至少2400ng/mL的平均最大卡博替尼血漿濃度(平均C最大)；按照遞送的每個(gè)100mg卡博替尼劑量為至少1100ng/mL的平均最小卡博替尼血漿濃度(平均C最大)；和至少0.35的AUC(卡博替尼)與卡博替尼加上測定的卡博替尼代謝物的總和的AUC之比：AUC(卡博替尼)/AUC(卡博替尼+測定的代謝物)；其中在第22天測量AUC。實(shí)施方案3。如實(shí)施方案1-2所述的藥物制劑，其中測定的代謝物選自由以下組成的組：其中GA是葡萄糖醛酸部分，實(shí)施方案4。如權(quán)利要求1-2所述的藥物制劑，其中測定的代謝物包括以下中的一種或多種：實(shí)施方案5。一種在人類患者中治療癌癥的方法，包括以使得能實(shí)現(xiàn)如下的速率對(duì)所述患者口服施用包含生理有效量的卡博替尼的藥物制劑：按照遞送的每個(gè)140mg卡博替尼劑量為至少60,000ng·h/mL的平均卡博替尼血漿曲線下面積(平均AUC)；按照遞送的每個(gè)140mg卡博替尼劑量為至少1000ng/mL的平均最大卡博替尼血漿濃度(平均C最大)；和至少0.25的AUC(卡博替尼)與卡博替尼加上測定的卡博替尼代謝物的總和的AUC之比：AUC(卡博替尼)/AUC(卡博替尼+測定的代謝物)；其中測量AUC是從時(shí)間零到最后可測量的濃度的時(shí)間。實(shí)施方案6。一種在人類患者中治療癌癥的方法，包括以使得能實(shí)現(xiàn)如下的速率對(duì)所述患者口服施用包含生理有效量的卡博替尼的藥物制劑：對(duì)于每日一次遞送的包含100mg卡博替尼的制劑為至少35,000ng·h/mL的卡博替尼的穩(wěn)態(tài)曲線下面積(平均AUC)；按照遞送的每個(gè)100mg卡博替尼劑量為至少2400ng/mL的平均最大卡博替尼血漿濃度(平均C最大)；按照遞送的每個(gè)100mg卡博替尼劑量為至少1100ng/mL的平均最小卡博替尼血漿濃度(平均C最大)；和至少0.35的AUC(卡博替尼)與卡博替尼加上測定的卡博替尼代謝物的總和的AUC之比：AUC(卡博替尼)/AUC(卡博替尼+測定的代謝物)；其中在第22天測量AUC。實(shí)施方案7。如實(shí)施方案5-6所述的方法，其中測定的代謝物選自由以下組成的組：其中GA是葡萄糖醛酸部分，實(shí)施方案8。如實(shí)施方案5-7所述的方法，其中測定的代謝物包括以下中的一種或多種：實(shí)施方案9。如實(shí)施方案5-8所述的方法，其中所述癌癥選自卵巢癌、肺癌、甲狀腺髓樣癌、肝癌、胃腸癌、胰腺癌、骨癌、血液癌、皮膚癌、腎癌、乳腺癌、結(jié)腸癌和輸卵管癌。實(shí)施方案10。如實(shí)施方案1-4或權(quán)利要求5-9的實(shí)施方案所述的藥物制劑，其中施用是每日一次的。實(shí)施例卡博替尼代謝物的鑒定本研究的目的是譜分析和鑒定人血漿、尿和糞便中的卡博替尼的代謝物。血漿、尿和糞便樣品收集自在健康男性受試者中單次175mg口服施用含[14C]卡博替尼(100μCi)的卡博替尼(L-蘋果酸鹽)之后的質(zhì)量平衡研究。研究設(shè)計(jì)及血漿、尿和糞便取樣八位男性受試者參與研究，并且每位受試者接受的單次口服劑量為含有[14C]-卡博替尼(100μCi)的175mg卡博替尼(L-蘋果酸鹽)。自8位受試者收集血漿、尿和糞便樣品用于代謝物譜分析。在給藥前、給藥后0.5、1、2、3、4、5、8、14、24、72、168、336、504和648小時(shí)收集血漿樣品；在給藥前、0-8小時(shí)、8-24小時(shí)、按24小時(shí)間隔到給藥后480小時(shí)以及按大于48小時(shí)間隔從給藥后504至1152小時(shí)收集尿樣品；并且在給藥前、按24小時(shí)間隔到給藥后480小時(shí)以及按大于48小時(shí)間隔從給藥后504至1152小時(shí)收集糞便樣品。將所有樣品送到QPSLLC(Newark，DE)并在-70℃下貯藏。耦合有放射流通型檢測器(RFD)的HPLC/串聯(lián)MS用于代謝物譜分析和鑒定具有足夠放射性水平的樣品。采用HPLC級(jí)分收集繼之以用TopCountNXTTM計(jì)數(shù)來對(duì)具有足夠放射性水平的血漿樣品進(jìn)行放射定量。在此項(xiàng)研究中采用三(3)種HPLC方法分離卡博替尼及其代謝物。HPLC方法1用于分析匯集的尿和糞便樣品以及來自不同時(shí)間點(diǎn)的個(gè)別血漿樣品。HPLC方法2用于分析來自藥物-藥物相互作用研究的血漿樣品，以搜索可與硫酸卡博替尼共洗脫的可能的代謝物。HPLC方法3用于匯集的血漿樣品。分析來自6位受試者的血漿、尿和糞便的選定樣品的卡博替尼及代謝物并記錄。來自2位受試者的樣品用于調(diào)查研究。測試制品用于此項(xiàng)研究的測試制品是[14C]卡博替尼和卡博替尼的混合物。星號(hào)指示[14C]標(biāo)記的位置。如WO2005/030140中所提供的那樣制備[14C]標(biāo)記的卡博替尼，不同的是使用[14C]標(biāo)記的4-氨基苯酚代替未標(biāo)記的4-氨基苯酚。[14C]標(biāo)記的4-氨基苯酚以鹽酸鹽市售，例如購自HartmannAnalytic、AmericanRadiolabeledChemicals或FisherScientific。一般化學(xué)品和參考標(biāo)準(zhǔn)甲酸和乙酸銨得自Sigma-AldrichChemicalCo.(St.Louis，MO)。乙腈(B&J牌，不含羰基，用于對(duì)痕量醛和酮敏感的應(yīng)用)、水(B&J牌，用于GC、HPLC和分光光度法)和甲醇(HPLC級(jí))購自FisherScientific(Pittsburgh，PA)。使用ElgastatUHQPS水純化系統(tǒng)生成I型水。由Exelixis，Inc提供非放射性標(biāo)記的代謝物標(biāo)準(zhǔn)物(氟苯胺裂解產(chǎn)物、硫酸卡博替尼和卡博替尼N-氧化物)。生物樣品收集血漿、尿和糞便樣品收集自在健康男性受試者中單次175mg口服施用含[14C]卡博替尼(100μCi)的卡博替尼(L-蘋果酸鹽)之后的卡博替尼質(zhì)量平衡研究。將樣品在干冰上從Celerion(Lincoln，NE)送到QPSLLC(Newark，DE)并且在-70℃下貯藏直至分析。來自6位受試者的樣品用于代謝物譜分析、鑒定和放射定量。來自2位受試者的血漿樣品僅用在作為共洗脫代謝物調(diào)查的一部分的關(guān)聯(lián)研究中。人血漿的樣品制備和放射性回收率為進(jìn)行代謝物譜分析、鑒定及放射定量，對(duì)6位受試者在給藥后0.5、1、2、3、4、5、8、14、24、72、168和336小時(shí)收集的個(gè)別放射性標(biāo)記的血漿樣品進(jìn)行處理并分析。為調(diào)查共洗脫代謝物，匯集、處理并分析給藥前、給藥后1-7、8-96和120-336小時(shí)六位受試者的非放射性標(biāo)記的血漿樣品。為將來自人質(zhì)量平衡研究的代謝物數(shù)據(jù)從非放射性標(biāo)記的血漿樣品關(guān)聯(lián)到放射性標(biāo)記的血漿樣品，還采用Hamilton匯集方法對(duì)六位受試者中的每一位匯集來自給藥后0-168小時(shí)的[14C]血漿樣品，進(jìn)行處理并通過放射定量進(jìn)行分析。對(duì)兩位受試者匯集來自給藥后1-168小時(shí)的[14C]血漿樣品(等體積)，進(jìn)行處理并分析。血漿提取和回收的初始方法將來自受試者的兩個(gè)血漿樣品(給藥后4和72小時(shí))用于初始提取和回收測定。質(zhì)量平衡研究中的每個(gè)血漿樣品的總放射性由Exelixis，Inc.提供并定義為100％。將樣品在生物罩(biologicalhood)下解凍后，將每個(gè)血漿樣品的兩個(gè)0.5mL等分試樣添加到3體積(1.5mL)的MeOH∶ACN(20∶80，v/v)中并渦旋(5分鐘)。將混合物以2000rpm離心10分鐘，并將上清液轉(zhuǎn)移到清潔的管中。用兩個(gè)另外3體積的MeOH∶CAN(20∶80，v/v)提取團(tuán)粒。將混合物離心并將上清液合并。通過2900TR液體閃爍計(jì)數(shù)器(LSC)(PackardInstruments，Meridian，CT)分析等分試樣。如下計(jì)算提取回收率：提取回收率(％)＝(上清液中的DPM/血漿樣品中的DPM)x100在環(huán)境水浴中于氮?dú)饬飨聦碜蕴崛〉纳锨逡赫舭l(fā)至干。然后將殘留物在0.35-0.5mL的MeOH∶ACN∶水(10∶20∶70，v/v/v)中復(fù)溶。將復(fù)溶的樣品以15,000rpm離心10分鐘，并通過LSC對(duì)等分試樣進(jìn)行復(fù)溶回收率分析。復(fù)溶回收率(％)＝(復(fù)溶溶液中的DPM/上清液中的DPM)x100血漿樣品制備根據(jù)樣品的可用體積和放射性水平情況，使用1.0-2mL血漿樣品，采用相同的方法提取放射性標(biāo)記和非放射性標(biāo)記的血漿樣品。在環(huán)境水浴中于氮?dú)饬飨聦⑸锨逡赫舭l(fā)至干，并且將殘留物在0.35-0.5mL的MeOH∶ACN∶水(10∶20∶70，v/v/v)中復(fù)溶。將復(fù)溶的樣品以15,000rpm離心10分鐘。將上清液的等分試樣注射到HPLC系統(tǒng)上用于分析。人尿的樣品制備和放射性回收率將來自受試者的匯集尿樣品(給藥后0-72、168-192和312-336小時(shí))一式三份凍干(各4mL)，并將殘留物在1mL的水∶ACN∶FA(80∶20∶0.1，v/v/v)中復(fù)溶。采用LSC對(duì)匯集的尿和復(fù)溶溶液中的放射性進(jìn)行計(jì)數(shù)并計(jì)算復(fù)溶回收率。為進(jìn)行代謝物譜分析、鑒定和放射定量，對(duì)來自六位受試者中的每一位的給藥前及3個(gè)匯集的尿樣品(給藥后0-72小時(shí)、168-192小時(shí)和312-336小時(shí))進(jìn)行分析。將每個(gè)匯集的尿樣品凍干，將殘留物在水∶ACN∶FA(80∶20∶0.1，v/v/v)中復(fù)溶，并在分析前將復(fù)溶的樣品以15,000rpm離心10分鐘。人尿的樣品制備和放射性回收率為了評(píng)估糞便樣品的提取回收率，將兩個(gè)來自受試者的糞便勻漿樣品在生物罩下解凍。精確地稱量出大約5.5-6g糞便勻漿用于提取。對(duì)糞便勻漿添加15mL的ACN∶MeOH(80∶20)。將混合物渦旋3分鐘并以3000rpm離心10分鐘。將上清液轉(zhuǎn)移到清潔的管中。再重復(fù)兩次提取程序。將來自所有三次提取的上清液合并。通過LSC確定合并的上清液中的放射性。使用下式計(jì)算提取回收率：提取回收率(％)＝(上清液中的DPM/糞便勻漿中的DPM)x100在環(huán)境溫度下在氮?dú)饬飨聺饪s上清液，并將殘留物在MeOH∶ACN∶水(10∶20∶70)中復(fù)溶。用LSC對(duì)復(fù)溶溶液的等分試樣進(jìn)行計(jì)數(shù)以用于復(fù)溶回收率。復(fù)溶回收率(％)＝(復(fù)溶溶液中的DPM/上清液中的DPM)x100總回收率(％)＝提取回收率(％)x復(fù)溶回收率(％)/100為了進(jìn)行代謝物譜分析、鑒定和放射定量，采用相同的提取回收程序?qū)碜粤皇茉囌咧械拿恳晃坏慕o藥前及3個(gè)匯集的糞便樣品(給藥后0-72、168-192和312-336小時(shí))進(jìn)行提取。在氮?dú)饬飨赂稍锷锨逡?，并將殘留物在水∶ACN∶FA(80∶20∶0.1，v/v/v)中復(fù)溶。在分析前將復(fù)溶的樣品以15,000rpm離心10分鐘。HPLC柱回收率實(shí)施HPLC柱回收以證明采用HPLC方法1從柱中有效地洗脫所有的放射性組分。將尿樣品的等分試樣(受試者1042，給藥后24-48小時(shí))注射到有或沒有柱的HPLC系統(tǒng)上，并將0-30分鐘的洗脫液收集到清潔的50mL離心管里。收集后得到來自每次注射的洗脫液的重量，并采用LSC對(duì)一式兩份的等分試樣(1mL)進(jìn)行計(jì)數(shù)。將計(jì)數(shù)的平均值用于計(jì)算在有或沒有安裝柱的情況下在收集的洗脫液中所含有的總放射性。柱回收率(％)＝(有柱情況下洗脫液中的DPM/沒有柱情況下洗脫液中的DPM)x100HPLC方法3僅用于匯集的血漿，且由于可用的樣品體積有限，沒有進(jìn)行柱回收。HPLC/MS/RFD和HPLC放射分析系統(tǒng)用于代謝物譜分析和鑒定的系統(tǒng)(HPLC/MS/RFD)由HTCPAL自動(dòng)進(jìn)樣器、SurveyorHPLC泵、LTQ線性離子阱質(zhì)譜儀和β-RAM3型RFD構(gòu)成。分別由Xcalibur和LauraLite3軟件處理通過質(zhì)譜法和RFD得到的數(shù)據(jù)。將HPLC洗脫液以3比1的比例在RFD與質(zhì)譜儀之間拆分。以下是HPLC、質(zhì)譜儀和RFD的條件的匯總。HPLC/MS/RFD方法1HPLC/MS方法2HPLC/MS方法3用于高分辨率MS的HPLC-MS系統(tǒng)由MichromBioresourcesParadigmMS4BHPLC和ThermoLTQOrbitrapDiscovery質(zhì)譜儀構(gòu)成。色譜條件和離子源參數(shù)與LTQ系統(tǒng)的HPLC方法1相同。按質(zhì)心模式獲得30000分辨率的數(shù)據(jù)。HPLC/TopCountNXTTM系統(tǒng)用于血漿樣品的放射定量。該系統(tǒng)由HTCPAL自動(dòng)進(jìn)樣器、兩個(gè)ShimadzuHPLC泵和FoxyJr.級(jí)分收集器(Isco，Lincoln，NE)構(gòu)成。使用EZ-2plus個(gè)人蒸發(fā)器(Genevac，ValleyCottage，NewYork)對(duì)收集在LumaPlateTM96孔板中的HPLC級(jí)分進(jìn)行干燥，并通過TopCountNXTTM微型板閃爍及發(fā)光計(jì)數(shù)器對(duì)干燥的樣品進(jìn)行計(jì)數(shù)。使用ProFSA軟件處理數(shù)據(jù)。HPLC方法與如上所述的相同。代謝物鑒定根據(jù)以下方法鑒定基質(zhì)中代表超過總放射性的5％或總AUC的5％的代謝物。在離子阱質(zhì)譜儀上獲得由Exelixis，Inc.提供的卡博替尼及其代謝物標(biāo)準(zhǔn)物的質(zhì)譜(MS、MS/MS和MS/MS/MS)。建議了主要碎片模式。這些代謝物的鑒定通過質(zhì)譜(MS和MS/MS)和滯留時(shí)間與真實(shí)參考標(biāo)準(zhǔn)的匹配得到確認(rèn)。對(duì)于其它未知的代謝物，在與LC-放射色譜圖上所見相同的滯留時(shí)間下以全掃描正電離模式以及負(fù)電離模式操作，在LC/MS色譜圖上搜索分子離子。然后對(duì)于相應(yīng)的分子離子獲得產(chǎn)物離子質(zhì)譜和高分辨率質(zhì)譜。基于它們的質(zhì)量碎片模式的分析提出了假定代謝物結(jié)構(gòu)?？ú┨婺峒捌浯x物的定量由各基質(zhì)在不同的時(shí)間點(diǎn)或時(shí)間間隔定量匯集的或個(gè)別的樣品中的卡博替尼及其代謝物是基于在它們的放射色譜圖上所見的相應(yīng)峰的整合。對(duì)于血漿樣品，針對(duì)每個(gè)峰在每個(gè)時(shí)間點(diǎn)計(jì)算樣品中總放射性的百分比并轉(zhuǎn)換成ng/mL。對(duì)于血漿中的卡博替尼及其代謝物的定量：ng/mL＝(總放射性的％)×(總ng當(dāng)量/該時(shí)間點(diǎn)的mL)/100由人質(zhì)量平衡研究的結(jié)果得到總ng當(dāng)量/mL的值。對(duì)于匯集的尿樣品，針對(duì)每個(gè)峰將匯集的樣品中的總放射性的百分比計(jì)算為匯集的樣品中的總非母峰的％：匯集的樣品中的總非母峰的％＝(峰的總放射性/非母峰的總放射性)x100對(duì)于匯集的糞便樣品，針對(duì)每個(gè)峰將匯集的樣品中的總放射性的百分比計(jì)算為匯集的樣品中的總非母峰加上母峰的百分比：匯集的樣品中的總非母峰加上母峰的％＝(峰的總放射性/母峰和非母峰的總放射性)x100針對(duì)每個(gè)峰將匯集的樣品中的總放射性的百分比轉(zhuǎn)換成匯集的樣品中的母峰的百分比：匯集的樣品中的母峰的％＝(峰的總放射性/母峰的總放射性)x100放射性檢測器的定量極限被定義為放射色譜圖上的信噪比(3比1)。對(duì)于TopCount和β-RAM放射流通型檢測器，定量的下限分別為10和500dpm。結(jié)果和討論放射性回收率使用來自受試者在給藥后4小時(shí)和72小時(shí)用三體積MeOH∶ACN(20∶80)提取三次的血漿樣品確定初始提取回收率。來自4和72小時(shí)樣品的放射性的平均回收率分別為98.43％和94.99％。全部弄干并復(fù)溶到MeOH∶ACN溶液當(dāng)中后，復(fù)溶回收率分別為92.73％和85.90％?？偦厥章史謩e為91.27％和81.60％。使用來自受試者給藥后0-8、24-48、72-96和120-144小時(shí)樣品的尿離心回收率在102％與104％的范圍之間。使用來自受試者的匯集的樣品，凍干后尿復(fù)溶回收率為94.7％。對(duì)于來自給藥后0-48小時(shí)匯集的糞便樣品，提取、復(fù)溶及總回收率分別為98.48％、88.80％和87.37％。對(duì)于給藥后120-168小時(shí)匯集的糞便樣品，提取、復(fù)溶及總回收率分別為85.85％、87.69％和75.24％。對(duì)于尿樣品來自HPLC柱的放射性回收率為97.05％。對(duì)血漿、尿和糞便放射定量未應(yīng)用校正因子解釋回收率。代謝物譜分析在受試者中，卡博替尼化合物9((硫酸卡博替尼)和化合物19(卡博替尼N-氧化物)是放射色譜圖上的主峰?；衔?(去甲基化和硫酸化氟苯胺裂解產(chǎn)物)是給藥后72小時(shí)后血漿樣品中的主要代謝物。代謝物化合物7(氟苯胺裂解產(chǎn)物)對(duì)應(yīng)的是次峰之一。采用HPLC方法1，代謝物化合物7、3(去甲基卡博替尼葡糖苷酸B)、9和10(氟苯胺裂解產(chǎn)物的甲酯)共洗脫。從受試者收集來自給藥后0-72小時(shí)、144-192小時(shí)和288-336小時(shí)的人尿樣品的代表性人尿代謝物曲線，即放射色譜圖(采用HPLC方法1)。代謝物化合物6是給藥后0-72小時(shí)、144-192小時(shí)和288-336小時(shí)匯集的尿樣品中的主要代謝物。除了化合物6外，在給藥后0-72小時(shí)匯集的樣品中觀察到代謝物化合物1、4、5、7和19。在給藥后144-192小時(shí)匯集的樣品中觀察到代謝物化合物1、4、5和7。在給藥后288-336小時(shí)匯集的樣品中檢測到代謝物化合物1和5。在尿樣品中未觀察到母體化合物卡博替尼。從來自給藥后0-72小時(shí)、144-192小時(shí)和288-336小時(shí)的人糞便樣品的代表性人糞便代謝物曲線，即放射色譜圖(采用HPLC方法1)。在給藥后0-72小時(shí)匯集的樣品中觀察到母體卡博替尼和代謝物化合物4、7、11和15(包括化合物16)。在給藥后144-192小時(shí)匯集的樣品中觀察到代謝物化合物4、7、11、15、16和18。在給藥后288-336小時(shí)匯集的樣品中觀察到代謝物化合物4和11。采用HPLC/MS分析的代謝物鑒定采用HPLC方法1對(duì)真實(shí)標(biāo)準(zhǔn)物進(jìn)行HPLC/MS分析顯示卡博替尼、氟苯胺裂解產(chǎn)物(化合物7)、硫酸鹽(化合物9)和N-氧化物(化合物19)的滯留時(shí)間分別為20.3、14.4、16.5和23.1分鐘。接下來通過HOPLC/MS分析血漿、尿和糞便樣品，并基于化合物的質(zhì)子化分子離子和碎片模式對(duì)它們進(jìn)行鑒定。人血漿中的卡博替尼及其代謝物的代謝物鑒定XIC中在大約19.1分鐘的峰的質(zhì)譜顯示出m/z502的質(zhì)子化分子離子。其產(chǎn)物離子譜顯示出m/z391、323和297的主要碎片，這與卡博替尼標(biāo)準(zhǔn)物的情況一致。MS數(shù)據(jù)匯總于表1和2中。表1.來自[14C]卡博替尼的單次口服劑量的樣品中的代謝物的滯留時(shí)間的HPLC放射色譜圖表2.采用HPLC的代謝物的MS數(shù)據(jù)卡博替尼及代謝物的PK參數(shù)在八位施用卡博替尼140mg/日的人受試者中測量卡博替尼及各種代謝物的PK參數(shù)。觀察的代謝物包括測量的參數(shù)包括以ng/mL測量的最大觀測濃度(C最大)；以h·ng/mL測量的濃度-時(shí)間曲線下面積(AUC)，測量是在時(shí)間0至24小時(shí)(AUC0-24)、在時(shí)間0至72小時(shí)(AUC0-72)、在時(shí)間0至最后可測量的濃度的時(shí)間(AUC0-t)。還計(jì)算了AUC比，包括AUC(卡博替尼)與卡博替尼加上測定的卡博替尼代謝物的總和的AUC之比。結(jié)果匯總于下表3中?？ú┨婺岽x物的激酶活性激酶稀釋測量激酶活性并根據(jù)KinaseProfilerServiceAssayProtocolsProtocolGuide第57卷通過EMDMillipore進(jìn)行譜分析。結(jié)果匯總于下表4中。將抑制指示為具有以下要點(diǎn)的IC50：A＝IC50小于50nM，B＝IC50大于50nM但小于500nM，C＝IC50大于500nM但小于5000nM，且D＝IC50大于5,000nM。取決于有關(guān)喹唑啉或喹啉的官能性，本發(fā)明的示例性化合物表現(xiàn)出對(duì)c-Met、KDR、c-Kit、flt-3和flt-4中任一者的選擇性。表3中所列出的酶的縮寫定義如下：c-Met是指肝細(xì)胞生長因子受體激酶；RET是指RET原癌基因激酶；KDR是指激酶插入結(jié)構(gòu)域受體酪氨酸激酶；flt-1α、flt-3和flt-4、fms樣酪氨酸激酶代表受體酪氨酸激酶的FLK家族；且AuroraBMP是指AuroraB激酶。當(dāng)列出百分比而非IC50值時(shí)，其指示在1μM時(shí)的抑制百分比。表中的空單元格僅指示缺少數(shù)據(jù)。代謝物合成及結(jié)構(gòu)數(shù)據(jù)6-去甲基酸在容器中，在20℃下將卡博替尼(15.0g；53.3mmol)和碳酸鉀(29.5g；213.3mmol；4當(dāng)量)懸浮于THF(210mL；14體積)和水(90mL；6體積)中。在單獨(dú)的容器中，將1-(甲氧羰基)環(huán)丙烷羧酸鈉(17.71g；106.6mmol；2當(dāng)量)懸浮于THF(90mL；6體積)中。添加DMF(120μL；3摩爾％)并冷卻到低于15℃。經(jīng)90分鐘添加草酰氯(9.34mL；106.6mmol；2當(dāng)量)，并且將反應(yīng)物在10-15℃下老化2小時(shí)。在20-25℃下經(jīng)2小時(shí)將酰氯漿料添加到卡博替尼懸浮液中并老化至少3小時(shí)，屆時(shí)HPLC分析顯示超過99％轉(zhuǎn)化成單和二羰基化材料的混合物。將反應(yīng)混合物經(jīng)過濾，用THF(30mL；2體積)洗滌并分離各層。向上部THF層添加1MNaOH(150mL；10體積)并將混合物在40℃下加熱1小時(shí)，屆時(shí)HPLC分析顯示皂化產(chǎn)物超過99％。將混合物冷卻到25℃并移除上部THF層。用1MHCl將含水層酸化到pH3-4以沉淀產(chǎn)物并老化1小時(shí)。將沉淀物過濾，用水(90mL，6體積)洗滌并在50℃下在氮泄放的情況下真空干燥(大于20psig)，得到灰色至褐色粉末。1H-NMR(DMSO-d6，400MHz)δ10.8-11.0(brs，1H)，10.7(s，1H)，8.65(d，J＝6.9Hz，1H)，7.81(d，J＝9.3Hz，2H)，7.67(s，1H)，7.58(s，1H)，7.32(d，J＝9.3Hz，2H)，6.69(d，J＝6.9Hz，1H)，4.01(s，3H)，2.48-2.53(m，4H)。MS(ESI-)m/z393[M-H]-。6-硫酸氫鹽6-去甲基酸將6-去甲基酸(120mg；0.30mmol)、氫氧化鉀(118mg；2.1mmol；7當(dāng)量)和三氧化硫三甲胺復(fù)合物(292mg；2.1mmol；7當(dāng)量)溶于水(3mL；25體積)中并加熱到70℃達(dá)2小時(shí)，屆時(shí)通過HPLC分析顯示轉(zhuǎn)化率超過99％。然后在冰浴中冷卻反應(yīng)混合物并用1NH2SO4水溶液逐滴酸化至大約pH1。使?jié){料在25℃下老化1小時(shí)，過濾，用水(3mL；25體積)洗滌并脫液。然后用丙酮(3mL；25體積)洗滌濕濾餅，并在氮泄放的情況下在35℃下真空(大于20psig)干燥24小時(shí)，得到米色粉末。或者，將6-去甲基酸(120mg；0.30mmol)懸浮在MeCN(50體積，6mL)中，添加三乙胺(1.27mL，9.12mmol，30當(dāng)量)并然后在冰浴中冷卻。滴加氯磺酸(101μL，1.52mmol，5當(dāng)量)并然后將反應(yīng)物加熱到70℃達(dá)1小時(shí)，屆時(shí)通過HPLC分析顯示轉(zhuǎn)化率超過98％。然后將反應(yīng)混合物在冰浴中冷卻2小時(shí)，在其中形成了沉淀物。以過濾方式移除沉淀物，用冷MeCN(50體積)沖洗。然后將MeCN溶液濃縮至大約20體積(大約2mL)并用100體積的1NHCl猝滅且在冰浴中冷卻，得到細(xì)沉淀物，將該沉淀物過濾，用50體積水和50體積丙酮洗滌，并在氮泄放的情況下在35℃下真空(大于20psig)干燥24小時(shí)，得到米色粉末。1H-NMR(DMSO-d6，400MHz)δ10.8(s，1H)，8.83(d，J＝5.9Hz，1H)，8.5(s，1H)，7.85(d，J＝8.5Hz，2H)，7.52(s，1H)，7.40(d，J＝8.5Hz，2H)，6.84(d，J＝5.9Hz，1H)，4.04(s，3H)，3.20-3.70(brs，1H)，1.39-1.48(brs，4H)。MS(ESI-)m/z473[M-H]-，236。鄰羥基-卡博替尼向燒瓶中裝入羧酸(0.84g；2.1mmol)、THF(1.2mL)和DMF(5μL)并冷卻到15℃。經(jīng)大約20分鐘向此漿料中滴加草酰氯(0.17mL；2.1mmol)。2小時(shí)后，經(jīng)大約15分鐘將酰氯漿料添加到另一容器中，該容器含有苯胺(0.2g，1.6mmol)、碳酸鉀(0.63g，4.6mmol)在THF(2.8mL)和水(1mL)中的攪拌懸浮液。3小時(shí)后，HPLC分析顯示完全轉(zhuǎn)化成產(chǎn)物。停止攪拌，移除下部含水層并添加水(30mL)以沉淀產(chǎn)物。然后通過過濾收集產(chǎn)物并用1∶1THF-水溶液(2x10mL)洗滌以得到淺灰色固體。然后使用甲醇/二氯甲烷作為流動(dòng)相通過硅膠上的快速色譜法將其進(jìn)一步純化?；蛘?，用EDAC(2.30g；12mmol)和HOBt(0.5g；3mmol)處理羧酸(4.08g；10mmol)、苯胺(1.52g；12mmol)和三乙胺(2.7mL；20mmol)在乙腈(100mL)中的懸浮液。將漿料在室溫下攪拌過夜，并且通過HPLC監(jiān)測反應(yīng)進(jìn)程。在反應(yīng)結(jié)束時(shí)，添加150mL水，并通過過濾收集沉淀的產(chǎn)物，用水洗滌，并然后通過快速色譜法純化。1H-NMR(DMSO-d6，400MHz)δ10.46(brs，1H)，10.29(brs，1H)，10.0(brs，1H)，8.47(d，1H)，7.92(dd，1H)，7.73(dd，2H)，7.51(s，1H)，7.40(s，1H)，7.28(dd，2H)，6.68(dd，1H)，6.62(dt，1H)，6.45(d，1H)，3.95(s，3H)，3.94(s，3H)，1.60-1.55(m，4H)。13CNMR(DMSO-d6，100MHz)δ169.82，167.67，159.91，157.51，152.58，149.97，149.35，149.09，148.98，148.86，146.49，135.72，123.00，122.97，122.91，122.43，121.30，115.17，107.86，105.10，104.87，103.16，102.43，102.19，99.08，55.74，55.71，55.66，30.02，16.51。MS(APCI+)m/z518.3[M+H]+，500.3?？ú┨婺?羥基硫酸鹽向羥基-卡博替尼(0.95g；1.9mmol)在THF(20mL)中的懸浮液添加三乙胺(5mL；36mmol)并冷卻到低于5℃。經(jīng)大約15分鐘滴加氯磺酸(1mL；15mmol)，使得溫度保持低于10℃。在室溫下過夜攪拌后，HPLC分析顯示剩下大約5％的原料。用1NHCl水溶液(25mL)處理反應(yīng)混合物。通過過濾收集沉淀產(chǎn)物，用水(4x25mL)洗滌并真空干燥，得到灰白色固體(937mg；82％粗收率)。通過AN-HPLC分析顯示產(chǎn)物純度為90.8％，主要雜質(zhì)為原料。使用乙酸銨水溶液/乙腈流動(dòng)相體系，通過C18柱上的制備型HPLC將產(chǎn)物純化到超過99％(AN-HPLC)。1H-NMR(DMSO-d6，400MHz)δ10.39(s，1H)，9.69(s，1H)，8.81(d，1H)，7.95(dd，1H)，7.85(d，2H)，7.77(s，1H)，7.51(s，1H)，7.11(s，1H)，7.08(dd，1H)，6.93(dd，1H)，6.45(d，1H)，4.05(s，3H)，4.04(s，3H)，1.53(s，4H)。MS(ESI-)m/z596.0[M-H]-。間羥基-卡博替尼向燒瓶中裝入羧酸(0.84g；2.1mmol)、THF(1.2mL)和DMF(5μL)并冷卻到15℃。經(jīng)大約20分鐘向此漿料中滴加草酰氯(0.17mL；2.1mmol)。2小時(shí)后，經(jīng)大約15分鐘將酰氯漿料添加到另一容器中，該容器含有苯胺(0.2g，1.6mmol)、碳酸鉀(0.63g，4.6mmol)在THF(2.8mL)和水(1mL)中的攪拌懸浮液。90分鐘后，HPLC分析顯示完全轉(zhuǎn)化成產(chǎn)物。停止攪拌，移除下部含水層并用乙酸乙酯(15mL)萃取。將有機(jī)層合并，經(jīng)無水MgSO4干燥，過濾并濃縮以得到棕色固體。然后使用乙酸乙酯/庚烷作為流動(dòng)相，通過硅膠上的快速色譜法將固體進(jìn)一步純化。1H-NMR(DMSO-d6，400MHz)δ10.15(brs，1H)，9.96(brs，1H)，9.89(brs，1H)，8.46(d，1H)，7.76(d，1H)，7.50(s，1H)，7.41(d，2H)，7.39(s，1H)，7.22(d，2H)，7.07-6.98(m，2H)，6.42(d，1H)，3.94(s，3H)，3.93(s，3H)，1.46(brs，4H).13CNMR(DMSO-d6，100MHz)δ168.27，167.95，160.02，152.56，149.48，149.33，148.86，148.56，146.46，146.21，144.52，144.39，136.45，135.33，135.31，122.23，121.22，115.63，115.44，115.15，111.29，111.23，110.26，107.85，103.04，99.08，55.73，55.71，31.66，15.40。MS(APCI+)m/z518.3[M+H]+，502.3?？ú┨婺酦-氧化物向燒瓶中裝入N-(4-{[6，7-雙(甲基氧基)喹啉-4-基]氧基}苯基)-N′-(4-氟苯基)環(huán)丙烷-1，1-二甲酰胺(3.21g；6.4mmol)、乙酸(32.1mL)和四水合過硼酸鈉(1.98g，12.8mmol)并加熱到65℃且攪拌過夜。24小時(shí)后，HPLC分析顯示約38∶62的原料∶產(chǎn)物。添加更多的氧化劑(1.98g；12.8mmol)并繼續(xù)加熱過夜。真空移除溶劑并使用二氯甲烷-甲醇梯度液(二氯甲烷至10％甲醇-二氯甲烷)通過快速色譜法純化殘留物，得到呈白色固體的0.95g產(chǎn)物。1H-NMR(DMSO-d6，400MHz)δ10.20(brs，1H)，10.08(brs，1H)，8.28(d，1H)，7.90(s，1H)，7.74(d，2H)，7.64(dd，2H)，7.48(s，1H)，7.23(d，2H)，7.15(t，2H)，6.45(d，1H)，3.97(s，3H)，3.94(s，3H)，1.47(brs，4H)。13CNMR(DMSO-d6，100MHz)δ172.11，168.18，168.13，159.49，157.09，153.34，150.72，150.57，149.98，137.41，136.32，135.24，135.21，134.06，122.44，122.36，122.19，120.65，117.23，11.17，114.95，104.37，100.34，99.12，56.09，56.03，31.59，15.42。MS(APCI+)m/z518.3[M+H]+。1-[4-(6，7-二甲氧基-喹啉-4-基氧基)-苯基氨甲?；鵠-環(huán)丙烷羧酸向THF(3.5mL)中的環(huán)丙基二羧酸(449mg，3.45mmol)添加TEA(485μL，3.45mmol)。在氮?dú)夥障聦⑺玫降娜芤涸谑覝叵聰嚢?0分鐘，之后添加亞硫酰氯(250μL，3.44mmol)。通過LCMS監(jiān)測反應(yīng)的單酰氯的形成(用MeOH猝滅樣品并尋找相應(yīng)的單甲酯)。在室溫下攪拌3小時(shí)后，添加呈固體的4-(6，7-二甲氧基-喹啉-4-基氧基)-苯胺(1.02g，3.44mmol)，接著添加更多的THF(1.5mL)。在室溫下繼續(xù)攪拌反應(yīng)物16小時(shí)。將所得到的稠漿料用EtOAc(10mL)稀釋并用1NNaOH萃取。過濾雙相漿料，用濃HCl將含水相酸化至pH或大約6并過濾。將兩種固體合并，用EtOAc洗滌，然后真空干燥。得到呈白色固體的所需產(chǎn)物1-[4-(6，7-二甲氧基-喹啉-4-基氧基)-苯基氨甲酰基]-環(huán)丙烷羧酸(962mg，68.7％收率，97％純度)。1HNMR(D2O/NaOH)：7.97(d，1H)，7.18(d，2H)，6.76(m，4H)，6.08(d，1H)，3.73(s，3H)，3.56(s，3H)，1.15(d，4H)。為了清楚和理解的目的，已經(jīng)借助于說明和舉例的方式在一些細(xì)節(jié)方面對(duì)前述的公開內(nèi)容進(jìn)行了描述。已經(jīng)參照各種具體和優(yōu)選的實(shí)施方案和技術(shù)對(duì)本發(fā)明進(jìn)行了描述。然而，應(yīng)當(dāng)理解的是，可以在本發(fā)明的實(shí)質(zhì)和范圍內(nèi)做出許多變化和修改。本領(lǐng)域技術(shù)人員顯而易見的是，可以在所附權(quán)利要求的范圍內(nèi)實(shí)施變化和修改。因此，要理解的是，上文的描述旨在為說明性而非限制性的。因此應(yīng)當(dāng)不是參照上文的描述而是應(yīng)當(dāng)參照以下所附的權(quán)利要求連同與這些權(quán)利要求具有等效性的表述的全部范圍來確定本發(fā)明的范圍。除非另有說明外，否者本文引用的所有專利文獻(xiàn)以引用的方式并入本文。當(dāng)前第1頁1 2 3