本發(fā)明屬于醫(yī)藥
技術(shù)領(lǐng)域：
，具體公開(kāi)了烏司他丁在制備治療膽囊癌藥物中的用途。
背景技術(shù)：
：在膽囊惡性腫瘤中膽囊癌(carcinomaofthegall-blader)占首位，其它尚有肉瘤、類癌、原發(fā)性惡性黑色素瘤、巨細(xì)胞腺癌等。原發(fā)性膽囊癌臨床上較為少見(jiàn)，較長(zhǎng)時(shí)間內(nèi)并未引起人們的重視，根據(jù)國(guó)內(nèi)教科書(shū)報(bào)道僅占所有癌總數(shù)的1％左右。由于B超，CT等影像學(xué)檢查的廣泛開(kāi)展，膽囊癌已逐漸被認(rèn)識(shí)，發(fā)現(xiàn)率有所提高。然而膽囊癌的發(fā)病有明顯的地區(qū)差別，并且膽囊癌病人的發(fā)病率女性較男性多2～4倍，多見(jiàn)于50～70歲，50歲以上者占90％。膽囊癌的誘發(fā)與膽結(jié)石、傷寒癥、膽管囊腫、膽囊息肉、瓷樣膽囊、亞硝胺類化學(xué)物質(zhì)、肥胖等有關(guān)。膽囊癌有多種不同的組織類型，但都缺乏特異性的臨床表現(xiàn)，膽囊癌絕大多數(shù)為腺癌，約占80％，其中60％為硬性腺癌，25％為乳頭狀腺癌，15％為黏液腺癌，其余為未分化癌占6％，鱗癌占3％，混合瘤或棘皮瘤占1％，尚有其他罕見(jiàn)的腫瘤包括類癌，肉瘤，黑色素瘤和淋巴瘤等。由于膽囊癌的惡性程度高、易早期轉(zhuǎn)移、難于早期發(fā)現(xiàn)、對(duì)化療藥物不敏感等特點(diǎn)，因此大多數(shù)患者確診時(shí)已屬中晚期。目前，膽囊癌的治療方法主要包括外科手術(shù)、放射治療、化學(xué)治療和中醫(yī)藥治療。臨床所見(jiàn)的膽囊癌大多數(shù)為晚期患者，故目前手術(shù)切除率很低，切除后的療效也很差；化療是晚期膽囊癌重要的治療手段，其對(duì)癌腫有較為直接的抑制作用。臨床上常用的膽囊癌化療藥物有絲裂霉素、5-氟尿嘧啶、環(huán)已亞硝脲、順鉑等，這些藥物均各有優(yōu)缺點(diǎn)，例如順鉑具有抗癌譜廣、作用強(qiáng)的優(yōu)點(diǎn)，卻易造成腎臟毒性；絲裂霉素有效率較高，但骨髓抑制作用也較強(qiáng)。中藥治療膽囊癌的優(yōu)勢(shì)在于對(duì)腫瘤有一定抑制作用，無(wú)副作用，能提高人體免疫力，減低化療藥物毒性，提高患者生存質(zhì)量，延長(zhǎng)生存時(shí)間。目前治療膽囊癌的中藥種類較多，但質(zhì)量良莠不齊。因此，尋找新的藥物治療和治療方法是臨床急需解決的問(wèn)題。烏司他丁是從健康男性尿中分離純化而得，分子量約為67000Da的酸性糖蛋白，是一種廣譜的蛋白酶抑制制劑，能夠抑制多種蛋白、糖和脂類水解酶的活性。其主要在肝臟中合成，由腎臟代謝隨尿液排出，且其分解形成的低分子量成分也具有很強(qiáng)的抑制水解酶的作用。1985年由日本首先開(kāi)發(fā)上市，目前常用于治療急性胰腺炎，慢性復(fù)發(fā)性胰腺炎，亦可用于急性循環(huán)衰竭的搶救輔助用藥。也有研究表明烏司他丁對(duì)肺癌、胃癌、肝癌、乳腺癌、宮頸癌等癌癥細(xì)胞有較好的抑制作用，但經(jīng)檢索，尚無(wú)發(fā)現(xiàn)有烏司他丁在治療膽囊癌的相關(guān)研究。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明的目的在于提供烏司他丁在制備治療膽囊癌藥物中的用途。經(jīng)動(dòng)物試驗(yàn)證實(shí)，烏司他丁對(duì)人膽囊癌裸鼠移植瘤有明顯的抑制作用，且烏司他丁對(duì)人膽囊癌裸鼠移植瘤的治療呈劑量依賴性，同時(shí)實(shí)驗(yàn)期間小鼠未出現(xiàn)活動(dòng)減少和精神萎靡等表現(xiàn)，小鼠進(jìn)食無(wú)明顯減少，無(wú)明顯消瘦，無(wú)裸鼠死亡，移植瘤處皮膚無(wú)破潰或糜爛，且體重均有所增加，并且檢查試驗(yàn)裸鼠的心、肝、腎、肺、脾、胸腺、腸道、胃部均沒(méi)有出現(xiàn)異常。這些結(jié)果表明烏司他丁對(duì)膽囊癌有較好的治療作用，且安全性高。進(jìn)一步的，所述藥物為凍干粉針劑或注射液。再進(jìn)一步的，所述凍干粉針劑或注射液配以一種或多種藥可接受的添加劑。所述凍干粉針劑制藥可接受的添加劑選自甘露醇、乳糖、水解明膠、氯化鈉或葡萄糖中的一種或其任意混合物；所述注射液可接受的添加劑選自注射用水、甘露醇、氯化鈉或葡萄糖中的一種或其任意混合物。因此，本發(fā)明的優(yōu)勢(shì)在于：本發(fā)明提供了烏司他丁在醫(yī)藥領(lǐng)域的一種新應(yīng)用，即烏司他丁可以作為治療膽囊癌的藥物使用，開(kāi)拓了烏司他丁的應(yīng)用方向，同時(shí)也給廣大膽囊癌患者提供一種新藥，其療效顯著，毒副作用低。具體實(shí)施方式以下通過(guò)實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)的說(shuō)明，但本發(fā)明的保護(hù)范圍不受具體實(shí)施例的任何限制，而是由權(quán)利要求加以限定。實(shí)施例1、制備烏司他丁凍干粉針取過(guò)濾滅菌烏司他丁水溶液20000萬(wàn)單位，加20克甘露醇溶解，調(diào)節(jié)PH到中性，加注射用水至2000毫升，加氯化鈉調(diào)節(jié)等滲，無(wú)菌過(guò)濾，分裝于1000個(gè)西林瓶中，無(wú)菌條件下冷凍干燥，即得。實(shí)施例2、制備烏司他丁注射液取過(guò)濾滅菌的烏司他丁水溶液10000萬(wàn)單位，加20克甘露醇溶解，調(diào)節(jié)PH到中性，加注射用水至2000毫升，加氯化鈉調(diào)節(jié)等滲，無(wú)菌過(guò)濾，分裝1000個(gè)西林瓶中，即得。實(shí)施例3、烏司他丁對(duì)人膽囊癌裸鼠移植瘤的作用研究1、材料動(dòng)物：BALB/c-nu/nu雌性裸鼠46只，鼠齡7～8周，體重18～20g，由廣東醫(yī)學(xué)院動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供；細(xì)胞株：人膽囊癌細(xì)胞株GBC-SD，購(gòu)自中科細(xì)胞所；順鉑，購(gòu)自南京制藥廠有限公司，國(guó)藥準(zhǔn)字H20104016。2、方法(1)人膽囊癌裸鼠移植瘤模型建立：a、細(xì)胞復(fù)蘇：將凍存于液氮中的人膽囊癌細(xì)胞取出后立即放入37℃水浴中復(fù)蘇10～15分鐘。b、將復(fù)蘇還的細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到潔凈的15ml的聚丙醇離心管中，加入10ml無(wú)血清1640培養(yǎng)基，輕輕混勻，4000rpm離心5分鐘后棄上清。c、加入1ml的15％FBS-1640培養(yǎng)基，輕彈后將細(xì)胞混合均勻。d、取4個(gè)9mm潔凈培養(yǎng)皿加入適量的15％FBS-1640培養(yǎng)基。e、將c步驟的細(xì)胞懸液分成四等份加入培養(yǎng)皿中，輕輕混勻。f、細(xì)胞置37℃細(xì)胞培養(yǎng)箱，5％二氧化碳條件培養(yǎng)。g、觀察細(xì)胞的生長(zhǎng)情況并每隔2～3天換成新鮮的培養(yǎng)液。h、取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞以生理鹽水配制成1×106濃度，0.5ml/只對(duì)10只實(shí)驗(yàn)裸鼠進(jìn)行皮下注射，觀察瘤生長(zhǎng)的情況。i、取正常荷瘤裸鼠，頸椎脫臼法處死，75％酒精消毒皮膚，用眼科剪刀和眼科鑷剝?nèi)〕鲆浦擦?，置于加抗生理鹽水中漂洗，剔除纖維包膜及出血壞死部分，切取生長(zhǎng)良好、淡紅色、魚(yú)肉狀的瘤組織，將其剪切成若干個(gè)約1.5mm×1.5mm×1.5mm的瘤組織小塊備用。抓取動(dòng)物，固定，消毒皮膚，用20號(hào)套管針將剪切好的瘤組織移植至裸鼠右背側(cè)前肢近腋部皮下。按上述方法進(jìn)行46只裸鼠的皮下移植。(2)小鼠模型的分組及用藥：接種后6d成瘤達(dá)到實(shí)驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)后，挑選腫瘤大小相似的(剔除腫瘤過(guò)大或過(guò)小的)裸鼠隨機(jī)分成5個(gè)實(shí)驗(yàn)組，每組各8只。對(duì)照組：10ml/(kg·d)生理鹽水，尾靜脈注射給藥；烏司他丁低劑量組：1000單位/(kg·d)烏司他丁注射液，尾靜脈注射給藥；烏司他丁中劑量組：5000單位/(kg·d)烏司他丁注射液，尾靜脈注射給藥；烏司他丁高劑量組：10000單位/(kg·d)烏司他丁注射液，尾靜脈注射給藥；順鉑組：2mg/(kg·d)順鉑注射液，尾靜脈注射給藥。各組每天定時(shí)給藥1次，連用21d。停藥后第4天頸椎脫臼法處死全部小鼠，剝離小鼠皮下的瘤體并稱瘤重，按公式計(jì)算腫瘤的平均抑瘤率(inhibitoryrate，IR)，IR＝(1-治療組平均瘤質(zhì)量/對(duì)照組平均瘤質(zhì)量)×100％。并且對(duì)裸鼠尸體進(jìn)行全面尸檢，肉眼觀察裸鼠心、肝、腎、肺、脾、胸腺、腸道等主要器官的變化。統(tǒng)計(jì)學(xué)分析：各組數(shù)據(jù)均為計(jì)量資料，使用統(tǒng)計(jì)分析軟件SPSS17.0，采用單因素方差分析和t檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。3、結(jié)果見(jiàn)下表1。表1各組裸鼠體重、移植瘤重量和抑瘤率的比較組別n移植瘤重量(g)抑瘤率(％)裸鼠體重(g)對(duì)照組81.86±0.29-26.11±3.10烏司他丁高劑量組80.83±0.14**40.21％23.76±2.64烏司他丁中劑量組80.88±0.16**38.54％23.95±2.36烏司他丁低劑量組81.00±0.24**31.84％24.87±2.02順鉑組80.92±0.18**40.35％21.94±2.18**與對(duì)照組相比，P＜0.01。(1)不良反應(yīng)觀察和各治療組對(duì)荷瘤裸鼠體重的影響：各烏司他丁用藥組小鼠未出現(xiàn)活動(dòng)減少和精神萎靡等表現(xiàn)，實(shí)驗(yàn)期間小鼠進(jìn)食無(wú)明顯減少，無(wú)明顯消瘦，無(wú)裸鼠死亡，移植瘤處皮膚無(wú)破潰或糜爛。各實(shí)驗(yàn)組裸鼠體重均緩慢增長(zhǎng)，其中各用藥組裸鼠體重增長(zhǎng)比對(duì)照組略慢，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。此外，對(duì)各烏司他丁用藥組小鼠進(jìn)行全面尸檢，結(jié)果發(fā)現(xiàn)裸鼠的心、肝、腎、肺、脾、胸腺、腸道、胃部均沒(méi)有出現(xiàn)異常，表明烏司他丁給藥的安全性較高。(2)各治療組對(duì)荷瘤裸鼠腫瘤重量和抑瘤率的影響：各用藥組與對(duì)照組比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)，烏司他丁對(duì)人膽囊癌裸鼠移植瘤的抑制效果接近于現(xiàn)有藥物，且烏司他丁對(duì)人膽囊癌裸鼠移植瘤的治療呈劑量依賴性。雖然本發(fā)明己以較佳實(shí)施例公開(kāi)如上，但它們并不是用來(lái)限定本發(fā)明，本發(fā)明的保護(hù)范圍應(yīng)當(dāng)以本申請(qǐng)的權(quán)利要求保護(hù)范圍所界定的內(nèi)容為準(zhǔn)。任何熟習(xí)本
技術(shù)領(lǐng)域：
者，在不脫離本發(fā)明的精神和范圍內(nèi)，所作的各種變化或等同替換，都應(yīng)當(dāng)屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。當(dāng)前第1頁(yè)1 2 3