技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種無(wú)免疫排斥創(chuàng)可貼，屬于醫(yī)療救護(hù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
：創(chuàng)面是正常皮膚（組織）在外界致傷因子如外科手術(shù)、外力、熱、電流、化學(xué)物質(zhì)、低溫以及機(jī)體內(nèi)在因素如局部血液供應(yīng)障礙等作用下所導(dǎo)致的損害。常伴有皮膚完整性的破壞以及一定量正常組織的丟失，同時(shí)，皮膚的正常功能受損。也稱(chēng)為傷口或者創(chuàng)傷。創(chuàng)面修復(fù)既傷口修復(fù)。創(chuàng)面修復(fù)是創(chuàng)傷、燒傷外科乃至整個(gè)醫(yī)學(xué)界所面臨的最重要、最基本的問(wèn)題之一，但真正把它作為一項(xiàng)獨(dú)立的課題來(lái)進(jìn)行系統(tǒng)和深入的研究，近20余年來(lái)才引起人們高度的重視。一方面，創(chuàng)面修復(fù)的許多基本問(wèn)題過(guò)去并沒(méi)有真正獲得解決，另一方面，現(xiàn)代醫(yī)學(xué)，特別是分子生物學(xué)的發(fā)展又給創(chuàng)面修復(fù)提出了許多新的問(wèn)題，甚至一些重要的概念也在不斷的更新和發(fā)展。如傳統(tǒng)的敷料(紗布)僅起單純覆蓋創(chuàng)面的作用，而現(xiàn)在，研制敷料的概念已發(fā)生了根本的變化，即敷料不僅要覆蓋創(chuàng)面，還應(yīng)具有促進(jìn)組織修復(fù)的功能，即所謂“活性敷料”或“革命性敷料”。其次，隨著人民生活水平的日益改善，對(duì)生活質(zhì)量的要求也越來(lái)越高，因而過(guò)去不太為人們重視的慢性體表潰瘍與瘢痕防治也越來(lái)越受到人們重視。因此，進(jìn)一步重視創(chuàng)面修復(fù)研究既是學(xué)術(shù)上的需要，也是社會(huì)發(fā)展到一定階段后對(duì)醫(yī)學(xué)與生物學(xué)提出的新要求。國(guó)外對(duì)創(chuàng)面修復(fù)十分重視，其基礎(chǔ)研究已深入至細(xì)胞、分子與基因水平。70年代以來(lái)，由于能有效的獲取大量細(xì)胞因子并用于動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，使得在以生長(zhǎng)因子與創(chuàng)面修復(fù)關(guān)系為突破口的組織修復(fù)研究國(guó)外走在了前列，并由此帶動(dòng)了整個(gè)創(chuàng)面修復(fù)的發(fā)展。經(jīng)過(guò)近20年的努力，已在組織修復(fù)的細(xì)胞學(xué)、胞外基質(zhì)與膠原代謝、生長(zhǎng)因子促(抑)創(chuàng)面修復(fù)機(jī)理、慢性難愈合潰瘍的病理生理特征與促愈合方法、增生性瘢痕的成因與控制、活性敷料的研制以及基因治療等方面取得了令人矚目的進(jìn)展，不少基礎(chǔ)研究成果已開(kāi)始應(yīng)用于臨床。我們國(guó)家有關(guān)創(chuàng)面修復(fù)的研究一直持續(xù)不斷，并且已在燒傷創(chuàng)面修復(fù)等領(lǐng)域取得可喜成績(jī)。但總的來(lái)講，我國(guó)在這一領(lǐng)域的整體研究仍落后于西方發(fā)達(dá)國(guó)家，基礎(chǔ)研究又落后于臨床治療。由于創(chuàng)面修復(fù)是一系統(tǒng)工程，涉及外科、創(chuàng)傷外科、燒傷、整形等諸多醫(yī)學(xué)領(lǐng)域，并與生物化學(xué)、生物學(xué)、分子生物學(xué)、生物力學(xué)以及生物材料學(xué)等許多基礎(chǔ)與應(yīng)用科學(xué)有著廣泛的聯(lián)系。因此，如果不把它作為一項(xiàng)重大的課題來(lái)進(jìn)行跨學(xué)科、跨專(zhuān)業(yè)攻關(guān)，顯然很難取得突破性進(jìn)展。我國(guó)著名工程院院士盛志勇教授、北京304醫(yī)院付小兵教授等一大批醫(yī)學(xué)知名人士，早在2003年就開(kāi)始陸續(xù)發(fā)表了大量論文或?qū)Ｖ?，并提出了“要充分利用現(xiàn)代高新生物技術(shù)的成果，從細(xì)胞、分子與基因水平探索正常與組織修復(fù)失控發(fā)生的奧秘，尋找可靠的促修復(fù)方法，加速新產(chǎn)品的開(kāi)發(fā)與應(yīng)用?！钡挠^點(diǎn)。目前，已經(jīng)商品化應(yīng)用于臨床的皮膚創(chuàng)面覆蓋物有：表皮細(xì)胞膜片、脫細(xì)胞真皮基質(zhì)、膠原海綿膜、膠原凝膠膜等。①表皮細(xì)胞膜片：該膜片(KC)缺點(diǎn)在于必須取患者的皮膚活檢標(biāo)本，需要2-3周的準(zhǔn)備時(shí)間，缺乏真皮成分，膜片菲薄易碎[O’ConnerNE，MallikenJB，Bankaclilegcls，etal.Graftingofburnswithculturedepitheliuntpreparedfromautologousepidermalcells[J].Lancet，1981，1：75-78]。②脫細(xì)胞真皮基質(zhì)：其缺點(diǎn)是可能含有未除凈的抗原物質(zhì)，有傳染病毒的危險(xiǎn)，并且材料孔貫通性差。③膠原海綿膜：如中國(guó)專(zhuān)利94118836.1和01134743.0，其缺點(diǎn)是材料中不含有細(xì)胞生子因子，并且力學(xué)性能差，不能抗感染；中國(guó)專(zhuān)利200510022581.X，材料中雖然直接加入了生長(zhǎng)因子，但沒(méi)引入微球緩釋技術(shù)，生長(zhǎng)因子易失去生物活性。④膠原凝膠：如中國(guó)專(zhuān)利CN02117585.3和CN03130382.X，缺點(diǎn)是生產(chǎn)過(guò)程復(fù)雜，膠原凝膠會(huì)收縮80％左右，抵抗膠原酶降解能力差，易遭到病毒感染和免疫排斥反應(yīng)，脆性大，手術(shù)操作困難。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的不足提供一種具有無(wú)免疫排斥或免疫排斥作用極低的、應(yīng)用范圍廣泛、創(chuàng)面修復(fù)效果極佳的創(chuàng)可貼。本發(fā)明通過(guò)以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)上述目的。一種無(wú)免疫排斥創(chuàng)可貼，其特征在于：創(chuàng)可貼包括纖維基底層、粘合層和創(chuàng)面修復(fù)敷料層。其特征在于包括如下步驟：（1）制造三維纖維基材料第一步：將生物可降解纖維分散在水或乙醇中，形成均相懸濁液；所述懸濁液中，纖維的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1-10%；第二步：將所述懸濁液在15-36℃下進(jìn)行陳化處理8-15h，使懸濁液形成凝固塊；第三步：采用超臨界干燥方法脫除所述凝固塊中凝固的水或乙醇，形成纖維交錯(cuò)材料；第四步：將纖維交錯(cuò)材料進(jìn)行1-5h熱交聯(lián)處理，獲得纖維交錯(cuò)點(diǎn)粘結(jié)固定的三維纖維基材料；生物可降解纖維選自：聚乳酸、聚己內(nèi)酯、聚乙交酯、聚氨酯、聚乙烯醇、或絲蛋白、彈力蛋白擬態(tài)的肽聚合物、海藻酸一種或多種物質(zhì)制成的纖維。（2）進(jìn)行多孔處理將步驟（1）獲得的三維纖維基材料浸漬在水中，然后再加入致多孔組合物，處理溫度20～60℃，時(shí)間為10～60min。所述致多孔組合物為：碳酸鎂、發(fā)泡劑和生物相容粘合劑，其中所述發(fā)泡劑包含磷酸鹽和磷酸氫鹽，該磷酸鹽和磷酸氫鹽在所述組合物內(nèi)存在的摩爾比為1：3-1：15，該組合物水合時(shí)反應(yīng)從而產(chǎn)生作為氣體組分的二氧化碳，其中從所述組合物釋放出所述氣體組分在組合物中產(chǎn)生至少8%的孔隙率；（3）浸漬膠原蛋白將多孔處理后的三維纖維基材料浸漬含有細(xì)胞生長(zhǎng)因子的膠原蛋白水溶膠，然后干燥，細(xì)胞生長(zhǎng)因子含量為1-10wt％，膠原蛋白的含量為130—1500IU/mL；（4）交聯(lián)固化干燥完畢后進(jìn)行交聯(lián)固化，其中，所述交聯(lián)劑選自1-乙基-3-(3-二甲基胺丙基)-碳化二亞胺、戊二醛、雙醛淀粉、乙二醇縮水甘油醚、丙三醇縮水甘油醚、楊梅栲膠、荊樹(shù)皮栲膠、1，6-己二異氰酸鹽中的任一種；交聯(lián)固化結(jié)束后，得到創(chuàng)面修復(fù)敷料；（5）制造創(chuàng)可貼將創(chuàng)面修復(fù)敷料粘合在纖維基底層上。其中所述交聯(lián)劑溶液中交聯(lián)劑的含量濃度優(yōu)選為0.01～0.05mol/L，更優(yōu)選為0.03mol/L；所述交聯(lián)固化的時(shí)間優(yōu)選為5～12h，更優(yōu)選為8～9h。所述細(xì)胞因子是對(duì)細(xì)胞的歸巢或趨化或細(xì)胞分化起作用的因子，這些因子可選自細(xì)胞定向遷移因子(SDF-1)、表皮生長(zhǎng)因子(EGF)、成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(FGF)、白介素IL-3、血管生成素結(jié)合因子(ECM)、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-α(TGF-α)、血小板衍生的生長(zhǎng)因子(PDGF)或細(xì)胞定向遷移因子、胰島素生長(zhǎng)因子、骨形態(tài)發(fā)生蛋白、骨形態(tài)發(fā)生蛋白-2、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子、結(jié)締組織生長(zhǎng)因子、堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子、骨橋蛋白、生長(zhǎng)激素類(lèi)(如：促生長(zhǎng)素)等細(xì)胞吸引及粘附因子所述生物相容粘合劑中還包括：核酸，碳水化合物，蛋白質(zhì)，多肽，聚（α-羥基酸），聚（內(nèi)酯），聚（氨基酸），聚（酸酐），聚（原酸酯），聚（酸酐-CO-酰亞胺），聚（原碳酸酯），聚（α-羥基烷酸酯），聚（磷酸酯），聚（L-丙交酯）（PLLA），聚（D,L-丙交酯）（PDLLA），聚乙交酯（PGA），聚（丙交酯-CO-乙交酯）（PLGA），聚（L-丙交酯-CO-D,L-丙交酯），聚（D,L-丙交酯-CO-亞丙基碳酸酯），聚羥基丁酸酯（PHB），聚羧酸，聚（鹽酸烯丙胺），聚（氯化二烯丙基二甲銨），聚（亞乙基亞胺），聚富馬酸丙二醇酯，聚乙烯醇，聚乙烯基吡咯烷酮，聚乙烯，聚甲基丙烯酸甲酯，碳纖維，聚乙二醇，聚氧乙醇，聚（乙烯基醇），聚（乙烯基吡咯烷酮），環(huán)氧乙烷-CO-環(huán)氧丙烷嵌段共聚物，聚（對(duì)苯二甲酸乙二醇酯），聚酰胺，及它們的共聚物。所述生物相容粘合劑選自：藻酸，阿拉伯酸，瓜爾膠，黃原膠，明膠，殼多糖，脫乙酰殼多糖，乙酸脫乙酰殼多糖，乳酸脫乙酰殼多糖，硫酸軟骨素，N,O-羧甲基脫乙酰殼多糖，葡聚糖，纖維蛋白膠，甘油，透明質(zhì)酸，透明質(zhì)酸鈉，纖維素，葡糖胺，蛋白聚糖，淀粉，乳酸，環(huán)氧乙烷與環(huán)氧丙烷共聚物，甘油磷酸鈉，膠原，糖原，角蛋白，絲，及它們的混合物。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有如下有益效果：（1）致孔組合物的引入使得敷料比常規(guī)創(chuàng)面貼具有更高和更均勻的孔隙，增強(qiáng)敷料在使用過(guò)程中的透氣性；（2）三維纖維基的制造方法相對(duì)于傳統(tǒng)創(chuàng)面膜的靜電紡絲技術(shù)更為簡(jiǎn)單，容易控制，無(wú)論原料還是工藝成本都更為低廉，具有較好的透氣透濕性；（3）本發(fā)明制造的創(chuàng)面敷料，能夠促進(jìn)皮膚纖維細(xì)胞生長(zhǎng)，加快損傷皮膚的愈合，相對(duì)于醫(yī)用紗布而言，動(dòng)物皮膚完全愈合的所需的天數(shù)減少了一半左右，且不會(huì)出現(xiàn)創(chuàng)面紅腫以及瘢痕攣縮。具體實(shí)施方式實(shí)施例1：（1）制造三維纖維基材料第一步：將聚乙烯醇纖維分散在水中，形成均相懸濁液；所述懸濁液中，纖維的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為7%；第二步：將所述懸濁液在15℃下進(jìn)行陳化處理8h，使懸濁液形成凝固塊；第三步：采用超臨界干燥方法脫除所述凝固塊中凝固的水或乙醇，形成纖維交錯(cuò)材料；第四步：將纖維交錯(cuò)材料進(jìn)行5h熱交聯(lián)處理，獲得纖維交錯(cuò)點(diǎn)粘結(jié)固定的三維纖維基材料；（2）進(jìn)行多孔處理將步驟（1）獲得的三維纖維基材料浸漬在水中，然后再加入致多孔組合物，處理溫度25℃，時(shí)間為18min。所述致多孔組合物為：碳酸鎂、發(fā)泡劑和生物相容粘合劑，其中所述發(fā)泡劑包含磷酸鹽和磷酸氫鹽，該磷酸鹽和磷酸氫鹽在所述組合物內(nèi)存在的摩爾比為1：7，該組合物水合時(shí)反應(yīng)從而產(chǎn)生作為氣體組分的二氧化碳，其中從所述組合物釋放出所述氣體組分在組合物中產(chǎn)生至少8%的孔隙率；（3）浸漬膠原蛋白將多孔處理后的三維纖維基材料浸漬含有細(xì)胞生長(zhǎng)因子的膠原蛋白水溶膠，然后干燥，細(xì)胞生長(zhǎng)因子含量為5wt％，膠原蛋白的含量為1300IU/mL；（4）交聯(lián)固化干燥完畢后進(jìn)行交聯(lián)固化，其中，所述交聯(lián)劑為乙二醇縮水甘油醚，交聯(lián)固化結(jié)束后，得到創(chuàng)面修復(fù)敷料。將創(chuàng)面修復(fù)敷料粘合在纖維基底層上。實(shí)施例2：（1）制造三維纖維基材料第一步：將絲蛋白纖維分散在水或乙醇中，形成均相懸濁液；所述懸濁液中，纖維的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為7%；第二步：將所述懸濁液在15℃下進(jìn)行陳化處理8h，使懸濁液形成凝固塊；第三步：采用超臨界干燥方法脫除所述凝固塊中凝固的水或乙醇，形成纖維交錯(cuò)材料；第四步：將纖維交錯(cuò)材料進(jìn)行2h熱交聯(lián)處理，獲得纖維交錯(cuò)點(diǎn)粘結(jié)固定的三維纖維基材料；（2）進(jìn)行多孔處理將步驟（1）獲得的三維纖維基材料浸漬在水中，然后再加入致多孔組合物，處理溫度20℃，時(shí)間為50min。所述致多孔組合物為：碳酸鎂、發(fā)泡劑和生物相容粘合劑，其中所述發(fā)泡劑包含磷酸鹽和磷酸氫鹽，該磷酸鹽和磷酸氫鹽在所述組合物內(nèi)存在的摩爾比為1：6，該組合物水合時(shí)反應(yīng)從而產(chǎn)生作為氣體組分的二氧化碳，其中從所述組合物釋放出所述氣體組分在組合物中產(chǎn)生至少8%的孔隙率；（3）浸漬膠原蛋白將多孔處理后的三維纖維基材料浸漬含有堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子的膠原蛋白水溶膠，然后干燥，堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子含量為8wt％，膠原蛋白的含量為130IU/mL；（4）交聯(lián)固化干燥完畢后進(jìn)行交聯(lián)固化，其中，所述交聯(lián)劑為雙醛淀粉，交聯(lián)固化結(jié)束后，得到創(chuàng)面修復(fù)敷料。其中所述交聯(lián)劑溶液中交聯(lián)劑的含量濃度為0.03mol/L；所述交聯(lián)固化的時(shí)間為8～9h。將創(chuàng)面修復(fù)敷料粘合在纖維基底層上。對(duì)比例1：1)制備RGD重組蛛絲蛋白-聚乙烯醇復(fù)合纖維膜將RGD重組蛛絲蛋白(暨南大學(xué)提供)和聚乙烯醇(平均聚合度為2400～2500)溶于98wt％的甲酸溶液中，配制成含有5wt％RGD重組蛛絲蛋白和5wt％聚乙烯醇的紡絲液。把紡絲液吸入2mL規(guī)格的注射器中，利用靜電紡織技術(shù)，在80kV(電壓強(qiáng)度)、20cm(注射器針頭距收集屏表面)、5ml/h(紡絲液流量)、45℃條件下，將紡絲液制備成RGD重組蛛絲蛋白-聚乙烯醇復(fù)合纖維膜。2)配制bFGF-膠原蛋白溶液將膠原蛋白(石家莊旭爾美生物科技有限公司提供)溶于無(wú)菌水中配制成2wt％的膠原蛋白溶液，按500IU/ml添加bFGF(北京科昕生物科技有限公司提供)，得到bFGF-膠原蛋白溶液。3)制備創(chuàng)面修復(fù)敷料將上述制得的RGD重組蛛絲蛋白-聚乙烯醇復(fù)合纖維膜恒溫37℃浸泡在上述制得的bFGF-膠原蛋白溶液中30min，然后放入凝膠模具中室溫自然凝膠干燥2h，得到干燥成型的復(fù)合纖維膜。將干燥成型的復(fù)合纖維膜放入濃度為0.01～0.05mol/L的EDC·HCl溶液中交聯(lián)8h加固，得到厚度為0.05mm的創(chuàng)面修復(fù)敷料。最后將制得的創(chuàng)面修復(fù)敷料放入無(wú)菌包裝袋，進(jìn)行環(huán)氧乙烷滅菌。將創(chuàng)面修復(fù)敷料粘合在纖維基底層上。對(duì)比例2：不進(jìn)行步驟（2）多孔處理，其他步驟同時(shí)實(shí)施例1對(duì)比例3：（1）制造三維纖維基材料第一步：將聚乳酸分散在水或乙醇中，形成均相懸濁液；所述懸濁液中，纖維的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為13%；第二步：將所述懸濁液在40℃下進(jìn)行陳化處理20h，使懸濁液形成凝固塊；第三步：采用超臨界干燥方法脫除所述凝固塊中凝固的水或乙醇，形成纖維交錯(cuò)材料；第四步：將纖維交錯(cuò)材料進(jìn)行6h熱交聯(lián)處理，獲得纖維交錯(cuò)點(diǎn)粘結(jié)固定的三維纖維基材料；（2）進(jìn)行多孔處理將步驟（1）獲得的三維纖維基材料浸漬在水中，然后再加入致多孔組合物，處理溫度15℃，時(shí)間為9min。所述致多孔組合物為：碳酸鎂、發(fā)泡劑和生物相容粘合劑，其中所述發(fā)泡劑包含磷酸鹽和磷酸氫鹽，該磷酸鹽和磷酸氫鹽在所述組合物內(nèi)存在的摩爾比為1：16；（3）浸漬膠原蛋白將多孔處理后的三維纖維基材料浸漬含有細(xì)胞生長(zhǎng)因子的膠原蛋白水溶膠，然后干燥，細(xì)胞生長(zhǎng)因子含量為15wt％，膠原蛋白的含量為100IU/mL；（4）交聯(lián)固化干燥完畢后進(jìn)行交聯(lián)固化，其中，所述交聯(lián)劑選自1-乙基-3-(3-二甲基胺丙基)-碳化二亞胺，交聯(lián)固化結(jié)束后，得到創(chuàng)面修復(fù)敷料。其中所述交聯(lián)劑溶液中交聯(lián)劑的含量濃度優(yōu)選為0.08mol/L，所述交聯(lián)固化的時(shí)間14h。將創(chuàng)面修復(fù)敷料粘合在纖維基底層上。創(chuàng)面修復(fù)敷料在創(chuàng)面的測(cè)試用100只白兔做測(cè)試，建立動(dòng)物創(chuàng)傷模型，隨機(jī)分成5組：實(shí)施例1組、實(shí)施例2組、實(shí)施例3組、對(duì)比例組和空白對(duì)照組，每組20只。白兔麻醉消毒后，制造成3cm×3cm的切口，完整去除皮膚全層，分別用與創(chuàng)面相同大小的實(shí)施例組和對(duì)比例組膜貼覆蓋創(chuàng)面，空白對(duì)照創(chuàng)面不做特殊處理，然后無(wú)菌加壓包扎。術(shù)后肌注青霉素10u/kgbw，每天2次，連續(xù)3天注射，預(yù)防感染。每周換藥，去除各組膜貼，傷口清潔后按原方法包扎。1至4周后觀察各組動(dòng)物創(chuàng)面的變化，計(jì)算創(chuàng)面愈合率，創(chuàng)面愈合率＝(原始創(chuàng)面面積-現(xiàn)有創(chuàng)面面積)/原始創(chuàng)面面積×100％，結(jié)果如下表1：表1術(shù)后不同時(shí)間點(diǎn)各組的創(chuàng)面愈合率（％）組別第一周第二周第四周空白對(duì)照14.9163.3398.94對(duì)比例123.7683.5899.97對(duì)比例2257998.88對(duì)比例3208198.90實(shí)施例1279099.99實(shí)施例2298999.97表1顯示本發(fā)明的第二周愈合率明顯高于其他方法制造的創(chuàng)面修復(fù)敷料。實(shí)施例組創(chuàng)面未見(jiàn)明顯瘢痕攣縮、無(wú)紅腫和炎癥，空白對(duì)照組出現(xiàn)水腫和炎癥，比較例部分有明顯瘢痕攣縮。孔隙率的測(cè)定：在恒溫條件下，往5ml比重瓶中裝滿(mǎn)無(wú)水乙醇，稱(chēng)重(W1)，將復(fù)合纖維膜稱(chēng)重(Ws)。并將膜置于比重瓶中，靜置15min,利用真空泵進(jìn)行脫氣，直至無(wú)氣泡逸出，使乙醇充分?jǐn)U散到膜的孔隙中，加滿(mǎn)乙醇，稱(chēng)重(W2)。把浸滿(mǎn)乙醇的樣品取出，對(duì)剩余的乙醇與比重瓶進(jìn)行稱(chēng)重(W3)。計(jì)數(shù)公式：孔隙率＝(W2-W3-Ws)/(W1-W3)表2孔隙率（％）實(shí)施例188％實(shí)施例286％比較例182％比較例265％比較例383％當(dāng)前第1頁(yè)1 2 3