本發(fā)明屬于生活用品與保健品領(lǐng)域，和天然產(chǎn)物提取物抗菌技術(shù)領(lǐng)域。具體地，涉及一種具有抗菌作用的含有竹葉黃酮提取物的牙膏及其制備方法。是竹子綜合利用技術(shù)，竹子中提取的竹葉黃酮作為一種新型的、天然的抗菌活性物質(zhì)。
背景技術(shù)：
竹葉作為天然植物葉，含有極其豐富的活性成分和無機礦物元素，自古以來就極具藥用價值，目前淡竹葉更是收藏于《中國藥典》中。關(guān)于竹葉的藥效，在《本草求真》、《藥品化義》等古籍和現(xiàn)在的《中藥大辭典》中均有記載。1998年，(淡)竹葉又被衛(wèi)生部批準列入“藥、食兩用的天然植物名單。”可見竹葉本身就具有安全使用性。近年的研究報道表明，竹葉具有抗脂質(zhì)過氧化、清除自由基、抗衰老、調(diào)節(jié)血脂、抗輻射、抗炎、抑菌劑增強免疫力等功效。采用急性毒性試驗(霍恩氏法)，據(jù)Ames試驗結(jié)果判斷標準，所測試的竹葉提取物無致突變作用。浙江省醫(yī)學科學院于1998－1999年間又對竹康寧膠囊(竹葉黃酮粉、竹葉黃酮)進行毒理學安全性評價，證實了竹葉提取物無毒副作用，具有很高的安全性。麻竹(學名：Dendrocalamuslatiflorus Munro)，是中國南方栽培最廣的竹種，筍味甜美，每年均有大量筍干和罐頭上市，甚至遠銷日本和歐美等國。麻竹庭園栽植，觀賞價值也高。由于麻竹是大型叢生竹，比起散生竹淡竹等，具有更豐富的資源儲存量，是作為竹葉產(chǎn)品開發(fā)較為理想的原材料。
隨著經(jīng)濟的發(fā)展和生活水平的提高，人們對口腔疾病的重視程度越來越高?？谇患膊∪绻粡脑搭^根治會伴隨著引發(fā)一些疾病，大量研究表明，糖尿病、心臟病、關(guān)節(jié)炎、腎病、眼病、胃腸道疾病、腦血管疾病、呼吸道疾病等都與口腔疾病有較強的相關(guān)性。而這些疾病大多是由細菌、致病菌、毒素在口腔蔓延引起的等有關(guān)，因此開發(fā)具有抗菌效能的藥物具有非?？谇坏慕】稻妥兊糜绕渲匾?/p>
牙膏是清潔口腔及牙齒最佳的日用品，除了具有潔牙護牙、去除口腔異味和漬垢的功能外，越來越多的功能被需求，如：抑制口腔有害細菌的滋生、輔助殺菌消炎、清熱降火、口氣清新等。目前已經(jīng)有多種功效型牙膏，如抗牙質(zhì)過敏、去漬美白、香型、藥物牙膏等，但是在功效牙膏中都添加了一些化學合成材料，這對人們的健康會造成潛在的威脅。因此，對天然健康的功效牙膏的開發(fā)變得非常急迫。
現(xiàn)有技術(shù)中，曾見金花茶、野菊花、綠茶、小藻球、普洱茶等天然物質(zhì)被用于牙膏中用來預(yù)防口腔疾病的報道，而未見報道將竹葉黃酮提取物用于牙膏中發(fā)揮其護理保健作用。竹葉中的竹葉黃酮具有抗氧化、殺菌消炎、生津止渴、提神醒腦、清涼解毒等功效，除此之外，竹葉具有一股清幽的香氣，使人心曠神怡。將竹葉黃酮用于牙膏中，開發(fā)出具有殺菌消炎、提神醒腦、清涼解毒的天然多功效牙膏極為必要。
技術(shù)實現(xiàn)要素：
本發(fā)明針對現(xiàn)有技術(shù)中存在的上述不足之處，提供一種具有抗菌作用的竹葉黃酮天然牙膏，該牙膏中含有本發(fā)明所提供的方法提取得到的竹葉黃酮提取液以及食品級輔料，除具有潔牙護齒、去除口腔異味和漬垢等牙膏的基本功能外，還能夠有效抑制口腔牙齒有害細菌滋生、殺菌消炎，清涼解毒等功效。
為了實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明解決技術(shù)問題所提供的技術(shù)方案如下：
一種含有竹葉黃酮提取物的具有抗菌作用的牙膏，所述牙膏含有竹葉黃酮提取物。
如所述的一種含有竹葉黃酮提取物的具有抗菌作用的牙膏，其中的竹葉黃酮牙膏各組分按其質(zhì)量百分比計為：竹葉黃酮提取物10％、甘油10％、山梨醇15％、月桂醇硫酸酯鈉2.5％、木糖醇3％、羥甲基纖維素鈉0.6％、磷酸二氫鈉0.2％、磷酸氫鈣二水物30％、黃原膠0.6％、PEG400 3％、水合硅石15％、苯甲酸鈉0.2％、香精0.6％，其余為去離子水。
如所述的一種含有竹葉黃酮提取物的具有抗菌作用的牙膏，其中的竹葉黃酮提取物由下述方法制備而得：
(1)取新鮮麻竹竹葉，清洗、自然晾干、粉碎研磨、過60目篩，得到麻竹竹葉粉末；
(2)將麻竹葉粉末與70％乙醇‐水混合均勻，按照料液比為1:20的比例置于錐形瓶中，在50℃超聲提取2h，連續(xù)2‐3次；
(3)將浸提液過濾去除竹渣，留下提取液用3倍的石油醚萃取、分層，去除上層液，將下層液過大孔樹脂D101純化，用70％乙醇‐水洗脫，收集洗脫液，并在50℃下減壓濃縮至干。
如所述的一種含有竹葉黃酮提取物的具有抗菌作用的牙膏，其中的竹葉黃酮提取物由下述方法制備而得：
(1)取新鮮麻竹竹葉，清洗、自然晾干、粉碎研磨、過60目篩，得到麻竹竹葉粉末；
(2)將麻竹葉粉末與70％乙醇‐水混合均勻，按照料液比為1:20的比例置于錐形瓶中，在50℃超聲提取2h，連續(xù)2‐3次；
(3)將浸提液過濾去除竹渣，留下提取液用3倍的石油醚萃取、分層，去除上層液，將下層液過大孔樹脂D101純化，用70％乙醇‐水洗脫，收集洗脫液，并在50℃下減壓濃縮至干。
本發(fā)明同時提供了竹葉黃酮提取物在制備具有抗菌作用的牙膏中的應(yīng)用，所述的竹葉黃酮提取物由下述方法制備而得：
(1)取新鮮麻竹竹葉，清洗、自然晾干、粉碎研磨、過60目篩，得到麻竹竹葉粉末；
(2)將麻竹葉粉末與70％乙醇‐水混合均勻，按照料液比為1:20的比例置于錐形瓶中，在50℃超聲提取2h，連續(xù)2‐3次；
(3)將浸提液過濾去除竹渣，留下提取液用3倍的石油醚萃取、分層，去除上層液，將下層液過大孔樹脂D101純化，用70％乙醇‐水洗脫，收集洗脫液，并在50℃下減壓濃縮至干。
如所述的竹葉黃酮提取物在制備具有抗菌作用的牙膏中的應(yīng)用，其中所述的抗菌作用是指抗金黃色葡萄球菌、鏈球菌、乳桿菌、厭氧擴菌、嗜酸乳桿菌、共生放線菌、大腸桿菌。
本發(fā)明還提供了竹葉黃酮提取物在制備預(yù)防口腔疾病的牙膏中的應(yīng)用。
如所述的竹葉黃酮提取物在制備預(yù)防口腔疾病的牙膏中的應(yīng)用，其中所述的預(yù)防口腔疾病是竹葉黃酮通過抗氧化、殺菌消炎、生津止渴、提神醒腦、清涼解毒作用，達到殺菌消炎、提神醒腦、清涼解毒的功效。
如所述的竹葉黃酮提取物在制備預(yù)防口腔疾病的牙膏中的應(yīng)用，其中所述的預(yù)防口腔疾病是竹葉黃酮通過對金黃色葡萄球菌、鏈球菌、乳桿菌、厭氧擴菌、嗜酸乳桿菌、共生放線菌、枯草芽孢桿菌、大腸桿菌的抑制作用，實現(xiàn)抗菌功效。
本發(fā)明另外還提供了制備上述的一種含有竹葉黃酮提取物的具有抗菌作用的牙膏的方法：所述的竹葉黃酮牙膏各組分按其質(zhì)量百分比計為：竹葉黃酮提取物10％、甘油10％、山梨醇15％、月桂醇硫酸酯鈉2.5％、木糖醇3％、羥甲基纖維素鈉0.6％、磷酸二氫鈉0.2％、磷酸氫鈣二水物30％、黃原膠0.6％、PEG400 3％、水合硅石15％、苯甲酸鈉0.2％、香精0.6％，其余為去離子水；
按照上述配方重量百分比的竹葉黃酮提取物、山梨醇、甘油加入去離子水中進行攪拌至完全溶解，再與其余成分混合、攪拌、均質(zhì)化，真空脫氣，繼續(xù)攪拌均勻使成膏狀物，再經(jīng)研磨后，真空脫氣得牙膏；
其中所述的竹葉黃酮提取物由下述方法制備而得：
(1)取新鮮麻竹竹葉，清洗、自然晾干、粉碎研磨、過60目篩，得到麻竹竹葉粉末；
(2)將麻竹葉粉末與70％乙醇‐水混合均勻，按照料液比為1:20的比例置于錐形瓶中，在50℃超聲提取2h，連續(xù)2‐3次；
(3)將浸提液過濾去除竹渣，留下提取液用3倍的石油醚萃取、分層，去除上層液，將下層液過大孔樹脂D101純化，用70％乙醇‐水洗脫，收集洗脫液，并在50℃下減壓濃縮至干。
本發(fā)明的一種具有抗菌活性的竹葉黃酮提取物及其制備方法和抗菌活性，其提取物的特征為：以叢生竹麻竹屬麻竹(Dendrocalamuslatiflorus Munro)的葉為原料，經(jīng)制備后，得到一種具有抗菌活性的竹葉提取物；該竹葉黃酮提取物對金黃色葡萄球菌、鏈球菌、乳桿菌、厭氧擴菌、嗜酸乳桿菌、共生放線菌、枯草芽孢桿菌、大腸桿菌具有不同程度的抑制，其抗菌效果依次為：金黃色葡萄球菌≈乳桿菌＞嗜酸乳桿菌菌≈鏈球菌＞共生放線菌≈厭氧擴菌＞大腸桿菌，可作為一種天然抗菌活性物質(zhì)。
與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的優(yōu)益性在于：
本發(fā)明的一種具有抗菌作用的竹葉黃酮牙膏及其制備方法，是竹子綜合利用技術(shù)，作為一種新型、天然的抗菌活性物質(zhì)。本發(fā)明以竹子的葉子為原料，經(jīng)清洗、自然晾干、粉碎研磨、過目篩、水熱回流、萃取、大孔樹脂純化、減壓濃縮，得到一種具有抗菌活性作用的竹葉黃酮提取物。以口腔常見細菌：金黃色葡萄球菌、鏈球菌、乳桿菌、厭氧擴菌、嗜酸乳桿菌、共生放線菌、大腸桿菌為受試菌，采用體外抑菌圈法對其抗菌效果進行了檢測。竹葉黃酮提取物對絕大多數(shù)受試菌抗菌效果良好，抗菌效果依次為：金黃色葡萄球菌≈乳桿菌＞嗜酸乳桿菌菌≈鏈球菌＞共生放線菌≈厭氧擴菌＞大腸桿菌。將具有抗菌作用的竹葉黃酮提取物配合食品級輔料制得具有抗菌作用的竹葉黃酮牙膏。各組分按其重量比計為：各組分按其質(zhì)量百分比計為：竹葉黃酮提取物10％、甘油10％、山梨醇15％、月桂醇硫酸酯鈉2.5％、木糖醇3％、羥甲基纖維素鈉0.6％、磷酸二氫鈉0.2％、磷酸氫鈣二水物30％、黃原膠0.6％、PEG400 3％、水合硅石15％、苯甲酸鈉0.2％、香精0.6％，其余為去離子水。竹葉黃酮牙膏從根本上消除了牙膏腐敗變質(zhì)、變色變味和化工安全等質(zhì)量問題，有效地提高了竹葉黃酮牙膏的保質(zhì)期限。同時，竹葉黃酮牙膏具有減少菌斑，防止有害細菌滋生、殺菌消炎、止血祛味、生津潤口、清熱消炎、口氣清新等功效，竹葉清香對恢復(fù)味蕾、提高味覺有特別的功效。本發(fā)明所采用的原料為可再生資源，且資源保有量大，生產(chǎn)成本低，制備步驟簡單易操作。該竹葉黃酮提取物采用了乙醇提取，無毒無污染，具有較好的抗菌活性，可作為天然抗菌活性產(chǎn)品開發(fā)。由竹葉黃酮提取物作為主要成分的牙膏具有抗菌作用，并且選取了竹葉黃酮提取物最佳的抗菌含量，對常見口腔疾病有顯著的預(yù)防和緩解效果。竹葉黃酮天然提取物制備的牙膏具有生津止渴、提神醒腦、清涼解毒、口氣清新等眾多功效。能長效保持口腔清潔衛(wèi)生。竹葉黃酮天然提取物無毒、無污染、成本低廉。竹葉黃酮牙膏的開發(fā)，為竹副產(chǎn)業(yè)的發(fā)展奠定基礎(chǔ)。
附圖說明
圖1為不同含量的竹葉黃酮提取物對金黃色葡萄球菌的抗菌效果圖。
具體實施方式
下面結(jié)合附圖，用本發(fā)明的具體實施例來進一步說明本發(fā)明的實質(zhì)性內(nèi)容，但并不以此來限制本發(fā)明。
實施例1：
具有抗菌作用的竹葉黃酮提取物的制備：
(1)取麻竹竹葉1kg，清洗、自然晾干、粉碎研磨、過40目篩，制成竹葉粉末；
(2)將步驟(1)所得的竹葉粉末與0％乙醇‐水混合均勻，按照料液比為1:5的比例添加錐形瓶中，在30℃下超聲提取1h，連續(xù)4次.
(3)將步驟(2)中所得的浸提液壓濾過濾去除竹渣，留下提取液用1:1的石油醚萃取、分層，去除上層液，將下層液在30℃下減壓濃縮。將濃縮液過大孔樹脂D101純化，用0％乙醇水洗脫，將洗脫液濃縮得到竹葉黃酮提取物。
實施例2
具有抗菌作用的竹葉黃酮提取物的制備：
(1)取麻竹竹葉1kg，清洗、自然晾干、粉碎研磨、過50目篩，制成竹葉粉末；
(2)將步驟(1)所得的竹葉粉末與30％乙醇‐水混合均勻，按照料液比為1:10的比例添加于錐形瓶中，在40℃下超聲提取2h，連續(xù)3次
(3)將步驟(2)中所得的浸提液壓濾過濾去除竹渣，留下提取液用1:2的石油醚萃取、分層，去除上層液，將下層液在40℃下減壓濃縮。將濃縮液過大孔樹脂D101純化，用30％乙醇水洗脫，將洗脫液濃縮得到竹葉黃酮提取物。
實施例3
具有抗菌作用的竹葉黃酮提取物的制備：
(1)取麻竹竹葉1kg，清洗、自然晾干、粉碎研磨、過60目篩，制成竹葉粉末；
(2)將步驟(1)所得的竹葉粉末與70％乙醇‐水混合均勻，按照料液比為1:20的比例添加于錐形瓶中，在50℃下超聲提取3h，連續(xù)2次
(3)將步驟(2)中所得的浸提液壓濾過濾去除竹渣，留下提取液用1:3的石油醚萃取、分層，去除上層液，將下層液在60℃下減壓濃縮。將濃縮液過大孔樹脂D101純化，用70％乙醇水洗脫，將洗脫液濃縮得到竹葉黃酮提取物。
實施例4
具有抗菌作用的竹葉黃酮牙膏的制備：
一種竹葉黃酮功能牙膏，其按照質(zhì)量百分比包括如下組分：竹葉黃酮提取物10％、甘油15％、山梨醇10％、月桂醇硫酸酯鈉3％、木糖醇3％、羥甲基纖維素鈉1％、磷酸二氫鈉0.3％、磷酸氫鈣二水物35％、黃原膠0.3％、PEG400 5％、水合硅石10％、苯甲酸鈉0.1％、香精1％，其余為去離子水。
按照上述配方重量百分比的竹葉黃酮提取物(按實施例1-3的方法所得)、山梨醇、甘油加入去離子水中進行攪拌至完全溶解，再與其余成分混合、攪拌、均質(zhì)化，真空脫氣，繼續(xù)攪拌均勻使成膏狀物，再經(jīng)研磨后，真空脫氣。
實施例5
具有抗菌作用的竹葉黃酮牙膏的制備：
一種竹葉黃酮功能牙膏，其按照質(zhì)量百分比包括如下組分：竹葉黃酮提取物(按實施例1‐3的方法所得)10％、甘油10％、山梨醇15％、月桂醇硫酸酯鈉2.5％、木糖醇3％、羥甲基纖維素鈉0.6％、磷酸二氫鈉0.2％、磷酸氫鈣二水物30％、黃原膠0.6％、PEG400 3％、水合硅石15％、苯甲酸鈉0.2％、香精0.6％，其余為去離子水。
按照上述配方重量百分比的各組分，按牙膏常規(guī)制備方法制成牙膏。
實施例6
具有抗菌作用的竹葉黃酮牙膏的制備：
一種竹葉黃酮功能牙膏，其按照質(zhì)量百分比包括如下組分：竹葉黃酮提取物10％、甘油15％、山梨醇15％、月桂醇硫酸酯鈉2％、木糖醇3％、羥甲基纖維素鈉0.3％、磷酸二氫鈉0.1％、磷酸氫鈣二水物25％、黃原膠1％、PEG400 4％、水合硅石20％、苯甲酸鈉0.3％、香精0.6％，其余為去離子水。
按照上述配方重量百分比的竹葉黃酮提取物(按實施例1-3的方法所得)、山梨醇、甘油加入去離子水中進行攪拌至完全溶解，再與其余成分混合、攪拌、均質(zhì)化，真空脫氣，繼續(xù)攪拌均勻使成膏狀物，再經(jīng)研磨后，真空脫氣。
實施例7
竹葉黃酮提取物抗菌效果實驗：
(1)供試菌株懸浮液制備：將7種供試菌種分別接種于固體肉湯培養(yǎng)基中，于37℃，恒溫培養(yǎng)24h。用接種鉤挑取已進行菌種斜面活化的培養(yǎng)基表面的菌塊，加入無菌生理鹽水，在組織研磨器中研磨均勻，并將菌懸液的濃度調(diào)節(jié)到1×106‐6×106cfu/ml。
(2)抑菌試驗：配制LB固體培養(yǎng)基，將固體培養(yǎng)基溶化倒入培養(yǎng)皿中冷卻、凝固后，用無菌棉拭子分別蘸取各試驗菌的菌懸液，均勻涂布培養(yǎng)基表面，制成含菌平板，每個菌種重復(fù)3次實驗。采用濾紙片法，將直徑5mm的濾紙圓片，經(jīng)高壓滅菌處理后干燥，滴加10μl1％本發(fā)明實施例1‐3所得竹葉黃酮提取物作為試驗樣片，滴加DMSO液作為陰性對照片，用無菌鑷子將試驗樣片和2片陰性對照樣片貼放于每個培養(yǎng)皿表面，蓋好培養(yǎng)皿，于37℃培養(yǎng)24h。結(jié)果如表1所示。
(3)竹葉黃酮提取物抗菌活性量的選擇：以金黃色葡萄球菌作為受試菌，將制備好的菌株懸液勻涂布在固體培養(yǎng)基表面，制成含菌平板，每個菌種重復(fù)3次實驗。采用濾紙片法，將直徑5mm的濾紙圓片，經(jīng)高壓滅菌處理后干燥，分別滴加10μl 0.1％，1％，2％，3％，4％，5％，10％，15％的竹葉黃酮提取物作為試驗樣片，滴加DMSO液作為陰性對照片，用無菌鑷子將試驗樣片和2片陰性對照樣片貼放于每個培養(yǎng)皿表面，蓋好培養(yǎng)皿，于37℃培養(yǎng)24h。觀察培養(yǎng)基濾紙片周圍的的變化，得出竹葉黃酮提取物最佳的抑菌濃度，結(jié)果如圖1所示。由表1和圖1可以看出，本發(fā)明竹葉黃酮提取物作為主要成分的牙膏對7種受試菌均具有抗菌作用。
表1 5％竹葉黃酮提取物對7種受試菌的抗菌活性
注：“－”：無抑菌活性；抑菌圈直徑：以mm計。
申請人聲明，本發(fā)明通過上述實施例來說明本發(fā)明的詳細方法，但本發(fā)明并不局限于上述詳細方法，即不意味著本發(fā)明必須依賴上述詳細方法才能實施。所述技術(shù)領(lǐng)域的技術(shù)人員應(yīng)該明了，對本發(fā)明的任何改進，對本發(fā)明產(chǎn)品各原料的等效替換及輔助成分的添加、具體方式的選擇等，均落在本發(fā)明的保護范圍和公開范圍之內(nèi)。