本發(fā)明屬于多酚提取技術領域。更具體地，本發(fā)明涉及一種提高木瓜皮多酚抗氧化活性的HPEF提取方法。

背景技術：

木瓜(學名：Chaenomeles sinensis(Thouin)Koehne)，有“百益果王”的稱號，它不僅食味鮮美，而且也是營養(yǎng)價值和藥用價值很高的中藥。中醫(yī)認為，木瓜具有舒經(jīng)活絡、健脾開胃、祛風濕的功效。我國的木瓜多產(chǎn)于山東、陜西、湖北、江西、安徽、江蘇、浙江、廣東、廣西等地。

由于習慣以及加工條件的限制，木瓜皮在加工中一般被遺棄，造成極大的資源浪費。從以往的研究可以發(fā)現(xiàn)，木瓜皮中含有多酚類化合物、生物堿、維生素等多種生理活性物質(zhì)，但對這些物質(zhì)進行提取、成分分析的研究報道很少，尤其是對木瓜皮多酚的研究就更少了。多酚在增強免疫力、降血糖、抗腫瘤、抗炎、抗病毒、抗衰老、抗凝血等方面發(fā)揮著生物活性作用。隨著技術發(fā)展和人類認識不斷加深，人們發(fā)現(xiàn)多酚類在生物體中除作結構材料和能源性材料外，更重要地，還參與了生命現(xiàn)象中細胞的各種活動。多酚廣泛應用于食品、紡織、化妝品和醫(yī)藥領域等領域，其在生物學上的重要意義決定了它在食品及醫(yī)藥領域有廣闊的前景。

多酚是多羥基化合物，它的結構特點決定多酚易溶或可溶于水、醇類、醚類、酮類、酯類等，因此，溶劑提取法主要有水溶劑提取和有機溶劑提取兩種。除此之外，還有微波輔助提取、超聲波輔助提取、生物酶解提取、超臨界流體萃取和膜技術提取等。CN 200610095283.8、“木瓜多酚類物質(zhì)的酶解提取方法”公開了一種木瓜多酚類物質(zhì)的酶解提取方法，它主要是經(jīng)過制漿、酶解、固液分離、回流浸提、合并、濃縮和干燥的步驟，在纖維素酶的作用下，從木瓜中分別得到木瓜水提物和木瓜醇提物，然后彼此混合，加入高倍醇，經(jīng)沉淀后除去蛋白多糖等雜質(zhì)，再經(jīng)減壓濃縮、噴霧干燥后即得木瓜粗多酚固體物。

高壓脈沖電場法(HPEF)是近年發(fā)展起來的一種新技術，其機理是利用細胞膜電穿孔原理在瞬間使細胞破壁，造成細胞膜電位混亂，細胞壁和細胞膜受到可逆或小可逆的破壞，從而令細胞組分流出，具有處理時間短、能耗低、較不易引起目的產(chǎn)物變性等優(yōu)點。以提高木瓜皮多酚抗氧化活性為目的的HPEF提取方法，能夠克服常規(guī)乙醇水提取對活性物質(zhì)帶來的不利影響；利用HPEF提取方法能夠加強與樣品相接觸的溶劑，并破壞其中木瓜中的細胞組分，將所需化合物從樣品基體中分離，從而進入溶劑中。CN 201010278239.7、“一種減少蘋果多酚在貯藏過程中損失量的高壓脈沖處理方法”公開了一種減少蘋果多酚在貯藏過程中損失量的高壓脈沖處理方法，其處理步驟包括：稱取蘋果多酚粉末0.5g溶于1000mL pH值5.0～7.0的磷酸緩沖溶液中，得到36.3mg/100mL電導率為2.11～4.90的蘋果多酚溶液，將配制完成的蘋果多酚溶液泵入高壓脈沖處理室，設置場強30～35KV/cm，脈寬4～6μs，頻率80～100Hz，循環(huán)處理1000～1500μs，收集處理完成的蘋果多酚溶液，蘋果多酚含量37.1～39.5mg/100mL。

目前尚無利用HPEF提取方法提取木瓜多酚的研究和應用。本發(fā)明人在已有研究的基礎上做了大量試驗，對于不同原料中的多酚，由于其溶出速率及干擾組分存在差異，在選擇處理條件上綜合考慮了得率、純度及抗氧化性能的差異，終于研制出本發(fā)明方法。本發(fā)明方法具有快速、成本低等特點，并且可以減少溶劑的用量，提高提取得率以及產(chǎn)品純度。

技術實現(xiàn)要素：

[要解決的技術問題]

本發(fā)明的目的是提供一種提高木瓜皮多酚抗氧化活性的HPEF提取方法。

[技術方案]

本發(fā)明是通過下述技術方案實現(xiàn)的。

本發(fā)明涉及一種提高木瓜皮多酚抗氧化活性的HPEF提取方法，所述方法包括以下步驟：

(1)原料處理

將木瓜皮清洗干凈后置于烘箱中烘至近干，然后在恒溫恒濕干燥器內(nèi)烘至恒重，使得木瓜皮的含水率低于0.01％，然后粉碎并過80目篩后，得到木瓜皮粉末，備用；

(2)HPEF提取

步驟(1)得到的木瓜皮粉末與乙醇水溶液混合，得到的混合物利用HPEF進行處理，再在0.01MPa條件下減壓過濾1.0h，得到的濾渣用提取溶劑洗滌3次，洗滌后的濾渣合并，得到木瓜皮多酚粗產(chǎn)品；

(3)樹脂吸附

將步驟(2)得到的木瓜皮多酚粗產(chǎn)品加水配制成10.0mg/mL的溶液，用大孔樹脂進行吸附，然后在30℃恒溫水浴中振蕩12h，振蕩頻率為1000r/min；

(4)成品制備

將步驟(3)的吸附后的大孔樹脂過濾，過濾后的樹脂用蒸餾水洗滌兩次，待樹脂濾干后用體積濃度50％的乙醇進行動態(tài)洗脫，洗脫液濃縮后真空冷凍干燥，得到木瓜皮多酚提取物固體。

根據(jù)本發(fā)明的一種具體實施方案，步驟(1)中所述烘箱的溫度為55～65℃，所述的恒溫恒濕干燥器的溫度為100～110℃。

根據(jù)本發(fā)明的另一種具體實施方案，在步驟(2)中，按照以mg計木瓜皮粉末的質(zhì)量與以mL計乙醇水溶液的體積比1:20～1:60的比例，將木瓜皮粉末置于乙醇水溶液中。

根據(jù)本發(fā)明的另一種具體實施方案，在步驟(2)中，HPEF的處理條件為功率400～600W、電場強度20～30KV/cm、脈寬4～8μs、頻率60～80Hz，處理時間為3～5h。

根據(jù)本發(fā)明的另一種具體實施方案，在步驟(2)中，所述乙醇水溶液的體積濃度是50～80％。

根據(jù)本發(fā)明的另一種具體實施方案，在步驟(2)中，提取溶劑是丙酮或乙醇，其體積濃度是60％～90％，以mg計濾渣的質(zhì)量與以mL計提取溶劑的體積之比為1:30～50。

根據(jù)本發(fā)明的另一種具體實施方案，在步驟(3)中，大孔樹脂吸附的流速為1.0～3.0BV/h，吸附時間為1.0～3.0h。

根據(jù)本發(fā)明的另一種具體實施方案，在步驟(4)中，動態(tài)洗脫的速率為2.0～4.0BV/h。

根據(jù)本發(fā)明的另一種具體實施方案，在步驟(4)中，洗脫液在60℃條件下濃縮到原有體積的10～15％，然后在-20～-10℃溫度和0.1～0.2MPa壓力條件下進行真空冷凍干燥。

下面將更詳細地描述本發(fā)明。

本發(fā)明涉及一種提高木瓜皮多酚抗氧化活性的HPEF提取方法，所述方法包括以下步驟：

(1)原料處理

將木瓜皮清洗干凈后置于55～65℃烘箱中烘至近干，然后在100～110℃恒溫恒濕干燥器內(nèi)烘至恒重，使得木瓜皮的含水率低于0.01％，然后粉碎并過80目篩后，得到木瓜皮粉末，備用。

在該原料處理步驟中，烘干木瓜皮的烘箱溫度范圍為55～65℃是適宜的，如果溫度高于65℃，會導致組織水分散失過快帶來組織體的萎縮，如果溫度低于55℃則會導致原料預處理時間過長。

恒溫恒濕干燥器的溫度100～110℃是適宜的，如果溫度高于110℃，會造成原料組織內(nèi)活性物質(zhì)的降解，如果低于100℃則會導致水分清除不徹底。使用的恒溫恒濕干燥器是本技術領域常用的可在市場上購買得到的產(chǎn)品，例如上海一恒儀器公司生產(chǎn)銷售的DHG-9031A型產(chǎn)品。

用恒溫恒濕干燥器處理木瓜皮使其含水率低于0.01％，是為了提高樣品的貯藏性及提高后期處理效率。

接下來木瓜皮進行粉碎并過80目篩，這是為了利于下一步HPEF提取，提高萃取效率，降低活性成分的破壞率。

(2)HPEF提取

按照以mg計木瓜皮粉末的質(zhì)量與以mL計乙醇水溶液的體積比1:20～1:60的比例，將步驟(1)得到的木瓜皮粉末置于體積濃度50～80％的乙醇水溶液中，得到的混合物利用HPEF進行處理，HPEF的處理條件為功率400～600W、電場強度20～30KV/cm、脈寬4～8μs、頻率60～80Hz，處理時間為3～5h，再在0.01MPa條件下減壓過濾1.0h，得到的濾渣用提取溶劑洗滌3次，提取溶劑是丙酮或乙醇，其體積濃度是60～90％，以mg計濾渣的質(zhì)量與以mL計提取溶劑的體積之比為1:30～50，洗滌后的濾渣合并，得到木瓜皮多酚粗產(chǎn)品。

本發(fā)明方法中使用的HPEF設備是本技術領域常用的設備，可在市場中購買得到，例如是中國農(nóng)業(yè)大學生產(chǎn)的OSU-4L型實驗室規(guī)模高壓脈沖電場連續(xù)處理設備。

對于HPEF提取方法來說，高壓脈沖功率、電場強度、料液比、脈寬、脈沖頻率等都是影響提取效率的關鍵因素。

在高壓脈沖功率方面，400～600W是合適的，在該功率條件下，原料組織內(nèi)活性物質(zhì)的溶出速率最為合適。

在電場強度上，當電場強度大于20KV/cm時，多酚的提取率逐漸提高，當電場強度超過30KV/cm，多酚的提取率下降。這是由于隨著電場強度增加，運動加快的極性溶劑能夠更多地進入到細胞內(nèi)，使多酚更容易滲透出來，同時細胞內(nèi)外的電場強度差異使細胞電極化，從而破壞細胞膜，使多酚更容易被提取。但過大的電場強度對多酚有降解作用。因此電場強度20～30KV/cm是適宜的。

在料液比方面，以mg計木瓜皮粉末的質(zhì)量與以mL計乙醇水溶液的體積之比是1:20～1:60。當木瓜皮的粉末質(zhì)量一定而溶劑量過少時，萃取體系的滲透壓過高，會阻礙木瓜皮多酚的溶出。當料液比在1:20～1:60這一范圍內(nèi)時，提取率隨著溶劑量增加而提高，當料液比超過1:60時，提取率下降。

在脈寬方面，由于兼顧儀器運行成本及提取效率，因而脈寬4～8μs是合適的。

脈沖頻率的適宜范圍是60～80Hz，這是由于高壓脈沖電場對植物細胞破壞的程度會影響提取率，當脈沖頻率小于60Hz時，會造成破壁作用不明顯、提取效率無明顯變化；當脈沖頻率大于80Hz時，由于電場頻率過大，會造成多酚降解。

該步驟中使用的提取溶劑是丙酮或乙醇，之所以選擇這些溶劑作為提取溶劑，是因為這些溶劑可改善原料和提取溶劑分子間的作用力，從而改善原料與提取溶劑的溶解度和選擇性。

提取溶劑的濃度對于多酚的提取效率有重要影響。如果提取溶劑的濃度高于90％，會造成原料與提取溶劑的溶解度降低；如果濃度低于60％，則會造成原料中活性物質(zhì)與提取溶劑的選擇性降低。

(3)樹脂吸附

將步驟(2)得到的木瓜皮多酚粗產(chǎn)品加水配制成10.0mg/mL的溶液，用大孔樹脂進行吸附，大孔樹脂吸附的流速為1.0～3.0BV/h，吸附時間為1.0～3.0h，然后在30℃恒溫水浴中振蕩12h，振蕩頻率為1000r/min。

在本發(fā)明方法中使用的大孔樹脂是本技術領域常用的大孔樹脂，例如是Daion HP-20或Amberlite XAD-4大孔樹脂，它們的特點是成本低且適用性好。

本發(fā)明方法使用例如由上海一恒生產(chǎn)的WSZ-10A恒溫振蕩器進行恒溫水浴振蕩，這些設備也都是本技術領域常用的設備。

(4)成品制備

將步驟(3)的吸附后的大孔樹脂過濾，過濾后的樹脂用蒸餾水洗滌兩次，待樹脂濾干后用體積濃度50％的乙醇進行動態(tài)洗脫，其洗脫速率為2.0～4.0BV/h，洗脫液在60℃條件下濃縮到原有體積的10～15％，然后在-20～-10℃溫度和0.1～0.2MPa壓力條件下進行真空冷凍干燥，得到木瓜皮多酚提取物固體。

之所以用濃度50％乙醇進行動態(tài)洗脫，是由于此濃度下解吸率最高。

采用以下方法和條件測定根據(jù)上述方法制備得到的木瓜皮多酚的得率、純度以及DPPH自由基清除能力。

采用Folin-酚法測定多酚產(chǎn)品中多酚的純度，測定的條件為：準確稱取一定質(zhì)量的多酚產(chǎn)品，加水溶解后定容成一定體積，吸取樣品溶液1mL，加入1mL蒸餾水、1mL Folin-酚試劑、3mL 10％的Na₂CO₃，測其750nm處的吸光值，代入回歸方程計算多酚含量，并計算多酚得率。

多酚得率的計算公式為：

多酚得率(mg/g)＝提取產(chǎn)品多酚量(mg)/原料總量(g)。

采用van der Toorn等使用的DTNB間接測定卷煙煙氣中自由基，結果以自由基清除率(％)表示，不同提取物清除自由基能力采用清除的IC₅₀值表示；計算出自由基清除率為50％時所需提取物濃度(EC₅₀)，按式計算IC₅₀＝50％×加入的DPPH質(zhì)量/加入的試樣溶液中溶質(zhì)質(zhì)量。

測定結果表明，根據(jù)本發(fā)明方法制備得到的木瓜皮多酚的DPPH自由基清除能力比傳統(tǒng)70％乙醇水提法提高1.31～1.83倍，具有明顯提高的DPPH自由基清除能力。如附圖1所示，在DPPH自由基體系中，木瓜皮多酚的IC₅₀為30.21～42.36μg/mL。

根據(jù)本發(fā)明方法制備得到的木瓜皮多酚具有抗氧化、增強機體免疫功能及抗腫瘤等活性，可在食品、醫(yī)藥及煙草領域中應用。

[有益效果]

與現(xiàn)有技術相比，本發(fā)明具有以下有益效果：

(1)本發(fā)明的提取方法適宜工業(yè)化生產(chǎn)，提取率高、純度高；

(2)根據(jù)本發(fā)明方法得到的木瓜皮多酚具有明顯提高的DPPH自由基清除能力；

(3)所使用的溶劑等具有無毒、無害、用量少、成本低的特點，工藝簡單、無環(huán)境污染，具有高效、省時和成本低等優(yōu)點，是一種綠色環(huán)保、前景廣闊的木瓜皮多酚提取技術。

【附圖說明】

附圖1是本發(fā)明的提取方法的木瓜皮多酚的得率、純度以及清除DPPH自由基活性的IC50值與傳統(tǒng)的乙醇水提法的對比圖。

【具體實施方式】

通過下述實施例將能夠更好地理解本發(fā)明。

實施例1：本發(fā)明的木瓜皮多酚的提取

(1)原料處理

稱取木瓜皮置于60℃烘箱中烘至近干，然后置于105℃的恒溫恒濕干燥器內(nèi)烘至恒重，過80目篩后，備用；

(2)HPEF提取

按照以mg計木瓜皮粉末的質(zhì)量與以mL計乙醇水溶液的體積比1:40的比例，取步驟(1)得到的木瓜皮粉末樣品，置于體積濃度70％的乙醇水溶液中，在功率500W、電場強度25KV/cm、脈寬6μs、頻率70Hz的處理條件下，用HPEF設備(OSU-4L型實驗室規(guī)模高壓脈沖電場連續(xù)處理設備，中國農(nóng)業(yè)大學生產(chǎn))處理3h，在SHZ-D(III)循環(huán)水真空泵0.01MPa條件下減壓過濾1.0h，濾渣用體積濃度為80％的乙醇提取溶劑洗滌3次，以mg計濾渣的質(zhì)量與以mL計提取溶劑的體積之比為1:40，洗滌后的濾渣合并，得到木瓜皮多酚粗產(chǎn)品；

(3)樹脂吸附

將步驟(2)得到的木瓜皮多酚粗產(chǎn)品加水配制成10.0mg/mL的溶液，用Daion HP-20大孔樹脂進行吸附，流速為2.0BV/h，吸附時間為2.0h，然后在WSZ-10A恒溫振蕩器水浴中振蕩12h，保持水浴溫度恒定為30℃，振蕩頻率為1000r/min；

(4)成品制備

將步驟(3)的吸附后的大孔樹脂過濾，過濾后的樹脂用蒸餾水洗滌兩次，待樹脂濾干后用體積濃度50％的乙醇進行動態(tài)洗脫，其洗脫速率為2.0BV/h，洗脫液在60℃條件下濃縮到原有體積的10～15％，然后在-15℃溫度和0.15MPa壓力條件下進行真空冷凍干燥，得到木瓜皮多酚提取物固體。

實施例2：本發(fā)明的木瓜皮多酚的提取

(1)原料處理

稱取木瓜皮置于65℃烘箱中烘至近干，然后置于100℃的恒溫恒濕干燥器內(nèi)烘至恒重，過80目篩后，備用；

(2)HPEF提取

按照以mg計木瓜皮粉末的質(zhì)量與以mL計乙醇水溶液的體積比1:60的比例，取步驟(1)得到的木瓜皮粉末樣品，置于體積濃度60％的乙醇水溶液中，在功率600W、電場強度25KV/cm、脈寬8μs、頻率60Hz的處理條件下，用HPEF設備(OSU-4L型實驗室規(guī)模高壓脈沖電場連續(xù)處理設備，中國農(nóng)業(yè)大學生產(chǎn))處理4h，在SHZ-D(III)循環(huán)水真空泵0.01MPa條件下減壓過濾1.0h，濾渣用體積濃度為90％的乙醇提取溶劑洗滌3次，以mg計濾渣的質(zhì)量與以mL計提取溶劑的體積之比為1:40，洗滌后的濾渣合并，得到木瓜皮多酚粗產(chǎn)品；

(3)樹脂吸附

將步驟(2)得到的木瓜皮多酚粗產(chǎn)品加水配制成10.0mg/mL的溶液，用Amberlite XAD-4大孔樹脂進行吸附，流速為1.0BV/h，吸附時間為3.0h，然后在WSZ-10A恒溫振蕩器水浴中振蕩12h，保持水浴溫度恒定為30℃，振蕩頻率為1000r/min；

(4)成品制備

將步驟(3)的吸附后的大孔樹脂過濾，過濾后的樹脂用蒸餾水洗滌兩次，待樹脂濾干后用體積濃度50％的乙醇進行動態(tài)洗脫，其洗脫速率為4.0BV/h，洗脫液在60℃條件下濃縮到原有體積的10～15％，然后在-20℃溫度和0.1MPa壓力條件下進行真空冷凍干燥，得到木瓜皮多酚提取物固體。

實施例3：本發(fā)明的木瓜皮多酚的提取

(1)原料處理

稱取木瓜皮置于55℃烘箱中烘至近干，然后置于110℃的恒溫恒濕干燥器內(nèi)烘至恒重，過80目篩后，備用；

(2)HPEF提取

按照以mg計木瓜皮粉末的質(zhì)量與以mL計乙醇水溶液的體積比1:20的比例，取步驟(1)得到的木瓜皮粉末樣品，置于體積濃度80％的乙醇水溶液中，在功率600W、電場強度25KV/cm、脈寬7μs、頻率80Hz的處理條件下，用HPEF設備(OSU-4L型實驗室規(guī)模高壓脈沖電場連續(xù)處理設備，中國農(nóng)業(yè)大學生產(chǎn))處理5h，在SHZ-D(III)循環(huán)水真空泵0.01MPa條件下減壓過濾1.0h，濾渣用濃度為70％的乙醇提取溶劑洗滌3次，以mg計濾渣的質(zhì)量與以mL計提取溶劑的體積之比為1:30，洗滌后的濾渣合并，得到木瓜皮多酚粗產(chǎn)品；

(3)樹脂吸附

將步驟(2)得到的木瓜皮多酚粗產(chǎn)品加水配制成10.0mg/mL的溶液，用Daion HP-20大孔樹脂進行吸附，流速為3.0BV/h，吸附時間為1.0h，然后在WSZ-10A恒溫振蕩器水浴中振蕩12h，保持水浴溫度恒定為30℃，振蕩頻率為1000r/min；

(4)成品制備

將步驟(3)的吸附后的大孔樹脂過濾，過濾后的樹脂用蒸餾水洗滌兩次，待樹脂濾干后用體積濃度50％的乙醇進行動態(tài)洗脫，其洗脫速率為3.0BV/h，洗脫液在60℃條件下濃縮到原有體積的10～15％，然后在-20℃溫度和0.2MPa壓力條件下進行真空冷凍干燥，得到木瓜皮多酚提取物固體。

實施例4：本發(fā)明的木瓜皮多酚的提取

(1)原料處理

稱取木瓜皮置于60℃烘箱中烘至近干，然后置于105℃的恒溫恒濕干燥器內(nèi)烘至恒重，過80目篩后，備用；

(2)HPEF提取

按照以mg計木瓜皮粉末的質(zhì)量與以mL計乙醇水溶液的體積比1:40的比例，取步驟(1)得到的木瓜皮粉末樣品，置于體積濃度60％的乙醇水溶液中，在功率600W、電場強度30KV/cm、脈寬8μs、頻率60Hz的處理條件下，用HPEF設備(OSU-4L型實驗室規(guī)模高壓脈沖電場連續(xù)處理設備，中國農(nóng)業(yè)大學生產(chǎn))處理4h，在SHZ-D(III)循環(huán)水真空泵0.01MPa條件下減壓過濾1.0h，濾渣用體積濃度為60％的乙醇提取溶劑洗滌3次，以mg計濾渣的質(zhì)量與以mL計提取溶劑的體積之比為1:30g/mL，洗滌后的濾渣合并，得到木瓜皮多酚粗產(chǎn)品；

(3)樹脂吸附

將步驟(2)得到的木瓜皮多酚粗產(chǎn)品加水配制成10.0mg/mL的溶液，用Amberlite XAD-4大孔樹脂進行吸附，流速為2.0BV/h，吸附時間為1.0h，然后在WSZ-10A恒溫振蕩器水浴中振蕩12h，保持水浴溫度恒定為30℃，振蕩頻率為1000r/min；

(4)成品制備

將步驟(3)的吸附后的大孔樹脂過濾，過濾后的樹脂用蒸餾水洗滌兩次，待樹脂濾干后用體積濃度50％的乙醇進行動態(tài)洗脫，其洗脫速率為2.0BV/h，洗脫液在60℃條件下濃縮到原有體積的10～15％，然后在-10℃溫度和0.1MPa壓力條件下進行真空冷凍干燥，得到木瓜皮多酚提取物固體。

實施例5：本發(fā)明的木瓜皮多酚的提取

(1)原料處理

稱取木瓜皮置于55℃烘箱中烘至近干，然后置于100℃的恒溫恒濕干燥器內(nèi)烘至恒重，過80目篩后，備用；

(2)HPEF提取

按照以mg計木瓜皮粉末的質(zhì)量與以mL計乙醇水溶液的體積比1:20的比例，取步驟(1)得到的木瓜皮粉末樣品，置于體積濃度50％的乙醇水溶液中，在功率400W、電場強度20KV/cm、脈寬5μs、頻率80Hz的處理條件下，用HPEF設備(OSU-4L型實驗室規(guī)模高壓脈沖電場連續(xù)處理設備，中國農(nóng)業(yè)大學生產(chǎn))處理5h，在SHZ-D(III)循環(huán)水真空泵0.01MPa條件下減壓過濾1.0h，濾渣用體積濃度為80％的丙酮提取溶劑洗滌3次，以mg計濾渣的質(zhì)量與以mL計提取溶劑的體積之比為1:50，洗滌后的濾渣合并，得到木瓜皮多酚粗產(chǎn)品；

(3)樹脂吸附

將步驟(2)得到的木瓜皮多酚粗產(chǎn)品加水配制成10.0mg/mL的溶液，用Amberlite XAD-4大孔樹脂進行吸附，流速為3.0BV/h，吸附時間為3.0h，然后在WSZ-10A恒溫振蕩器水浴中振蕩12h，保持水浴溫度恒定為30℃，振蕩頻率為1000r/min；

(4)成品制備

將步驟(3)的吸附后的大孔樹脂過濾，過濾后的樹脂用蒸餾水洗滌兩次，待樹脂濾干后用體積濃度50％的乙醇進行動態(tài)洗脫，其洗脫速率為4.0BV/h，洗脫液在60℃條件下濃縮到原有體積的10～15％，然后在-10℃溫度和0.2MPa壓力條件下進行真空冷凍干燥，得到木瓜皮多酚提取物固體。

實施例6：本發(fā)明的木瓜皮多酚的提取

(1)原料處理

稱取木瓜皮置于65℃烘箱中烘至近干，然后置于100℃的恒溫恒濕干燥器內(nèi)烘至恒重，過80目篩后，備用；

(2)HPEF提取

按照以mg計木瓜皮粉末的質(zhì)量與以mL計乙醇水溶液的體積比1:60的比例，取步驟(1)得到的木瓜皮粉末樣品，置于體積濃度70％的乙醇水溶液中，在功率500W、電場強度20KV/cm、脈寬4μs、頻率70Hz的處理條件下，用HPEF設備(OSU-4L型實驗室規(guī)模高壓脈沖電場連續(xù)處理設備，中國農(nóng)業(yè)大學生產(chǎn))處理3h，在SHZ-D(III)循環(huán)水真空泵0.01MPa條件下減壓過濾1.0h，濾渣用體積濃度為70％的丙酮提取溶劑洗滌3次，以mg計濾渣的質(zhì)量與以mL計提取溶劑的體積之比為1:40，洗滌后的濾渣合并，得到木瓜皮多酚粗產(chǎn)品；

(3)樹脂吸附

將步驟(2)得到的木瓜皮多酚粗產(chǎn)品加水配制成10.0mg/mL的溶液，用Amberlite XAD-4大孔樹脂進行吸附，流速為1.0BV/h，吸附時間為2.0h，然后在WSZ-10A恒溫振蕩器水浴中振蕩12h，保持水浴溫度恒定為30℃，振蕩頻率為1000r/min；

(4)成品制備

將步驟(3)的吸附后的大孔樹脂過濾，過濾后的樹脂用蒸餾水洗滌兩次，待樹脂濾干后用體積濃度50％的乙醇進行動態(tài)洗脫，其洗脫速率為3.0BV/h，洗脫液在60℃條件下濃縮到原有體積的10～15％，然后在-15℃溫度和0.1MPa壓力條件下進行真空冷凍干燥，得到木瓜皮多酚提取物固體。

實施例7：本發(fā)明的木瓜皮多酚的提取

(1)原料處理

稱取木瓜皮置于60℃烘箱中烘至近干，然后置于105℃的恒溫恒濕干燥器內(nèi)烘至恒重，過80目篩后，備用；

(2)HPEF提取

按照以mg計木瓜皮粉末的質(zhì)量與以mL計乙醇水溶液的體積比1:20的比例，取步驟(1)得到的木瓜皮粉末樣品，置于體積濃度60％的乙醇水溶液中，在功率400W、電場強度30KV/cm、脈寬7μs、頻率60Hz的處理條件下，用HPEF設備(OSU-4L型實驗室規(guī)模高壓脈沖電場連續(xù)處理設備，中國農(nóng)業(yè)大學生產(chǎn))處理4h，在SHZ-D(III)循環(huán)水真空泵0.01MPa條件下減壓過濾1.0h，濾渣用體積濃度為90％的丙酮提取溶劑洗滌3次，以mg計濾渣的質(zhì)量與以mL計提取溶劑的體積之比為1:50，洗滌后的濾渣合并，得到木瓜皮多酚粗產(chǎn)品；

(3)樹脂吸附

將步驟(2)得到的木瓜皮多酚粗產(chǎn)品加水配制成10.0mg/mL的溶液，用Daion HP-20大孔樹脂進行吸附，流速為2.0BV/h，吸附時間為2.0h，然后在WSZ-10A恒溫振蕩器水浴中振蕩12h，保持水浴溫度恒定為30℃，振蕩頻率為1000r/min；

(4)成品制備

將步驟(3)的吸附后的大孔樹脂過濾，過濾后的樹脂用蒸餾水洗滌兩次，待樹脂濾干后用體積濃度50％的乙醇進行動態(tài)洗脫，其洗脫速率為3.0BV/h，洗脫液在60℃條件下濃縮到原有體積的10～15％，然后在-20℃溫度和0.2MPa壓力條件下進行真空冷凍干燥，得到木瓜皮多酚提取物固體。