本專利申請以于2015年1月30日提交到韓國專利廳的韓國專利申請第10-2015-0015524號為基礎(chǔ)主張優(yōu)先權(quán)，上述專利申請的公開事項作為參照插入于本說明書中。
本發(fā)明涉及穩(wěn)定性、用藥依從性及治療效果得到顯著改善的育發(fā)、養(yǎng)發(fā)或生發(fā)促進用組合物。
背景技術(shù)：
人的脫發(fā)周期大體上分為毛發(fā)生長初期(anagen)、毛發(fā)生長中期(catagen)及毛發(fā)生長靜止期(telogen)。毛發(fā)生長初期為隨著毛乳頭的活躍，細胞分裂旺盛，從而使毛發(fā)快速生長的時期。毛發(fā)生長初期的時間因毛的種類而異，但在頭發(fā)的情況下，毛發(fā)生長初期為3-6年左右。在毛發(fā)生長初期生長的毛發(fā)占全部毛發(fā)的80-90％，對于正處于脫發(fā)階段的人而言，其具有毛發(fā)生長初期縮短，且毛發(fā)生長靜止期長的毛發(fā)周期，因而在全部毛發(fā)中，在毛發(fā)生長初期生長的毛發(fā)的比重減少。毛發(fā)生長中期為生長初期結(jié)束之后毛發(fā)的生成逐漸變慢，最終停止細胞分裂及生長的時期，毛發(fā)生長中期為1-1.5個月左右，全部毛發(fā)的1％左右屬于這個階段。毛發(fā)生長靜止期為生長的最后階段，在此階段，毛囊和毛乳頭完全分離，并且毛囊萎縮、毛根進一步靠近上側(cè)，并發(fā)生脫發(fā)的階段。毛發(fā)生長靜止期持續(xù)3-4個月，全部毛發(fā)的4-14％屬于此階段。若在毛發(fā)生長靜止期結(jié)束之后毛乳頭的活動重新活躍，則產(chǎn)生新的毛發(fā)的毛乳頭，并擠出處于毛發(fā)生長靜止期的毛發(fā)，使其完全脫離到頭皮外。
眾所周知，脫發(fā)癥的主要原因與雄激素和類固醇激素有關(guān)，也有壓力嚴重干涉的有關(guān)報道，最近提出脫發(fā)的直接原因在于腎功能障礙的主張，但到目前為止，對于脫發(fā)癥的準確原因或發(fā)病機制，還存在很多的未知部分。
當(dāng)前，用于治療脫發(fā)的制劑大體上分為藥品、準藥品及化妝品。需要有醫(yī)生的處方才能購買的處方藥有由美國默克(merck)公司開發(fā)并銷售的“保法止”，作為其主要成分的非那雄胺(finasteride)于1997年12月作為脫發(fā)治療劑得到美國食品藥品管理局(fda)的核準。非那雄胺作為抑制轉(zhuǎn)換為雙氫睪酮(dihydrotestosterone，dht)的5α-還原酶的藥劑，起到使軟毛生長為粗且長的毛發(fā)的作用。其在短期內(nèi)對改善脫發(fā)具有效果，但據(jù)報道，存在陽痿、性功能減退、男性乳房腫大等副作用。米諾地爾(minoxidil)作為安全性和有效性得到認可，從而無需醫(yī)生處方也可購買的藥品，其于1997年12月作為最初的涂抹用脫發(fā)治療劑，得到美國食品藥品管理局的核準。上述藥品改善血液循環(huán)，并開放鉀通道，從而具有促進毛發(fā)生長的效果，但可能引起瘙癢、皮疹等局部反應(yīng)，并可出現(xiàn)脈頻等。
褪黑激素為由大腦的松果腺生成、分泌的激素，由色氨酸(tryptophan)和血清素(serotonin)制成。褪黑激素作為內(nèi)分泌調(diào)節(jié)劑，具有使毛發(fā)生長、調(diào)節(jié)著色或脫皮的功能，并且可調(diào)節(jié)毛發(fā)的周期，其作為脫氧核糖核酸(dna)恢復(fù)衍生物，促進毛發(fā)的生長。因此褪黑激素可成為可使以往脫發(fā)治療劑的多種副作用最小化的代替技術(shù)方案，但由于光穩(wěn)定性顯著下降，并且溶解度相對低，因而在以外用劑形態(tài)實現(xiàn)產(chǎn)品化方面存在諸多困難。因此，要求開發(fā)出作為藥理成分來包含褪黑激素，改善保管穩(wěn)定性，并且既具有優(yōu)秀的服用便利性，又使藥物傳遞效率及藥物持續(xù)性得到優(yōu)化的藥劑學(xué)組合物。
在本發(fā)明的整個說明書中，參照了多個論文及專利文獻，并示出對其的引用。被引用的論文及專利文獻的全部公開內(nèi)容作為參照插入于本說明書中，從而對本發(fā)明所屬技術(shù)領(lǐng)域的水平及本發(fā)明的內(nèi)容進行進一步明確說明。
技術(shù)實現(xiàn)要素：
技術(shù)問題
本發(fā)明人為了開發(fā)出副作用比以往的脫發(fā)治療劑少，并具有優(yōu)秀的保管穩(wěn)定性及給藥便利性的育發(fā)、養(yǎng)發(fā)或生發(fā)促進用組合物而進行了深入研究及努力。最終發(fā)現(xiàn)，在以規(guī)定含量包含褪黑激素、d-泛醇、生物素及煙酰胺的情況下，可使作為藥理成分的褪黑激素的光穩(wěn)定性得到改善，提高制劑性狀的透明度，并且不僅使藥物吸收，尤其使硬皮滲透吸收極大化，而且在長期保管時，使因紫外線而發(fā)生的化學(xué)、物理變化最小化，從而可顯著改善制劑的穩(wěn)定性，由此完成了本發(fā)明。
因此，本發(fā)明的目的在于提供育發(fā)、養(yǎng)發(fā)或生發(fā)促進用藥劑學(xué)組合物。
本發(fā)明的另一目的在于提供促進育發(fā)、養(yǎng)發(fā)或生發(fā)的方法。
本發(fā)明的其他目的及優(yōu)點可通過以下具體實施方式、發(fā)明要求保護范圍及附圖來得以明確。
解決問題的方案
根據(jù)本發(fā)明的一實施方式，本發(fā)明提供包含褪黑激素、d-泛醇、生物素及煙酰胺作為有效成分的育發(fā)、養(yǎng)發(fā)或生發(fā)促進用組合物。
本發(fā)明人為了開發(fā)出副作用比以往的脫發(fā)治療劑少，并具有優(yōu)秀的保管穩(wěn)定性及給藥便利性的育發(fā)、養(yǎng)發(fā)或生發(fā)促進用組合物而進行了深入研究及努力。最終發(fā)現(xiàn)，在以規(guī)定含量包含褪黑激素、d-泛醇、生物素及煙酰胺的情況下，可使作為藥理成分的褪黑激素的光穩(wěn)定性得到改善，提高制劑性狀的透明度，不僅使藥物吸收，尤其使硬皮滲透吸收極大化，而且在長期保管時，使因紫外線而發(fā)生的化學(xué)、物理變化最小化。并且，在以規(guī)定含量包含褪黑激素、d-泛醇、生物素及煙酰胺的情況下，使抗氧化效果極大化，從而可預(yù)防發(fā)炎，并可呈現(xiàn)出抗炎效果。
在本說明書中，術(shù)語“促進育發(fā)”、“促進養(yǎng)發(fā)”及“促進生發(fā)”表示通過促進毛發(fā)的生成及生長，從而最終在全部毛發(fā)中增加毛發(fā)生長初期毛發(fā)的比重。因此，上述術(shù)語表示在毛發(fā)生長初期抑制因毛發(fā)的比重減少而引發(fā)的脫發(fā)，因而與“改善脫發(fā)”、“預(yù)防脫發(fā)”及“治療脫發(fā)”具有相同的含義。
根據(jù)本發(fā)明的具體實例，相對于本發(fā)明的組合物總量，包含0.001-1.0重量百分比的本發(fā)明用褪黑激素(melatonin)。更加具體地，包含0.005-0.5重量百分比，進一步具體地，包含0.01-0.3重量百分比，最為具體地，包含0.05-0.2重量百分比。
根據(jù)本發(fā)明的具體實例，相對于本發(fā)明的組合物總量，包含0.01-0.5重量百分比的本發(fā)明用d-泛醇(dexpanthenol)。更加具體地，包含0.02-0.4重量百分比，進一步具體地，包含0.05-0.3重量百分比，最為具體地，包含0.1-0.2重量百分比。
根據(jù)本發(fā)明的具體實例，相對于本發(fā)明的組合物總量，包含0.001-0.05重量百分比的本發(fā)明用生物素(biotin)。更加具體地，包含0.002-0.04重量百分比，進一步具體地，包含0.005-0.03重量百分比，最為具體地，包含0.01-0.02重量百分比。
根據(jù)本發(fā)明的具體實例，相對于本發(fā)明的組合物總量，包含0.006-0.3重量百分比的本發(fā)明用煙酰胺(nicotinamide)。更加具體地，包含0.012-0.24重量百分比，進一步具體地，包含0.03-0.18重量百分比，最為具體地，包含0.06-0.12重量百分比。
根據(jù)本發(fā)明的具體實例，本發(fā)明的組合物還包含光穩(wěn)定劑。
在本說明書中，術(shù)語“光穩(wěn)定劑(lightstabilizer)”表示阻斷制劑在加工、保管及流通過程中因暴露于太陽光下而造成有效成分被劣化、分解、氧化或變色，從而在原來的功效和性狀發(fā)生變化的現(xiàn)象。本發(fā)明的光穩(wěn)定化將通過自由基的捕獲、氫過氧化物的分解、重金屬的捕獲、單線態(tài)氧淬滅來實現(xiàn)的穩(wěn)定化均包括在內(nèi)，但并不局限于此，包括用于阻斷或緩解因暴露于可見光及紫外線而可能發(fā)生的物理、化學(xué)變化的全部機制。
作為用于本發(fā)明的光穩(wěn)定劑，例如，可舉出三唑類、二苯甲酮類、受阻胺光穩(wěn)定劑(hinderedaminelightstabilizer，hals)、受阻酚光穩(wěn)定劑(hinderedphenollightstabilizer)、al-mg(鋁-鎂)類穩(wěn)定劑，但并不局限于此。
根據(jù)本發(fā)明的具體實例，用于本發(fā)明的光穩(wěn)定劑為二苯甲酮。更加具體地，相對于本發(fā)明的組合物總量，包含0.008-0.5重量百分比的上述二苯甲酮，進一步具體地，包含0.04-0.3重量百分比，最為具體地，包含0.08-0.2重量百分比。
根據(jù)本發(fā)明的具體實例，本發(fā)明的組合物還包含制劑用穩(wěn)定劑。作為制劑用穩(wěn)定劑，例如，可舉出對羥基苯甲酸酯(parahydroxybenzoicacidester)衍生物、吡咯烷酮(pyrrolidinone)衍生物、乙醇、苯酚衍生物、硫柳汞(thimerosal)、乙酸酐、羧酸鈉、月桂基硫酸鈉(laurylsulfate)、硫化物、亞硫酸鹽(sulfite)、抗壞血酸、視黃醇(retinol)、生育酚(tocopherol)、丁基羥基茴香醚(butylhydroxylanisole)，但并不局限于此。
根據(jù)本發(fā)明的具體實例，用于本發(fā)明的制劑用穩(wěn)定劑為甲基-2-吡咯烷酮(methyl-2-pyrrolidinone)。更加具體地，相對于本發(fā)明的組合物總量，包含0.05-2.0重量百分比的上述甲基-2-吡咯烷酮，進一步具體地，包含0.1-1.5重量百分比，最為具體地，包含0.5-1.0重量百分比。
在本發(fā)明的組合物由藥劑學(xué)組合物制備的情況下，本發(fā)明的藥劑學(xué)組合物除了上述有效成分之外，還可包含藥劑學(xué)上允許的載體。
包含于本發(fā)明的藥劑學(xué)組合物的藥劑學(xué)上允許的載體通常利用于制劑的情況，包含乳糖、葡萄糖、蔗糖、山梨糖醇、甘露糖醇、淀粉、阿拉伯膠、磷酸鈣、藻酸鹽、明膠、硅酸鈣、微晶纖維素、聚乙烯吡咯烷酮、纖維素、水、糖漿、甲基纖維素、羥基苯甲酸甲酯、丙基羥苯酸酯、滑石、硬脂酸鎂及礦物油等，但并不局限于此。本發(fā)明的藥劑學(xué)組合物除上述多種成分之外，還可包含潤滑劑、潤濕劑、甜味劑、香味劑、乳化劑、懸浮劑、保鮮劑等。適當(dāng)?shù)乃巹W(xué)上允許的載體及制劑詳細記載于雷明頓藥物科學(xué)(remington’spharmaceuticalsciences)(19thed.，1995)。
本發(fā)明的藥劑學(xué)組合物的適當(dāng)給藥量可根據(jù)制劑化方法、給藥方式、患者的年齡、體重、性別、病態(tài)、食物、給藥時間、給藥途徑、排泄速度及反應(yīng)靈敏性等多種因素以多種方式開處方。本發(fā)明的藥劑學(xué)組合物的優(yōu)選給藥量范圍以成人基準，在0.001-100mg/kg范圍之內(nèi)。
本發(fā)明的藥劑學(xué)組合物能夠以口服或非口服的方式給藥，在以非口服的方式給藥的情況下，能夠以涂敷于皮膚的局部、皮下注射、硬皮給藥等方式進行給藥?？紤]到適用本發(fā)明的藥劑學(xué)組合物的目的在于促進育發(fā)、養(yǎng)發(fā)或生發(fā)，優(yōu)選地，通過涂敷于頭皮的局部或硬皮給藥的方式進行給藥。
根據(jù)可使本發(fā)明所屬技術(shù)領(lǐng)域的普通技術(shù)人員容易實施的方法，本發(fā)明的藥劑學(xué)組合物通過利用藥劑學(xué)上允許的載體和/或賦形劑來進行制劑化，從而以單位容量形態(tài)制備或以內(nèi)入于多容量容器內(nèi)的形態(tài)制備。在此情況下，劑型還可具有油或水性介質(zhì)中的溶液、懸浮液、糖漿劑、乳化液或爽膚水、乳液、面霜及洗發(fā)水等形態(tài)或浸膏劑、散劑、粉劑、顆粒劑、片劑或膠囊劑形態(tài)，并且還可包含分散劑或穩(wěn)定劑。
根據(jù)本發(fā)明的一具體例，本發(fā)明的藥劑學(xué)組合物為皮膚外用組合物。上述皮膚外用組合物的劑型不受特殊限制，但優(yōu)選為粉、凝膠、軟膏、面霜、液體或氣溶膠劑型。
在本發(fā)明中所記載的作為皮膚外用劑型的凝膠，可使用選自卡波姆(carbomer)、聚乙二醇(polyethyleneglycol)、聚丙二醇(polypropyleneglycol)、聚丙烯酸(polyacrylicacid)、羧甲基纖維素(carboxymethylcellulose)、羥甲基纖維素(hydroxymethylcellulose)、聚乙烯吡咯烷酮(polyvinylpyrrolidone)、明膠(gelatine)、海藻酸鹽(alginatesalt)、甲殼素(chitin)或殼聚糖(chitosan)衍生物、透明質(zhì)酸(hyaluronicacid)、膠原蛋白(collagen)中的一種或兩種以上，但并不局限于此。
如上所述，本發(fā)明的組合物可用作具有局部涂敷于頭皮的形態(tài)的皮膚外用組合物。
本發(fā)明的藥劑學(xué)組合物可用于包括人類在內(nèi)的所有動物的育發(fā)、養(yǎng)發(fā)或促進生發(fā)，其對象(subject)并不局限于人類。
根據(jù)本發(fā)明的一實例，本發(fā)明為化妝品組合物。
本發(fā)明的抗氧化用組合物能夠以育發(fā)、養(yǎng)發(fā)或生發(fā)促進用化妝品組合物的形態(tài)制備。本發(fā)明的化妝品組合物可制備成在本發(fā)明所屬技術(shù)領(lǐng)域中通常制備的任何劑型，例如，可制備成溶液、懸浮液、乳濁液、糊劑、凝膠、面霜、乳液、粉、肥皂、含表面活性劑的潔面劑、油、粉底、乳濁液粉底、粉底蠟及噴劑等劑型，但并不局限于此。更加詳細地，可制備成柔膚化妝水、營養(yǎng)化妝水、乳液、營養(yǎng)面霜、按摩面霜、精華素、潔面霜、潔面泡沫、潔面水、面膜、噴劑或粉劑型。
在本發(fā)明的劑型為糊劑、面霜、乳液或凝膠的情況下，作為載體成分，可利用動物油、植物油、蠟、石蠟、淀粉、黃蓍膠、纖維素衍生物、聚乙二醇、硅、膨潤土、二氧化硅、滑石或氧化鋅等。
在本發(fā)明的劑型為粉或噴劑的情況下，作為載體成分，可利用乳糖、滑石、二氧化硅、氫氧化鋁、硅酸鈣或聚酰胺粉末，尤其，在噴劑的情況下，還可包含氯氟烴、丙烷/丁烷或二甲醚等推進劑。
在本發(fā)明的劑型為溶液或乳濁液的情況下，作為載體成分，可利用溶劑、增溶劑或乳化劑，例如，可舉出水、乙醇、異丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、芐醇、苯甲酸芐酯、丙二醇、1，3-丁基乙二醇油、甘油脂肪酯、聚乙二醇或山梨糖醇酐脂肪酸酯。
在本發(fā)明的劑型為懸浮液的情況下，作為載體成分，可利用水、乙醇或丙二醇等液相稀釋劑、乙氧基化異硬脂醇、聚氧乙烯山梨醇酯及聚氧乙烯山梨糖醇酐酯等懸浮劑、微晶纖維素、甲基氫氧化鋁、膨潤土、瓊脂或黃蓍膠等。
在本發(fā)明的劑型為含表面活性劑的潔面劑的情況下，作為載體成分，可利用脂肪醇硫酸鹽、脂肪醇醚硫酸鹽、磺基琥珀酸單酯、羥乙基磺酸鹽、咪唑啉衍生物、甲基?；撬猁}、肌氨酸鹽、脂肪酸酰胺醚硫酸鹽、烷基酰胺甜菜堿、脂肪醇、脂肪酸甘油酯、脂肪酸二乙醇酰胺、植物油、羊毛脂衍生物或乙氧基化甘油脂肪酸酯等。
本發(fā)明的化妝品組合物除了包含有效成分和載體成分之外，還包含通常利用于化妝品組合物的多種成分，例如，可包含抗氧化劑、穩(wěn)定劑、增溶劑、維生素、顏料及香料等通常的助劑。
在本發(fā)明的一實例中，本發(fā)明為功能性食品組合物。本發(fā)明的功能性食品組合物包含在制造食品時通常添加的成分，例如，包含蛋白質(zhì)、碳水化合物、脂肪、營養(yǎng)素及調(diào)味劑。例如，在制備成清涼劑的情況下，除了有效成分之外，還可包含香味劑或天然碳水化合物。例如，天然碳水化合物包含單糖(例如，葡萄糖、左旋糖等)；二糖(例如，麥芽糖、蔗糖等)；寡糖；多糖(例如，糊精、環(huán)糊精等)；及糖醇(例如，木糖醇、山梨糖醇、赤蘚醇等)。
作為香味劑，可利用天然香味劑(例如，索馬甜、甜菊提取物等)及合成香味劑(例如，糖精、阿斯巴甜等)。
根據(jù)本發(fā)明的再一實施方式，本發(fā)明提供包含0.001-1.0重量百分比的褪黑激素、0.01-0.5重量百分比的d-泛醇、0.001-0.05重量百分比的生物素及0.006-0.3重量百分比的煙酰胺作為有效成分的育發(fā)、養(yǎng)發(fā)或生發(fā)促進用藥劑學(xué)組合物。
對于與育發(fā)、養(yǎng)發(fā)或生發(fā)促進用組合物有關(guān)的本實施方式，在上述已經(jīng)說明的與育發(fā)、養(yǎng)發(fā)或生發(fā)促進用組合物有關(guān)的另一實施方式中明確限定了有效成分的含量，因而引用在上述發(fā)明的詳細說明中就針對上述另一實施方式記載的所有內(nèi)容，為了避免本說明書的記載過于復(fù)雜，將省略重復(fù)的內(nèi)容。
根據(jù)本發(fā)明的另一實施方式，本發(fā)明提供包含褪黑激素、d-泛醇、生物素及煙酰胺作為有效成分的脫發(fā)的預(yù)防或治療用組合物。在本說明書中，術(shù)語“預(yù)防脫發(fā)”表示通過增加毛發(fā)生長初期的毛發(fā)比重，從而預(yù)防因毛發(fā)生長初期毛發(fā)的比重減少而引發(fā)的脫發(fā)，在本說明書中，術(shù)語“治療脫發(fā)”表示隨著上述毛發(fā)生長初期毛發(fā)的比重增加，延緩脫發(fā)的進行或抑制脫發(fā)癥狀，最終減少處于毛發(fā)脫落狀態(tài)的頭皮的面積。
本發(fā)明的一實施方式引入上述就針對作為本發(fā)明另一實施方式的育發(fā)、養(yǎng)發(fā)或生發(fā)促進用組合物說明的內(nèi)容，為了避免本說明書的記載過于復(fù)雜，將省略重復(fù)的內(nèi)容。
本發(fā)明的還有一實施方式提供包含0.001-1.0重量百分比的褪黑激素、0.01-0.5重量百分比的d-泛醇、0.001-0.05重量百分比的生物素及0.006-0.3重量百分比的煙酰胺作為有效成分的脫發(fā)的預(yù)防或治療用藥劑學(xué)組合物。
對于與脫發(fā)的預(yù)防或治療用組合物有關(guān)的本實施方式，在上述已經(jīng)說明的與脫發(fā)的預(yù)防或治療用組合物有關(guān)的還有一實施方式中明確限定了有效成分的含量，因而引用在上述發(fā)明的詳細說明中就針對上述還有一實施方式記載的所有內(nèi)容，為了避免本說明書的記載過于復(fù)雜，將省略重復(fù)的內(nèi)容。
本發(fā)明的又一實施方式提供如下的促進育發(fā)、養(yǎng)發(fā)或生發(fā)的方法，即，上述促進育發(fā)、養(yǎng)發(fā)或生發(fā)的方法包括向所需對象給藥藥劑學(xué)有效量的包含褪黑激素、d-泛醇、生物素及煙酰胺作為有效成分的育發(fā)、養(yǎng)發(fā)或生發(fā)促進用組合物的步驟。
本說明書中的術(shù)語“藥劑學(xué)有效量”表示利用上述組合物促進對象的育發(fā)、養(yǎng)發(fā)或生發(fā)，預(yù)防脫發(fā)癥狀，實現(xiàn)減輕或治療功效所需的充分量。本說明書中的術(shù)語“對象(subject)”表示包括人類在內(nèi)的所有動物，其不受特殊限制，尤其表示需要促進育發(fā)、養(yǎng)發(fā)或生發(fā)的對象。本發(fā)明的方法涉及向?qū)ο蠼o藥上述育發(fā)、養(yǎng)發(fā)或生發(fā)促進用組合物的方法，因而引入重復(fù)的內(nèi)容，為了避免本說明書的記載過于復(fù)雜，將省略重復(fù)的內(nèi)容。
本發(fā)明的又一實施方式提供如下的促進育發(fā)、養(yǎng)發(fā)或生發(fā)的方法，即，上述促進育發(fā)、養(yǎng)發(fā)或生發(fā)的方法包括向所需對象(subject)給藥藥劑學(xué)有效量的包含0.001-1.0重量百分比的褪黑激素、0.01-0.5重量百分比的d-泛醇、0.001-0.05重量百分比的生物素及0.006-0.3重量百分比的煙酰胺作為有效成分的育發(fā)、養(yǎng)發(fā)或生發(fā)促進用組合物步驟。
本發(fā)明的方法涉及向?qū)ο?subject)給藥上述育發(fā)、養(yǎng)發(fā)或生發(fā)促進用組合物的方法，已經(jīng)在發(fā)明的一實施方式中具體限定上述促進育發(fā)、養(yǎng)發(fā)或生發(fā)的方法中的組成成分的含量，因而引入重復(fù)的內(nèi)容，為了避免本說明書的記載過于復(fù)雜，將省略重復(fù)的內(nèi)容。
發(fā)明的效果
對本發(fā)明的特征及優(yōu)點概括如下：
(a)本發(fā)明提供包含褪黑激素、d-泛醇、生物素及煙酰胺作為有效成分的育發(fā)、養(yǎng)發(fā)或生發(fā)促進用藥劑學(xué)組合物；化妝品組合物；功能性食品組合物；或利用上述組合物的促進育發(fā)、養(yǎng)發(fā)或生發(fā)的方法。
(b)本發(fā)明的組合物改善作為藥理活性成分的褪黑激素的光穩(wěn)定性，并使制劑穩(wěn)定化，顯著抑制頭皮炎癥，從而使生發(fā)或養(yǎng)發(fā)效果極大化。
(c)本發(fā)明的組合物可作為同時提高光穩(wěn)定性、保存性、用藥便利性及治療效果的有效的生發(fā)、養(yǎng)發(fā)促進劑或脫發(fā)的預(yù)防或治療用劑來有效利用。
附圖說明
圖1示出在被地塞米松(dexamethasone)誘導(dǎo)的脫發(fā)癥(alopecia)c57bl/6小鼠模型中，在處理試驗物質(zhì)之后第九天的生發(fā)效力評價(areaofhairrestoration)結(jié)果。圖1中經(jīng)箭頭處理的部分表示在利用數(shù)碼相機拍攝涂敷部位之后，利用imagej軟件(美國國立衛(wèi)生研究院(nih)，馬里蘭州貝塞斯達(bethesda，md))分析的范圍。
具體實施方式
以下，通過實施例進一步詳細說明本發(fā)明。這些實施例僅僅用于進一步具體說明本發(fā)明，而根據(jù)本發(fā)明的主旨，本發(fā)明的范圍并不局限于這些實施例，這對于本發(fā)明所屬技術(shù)領(lǐng)域的普通技術(shù)人員而言是顯而易見的。
實施例
實施例制劑的制備
制備出用于本發(fā)明的含有褪黑激素、d-泛醇、生物素及煙酰胺這4種復(fù)合成分的9種制劑，上述制劑的具體成分示出在以下表1中。
實施例制劑的組成
表1
各種制劑的制備方法
表2
實施例1至實施例5用于確定適合于本發(fā)明的組合物的功效、效果及性狀的基本制劑的處方，在實施例6及實施例7中適用用于確保穩(wěn)定性及增加吸收率的組成，在實施例8及實施例9中適用用于從因紫外線而發(fā)生的化學(xué)、物理變化中確保制劑的穩(wěn)定性的組成。
實驗例1：抗氧化效果(dpph)的測定
自由基被當(dāng)作引發(fā)老化(例如，脫發(fā)、皮膚老化)的原因物質(zhì)，通過使用光穩(wěn)定劑來測定自由基清除活性，由此測定出抗氧化效果程度。
為了制備dpph試驗組的試樣，對0.1重量百分比的褪黑激素、0.01重量百分比的生物素、0.06重量百分比的煙酰胺及0.1重量百分比的d-泛醇進行了10分鐘的攪拌，直到完全溶解于乙醇中。并且，由80μg/ml配置dpph(1-二苯基-2-苦肼基(1-diphenyl-2-picrylhydrazyl))溶液，并以使1ml的上述溶液的各個分餾的濃度達到2mg/ml的方式溶解于乙醇中。之后，針對dpph的顏色變化，通過使用紫外分光光度計在517nm的吸收波長下對吸光度進行測定，并將對活性的大小進行測定的結(jié)果值代入以下數(shù)學(xué)式中，由此計算出抑制效果。實驗結(jié)果，在包含褪黑激素、生物素、煙酰胺及d-泛醇的情況下，所測定出的抗氧化效果最為優(yōu)秀，在分別單獨使用d-泛醇、生物素、煙酰胺的情況下，導(dǎo)出抗氧化效果顯著低于將褪黑激素、生物素、煙酰胺及d-泛醇全部包含的情況的結(jié)果。其結(jié)果示出在表3中。
數(shù)學(xué)式1
表3
上述實施例通過參照衛(wèi)生毒理學(xué)雜志(journaloftoxicologyandpublichealthvol.23no.3，2007.9，263-269.)來進行。
實驗例2：劑型組合物的穩(wěn)定化效果測定
為了確定適合于本發(fā)明的組合物的功效、效果及性狀的制劑，制備出包含褪黑激素、生物素、d-泛醇及煙酰胺作為有效成分的組合物，并通過光穩(wěn)定性試驗，對上述有效成分的組成對褪黑激素的穩(wěn)定性產(chǎn)生的效果進行了測定。利用光穩(wěn)定性腔室并依據(jù)國際協(xié)調(diào)會議(ich，internationalconferenceonharmonization)方針的q1b(穩(wěn)定性試驗：新原料藥和制劑的光穩(wěn)定性測試(stabilitytesting：photostabilitytestingofnewdrugsubstancesandproducts))，在視覺識別系統(tǒng)(vis)為40klux的條件下實施了試驗。
按照表2的方法來制備出劑型組合物試驗組(實施例1-實施例5)。并且，在泵型的透明容器(hdpe)中分別填充50g作為試驗組的試樣。將完成填充的試樣放置于光穩(wěn)定性腔室內(nèi)的照射方向，之后根據(jù)時間段分別采樣2ml。若完成采樣，則通過液體色譜法(hplc)進行定量分析。液體色譜法的分析條件如下：利用檢測器、紫外吸收光譜(波長為225nm)柱為c18(4.6mm×50mm，1.8μm)或與此相同的欄，流動相為0.018mol/l磷酸鹽緩沖液(ph為3.0)：乙腈(90：10)，且流速為1ml/min，注入量為50μl，溫度為25℃，以標準液(3次)、檢液(2次)順序進行了注入。實驗結(jié)果，對于劑型組合物的穩(wěn)定性而言，相對于褪黑激素的單獨組，褪黑激素、生物素、煙酰胺及d-泛醇的混合組維持了含量穩(wěn)定性，可知在褪黑激素中混合生物素、煙酰胺及d-泛醇在提高含量穩(wěn)定性方面具有顯著效果。將其結(jié)果示出在表4中。
作為參考，將2.45g的磷酸二氫鉀溶解于水中來使溶液達到1l，之后投入20％的磷酸來將ph調(diào)整為3.0，由此制備出磷酸鹽緩沖液。
實驗例3：褪黑激素的光穩(wěn)定化效果測定
由于作為主要成分的褪黑激素對光比較脆弱，為此添加穩(wěn)定劑或光穩(wěn)定劑，通過光穩(wěn)定性試驗來測定由此產(chǎn)生的效果。利用光穩(wěn)定性腔室并依據(jù)國際協(xié)調(diào)會議方針的q1b(穩(wěn)定性試驗：新原料藥和制劑的光穩(wěn)定性測試)，在視覺識別系統(tǒng)為40klux的條件下實施了試驗。
為了制備穩(wěn)定劑試驗組試樣，在0.1重量百分比的褪黑激素中分別攪拌了0.1重量百分比的各種穩(wěn)定劑(甲基-2-吡咯烷酮、抗壞血酸、生育酚、丁基羥基茴香醚)，共攪拌10分鐘，直到完全溶解于乙醇中。
為了制備光穩(wěn)定劑試驗組試樣，在0.1重量百分比的褪黑激素中分別攪拌了0.1重量百分比的各種穩(wěn)定劑(二苯甲酮、氧化鋅、水楊酸異辛酯、二氧化鈦)，共攪拌10分鐘，直到完全溶解于乙醇中。
并且，在泵型的透明容器(hdpe)中分別填充50g作為試驗組的試樣。
將完成填充的試樣放置于光穩(wěn)定性腔室內(nèi)的照射方向，之后根據(jù)時間段分別采樣2ml。若完成采樣，則通過液體色譜法(hplc)進行定量分析。液體色譜法的分析條件如下：利用檢測器、紫外吸收光譜(波長為225nm)柱為c18(4.6mm×50mm，1.8μm)或與此相同的欄，流動相為0.018mol/l磷酸鹽緩沖液(ph為3.0)：乙腈(90：10)，且流速為1ml/min，注入量為50μl，溫度為25℃，以標準液(3次)、檢液(2次)順序進行了注入。實驗結(jié)果，以甲基-2-吡咯烷酮、抗壞血酸、生育酚、丁基羥基茴香醚順序?qū)Ψ€(wěn)定劑的活性進行了測定，可知甲基-2-吡咯烷酮的穩(wěn)定化活性最為優(yōu)秀，因而作為穩(wěn)定劑，最優(yōu)選地，可利用甲基-2-吡咯烷酮。
以二苯甲酮、氧化鋅、水楊酸乙基己烷、二氧化鈦順序測定了光穩(wěn)定化活性，可知二苯甲酮的光穩(wěn)定化活性最為優(yōu)秀，因而作為光穩(wěn)定劑，最優(yōu)選地，可利用二苯甲酮。將其結(jié)果示出在表5及表6中。
作為參考，將2.45g的磷酸二氫鉀溶解于水中來使溶液達到1l，之后投入20％的磷酸來將ph調(diào)整為3.0，由此制備出磷酸鹽緩沖液。
基于劑型組合物的穩(wěn)定性評價結(jié)果
表4
(保管條件：25℃，60rh)，(光條件：vis40klux)
制劑用穩(wěn)定劑篩選實驗結(jié)果
表5
(保管條件：25℃，60rh，光條件：vis40klux)
光穩(wěn)定劑篩選實驗結(jié)果
表6
(保管條件：25℃，60rh，光條件：vis40klux)
如表4所示，在生物素、煙酰胺及d-泛醇均包含于褪黑激素的情況下，相對于單獨追加生物素、煙酰胺或d-泛醇的情況，可獲得更加優(yōu)秀的含量穩(wěn)定性，如表5所示，在利用甲基-2-吡咯烷酮的情況下，含量穩(wěn)定性最為優(yōu)秀，因而示出可將甲基-2-吡咯烷酮用作適當(dāng)?shù)姆€(wěn)定劑。并且，如表6所示，在利用二苯甲酮的情況下，含量穩(wěn)定性最為優(yōu)秀，因而示出可將二苯甲酮用作適當(dāng)?shù)墓夥€(wěn)定劑。但是，如上所述，雖然可將二苯甲酮用作優(yōu)秀的光穩(wěn)定劑，但存在可通過擾亂內(nèi)分泌系統(tǒng)來使過敏性疾病惡化等以往公知的一部分副作用，因而為了代替二苯甲酮，可通過還使褪黑激素包含生物素、煙酰胺及d-泛醇的復(fù)合組，或利用甲基-2-吡咯烷酮，或減少二苯甲酮的含量，并為了補充上述二苯甲酮而利用生物素、煙酰胺及d-泛醇的復(fù)合組及甲基-2-吡咯烷酮等方式提高褪黑激素的光穩(wěn)定性。
僅利用d-泛醇、生物素及煙酰胺的復(fù)合成分，也可使褪黑激素的光穩(wěn)定性得到顯著提高，通過追加包含穩(wěn)定劑或光穩(wěn)定劑，例如，還包含甲基-2-吡咯烷酮、二苯甲酮來可確保進一步提高的光穩(wěn)定性。
實驗例4：在被地塞米松誘導(dǎo)的脫發(fā)癥(alopecia)c57bl/6模型中試驗物質(zhì)的生發(fā)效力的評價
為了評價在被地塞米松誘導(dǎo)的脫發(fā)癥c57bl/6小鼠模型中試驗物質(zhì)的給藥對促進生發(fā)產(chǎn)生的影響，委托韓國動物科學(xué)研究所進行了本實驗。
4-1.試驗系統(tǒng)
無特定病原菌(spf)的c57bl/6小鼠，c57bl/6ncrljori(東方生物)廣泛使用于各種藥效及毒性試驗，并積累有豐富的試驗基礎(chǔ)資料，且可利用這些資料來容易對試驗結(jié)果進行解釋及評價，因而選擇用作利用于本實驗的種類及系統(tǒng)。入手100只5周齡的雌性小鼠，在入手之后經(jīng)過了7天的檢疫及馴化期間，并將70只雌性小鼠利用于試驗。
在馴化期間(藍色)、給藥及觀察期間(紅色)內(nèi)通過使用尾部標記法來對動物進行了尾部標記。在飼養(yǎng)箱附著以顏色來區(qū)分的個體尾部標記卡，在飼養(yǎng)室的入口附著動物室使用記錄簿。
4-2.飼養(yǎng)環(huán)境
本試驗在被設(shè)定為溫度為23±3℃，相對濕度為55±15％，通風(fēng)次數(shù)為10～20次/hr，照明時間為12小時(上午8點開燈～下午8點閉燈)及照度為150～300lux的韓國動物科學(xué)研究有限公司的嚙齒類飼養(yǎng)區(qū)域2號室內(nèi)實施。
飼養(yǎng)期間內(nèi)，每周1次對動物室的溫度、濕度、通風(fēng)次數(shù)及照度等環(huán)境條件進行了測定。未檢測出可能對環(huán)境測定結(jié)果試驗的結(jié)果產(chǎn)生不良影響的情況。
從dreambio公司購進由嘉吉農(nóng)標普瑞納有限公司生產(chǎn)的實驗動物用飼料，并將上述飼料投入于飼喂器，使小鼠自由攝取，將經(jīng)過凈化水投入于聚碳酸酯飲水瓶，使小鼠自由攝取。作為墊子，從沙龍生物有限公司購進木墊來使用。
在馴化、給藥及觀察期間內(nèi)，在嚙齒類用聚碳酸酯飼養(yǎng)箱(w170×l235×h125mm)中以每箱飼養(yǎng)5只以下的方式進行了飼養(yǎng)。
經(jīng)作為韓國動物科學(xué)研究有限公司的動物實驗倫理委員會的kamsiiacuc的核準，實施了本試驗。
4-3.試驗組的組成及給藥量的設(shè)定
試驗組的組成示出在以下表7中。
表7
篩選出脫毛后皮膚未受傷且膚色為粉紅色的動物，并隨機實施了組分離。在組分離之后，將各個組分為賦形劑對照組、陽性對照組(3％的米諾地爾給藥組)、htb005(1)～htb005(5)給藥組來投放試驗物質(zhì)。
4-4.給藥
通過作為臨床預(yù)定途徑的皮膚涂敷來進行給藥，在試驗物質(zhì)的情況下，從脫毛后的第七天開始以1次/日，共給藥9天的方式進行給藥，在地塞米松的情況下，從脫毛后的第九天開始以1次/日，共給藥7天的方式進行了給藥。在地塞米松的情況下，以1ml/head的方式進行了涂敷。利用噴劑容器(約0.18ml/1次)進行涂敷，以均勻地擴散于皮膚規(guī)定區(qū)域。
在被脫毛的皮膚上放上1.5cm×1.5cm大小的框之后，以均勻擴散的方式利用噴劑容器涂敷試驗物質(zhì)及陽性對照物質(zhì)。
4-5.試驗方法及檢查項目
(1)模型的制備
在利用舒泰50(zoletil50，virbac，france)及甲芐噻嗪(xylazine，
(2)照片的拍攝及分析
分別在脫毛實施日(0天(day))、第7天、第9天、第12天及第16天利用舒泰50及甲芐噻嗪誘導(dǎo)麻醉，之后利用數(shù)碼相機拍攝了涂敷部位，之后利用imagej軟件(software)(nih，bethesda，md)進行了分析。
(3)體重的測定：在脫毛實施日之后以1次/周的方式測定體重。
(4)尸檢
在脫毛后的第16天，通過摘除涂敷試驗物質(zhì)的部位，并固定于10％的中性緩沖福爾馬林溶液中。
(5)組織病理學(xué)檢查
通過對被固定的組織進行修剪、脫水、石蠟包埋、切割等普通的組織處理過程來制作用于組織病理學(xué)檢查的試料，之后實施蘇木精-伊紅(h&e，hematoxylin&eosin)染色，并基于是否形成毛囊及毛囊的生長期比率實施了生發(fā)效力評價。在利用光學(xué)顯微鏡(olympusbx53，japan)拍攝照片之后，按每個個體隨機選擇5張照片來對毛囊數(shù)量及生長期比率進行了評價。
4-6.統(tǒng)計學(xué)分析
對于毛囊數(shù)量及生發(fā)面積，假設(shè)資料的正規(guī)性，并適用單因素方差分析(one-wayanova)。在單因素方差分析結(jié)果顯著的情況下，通過實施包括新復(fù)極差法檢驗(dunnett’smultiplecomparisontest)在內(nèi)的事后檢驗來確認呈現(xiàn)出與賦形劑對照組及陽性對照組顯著差異的組。
對于生長期比率評價，利用順序化的數(shù)據(jù)來實施非參數(shù)檢驗獨立樣本檢驗(kruskal-wallis’h-test)，在其結(jié)果顯著的情況下，通過作為事后分析的鄧肯氏多重比較測試(dunn’smultiplecomparisontest)來確認呈現(xiàn)出與賦形劑對照組及陽性對照組顯著差異的組。
統(tǒng)計學(xué)分析利用棱鏡(prism)5.03(graphpadsoftwareinc.，sandiego，ca，usa)，在ph值小于0.05的情況下，統(tǒng)計學(xué)上判定為效果顯著。
4-7.實驗結(jié)果
為了評價在被地塞米松誘導(dǎo)的脫發(fā)癥c57bl/6小鼠模型中試驗物質(zhì)的給藥對促進生發(fā)產(chǎn)生的影響而進行了本試驗(g1：賦形劑對照組，g2：陽性對照組(3％的米諾地爾(minoxidil))，g3：0.01％的褪黑激素給藥組，g5：0.1％的褪黑激素給藥組，g6：單獨使用0.1％褪黑激素的給藥組，g7：0.2％的褪黑激素給藥組)。
據(jù)報道，米諾地爾(minoxidil)對男性脫發(fā)癥(androgeneticalopecia)具有效果(messengeragetal，2004)，在本試驗中，米諾地爾被用作陽性對照組。在對生發(fā)面積進行測定的結(jié)果，在公開給藥試驗物質(zhì)之后第七天，所有試驗物質(zhì)給藥組的生發(fā)面積呈現(xiàn)出大于賦形劑對照組的傾向。并且，在公開給藥試驗物質(zhì)后的第12天及第16天，相對于賦形劑對照組，0.01％的褪黑激素(melatonin)及0.2％的褪黑激素給藥組的生發(fā)面積呈現(xiàn)出大面積傾向，0.01％的褪黑激素及0.2％的褪黑激素給藥組的生發(fā)面積呈現(xiàn)出比陽性對照組還大的傾向，因而認為試驗物質(zhì)有助于促進生發(fā)。
在組織病理學(xué)檢查中，在對毛囊數(shù)量測定結(jié)果及生長期毛囊比率進行分析的結(jié)果，統(tǒng)計學(xué)上未觀察到顯著差異。但是，在生長期毛囊比率分析結(jié)果中，0.01％的褪黑激素及0.2％的褪黑激素給藥組的生長期毛囊比率呈現(xiàn)出比陽性對照組還大的傾向，因而認為試驗物質(zhì)的給藥對轉(zhuǎn)換為生長期毛囊的方面產(chǎn)生影響。
總之，當(dāng)向被地塞米松誘導(dǎo)的脫發(fā)癥c57bl/6的小鼠模型的皮膚涂敷9天的試驗物質(zhì)時，在所有測定日內(nèi)，觀察到0.2％的褪黑激素給藥組的生發(fā)面積比賦形劑對照組及陽性對照組的的傾向，在0.01％的褪黑激素給藥組中，在除第9天之外的所有測定日內(nèi)，觀察到比賦形劑對照組及陽性對照組大的傾向。并且，觀察到0.01％的褪黑激素及0.2％的褪黑激素給藥組的毛囊數(shù)量及生長期毛囊比率比賦形劑對照組及陽性對照組多的傾向。
因此，在本試驗條件下，認為在被地塞米松誘導(dǎo)的脫發(fā)癥c57bl/6的小鼠模型中，投放0.01％的褪黑激素及0.2％的褪黑激素的試驗物質(zhì)可有助于促進生發(fā)。
表8
在表8中，以平均來表示數(shù)據(jù)，g1為賦形劑對照組，g2為3％的米諾地爾0.18ml/head，g3為0.01％的褪黑激素0.18ml/head，g5為0.1％的褪黑激素0.18ml/head，g6為單獨使用的0.1％的褪黑激素0.18ml/head，g7為0.2％的褪黑激素0.18ml/head。
表9
在全部毛囊中以活性形態(tài)毛囊的數(shù)量之比來進行計算?；钚悦冶硎驹谏l(fā)試驗的組織病理學(xué)檢查意見中，轉(zhuǎn)換為生長期毛囊及毛發(fā)的個體的比率。在組織病理學(xué)檢查中，分為生長期、毛發(fā)生長靜止期及毛發(fā)生長中期，在全部毛囊中僅計算出生長期毛囊的比率。生長期、毛發(fā)生長靜止期及毛發(fā)生長中期通過在顯微鏡下綜合考慮毛囊數(shù)量、毛囊的大小及毛發(fā)的粗細、形態(tài)等來進行了判斷并確定。計算方法如下：
活性毛囊比率(anagenratio)＝脫毛部位轉(zhuǎn)換為生長期的動物數(shù)量/各個試驗組的全部動物數(shù)量x100。
即，表示比率越高，則生發(fā)面積越大。
在表9中，以平均來表示數(shù)據(jù)，g1為賦形劑對照組，g2為3％的米諾地爾0.18ml/head，g3為0.01％的褪黑激素0.18ml/head，g6為單獨使用的0.1％的褪黑激素0.18ml/head，g7為0.2％的褪黑激素0.18ml/head。
以上，對本發(fā)明的特定部分進行詳細描述，本發(fā)明所屬技術(shù)領(lǐng)域的普通技術(shù)人員明確理解這種具體的描述僅僅為優(yōu)選的實例，而本發(fā)明的范圍并不局限于此。因此，本發(fā)明的實際范圍應(yīng)通過所附的發(fā)明要求保護范圍及其等同技術(shù)方案來定義。