本發(fā)明屬于中藥組合物技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種中藥組合物及其制備方法和應(yīng)用。

背景技術(shù)：

急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎是一種代謝紊亂類疾病，其主要癥狀為患病關(guān)節(jié)的紅、腫、熱、痛現(xiàn)象。急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎在發(fā)作的同時，還會誘發(fā)高血壓、動脈粥樣硬化以及肝腎損傷等重大疾病，嚴(yán)重危害著人類的健康。

急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎的發(fā)病機制為，患者體內(nèi)嘌呤代謝紊亂，從而造成尿酸積聚增多，過量的尿酸以尿酸鈉結(jié)晶的形式沉積在關(guān)節(jié)、滑膜及周圍組織，造成該部位的炎癥反應(yīng)。因此，可以將抗炎活性以及抑制黃嘌呤氧化酶的活性作為評價藥物抗急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎活性的兩個指標(biāo)。市售的治療急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎的藥物主要有非甾體類抗炎藥、黃嘌呤氧化酶抑制劑、促尿酸排泄藥等，然而這些藥均存在較大的毒副作用。因此，從高效、低毒、多靶點的中藥中篩選出治療急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎效果較好的藥物并組成組方可以達到較好的治療目的。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

有鑒于此，本發(fā)明的目的是為了解決現(xiàn)有的治療急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎的藥物毒副作用大且效果不顯著的問題，而提供一種中藥組合物及其制備方法和應(yīng)用。

本發(fā)明首先提供一種中藥組合物，由以下重量份的中藥原料制成：

黃柏9.5～12重量份；

蒼術(shù)3～6重量份；

銀杏葉4.5～6重量份。

優(yōu)選的是，所述的中藥組合物，由以下重量份的中藥原料制成：

黃柏10～11.5重量份；

蒼術(shù)3.5～5.5重量份；

銀杏葉4.5～5.5重量份。

優(yōu)選的，所述的中藥組合物，由以下重量份的中藥原料制成：黃柏10重量份、蒼術(shù)5重量份、銀杏葉5重量份。

本發(fā)明還提供了一種中藥組合物的制備方法，包括：

a)將黃柏加入醇類溶劑中超聲提取，得到黃柏提取液；

b)將蒼術(shù)加入醇類溶劑中超聲提取，得到蒼術(shù)提取液；

c)將銀杏葉加入醇類溶劑中超聲提取，得到銀杏葉提取液；

d)將a)、b)、c)中得到的黃柏提取液、蒼術(shù)提取液和銀杏葉提取物混合，得到中藥組合物。

優(yōu)選的，所述a)、b)、c)中的黃柏、蒼術(shù)及銀杏葉均需粉碎后進行提取。

優(yōu)選的，所述a)、b)、c)中的醇類溶劑均為65％～75％的乙醇水溶液。

優(yōu)選的，所述a)、b)、c)中的黃柏、蒼術(shù)或銀杏葉的體積與醇類溶劑的體積比均為1：(8～10)。

優(yōu)選的，所述a)、b)、c)中，提取溫度為25～50℃，提取時間為1～2h。

本發(fā)明還提供上述中藥組合物在制備治療急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎藥物中的應(yīng)用。

本發(fā)明的藥理作用如下：

黃柏為蕓香科植物黃皮樹的干燥樹皮，其性味苦、寒，具有清熱燥濕、瀉火除蒸、解毒療瘡的功效。其現(xiàn)代藥理作用主要為，抗炎、抗菌、抑制黃嘌呤氧化酶、抗痛風(fēng)等。

蒼術(shù)為菊科植物北蒼術(shù)的干燥根莖，其性味辛、苦、溫，具有燥濕徤脾，祛風(fēng)散寒，明目的功效。同時還具有抗菌、抗炎、促排尿、抗痛風(fēng)等現(xiàn)代藥理作用。

銀杏葉銀杏科植物銀杏的干燥葉，其性味干、苦、澀、平，具有活血化瘀，通絡(luò)止痛，斂肺平喘，化濁降脂的功效。同時還具有抗炎、抑制黃嘌呤氧化酶等現(xiàn)代藥理活性。

本發(fā)明的有益效果

本發(fā)明提供一種中藥組合物及其制備方法和應(yīng)用，該中藥組合物由以下重量份的中藥原料制成：黃柏9.5～12重量份；蒼術(shù)3～6重量份；銀杏葉4.5～6重量份。本發(fā)明將黃柏、蒼術(shù)與銀杏葉進行組方，黃柏與銀杏葉具有較好的抗炎及抑制黃嘌呤氧化酶的活性，蒼術(shù)具有較好的抗炎及促進尿酸排泄的活性。將上述幾味中藥進行配伍，相互作用，具有抗炎、抑制尿酸生成及促進尿酸排泄的作用，從多個角度達到治療急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎的作用，具有較好的效果，且組合物由于采用中藥成分，毒副作用小。

附圖說明

圖1為本發(fā)明黃嘌呤氧化反應(yīng)產(chǎn)物尿酸及內(nèi)標(biāo)物質(zhì)5-氟尿嘧啶的質(zhì)譜總離子流圖。

具體實施方式

下面將對本發(fā)明實施例中的技術(shù)方案進行清楚、完整地描述，顯然，所描述的實施例僅僅是本發(fā)明一部分實施例，而不是全部的實施例?；诒景l(fā)明中的實施例，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員在沒有做出創(chuàng)造性勞動前提下所獲得的所有其他實施例，都屬于本發(fā)明保護的范圍。

本發(fā)明首先提供了一種中藥組合物，由以下重量份的中藥原料制成：

黃柏9.5～12重量份；

蒼術(shù)3～6重量份；

銀杏葉4.5～6重量份。

優(yōu)選的是，所述的中藥組合物由以下重量份的中藥原料制成：

黃柏10～11.5重量份；

蒼術(shù)3.5～5.5重量份；

銀杏葉4.5～5.5重量份。

更優(yōu)選的是，所述的中藥組合物由以下重量份的中藥原料制成：

黃柏10重量份；

蒼術(shù)5重量份；

銀杏葉5重量份。

本發(fā)明還提供了一種中藥組合物的制備方法，包括：

a)將黃柏加入醇類溶劑中超聲提取，得到黃柏提取液；

b)將蒼術(shù)加入醇類溶劑中超聲提取，得到蒼術(shù)提取液；

c)將銀杏葉加入醇類溶劑中超聲提取，得到銀杏葉提取液；

d)將a)、b)、c)中得到的黃柏提取液、蒼術(shù)提取液和銀杏葉提取物混合，得到中藥組合物。

按照本發(fā)明，所述的黃柏、蒼術(shù)和銀杏葉在進行超生提取前，優(yōu)選先進行粉碎，所述的a)、b)、c)中用醇類溶劑作為提取溶劑，所述的醇類溶劑為本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的醇類溶劑即可，并無特殊的限制，本發(fā)明中優(yōu)選為乙醇，更優(yōu)選為65％～75％的乙醇；所述醇類溶劑的體積與黃柏、蒼術(shù)或銀杏葉體積的比例均優(yōu)選為(8～10)：1；所述提取溫度優(yōu)選為25～50℃，所述提取時間優(yōu)選為1～2h。

按照本發(fā)明，本發(fā)明對原料黃柏、蒼術(shù)和銀杏葉的來源并沒有特殊的限制，為市售即可。

本發(fā)明還提供了上述中藥組合物在制備治療急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎藥物中的應(yīng)用。

為了進一步說明本發(fā)明，以下結(jié)合實施例對本發(fā)明提供的一種中藥組合物及其制備方法進行詳細描述。

以下實施例中所用的試劑均為市售。

實施例1

將10重量份的黃柏粉碎后，加入8倍體積的75％的乙醇，25～50℃，超聲提取1小時，得到黃柏提取液；

將3.5重量份的蒼術(shù)粉碎后，加入8倍體積的75％的乙醇，25～50℃，超聲提取1小時，得到蒼術(shù)提取液；

將5.5重量份的銀杏葉粉碎后，加入8倍體積的75％的乙醇，25～50℃，超聲提取1小時，得到銀杏葉提取液；

將上述黃柏提取液、蒼術(shù)提取液和銀杏葉提取液混合，得到中藥組合物。

實施例2

將10重量份的黃柏粉碎后，加入10倍體積的75％的乙醇，25～50℃，超聲提取2小時，得到黃柏提取液；

將5重量份的蒼術(shù)粉碎后，加入10倍體積的75％的乙醇，25～50℃，超聲提取2小時，得到蒼術(shù)提取液；

將5重量份的銀杏葉粉碎后，加入10倍體積的75％的乙醇，25～50℃，超聲提取2小時，得到銀杏葉提取液；

將上述黃柏提取液、蒼術(shù)提取液和銀杏葉提取液混合，得到中藥組合物。

實施例3

將11.5重量份的黃柏粉碎后，加入9倍體積的75％的乙醇，25～50℃，超聲提取1.5小時，得到黃柏提取液；

將5.5重量份的蒼術(shù)粉碎后，加入9倍體積的75％的乙醇，25～50℃，超聲提取1.5小時，得到蒼術(shù)提取液；

將4.5重量份的銀杏葉粉碎后，加入9倍體積的75％的乙醇，25～50℃，超聲提取1.5小時，得到銀杏葉提取液；

將上述黃柏提取液、蒼術(shù)提取液和銀杏葉提取液混合，得到中藥組合物。

對比例1

將8重量份的黃柏粉碎后，加入8倍體積的75％的乙醇，25～50℃，超聲提取1小時，得到黃柏提取液。

將8重量份的蒼術(shù)粉碎后，加入8倍體積的75％的乙醇，25～50℃，超聲提取1小時，得到蒼術(shù)提取液。

將4重量份的銀杏葉粉碎后，加入8倍體積的75％的乙醇，25～50℃，超聲提取1小時，得到銀杏葉提取液。

將上述黃柏提取液、蒼術(shù)提取液和銀杏葉提取液混合，得到中藥組合物。

對比例2

將6.7重量份的黃柏粉碎后，加入10倍體積的75％的乙醇，25～50℃，超聲提取2小時，得到黃柏提取液。

將6.7重量份的蒼術(shù)粉碎后，加入10倍體積的75％的乙醇，25～50℃，超聲提取2小時，得到蒼術(shù)提取液。

將6.7重量份的銀杏葉粉碎后，加入10倍體積的75％的乙醇，25～50℃，超聲提取2小時，得到銀杏葉提取液。

將上述黃柏提取液、蒼術(shù)提取液和銀杏葉提取液混合，得到中藥組合物。

對比例3

將5重量份的黃柏粉碎后，加入9倍體積的75％的乙醇，25～50℃，超聲提取1.5小時，得到黃柏提取液。

將10重量份的蒼術(shù)粉碎后，加入9倍體積的75％的乙醇，25～50℃，超聲提取1.5小時，得到蒼術(shù)提取液。

將5重量份的銀杏葉粉碎后，加入9倍體積的75％的乙醇，25～50℃，超聲提取1.5小時，得到銀杏葉提取液。

將上述黃柏提取液、蒼術(shù)提取液和銀杏葉提取液混合，得到中藥組合物。

下面通過抗炎實驗及體外抑制黃嘌呤氧化酶實驗進一步說明本發(fā)明的效果：

1抗炎實驗

本實驗以尿酸鈉結(jié)晶誘導(dǎo)的huvec損傷為模型結(jié)合mtt實驗，以藥物抑制huvec損傷的抑制率為指標(biāo)，對藥物的抗炎活性進行評價。

1.1實驗材料與試劑

黃柏、蒼術(shù)、銀杏葉均購自吉林省長春市吉林大藥房。huvec細胞株購買于。dmem(thermo)，青霉素，鏈霉素，胰蛋白酶，二甲基亞砜(dmso)，3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazoliumbromide(mtt)均購自美國sigma公司；胎牛血清(thermo)。96孔細胞培養(yǎng)板(greiner，德國)；酶標(biāo)儀(tecan，澳大利亞)；二氧化碳培養(yǎng)箱(mco-175，sanyo)；光學(xué)倒置顯微鏡(xds-1b，重慶光學(xué)儀器廠)。

1.2msu溶液的制備方法

稱取10mg的msu結(jié)晶，高壓滅菌1h，加入100μl的dmso，再加dmem定容至10ml,超聲30min至溶解，制成1mg/ml的msu儲備液，用時以dmem稀釋至相應(yīng)濃度。

1.3huvec的體外培養(yǎng)

huvec經(jīng)0.25％胰蛋白酶消化，用含10％胎牛血清的dmem培養(yǎng)液中和，3500r/min離心10min后，棄去上清液，加含10％胎牛血清的dmem培養(yǎng)液，移入細胞培養(yǎng)瓶中，放入37℃、5％co2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)至對數(shù)生長期。

1.4huvec細胞活性檢測

用0.25％的胰蛋白酶消化huvec，以8000/孔的密度，100μl接種到96孔板中，培養(yǎng)24h，棄去培養(yǎng)液。每孔加入50μl的msu溶液(空白組以50μl的dmem代替)，每組設(shè)置6個平行孔。當(dāng)生藥濃度為0.2mg/ml時，達到黃柏、蒼術(shù)、銀杏葉等中藥的安全濃度。因此，每孔加入50μl的實施例1、2、3、4中的藥液，使其終濃度為生藥濃度0.2mg/ml(空白組及模型組以50μl的dmem代替)。放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h，棄去藥液，每孔加入100μl的msu溶液，放入培養(yǎng)箱培養(yǎng)4h，棄去孔內(nèi)溶液，加入150μl的dmso，放入酶標(biāo)儀中，37℃低速震蕩溶解10min，570nm處檢測吸光度，進行統(tǒng)計分析。細胞存活率按以下公式得出：

ic％＝(試驗孔吸光度均值/空白孔吸光度均值)×100％

1.5實驗結(jié)果

表1不同配比復(fù)方及相同生藥濃度的黃柏蒼術(shù)藥對與銀杏葉單味藥的抗炎活性(mean±sd，n＝6)

從表1中可以看出，三個對比例對尿酸鈉引起的huvec細胞損傷的抑制作用較差，即抗炎作用較差，且組成復(fù)方的中藥間并不存在明顯的協(xié)同作用。與之相比，實施例1-3的中藥組合物均具有較好的抗炎活性，且抑制率明顯高于與復(fù)方中生藥濃度相同的黃柏蒼術(shù)藥對及銀杏葉單味藥的抑制率的加和，因此可以說以這些比例組成組方后，銀杏葉與黃柏蒼術(shù)藥對在抗炎方面產(chǎn)生了協(xié)同作用，具有一定的研發(fā)價值。

2體外抑制黃嘌呤氧化酶活性實驗

黃嘌呤氧化酶氧化黃嘌呤生成尿酸是人體內(nèi)尿酸產(chǎn)生最重要的途徑，本節(jié)將加入藥物后黃嘌呤氧化酶氧化黃嘌呤所生成尿酸的量，與不加藥物時生成尿酸的量進行比較，對藥物對黃嘌呤氧化酶的抑制率進行分析檢測。

2.1實驗材料與試劑

黃柏、蒼術(shù)、銀杏葉購自吉林省長春市吉林大藥房。黃嘌呤氧化酶和tris購自美國sigma公司；5-氟尿嘧啶購自中國上海的aladdin公司。乙腈、甲酸均為色譜純(美國fisher公司)；實驗用水為milli-q超純水。其它未提到的藥品和試劑均為北京化學(xué)試劑公司產(chǎn)品。

2.2實驗儀器與設(shè)備

uplc-q-tof/ms為waterssynaptg2四極桿飛行時間質(zhì)譜儀配備acquityuplc系統(tǒng)(waters，美國)；超高效液相色譜-三級四極桿質(zhì)譜儀(acquity-xevotq,waterscorp.,milford,ma,usa)；centrifuge5810r超速速冷凍離心機(eppendorf，德國)。

2.3黃嘌呤氧化酶抑制率的測定

終體積為200μl，20mu/ml的黃嘌呤氧化酶，150m的黃嘌呤，50mm的tris-hcl緩沖溶液(ph8.7)，5mg/ml生藥濃度的中藥提取液(且黃柏蒼術(shù)與銀杏葉的濃度與其占復(fù)方中的生藥濃度相同)，在37攝氏度反應(yīng)5min，用四倍量的冰乙腈終止反應(yīng)，加入終濃度為4μm/l的5-氟尿嘧啶作為內(nèi)標(biāo)，過0.22μm濾膜，進行超高效液相色譜-三級四極桿質(zhì)譜分析。

液相條件：watersacquityuplcbehc18色譜柱(4.6×150mmi.d.,5μm；美國)；流動相a為乙腈，b為含0.1％的甲酸的水溶液；流速：0.3ml/min；柱溫：25℃；梯度：0-4min，10％a(90％b)-30％a(70％b)；4-7min，30％a(70％b)-80％a(20％b)；7-9min,80％a(20％b)-100％a(0％b)。

質(zhì)譜條件：esi離子源，負離子掃描模式，毛細管電壓3.0kv；脫溶劑氣溫度350℃；脫溶劑氣流速650l/h；錐孔氣流速50l/h；離子源溫度120℃。抑制率(％)按下式計算：

i＝(a1-a2)/a1×100％

式中，i為藥液對黃嘌呤氧化酶的抑制率；a1為未加藥液的反應(yīng)體系中尿酸相對內(nèi)標(biāo)物的峰面積；a2為有藥液的反應(yīng)體系中尿酸相對內(nèi)標(biāo)物的峰面積。黃嘌呤氧化反應(yīng)產(chǎn)物尿酸及內(nèi)標(biāo)物質(zhì)5-氟尿嘧啶的質(zhì)譜總離子流圖如圖1所示。

2.4質(zhì)譜方法優(yōu)化

表2尿酸和內(nèi)標(biāo)物5-氟尿嘧啶的質(zhì)譜條件

2.5實驗結(jié)果

表3不同配比復(fù)方及相同生藥濃度的黃柏蒼術(shù)藥對與銀杏葉對黃嘌呤氧化酶的抑制率(mean±sd，n＝6)

從表3中可以看出，各對比例與實施例相比，抑制黃嘌呤氧化酶的活性較差，且組成復(fù)方的單位藥間并不存在協(xié)同作用。而各實施例均對黃嘌呤氧化酶活性具有較好的抑制作用，且復(fù)方抑制率明顯高于與復(fù)方中生藥濃度相同的黃柏蒼術(shù)藥對及銀杏葉單味藥的抑制率的加和，因此可以說以這些比例組成組方后，銀杏葉與黃柏蒼術(shù)藥對在抑制黃嘌呤氧化酶活性方面產(chǎn)生了協(xié)同作用，具有一定的研發(fā)價值。

通過上述實施例，本發(fā)明已經(jīng)完全有效的達到了發(fā)明目的。熟悉該項技藝的人士應(yīng)該明白本發(fā)明包括但不限于附圖、附表和上述實施例中描述的內(nèi)容。任何不偏離本發(fā)明的功能和原理的修改都將包括在權(quán)利要求書的范圍中。