本公開涉及免疫療法。更具體地，本公開涉及對b細胞成熟抗原(bcma)具有特異性的嵌合抗原受體(car)分子、用于治療免疫相關病癥的組合物及其方法。

背景技術：

1、以下列出了被認為與目前公開的主題的背景技術相關的參考文獻：

2、[1]friedman?km、garrett?te、evans?jw等人。通過抗b細胞成熟抗原嵌合抗原受體t細胞有效靶向多種表達b細胞成熟抗原的血液惡性腫瘤。hum.gene?ther?2018；29:585-601。

3、[2]carpenter?ro、evbuomwan?mo、pittaluga?s等人。b細胞成熟抗原是多發(fā)性骨髓瘤過繼性t細胞療法的有希望的靶點。clin.cancer?res?2013；19:2048-2060。

4、[3]ali?sa、shi?v、maric?i等人。表達抗b細胞成熟抗原嵌合抗原受體的t細胞導致多發(fā)性骨髓瘤緩解。blood?2016；128:1688-1700。

5、[4]brudno?jn、maric?i、hartman?sd等人。經基因修飾以表達抗b細胞成熟抗原嵌合抗原受體的t細胞導致緩解不良預后的復發(fā)性多發(fā)性骨髓瘤。jco?2018；36:2267-2280。

6、[5]raje?n、berdeja?j、lin?y等人。抗bcmacar?t細胞療法bb2121治療復發(fā)性或難治性多發(fā)性骨髓瘤。n?engl?j?med?2019；380:1726-1737。

7、[6]cohen?ad、garfall?al、stadtmauer?ea等人。b細胞成熟抗原特異性car?t細胞在多發(fā)性骨髓瘤中具有臨床活性。j?clin?invest?2019；129:2210-2221。

8、[7]jiang?s、jin?j、hao?s等人。低劑量人scfv衍生的bcma靶向car-t細胞在復發(fā)性/難治性多發(fā)性骨髓瘤患者中實現(xiàn)了快速應答和高度完全緩解。blood?2018；132:960。

9、[8]liu?y、chen?z、fang?h等人。bcma引導的car-t療法對復發(fā)性或難治性多發(fā)性骨髓瘤的持久的緩解。blood?2018；132:956。

10、[9]mailankody?s、ghosh?a、staehr?m等人。mcarh171(一種人源性bcma靶向car?t細胞療法)在復發(fā)性/難治性多發(fā)性骨髓瘤中的臨床應答和藥代動力學：i期臨床試驗的最終結果。blood?2018；132:959。

11、[10]munshi?nc、anderson?ld,jr.、shah?n等人。復發(fā)性和難治性多發(fā)性骨髓瘤中的idecabtagene?vicleucel。n.engl.j.med.2021；384:705-716。

12、[11]eisenberg?v、hoogi?s、shamul?a、barliya?t,cohen?cj。t細胞“ala?car-t(e)”-基因工程t細胞對癌癥的應答。adv.drug?deliv.rev.2019；141:23-40。

13、[12]kawalekar?ou、o'connor?rs、fraietta?ja等人。不同的共同受體信號傳導調節(jié)特定的代謝途徑并影響car?t細胞的記憶發(fā)育。immunity.2016；44:380-390。

14、[13]watanabe?n、bajgain?p、sukumaran?s等人。微調car間隔子提高t細胞效能。oncoimmunology.2016；5:e1253656。

15、[14]ying?z、huang?xf、xiang?x等人。安全且有效的抗cd19?car?t細胞療法。nat.med.2019；25:947-953。

16、本文對上述參考文獻的承認不應被推斷為意指這些參考文獻以任何方式與目前公開的主題的專利性相關。

17、背景技術

18、多發(fā)性骨髓瘤(mm)通過惡性漿細胞的克隆擴增在骨髓中發(fā)育，并與血液和尿液中單克隆免疫球蛋白的過量產生相關聯(lián)。盡管在mm的治療方面取得了顯著的進展，但是這種疾病在復發(fā)性/難治性(r/r)患者中仍然是不可治愈的，具有不良預后。因此，需要開發(fā)靶向多發(fā)性骨髓瘤的新型治療方法。繼cd19靶向car療法血液惡性腫瘤取得重大成功并于2017年獲得fda批準后，car療法需要新的潛在靶點。在這方面，b細胞成熟抗原(bcma)是一種屬于腫瘤壞死因子受體(tnfr)超家族的細胞表面蛋白。在與april和baff相互作用后，bcma可促進b細胞存活和增殖。除了成熟的b淋巴細胞和漿細胞，bcma在大多數(shù)mm病例中高度表達，使其成為car療法的有吸引力的靶點[1]。

19、kochenderfer及其同事在臨床試驗中測試了抗bcmacar，該臨床試驗在用0.3-3x106?car?t細胞/kg治療的患者組中產生了20％的客觀應答率[2]。接受最高劑量car?t細胞(9x106細胞/kg)的患者組獲得了較高的總體應答率(orr)(81％)[3,4]。最近的若干項試驗證明了抗bcmacar方法在有希望的i/ii期研究中的潛力，在大量預治療的r/r多發(fā)性骨髓瘤患者中達到80％的orr，具有深度和持久的應答[5-10]。基于nejm中出版的ii期試驗的令人印象深刻的結果，fda和ema批準idecabtagene?vicleucel(ide-cel或bb2121)用于治療r/r?mm患者。示出非常令人鼓舞的結果的附加的car?t細胞產物是ciltacabtageneautoleucel(cilta-cel)，其合并了兩個抗bcma單重鏈結構域和4-1bb共刺激結構域。使用這種構建體的少數(shù)臨床試驗證明orr大于80％而沒有細胞因子釋放綜合征或神經毒性方面的過度毒性。

20、有理由推測，需要高劑量的car?t細胞來實現(xiàn)應答[10]和防止復發(fā)可能與靶向部分的低親和力、較差的抗原表達、t細胞隨時間推移的持久性缺乏和/或car表達和穩(wěn)定性降低有關[11]。因此，car分子可能被調節(jié)以增強工程化t細胞功能。

21、car分子由兩個基本部分組成：細胞外結合結構域和信號傳導結構域。結合結構域通常由靶向設計抗原的單鏈片段可變(scfv)組成，而信號傳導結構域通常由共刺激部分(cd28和/或4-1bb)組成，與cd3一起促進t細胞活化。此外，共刺激的類型可極大地促進cart細胞的持久性和代謝活性(諸如在基于4-1bb的car中所示)，而cd28促進更有效但短暫的應答[12]。鉸鏈結構域和跨膜結構域連接兩個car部分，提供了car分子的適當連接和柔性，影響car-t細胞功能、結構穩(wěn)定性和表達。car的特定鉸鏈結構域的選擇通常根據靶配體與細胞膜的接近程度來選擇。

22、作為其功能的關鍵決定因素，car的組成和結構通常根據經驗進行優(yōu)化。例如，zhang等人的研究表明，摻入cd8或cd28的跨膜結構域而不是cd3的跨膜結構域可導致更高的car表面表達。在另一項研究中，smith等人表明使用更長的鉸鏈結構域增加了car的效能和特異性。還示出了car設計的優(yōu)化和共刺激如何可減少活化誘導的細胞死亡(aicd)，并隨時間推移導致car表達的改善。除了特異性，鉸鏈組成也可影響強直信號傳導和提高體內活性；研究示出，基于igg的鉸鏈的修飾提高了體內活性，并降低了由位于igg鉸鏈中的ch2ch3結構域介導的強直信號傳導效應[13]。最近還表明，cd8α鉸鏈結構域和tm結構域的修飾導致car-t細胞中抗凋亡分子表達增加，并且細胞因子分泌減少，同時保留細胞毒性功能[14]。最近對基于抗cd19?car-t的臨床研究的回顧性分析，進一步支持了car結構域的結構組成(超出scfv和共刺激部分)影響臨床結果和相關毒性的觀點。例如，已經表明，與基于cd8鉸鏈-tm的car相比，基于cd28鉸鏈-tm的car顯示出更高的臨床功效和嚴重的細胞毒性。

23、因此，本領域需要提供改進的bcma-car-t分子，其根據經驗評估最佳配置，并表現(xiàn)出增加的特異性和高的體外和長期體內功效。本說明書解決了這些需求。

技術實現(xiàn)思路

1、本公開的第一方面涉及嵌合抗原受體(car)分子，該car分子包含以下組分：(i)至少一個靶結合結構域；其中所述靶結合結構域中的至少一個靶結合結構域特異性地識別并結合b細胞成熟抗原(bcma)；(ii)衍生自分化8α(cd8α)蛋白簇的至少一個鉸鏈結構域和至少一個跨膜結構域(也稱為t細胞表面糖蛋白cd8α鏈)。應當注意的是，結構域的鉸鏈區(qū)包含如seq?id?no:9所示的氨基酸序列，和其任何片段、衍生物和變體。該car分子還包含(iii)至少一個細胞內t細胞信號轉導結構域。更具體地，該結構域包含腫瘤壞死因子(tnf)受體家族成員的至少一個結構域，和任選地t細胞受體(tcr)分子的至少一個結構域。在一些實施方案中，本公開的car?t分子包含如seq?id?no:1或其任何片段和衍生物中任一者所示的氨基酸序列，例如，car?t分子包含如seq?id?no:40所示的氨基酸序列。

2、本公開的另一個方面涉及包含編碼至少一種car分子的至少一種核酸序列的核酸分子，或包含所述核酸分子的任何盒、載體或媒介物。在一些實施方案中，此類編碼的car分子包含以下組分。首先(i)，至少一個靶結合結構域；其中所述靶結合結構域中的至少一個靶結合結構域特異性地識別并結合bcma；第二(ii)，衍生自cd8α蛋白的至少一個鉸鏈結構域和至少一個跨膜結構域。應當注意的是，結構域的鉸鏈區(qū)包含如seq?id?no:9所示的氨基酸序列，和其任何片段、衍生物和變體。該car分子還包含作為第三組分(iii)的至少一個細胞內t細胞信號轉導結構域。更具體地，該結構域包含tnf受體家族成員的至少一個結構域，和任選地tcr分子的至少一個結構域。

3、本公開的另一個方面涉及基因編輯系統(tǒng)，該基因編輯系統(tǒng)包含：

4、首先(i)，根據本公開所述的至少一種核酸分子，或包含該至少一種核酸分子的任何盒、載體或媒介物；和

5、第二(ii)，至少一種基因編輯組分或編碼該基因編輯組分的核酸序列。在一些具體實施方案中，由本公開提供的基因編輯系統(tǒng)的至少一種核酸分子編碼至少一種car分子，該至少一種car分子包含以下組分：(i)，至少一個靶結合結構域；其中所述靶結合結構域中的至少一個靶結合結構域特異性地識別并結合bcma；(ii)，衍生自cd8α蛋白的至少一個鉸鏈結構域和至少一個跨膜結構域。應當注意的是，結構域的鉸鏈區(qū)包含如seq?id?no:9所示的氨基酸序列，和其任何片段、衍生物和變體；和(iii)至少一個細胞內t細胞信號轉導結構域。更具體地，該結構域包含tnf受體家族成員的至少一個結構域，和任選地tcr分子的至少一個結構域。

6、本公開的另一個方面涉及表達至少一種car分子的t細胞譜系的基因工程化細胞，或包含本文所公開的該經基因修飾的細胞的任何細胞群體。更具體地，在一些實施方案中，由工程化細胞表達的car包含以下組分：首先(i)，至少一個靶結合結構域；其中所述靶結合結構域中的至少一個靶結合結構域特異性地識別并結合bcma；第二(ii)，衍生自cd8α蛋白的至少一個鉸鏈結構域和至少一個跨膜結構域。應當注意的是，結構域的鉸鏈區(qū)包含如seqid?no:9所示的氨基酸序列，和其任何片段、衍生物和變體。該car分子還包含作為第三組分(iii)的至少一個細胞內t細胞信號轉導結構域。更具體地，該結構域包含tnf受體家族成員的至少一個結構域，和任選地tcr分子的至少一個結構域。

7、本公開的另一個方面涉及一種組合物，該組合物包含至少一種car分子、包含編碼所述car分子的至少一種核酸序列的任何核酸分子、或包含該核酸分子的任何盒、載體、媒介物或基因編輯系統(tǒng)、表達所述car分子的任何宿主細胞、和/或表達所述car的t譜系的任何基因工程化細胞或包含該t譜系的至少一種所述基因工程化細胞的細胞群體。更具體地，此類car分子包含以下組分。首先(i)，至少一個靶結合結構域；其中所述靶結合結構域中的至少一個靶結合結構域特異性地識別并結合bcma；第二(ii)，衍生自cd8α蛋白的至少一個鉸鏈結構域和至少一個跨膜結構域。應當注意的是，結構域的鉸鏈區(qū)包含如seq?id?no:9所示的氨基酸序列，和其任何片段、衍生物和變體。該car分子還包含作為第三組分(iii)的至少一個細胞內t細胞信號轉導結構域。更具體地，該結構域包含tnf受體家族成員的至少一個結構域，和任選地tcr分子的至少一個結構域。

8、應該注意的是，根據任選的實施方案，本公開的組合物還包含藥學上可接受的載體、稀釋劑、賦形劑和添加劑中的至少一者。

9、本公開的另一個方面涉及用于治療、預防、改善、抑制或延遲哺乳動物受試者中免疫相關病癥的發(fā)作的方法。在一些實施方案中，該方法包括向該受試者施用有效量的以下項中的至少一者的步驟：

10、(a)編碼至少一種car分子的至少一種核酸分子；(b)包含(a)的該核酸分子的至少一個盒、載體媒介物或基因編輯系統(tǒng)；(c)表達該car的至少一個細胞(具體地，t譜系的細胞)，或此類細胞群體；和(d)包含(a)、(b)和(c)中的至少一者的組合物。更具體地，在所公開的方法的一些實施方案中，此類car分子包含以下組分。首先(i)，至少一個靶結合結構域；其中該靶結合結構域中的至少一個靶結合結構域特異性地識別并結合bcma；第二(ii)，衍生自cd8α蛋白的至少一個鉸鏈結構域和至少一個跨膜結構域。應當注意的是，結構域的鉸鏈區(qū)包含如seq?id?no:9所示的氨基酸序列，和其任何片段、衍生物和變體。該car分子還包含作為第三組分(iii)的至少一個細胞內t細胞信號轉導結構域。更具體地，該結構域包含tnf受體家族成員的至少一個結構域，和任選地tcr分子的至少一個結構域。

11、本公開的另一個方面涉及有效量的以下項中的至少一者：

12、(a)編碼至少一種car分子的至少一種核酸分子；(b)包含(a)的所述核酸分子的至少一個盒、載體媒介物或基因編輯系統(tǒng)；(c)表達該car分子的至少一個細胞，具體地，t譜系的細胞，或這些細胞群體；和(d)包含(a)、(b)和(c)中的至少一者的組合物；用于在治療、預防、改善、抑制或延遲哺乳動物受試者中免疫相關病癥的發(fā)作的方法中使用。在所討論的用途的一些實施方案中，此類car分子包含以下組分。首先(i)，至少一個靶結合結構域；其中所述靶結合結構域中的至少一個靶結合結構域特異性地識別并結合bcma；第二(ii)，衍生自cd8α蛋白的至少一個鉸鏈結構域和至少一個跨膜結構域。應當注意的是，結構域的鉸鏈區(qū)包含如seq?id?no:9所示的氨基酸序列，和其任何片段、衍生物和變體。該car分子還包含作為第三組分(iii)的至少一個細胞內t細胞信號轉導結構域。更具體地，該結構域包含tnf受體家族成員的至少一個結構域，和任選地tcr分子的至少一個結構域。

13、在又一些另一個方面，本公開提供了一種針對表達bcma蛋白的靶細胞和/或包含該靶細胞的組織靶向活化t譜系的細胞的方法。更具體地，該方法包括將該t譜系的該細胞與有效量的以下項中的至少一者接觸的步驟：

14、(a)編碼至少一種car分子的至少一種核酸分子；(b)包含(a)的所述核酸分子的至少一個盒、載體媒介物或基因編輯系統(tǒng)；和(c)包含(a)和(b)中的至少一者的組合物；更具體地，此類car分子包含以下組分。首先(i)，至少一個靶結合結構域；其中所述靶結合結構域中的至少一個靶結合結構域特異性地識別并結合bcma；第二(ii)，衍生自cd8α蛋白的至少一個鉸鏈結構域和至少一個跨膜結構域。應當注意的是，結構域的鉸鏈區(qū)包含如seq?idno:9所示的氨基酸序列，和其任何片段、衍生物和變體。該car分子還包含作為第三組分(iii)的至少一個細胞內t細胞信號轉導結構域。更具體地，該結構域包含tnf受體家族成員的至少一個結構域，和任選地tcr分子的至少一個結構域。

15、借助以下描述，本公開的這些方面和其他方面將變得顯而易見。