專利名稱：Il-4在增強化療劑作用中的應用的制作方法
本申請是1994年9月7日提交的共同擁有，共同未決的美國申請?zhí)?8/301,929的部分繼續(xù)申請。
本發(fā)明涉及通過給予所說哺乳動物有效量的白介素-4來增強化療藥物在哺乳動物中的作用的方法。
背景技術(shù)：
白介素-4(IL-4)是對B淋巴細胞具有多效性作用的一種細胞因子。Krammer等，美國國家科學院院刊(Proc.Nat.Acad.Sci.USA)，81，6149-6153(1984)，公開了在體外IL-4增加了表面II型主要組織相容性抗原。IL-4還增進B細胞的存活[Rabin，等，美國國家科學院院刊，82，2935-2939(1985)]并誘導Fcε受體的表達。已證明人IL-4可刺激IgG和IgM的產(chǎn)生(Defrance.等，免疫學雜志(J.Immunol.)(1988))。IL-4還抑制選擇的B細胞群的增殖并可拮抗IL-2在體外誘導的單核慢性淋巴細胞白血病細胞的增殖。參見，Karrau.等，實驗醫(yī)學雜志(J.Exp.Med.)，168，85-94(1988)；Rennick，等，美國國家科學院院刊，84，6889-6893(1987)。
還已證明了IL-4對其它類型細胞的作用。IL-4可增加存活力并刺激正常輔助細胞和抑制T細胞(Hu-Li等，實驗醫(yī)學雜志，165，157(1987)]以及T細胞系[Mosmann，等，美國國家科學院院刊，83，5654(1986)Fernandez-Botran.等，實驗醫(yī)學雜志，164，580(1986)]的生長。IL-4還刺激非特異的巨噬細胞的細胞毒性并增強巨噬細胞呈遞抗原的能力，Crawford，等，免疫學雜志，139.，135(1987)。另外，在Tepper.等，細胞，57，503-512(1989)的研究報道中提示小鼠IL-4表現(xiàn)出潛在的體內(nèi)抗腫瘤活性。
化療藥物常被用于治療白血病，淋巴瘤，骨髓瘤，某些肉瘤，和其它類型癌癥的患者。但是，一些患者對化療產(chǎn)生抵抗性，即對初始的化療不反應。其它一些患者在初始化療之后舊病復發(fā)并且在重復治療之后產(chǎn)生了對化療藥物的抵抗性。
例如，在對何杰金病或非何杰金淋巴瘤的治療中通常包括組合化療，這可在III期或IV期何杰金病患者達到高達80％的緩解率。但是，由于產(chǎn)生了對化療的抵抗性，緩解的患者有舊病復發(fā)的危險。
對淋巴瘤復發(fā)患者以及那些有抵抗性的患者的治療通常需要高劑量的組合化療結(jié)合自身骨髓移植。這樣的治療可達到緩解，但在這些情況下的緩解不如對以前未治療過的患者通過初次組合化療獲得的緩解經(jīng)常和持久。因此就需要一種治療復發(fā)的或有抵抗性的癌癥患者的方法，特別是需要治療復發(fā)的或有抵抗性的何杰金病和非何杰金淋巴瘤患者的方法。
在文獻中還已知其它形式的癌癥治療方法，如放療。但是，一些患者對放療有抵抗性，即對放療不產(chǎn)生反應。因此就需要一種治療對其它類型的癌癥治療(如放療)有抵抗性的癌癥患者的方法。
發(fā)明概述本發(fā)明通過提供一種治療哺乳動物癌癥的方法而滿足了前述的要求，該方法導致哺乳動物對其它化療藥物敏感化。
更具體地說，本發(fā)明以一種實施方案的方式提供了一種增強化療劑作用的方法，它包括與一種或多種其它化療藥物結(jié)合起來，給予患有癌癥的哺乳劑有效量的IL-4。
本發(fā)明還進一步提供了增強化療劑的方法，它包括(a)給予已變得對一種或多種化療藥物有抵抗性的患有癌癥的哺乳動物有效量的IL-4一段時間，使以誘導對其它化療藥物產(chǎn)生敏感性；和(b)用其它化療劑重新對所說哺乳動物進行治療。
在一個優(yōu)選的實施方案中，哺乳動物是患有何杰金病或非何杰金淋巴瘤的人。
在另一種實施方案中，本發(fā)明提供了一種對患有癌癥的哺乳動物進行治療的方法，該方法使得哺乳動物對其它形式的治療(例如放療)敏感化。
更具體地說，本發(fā)明提供了一種增強放療作用的方法，它包括與放療結(jié)合起來，給予患有癌癥的哺乳動物有效量的IL-4。發(fā)明詳述本文引用的所有參考文獻的全部內(nèi)容都作為參考。
本文所用的術(shù)語“增強化療劑的作用”意指增加了所說化療劑在治療哺乳動物癌癥中的效果。類似地，術(shù)語“增強放療的作用”指增加了所說放療對哺乳動物癌癥治療的效果。
“增加的效果”是通過對抗癌活性的增進的檢測而確定的即與使用同樣劑量的化療劑而不用IL-4相比，在給予有效量的IL-4之后或同時特定的劑量的化療劑的抗癌活性的增進。典型地，增加的效果表現(xiàn)為在IL-4治療之前，哺乳動物對化療有很小或無應答，而在IL-4治療之后或當與IL-4同時使用時對化療產(chǎn)生增進的應答。通過基本上相同的方法對放療與IL-4結(jié)合使用效果的增加進行了確定。
“有抵抗性的哺乳動物”本文定義為一種通過在化療后的測定中缺少有益的結(jié)果而表現(xiàn)為對化療劑有抵抗性的哺乳動物。如下文所述，優(yōu)選地有抵抗性哺乳動物是人，并且在一個特別優(yōu)選的實施方案中，有抵抗性的哺乳動物是一種有抵抗性的或復發(fā)的何杰金病或非何杰金淋巴瘤患者。
“與一種或多種其它化療藥物合用”給予IL-4意指IL-4的使用或者是(a)在化療開始之前，或者是(b)在化療停止或中止之后重新化療之前，或者(c)在化療過程之中，即；與其它化療藥物同時使用。
已知各種可用于需要化療的患者的治療劑包括1，3-二(2-氯乙基)-1-亞硝基尿素[BiCNU]，硫酸博萊霉素，5-氟尿嘧啶，6-巰基嘌呤，可的松，氨甲蝶呤，羅氮芥，絲裂霉素，順鉑，鹽酸甲基芐肼，氮烯唑胺，阿糖胞苷，鏈脲霉素，表鬼臼脂素，鬼臼乙叉甙[VP-16]，紫杉醇，蒽環(huán)類抗生素(如鹽酸柔紅霉素(阿霉素)和咪托蒽酮)，長春堿(如硫酸長春花堿和硫酸長春新堿)，以及烷基化試劑(如meclorethamine，環(huán)磷酰亞胺，異環(huán)磷酰亞胺)。如在The MerckManual，16th.Ed.，R.Berkow，ed.，Merck Research Laboratories(Rahway，NJ1992)中所述，這些試劑一般單獨或組合用于腫瘤疾病的化療之中。
具體說來，在何杰金病的治療中優(yōu)選的化療劑包括如下藥物的組合治療meclorethamine，長春新堿，甲基芐肼和可的松；或阿霉素，博萊霉素，長春花堿和氮烯唑胺，優(yōu)選的治療非何杰金淋巴瘤的組合劑包括環(huán)磷酰亞胺，長春新堿和可的松，含有或不含有阿霉素；或這四個藥物與例如博萊霉素，氨甲蝶呤，阿糖胞苷和甲基芐肼的藥物組合。
化療被用于治療各種癌癥。此處術(shù)語“癌”包括淋巴瘤，癌和肉瘤，以及其它腫瘤疾病，這些術(shù)語在本領(lǐng)域中是常用的。參見例如The MerckManual，16th Ed.同上文。本發(fā)明的方法可用于在患有這些疾病的且對所述化療劑有抵抗性的患者中增強這些化療劑的作用。
在特定的何杰金病或非何杰金淋巴瘤病例中，患者可能對化療有抵抗性；或者在這些疾病的化療誘導的緩解之后的復發(fā)中對這類化療劑的敏感性降低。按下文所定義的方法通過在IL-4治療之后重新化療檢測有利的結(jié)果，確定了由IL-4治療所誘導的化療劑增加的效果。
IL-4與“放療結(jié)合使用”意指IL-4的使用或者(a)是在放療開始之前，(b)是在放療終止或中止之后重新開始該治療之前，或者(c)是在放療過程之中，即；與放療同時使用。
用放療治療癌癥的方法是本領(lǐng)域所熟知的。例如，參見The MerckManual，16th Ed.同上文。
典型地，有抵抗性的或復發(fā)的患者是那些在兩種不同的化療方案之后具有進行性疾病的患者或者那些在至少兩個第二種化療方案之后仍未有反應的患者。
“有利的結(jié)果”，本文定義為對化療的部分或完全應答。在確定這類應答時，必須用未檢測到新的所檢測癥狀的病灶或疾病來標記所有可測量的病灶。
“完全應答”被定義為疾病的所有特征都基本完全地消失。在何杰金癥或非何杰金淋巴瘤中，完全應答還可通過負性兩側(cè)的骨髓抽吸和活檢來表明。
“部分應答”被定義為疾病可測量的消退量少于完全應答。在何杰金癥或非何杰金淋巴瘤中，部分應答指所有可測量的病灶直徑總和基值的減少大于或等于50％。
任何合適的IL-4都可用于本發(fā)明。如美國專利5,017,691中所描述的，可用常規(guī)重組DNA方法制備的哺乳動物IL-4。另外，人和小鼠IL-4可從商業(yè)途徑購買到，例如馬薩諸塞州，波士頓，Genzyme公司。而且，已從各種不同的培養(yǎng)上清液中純化了非重組的IL-4，例如Sanderson，等，美國國家科學院院刊，83，437-440(1986)，(小鼠)；Grabstein，等，實驗醫(yī)學雜志，163，1405-1413(1985)，(小鼠)；Ohara，等，免疫學雜志，135，2518-2523(1985)，(小鼠，BSF-I)；Butler，等，免疫學雜志，133，251-255(1984)，(人BCGF)；和Farrar，等，免疫學雜志，131，1838-1842(1983)，(小鼠，BCGF)。
優(yōu)選地，當治療人時，本發(fā)明使用IL-4為人IL-4。最優(yōu)選地是如PCT國際申請PCT/US89/04788中描述的由分泌性大腸桿菌產(chǎn)生的重組人IL-4，以及具有Yokota等，在美國國家科學院院刊，83，5894-5898(1986)和PCT國際申請PCT/US87/02990中所描述的序列的重組人IL-4。
根據(jù)本發(fā)明，哺乳動物被給有效量的IL-4一段時間以便足以增強化療劑的作用或使以前對化療的抗腫瘤作用有抵抗性的患者敏感化。劑量范圍一般是大約每天每公斤體重0.2μg到25μg的IL-4。優(yōu)選地，給予哺乳動物每天每公斤體重約0.25μg～10μg的重組hIL-4，并且最優(yōu)選每天每公斤體重給予哺乳動物0.25μg～5μg的rhIL-4。
給藥的量，頻率和時間將根據(jù)如嗜中性白細胞和單核細胞計數(shù)的水平(例如，單核細胞缺乏癥或粒細胞缺乏癥的嚴重程度)，患者的年齡，營養(yǎng)等因素而變化。優(yōu)選IL-4在開始時為每天給藥并在患者的生活期間持續(xù)階段性地給藥?？梢栽谧畛鯇χ行园准毎嫈?shù)和IL-4對抗體水平增加的程度的篩選中確定用藥的劑量和頻率。
用藥可通過靜脈內(nèi)，非胃腸道，皮下，肌肉或其它可接受的全身方法，而皮下用藥是優(yōu)選的。以使用任意常規(guī)的藥劑形式來給予IL-4。非胃腸道制劑包括無菌溶液或懸浮液。優(yōu)選將于約每公斤體重10～25微克的重組IL-4通過靜脈內(nèi)給予人。
使用如在Remington’s Pharmaceutical Science 18th Ed.，A.Gennaro，ed.，Mack Publishing Co.(Easton，PA，1990)所描述的常規(guī)技術(shù)，用常規(guī)的藥用賦形劑和添加劑制備符合上述劑量形式的藥物組合物的制劑。
現(xiàn)在，優(yōu)選全身使用IL-4，優(yōu)選通過皮下或腹膜內(nèi)注射或者甚至是靜脈注射。用于給藥的溶液可由冷凍干燥粉末重新組成并且它們可以另外含有防腐劑，緩沖劑，分散劑等。
優(yōu)選地，將IL-4用無菌水或10mM檸檬酸鹽緩沖液和不含防腐劑的無菌水重新配制成最大濃度不超過100μg/ml溶液，并且通過皮下注射，腹膜內(nèi)注射或連續(xù)靜脈內(nèi)輸注或靜脈內(nèi)注射系統(tǒng)給藥。對連續(xù)輸注來說，可將每天的劑量加入到5ml生理鹽水中并且可將該溶液通過機械泵或通過重力來輸注。
本發(fā)明可由下面的實施例加以說明，但是本發(fā)明并不受此限制。
實施例材料和方法以所指示的濃度使用購自Schering-Plough公司(Union，NJ)的重組hIL-4。Schering的rhIL-4的純度大于95％并且有大約2×107Units/mg蛋白的特定的活性?？赏ㄟ^如在Mosmann，免疫學方法雜志，65，55-63(1983)中所述的測試方法來確定具體活性。
得到的rhIL-4是盛于25μg和100μg小瓶中的無菌粉末(分別含共30μg和120μg的rhIL-4)。通過向小瓶中加入1.2mL USP注射用無菌水得到每mL含25μg或100μgrh IL-4的1.2ml溶液來重新配制rhIL-4。將重新形成的溶液貯存在2-8℃下備用并在重新配制后的24小時內(nèi)使用。何杰金病的治療如本文所定義，選擇由組織學證明具有復發(fā)的或有抵抗性的何杰金病的共24名患者來用IL-4治療。根據(jù)物理檢測，胸廓X-射線，CT掃描或正性骨髓抽吸和活組織檢測，所有患者都具有兩個垂直直徑至少為2cm×2cm的可測量的疾病。在開始IL-4治療之前至少4周所有的化療和/或放療都被終止，并且在IL-4治療期間，沒有進行放療或給予化療劑。
患者每天使用1.0μg/kg劑量的rh IL～4來治療。通過皮下注射給予rh IL-4并且持續(xù)治療8周。
在結(jié)束IL-4治療之后，患者再次用化療劑治療1-3個月?；焺┍唤M合使用，包括蒽環(huán)類，長春堿和烷基化試劑。如上文所定義的，24名患者中有5名患者表現(xiàn)為部分或完全應答的有利應答。
在評價患者的應答時，所有可測量的病灶被標示出來，并且對表現(xiàn)出有利應答的患者未檢測到新的病灶。“完全應答”被由通過包括負性雙側(cè)骨髓抽吸和活組織檢測，所有疾病特征的消失而得到確證。非何杰金淋巴瘤的治療選擇三名組織學證明患有復發(fā)的或有抵抗性的非何杰金淋巴瘤的患者來進行IL-4治療。根據(jù)上面何杰金患者中基本相同的方法，對患者進行了選擇，治療和評價，但劑量為每天5μg/kg。
在IL-4治療結(jié)束之后，應用如上所述治療何杰金病患者基本相同的方法，用化療劑對這些患者再次進行治療。三名患者中的一個表現(xiàn)出為部分或完全應答的對化療的有利應答。
可在不背離本發(fā)明的精神和范圍的情況下，對本發(fā)明進行修飾和改變，這對本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來講，是顯而易見的。本文所描述的特定的實施方案僅僅是做為實施例而提供的并且本發(fā)明并不應局限于此。
權(quán)利要求
1.IL-4在制備增強一種或多種其它化療劑的抗癌作用的藥物中的應用，其中將有效量的IL-4與其它化療藥劑一起給予患癌癥的哺乳動物。
2.權(quán)利要求1的應用，其中給予IL-4是在用其它化療劑開始化療之前。
3.權(quán)利要求1的應用，其中給予IL-4是在其它化療劑的同時。
4.IL-4在制備用于增強化療劑的抗癌作用的藥物中的應用，其中(a)將有效量的IL-4給予患癌癥的哺乳動物一段時間以便足以誘導對其它化療劑的敏感性，其中該哺乳動物對一種或多種其它化療劑有抵抗性；和(b)然后重新用其它化療劑對所說哺乳動物進行治療。
5.權(quán)利要求1，2，3或4的應用，其中哺乳動物是人。
6.權(quán)利要求5的應用，其中癌癥是何杰金病或非何杰金淋巴瘤。
7.權(quán)利要求1，2，3或4的應用，其中IL-4是人IL-4。
8.權(quán)利要求7的應用，其中人IL-4是重組人IL-4。
9.權(quán)利要求8的應用，其中重組人IL-4是在大腸桿菌中產(chǎn)生的。
10.權(quán)利要求4的應用，其中在重新用其它化療劑治療之前每天給予IL-4，大約持續(xù)8周。
11.權(quán)利要求1，2，3或4的應用，其中由皮下給予IL-4。
12.權(quán)利要求1，2，3或4的應用，其中通過靜脈內(nèi)給予IL-4。
13.一種增強化療劑的抗癌作用的方法，它包括與一種或多種其它化療劑一起給予患癌癥的哺乳動物有效量的IL-4。
14.一種包含IL-4的用于增強一種或多種其它化療劑的抗癌作用的藥用組合物。
15.權(quán)利要求14的藥用化合物，其中將有效量的IL-4與其它化療劑一起給予患癌癥的哺乳動物。
全文摘要
描述了一種在患有癌癥的哺乳動物中增強化療劑或放療作用的方法。該方法包括與其它化療劑或放療一起使用IL-4。
文檔編號A61K31/675GK1157571SQ95194962
公開日1997年8月20日 申請日期1995年9月7日 優(yōu)先權(quán)日1994年9月7日
發(fā)明者M·E·瑞巴克, B·科伊菲爾 申請人:先靈公司