專利名稱：玻連蛋白受體拮抗劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明的領(lǐng)域本發(fā)明涉及藥學活性化合物，它們可以抑制玻連蛋白受體并用于治療炎癥、癌癥和心血管疾病，例如動脈粥樣硬化癥和再狹窄以及骨的再吸收是一個因素的疾病，例如骨質(zhì)疏松。
本發(fā)明的背景整聯(lián)蛋白是細胞粘附受體的超家族，它們是在各種細胞上表達的跨膜糖蛋白。這些細胞表面粘附受體包括gpⅡb/Ⅲa，即纖維蛋白原受體，及αvβ3、玻連蛋白受體。纖維蛋白原受體gpⅡb/Ⅲa在血小板表面表達，并且它介導血小板的聚集并在流血傷口部位形成止血塊(Philips等，Blood.,1988,71,831)。玻連蛋白受體αvβ3可以在多種細胞上表達，所述細胞包括內(nèi)皮細胞、平滑肌細胞、破骨細胞和腫瘤細胞，因此，它具有多種功能。在破骨細胞的細胞膜上表達的αvβ3受體介導骨的再吸收過程并有助于骨質(zhì)疏松的發(fā)展(Ross等，J.Biol.Chem.,1987,262,7703)。在人主動脈平滑肌細胞上表達的αvβ3受體刺激平滑肌細胞遷移進入異內(nèi)膜(neointima),這將導致血管成形術(shù)后動脈粥樣硬化癥和再狹窄的形成(Brown等，Cardiovascular Res,1994,28,1815)。此外，最近的研究表明αvβ3拮抗劑通過誘導血管原的血管的脫噬作用(apoptosis)而能夠促進腫瘤的退化(Brooks等，Cell,1994,79,1157)。因此能夠阻礙玻連蛋白受體的試劑可以用于治療該受體介導的疾病，例如骨質(zhì)疏松、動脈粥樣硬化癥、再狹窄和癌癥。
已知玻連蛋白受體可以結(jié)合骨基質(zhì)蛋白，例如osteopontin、骨涎液蛋白(sialoprotein)和糖蛋白G，它們含有三肽Arg-Gly-Asp(或RGD)特征結(jié)構(gòu)。因此Horton等(Exp.Cell Res.1991,195,368)公開含有RGD特征結(jié)構(gòu)。因此Horton等(Exp.Cell Res.1991,195,368)公開含有RGD的多肽和抗玻連蛋白受體的抗體(23C6)可以通過破骨細胞抑制牙的再吸收和細胞擴散。此外Sato等(J.CelL Biol.1990,111,1713)公開echistatin，一種蛇毒肽(含有RGD序列)在組織培養(yǎng)液中為骨的再吸收有力的抑制劑，并抑制破骨細胞粘附于骨上。Fisher等(Endocrinology1993,132,1411)進一步證明echistatin抑制大鼠體內(nèi)的骨再吸收。Bertolini等(J.Bone Min.Res,6,Sup.l,S146252)表明環(huán)-S,S-Nα-乙?；腚装滨；?Nα-甲基-精氨?；?甘氨?；?天冬酰基-青霉胺抑制破骨細胞粘附于骨上。EP 528587和528586報道取代的苯基衍生物，它們可以抑制破骨細胞介導的骨的再吸收。
Alig等(EP0381033)、Hartman等(EP0540334)、Blackburn等(WO93/08174)、Bondinell等(WO93/00095)、Blackburn等(WO95/04057)、Egbertson等(EP0478328)、Sugihara等(EP529858)、Porter等(EP0542363)和Fisher等(EP0635492)公開部分化合物，它們用于抑制纖維蛋白原受體。現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)部分適當取代的化合物為玻連蛋白受體有力的抑制劑。具體而言，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)此類化合物對玻連蛋白受體比對纖維蛋白原受體有更有力的抑制作用并且此類化合物含有纖維蛋白原受體拮抗劑模板。
本發(fā)明的概述本發(fā)明包括此后所述的式(Ⅰ)-(Ⅴ)化合物和(ⅩⅪ)-(ⅩⅫ)化合物，它們具有抑制玻連蛋白受體的藥理活性并且可以用于治療炎癥、癌癥和心血管疾病，例如動脈粥樣硬化癥和再狹窄，以及其中骨的再吸收為一個因素的疾病，例如骨質(zhì)疏松。
本發(fā)明也提供含有式(Ⅰ)-(Ⅴ)(ⅩⅪ)-(ⅩⅫ)以及藥學上的載體的藥用組合物。
本發(fā)明也提供治療玻連蛋白受體介導的疾病的方法。具體而言，本發(fā)明的化合物用于治療動脈粥樣硬化癥、再狹窄、炎癥、癌癥和其本發(fā)明詳述本發(fā)明包括新的化合物，相對于對纖維蛋白原受體而言，它們是玻連蛋白受體的更有力的抑制劑。本發(fā)明的化合物包括纖維蛋白原受體拮抗劑模板，該模板連接于含氮5元環(huán)上，該環(huán)任選與芳香6元環(huán)稠合。纖維蛋白原受體拮抗劑模板可以被含有酸部分的脂肪族取代基取代。優(yōu)選約有14個插入的共價鍵通過最短的分子內(nèi)途徑存在于纖維蛋白原受體拮抗劑模板的酸性基團和任選稠合的5元環(huán)的氮之間。
如此處所用，術(shù)語“纖維蛋白原受體拮抗劑模板”意為纖維蛋白原受體拮抗劑的核心結(jié)構(gòu)，所述核心被一個酸性基團取代并且連接于被堿性氮部分取代的有機基團上。纖維蛋白原受體拮抗劑為抑制劑，它可以抑制纖維蛋白原與模板結(jié)合的纖維蛋白原受體GPⅡb-Ⅲa的連接。本發(fā)明的目的為通過用可任選稠合的含氮5元雜環(huán)(優(yōu)選咪唑環(huán)，最優(yōu)選苯并咪唑環(huán))替換纖維蛋白原受體拮抗劑上堿性的氮部分取代的有機基團而將纖維蛋白原受體拮抗劑轉(zhuǎn)化為玻連蛋白受體拮抗劑。
本發(fā)明包括式(Ⅰ)-(Ⅴ)化合物或其藥學上可接受的鹽
或
或
或
其中
W為-(CHRg)b-V’-或Ar；A為纖維蛋白原受體拮抗劑模板；V’為CONR21或NR21CO；G為NRe、S或O；Rg為H、C1-6烷基、Het-C0-6烷基、C3-7環(huán)烷基-C0-6烷基或Ar-C0-6烷基；R21為Het-C0-6烷基-U’-C1-6烷基、C3-7環(huán)烷基-C0-6烷基-U’-C1-6烷基或Ar-C0-6烷基-U’-C1-6烷基-；U’為CONRf或NRfCO；Rf為H、C1-6烷基或Ar-C0-6烷基；Re為H、C1-6烷基、Ar-C1-6烷基、Het-C1-6烷基、C3-7環(huán)烷基-C1-6烷基、(CH2)qOH或(CH2)kCO2Rg；k為0、1或2；q為1或2；b為0、1或2；Rb和Rc獨立選自H、C1-6烷基、Ar-C0-6烷基、Het-C0-6烷基或C3-6環(huán)烷基-C1-6烷基、鹵素、CF3、ORf、S(O)kRf、CORf、NO2、N(Rf)2、CO(NRf)2、CH2(NRf)2或Rb和Rc結(jié)合形成5元或6元芳香或非芳香碳環(huán)或雜環(huán)，任選被多至3個選自鹵素、CF3、C1-4烷基、ORf、S(O)kRf、CORf、CO2RfOH、NO2、N(Rf)2、CO(NRf)2和CH(NRf)2或亞甲二氧基的取代基取代。
本發(fā)明也包括式(ⅩⅪ)-(ⅩⅫ)化合物或其藥學上可接受的鹽
或
其中B為式-(CHRg)a-U-(CHRg)b-V-的連接部分；A為纖維蛋白原受體拮抗劑模板；G為NRe、S或O；Rg為H、C1-6烷基、Het-C0-6烷基、C3-7環(huán)烷基-C0-6烷基或Ar-C0-6烷基；Rk為Rg、-C(O)Rg或-C(O)ORf；Ri為H、C1-6烷基、Het-C0-6烷基、C3-7環(huán)烷基-C0-6烷基、Ar-C0-6烷基、Het-C0-6烷基-U’-C1-6烷基、C3-7環(huán)烷基-C0-6烷基-U’-C1-6烷基或Ar-C0-6烷基-U’-C1-6烷基-或C1-6烷基；Rf為H、C1-6烷基或Ar-C1-6烷基；Rc為H、C1-6烷基、Ar-C1-6烷基、Het-C1-6烷基、C3-7環(huán)烷基-C1-6烷基、(CH2)qOH或(CH2)kCO2Rg；U、U’和V獨立不存在或為CO、CRg2、C(=CRg2)、S(O)k、O、NRg、CRgORg、CRg(ORk)CRg2、CRg2CRg(ORk)、C(O)CRg2、CRg2C(O)、CONRiNRiCOOC(O)、C(O)O、C(S)O、OC(S)、C(S)NRg、NRgC(S)、S(O)2NRg、NRgS(O)2、N=N、NRgNRg、NRgCRg2、NR8CRg2、CRg2O、OCRg2、C≡C、CRg=CRg、Ar或Het；k為0、1或2；q為1或2；a為0、1或2；b為0、1或2；Rb和Rc獨立選自H、C1-6烷基、Ar-C0-6烷基、Het-C0-6烷基或C3-6環(huán)烷基-C0-6烷基、鹵素、CF3、ORf、S(O)kRf、CORf、NO2、N(Rf)2、CO(NRf)2、CH2(NRf)2或Rb和Rc結(jié)合形成5元或6元芳香或非芳香碳環(huán)或雜環(huán)，可任選被多至3個選自鹵素、CF3、C1-4烷基、ORf、S(O)kRf、CORf、CO2RfOH、NO2、N(Rf)2、CO(NRf)2和CH2(NRf)2或亞甲二氧基的取代基取代。
優(yōu)選，U’為CONRf或NRfCO。
本發(fā)明化合物的藥學上可接受的加成鹽、復合物或前體藥物也包括在本發(fā)明中。認為前體藥物為任何共價連接的載體，在體內(nèi)可以釋放式(Ⅰ)的活性母體藥物。除特別指明外，當本發(fā)明的化合物具有一個或多個手性中心時，本發(fā)明包括每一個非消旋化合物，所述化合物可以合成或用常規(guī)技術(shù)拆分。當化合物含有不飽和碳碳雙鍵時，順式(Z)和反式(E)異構(gòu)體都在本發(fā)明范圍內(nèi)。當化合物可以存在互變異構(gòu)體形式時，例如酮-烯醇互變異構(gòu)體，如
和
認為每一個互變異構(gòu)體都包括在本發(fā)明范圍內(nèi)，而不管是否存在平衡還是被R1的適當取代封閉為一種形式。
式(Ⅰ)-(Ⅴ)和(ⅩⅪ)-(ⅩⅫ)化合物抑制玻連蛋白和其他的含有RGD的多肽與玻連蛋白(αvβ3)受體的連接。破骨細胞上玻連蛋白受體的抑制作用抑制破骨細胞的骨的再吸收，并用于治療骨的再吸收相關(guān)的病理的疾病，例如骨質(zhì)疏松。此外，由于本發(fā)明的化合物抑制多種不同類型的細胞上的玻連蛋白受體，因此所述化合物可以由于治療炎癥和心血管疾病，例如動脈粥樣硬化癥和再狹窄，并用作抗轉(zhuǎn)移和抗腫瘤劑。
在特殊的實施方案中，本發(fā)明的化合物為式(Ⅱ)化合物，其中Rb和Rc結(jié)合形成含有多至2個氮原子的芳香環(huán)。在優(yōu)選的實施方案中，Rb和Rc結(jié)合形成式(Ⅱa)的可任選取代的苯環(huán)
其中G為N-Rc、S、CH或O。
適合的W為-(CHRg)aNRiCO-或
或，當G為CH，W為-CH2CH2NRiCO-時，其中Ri為連接于G的亞甲基。
優(yōu)選W為-CHRgNRiCO-。
適合的Ri為H、C1-6烷基、C3-7環(huán)烷基、Ar或被一個至三個選自鹵素、CN、NRg2、ORg、SRg、CO2Rg、CON(Rg)2、Ar、Het或C3-7環(huán)烷基取代的C1-6烷基。特別是，R1為H、甲基、丁基、氰基甲基、羧基甲基、苯基乙基或苯并咪唑基甲基。
適合的Rx、Ry和Rz獨立選自C1-6烷基、甲氧基、硝基、三氟甲基、氟代、氯代、氨基或Rx和Ry相鄰并結(jié)合形成亞甲二氧基基團。
優(yōu)選G為NRe。
適合的Re為H、C1-4烷基、Ar、Het或被Ar或Het取代的C1-4烷基。更適合，Rc為H、甲基或苯并咪唑基甲基。
在另一個特殊的實施方案中，其中Rb和Rc結(jié)合形成含有1至2個氮原子的式(Ⅱb-d)的6元芳香環(huán)
其中G、Rx、Ry如上述式(Ⅱa)的定義。
特別是，本發(fā)明的化合物含有含氮的可任選稠合的5元環(huán)、連接基團W和纖維蛋白原受體拮抗劑模板A。特別是，纖維蛋白原受體拮抗劑模板A如Bondinell等(WO93/00095,1993年1月7日公開)所定義的亞式(Ⅵ)或其藥學上可接受的鹽
A1至A5形成可接近的取代的7元環(huán)，所述環(huán)可以為飽和或未飽和，可任選含有多至2個選自O(shè)、S和N的雜原子，其中S和N可任選被氧化。
D1至D4形成可接近的取代的6元環(huán)，可任選含有多至2個氮原子。
R至少為一個選自R7、Q-C1-4烷基、Q-C2-4鏈烯基、Q-C2-4炔基的取代基，可任選被一個或多個=O、R11或R7取代；R*為H、Q-C1-6烷基、Q-C1-6氧代烷基、Q-C2-6鏈烯基、Q-C3-4氧代鏈烯基、Q-C3-4氧代炔基、Q-C2-4炔基、C3-6環(huán)烷基、Ar或Het，可任選被一個或多個R11取代；Q為H、C3-6環(huán)烷基、Het或Ar；R7為-COR8、-COCR’2R9、-C(S)R8、-S(O)mOR’、-S(O)mNR’R”、-PO(OR’)、-PO(OR’)2、-B(OR’)2、-NO2和Tet；R8為-OR’、-NR’R”、-NR’SO2R’、-NR’OR’、-OCR’2C(O)OR’、-OCR’2OC(O)-R’、-OCR’2C(O)NR’2、CF3或AA1；R9為-OR’、-CN、-S(O)rR’、S(O)mNR’2、-C(O)R’C(O)NR’2或-CO2R’；R11為H、鹵素、-OR12、-CN、-NR’R12、-NO2、-CF3、CF3S(O)r、-CO2R’、-CONR’2、Q-C0-6烷基、Q-C1-6氧代烷基、Q-C2-6鏈烯基、Q-C2-6炔基、Q-C0-6烷氧基、Q-C0-6烷基氨基-或Q-C0-6烷基-S(O)r-；R12為R’、-C(O)R’、-C(O)NR’2、-C(O)OR15、-S(O)mR’或S(O)mNR’2；R13為R’、-CF3、-SR’或-OR’；
R14為R’、-C(O)R’、CN、NO2、SO2R’或C(O)OR15；R15為H、C1-6烷基或Ar-C0-4烷基；R’為H、C1-6烷基、C3-7環(huán)烷基-C0-4烷基或Ar-C0-4烷基；R”為R’、-C(O)R’或-C(O)OR15；R”’為R”或AA2；AA1為通過其氨基連接的氨基酸，其羧基基團可任選被保護，AA2為通過其羧基連接的氨基酸，其氨基基團可任選被保護；m為1或2；n為0至3；p為0或1；和t為0至2。
參考式(Ⅵ)，適合，A1為CR1R1’、CR1、NR1、N、O或S(O)x；A2為CR2R2’、CR2、NR2；A3為CR3R3’、CR3、NR3、N、O或S(O)x；A4為CR4R4’、CR4、NR4或N；A5為CR5R5’、CR5、NR5、N、O或S(O)x；D1-D4為CR11、CR6或N；R1和R1’為R*或R，或者一起為=O；R2和R2’為R*、R或=O；R3和R3’為R*、R或=O；R4和R4’為R*、R或=O；R5和R5’為R*、R或=O；和x為0至2。
更適合，A1為CR1R1’、CR1、NR1、N、O或S；A2為CR2R2’、NR2或CR2；A3為CR3R3’；A4為CR4R4’、CR4、NR4或N；A5為CR5R5’、CR5、NR5、N、O；D1-D4為CH；R2或R4為R；R3、R3’和R5、R5’為=O或R*、H。
優(yōu)選，A1為CHR1、CR1、NR”、N或S；A2為CR2或CR2R2’；A3為CR3R3’；A4為CR4R4’或NR4；A5為CR5R5’和D1-D4為CH。
在一個實施方案中，A1為CR1，A2為CR2，A3為C=O，A4為NR4和A5為CHR5。
在另一個實施方案中，A1為NR1,A2為CHCR2,A3為CR3R3’,A4為NR4和A5為C=O。
在另一個實施方案中，A1和A4為C=O,A2為NR2,A3為CHR3’和A5為NR5。
在一個優(yōu)選的實施方案中，A1為NR1,A2為CHR2,A3為C=O,A4為NR’和A5為CHR5。
用下列式(Ⅵa)-(Ⅵi)每一個給出(Ⅵ)亞式的代表
在實施例中對本發(fā)明的特殊的實施方案進行命名，其中所述纖維蛋白原受體拮抗劑模板A屬于亞式(Ⅵ)。
本發(fā)明優(yōu)選的化合物為下列化合物或其藥學上可接受的鹽5-[[[(苯并咪唑-2-基)甲基]甲基氨基]羰基]-1H-苯并咪唑-2-氨基乙酸；(±)-2,3,4,5-四氫-7-[[[(苯并咪唑-2-基)甲基]甲基氨基]羰基]-4-(3,3-二甲基丁基)-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸；(S)-2,3,4,5-四氫-4-甲基-3-氧代-7-[[[(5-三氟甲基苯并咪唑-2-基)甲基]甲基氨基]羰基]-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸；(S)-2,3,4,5-四氫-7-[[[(4,7-二甲氧基苯并咪唑-2-基)甲基]甲基氨基]羰基]-4-甲基-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸；(±)-2,3,4,5-四氫-7-[[[(苯并咪唑-2-基)甲基]氨基]羰基]-4-(3,3-二甲基丁基)-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸；(S)-2,3,4,5-四氫-7-[[[(4-甲基苯并咪唑-2-基)甲基]甲基氨基]羰基]-4-甲基-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸；S)-2,3,4,5-四氫-7-[[N-[(苯并咪唑-2-基)甲基]-N-(4-氨基丁基)氨基]羰基]-4-甲基-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸；(S)-2,3,4,5-四氫-7-[[N-(苯并咪唑-2-基)甲基]-N-(2-氰基甲基)氨基]羰基]-4-甲基-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸；(S)-2,3,4,5-四氫-7-[[[(苯并咪唑-2-基)甲基]氨基]羰基]-3-氧代-4-(4-鄰苯二酰亞氨基丁基)-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸；4-[[[3-(苯并咪唑-2-基)丙基]氨基]羰基]哌啶-1-乙酸；4-[[[3-(苯并咪唑-2-基)丙基]氨基]羰基]苯基乙酸；(S)-2,3,4,5-四氫-7-[[[(4-氮雜-5,7-二甲基苯并咪唑-2-基)甲基]甲基氨基]羰基]-4-甲基-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸；(±)-2,3,4,5-四氫-7-[[[(苯并咪唑-2-基)甲基]甲基氨基]羰基]-4-[2-(3,4-亞甲二氧基苯基)乙基]-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸；
(±)-2,3,4,5-四氫-7-[[[(苯并咪唑-2-基)甲基]氨基]羰基]-4-(2-甲氧基乙基)-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸；(S)-2,3,4,5-四氫-7-[[[(苯并咪唑-2-基)甲基]甲基氨基]羰基]-4-甲基-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酰胺；(±)-2,3,4,5-四氫-7-[[[[1-[(苯并咪唑-2-基)甲基]苯并咪唑-2-基]甲基]氨基]羰基]-4-甲基-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸；(S)-2,3,4,5-四氫-7-[[[(苯并咪唑-2-基)甲基]甲基氨基]羰基]-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸；(S)-2,3,4,5-四氫-7-[[雙[(苯并咪唑-2-基)甲基]氨基]羰基]-4-甲基-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸；(±)-2,3,4,5-四氫-7-[[[(4-氮雜苯并咪唑-2-基)甲基]甲基氨基]羰基]-4-(3,3-二甲基丁基)-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸；(±)-2,3,4,5-四氫-7-[[[(苯并咪唑-2-基)甲基]甲基氨基]羰基]-3-氧代-4-(2,2,2-三氟乙基)-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸；(±)-2,3,4,5-四氫-7-[[2-(苯并咪唑-2-基)乙?；鵠氨基]-5-氧代-4-(2-苯基乙基)-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸；(±)-2,3,4,5-四氫-7-[[[(苯并咪唑-2-基)甲基]氨基]羰基]-3-氧代-4-(2,2,2-三氟乙基)-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸；(S)-2,3,4,5-四氫-7-[[[(5,6-二氟苯并咪唑-2-基)甲基]甲基氨基]羰基]-4-甲基-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸；(±)-2,3,4,5-四氫-7-[[雙[(苯并咪唑-2-基)甲基]氨基]羰基]-3-氧代-4-(2-苯基乙基)-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸；(S)-2,3,4,5-四氫-7-[[[(4-氮雜-5-甲基苯并咪唑-2-基)甲基]氨基]羰基]-4-甲基-3-氧代-1H-1,4-二氮雜_-2-乙酸；(S)-2,3,4,5-四氫-4-甲基-7-[[[(4-硝基苯并咪唑-2-基]甲基]甲基氨基]羰基]-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸；(±)-2,3,4,5-四氫-7-[[[(4-氮雜-5-甲基苯并咪唑-2-基)甲基]氨基]羰
(±)-2,3,4,5-四氫-7-[[[(4-氮雜-5-甲基苯并咪唑-2-基)甲基]氨基]羰基]-3-氧代-4-(2,2,2-三氟乙基)-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸；(±)-4-[4-[[[(1H-苯并咪唑-2-基)甲基]甲基氨基]羰基]苯基]-3-苯基丁酸；(±)-3-[[[4-(4-氮雜苯并咪唑-2-基)丁?；鵠甘氨?；鵠氨基]-4-戊酸；(S)-2,3,4,5-四氫-7-[[[[1-(2-羥乙基)苯并咪唑-2-基]甲基]氨基]羰基]-4-甲基-3-氧代-1H-1,4-苯并二氫雜_-2-乙酸；(±)-2,3,4,5-四氫-7-[[[(4-氮雜-5-甲基苯并咪唑-2-基)甲基]氨基]羰基]-4-(2-甲氧基乙基)-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸；(S)-2,3,4,5-四氫-7-[[[(4-氨基苯并咪唑-2-基)甲基]甲基氨基]羰基]-4-甲基-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸；(S)-2,3,4,5-四氫-7-[[[(苯并咪唑-2-基)甲基]甲基氨基]羰基]-4-甲基-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸乙酯；(S)-2,3,4,5-四氫-7-[[[(苯并咪唑-2-基)甲基]甲基氨基]羰基]-4-甲基-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸[(2,2-二甲基-2-甲氧基乙?；?氧基]甲酯；2,3,4,5-四氫-7-[[[((1R)-(苯并咪唑-2-基)乙基]甲基氨基]羰基]-4-甲基-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜_-(2S)-乙酸；(±)-N-[2-(氨基甲基)-4-[[[(4-氮雜-5-甲基苯并咪唑-2-基)甲基]甲基氨基]羰基]苯基]天冬氨酸；(±)-2,3,4,5-四氫-4-甲基-3-氧代-7-[[[(菲并咪唑-2-基)甲基]氨基]羰基]-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸；(±)-2,3,4,5-四氫-7-[3-(苯并咪唑-2-基)苯基]-4-甲基-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸；(±)-4-[4-[[[(苯并咪唑-2-基)甲基]甲基氨基]羰基]苯基]-3-(二甲基氨基羰基)丁酸；
(S)-2,3,4,5-四氫-7-[[[(苯并咪唑-2-基)甲基]氨基]羰基]-3-氧代-4-[2-(吡啶-3-基)乙基]-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸酯；(S)-2,3,4,5-四氫-7-[[[(4-氮雜-5-甲基苯并咪唑-2-基)甲基]甲基氨基]羰基]-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸；(±)-2,3,4,5-四氫-7-[[N-[(苯并咪唑-2-基)甲基]-N-[[4-(2-羧基苯甲?；?氨基]丁基]氨基]羰基]-3-氧代-4-(2-苯基乙基)-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸；(±)-2,3,4,5-四氫-7-[[N-[(苯并咪唑-2-基)甲基]-N-[[4-(4-疊氮基-2-羥基苯甲酰基)氨基]丁基]氨基]羰基]-3-氧代-4-(2-苯基乙基)-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸；(S)-2,3,4,5-四氫-7-[[[(4-氮雜-5-甲基苯并咪唑-2-基)甲基]氨基]羰基]-4-甲基-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸乙酯；2,3,4,5-四氫-7-[[N-[(苯并咪唑-2-基)甲基]-N-[[[(±)生物素?；鵠氨基]丁基]氨基]羰基]-3-氧代-4-(2-苯基乙基)-1H-1,4-苯并二氮雜_-(2RS)-乙酸；2,3,4,5-四氫-7-[[[(1S)-(苯并咪唑-2-基)乙基]甲基氨基]羰基]-4-甲基-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜_-(2S)-乙酸；(S)-2,3,4,5-四氫-7-[[[(咪唑并(1,2a)吡啶-2-基)甲基]甲基氨基]羰基]-4-甲基-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸；(S)-2,3,4,5-四氫-7-[[[(苯并咪唑-2-基)甲基]氨基]羰基]-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸；(±)-5-[[2,3,4,5-四氫-7-[[[(苯并咪唑-2-基)甲基]氨基]羰基]-3-氧代-4-(2-苯基乙基)-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-基]甲基]四唑；(S)-2,3,4,5-四氫-7-[[[(4-氮雜-5-甲基苯并咪唑-2-基)甲基]氨基]羰基]-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸；(±)-2,3,4,5-四氫-7-[3-(苯并咪唑-2-基)丙基]-4-甲基-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸；(±)-2,3,4,5-四氫-7-[[N-[(苯并咪唑-2-基)甲基]-N-(4-氨基丁基)氨
(±)-2,3,4,5-四氫-7-[[[(苯并咪唑-2-基)甲基]氨基]羰基]-4-甲基-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-(N-羥基)乙酰胺；(±)-3-[[[2-(苯并咪唑-2-基)乙基]氨基]琥珀?；鵠氨基-4-戊酸乙酯；(±)-3-[[[2-(苯并咪唑-2-基)乙基]氨基]琥珀?；鵠氨基-4-戊酸；(±)-2,3,4,5-四氫-7-[[N-[(苯并咪唑-2-基)甲基]-N-[[4-(4-疊氮基-3-碘-2-羥基苯甲?；?氨基]丁基]氨基]羰基]-3-氧代-4-(2-苯基乙基)-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸；2,3,4,5-四氫-7-[[[(1S)-(苯并咪唑-2-基)乙基]氨基]羰基]-4-甲基-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜_-(2S)-乙酸；2,3,4,5-四氫-7-[[[(1 R)-(苯并咪唑-2-基)乙基]氨基]羰基]-4-甲基-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜_-(2S)-乙酸；和(±)-7-[[[(4,5-二甲基-1H-咪唑-2-基)甲基]甲基氨基]羰基]-2,3,4,5-四氫-4-甲基-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸。
最優(yōu)選的纖維蛋白原受體拮抗劑模板為亞式(Ⅵa)，其中CR2R2為CHCH2CO2H,CR3R3’為C=O和CR5R5’為CH2。當A-W-取代基連接于3-氧代-2,3,4,5-四氫-1H-1,4-苯并二氮雜_環(huán)系統(tǒng)的7-位時，纖維蛋白原受體拮抗作用特別顯著。
除特別指明外，在下式中對于取代基的定義與式(Ⅰ)-(Ⅴ)和(ⅩⅩ)-(ⅩⅪ)中相同。
優(yōu)選的纖維蛋白原受體模板A的另一個實施方案是由亞式(Ⅶ)的1,4-苯并二氮雜_2,5-二酮為代表
其中Y為H、C1-4烷基、C1-4烷氧基、C1-4烷氧基羰基、F、Cl、Br、I、CF3、ORf、S(O)kRf、CORf、NO2、N(Rf)2、CO(NRf)2、CH2N(Rf)2、亞甲二氧基、CN、CO2Rf、OC(O)Rf、或NHC(O)Rf；和Rh為(CH2)qCO2Rf。
Bondinell等(WO93/00095,1993年1月7日公開)和Blackburn等(WO93/08174,1993年4月29日公開)詳細敘述在制備該亞式的纖維蛋白原受體拮抗劑時該亞結(jié)構(gòu)的制備和應用。
下面表Ⅰ總結(jié)了本發(fā)明范圍包括的其他優(yōu)選的纖維蛋白原受體模板。這些模板為表1Ⅷ)
或
其中R21和R22獨立為H、-Z-CO2Rf或Z-CON(Rf)2，前提為A1或A2之一為-Z-CO2Rf或Z-CON(Rf)2；Z為-CH2-、-O(CH2)q-、-NRf(CH2)q-、-S(CH2)q、-CH2CH2-、-CH(CH3)CH2-、-(CH2)3-、-CH=CH-、-C(CH3)=CH-、CH2-CH=CH-或CH=CHCH2；Y為H、C1-4烷基、C1-4烷氧基、C1-4烷氧基羰基、F、Cl、Br、I、CF3、ORf、S(O)kRf、CORf、NO2、N(Rf)2、CO(NRf)2、CH2N(Rf)2、亞甲二氧基或Z-CORf,在Alig等的EP0381033(1990年8月8日公開)。(Ⅸ)
其中R6為芳基、C1-10烷基、C3-6環(huán)烷基、C4-10芳烷基、C1-10烷氧基烷基、C1-10烷芳基、C1-10烷基硫代烷基、C1-10烷氧基硫代烷基、C1- 10烷基氨基、C4-10芳烷基氨基、C1-10鏈烷?；被4-10芳烷?；被?、C1-10鏈烷酰基、C4-10芳烷酰基或C1-10羧基烷基；和Y為H、C1-4烷基、C1-4烷氧基、C1-4烷氧基羰基、F、Cl、Br、I、CF3、ORf、S(O)kRf、CORf、NO2、N(Rf)2、CO(NRf)2、CH2N(Rf)2、亞甲二氧基、CN、CO2Rf、OC(O)Rf或NHC(O)Rf,在Egbertson等，EP 0478328,1992年4月1日公開。(Ⅹ)
其中M1為CH或N；M2為CH或N，前提為當M1為CH時，M2為N；和G’為N或N_R”，在Eldred等，EP0542363，1993年5月19日公開。(Ⅺ)
其中M1為CH或N；和M2為CH或N，前提為當M1為CH時，M2為N，在Porter等，EP0537980,1993年4月21日公開。(Ⅻ)
其中M1為CH或N；Y為H、C1-4烷基、C1-4烷氧基、C1-4烷氧基羰基、F、Cl、Br、I、CF3、ORf、S(O)kRf、CORf、NO2、N(Rf)2、CO(NRf)2、CH2N(Rf)2、亞甲二氧基、CN、CO2Rf、OC(O)Rf或NHC(O)Rf；
D3為CH2或C=O；和Rh為(CH2)qCO2Rf,在Klinnick等，EP 0635492,1995年1月25日公開。(ⅩⅢ)
其中Y為H、C1-4烷基、C1-4烷氧基、C1-4烷氧基羰基、F、Cl、Br、I、CF3、ORf、S(O)kRf、CORf、NO2、N(Rf)2、CO(NRf)2、CH2N(Rf)2、亞甲二氧基、CN、CO2Rf、OC(O)Rf或NHC(O)Rf；Rh為(CH2)nCO2Rf，和
或
在Blackburn等，WO95/04057,1995年2月9日公開。(ⅩⅣ)
其中L*是-C(O)NRg-(CH2)-,-C(O)-(CH2)q-,NRg-(CH2)q-,-O-(CH2)q-，或S(O)k-(CH2)q-,在Hartman等，EP 0540331,1993年5月5日公開。(ⅩⅤ)
在Sugihara等,EP 0529858,1993年3月3日公開。(ⅩⅥ)
其中Y為H、C1-4烷基、C1-4烷氧基、C1-4烷氧基羰基、F、Cl、Br、I、CF3、ORf、S(O)kRf、CORf、NO2、N(Rf)2、CO(RNf)2、CH2N(Rf)2、亞甲二氧基、CN、CO2Rf、OC(O)Rf或NHC(O)Rf,在Himmeisbach等，EP 0483667,1992年5月6日公開。(ⅩⅦ)
在Linz等，EP 0567968,1993年11月3日公開。(ⅩⅧ)
其中Rd為Het-C0-6烷基；和Z”、Z”’獨立為氫、C1-4烷基、鹵素、ORf、CN、S(O)kRf、CORf或OH,在Bovy等，EP 0539343,1993年4月28日公開。
在實施例中對含有特異纖維蛋白原模板的本發(fā)明的化合物命名。這些實施例是用于說明本發(fā)明，而不限制本發(fā)明的范圍。
上述對用于本發(fā)明的纖維蛋白原受體模板的描述得自共同未決的公開專利申請。應該參考這些專利申請的完全的公開，包括制備所述模板和用所述模板制備特異的化合物的方法，在此引入這些專利申請的完全的公開作參考。
下面表Ⅱ描述其他的纖維蛋白原受體拮抗劑，其核心結(jié)構(gòu)用于實施本發(fā)明。應該參考完全公開的專利申請和它們的其他發(fā)表物，包括制備所述模板的方法和用所述模板制備特異化合物的方法，在此引入所注的專利申請和其他發(fā)表物作參考。因為認為連接于可任選稠合的含氮5元環(huán)上的任何的纖維蛋白原受體拮抗劑具有新的在此所述的可利用性，因此下列表不限制本發(fā)明的范圍。
表ⅡAdir et CompagnieFR 928004,June 30,1992,Fauchere,J.L.,et.al.EP 0578535.June 29,1993,Fauchere,J-L,描述X-RGDW-OH類似物，其中X含有陽離子胺。CA 2128560,Jan.24,1995,Godfroid,J-J,取代的哌嗪。Asahi Breweries,Ltd.JP 05239030,Sep.17,1993,氨基甲基四氫異喹啉。Asahi GlassWO 90/02751,Ohba,M.et al.Sept.8,1989描述含有RGD的環(huán)多肽。WO 90/115950,Mar.22,1990,Ohba,M.,et al.EP 0406428,1/9/91描述含有RGD的環(huán)多肽。WO 92/09627,Isoai,A.et al.Nov.29,1991描述含有RGD的環(huán)多肽。Cassella AGDE 4207254,(Der 93-289298/37)Mar.7,1992,Zoller,G.,et al.描述胍基丙基-4-氧代-2-硫代咪唑烷-3-基-Asp-X類似物EP 93904010,Feb.24,1993,Zoller,G.,4-氧代-2-硫代咪唑烷衍生物。EP 0565896,Mar.18,1993,Klinger,O,et al.描述胍基乙基苯氧基乙酰基-Asp-X類似物EP 0566919,(Der 93-338002/43)Apr.3,1993,Zoller,G.,et al.描述胍基丙基-4-氧代-2-硫代咪唑烷-3-基-Asp-X-類似物。EP 580008,(Der 94-027663/04)July 6,1993,Zoller,G.,et al.描述5-m-胍基苯基-2,4-二氧代咪唑烷-3-基)乙酰基-Asp-Phg。DE 224414,July 6,1993,Zoller,G.,et al.描述5-m-胍基苯基-2,4-二氧代咪唑烷-3-基)乙酰基-Asp-Phg。EP 584694,(Der 94-067259/09)Apr.2,1994,Zoller,G.,et al.描述5-m-胍基苯基-2,4-二氧代咪唑烷-3-基)乙酰基-Asp-Phg。DE 4301747,(Der 94-235891/29)Jul.28,1994,Zoller,G.,et al.描述5-m-胍基苯基-2,4-二氧代咪唑烷-3-基)乙酰基-Asp-Phg類似物。DE 4308034,(Der 94-286666/36)Sept.15,1994,Klinger,O.et al.描述5-m-胍基苯基-2,4-二氧代咪唑烷-3-基)乙酰基-Asp-Phg類似物。DE 4309867,Sept.29,1994,Klingler,O,et al.描述5-m-胍基苯基-2,4-二氧代咪唑烷-3-基)乙?；?Asp-Phg。ChironWO 93/07169,(Der 93-134382/16),Mar.15,1993,Deviin,J.J.,et al.描述RGD的多肽。Ciba GeigyEP 0452210,(Der 91-305246/42)Apr,5,1990,描述氨基鏈烷?；?GDF類似物。EP 0452257,Mar.26,1991,Allen,M.C.,et al.描述氨基鏈烷?；鵄sp-Phe類似物。COR TherapeuticsWO 90/15620,June 15,1990描述含有RGD的環(huán)多肽。EP 0477295,Apr.1,1992Scarborough,R.M.et al.WO 92/08472,May 29,1992,Scarborough,R.M.et al.WO 93/223356,April 27,1993,Swift,R.L.,et al.描述含有RGD的環(huán)多肽。EP 0557442,Sept.1,1993,Scarborough,R.M.,et al.Scarborough,R.M.；Rose,J.W.；Hsu,M.A.；Phillips,D.R.；Fried,V.A.；Campbell,A.M.；Nunnizzi,L.；Charo,I.F.,Barbourin,得自SistrurusM.Barbouri蛇毒的GPⅡb-Ⅲa特異性內(nèi)源拮抗劑。
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.J.Amer.Chem.Soc.,116,3220,1994.Ellem Ind Farma SpaGB 2207922,Aug,3,1988,描述線性RGD類似物。Farmitalia Erba SRL CarloEP 611765(Der 94-265375/33),Aug 24,1994Cozzi,P.,et al.描述5-(2-吡嗪基甲基-2-咪唑-1-基)-1-環(huán)己基亞乙基)氨基氧基戊酸。Fuji Photo FilmJP 04208296-A(Der.92-303598/38),Nov.30,1990,描述RGD肽。JP 04213311-A(Der.92-305482/38),Nov.27,1990,描述多中心(multimeric)RGD肽。JP 04217693-A,(Der 92-312284/38),Oct.23,1990，描述多中心RGD肽。JP 04221394-A(Der.92-313678/38),Oct.26,1990，描述多中心RGD肽。JP 04221395-A(Der.92-313679/38),Oct.26,1990，描述多中心RGD肽。JP 04221396-A(Der.92-313680/38),Oct.26,1990，描述多中心RGD肽。JP 04221397-A(Der.92-313681/38),Dec.20,1990，描述多中心RGD肽。EP 0482649 A2,April 29,1992,Kojima,M.et al.描述RGD肽。EP 0488258A2,June 3,1992,Komazawa,H.,et al描述RGD肽。EP 503301-A2,Feb.14,1991,Kitaguchi,H.et al.描述RGD肽。JP 05222092,May 21,1993,Nishikawa,N.,et al.描述線性X-RGDS。JP 06239885,(Der 94-313705/39),Aug 30,1993,Nishikawa,N.et al.描述多中心RGD肽。WO 9324448,(Der 93-405663/50),Dec.9,1993,Nishikawa,N.,et al.描述多中心反-逆RGD肽。JP 06228189,(Der 94-299801/37),Aug.16,1994.描述RGD肽。EP 619118,(Der 94-311647/39),Oct.12,1994,Nishikawa,N.et al.描述線性RGD肽。FujisawaEP 0513675,May 8,1992,N.Umekita,et al.描述脒基苯氧基鏈烷?；?Asp-Val-OH類似物．WO 9409030-A1,Apr.28,1994,Takasugi,H.,et al.描述脒基苯氧基丁?；?Asp-Val-OH類似物。EP 0513675,(Der 92-383589/47)描述脒基苯氧基丁?；?Asp-Val類似物。WO 9500502,Jan,5,1995,Oku,T.,et al.,描述“氨基哌嗪衍生物”。FR 144633Thromb Haem.69,706,1993.Cox,D.；Aoki,T.；Seki,J.；Motoyama,Y.；Yoshida,K.,Pentamidine特異性非肽GPⅡb/Ⅲa拮抗劑,Thromb.Haem.,69,707,1993.GenentechWO 90/15072(Der 91007159)描述含有RGD肽。WO 91/01331(Der 91058116),July 5,1990,P.L.Barker,et al.描述含有RGD的環(huán)肽。WO 91/04247,Sept.24,1990,T.R.Webb描述(胍基烷基)Pro-GD類似物。WO 91/11458(Der 91252610),Jan.28,1991,P.L.Barker,et al.描述含有RGD的環(huán)肽。WO 92/07870,Oct.24,1991 J.P.Bumier,et al.描述含有RGD的環(huán)肽。WO 92/17492,Oct.15,1992,Burnier,J.P.et al.描述含有RGD的環(huán)肽。CA 2106314,Oct.6,1992,Burnier,J.P.et al.WO 93/08174,Oct.15,1991,B.K.Blackbum,et al.描述2,5-二氧代-1,4-苯并二氮雜_。CA 2106314,Oct.6,1992,Burnier,J.P.,et al.EP 0555328,Aug.18,1993,J.P.Burnier,et al.WO 95/04057,Feb.9,1995,Blackburn,B.K.,et al.描述在1,2位含有雜環(huán)的1,4-苯并二氮雜_。Scarborough,R.M.,Naughton,M.A.,Teng,W.,Rose,J.W.,Phillips,D.R.,
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在經(jīng)口給予狗后的鑒定。,Thromb.
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描述吡啶并丙?；禄郊柞；愃莆?。EO 632019,Jan.4,1995,Brown,G.,Shute,R.E.EO 632020,Jan.4,1995,Brown,G.,Shute,R.E.
除特別指明外,當本發(fā)明的化合物具有一個或多個手性中心時，本發(fā)明包括每一個非外消旋的化合物，這些化合物可以用常規(guī)技術(shù)合成和拆分。當化合物具有不飽和碳碳雙鍵時，順式(Z)和反式(E)異構(gòu)體都屬于本發(fā)明的范圍。在任一情況下任何取代基的意義不依賴于其本身的意義，或在另一情況下任何取代基的意義。
在此用在肽和化學領(lǐng)域通常使用的縮寫和符號描述本發(fā)明的化合物。一般而言，氨基酸縮寫遵循Eur.J.Biochem,158,9(1984)所述的IUPAC-IUB Joint Commission on Biochemical Nomenclature。
此處所用C1-4烷基指1-4個碳原子的任選取代的烷基基團，包括甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基和叔丁基。C1-6烷基另外包括戊基、正戊基、異戊基、新戊基和己基以及其簡單的脂肪族的異構(gòu)物。C0-4烷基和C0-6烷基另外表明無烷基存在(例如存在共價鍵)。
任何的C1-4烷基或C1-6烷基、C2-6鏈烯基、C2-6炔基或C1-6氧代烷基可任選被Rx取代，所述取代基可以在產(chǎn)生穩(wěn)定結(jié)構(gòu)的任何的碳原子上并可以由常規(guī)的合成技術(shù)獲得。Rx適合的基團包括C1-4烷基、OR’、SR’、C1-4烷基、C1-4烷基磺?；?、C1-4烷基次硫酸基、-CN、N(R’)2、CH2(R’)2、-NO2、-CF3、-CO2R’、-CON(R’)2、-COR’-NR’C(O)R’、OH、F、Cl、Br、I、N3或CF3S(O)r-，其中r為0-2。
此處所用Ar或芳基指苯基，或萘基或被一至三個選自下列取代基取代的苯基或萘基例如如上烷基所定義的C1-4烷基、C1-4烷氧基、C1-4烷硫基、三氟代烷基、N3、OH、CO2H、F、Cl、Br或I。
Het或雜環(huán)指可任選取代的5或6元單環(huán)的環(huán)，含有一至三個選自氮、氧和硫的雜原子的9或10元雙環(huán)，所述環(huán)是穩(wěn)定的并可以由常規(guī)的化學合成獲得。雜環(huán)的實例包括苯并呋喃、苯并咪唑、苯并吡喃、苯并噻吩、生物素、呋喃、咪唑、二氫吲哚、嗎啉、哌啶、哌嗪、吡咯、吡咯烷、吡啶、四氫吡啶、吡啶、噻唑。噻吩。喹啉。異喹啉和四氫及全氫化喹啉和異喹啉。在Het環(huán)上任何的可行的多至三個取代基的組合，例如上述烷基所定義的可以由化學合成得到的并且穩(wěn)定的取代基都屬于本發(fā)明的范圍。
C3-7環(huán)烷基指可任選取代的3-7個碳原子的碳環(huán)系統(tǒng)，它可以含有多至兩個不飽和碳碳鍵。C3-7環(huán)烷基的典型的實例為環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基、環(huán)戊烯基、環(huán)己基、環(huán)己烯基和環(huán)庚基。在環(huán)烷基環(huán)上可以由常規(guī)的化學合成得到的并且穩(wěn)定的任何多至三個取代基的組合，例如上述烷基所定義的都屬于本發(fā)明的范圍。
當Rb和Rc結(jié)合形成5或6元芳香或非芳香碳環(huán)或與Rb和Rc連接的環(huán)稠合的雜環(huán)時，形成的環(huán)一般為選自上述Het所列的5或6元雜環(huán)或為苯基、環(huán)己基或環(huán)戊基環(huán)。優(yōu)選Rb和Rc為-D1=D2-D3=D4，其中D1-D4獨立為CH、N或C-Rx，前提為D1-D4中不超過兩個為N。最優(yōu)選，當Rb和Rc結(jié)合時，它們形成-CH=CH-CH=CH-。
部分基團縮寫如下。t-Bu指叔丁基基團，Boc指叔丁氧基羰基基團，F(xiàn)moc指芴基甲氧基羰基基團，Ph指苯基基團，Cbz指芐氧基羰基基團，BrZ指鄰溴代芐氧基羰基基團，CIZ指鄰氯代芐氧基羰基基團，Bzl指芐基基團，4-MBzl指4-甲基芐基基團，Me指甲基，Et指乙基，Ac指乙酰基，Alk指C1-4烷基，Nph指1-或2-萘基和chex指環(huán)己基。Tet指5-四唑基。
部分試劑縮寫如下。DCC指二環(huán)己基碳二亞胺，DMAP指二甲基氨基吡啶，DIEA指二異丙基乙胺，EDC指1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽。HOBt指1-羥基苯并三唑，THF指四氫呋喃，DIEA指二異丙基乙胺，DME指二甲氧基乙烷，DMF指二甲基甲酰胺，NBS指N-溴代琥珀酰亞胺，Pd/C指鈀炭催化劑，PPA指1-丙烷膦酸環(huán)酸酐，DPPA指二苯基磷?；B氮化物，BOP指苯并三唑-1-基氧基-三(二甲基-氨基)六氟磷酸磷鎓，HF指氫氟酸，TEA指三乙胺，TFA指三氟乙酸，PCC指氯代鉻酸吡啶鎓。
制備式(Ⅰ)-(Ⅴ)化合物，例如通過用本領(lǐng)域中一般所知的方法使式(ⅩⅨ)化合物與式(ⅩⅩ)化合物反應，其中L1和L2是可以反應在W部分形成共價鍵的基團。
典型的方法包括偶合形成酰胺鍵，親核置換反應和鈀催化的偶合。例如，當W含有醚或胺連接時，可以通過置換反應形成鍵，L1和L2之一含有氨基或羥基而另一個含有置換基團，例如氯、溴或碘基團。當W含有酰胺鍵時，一般L1和L2之一含有氨基基團，另一個含有羧酸基團。另一方面，L1可以為芳基或雜芳基溴化物、碘化物或三氟甲基磺酰基氧基衍生物，L2可以含有氨基基團，可以在適當?shù)娜軇├缍谆柞０坊蚣妆街型ㄟ^鈀催化氨基羰基化和一氧化碳形成酰胺鍵。
很明顯L1和L2準確的身份取決于鍵形成的位置。描述了制備鍵-(CHR”)r-U-(CHR”)s-V-的一般方法，例如在EP-A0372486和EP-A0381033及EP-A0478363中，在此引入作參考。
例如，如果V為CONH,L1可以為-NH2,L2可以為OH(如在酸中)或Cl(如在酰氯中)，且R6”可以為W-(CR’2)q-Z-(CR’R10)r-U-(CR’2)s-C(O)，任何的功能基團可任選被保護。例如，R6”可以為(芐氧基羰基-脒基)苯甲酰基-或(Nα-Boc,Nguan-Tos)精氨?；?。當L2為OH時，使用偶合試劑。
同樣，如果V為NHCO,L1可以為-CO2H或CO-Cl,L2可以為-NH2,R6”可以為W-(CR’2)q-Z-(CR’R10)r-U-(CR’2)s-。例如R6”可以為(芐氧基羰基-脒基)苯基、(芐氧基羰基氨基)甲基芐基-或6-(芐氧基羰基氨基)己基-。
當V為NHSO2時，L1可以為SO2Cl,L2可以為-NH2且R6”可以如上述。當V為SO2NH時，L1可以為-NH2,L2可以為SO2Cl。公開制備該磺?；鹊姆椒ǎ缭贘.Org.Chem.,23,1257(1958)中。
如果V為CH=CH,L1可以為-CHO,L2可以為CH=P-Ph3和R6”可以為W-(CR’2)q-Z-(CR’R10)r-U-(CR’2)s-?；蛘週1可以為CH=P-Ph3,L2可以為CHO，如R6”可以為W-(CR’2)q-Z-(CR’R10)r-U-(CR’2)s-1-CHO。
可以通過還原適當保護的化合物(其中V為CH=CH)獲得V為CH2CH2的化合物。
當V為CH2O、CH2N或C≡C時，L1可以分別為-OH、-NH或-C≡CH；L2可以為-Br；R6”可以為W-(CR’2)q-Z-(CR’R10)r-U-(CR’2)s-。例如R6”可以為(芐氧基羰基氨基)-甲基芐基-或2-(N-芐基-4-哌啶基)-乙基。同樣，當U或V為OCH2、NR’CH2或C≡C時，L1可以為-CH2Br,L2可以分別為-OH、-NH或-C≡CH?；蛘?，當U或V為C≡C時，L1可以為Br、I、CF3SO3,L2可以為C≡CH并且可以用鈀和堿催化偶合。
可以通過J.Org.Chem,54,1354(1989)公開的方法由適當保護的其中V為CH=CH化合物制備其中V=CH2CHOH化合物，。
可以通過Tet.Lett,31,231(1990)公開的方法由適當保護的化合物(其中V為CH=CH)制備其中V=CHOHCH2化合物。
通過本領(lǐng)域熟知的方法，例如Hynes等(J.Het.Chem,1988,25,1173)Muller等(Helv.Chin.Acta,1982,65,2118)；Mori等(Heterocycles,1981,16,1491)制備式(Ⅵ)化合物的核心的6-7稠合的環(huán)系統(tǒng)。同樣，已知并公開，例如在Bondinell等(國際專利申請WO93/00095)中，苯丙氮雜_1,4-苯并硫氮雜_、1,4-苯并氧氮雜_和1,4-苯并二氮雜_的制備方法。
下列流程詳細說明本發(fā)明化合物的制備。
流程Ⅰ
a)EtOAc/LiN(TMS)2,THF；b)Et3SiH,BF3·OEt2,CH2Cl2；c)H2,10％Pd/C,EtOH；d)EtSH,AlCl3,CH2Cl2；e)Tf2O,2,6-二甲基吡啶，CH2Cl2；f)CO,KOAc,Pd(OAc)2,dppf,DMSO；g)2-(甲基氨基甲基)苯并咪唑二鹽酸鹽,EDC,HOBt·H2O,(i-Pr)2NEt,CH3CN；h)1.0N NaOH,EtOH.
使適當取代的脫氧安息香,例如2-(4-甲氧基苯基)-1-苯基乙酮(Chem.Ber,1958,91,755-759)與乙酸乙酯的烯醇化物(可以使乙酸乙酯暴露于適當?shù)孽０穳A,例如二異丙基氨化鋰(LDA)或雙(三甲基硅烷)氨化鋰(LiN(TMS)2)進行醛醇型縮合反應得到Ⅰ-2。經(jīng)常選擇THF作為醛醇縮合反應的溶劑，盡管在各種其他物質(zhì)例如HMPA或TMEDA存在下也使用THF。Ⅰ-2與三乙基硅烷(Et3SiH)在三氟化硼醚化物(BF3.OEt2)存在下根據(jù)Orphanopoulos和Smonu(Synth.Commun.1988,833)的一般方法進行叔芐醇的還原反應得到Ⅰ-3和由醇的β-消除衍生的烯的產(chǎn)物?？梢杂免Z催化劑，例如活性炭上的鈀金屬(Pd/C)在適當?shù)亩栊匀軇├缂状?、乙醇或乙酸乙酯中，氫化將烯的產(chǎn)物方便地轉(zhuǎn)化為Ⅰ-3?？梢栽贚ewis酸催化劑，優(yōu)選無水三氯化鋁(AlCl3)存在下，在惰性溶劑例如二氯甲烷中通過與硫醇(EtSH)的反應去除Ⅰ-3的甲基醚得到Ⅰ-4。其他去除甲基醚的方法公開在Greene“Protective Groupsin Organic Synthesis”(Wiley-Interscience出版)。在適當?shù)姆怯H核胺堿例如2,6-二甲基吡啶存在下，在惰性溶劑通常為二氯甲烷中通過與三氟甲磺酸酸酐(Tf2O)反應將醇Ⅰ-4轉(zhuǎn)化為它的三氟甲磺酸酯Ⅰ-5。在乙酸鉀、1,1’-雙(二苯基膦)二茂鐵(dppf)和鈀催化劑，例如乙酸鈀(Pd(OAc)2)存在下，在適當?shù)娜軇?，?yōu)選DMSO中，根據(jù)Cacchi和Lupi(Tet.Lett.1992,33,3939)中的方法使Ⅰ-5與一氧化碳(CO)反應進行三氟甲磺酸芳酯的羧基化。用例如EDC和HOBT或SOCl2，將產(chǎn)生的苯甲酸的衍生物Ⅰ-6轉(zhuǎn)化為羧酸的活化的形式，隨后使其活化形式與適當?shù)陌?，例?-(甲基氨基甲基)甲基苯并咪唑二鹽酸鹽，在適當?shù)娜軇├鏒MF、CH2Cl2或CH3CN中反應得到Ⅰ-7。取決于是否需要中和酸，可以加入堿例如二異丙基乙胺((i-Pr)2NEt)或吡啶。已知多種另外的可以將羧酸轉(zhuǎn)化為酰胺的方法，可以在標準的參考書，例如“ Compendium of Organic Synthetic Methods”第Ⅰ-Ⅵ卷(由Wiley-Intersciene出版)或Bodansky“The Practice of Peptide Synthesis”(由Springer-Verlag出版)中發(fā)現(xiàn)。用堿水溶液，例如氫氧化鋰在THF水溶液或氫氧化鈉在甲醇或乙醇水溶液中使Ⅰ-7的乙酯水解，用適當?shù)乃崂鏣FA或鹽酸酸化中間體羧酸鹽得到羧酸Ⅰ-8?；蛘?，如果需要可以分離中間體羧酸鹽或者通過本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的方法制備游離羧酸的羧酸鹽。
流程Ⅱ
a)異丁烯，TfOH,CH2Cl2；b)丙烯酸甲酯,Pd(OAc)2,P(tol)3,(i-Pr)2NEt,丙腈e；c)H2,10％Pd/C,MeOH,EtOAc；d)1.0N LiOH,THF,H2O；e)二甲基胺鹽酸鹽，EDC,HOBt·H2O,(i-Pr)2NEt,CH3CN；f)LiN(TMS)2,THF，然后BrCH2CO2Et；g)TFA,CHCl2；h)2-(甲基氨基甲基)苯并咪唑二鹽酸鹽EDC,HOBt·H2O,(i-Pr)2NEt,CH3CN；i)1.0N LiOH,THF,H2O.
通過與異丁烯在催化量的酸，例如三氟甲磺酸(TfOH)或硫酸存在下，在惰性溶劑，一般為二氯甲烷或乙醚中將商業(yè)可以得到的4-溴代苯甲酸(Ⅱ-1)轉(zhuǎn)化為叔丁酯(Ⅱ-2)。另外的形成叔丁酯的方法在Greene“Protective Groups in Organic Synthesis”(Wiley-Interscience出版)中描述?？梢允褂闷渌孽ィ灰芘c其后的化學處理相容并當需要時可以選擇性地除去。Ⅱ-2和丙烯酸甲酯間進行Heck-型反應得到Ⅱ-3。Heck反應的一般條件由Heck(Org.Reaction 1982,27,345)進行綜述。例如Ⅱ-2與丙烯酸甲酯在乙酸鈀(Ⅱ)(Pd(OAc)2)和三鄰甲苯基膦(P(tol)3)存在下，在惰性溶劑例如乙腈、丙腈或甲苯中，在適當?shù)乃崆宄齽├缍惐野?(iPr)2NEt)存在下反應得到Ⅱ-3。Ⅱ-3的α,β-不飽和酯的還原得到飽和的化合物Ⅱ-4，此反應在標準的氫化條件下發(fā)生，例如在適當?shù)拇呋瘎﹥?yōu)選活性炭上的鈀金屬(Pd/C)存在下，在惰性溶劑，通常為甲醇、乙醇、乙酸乙酯或其混合物中與氫氣反應。用堿水溶液，例如氫氧化鋰在THF水溶液或氫氧化鈉在甲醇或乙醇水溶液中使Ⅱ-4的甲酯水解，用適當?shù)乃崂鏣FA或鹽酸酸化中間體羧酸鹽得到羧酸Ⅱ-5。用例如EDC和HOBt或SOCl2將其轉(zhuǎn)化為羧酸的活化的形式，隨后使其活化形式與適當?shù)陌?，例如二甲胺鹽酸鹽，在適當?shù)娜軇├鏒MF、CH2Cl2或CH3CN中反應得到Ⅱ-6。取決于是否需要中和酸，可以加入堿例如二異丙基乙胺((i-Pr)2NEt)或吡啶。已知多種另外的可以將羧酸轉(zhuǎn)化為酰胺的方法，可以在標準的參考書，例如“Compendium of Organic Synthetic Methods”第Ⅰ-Ⅵ卷(由Wiley-Interscinence出版)或Bondansky“The Practice of PeptideSynthesis”(Syringer-Verlag出版)中發(fā)現(xiàn)。Ⅱ-6與酰胺堿例如雙(三甲基甲硅烷基)氨化鋰(LiN(TMS)2)、雙(三甲基甲硅烷基)氨化鈉(NaN(TMS)2)、雙(三甲基甲硅烷基)氨化鉀(KN(TMS)2)、或二異丙基氨化鋰(LDA)在惰性溶劑，通常為THF或乙二醇二甲醚(DMF)反應得到中間體酰胺烯醇化物。一般不將其分離，而是使其在位與親電子試劑，例如溴代乙酸乙酯反應得到烷基化的產(chǎn)物Ⅱ-7。本領(lǐng)域的技術(shù)人員熟知各種另外的輔助物質(zhì)，例如HMPA。四甲基亞乙基二胺(TMEDA)或1,3-二甲基-3,4,5,6-四氫-2(1H)-嘧啶二酮(DMPU)可以用于提高烷基化反應的效能)。在惰性溶劑中通常為二氯甲烷、1,4-二氧六環(huán)或其混合物，在酸性條件下，通常與TFA或HCl反應去除Ⅱ-7的叔丁酯基團得到酸Ⅱ-8。其他用于去除叔丁酯的方法公開在Greene“ProtectiveGroups in Organic Synthesis”(Wiley-Interscience出版)。在流程Ⅰ所述的將Ⅰ-6轉(zhuǎn)化為Ⅰ-7和將Ⅰ-7轉(zhuǎn)化為Ⅰ-8的通常的條件下分別將Ⅱ-8轉(zhuǎn)化為Ⅱ-9和將Ⅱ-9轉(zhuǎn)化為Ⅱ-10。
流程Ⅲ
a)3-甲酯基丙酰氯，(i-Pr)2NEt,CH2Cl2；b)1.0N NaOH,MeOH；c)3-氨基-4-戊炔酸乙酯，EDC,HOBt·H2O,(i-Pr)2NEt,CH3CN,DMF；d)1.0N LiOH,THF,H2O,CH3CN.
在適當?shù)乃崆宄齽├缛野贰⒍惐野坊蜻拎さ拇嬖谙?，在中性溶劑通常為二氯甲烷中使易得?-(2-氨基乙基)苯并咪唑與3-甲酯基丙酰氯反應得到Ⅲ-2。在流程Ⅰ所述的轉(zhuǎn)化Ⅰ-7為Ⅰ-8的通常的條件下水解Ⅲ-2的甲酯可以得到Ⅲ-3。或者在適當?shù)膲A例如三乙胺、二異丙基乙胺或吡啶的存在下，在中性溶劑通常為二氯甲烷中使Ⅲ-1與琥珀酸酐反應直接得到Ⅲ-3。在流程Ⅰ所述將Ⅰ-6轉(zhuǎn)化為Ⅰ-7的通常的條件下通過與已知的3-氨基-4-戊炔酸乙酯(WO93/07867)反應將Ⅲ-3轉(zhuǎn)化為Ⅲ-4。根據(jù)流程Ⅰ所述的將Ⅰ-7轉(zhuǎn)化為Ⅰ-8的通常的條件下完成Ⅲ-4乙酯的水解得到Ⅲ-5。
流程Ⅳ
a)4-(氯代甲?；?丁酸甲酯，Et3N,THF；b)AcOH；c)1.0N NaOH,MeOH；d)Boc-Gly,EDC,HOBt·H2O,(i-Pr)2NEt,CH3CN；e)TFA,CH2Cl2；f)3,EDC,HOBt·H2O,(i-Pr)2NEt,CH3CN；g)1.0 N LiOH,THF,H2O.
通過兩個獨立地制備中間體Ⅳ-3和Ⅳ-6的反應完成Ⅳ-8的合成反應。由商業(yè)可得到的2,3-二氨基吡啶(Ⅳ-1)開始制備中間體Ⅳ-3。根據(jù)此流程，在適當?shù)乃崆宄齽缛野?、二異丙基乙胺或吡啶存在下，在中性溶劑通常為二氯甲烷或THF中用4-(氯代甲酰基)丁炔酸甲酯使Ⅳ-1?；玫街虚g體一?；难苌?。然后使此衍生物環(huán)化，例如用回流的乙酸得到Ⅳ-2。在流程Ⅰ所述的使Ⅰ-7轉(zhuǎn)化為Ⅰ-8的一般的條件下進行Ⅳ-2甲酯的水解得到Ⅳ-3。在前述參考的Bodansky出版物和在流程Ⅰ所述的轉(zhuǎn)化Ⅰ-6為Ⅰ-7的標準的肽鍵形成條件下使已知的3-氨基-4-戊炔酸乙酯(WO93/07867)與商業(yè)可得到的叔丁氧基羰基甘氨酸(Boc-Gly)偶合制備中間體Ⅳ-6。在已知的去除Boc保護基團的酸性條件下將上述反應的產(chǎn)物，Ⅳ-5去保護得到Ⅳ-6。此類反應的條件在先前參考的Bodansky和Greene出版物中描述。在先前所述的標準的肽偶合條件下使兩個中間體Ⅳ-3和Ⅳ-6偶合得到Ⅳ-7，根據(jù)流程Ⅰ所述轉(zhuǎn)化Ⅰ-7為Ⅰ-8的通常的方法將其水解得到Ⅳ-8。
流程Ⅴ
a)(Boc)2O,DMAP,CH3CN；b)氯代甲酸異丁酯，Et3N,TH-F，然后1,2-亞苯基二胺，然后AcOH；c)(n-Bu3Sn)2,(PPh3)2PdCl2,DMF；d)CuI,(PPh3)2PdCl2,DMF；e)4 M HCl/二氧六環(huán)；f)1.0 N NaOH,MeOH.
通過使兩個獨立制備的中間體Ⅴ-2和Ⅴ-5反應完成Ⅴ-7的合成反應?？梢栽邗；呋瘎?，優(yōu)選4-二甲基氨基吡啶(DMAP)或4-吡咯烷并吡啶存在下，在中性溶劑例如CH3CN、THF或CH2Cl2中使易得的Ⅴ-1與碳酸氫二叔丁酯(di-tert-butyl dicarbonate)((Boc)2O)反應方便地制備Ⅴ-2。將商業(yè)可得到的3-碘代苯甲酸(Ⅴ-3)轉(zhuǎn)化為苯并咪唑衍生物Ⅴ-4制備中間體Ⅴ-5。根據(jù)該流程，可以在適當?shù)陌穳A，例如三乙胺、二異丙基乙胺或4-甲基嗎啉存在下，在中性溶劑，通常為二氯甲烷或THF中使Ⅴ-3與氯代甲酸異丁酯反應得到中間體混合酸酐衍生物。不經(jīng)分離，使該衍生物與適當?shù)膩啽交贩磻玫揭?N-酰化的亞苯基二胺中間體。然后用乙酸使該中間體環(huán)化得到Ⅴ-4。在鈀催化反應，例如雙(三苯基膦)氯化鈀(Ⅱ)((PPh3)2PdCl2)存在下，在惰性溶劑通常為DMF中Ⅴ-4與雙(三丁基錫)反應產(chǎn)生Ⅴ-5。Ⅴ-2與Ⅴ-5的Stille-型的偶合反應得到Ⅴ-6是在鈀催化劑例如雙(三苯基膦)氯化鈀(Ⅱ)((PPh3)2PdCl2)參與下，在碘化銅(Ⅰ)(CuI)存在下，在適當?shù)闹行匀軇┩ǔ镈MF中進行的。為獲得Ⅴ-7，用本領(lǐng)域技術(shù)人員所知的方法和Greene出版物所述的方法去除Ⅴ-6的保護基團。因此，在酸性條件下，例如4M HCl二氧六環(huán)溶液或TFA的二氯甲烷溶液，去除Boc保護基團，根據(jù)流程Ⅰ所述將Ⅰ-7轉(zhuǎn)化為Ⅰ-8水解所述甲酯。
流程Ⅵ
a)3-丁炔-1-醇，(PPh3)2PdCl2,PPh3,CuI,Et3N；b)H2,10％Pd/C,EtOH；c)2,2,6,6-四甲基氧代氯化哌啶鎓，CH2Cl2，然后NaClO2,Na2HPO3,2-甲基1-2-丁烯ne,H2O；d)氯代甲酸異丁酯，Et3N,然后1,2-亞苯基二按AcOH；e)1.0N LiOH,THF,H2O；f)TFA,CH2Cl2.
在一種胺溶劑中(如三乙基胺(Et3N))，在催化劑量的鈀鹽[通常用二(三苯基膦)氯化鈀Ⅱ((PPh3)2PdCl2)]和催化劑的碘化銅(Ⅰ)(CuI)存在時，使化合物Ⅵ-1(其制備如流程Ⅴ所述)與3-丁炔-1-醇反應得到Ⅵ-2?？杉尤胍环N膦配體，如三苯基膦(PPh3)，以提高反應的效率。在本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知的標準氫化條件下，完成Ⅵ-2的炔基單位的還原。根據(jù)Wovkulich(J.Org.Chem.1993,58,832-839)所述的兩步方法，將所得化合物Ⅵ-3氧化為相應的羧酸Ⅵ-4。將伯醇氧化成相應的羧酸的許多可選擇的方法已經(jīng)公開，可以在參考卷如“Compendium of Organic Synthetic Methods”(Wiley-Interscience出版)中發(fā)現(xiàn)。根據(jù)上述工藝流程所述方法，可將羧酸Ⅵ-4轉(zhuǎn)化為苯并咪唑衍生物Ⅵ-5。根據(jù)上述流程所述方法，將Ⅵ-5的甲酯除去，并在酸性條件下(如4MHCl于二噁烷中，或TFA于CH2Cl中)除去其Boc保護基團即可得到Ⅵ-6。
流程Ⅶ
a)1,2-亞苯基二胺，DCC,DMF,CH2Cl2；b)AcOH,THF；c)TsCl,NaH,THF；d)O3,CH2Cl2,MeOH，然后DMS；e)NH2OH·HCl,NaOAc,MeOH；f)NCS,DMF；g)3-丁烯酸叔丁酯，Et3N；h)4M HCl二氧六環(huán)，CH2Cl2；i)3-氨基丁酸乙酯，EDC,HOBt·H2O,(i-Pr)3NEt,CH3CN；j)1.0N LiOH,THF,H2O.
采用前述一般工藝流程，將可得自商業(yè)的4-戊烯酸(Ⅶ-1)轉(zhuǎn)化為苯并咪唑衍生物Ⅶ-2。在惰性溶劑中(優(yōu)選THF)，在一種適當?shù)膲A存在時(通常為氫化鈉或堿金屬氫氧化物水溶液)，通過與一種磺酰氯(如對-甲苯磺酰氯)反應，可以完成Ⅶ-2中苯并咪唑部分的氮原子之一的保護，得到Ⅶ-3。可以使用本領(lǐng)域中技術(shù)人員所熟知的可選擇的保護基團，只要它們與以后的化學處理相容，并且在需要時可以除去即可。這樣的保護基團如Greene的“Protective Groups和Organic Synthesis”(Wiley-Interscience出版)所述。通過惰性溶劑(通常為CH2Cl2或為CH2Cl2和MeOH的混合物)中的臭氧分解反應，然后用一種適當?shù)倪€原劑(一般為甲基硫醚(DMS)或三苯基膦)將臭氧化物在位還原，可以很容易地完成Ⅶ-3烯烴的氧化裂解以獲得醛Ⅶ-4?？梢允褂醚趸呀獾目蛇x擇的方法，如Lemieux-Johnson反應(J.Org.Chem.1956,21,478)。根據(jù)本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的標準流程，可將上述醛轉(zhuǎn)化為醛肟Ⅶ-5，根據(jù)WO 95/14682和WO 95/14683所述方法，可將該醛肟氧化為肟酰氯衍生物Ⅶ-6。根據(jù)WO 95/14682和WO 95/14683所述方法，在一種惰性溶劑如苯或甲苯中，在一種適當?shù)膲A如三乙胺或二異丙基乙胺存在時，使Ⅶ-6與一種烯烴如3-丁烯酸叔丁酯(Tet.Lett.1985,26,381-384)反應即可得到環(huán)加合物Ⅰ-7。在標準酸性條件下，一般為TFA于CH2Cl2中或HCl于二噁烷中，將Ⅶ-7叔-丁酯除去可得羧酸Ⅶ-8。用如EDC和HOBt或SO2Cl2使該羧酸活化，隨后使該活化形式在中性溶劑(如DMF、CH2Cl2或CH3CN)中與適當?shù)陌啡绂?丙氨酸的適當?shù)难苌锓磻a(chǎn)生Ⅶ-9。根據(jù)是否需要酸中和，可以使用一種加入的堿如二異丙基乙胺((i-Pr)2NEt)或吡啶。許多其它的將羧酸轉(zhuǎn)化為酰胺的方法是已知的，且可在標準參考書中找到，如“Compendium of Organic SyntheticMethods”，第Ⅰ-Ⅵ卷。(Wiley-Interscience出版)或Bondansky,“ThePractice of Peptide Synthesis”(Spring-Verlag出版)。根據(jù)本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的各種方法,可以容易地得到β-丙氨酸的衍生物的外消旋物或光學純的形式。一種有代表性的方法公開于WO 93/07867。用堿水溶液如LiOH于THF水溶液中或NaOH于甲醇或乙醇水溶液中，可以除去Ⅶ-9的乙酯或磺?；Ｗo基團。用一種適當?shù)乃崛鏣FA或HCl將中間產(chǎn)物羧酸鹽酸化得到羧酸Ⅶ-10?？蛇x擇的，如果需要時，通過本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知的方法可將中間體羧酸鹽分離，或者制備游離羧酸的羧酸鹽。
流程Ⅷ
a)COCl2于甲苯中，Na2CO3,H2O；b)β-丙氨酸芐酯甲苯磺酸鹽，DMAP，吡啶；c)CH3I,2,6-二甲基吡啶，DMF；d)BrCH2COBr,Et3N,CH2Cl2；e)NaH,DMF；f)CO,(Ph3P)2PdCl2,DIEA,2-(甲基氨基甲基)苯并咪唑二鹽酸鹽，NMP；g)H2,Pd/C,EtOH。
根據(jù)US 5403836和WO 9504057的流程，以從2-氨基-4-碘代苯甲酸(Ⅷ-1)開始而非自2-氨基-5-碘代苯甲酸開始，制備化合物Ⅷ-5。在一種惰性溶劑中(可選1-甲基-2-吡咯烷酮NMP)，在鈀催化劑存在的條件下(優(yōu)選(Ph3P)2PdCl2，在一氧化碳環(huán)境中，使Ⅷ-5與一種適當?shù)陌啡?-(甲基氨基甲基)苯并咪唑反應得酰胺Ⅷ-6。根據(jù)是否需要中和，可使用一種添加的堿如二異丙基乙胺(DIEA)或吡啶。在本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知的標準氫化條件下，除去Ⅷ-6的芐酯可獲得Ⅷ-7?？蛇x擇的，使用一種堿水溶液如LiOH于THF水溶液中或NaOH于甲醇或乙醇水溶液中，可以將芐酯皂化。用一種適當?shù)乃崛鏣FA或HCl將中間產(chǎn)物羧酸鹽酸化可以得到羧酸。如果需要，采用本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的方法可將Ⅷ-7的中間體羧酸鹽分離，或者制備羧酸的適當鹽。
流程Ⅸ
a)β-丙氨酸乙酯鹽酸鹽，DMAP,吡啶；b)BrCH2COBr,Et3N,CH2Cl2；c)NaH,DMF；d)Lawesson’s試劑.,THF,50℃；e)CH3I,(n-Bu)4NHSO4,NaOH,CH2Cl2,H2O；f)炔丙胺，吡啶HCl，甲苯；g)CO,(Ph3P)2PdCl2,DIEA,2-(甲基氨基甲基)苯并咪唑二鹽酸鹽，NMP；h)LiOH,THF,H2O.
根據(jù)US 5403836和WO 9504057的流程，自4-碘代靛紅酸酐(Ⅸ-1，見流程Ⅰ)而非自5-碘代靛紅酸酐開始，制備化合物Ⅸ-6。根據(jù)流程ⅩⅢ中將ⅩⅢ-5轉(zhuǎn)化為ⅩⅢ-7的步驟，將Ⅸ-6轉(zhuǎn)化為Ⅸ-7。
流程Ⅹ
a)1-Boc-哌嗪，NaBH3CN,HCl,MeOH；b)4 M HCl/二氧六環(huán),CH2Cl2；c)SOCl2,CH2Cl2；d)3,DIEA,DMF；e)1.0 N NaOH,MeOH.
易得的1-(乙氧基羰基甲基)-4-哌啶酮(Ⅹ-1,EP A0542363 A2)與可得自商業(yè)的1-Boc-哌嗪和一種適當?shù)倪€原劑(優(yōu)選氰基硼氫化鈉)經(jīng)還原胺化反應可得到胺Ⅹ-2。該反應通常在酸性催化下(常用HCl)和羥基溶液(如甲醇和乙醇)中進行。在適當?shù)娜軇┤鏑H2Cl2中，在酸性條件下(優(yōu)選HCl/二氧六環(huán)或TFA)，除去Boc保護基團可得到胺Ⅹ-3。在極性溶劑中(優(yōu)選DMF)，在一種適當?shù)乃崆宄齽?如二異丙基乙胺DIEA)存在下，使其與2-(2-氯代乙基)苯并咪唑(Ⅹ-5)反應得到偶合產(chǎn)物X-6。在惰性溶劑如CH2Cl2中，在三苯基膦存在時，通過2-(2-羥基乙基)苯并咪唑與一種適當?shù)柠u代試劑(如亞硫酰氯或四氯化碳)反應可制備2-(2-氯代乙基)苯并咪唑。使用堿的水溶液如LiOH于THF水溶液中或NaOH于醇或乙醇水溶液中，除去Ⅹ-6的乙酯。用一種適當酸如TFA或HCl將中間體羧酸鹽酸化以制備羧酸Ⅹ-7?？蛇x擇的，如果需要，根據(jù)本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知的方法可將中間體羧酸鹽分離，或者制備游離羧酸的羧酸鹽。
流程Ⅺ
a)2-(3-溴代丙基)苯并咪唑，DIEA,DMF；b)4M HCl/二氧六環(huán)CH2Cl2.
在極性溶劑(優(yōu)選DMF)中，在一種適當?shù)乃峤怆x劑如二異丙基乙胺(DIEA)存在時，使易得的哌嗪衍生物Ⅺ-1(EPA 0537980Al)與易得的2-(3-溴代丙基)苯并咪唑(J.Org.Chem,1962,27,2165)反應得到偶合產(chǎn)物Ⅺ-2。在適當?shù)娜軇┤鏑H2Cl2中，在標準的酸性條件下(優(yōu)選HCl/二氧六環(huán)或TFA)，除去叔-丁基酯保護基團得到羧酸Ⅺ-3。如果需要，根據(jù)本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的方法可制備該羧酸的適當?shù)柠}。
流程Ⅻ
a)2-(苯并咪唑基)丙酸，BOP-Cl,NMM,CH2Cl2；b)LiOH,THF,H2O；c)β-丙氨酸芐酯，EDC,HOBt·H2O,NMM,CH2Cl2；d)H2,10％Pd/C,AcOH,THF,H2O.
按照Beavers等(WO 95/25091，實施例1)的流程制備Ⅻ-4，但以(2-苯并咪唑基)丙酸代替Nα-Boc-D-lys(Cbz)-OH。
流程ⅩⅢ
a)2-(氨基甲基)苯并咪唑，Et3N，苯；b)1.0N LiOH,MeOH,H2O；c)β-丙氨酸乙酯，BOP,Et3N,CH3CN。
在1H-異吲哚-5-甲酰胺，2,3-二氫-N-(2-羧基-乙基)-2-[2-(哌啶基)乙基]-3-氧代(制備1-12,EPA 0540334 A1)的制備的-般條件下，使一種適當?shù)墓倌芑陌啡?-(氨基甲基)苯并咪唑與4-溴代甲基苯-1,3-二羧酸二甲酯(ⅩⅢ-1；如EP 0540334Al中所合成)反應得到ⅩⅢ-2。使用堿的水溶液如LiOH于THF水溶液中或NaOH于甲醇或乙醇水溶液中，將ⅩⅢ-2的甲酯水解，然后用適當?shù)乃崛鏣FA或HCl將中間體羧酸鹽酸化得到羧酸ⅩⅢ-3。用例如EDC和HOBt、SOCl或BOP試劑將ⅩⅢ-3的羧酸轉(zhuǎn)化為該羧酸的一種活化形式，隨后該活化形式在適當?shù)娜軇┤鏒MF、CH2Cl2或CH3CN中與一種適當?shù)陌啡绂?丙氨酸乙酯反應得到ⅩⅢ-4。根據(jù)是否需要酸中和，使用一種添加的堿如二異丙基乙胺((i-Pr)2NEt)或吡啶。將羧酸轉(zhuǎn)化為酰胺的許多其它方法是已知的，且在標準參考書如“Compendium of OrganicSynthetic Methods”第Ⅰ-Ⅵ卷，(Wiley-Interscience出版)，或Bondansky,“The Practice of Peptide Synthesis”(Springer-Verlag出版)中可找到。如上所述的酯水解將ⅩⅢ-2轉(zhuǎn)化為ⅩⅢ-3，然后得到ⅩⅢ-5。可選擇的，如需要，根據(jù)本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的方法可將ⅩⅢ-5的中間體羧酸鹽分離或者制備游離羧酸的羧酸鹽。
流程ⅪⅤ
a)(Boc)2O,NaOH,1,4-二氧六環(huán)H2O；b)BrCH2CO2Bn,K2CO3,丙酮；c)4MHCl/二氧六環(huán)；d)2-(苯并咪唑基)乙酸d,EDC,DIEA,DMF；e)H2,5％Pd/C,MeOH.
在二氧六環(huán)水溶液中，用碳酸氫二叔丁酯和氫氧化鈉處理ⅩⅣ-1得到ⅩⅣ-2，在丙酮中用溴代乙酸芐酯和碳酸鉀將ⅩⅣ-2上的氧烷基化得到ⅩⅣ-3。用氯化氫在二噁烷中除去ⅩⅣ-3上的Boc基團，所得ⅪⅤ-4于DMF中用2-(苯并咪唑基)乙酸、EDC和DIEA在氮上酰化得到得ⅪⅤ-5。在甲醇中用氫和Pd/C處理將ⅩⅣ-5中的芐酯裂解得到ⅪⅤ-6。
流程ⅩⅤ
a)2-(苯并咪唑基)乙酸，EDC,DIEA,DMF；b)NaOH,H2O,CH3OH.
在適當?shù)娜軇┲?如DMF或乙腈中)，在EDC和DIEA存在時，使Ⅺ-1(如Alig等于EPA0372486中所述制備)與適當取代的羧酸如2-(苯并咪唑基)乙酸縮合。將羧酸轉(zhuǎn)化為酰胺的許多其它方法是已知的，且在標準參考書如“Compendium of Organic Synthesis”第Ⅰ-Ⅵ卷(Springer-Verlag出版)中可找到。通過在適當?shù)娜軇┤缂状妓芤褐?，用適當?shù)脑噭┤鐨溲趸c進行皂化可以完成酯的水解?？蛇x擇的，在適當?shù)娜軇┤缂状?、乙醇或乙酸中，用適當?shù)拇呋瘎┤鏟d/C和氫處理，可將芐酯轉(zhuǎn)化為酸。
流程ⅩⅥ
a)2-(苯并咪唑基)乙酸，EDC,DIEA,DMF；b)TFA
在適當?shù)娜軇┤鏒MF或乙腈中，在EDC和DIEA存在時，使ⅩⅥ-1(如Aeig等，EPA 0505868所述制備)與一種適當?shù)聂人崛?2-苯并咪唑基)乙酸縮合得到ⅩⅥ-2。將羧酸轉(zhuǎn)化為酰胺的許多其它方法是已知的，且在標準參考書中，如“Compendium of Organic Synthesis”第Ⅰ-Ⅵ卷(Springer-Verlag出版)中可找到。用三氟代乙酸或氯化氫完成ⅩⅥ-2中酯的水解以得到ⅩⅥ-3。可選擇的，在適當?shù)娜軇┤缂状贾?，用適當?shù)脑噭┤?NNaOH可以皂化ⅩⅥ-2中的酯。
流程ⅩⅦ
a)2-(苯并咪唑基)乙酸，EDC,DIEA,DMF；b)TFA,CH2Cl2
使ⅩⅦ-1(如Sugihara等所述制備，EP0529858)與適當?shù)娜〈聂人崛?2-苯并咪唑基)乙酸縮合得到ⅩⅦ-2，根據(jù)Sugihara等(實施例59)的一般流程，用TFA將叔-丁酯裂解以得到ⅩⅦ-3。將羧酸轉(zhuǎn)化為酰胺的許多其它方法是已知的，且在標準參考書，如“Compendium ofOrganic Synthesis”第Ⅰ-Ⅵ卷(Springer-Verlag出版)中可找到。
流程ⅩⅧ
a)4-[2-(苯并咪唑基)甲基]苯酚，Cs2CO3,DMF；b)TFA按照Himmelsbach等的一般方法(實施例3(51))，用適當?shù)娜〈椒尤?-[2-(苯并咪唑基)甲基]苯酚(根據(jù)Wahlgren和Addison的一般流程制備，J.Heterocycl.Chem,1 989,26,541-3)處理化合物ⅩⅧ-1(如Himmelsbaeh等所述制備，Australian Patent Application AU-A-86926/91，實施例Ⅵ(28))得到ⅩⅧ-2。根據(jù)Himmelsbach等的一般流程(實施例7(3))，用1N NaOH于CH3OH中將ⅩⅧ-2中的叔丁酯水解得到ⅩⅧ-3?？蛇x擇的，用TFA或HCl將叔丁酯裂解。
流程ⅩⅨ
a)HO-CCH2Ph-4-CE2CH2CO2CH3,Ph2POCl,Et3N,DMAP,THF；b)NaH,DMF,BrCH2CO2CH3；c)KOt-Bu,TH-F,DMF；d)KOt-Bu,CH3I,DMF；e)LiOH,THF,H2O.
采用Linz等(EP 0567968)的流程制備ⅩⅨ-5，但用(2-苯并咪唑基)甲胺代替4-氰基苯胺。
流程ⅩⅩ
a)ClCH2CO2Et,Et3N,DMF；b)BBr3；c)(CF3SO)2O；d)CO,Pd(OAc)2,PPh3,DIEA,NMP,NH4HCO3,H2O；e)H2N-R,EDC/HOBt,DIEA,DMF；f)H2N-R,CO,Pd(OAc)2,PPh,DIEA,NMP,NH4HCO3,H2O；g)1N NaOH,HOEt如M.J.Fisher等所述(EP 0635492,Jan,25,1995),流程ⅩⅩ提供了一種制備作為可仿效的纖維蛋白原受體拮抗劑的1,2,3,4-四氫異喹啉化合物的方法。如前所述，根據(jù)D.J.Shall和G.L.Grunewald(J.Med.Chem.1987,30,2208-16)所述的方法制備6-甲氨基-3,4-二氫異喹啉如化合物ⅩⅩ-1。在叔胺存在時，用鹵代乙酸酯處理異喹啉得到2-乙酸酯如ⅩⅩ-2所代表的。采用本領(lǐng)域所知的方法用BBr3將6-甲氧基化合物轉(zhuǎn)變成相應的6-羥基化合物，然后用三氟磺酸酐將其轉(zhuǎn)化為三氟甲磺酸鹽。通過鈀催化的羰基化反應得到6-羧基化合物如化合物ⅩⅩ-5，應用一種標準的胺鍵形成試劑，將ⅩⅩ-5與胺如(2-苯并咪唑基)乙酸縮合得到所需要的胺如化合物ⅩⅩ-6。皂化得到ⅩⅩ-7，可選擇的，鈀催化的與三氟甲磺酸酯如ⅩⅩ-4的羰基化反應可以被所述的氨基甲基化合物截獲，經(jīng)皂化后，獲得相應的6-(2-苯并咪唑基)甲基氨基羰基化合物ⅩⅩ-7。
流程ⅩⅪ
a)1.LiN(TMS)2,2.ClCH2CO2Et,DMF；b)BBr3；c)(CF3SO2)2O；d)CO,Pd(OAc)2,PPh3,DIEA,NMP,NH4HCO3,H2O；e)H2N-R,EDC/HOBt,DIEA,DMF；f)H2N-RCO,Pd(OAc)2,PPh2,DIEA,NMP,NH4HCO3,H2O；g)1N NaOH,HOEt流程ⅩⅪ提供了一種制備3,4-二氫異喹啉-1-酮(作為可例證性的纖維蛋白原受體拮抗劑)的方法(如M.J.Fisher等所述,EP 0635492,Jan.25,1995)相應的，用堿如LiN(TMS)2和鹵代乙酸酯處理1-氧代化合物ⅩⅪ-1(按D.J.Sall和G.L.Grunewald所述方法制備，J.Med.Chem.1987,30,2208-2216)得到2-乙酸酯如化合物ⅩⅪ-2。然后將1-氧代化合物應用于流程ⅩⅩ所采用的一系列相似的反應，取代相應的1-氧代類似物，如流程ⅩⅪ所示，得到ⅩⅪ-7。如與流程ⅩⅩ中相同，可選擇的，將鈀催化的與三氟甲磺酸酯的羰基化反應如化合物ⅩⅪ-4用胺截獲，經(jīng)皂化后，獲得ⅩⅪ-7。
流程ⅩⅫ
a)RCO-X；b)TFA/CH2Cl2流程ⅩⅫ提供了作為例證性纖維蛋白原受體拮抗劑的6-酰氨基四氫化萘化合物的制備方法(如M.J.Fisher等所述，EP0635492,Jan.25,1995)。如前所述，將6-氨基-2-叔-丁基氧基羰基-四氫化萘-1-酮如化合物ⅩⅫ-1(根據(jù)M.J.Fisher等所述方法制備，EP0635492,Jan.25,1995)與一種羧酸的活化的衍生物如(2-苯并咪唑基)乙酸的活性衍生物縮合，經(jīng)去酯化后，得到酰胺如ⅩⅫ-2。
流程ⅩⅩⅢ
a)CF3SO2O；b)CO,Pd(OAc)2,PPh3,DIEA,NMP,NH4HCO3,H2O；c)H2N-R,EDC/HOBt,DIEA,DMF；d)H2N-R,CO,Pd(OAc)2,PPh3,DIEA,NMP,NH4HCO3,H2O；e)1NNaOH,HOEt流程ⅩⅩⅢ提供了一種作為可仿照的纖維蛋白原受體拮抗劑的6-氨基?；臍浠粱衔锏闹苽浞椒?如M.J.Fisher等所述,EP0635492,Jan.25,1995)。如前所述，用三氟甲磺酸酐處理乙氧基羰基甲基-6-氫-四氫化萘-1-酮如化合物ⅩⅩⅢ-1(根據(jù)M.J.Fisher等所述方法制備，EP0635492,Jan.25,1995)得到三氟甲磺酸酯如化合物ⅩⅩⅢ-2，將其應用于鈀催化的羰基化反應得到羧酸如化合物ⅩⅩⅢ-3，然后將其與酰胺縮合，經(jīng)去酯化后即得6-氨基?；衔铫?5?？蛇x擇的，鈀催化的與三氟甲磺酸酯的如化合物ⅩⅩⅢ-2的羰基化反應可以被所述的胺化合物截獲，經(jīng)皂化后即可得到相應的6-氨基酰基化合物ⅩⅩⅢ-5。
流程ⅩⅩⅣ
a) BrCH2CO2Et,K2CO3,NaI；b)1.DBU,EtOH,2.HCl,EtOH；c)DiBAL,-78℃；d)NaH,THF；e)H2,10％Pd-C；f)R2CO-X；g)1N NaOH,MeOH流程ⅩⅩⅣ提供了一種作為可仿照的纖維蛋白原受體拮劑的5-酰氨基苯并呋喃和5-酰氨基二氫苯并呋喃化合物的制備方法(如M.L.Denney等所述，EP0655439,31/5/95)。因此，用鹵代乙酸酯處理4-硝基水楊醛如化合物ⅩⅩⅣ-1得到苯氧乙酸酯如化合物ⅩⅩⅣ-2。用堿如DBU處理醛可獲得2-烷氧基羰基呋喃例如化合物ⅩⅩⅣ-3。用例如DiBAL將2-烷氧基羰基還原成醛。通過Wittig反應可獲得2-丙烯酸酯如化合物ⅩⅩⅣ-4，然后將其還原為苯并呋喃-2-丙酸酯如化合物ⅩⅩⅣ-5和二氫苯并呋喃-2-丙酸酯如化合物ⅩⅪⅤ-6。胺ⅩⅩⅣ-5與羧酸的活化的衍生物縮合經(jīng)去酯化后成酰胺5ⅩⅩⅣ-8?？蛇x擇的，胺ⅩⅩⅣ-6與羧酸的活化的形式縮合經(jīng)去酯化后成酰胺ⅩⅩⅣ-7。
流程ⅩⅩⅤa
a)1．TBDMS-Cl，咪唑；b)DiBAl-H,-78℃,d)NaH,THF；e)H2,5％Pd-C；f)Et4N+F-
流程ⅩⅩⅤb
a)(CF3SO2)2O；b)CO,Pd(OAc)2,PPh3,DIEA,NMP,NH4HCO3,H2O；c)H2N-R,EDC/HOBt,DIEA,DMF；d)H2N-R,CO,Pd(OAc)2,PPh2,DIEA,NMP,NH4HCO3,H2Oe) 1NNaOH,EtOH
流程ⅩⅩⅤc
a)(CF3SO2)2O；b)CO,Pd(OAc)2,PPh3,DIEA,NMP,NH4HCO3,H2O；c)H2N-R,EDC/HOBt,DIEA,DMF；d)H2N-R,CO,Pd(OAc)2,PPh2,DIEA,NMP,NH4HCO3,H2Oe)1NNaOH,EtOH流程ⅩⅩⅤ提供了一種制備作為可仿照的纖維蛋白原受體拮抗劑的5-氨基酰基苯并呋喃和5-氨基?；浔讲⑦秽衔锏姆椒?如M.L.Denney等所述，EP 0655439,31/5/95)。因此，用TBDMS-Cl處理5-羥基苯并呋喃-2-羧酸酯如ⅩⅩⅤa-1(以M.L.Denney等的方法制備，EP 0655439,31/5/95)可得到酯的TBDMS衍生物ⅩⅩⅤa-2。將酯還原成如醛化合物ⅩⅩⅤa-3。通過Wittig反應得到丙烯酸酯ⅩⅩⅤa-4。通過催化還原得到苯并呋喃-2-乙酸酯和二氫苯并呋喃-2-乙酸酯。通過本領(lǐng)域所知的方法，將每一酯的甲硅烷基醚基團裂解可獲得苯并呋喃-2-乙酸酯ⅩⅩⅤa-5或二氫苯并呋喃-2-乙酸酯ⅩⅩⅤa-6。
如流程ⅩⅩⅤb和ⅩⅩⅤc中所見，通過鈀催化的羰基化反應，可分別將每一醇轉(zhuǎn)化為羧酸如化合物ⅩⅩⅤb-2或ⅩⅩⅤc-2，然后它們分別與胺縮合經(jīng)去酯化后，得到酰胺ⅩⅩⅤb-4或ⅩⅩⅤc-4。可選擇的，鈀催化的與三氟甲磺酸酯如ⅩⅩⅤb-1或ⅩⅩⅤc-1的羰基化反應可用所述氨基甲基化合物截獲，經(jīng)去酯化后，得到相應的6-氨基?；衔铫鮞-4或ⅩⅩⅤc-4。
這里所用的酰胺偶聯(lián)試劑是表示可用來形成肽鍵的試劑。典型的偶聯(lián)方法使用碳二亞胺、活化的酸酐和酯及酰鹵。典型的試劑如EDC、DCC、DPPA、PPA、BOP試劑、HOBt、N-羥基琥珀酰亞胺和草酰氯。
形成肽鍵的偶聯(lián)方法在本領(lǐng)域是眾所周知的。Bodansky等于THE PRACTICE OF PEPTIDE SYNTHESIS(Springer-Verlag,Berlin,1984)、Ali等于J.Med.Chem.,29,984(1986)和J.Med.Chem.,30,2291(1987)中所提出的肽合成的方法普遍闡明了工藝技術(shù)，在這里引入作為參考。
典型的，任選的在催化劑如1-羥基苯并三唑(HOBt)和二甲基氨基吡啶(DMAP)存在時，使用一種適當?shù)奶级啺放悸?lián)劑如N’,N’二環(huán)己基羰二亞胺(DCC)將胺或苯胺通過其游離氨基基團偶聯(lián)至一種適當?shù)聂人岬孜铩Ｆ渌椒ㄒ彩沁m當?shù)?，例如，形成適當?shù)谋槐Ｗo的所述底物的游離羧基的活化的酯、酸酐或酰鹵，然后任選地在堿存在時與適當?shù)谋槐Ｗo的胺的游離酰反應。例如，在無水溶劑中如二氯甲烷或四氫呋喃(THF)，在堿如N-甲基嗎啉、DMAP或三烷基胺存在時，用氯代甲酸異丁酯處理保護的Boc-氨基酸或Cbz-脒基苯甲酸形成“活化的酸酐”，隨后使其與第二種被保護的氨基酸或苯胺的游離胺反應。
式(ⅩⅨ)和(ⅩⅩ)化合物是商業(yè)易得的，或者采用本領(lǐng)域已知的方法制備如這里所說明的公開標準參考書中的方法，如COMPENDIUM OF ORGANIC SYNTHETIC METHODUS第Ⅰ-Ⅵ卷(Wiley-Interscience)。制備苯并咪唑的常用方法公開于Nestor等，J.Med.Chem.1984,27,320。制備式(ⅩⅩ)化合物的代表性的方法本領(lǐng)域也是已知的，且可于EP-A 0381033中發(fā)現(xiàn)。
所述化合物的酸加成鹽可由其母體化合物與一種過量的酸如氫氯酸、氫溴酸、氫氟酸、硫酸、磷酸、乙酸、三氟乙酸、馬來酸、琥珀酸或甲磺酸在適當?shù)娜軇┲幸詷藴实姆绞街苽?。部分化合物形成可接受的?nèi)鹽或兩性離子化合物。通過用過量的堿性試劑(如含有適當陽離子的氫氧化物，碳酸鹽或醇鹽)或用適當?shù)挠袡C胺處理母體化合物制備其陽離子鹽。藥學上可接受的鹽中存在的陽離子的特殊例子如Li+、Na+、K+、Ca++、Mg++和NH4+。
本發(fā)明也提供一種藥學組合物，它包括基于式(Ⅰ)-(Ⅴ)和式(ⅩⅪ)-(ⅩⅩⅫ)的化合物和一種藥學上可接受的載體。因此，式(Ⅰ)-(Ⅴ)和式(ⅩⅪ)-(ⅩⅩⅫ)的化合物可用于藥物的生產(chǎn)。如前所述制備式(Ⅰ)-(Ⅴ)和式(ⅩⅪ)-(ⅩⅫ)化合物的藥學組合物可制成溶液或凍干粉針形式用于胃腸外給藥。粉末在使用前可加入適當?shù)南♂寗┗蚱渌帉W上可接受的載體復制。液體劑型可以是一種緩沖的、等滲的、水溶液性溶液。合適的稀釋劑的例子有等滲的生理鹽水溶液、標準的5％葡萄糖水溶液或緩沖的醋酸鈉或酯酸銨溶液。這樣的組方特別適用于胃腸外給藥，但也可用于口服給藥或者含在定量吸入器中或霧化器中吸入法給藥。如果需要可加入其它輔如聚乙烯吡咯烷酮、明膠、羥基纖維素、阿拉伯膠、聚乙二醇、甘露醇、氯化鈉或檸檬酸鈉。
可選擇的，這些化合物可以裝入膠囊、壓成片劑或制成乳劑或糖漿劑用于口服給藥?？杉尤胨帉W上可接受的固體或液體載體以增加或穩(wěn)定液組合物或使組合物容易制備。固體載體包括淀粉、乳糖、硫酸鈣二水合物、白陶土、硬脂酸鎂或硬脂酸、滑石粉、果膠、阿拉伯膠、瓊脂或明膠。液體載體包括糖漿、花生油、橄欖油、鹽水或水。載體也包括緩釋成份如單硬脂酸甘油酯或雙硬脂酸甘油酯，單獨使用或加上蠟。固體載體的量是變化的，但優(yōu)選在每個劑量單位約20mg到約1g之間。依據(jù)藥劑學上傳統(tǒng)工藝來制備，對于片劑，如果需要時，包括研磨、混合、制粒和壓片；或者對于硬膠囊包括研磨、混合或填充、當使用液體載體時，制備的形式為糖漿劑、酏劑、乳劑或水溶液性或非水溶液性的混懸液。這樣一種液體形式可以直接口服給藥或填裝進軟明膠膠囊。
對于直腸給藥，本發(fā)明的化合物也可以與輔料如可可油、甘油、明膠或聚乙二醇結(jié)合，塑制成栓劑。
此處所述的化合物是玻體蛋白受體拮抗劑，可用于治療其病理學歸因于配體或細胞玻連蛋白受體相互作用的疾病。例如，這些化合物用于治療其中骨基質(zhì)丟失產(chǎn)生病理的疾病。所以，這些化合物可用于治療骨質(zhì)疏松、甲狀旁腺機能亢進、Paget’s疾病、惡性高鈣血癥、骨轉(zhuǎn)移而產(chǎn)生的溶骨損害。由于固定術(shù)或性激素缺乏而導致的骨丟失。本發(fā)明的化合物相信也有以下用途抗腫瘤劑、抗血管生成劑、抗炎劑及抗轉(zhuǎn)移劑，所以可用于動脈粥樣硬化癥和再狹窄的治療。
該肽可以口服或注射給病人用藥，在這種情況下，藥物的濃度應足夠于抑制骨的重吸收或其它的此類適應癥。含有此肽的藥學組合物給藥的口服劑量為大約0.1到大約50mg/kg之間，應以與病人疾病一致的方式。優(yōu)選口服劑量為大約0.5到大約20mg/kg。對于急性治療，應優(yōu)選腸道外給藥。在5％葡萄糖水或生理鹽水或適當賦形劑的相似組方中的所述肽的靜脈輸液是最有效的，盡管肌肉內(nèi)團塊(bolus)藥物注射也是有用的。典型的，胃腸外劑量為大約0.01到大約100mg/kg；優(yōu)選在0.1到20mg/kg之間?；衔锩刻旖o藥一到四次，以達到日總劑量大約0.4到大約400mg/kg/天的水平。通過比較試劑的血液水平與產(chǎn)生治療效果所需的濃度，本領(lǐng)域的技術(shù)人員可以較易確定化合物給藥的精確水平和方法。
化合物可以通過幾個生物學檢驗中的一個實驗以確定要求達到預定藥理作用的化合物濃度。
玻連蛋白結(jié)合抑制試驗固相[3H]-SK&F-107260與αvβ3之結(jié)合用含有1mMCaCl2、1mMMnCl2、1mM MgCl2(緩沖液A)和0.05％NaN3的緩沖液T稀釋在緩沖液T(含有2mM CaCl2和1％辛基葡萄糖苷)中的人胎盤或人血小板αvβ3(0.1-0.3mg/ml)，然后以每孔0.1ml立即加到96孔ELISA平板(Coming,New York,NY)中，每孔加入0.1-0.2μg的αvβ3。該平板于4℃過夜孵育。實驗時，用緩沖液A洗滌孔眼一次，用在同樣緩沖液中的3.5％牛血清白蛋白0.1ml在室溫下孵育1小時。孵育后的孔內(nèi)容物被完全抽出，用0.2ml緩沖液A洗滌兩次。
化合物溶于100％DMSO得到2mM的儲備液，將其用結(jié)合緩沖液(15mM Tris-HCl(pH 7.4),100mM NaCl,1mM CaCl2,1mMMnCl2,1mM MgCl2)稀釋使最后化合物的濃度為100μM。該溶液然后稀釋至所需要的化合物最終濃度。未標記的拮抗劑的各種濃度(0.001-100μM)分別以三份加入孔眼中，然后加入5.0mM的[3H]-SK&F-107260(65-86Ci/mmol)。
平血在室溫下孵育1小時。孵育后孔內(nèi)容物被完全抽出，以孔到孔的方式用0.2ml冰冷的緩沖液A洗滌一次。用0.1ml的1％SDS溶解受體，加入3ml Ready Safe到Beckman LS Liquid ScintillationCounter中，以40％的效率通過液體閃爍計數(shù)計算結(jié)合的[3H]-SK&F-107260。在2μM SK&F-107260存在時測定[3H]-SK&F-107260的非特殊結(jié)合，應一致性的少于總放射性配體輸入的1％。通過由LUNDON-2程序所改進的非線性、最小二乘圖解法程序測定IC50(抑制[3H]-SK&F-107260 50％結(jié)合的拮抗劑的濃度)。根據(jù)下列方程計算Ki(拮抗劑的解離常數(shù))Ki=IC50/(1+L/Kd)，其中L和Kd分別是[3H]-SK&F-107260的濃度和解離常數(shù)。
在濃度范圍大約為0.001到50微摩爾時，本發(fā)明的化合物可以抑制玻連蛋白與SK&F-107260的結(jié)合。
以本領(lǐng)域中的檢驗標準也可以對本發(fā)明的化合物進行體內(nèi)和體外骨重吸收的實驗，用于評價骨形成的抑制，例如公開于EP 528587的凹痕形成檢驗，也可以用人的破骨細胞代替大鼠的破骨細胞和用卵巢切除術(shù)的大鼠模型完成實驗(Wronski等發(fā)表于Cell and Materials1991,sup.1,69-74)。血管平滑肌細胞遷移檢測使用大鼠和人的主動脈平滑肌細胞。在Transwell細胞孵育室中通過使用一種有8μm孔(Costar)的聚碳酸酯膜來監(jiān)測細胞遷移。濾器較低的表面用玻連蛋白包被。細胞以2.5-5.0×106個細胞/ml的濃度懸浮于補充有0.2％牛血清白蛋白的DMEM中，且在20℃時先用各種濃度的實驗化合物預處理20分鐘。單獨的溶劑用做對照。0.2ml細胞懸浮液被置于孵育室上層。下層含有以0.2％牛血清白蛋白補充的0.6ml DMEM。孵育于37℃在95％空氣/5％CO2氣體中進行24小時。孵育后，輕輕刮去濾器上表面上的未遷移細胞。然后將濾器定置于甲醇中，用10％Giemsa著色劑染色?？赏ㄟ^a)數(shù)出已適移到濾器下表面的細胞數(shù)或通過b)用10％乙酸提取已染色細胞，然后于600nm測定吸收度兩種方法測定遷移。甲狀旁腺切除術(shù)大鼠模型每一實驗組包括5-6只雄性Sprague-Dawley大鼠。使用前7天將這些大鼠進行甲狀旁腺切除(由賣主進行，Taconic Farms)。使用前24小時(即尾靜脈取血后置于肝素抗凝試管中后)立即測定全部血中循環(huán)的離子鈣的濃度。選擇包括那些離子鈣水平(Cika-Comingmodel 634鈣pH分析儀測定)是1.2mM/E的大鼠。然后大鼠的飲食為不含鈣的食物和去離子水。實驗開始時，大鼠的體重為大約100g。測定基礎(chǔ)鈣水平，然后大鼠以單次靜脈(尾靜脈)藥團塊注射的方式給以對照載體(鹽水)或化合物(溶解于鹽水中)，然后立即單次皮下注射入甲狀旁腺激素1-34肽(hPTH1-34，劑量為0.2mg/kg在鹽水中/0.1％牛血清白蛋白，Bachem,Ca)或PTH載體?；衔?PTH給藥后2小時測定血鈣對PTH的響應(和化合物對這種響應的任何效果)。大鼠尺骨漂移模型實驗開始時，每一實驗組包括8-10只雄性的體重大約為30-40g的Sprague-Dawley或Wistar大鼠。被試驗的試劑以適當?shù)耐緩浇o藥7天，日劑量單次或多次給藥。第一次劑量給藥之前，給予大鼠單次劑量的熒光標記物(四環(huán)素25mg/kg，或鈣黃綠素10mg/kg)，用以標記在當時的時間點骨形成表面的位置?；衔锝o藥完成后，殺死大鼠和在肘處切掉兩前肢，在踝關(guān)節(jié)處切掉腳，剝除皮膚。冷凍樣品且將其垂直安放于切片機卡盤上。在恒溫切片機上將尺骨中間部位的交叉部分切片。在皮質(zhì)骨的中-背部位以形態(tài)測定法測定骨重吸收的比率。測定方法如下骨膜表面骨被重吸收的量等于骨膜表面向標記處移動的距離，標記處與第0天內(nèi)膜骨形成表面相合并。通過從第0天的寬度減去骨內(nèi)膜表面和標記處之間骨的寬度計算該距離；將結(jié)果除以7即為每天以微米計的重吸收比率。人體破骨細胞重吸收檢驗(“PIT檢驗”)·從液氮儲存器中取出破骨細胞瘤衍生的細胞懸浮液的可分量，迅速于37℃升溫，在PRMI-1640介質(zhì)中離心洗滌一次(1000rpm,5min,4℃)。·抽出介質(zhì)，用鼠的抗-HLA-DR抗體代替，該抗體用RPMI-1640以1∶3稀釋。在冰上孵育30分鐘，且不時攪拌細胞混懸液。·細胞用冷的RPMI-1640通過離心(1000rpm,5min,4℃)洗滌兩次，細胞被轉(zhuǎn)移至已消毒的15ml離心管中。在改良的Neubauer計數(shù)室中數(shù)出單核細胞的數(shù)量。·從儲存瓶中取出以羊的抗-鼠IgG包被的足夠的磁珠(5/單核細胞)，置入5ml新鮮介質(zhì)中(除去可能存在的有毒的疊氮化物)。將磁珠固定在磁鐵上以除去介質(zhì)，再用新鮮介質(zhì)替換。·磁珠與細胞混合，混懸液于冰上孵育30分鐘，不斷攪拌混懸液。·包被磁珠的細胞被固定在磁鐵上，剩余的細胞(破骨細胞豐富部分)被倒入已消毒的50ml離心管中?！⑿迈r介質(zhì)加入包被磁珠的細胞中以使被吸附的破骨細胞脫離。該洗滌過程重復10次。包被珠子的細胞被棄掉?！な褂靡淮罂椎囊淮涡缘乃芰螾asteur來放置裝有樣品的室箱，在計數(shù)室中數(shù)出破骨細胞?！ねㄟ^離心使細胞成小丸，在EMEM介質(zhì)將破骨細胞濃度調(diào)節(jié)為1.5×144ml，用10％胎牛血清和1.7g/l的碳酸氫鈉補充?！ぜ毎鞈乙?每次處理)的每份量3ml被倒入15ml離心管中。通過離心將細胞成小丸。·經(jīng)適當處理的3ml加到每一管中(在EMEM介質(zhì)中稀釋至50μM)。也包括適當?shù)妮d體對照、陽性對照(87 MEM1介質(zhì)中稀釋至100μg/ml)和一種同型對照(IgG2a稀釋至100μg/ml)。37℃孵育30分鐘?！ぜ毎拿糠至?.5ml接種到無菌的48-孔平板的牙質(zhì)薄片上，在37℃孵育2小時。每次處理都監(jiān)測為一式四份?！そ?jīng)六次更換的溫PBS(在六孔平板中10ml/孔)洗滌薄片，然后置于新的處理或?qū)φ铡?7℃孵育48小時?？咕剖猁}的酸性磷酸酯酶(TRAP)方法(破骨細胞譜系的細胞選擇性著色劑)?！ぴ诹姿猁}緩沖鹽水中洗滌薄片，在2％的gluteraldehyde(戊二醛)(在0.2M的二甲基胂酸鈉中)中固定5分鐘?！に邢礈焖鼈?，在37℃時TRAP緩沖液中孵育5分鐘?！だ渌邢礈旌?，將其于4℃在冷乙酸鹽緩沖液/堅牢紅garnet中孵育5分鐘?！み^量的緩沖液被抽干，薄片經(jīng)水洗滌后空氣干燥。·用亮區(qū)顯微鏡計數(shù)TRAP陽性破骨細胞，然后用超聲處理從牙質(zhì)表面除去破骨細胞。·用Nikon/LasertecILM21W同焦點顯微鏡測定凹痕體積。人破骨細胞再吸收和粘連檢驗使用得自破骨細胞瘤組織的正常人破骨細胞進行凹痕吸收和粘連檢驗已經(jīng)發(fā)展起來并形成標準化。破骨細胞群用磁珠(Dynal Inc,NY)非選自破骨細胞瘤細胞混液。這些磁珠用鼠的單克隆抗體包被，該抗體可識別人體Ⅱ型主要組織相容性抗原，上述抗原存在于細胞混懸液中。使用磁鐵自細胞混合物中除去可表達該抗原并隨后與磁珠結(jié)合的細胞。然后將富含破骨細胞的混懸液準備好用于詳述于下的檢驗中。吸收檢驗(用ELISA讀出法)將富含破骨細胞的制備物與實驗化合物(4劑量)或?qū)φ瘴镆黄鹩?7℃預孵育30分鐘。然后將其接種于小牛皮質(zhì)骨薄片上，該薄片在48-孔組織孵育平板的孔中，并在37℃進一步孵育2小時。該骨薄片用六次更換的溫磷酸鹽緩沖鹽水(PBS)洗滌以除去未粘連細胞，然后將其重新置于含有新制化合物或?qū)φ瘴锏?8孔平板的孔中。然后將組織孵育平板于37℃孵育48小時。將每一孔中的上清液抽出置于不同的試管中，于能夠測定在重吸收過程中釋放出的膠原多肽的競爭性的ELISA中進行監(jiān)測。這是一種可獲自商業(yè)的ELISA(Osteometer,Denmark)，它含有一種可特異性地與一種8-氨基酸系列(Glu-Lys-Ala-His-Asp-Gly-Gly-Arg)反應的兔抗體，上述氨基酸系列存在于Ⅰ型膠原的α1-鏈的羧基-末端尾肽中。結(jié)果表示為與載體對照物比較的吸收抑制。
粘連檢驗得自破骨細胞瘤的破骨細胞與化合物(4劑量)或?qū)φ瘴镆黄鹩?7℃預孵育30分鐘。然后將細胞接種于包有osteopontin的破片上(人或鼠的osteopontin，2.5ug/ml)并于37℃孵育2小時。在PBS中劇烈洗滌玻片除去未粘連細胞，保留在玻片上的細胞于丙酮中固定。對破骨細胞的耐酒石酸鹽的酸性磷酸酶(TRAP)進行染色，該酶為顯性細胞的一種選擇性標記，然后通過光學顯微鏡計數(shù)。結(jié)果表示為與載體對照物比較的粘連抑制％。RGD-介導的GPⅡb-Ⅲa結(jié)合的抑制GPⅢb-Ⅲa的純化在3％的辛基葡萄糖苷、20mM Tris-HCl,pH 7.4 140mM NaCl,2mM CaCl2中，在4℃時輕輕攪拌2小時，將10單位的過時的已洗滌的人血小板(得自Red Cross)溶解。溶解產(chǎn)物以100000g離心1小時。所得上清液被加到5ml的經(jīng)20mM Tris-HCl,pH 7.4 140mM NaCl,2mM CaCl21％辛基葡萄糖苷(緩沖液A)的預平衡的小扁豆植物凝血素瓊脂凝膠4B柱(E.Y.Labs)。2小時孵育后，用50ml冷緩沖液A洗滌柱子，用含有10％葡萄糖的緩沖液A洗脫保留植物凝血素GPⅡb-Ⅲa。所有過程都在4℃進行。根據(jù)SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳所示，所得到的GPⅡb-Ⅲa純度＞95％。脂質(zhì)體中GPⅢb-Ⅲa的結(jié)合在氮氣流下，將磷酯酰絲氨酸(70％)和卵磷脂(30％)(AvantiPolarLipids)的混合物干燥在玻璃管管壁上。將純化的GPⅡb-Ⅲa被稀釋到最終濃度為0.5mg/ml，且以蛋白磷脂的比例為1∶3(w∶w)與磷脂混合?；旌衔镏匦禄鞈?，且在超聲溶中超聲處理5分鐘。使用12000-14000分子量的截斷透析管，將混合物對1000倍過量的50mMTris-HCl,pH 7.4,100mM NaCl,2mM CaCl2(更換2次)過夜透析。含有GPⅡb-Ⅲa的脂質(zhì)體以12000g離心15分鐘，且再混懸于透析緩沖液中，最終蛋白質(zhì)的濃度為大約1mg/ml。脂質(zhì)體貯存于-70℃直至需要時。
與GPⅡb-Ⅲa的競爭結(jié)合使用[3H]-SK&F-10726作為RGD-類型的配體，以間接競爭結(jié)合的方法檢測與纖維蛋白原受體(GPⅡb-Ⅲa)的結(jié)合。使用0.22μm的親水性微孔膜，在96孔過濾平板裝置(Millipore Corporation,Bedford,MA)中完成結(jié)合檢測?？籽墼谑覝叵掠?.2ml的10μg/ml聚賴氨酸(SigmaChemical Co.,St.Louis,MO)預包被1小時以阻斷非特異性的結(jié)合。未標記的苯并二氮雜_的各種濃度一式四份加到孔眼中。[3H]-SK&F-10726以最終濃度4.5nm加到每一孔眼中，然后加入1μg的GPⅡb-Ⅲa的含有純化的血小板脂質(zhì)體?；旌衔镌谑覝叵路跤?小時。通過使用Mullipore過濾多支管過濾，將GPⅡb-Ⅲa-結(jié)合[3H]-SK&F-10726與未結(jié)合的分離，然后用冰冷的緩沖液洗滌(2次，每次0,2ml)。在1.5mlReady Solve(Beckman nstrucments,Fullerton,CA于Beckman液體閃爍計數(shù)器(Model LS 6800)中以40％的效率計數(shù)仍然保留于濾器上的結(jié)合的放射活性。在20μm未標記的SK&F-10726中測定非特異性結(jié)合，應保持一致的小于加到樣品中總放射性的0.14％。所有的數(shù)據(jù)點都是四份測定值的平均值。
通過非線性最小二乘圖解法程序分析競爭性結(jié)合的數(shù)據(jù)。該方法可以提供拮抗劑的IG50(在平衡時抑制[3H]-SK&F-107260定結(jié)合50％時的拮抗劑的濃度)。IG50與拮抗劑的平衡解離常數(shù)(Ki)有關(guān)，根據(jù)Chemg和Prusoff方程Ki=IC50/(1+L/Kd)，其中L是用于競爭結(jié)合檢驗的[3H]-SK&F-107260的濃度(4.5nM)，Kd是[3H]-SK&F-107260的解離常數(shù)，Scatchard分析測定為4.5nM。
本發(fā)明的化合物抑制玻連蛋白與SK&F007260的結(jié)合，對玻連蛋白受體該化合物的Ki為大約10倍于對纖維蛋白原受體的值。優(yōu)選化合物具有的Ki值對玻連蛋白受體30倍于對纖維蛋白原受體。最優(yōu)選化合物具有的Ki值對玻連蛋白受體100倍于對纖維蛋白原受體。
后面的實施例絕不意欲限制本發(fā)明的范圍，而是用于描述怎樣制備和使用本發(fā)明的化合物。對于本領(lǐng)域中技術(shù)人員，許多其它實施方案也是顯而易見的。
一般情況可分別用Brkuer AM 250或Bruker 400光譜儀于250或400MHz記錄核磁共振譜。CDCl3是氘氯仿，DMSO-d6為六氘二甲基亞砜，CD3OD為四氘甲醇。以從內(nèi)標四甲基硅烷向低場偏移百分分之幾(δ)記錄化學位移。NMR數(shù)據(jù)的縮寫如下S=單峰、d=雙峰、t=三峰、q=四峰、m=多峰、dd=雙雙峰、dt=三雙峰、app=明顯的、br=寬峰。J代表于Hertz測定的NMR偶和常數(shù)。于Perkin-Elmer 683紅外光譜儀上記錄連續(xù)波段紅外(IR)光譜。于Nicolet Impact400D紅外光譜儀上記錄Fourier轉(zhuǎn)移紅外(FTIR)光譜。以發(fā)射方式記錄IR和FTIR光譜，以波長的倒數(shù)(cm-1)記錄紅外等的位置。用快速原子轟擊(FAB)或電子噴霧(ES)離子化技術(shù)，于VG70FE，PE Syx API Ⅲ或VG ZAB HF儀器上記錄質(zhì)譜。使用Perkin-Elmer240C元素分析儀可獲得元素分析。于Thomas-Hoover熔點儀測定熔點且被修正。以攝氏度來記錄所有的溫度。
Analtech Silica Gel GF和E.Merck.Silica Gel 60 F-254薄層板被用于薄層色譜法。快速和重力色譜于E.Merck Kieselgel 60(230-400目)硅膠上進行。分析和制備HPLC于Rainin或Beckman色譜儀上進行。ODS指一種十八烷甲硅烷基衍生的硅膠層析固定相。5μApex-ODS指具有標定粒子大小為5μm的十八烷基甲硅烷基衍生的硅膠層析固定相，它是由Jones Chromatography Littleton,Colorado生產(chǎn)的。YMCODS-AQ_是一種由YMC Co.Ltd.,Kyoto,Japan注冊的商標，也是一種ODS色譜固定相。PRP-1_是Hamilton Co.,Reno,Nevada的注冊商標，是一種聚合體(苯乙烯-二乙烯基苯)色譜固定相。Celite_是由酸洗的硅藻土組成的助濾劑，是Manville Corp.,Denver,Colorado的注冊商標。
根據(jù)Bondinell等于WO 93/00095的方法制備(±)-7-羧基-4-甲基-3-氧代-2,3,4,5-四氫-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸甲酯、(2S)-7-羧基-4-甲基-3-氧代-2,3,4,5-四氫-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸甲酯、(2R)-7-羧基-4-甲基-3-氧代-2,3,4,5-四氫-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸甲酯、(±)-7-羧基-4-異丙基-3-氧代-2,3,4,5-四氫-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸甲酯、(±)-7-羧基-3-氧代-2-(2-苯基乙基)-2,3,4,5-四氫-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸甲酯、(±)-8-羧基-2-甲基-3-氧代-2,3,4,5-四氫-1H-2-苯并氮雜_-4-乙酸甲酯、(±)-7-氨基-5-氧代-4-(2-苯基乙基)-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸甲酯和4-氟-3-甲基苯甲酸叔丁酯。根據(jù)P50256-1制備(±)-7-羧基-4-(2-甲氧基乙基)-3-氧代-2,3,4,5-四氫-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸甲酯、(±)-7-羧基-4-[2-(3,4-亞甲二氧基苯基)乙基]-3-氧代-2,3,4,5-四氫-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸甲酯、(±)-7-羧基-3-氧代-2,3,4,5-四氫-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸甲酯、(±)-2,3,4,5-四氫-7-[[[(苯并咪唑-2-基)甲基]氨基]羰基]-4-甲基-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸甲酯、(S)-2,3,4,5-四氫-7-[[[(苯并咪唑-2-基)甲基]甲基氨基]羰基]-4-甲基-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸，2-(甲基氨基甲基)苯并咪唑二鹽酸鹽和4-氮雜-5-甲基-2-(甲基氨基)甲基苯并咪唑。
制備12-(氨基甲基)-4-氮雜-5-甲基苯并咪唑二鹽酸鹽的制備a)2,3-二氨基-6-甲基吡啶將10％Pd/C(3.2g,3mmol)加至2-氨基-6-甲基-3-硝基吡啶(2.30g,15mmol)在無水乙醇(150ml)中的溶液中，于室溫氫氣(50psi)環(huán)境下振搖所述混合物。1.5小時后，通過celite_過濾所述混合物，真空濃縮濾液得到為黃色油狀物的目標化合物。將其不經(jīng)進一步純化應用
1H NMR(250MHz,CD3OD)δ6.82(d,1H),6.36(d,1H),2.25(s,3H).
b)2-氨基-3-[(芐氧基羰基)甘氨酰基]氨基-6-甲基吡啶于0℃氬氣環(huán)境下將DCC(3.09g,15mmol)加至2,3-二氨基-6-甲基吡啶(15mmol)和Cbz-甘氨酸(3.14g,15mmol)在DMF(19ml)和二氯甲烷(19ml)中的溶液中。當DCC溶解后，將微微渾濁的溶液溫熱至室溫。18.5小時后，通過celite_過濾所述混合物，并將濾液在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(rotavap)上濃縮至干。將殘留物在二甲苯中再濃縮(去除DMF)得到黃色固體。經(jīng)硅膠層析(10％MeOH/CHCl3洗脫)得到為黃色固體目標化合物(2.24g,48％)TLCRf(10％MeOH/CHCl3)0.57；1H NMR(250MHz,DMSO-d6)δ9.11(brs,1H),7.48-7.60(brt,1H),7.20-7.48(m,6H),6.40(d,1H),5.69(brs,2H),5.06(s,2H),3.82(d,2 H),2.23(s,3H).
c)4-氮雜-2-(芐氧基羰基)氨基甲基-5-甲基苯并咪唑于氬氣環(huán)境下加熱回流2-氨基-3-[(芐氧基羰基)甘氨酰基]氨基-6-甲基吡啶(2.24g,7.13mmol)在冰乙酸(70ml)中的溶液。17小時后，濃縮所述溶液(旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，高度真空)，將殘留物在甲苯中再濃縮(去除乙酸)。用熱的乙酸乙酯(20ml)處理產(chǎn)生的黃色油狀物并將所述混合物冷至室溫。通過抽吸過濾收集固體并用乙酸乙酯洗滌得到為灰白色固體的目標化合物(1.72g,81％)TLC Rf(15％MeOH/CHCl3)0.63；MS(ES)m/e 297.4(M+H)+.
d)2-(氨基甲基)-4-氮雜-5-甲基苯并咪唑二鹽酸鹽將10％Pd/C(153mg,0.14mmol)加至4-氮雜-2-(芐氧基羰基)氨基甲基-5-甲基苯并咪唑(213.4mg,0.72mmol)和1.0N HCl(1.44ml,1.44mmol)在無水乙醇(7.2ml)中的溶液中。向所述混合物中通入氫氣，然后于氫氣環(huán)境(氣球)室溫下快速攪拌。2小時后，通過硅藻土過濾所述反應物，在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上濃縮濾液得到為灰白色固體的目標化合物MS(ES)m/e 163.2(M+H)+。
制備2(±)-2,3,4,5-四氫-7-羧基-4-(3,3-二甲基丁基)-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸甲酯的制備a)3-[(3,3-二甲基丁基)氨基]甲基-4-硝基苯甲酸叔丁酯加熱回流3-甲基-4-硝基苯甲酸叔丁酯(WO 93/00095；17.7g,74.7mmol)、NBS(19.9g,112.0mmol)、過氧化苯甲酰(1.81g,7.47mmol)和四氯化碳(370ml)的混合物。17.5小時后，將所述反應物在冰中徹底冷卻并過濾去除琥珀酰亞胺沉淀。濃縮濾液得到棕黃色油狀物。
將此油狀物(4.2g,13.29mmol)溶于無水THF(50ml)中并立即一次性加入3,3-二甲基丁胺(3.0g,29.64mmol)。于室溫下將桔黃色溶液攪拌80分鐘，然后濃縮去除THF。用乙醚(150ml)稀釋殘留物并順序用1.0N氫氧化鈉(25ml)和水(25ml)洗滌。用乙醚(50ml)回萃取合并水層，用鹽水(25ml)洗滌合并的有機層并干燥(硫酸鎂)。濃縮得到粗的為淡棕色油狀物的目標化合物MS(ES)m/e 337.2(M+H)+。
b)3-[[N-(3,3-二甲基丁基)-N-(叔丁氧基羰基)]氨基]甲基-4-硝基苯甲酸叔丁酯于室溫下將碳酸氫二叔丁酯(4.0g,18.39mmol)一次性加至3-[(3,3-二甲基丁基)氨基]甲基-4-硝基苯甲酸叔丁酯(4.12g,1 2.26mmol)在氯仿(80ml)中的溶液中。18小時后，濃縮所述反應物并在己烷中再濃縮(去除氯仿)。經(jīng)硅膠層析(10-25％乙酸乙酯/己烷洗脫)得到為黃色油狀物的目標化合物(5.0g,93％)MS(ES)m/e 437.2(M+H)+,459.2(M+Na)+。
c)4-氨基-3-[[N-(3,3-二甲基丁基)-N-(叔丁氧基羰基)]氨基]甲基苯甲酸叔丁酯將10％Pd/C(1.0g,0.94mmol)加至3-[[N-(3,3-二甲基丁基)-N-(叔丁氧基羰基)]氨基]甲基-4-硝基苯甲酸叔丁酯(4.95g,11.35mmol)在乙酸乙酯(50ml)中的溶液中，并在氫氣環(huán)境(55psi)室溫下用Parr裝置振搖所述混合物。4小時后，通過celite_過濾所述反應物，濃縮濾液得到為紅棕色油狀物的目標化合物(4.3g,93％)MS(ES)m/e 407.4(M+H)+。
d)(±)-4-[2-(1,4-二甲氧基-1,4-二氧代丁基)氨基]-3-[[N-(3,3-二甲基丁基)-N-(叔丁氧基羰基)]氨基]甲基苯甲酸叔丁酯將4-氨基-3-[[N-(3,3-二甲基丁基)-N-(叔丁氧基羰基)]氨基]甲基苯甲酸叔丁酯(5.6g,13.79mmol)和二羧酸二甲基乙炔酯(1.86ml,15.17mmol)在甲醇(28ml)中的溶液加熱回流1小時，然后冷至室溫。將產(chǎn)生的溶液與甲醇(80ml)和10％Pd/C(2.9g,2.76mmol)合并，并于氫氣環(huán)境(50psi)室溫下在Parr裝置上振搖所述混合物。22小時后，通過celite_過濾所述反應物，將濾液在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上濃縮。將殘留物在氯仿中再濃縮(去除甲醇)，然后經(jīng)硅膠層析(用25％乙酸乙酯/己烷洗脫)。得到微弱黃色油狀的目標化合物(2.64g,42％)MS(ES)m/e 551.2(M+H)+。
e)(±)-2,3,4,5-四氫-7-羧基-4-(3,3-二甲基丁基)-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸甲酯于0℃將TFA(25ml)一次性加至(±)-4-[2-(1,4-二甲氧基-1,4-二氧代丁基)氨基]-3-[[N-(3,3-二甲基丁基)-N-(叔丁氧基羰基)]氨基]甲基苯甲酸叔丁酯(12.64g,4.8mmol)在無水二氯甲烷(25ml)的溶液中，將微弱黃色的溶液溫熱至室溫。1小時后，在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上濃縮所述溶液，從甲苯中再濃縮殘留物(去除殘留的TFA)。將殘留的油狀物與甲苯(50ml)以及Et3N(3.34ml,24mmol)合并，加熱回流所述混合物。產(chǎn)生淡黃色均一的溶液。16小時后，在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上濃縮所述反應液得到固體殘留物。將其溶于少量的甲醇(約10ml)中，用水(10ml)稀釋，用冰乙酸酸化至pH4.5。過濾所述混合物，順序用甲醇和乙醚洗滌所述沉淀，然后在高度真空下干燥得到幾乎無色的粉末目標化合物(1.88g,93％)MS(ES)m/e 363.2(M+H)+。
制備3雙[(苯并咪唑-2-基)甲基]胺三(三氟乙酸鹽)的制備a)雙[[1-N-(叔丁氧基羰基)苯并咪唑-2-基]甲基]-N-(叔丁氧基羰基)胺將1-(叔丁氧基羰基)-2-(溴代甲基)苯并咪唑(P50256-1,2.00g,9.48mmol)在THF(30ml)中的溶液加至2-氨基甲基苯并咪唑二鹽酸鹽水化物(6.26g,28.4mmol)和三乙胺(4.0ml,28.4mmol)在無水THF(50ml)中的攪拌的溶液中。8小時后，緩慢加入碳酸氫二叔丁酯(10.0g,45.84mmol)在氯仿(50ml)中的溶液。于室溫下將產(chǎn)生的混合物攪拌過夜然后濃縮。將殘留物吸收于二氯甲烷(150ml)中，順序用水(60ml)、5％碳酸氫鈉(60ml)和鹽水(60ml)洗滌。干燥(硫酸鎂)，濃縮，經(jīng)硅膠層析(6％甲醇/二氯甲烷洗脫)得到為微弱黃色油狀物的目標化合物(0.46g,8％)MS(ES)m/e 578.4(M+H)+。
b)雙[(苯并咪唑-2-基)甲基]胺三(三氟乙酸鹽)于室溫下將TFA(3ml)和二氯甲烷(9ml)的溶液一次性加至雙[[1-N-(叔丁氧基羰基)苯并咪唑-2-基]甲基]-N-(叔丁氧基羰基)胺(0.23g,0.4mmol)中。35分鐘后，在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上濃縮所述溶液，將殘留物在甲苯中再濃縮(去除殘留的TFA)得到為灰白色粉末的目標化合物(0.17g,68％)MS(ES)m/e 278.0(M+H)+。
制備42-[[1-[(苯并咪唑-2-基)甲基]苯并咪唑]甲基]胺雙(三乙酸鹽)的制備a)[[1-N-(叔丁氧基羰基)苯并咪唑-2-基]甲基]-N-(叔丁氧基羰基)胺于0℃將碳酸氫二叔丁酯(6.54g,30.0mmol)在二氯甲烷(50ml)中的溶液加至2-氨基甲基苯并咪唑二鹽酸鹽水化物(3.0g,13.63mmol)和三乙胺(8.44ml,61.3mmol)在無水二氯甲烷(50ml)中的攪拌的溶液中。于室溫下將所述反應物攪拌1小時，然后加入更多的三乙胺(1.9ml,13.8mmol)和碳酸氫二叔丁酯(2.97g,13.63mmol)。于室溫下攪拌生成的混合物24小時，再濃縮。將殘留物吸收于二氯甲烷(50ml)中并順序用0.5NHCl(2×40ml)、5％碳酸氫鈉(50ml)和鹽水(50ml)洗滌。使粗的產(chǎn)物從二氯甲烷/乙醚中重結(jié)晶得到為白色粉末的目標化合物(2.8g,59％)MS(ES)m/e 348.2(M+H)+。
b)2-[[1-[[(1-(叔丁氧基羰基)苯并咪唑-2-基]甲基]苯并咪唑]甲基]-N,N-二-(叔丁氧基羰基)胺將1-(叔丁氧基羰基)-2-(溴代甲基)苯并咪唑(0.6g,1.93mmol)加至[[1-N-(叔丁氧基羰基)苯并咪唑-2-基]甲基]-N-(二叔丁氧基羰基)胺(0.6g,1.73mmol)和氫化鈉(0.1g,4.17mmol)在無水THF(12ml)和DMF(4ml)中的攪拌的溶液中。于室溫下將產(chǎn)生的混合物攪拌1小時，然后濃縮。將殘留物吸收于二氯甲烷(100ml)中，然后順序用水(50ml)、5％碳酸氫鈉(30ml)和鹽水(30ml)洗滌。干燥(硫酸鎂)，濃縮，經(jīng)硅膠層析(2∶3乙酸乙酯/己烷洗脫)得到為微弱黃色油狀物的目標化合物(0.27g,27％)MS(ES)m/e 578.2(M+H)+。
c)2-[[1-[(苯并咪唑-2-基)甲基]苯并咪唑]甲基]胺雙(三氟乙酸鹽)于室溫下將所有的TFA/CH2Cl2(30ml,25％)溶液一次性加至2-[[1-[[(1-(叔丁氧基羰基)苯并咪唑-2-基]甲基]苯并咪唑]甲基]-N,N-二-(叔丁氧基羰基)胺(0.25g,0.43mmol)中。25分鐘后，在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上濃縮所述溶液，使粗的產(chǎn)物在二氯甲烷/乙醚中重結(jié)晶得到為灰白色粉末的目標化合物(0.17g,63％)MS(ES)m/e 278.0(M+H)+。
實施例1(±)-2,3,4,5-四氫-7-[[[(4-氮雜-5-甲基苯并咪唑-2-基)甲基]氨基]羰基]-4-(2-甲氧基乙基)-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸的制備a)(±)-2,3,4,5-四氫-7-[[[(4-氮雜-5-甲基苯并咪唑-2-基)甲基]氨基]羰基]-4-(2-甲氧基乙基)-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸甲酯于室溫下將EDC(138mg,0.72mmol)加至(±)-7-羧基-4-(2-甲氧基乙基)-3-氧代-2,3,4,5-四氫-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸甲酯(202mg,0.60mmol)、2-(氨基甲基)-4-氮雜-5-甲基苯并咪唑二鹽酸鹽(0.72mmol)、HOBt.H2O(97mg,0.72mmol)和二異丙基乙胺(0.84ml,4.8mmol)在無水CH3CN(3ml)中的溶液中。16小時后，濃縮所述反應物，在二甲苯/氯仿中再濃縮殘留物。經(jīng)硅膠層析(15％甲醇/氯仿)得到目標化合物(不純)TLC Rf(15％甲醇/氯仿)0.55；MS(ES)m/e 481.5(M+H)+。不經(jīng)進一步純化使用。
b)(±)-2,3,4,5-四氫-7-[[[(4-氮雜-5-甲基苯并咪唑-2-基)甲基]氨基]羰基]-4-(2-甲氧基乙基)-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸于室溫下將兩相的(±)-2,3,4,5-四氫-7-[[[(4-氮雜-5-甲基苯并咪唑-2-基)甲基]氨基]羰基]-4-(2-甲氧基乙基)-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸甲酯(0.60mmol)、1.0N LiOH(1.8ml,1.8mmol)和THF(4.2ml)的混合物攪拌45分鐘，然后濃縮去除THF。用乙醚(2×2ml)洗滌水層，并棄去乙醚層。用乙腈(2ml)稀釋水層并用TFA(0.23ml)酸化。在rovatap上濃縮產(chǎn)生的溶液至干，將殘留物經(jīng)ODS層析純化(12％乙腈/水含有O.1％TFA(250ml)，然后15％乙腈/水，含有0.1％TFA)。濃縮并冷凍干燥得到為淡黃色粉末的目標化合物(199.5mg,50％兩步產(chǎn)率)HPLC(PRP-1_,15％CH3CN/H2O含有0.1％TFA)K1=1.4；MS(ES)m/e 467(M+H)+.計算值C23H26N6O5·1.5CF3CO2H·1.33 H2OC,47.21；H,4.60；N,12.70.實測值C,47.20；H,4.73；N,12.79.
實施例2(±)-2,3,4,5-四氫-7-[[[(苯并咪唑-2-基)甲基]氨基]羰基]-4-(2-甲氧基乙基)-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸的制備a)(±)-2,3,4,5-四氫-7-[[[(苯并咪唑-2-基)甲基]氨基]羰基]-4-(2-甲氧基乙基)-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸甲酯于室溫下將EDC(230mg,1.2mmol)加至(±)-7-羧基-4-(2-甲氧基乙基)-3-氧代-2,3,4,5-四氫-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸甲酯(336.4mg,1.0mmol)、2-(氨基甲基)苯并咪唑二鹽酸鹽水化物(264mg,1.2mmol)、HOBt.H2O(162mg,1.2mmol)和二異丙基乙胺(0.70ml,4.0mmol)在無水DMF(5ml)中的溶液中。17小時后，濃縮所述反應物，自二甲苯(2x)中用濃縮殘留物以除去DMF。用水(3ml)稀釋殘留物，用氯仿(3×5ml)萃取。用甲醇(2ml)處理合并的萃取物以溶解沉淀，然后干燥(硫酸鎂)并濃縮。在二甲苯中再濃縮(去除殘留的DMF)殘留物淡黃色固體。將其溶于甲醇/氯仿中，并濃縮所述溶液得到油狀物。經(jīng)硅膠層析(10％甲醇/氯仿)得到灰白色固體，將其與乙酸乙酯(3ml)一起研磨得到為無色固體的目標化合物(397.1mg,85％)TLC Rf(10％甲醇/氯仿)0.46；MS(ES)m/e 466.2(M+H)+。
b)(±)-2,3,4,5-四氫-7-[[[(苯并咪唑-2-基)甲基]氨基]羰基]-4-(2-甲氧基乙基)-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸于室溫下將1.0N LiOH(1.0ml,1.0mmol)加至(±)-2,3,4,5-四氫-7-[[[(苯并咪唑-2-基)甲基]氨基]羰基]-4-(2-甲氧基乙基)-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸甲酯(397mg,0.85mmol)在THF(4.3ml)和水(3.3ml)中的懸浮液中。于40-50℃將淡黃色的混合物攪拌1小時，然后于室溫下將產(chǎn)生的均一的溶液攪拌17.5小時。濃縮所述反應物，將產(chǎn)生的油狀物溶于水(4ml)中。過濾所述溶液去除微粒，然后用1.0N鹽酸(1.0ml)中和濾液。收集黃色的固體并與熱的1∶1的乙腈/水在充分攪拌下研磨。收集產(chǎn)生的固體，用大量的1∶1的乙腈/水洗滌，并在高度真空下(40℃)干燥得到為無色粉末的目標化合物(327.9mg,85％)HPLC(PRP-1_,15％CH3CN/H2O含有0.1％TFA)K’=4.6；MS(ES)m/e 452.2(M+H)+.計算值C23H25N5O5C,61.19；H,5.58；N,15.51.實測值C,61.18；H,5.58；N,15.39.
實施例3(±)-4-[4-[[[(1H-苯并咪唑-2-基)甲基]甲基氨基]羰基]苯基]-3-苯基丁酸的制備a)3-羥基-4-(4-甲氧基苯基)-3-苯基丁酸乙酯于-78℃氬氣環(huán)境下用5-6分鐘將無水乙酸乙酯(4.3ml,44mmol)滴加至雙(三甲基甲硅烷基)氨化鋰(1.0M于THF中，40ml,40mmol)在無水THF(60ml)中的于火焰干燥的燒瓶中溶液中。于-78℃將黃色溶液攪拌0.5小時，然后用12分鐘滴加2-(4-甲氧基苯基)-1-苯基乙酮(Chem.Ber.1958,91,755-759；4.53g,20mmol)在無水THF(20ml)中的溶液。使用另外的THF(2ml)作為轉(zhuǎn)移劑。0.5小時后，用飽和的氯化銨(120ml)驟冷所述反應物并溫熱至室溫。用乙酸乙酯萃取，干燥(硫酸鎂)，濃縮，經(jīng)硅膠層析(20％乙酸乙酯/己烷)得到為淡黃色油狀物的目標化合物(6.13g,96％)TLCRf(20％EtOAc/己烷)0.34；MS(ES)m/e 315.2(M+H)+.
b)4-(4-甲氧基苯基)-3-苯基丁酸乙酯于0℃氬氣環(huán)境下用3分鐘將三氟硼烷醚化物(4.8ml,39mmol)滴加至3-羥基-4-(4-甲氧基苯基)-3-苯基丁酸乙酯(6.13g,19.5mmol)和三乙基硅烷(6.2ml,39mmol)在無水二氯甲烷(49ml)中的溶液中。于室溫下將所述反應物攪拌過夜，然后用5％碳酸氫鈉(100ml)驟冷。將所述混合物快速攪拌10分鐘，然后分離。用二氯甲烷(100ml)萃取水層，干燥(硫酸鈉)合并的有機層并濃縮。將殘留物從己烷(去除二氯甲烷)再濃縮殘留黃色油狀物。將其溶于無水乙醇(100ml)，加入10％Pd/C(775mg,1.95mmol)。于室溫氫氣(50psi)環(huán)境下在Parr裝置上振搖所述混合物2小時，然后通過celite_過濾。濃縮濾液，將殘留物經(jīng)硅膠層析(15％乙酸乙酯/己烷)。獲得為無色油狀物的目標化合物(5.27g,91％)TLCRf(15％EtOAc/己烷)0.40；MS(ES)m/e 299.2(M+H)+.
c)4-(4-羥基苯基)-3-苯基丁酸乙酯于0℃氬氣環(huán)境下將所有的無水三氯化鋁(4.49g,33.7mmol)一次性加至4-(4-甲氧基苯基)-3-苯基丁酸乙酯(2.01g,6.74mmol)和乙硫醇(2.5ml,33.7mmol)在無水二氯甲烷(67ml)中的溶液中。將黃色的溶液溫熱至室溫并攪拌3小時，然后再冷至0℃并用3N冷鹽酸(67ml)驟冷。將所述混合物攪拌5分鐘，然后分離。用二氯甲烷(2×100ml)萃取水層，干燥(硫酸鈉)合并的有機層并濃縮。經(jīng)硅膠層析(25％乙酸乙酯/己烷)得到為無色油狀物的目標化合物(1.84g,96％)TLC Rf(30％EtOAc/己烷)0.47；MS(ES)m/e 285.2(Md)3-苯基-4-[4-(三氟甲磺酰氧基)苯基]丁酸乙酯于-78℃氬氣環(huán)境下將三氟甲磺酸酐(1.4ml,8.4mmol)迅速滴加至4-(4-羥基苯基)-3-苯基丁酸乙酯(1.84g,6.47mmol)和2,6-二甲基吡啶(1.5ml,12.9mmol)在無水二氯甲烷(32ml)中的溶液中。0.5小時后，將所述黃色溶液溫熱至室溫并攪拌1小時。用乙醚(150ml)稀釋所述反應物并順序用1.0N鹽酸(15ml)、5％碳酸氫鈉(15ml)和飽和鹽水(15ml)洗滌。干燥(硫酸鎂)，濃縮，經(jīng)硅膠層析(15％乙酸乙酯/己烷)得到幾乎無色的油狀物的目標化合物(2.62g,97％)TLCRf(20％EtOAc/己烷)0.55；MS(ES)m/e 417.0(M+H)+.
e)4-(4-羧基苯基)-3-苯基丁酸乙酯向3-苯基-4-[4-(三氟甲磺酰氧基)苯基]丁酸乙酯(2.62g,6.29mmol)、無水乙酸鉀(2.47g,25.16mmol)、Pd(OAc)2(70.6mg,0.31mmol)、dppf(697.4mg,1.26mmol)和無水DMSO(31ml)的混合物中通入一氧化碳(三個排空/充入一氧化碳的循環(huán)，然后再向混合物中通入一氧化碳5分鐘)，然后于70℃一氧化碳下加熱。3.5小時后，用水(31ml)稀釋，在冰上冷卻，用1.0N鹽酸(25ml)酸化，用二氯甲烷(2×100ml)萃取，干燥(硫酸鎂)，濃縮，在甲苯中再濃縮殘留紅桔色的液體。經(jīng)硅膠層析(1％AcOH 7∶3甲苯/乙酸乙酯)得到為奶油色固體的目標化合物(1.78g,91％)TLC Rf(1％AcOH in 7∶3甲苯/EtOAc)0.47；MS(ES)m/e 313.2(M+H)+.
f)(±)-4-[4-[[[(1H-苯并咪唑-2-基)甲基]甲基氨基]羰基]苯基]-3-苯基丁酸乙酯于室溫下將EDC(230mg,1.2mmol)加至4-(4-羧基苯基)-3-苯基丁酸乙酯(312.4mg,1.0mmol)、2-(甲基氨基甲基)苯并咪唑二鹽酸鹽(28lmg,1.2mmol)、HOBt.H2O(162mg,1.2mmol)和二異丙基乙胺(0.70ml,4.0mmol)在無水乙腈(5ml)中的溶液中。18小時后，濃縮所述反應物，將棕色殘留物經(jīng)硅膠層析(5％MeOH在1∶1乙酸乙酯/氯仿中)。獲得為淡桔色泡沫狀物的目標化合物(439.2mg,96％)TLC Rf(5％MeOH于1∶1 EtOAc/CHCl3)0.50；MS(ES)m/e 456.2(M+H)+.
g)(±)-4-[4-[[[(1H-苯并咪唑-2-基)甲基]甲基氨基]羰基]苯基]-3-苯基丁酸于50℃攪拌(±)-4-[4-[[[(1H-苯并咪唑-2-基)甲基]甲基氨基]羰基]苯基]-3-苯基丁酸乙酯(439.2mg,0.96mmol)和1.0N氫氧化鈉(1.2ml,1.2mmol)在乙醇(8.4ml)中的溶液。24小時后，將所述反應物濃縮至干，將殘留物經(jīng)ODS層析(35％甲醇/水)純化。濃縮并冷凍干燥得到為無色粉末的目標化合物(412.2mg,86％)HPLC(PRP-1_,35％CH3CN/H2O含有0.1％TFA)K1=1.4；MS(ES)428(M+H)+,450(M+Na)-.計算值C26H24N3O3Na·2.75H2OC,62.58；H,5.96；N,8.42.實測值C,62.34；H,5.84；N,8.44.
實施例4(±)-4-[4-[[[(苯并咪唑-2-基)甲基]甲基氨基]羰基]苯基]-3-(二甲基氨基羰基)丁酸的制備a)4-溴代苯甲酸叔丁酯將三氟甲磺酸(0.18ml,2mmol)滴加至4-溴代苯甲酸(20.10g,100mmol)、無水二氯甲烷(100ml)和濃縮異丁烯(-78℃,100ml)的混合物中，在干冰/丙酮冷凝器下使產(chǎn)生的混合物回流。40分鐘后，加入更多的異丁烯(30ml)，然后繼續(xù)回流20分鐘。將所述反應物傾至乙醚(500ml)中并順序用1.0N氫氧化鉀(2×50ml)、水(50ml)和飽和鹽水(50ml)洗滌。干燥(硫酸鎂)，濃縮并經(jīng)硅膠層析(5％乙酸乙酯/己烷)得到為淡黃色油狀物的目標化合物(15.28g,59％)TLC Rf(5％EtOAc/己烷)0.59；MS(ES)m/e259/257(M+H)+.
b)3-[4-(叔丁氧基羰基)苯基]丙烯酸甲酯將4-溴代苯甲酸叔丁酯(5.14g,20mmol)、丙烯酸甲酯(9.1ml,100mmol)、乙酸鈀(224.5mg,1mmol)、三對甲苯基膦(608.8mg,2mmol)和二異丙基乙胺(7.0ml,40mmol)在丙腈(100ml)中回流3小時，然后在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上濃縮。用乙醚(200ml)稀釋殘留物，并順序用1.0N鹽酸(2×50ml)、5％碳酸氫鈉(50ml)和飽和的鹽水(50ml)洗滌。干燥(硫酸鎂)，濃縮并經(jīng)硅膠層析(15％乙酸乙酯/己烷)得到為淡黃色固體的目標化合物(3.34g,64％)TLC Rf(20％EtOAc/己烷)0.51；MS(ES)m/e 263.0(M+H)+.
c)3-[4-(叔丁氧基羰基)苯基]丙酸甲酯將10％Pd/C(2.71g,2.55mmol)加至3-[4-(叔丁氧基羰基)苯基]丙烯酸甲酯(3.34g,12.73mmol)在甲醇(65ml)和乙酸乙酯(65ml)中的溶液中，于室溫下將所述混合物于氫氣環(huán)境下(50psi)在Parr裝置上振搖。3小時后，通過celite_過濾所述反應物，在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上將濾液濃縮至干。在己烷中再濃縮殘留為渾濁灰色油狀物的目標化合物(3.27g,97％)TLCRf(20％EtOAc/己烷)0.63；MS(ES)m/e 265.0(M+H)+.
d)3-[4-(叔丁氧基羰基)苯基]丙酸于室溫下將3-[4-(叔丁氧基羰基)苯基]丙酸甲酯(3.27g,12.37mmol)、1.0N LiOH(14.8ml,14.8mmol)、THF(31ml)和水(16ml)的混合物攪拌1.5小時，然后在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上濃縮以去除THF。用乙醚(2×30ml)洗滌水溶液并棄去乙醚層。用1.0N鹽酸(約17ml)酸化水層，用氯仿(3×50ml)萃取所述混合物。干燥(硫酸鈉)并濃縮得到為無色粉末的目標化合物(3.04g,98％)mp 88.5-89.5℃；MS(DCI/NH3)m/e268.0(M+NH4)+。
e)N,N-二甲基3-[4-(叔丁氧基羰基)苯基]丙酰胺于室溫下將EDC(2.09g,10.88mmol)加至3-[4-(叔丁氧基羰基)苯基]丙酸(2.27g,9.07mmol)、二甲胺鹽酸鹽(0.88g,10.88mmol)、HOBt.H2O(1.47g,10.88mmol)和二異丙基乙胺(3.2ml,18.14mmol)在無水乙腈(45ml)中的溶液中。19.5小時后，濃縮所述反應物，將殘留物經(jīng)硅膠層析(乙酸乙酯)。獲得為無色油狀物的目標化合物(2.46g,98％)TLC Rf(EtOAc)0.52；MS(ES)m/e 278.4(M+H)+.
f)4-[4-(叔丁氧基羰基)苯基]-3-(二甲基氨基羰基)丁酸乙酯于-78℃氬氣環(huán)境下用2.5分鐘將雙(三甲基甲硅烷)氨化鋰在THF(1.0M,5.8ml,5.8mmol)中的溶液滴加至N,N-二甲基3-[4-(叔丁氧基羰基)苯基]丙酰胺(1.34g,4.83mmol)在無水THF(48ml)中的溶液中。于-78℃將黃色的溶液攪拌0.5小時，然后用15秒沿燒瓶壁(預冷的)加入溴代乙酸乙酯(2.7ml,24.15mmol)。0.5小時后，將所述反應物傾至飽和的氯化銨(50ml)中，用乙酸乙酯(2×100ml)萃取所述混合物。干燥(硫酸鎂)，濃縮并從二甲苯中再濃縮殘留淡黃色油狀物。經(jīng)硅膠層析(1∶1乙酸乙酯/己烷)得到為淡黃色油狀物的目標化合物(453.5mg,26％)TLC Rf(1∶1 EtOAc/己烷)0.44；MS(ES)m/e 364.2(M+H)+.
g)4-(4-羧基苯基)-3-(二甲基氨基羰基)丁酸乙酯于0℃將所有的TFA(2.3ml)一次性加至4-[4-(叔丁氧基羰基)苯基]-3-(二甲基氨基羰基)丁酸乙酯(168.6mg,0.46mmol)在無水二氯甲烷(2.3ml)中的溶液中。于室溫下將所述溶液攪拌0.5小時，然后在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上濃縮至干。將殘留物在甲苯中再濃縮得到為淡黃色油狀物的目標化合物MS(ES)m/e 308.0(M+H)+.
h)(±)-4-[4-[[[(苯并咪唑-2-基)甲基]甲基氨基]羰基]苯基]-3-(二甲基氨基羰基)丁酸乙酯于室溫下將EDC(105.8mg,0.55mmol)加至4-(4-羧基苯基)-3-(二甲基氨基羰基)丁酸乙酯(0.46mmol)、2-(甲基氨基甲基)苯并咪唑二鹽酸鹽(129.2mg,0.55mmol)、HOBt.H2O(74.6mg,0.55mmol)和二異丙基乙胺(0.32ml,1.84mmol)在無水乙腈(2.3ml)中的溶液中。22小時后，濃縮所述反應物，將黃色的殘留物經(jīng)硅膠層析(10％甲醇1∶1乙酸乙酯/氯仿)。獲得為淡黃色油狀物的目標化合物(191.5mg,92％)TLC Rf(10％MeOH in 1∶1 EtOAc/CHCl3)0.44；MS(ES)m/e451(M+H)+.
i)(±)-4-[4-[[[(苯并咪唑-2-基)甲基]甲基氨基]羰基]苯基]-3-(二甲基氨基羰基)丁酸于室溫下將(±)-4-[4-[[[(苯并咪唑-2-基)甲基]甲基氨基]羰基]苯基]-3-(二甲基氨基羰基)丁酸乙酯(191.5mg,0.43mmol)和1.0N氫氧化鋰(0.52ml,0.52mmol)在THF(2.2ml)和水(1.6ml)中的溶液攪拌17小時，然后用TFA(0.10ml,1.29mmol)酸化。濃縮得到殘留物的水溶液，經(jīng)ODS層析純化(17％乙腈/水，含有0.1％TFA，用15％乙腈/水，含有0.1％TFA再次層析)。濃縮并冷凍干燥得到為無色粉末的目標化合物(133.4mg,47％)HPLC(PRP-1_,20％CH3CN/H2O含有0.1％TFA)K’=1.3；MS(ES)m/e423.2(M+H)+.計算值C23H26N4O4.2CF3CO2H·0.5H2OC,49.17；H,4.43；N,8.49.實測值C,49.13；H,4.62；N,8.52.
實施例5(S)-2,3,4,5-四氫-7-[[[(苯并咪唑-2-基)甲基]甲基氨基]羰基]-4-甲基-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸,[(2,2-二甲基-2-甲氧基乙?；?氧基]甲酯的制備a)(S)-2,3,4,5-四氫-7-[[[[1-(叔丁氧基羰基)苯并咪唑-2-基)甲基]甲基氨基]羰基]-4-甲基-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸向(S)-2,3,4,5-四氫-7-[[[(苯并咪唑-2-基)甲基]甲基氨基]羰基]-4-甲基-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸(444mg,1.0mmol)、三乙胺(0.1464ml,1.05mmol)在DMF(8ml)中的混合物中滴加碳酸氫二叔丁酯(230mg,1.05mmol)在DMF(2ml)中的溶液。于室溫下將所述反應混合物攪拌18小時。取一份進行測定表明僅有50％轉(zhuǎn)化。再加入另一份量的三乙胺和碳酸氫二叔丁酯并繼續(xù)攪拌18小時。測定表明仍然有部分未反應的物質(zhì)，因此加入第三份量的反應試劑并再攪拌18小時。將所述反應混合物濃縮至干，將殘留的油狀物與水一起研磨，過濾并于40-50℃真空干燥得到為白色固體的目標化合物(0.442g,85％)。MS(ES)m/e 522.4[M+H]+。
b)(S)-2,3,4,5-四氫-7-[[[[1-(叔丁氧基)苯并咪唑-2-基)甲基]甲基氨基]羰基]-4-甲基-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸，[(2,2-二甲基-2-甲氧基乙酰基)氧基]甲酯向?qū)嵤├?a化合物(0.209g,0.4mmol)在無水丙酮(10ml)中的溶液中加入無水碳酸鉀(0.25g,1.8mmol)。于室溫氬氣環(huán)境下將所述反應混合物攪拌1小時。然后加入2-甲氧基-2-甲基丙酸氯代甲酯(US4602012,7月,22日，1986)(0.334g,2.0mmol)，接著加入四丁基碘化銨(0.03g,0.08mmol)。于室溫氬氣環(huán)境下將所述反應物攪拌48小時。然后過濾并將濾液濃縮為黃色油狀物的目標化合物(0.67g，定量)。TLC Rf0.48(硅膠，6％甲醇于二氯甲烷中)。MS(ES)m/e 652.2[M+H]+。
c)(S)-2,3,4,5-四氫-7-[[[(苯并咪唑-2-基)甲基]甲基氨基]羰基]-4-甲基-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸，[(2,2-二甲基-2-甲氧基乙酰基)氧基]甲酯向?qū)嵤├?b化合物(0.67g,1mmol)于二氯甲烷(5mL)的溶液中加入TFA(1mL)。于RT在氬氣下將反應物攪拌4h。將其濃縮至干，用二氯甲烷將殘余物蒸發(fā)三次以除去痕量TFA，得到目標化合物(0.4g,73％)。將其于快速硅膠柱上純化(梯度，2-3％甲醇于二氯甲烷中)。收集含有純化合物的部分，濃縮得到灰白色固體的目標化合物(65mg)。MS(ES)m/e 552.2[M+H]+.1H NMR(400MHz,(CDCl3)δ7.6(br s,1H),7.22(m,6H),6.5(d,1H),5.85(d,1H),5.8(d,1H),5.4(d,1H),5.05(m,1H),4.79(q,2H),4.3(d,1H),3.7(d,1H),3.25(s,3H),3.15(s,3H),3.05(s,3H),3.02(dd,1H),2.7(dd,1H),1.4(s,6H)計算值C28H33N5O7·1.25H2OC,58.58；H,6.23；N,12.20.實測值C,58.60,H,5.94,N,12.00.
實施例6(±)-2,3,4,5-四氫-7-[[[(苯并咪唑-2-基)甲基]氨基]羰基]-4-甲基-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-(N-羥基)乙酰胺的制備a)(±)-2,3,4,5-四氫-7-[[[(苯并咪唑-2-基)甲基氨基]羰基]-4-甲基-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-(N-羥基)乙酰胺將NaOMe(Aldrich,25％wt.的MeOH溶液，2.2mL,9.7mmol)于45℃加至鹽酸羥胺(0.69g,9.7mmol)于MeOH(40mL)的溶液中，將混合物攪拌5min。將(±)-2,3,4,5-四氫-7-[[[(苯并咪唑-2-基)甲基]氨基]羰基]-4-甲基-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸甲酯(0.82g,1.9mmol)混懸于MeOH(2mL)和THF(15mL)中，并將其滴加到上述溶液中。然后將反應于45℃攪拌24小時。將混合物于真空中濃縮，然后用含有0.1％TFA的10％CH3CN/H2O(5mL)處理。所有的物質(zhì)溶解，然后一種固體沉淀出來。通過加入過量的TFA將該物質(zhì)的一半溶入流動相，并用制備HPLC(YMC ODS-AQ,50x250mm，流速=80mL/min，含有0.1％TFA的10％CH3CN/H2O；tR=57min)純化得到作為白色固體的目標化合物(91mg,22％)。MS(ES)m/e 423.1[M+H]+.1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.06(bt,J=4Hz,1H),7.77(m,2H),7.58(m,2H),7.50(m,2H),6.60(d,J=10Hz,1H),6.40(bs,1H),5.52(d,J=19Hz,1H),5.18(bt,J=9Hz,1H),4.85(d,J=6Hz,1H),3.83(d,J=19Hz,1H),2.95(s,3H),2.60(dd,J=17,9Hz,1H),2.28(dd,J=15,7Hz,1H).
計算值C21H22N6O4·1.5C2HF3O2·1.0H2O)C,47.14；H,4.20；N,13.74.實測值C,46.95；H,4.24；N,13.37.
實施例7(±)-2,3,4,5-四氫-7-[3-(苯并咪唑-2-基)苯基]-4-甲基-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸的制備a)2-(3-碘代苯基)苯并咪唑?qū)⒙却姿岙惗□?2.9mL,21mmol)加至3-碘代苯甲酸(5.0g,20mmol)和Et3N(3.7mL,26mmol)于THF(50mL)中的冷的溶液中。將溶液于10℃攪拌1h。將所有的溶液緩慢加入1,2-二氨基苯(2.2g,20mmol)于THF(50mL)的溶液中。18hr后，將反應物濃縮，殘余物在EtOAc和5％Na2CO3之間分配。分層，用水洗滌EtOAc層。濃縮有機層得到殘余物，用EtOAc處理該殘余物并持續(xù)15min。過濾得到一種固體，用AcOH(50mL)處理并加熱至110℃。18hr后，將溶液濃縮。用EtOAc處理殘余物，將溶液過濾得到目標化合物(3.14g,50％)MS(ES)m/e321.2(M+H)+。b)2-[(3-三丁基甲錫烷基)苯基]苯并咪唑在氬氣下，將2-(3-碘代苯基)苯并咪唑(1.0g,3.1mmol)、雙三丁基錫(3.9mL,6.2mmol)和PdCl2(PPh3)2(100mg,0.14mmol)于DMF(10mL)中的溶液加熱至90℃。2hr后，將溶液濃縮。用正己烷處理殘余物并過濾。加入EtOAc并將溶液過濾。將濾液濃縮得到目標化合物(812mg,54％)MS(ES)m/e 485.4(M+H)+。c)(±)-2,3,4,5-四氫-1-(叔-丁氧基羰基)-7-碘代-4-甲基-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸甲酯將碳酸氫二叔丁基酯(2.0g,8.6mmol)加至7-碘代-4-甲基-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸甲酯(1.6g,4.3mmol)和DMAP(10mg,0.08mmol)于CH3CN(10mL)的溶液中，將溶液于RT攪拌。間斷性的加入另外的雙碳酸二叔丁基酯(總量為8g,34.4mmol)直到反應完成。濃縮和硅膠層析得到目標化合物(1.8g,90％)MS(ES)m/e497.2(M+H)+。d)(±)-2,3,4,5-四氫-7-[3-(苯并咪唑-2-基)苯基]-1-(叔-丁氧基羰基)-4-甲基-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸甲酯將2-[(3-三丁基甲錫烷基)苯基]苯并咪唑(0.24g,0.5mmol)、(±)-1-(叔-丁氧基羰基)-7-碘代-4-甲基-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸甲酯(0.223g,0.7mmol)、CuI(10mg,0.05mmol)和PdCl2(PPh3)2(40mg,0.05mmol)于DMF(10mL)中的混合液在氬氣下加熱至100℃。18hr后，將溶液濃縮。經(jīng)硅膠層析后得到目標化合物(0.06g,22％)MS(ES)m/e 541.5(M+H)+。e)(±)-2,3,4,5-四氫-7-[3-(苯并咪唑-2-基)苯基]-4-甲基-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸甲酯將(±)-2,3,4,5-四氫-7-[3-(苯并咪唑-2-基)苯基]-1-(叔-丁氧基羰基)-4-甲基-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸甲酯(0.06g,0.11mmol)于4MHCl/二氧六環(huán)(3mL)中的溶液于室溫下攪拌1hr。將溶液濃縮得到目標化合物(0.05g,100％)MS(ES)m/e 441.4(M+H)+。f)(±)-2,3,4,5-四氫-7-[3-(苯并咪唑-2-基)苯基]-4-甲基-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸于室溫下將1.0N NaOH(0.22mL,0.22mmol)滴加到(±)-2,3,4,5-四氫-7-[3-(苯并咪唑-2-基)苯基]-4-甲基-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸甲酯(0.05g,0.11mmol)于1∶1MeOH/H2O(2mL)的溶液中，將所得溶液攪拌18hr，然后濃縮。將殘余物溶入水，用AcOH將溶液酸化至pH4(Litmus試紙)。過濾即得目標化合物(0.005g,10％)1H NMR(250MHz,DMSO-d6)δ2.4-2.9(m,2H),3.0-3.1(s,3H),3.8-4.0(d,1H),5.0-5.1(m,1H),5.5-5.6(d,1H),6.7-6.8(d,1H),7.5-8.5(m,11H)；MS(ES)m/e 427.5(M+H)+.計算值C25H22N4O31.5HCl·1.0AcOH·0.5H2OC,58.94；H,5.22；N,10.18.實測值C,59.00；H,5.15；N,9.92.
實施例8(±)-2,3,4,5-四氫-4-甲基-3-氧代-7-[[[(菲咪唑-2-基)甲基]氨基]羰基]-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸的制備a)2-[[(N-芐氧基羰基)氨基]甲基]菲咪唑根據(jù)實施例7(a)的一般流程，用N-Cbz-丙氨酸代替3-碘代苯甲酸，用9,10-二氨基菲代替1,2-二氨基苯，制備目標化合物(0.41g,45％)MS(ES)m/e 382.4(M+H)+。b)2-(氨基甲基)菲咪唑?qū)?-[[(N-芐氧基羰基)氨基]甲基]菲咪唑(0.2g,0.52mmol)于30％HBr的乙酸(0.8mL)中的溶液于室溫下攪拌1hr。將溶液濃縮，殘余物用Et2O處理。過濾即得作為油狀殘余物的目標化合物(0.138g,80％)MS(ES)m/e 248.3(M+H)+。c)(±)-2,3,4,5-四氫-4-甲基-3-氧代-7-[[[(菲咪唑-2-基)甲基]氨基]羰基]-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸甲酯于室溫下將EDC(0.08g,0.42mmol)加至2-(氨基甲基)菲咪唑(0.138g,0.42mmol)、(±)-7-羧基-4-甲基-3-氧代-2,3,4,5-四氫-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸甲酯(0.123g,0.42mmol)、HOBt·H2O(0.063g,0.42mmol)和Et3N(0.14mL,1mmol)于無水DMF(5mL)溶液中。18hr后，將反應物濃縮，殘余物在EtOAc與5％NaHCO3之間分配。分層，用水洗滌有機層。干燥(Na2SO4)和濃縮即得目標化合物(0.2g,90％)MS(ES)m/e 522.4(M+H)+。d)(±)-2,3,4,5-四氫-4-甲基-3-氧代-7-[[[(菲咪唑-2-基)甲基]氨基]羰基]-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸根據(jù)實施例7(f)的流程，將(±)-2,3,4,5-四氫-4-甲基-3-氧代-7-[[[(菲咪唑-2-基)甲基]氨基]羰基]-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸甲酯(0.2g,0.38mmol)經(jīng)皂化和純化即得目標化合物(0.014g,10％)
MS(ES)m/e 508.5(M+H)+.計算值C29H25N5O41.0 TFA 3.0H2OC,55.11；H,4.77；N,10.37.實測值C,55.38；H,5.13；N,10.74實施例9(±)-7-羧基-4-(2,2,2-三氟乙基)-3-氧代-2,3,4,5-四氫-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸甲酯的制備a)3-[(2,2,2-三氟乙基)氨基]甲基-4-硝基苯甲酸叔丁酯將3-溴代甲基-4-硝基苯甲酸叔丁酯(2.4g,8mmol)溶于無水THF(50ml)中，并立即一次性加入2,2,2-三氟乙胺(3ml,38mmol)。于室溫下將桔黃色溶液攪拌40分鐘，然后濃縮去除THF。將殘留物溶于乙醚(100ml)中并用10％碳酸鈉水溶液(50ml)和鹽水(5ml)洗滌兩次。干燥(硫酸鎂)有機層。濃縮并經(jīng)硅膠層析(2.5％-10％乙酸乙酯/己烷)得到為黃色油狀物的目標化合物(1.6g,63％)1HNMR(250MHz,CDCl3)δ8.21(d,J=1.3Hz,1H),8.03(dd,J=8.4,1.3 Hz,1H),7.96(d,J=8.4Hz,1H),4.20(s,2H),3.24(q,J=9.3Hz,2H),1.62(s,9H).
b)3-[[N-(2,2,2-三氟乙基)-N-(叔丁氧基羰基)-氨基]甲基-4-硝基苯甲酸叔丁酯于室溫下將碳酸氫二叔丁酯(2.15g,10mmol)一次性加至3-[(2,2,2-三氟乙基)氨基]甲基-4-硝基苯甲酸叔丁酯(1.6g,5mmol)在二氯甲烷(25ml)中的溶液中。濃縮所述反應物并于真空下加熱至50℃18小時。經(jīng)硅膠層析(2％-5％乙酸乙酯/己烷)得到為黃色油狀物的目標化合物(2g,96％)1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.85-8.15(m,3H),4.75-5.05(m,2H),3.80-4.10(m,2H),1.60(s,9H),1.15-1.80(m,9H).
c)4-氨基-3-[[N-(2,2,2-三氟乙基)-N-(-叔丁氧基羰基)氨基]甲基苯甲酸叔丁酯10％Pd/C(.4g,.4mmol)加至3-[[N-(2,2,2-三氟乙基)-N-(叔丁氧基羰基)氨基]甲基-4-硝基苯甲酸叔丁酯(2.0g,5mmol)在乙酸乙酯(20ml)中的溶液中。于室溫氫氣環(huán)境下(55psi)在Parr裝置上振搖所述混合物。4小時后，通過celite_過濾所述反應物，濃縮濾液得到為無色油狀物的目標化合物(1.9g,99％)1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.76(dd,J=8.5Hz,1.8Hz,1H),7.68(d,J=1.8Hz,1H),6.62(d,J=8.4Hz,1H),4.53(s,2H),3.69(m,2H),1.58(s,9H),1.51(m,9H).
d)(±)-4-[2-(1,4-二甲氧基-1,4-二氧代丁基)氨基]-3-[[N-(2,2,2-三氟乙基)-N-(叔丁氧基羰基)氨基]甲基苯甲酸叔丁酯將4-氨基-3-[[N-(2,2,2-三氟乙基)-N-(叔丁氧基羰基)]氨基]甲基苯甲酸叔丁酯(1.9g,5mmol)和乙炔二羧酸二甲酯(0.58ml,5.5mmol)在甲醇(10ml)中加熱回流60分鐘，然后冷至室溫。將產(chǎn)生的溶液與甲醇(20ml)和10Pd/C(0.5g,5mmol)合并，于室溫氫氣環(huán)境下(50psi)在Parr裝置上振搖所述混合物。3小時后，通過celite_過濾所述反應物，在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上濃縮濾液。得到為微弱黃色油狀物的目標化合物(1.6g,62％)1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.85(dd,J=8.4,2.0Hz,1H),7.68(d,J=2.0Hz,1H),6.65(d,J=8.4Hz,1H),6.15(br s,1H),4.55-4.70(m,2H),4.40(1/2 AB,J=15.3Hz,1H),3.71(s,3H),3.70(s,3H),3.35-3.50(m,2H),2.95(dd,J=16.9,6.8Hz,1H),2.84(dd,J=16.9,6.9Hz,1H),1.56(s,18H).
e)(±)-7-羧基-4-(2,2,2-三氟乙基)-3-氧代-2,3,4,5-四氫-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸甲酯于0℃將TFA(7ml)一次性加至(±)-4-[2-(1,4-二甲氧基-1,4-二氧代丁基)氨基]-3-[[N-(2,2,2-三氟乙基)-N-(叔丁氧基羰基)]氨基]甲基苯甲酸叔丁酯(1.6g,3mmol)在無水二氯甲烷(20ml)中，將微弱黃色的溶液溫熱至室溫。2小時后，在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上濃縮所述溶液，在甲苯中再濃縮殘留物(去除殘留的TFA)。將產(chǎn)生的油狀物與甲苯(10ml)和Et3N(2ml,15mmol)合并，于氬氣環(huán)境下加熱回流所述混合物。18小時冷卻所述溶液并真空濃縮至干。將殘留物溶于少量回流的甲醇(約15ml)中，用水(10ml)稀釋，用冰乙酸(4滴)酸化。將所述混合物置于冰箱過夜然后過濾。高度真空干燥固體得到為褐色粉末的目標化合物(0.80g,76％)1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.61(2,1H),7.57(dd,J=8.5,2Hz,1H),6.63(d,J=2Hz,1H),6.59(d,J=8.5Hz,1H),5.59(d,J=16.7Hz,1H),5.25(m,1H),4.28(m,2H),4.15(d,J=16.7Hz,1H),3.61(s,3H),2.86(dd,J=16.8,8.7Hz,1H),2.74(dd,J=16.8,5.4Hz,1H).
f)(±)-2,3,4,5-四氫-7-[[[(苯并咪唑-2-基)甲基]氨基]羰基]-3-氧代-4-(2,2,2-三氟乙基)-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸甲酯于室溫氬氣環(huán)境下將EDC(0.16g,0.86mmol)加至(±)-7-羧基-4-(2,2,2-三氟乙基)-3-氧代-2,3,4,5-四氫-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸甲酯(0.2g,0.71mmol)、HOBt.H2O(0.12g,0.86mmol)、2-氨基甲基苯并咪唑二鹽酸鹽(0.19g,0.86mmol)、DIEA(0.5ml,2.8mmol)和乙腈(5ml)的溶液中。于室溫下將產(chǎn)生的溶液攪拌過夜，然后濃縮。使殘留物分配于乙酸乙酯和水之間，分離層。用鹽水洗滌有機層，干燥(硫酸鎂)并濃縮。經(jīng)硅膠層析(1％-10％甲醇于二氯甲烷中)得到為褐色固體的目標化合物(0.12g,44％)NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.59(t,J=5Hz,1H),7.61(m,2H),7.50(m,2H),7.16(m,2H),6.57(d,J=11.1Hz,1H),6.17(d,J=5Hz,1H),5.53(d,J=16.7Hz,1H),5.13(m,1H),4.75(m,2H),4.10(m,2H),3.62(s,3H),2.94(dd,J=16.8,8.5Hz,1H),2.69(dd,J=16.8,5.4Hz,1H).
g)(±)-2,3,4,5-四氫-7-[[[(苯并咪唑-2-基)甲基]氨基]羰基]-3-氧代-4-(2,2,2-三氟乙基)-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸于室溫下將(±)-2,3,4,5-四氫-7-[[[(苯并咪唑-2-基)甲基]氨基]羰基]-3-氧代-4-(2,2,2-三氟乙基)-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸甲酯(0.12g,0.25mmol)和氫氧化鋰一水化物(0.017g,0.4mmol)在THF(10ml)、甲醇(2ml)和水(2ml)中的溶液攪拌過夜。然后濃縮并將殘留物溶于水中。用3N鹽酸將所述溶液的pH調(diào)至4，然后冷凍1小時。過濾收集產(chǎn)生的固體并干燥得到為白色固體的目標化合物(0.11g,90％)Ms(ES)m/e476[M+H]+。 C22H20N5F3O4.1.25H2O計算值C,53.07；H,4.55；N,14.06。實測值C,52.85；H,4.36；N,13.98。
實施例10(±)-2,3,4,5-四氫-7-[[[(苯并咪唑-2-基)甲基]甲基氨基]羰基]-3-氧代-4-(2,2,2-三氟乙基)-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸的制備a)(±)-2,3,4,5-四氫-7-[[[(苯并咪唑-2-基)甲基]甲基氨基]羰基]-3-氧代-4-(2,2,2-三氟乙基)-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸甲酯根據(jù)實施例9(f)的方法，但用2-(甲基氨基甲基)苯并咪唑二鹽酸鹽代替2-氨基甲基苯并咪唑二鹽酸鹽，制備目標化合物1HNMR(400MHz,CDCl3)δ7.67(m,2H),7.37(m,2H),7.25(m,2H),6.54(d,J=8 Hz,1H),5.46(d,J=16.7Hz,1H),5.20(m,1H),5.04(s,2H),4.71(m,1H),4.17(m,1H),3.94(m,1H),3.92(d,J=16.7,1H),3.74(s,3H),3.23(s,3H),2.98(m,1H),2.74(m,1H).
b)(±)-2,3,4,5-四氫-7-[[[(苯并咪唑-2-基)甲基]甲基氨基]羰基]-3-氧代-4-(2,2,2-三氟乙基)-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸根據(jù)實施例9(g)的方法，將(±)-2,3,4,5-四氫-7-羧基-[[[(苯并咪唑-2-基)甲基]甲基氨基]羰基]-3-氧代-4-(2,2,2-三氟乙基)-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸甲酯皂化得到目標化合物MS(ES)m/e 490.2[M+H]+C23H22N5F3O4.2.25H2O計算值C,52.12；H,5.04；N,13.21。實測值C,52.00；H,5.12；N,13.09。
實施例11(±)-2,3,4,5-四氫-7-[[[(4-氮雜-5-甲基苯并咪唑-2-基)甲基氨基]羰基]-3-氧代-4-(2,2,2-三氟乙基)-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸的制備a)(±)-2,3,4,5-四氫-7-[[[(4-氮雜-5-甲基苯并咪唑-2-基)甲基]氨基]羰基]-3-氧代-4-(2,2,2-三氟乙基)-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸甲酯根據(jù)實施例9(f)的方法，但用2-(氨基甲基)-4-氮雜-5-甲基苯并咪唑二鹽酸鹽代替2-氨基甲基苯并咪唑二鹽酸鹽，制備目標化合物MS(ES)m/e 505.2(M+H)+。
b)(±)-2,3,4,5-四氫-7-[[[(4-氮雜-5-甲基苯并咪唑-2-基)甲基]氨基]羰基]-3-氧代-4-(2,2,2-三氟乙基)-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸根據(jù)實施例9(g)的方法，將(±)-2,3,4,5-四氫-7-[[[(4-氮雜-5-甲基苯并咪唑-2-基)甲基]氨基]羰基]-3-氧代-4-(2,2,2-三氟乙基)-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸甲酯皂化得到目標化合物MS(ES)m/e 491.2[M+H]+。C22H21N6F3O4.27/8H2O計算值C,48.73；H,4.97；N,15.50。實測值C,48.50；H,4.59；N,15.33。
實施例12(±)-2,3,4,5-四氫-7-[[[(苯并咪唑-2-基)甲基]甲基氨基]羰基]-4-[2-(3,4-亞甲二氧基苯基)乙基]-3-氧代-1H-1,4-苯并二氯雜_-2-乙酸的制備a)(±)-2,3,4,5-四氫-7-[[[(苯并咪唑-2-基)甲基]甲基氨基]羰基]-4-[2-(3,4-亞甲二氧基苯基)乙基]-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸甲酯于室溫氬氣環(huán)境下將EDC(0.10g,0.55mmol)加至7-羧基-4-[2-(3,4-亞甲二氧基苯基)乙基]-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸甲酯(0.14g,0.3mmol)、2-(甲基氨基甲基)苯并咪唑二鹽酸鹽(0.12g,0.51mmol)、HOBt.H2O(0.072g,0.55mmol)、DIEA(0.32ml,1.84mmol)在DMF(5ml)中的溶液中。于室溫下將產(chǎn)生的溶液攪拌過夜，然后濃縮。使殘留物分配于乙酸乙酯和水之間，分離層。用乙酸乙酯萃取水層，用鹽水洗滌合并的有機層，干燥(硫酸鎂)并濃縮。經(jīng)硅膠層析得到無色泡沫狀的目標化合物(0.11g,59％)1H NMR(CDCl3)δ7.62(m,2H),7.31(m,2H),7.20(d,J=8.1Hz,1H),7.07(s,1H),6.65(d,J=7.9Hz,1H),6.60(s,1H),6.55(d,J=7.9Hz,1H),6.46(d,J=8.1Hz,1H),5.90(d,J=5.4Hz,2H),5.26(d,J=16.5Hz,1H),5.02(m,1H),4.93,(d,J=14.6,1H),4.83(d,J=14.6Hz,1H),4.51(d,J=5Hz,1H),3.74(s,3H),3.71(m,1H),3.60(m,1H),3.58(d,J=16.5Hz,1H),3.18(s,3H),2.99(dd,J=16,6.8 Hz,1H),2.70(m,1H).
b)(±)-2,3,4,5-四氫-7-[[[(苯并咪唑-2-基)甲基]甲基氨基]羰基]-4-[2-(3,4-亞甲二氧基苯基)乙基]-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸于室溫下向(±)-2,3,4,5-四氫-7-[[[(苯并咪唑-2-基)甲基]甲基氨基]羰基]-4-[2-(3,4-亞甲二氧基苯基)乙基]-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸甲酯(0.11g,0.19mmol)在THF(1ml)中加入氫氧化鋰一水化物(0.01g,0.23mmol)在水(1ml)中的溶液。于室溫下將產(chǎn)生的溶液攪拌過夜，然后濃縮至干。將殘留物溶于水中，用乙酸乙酯洗滌所述溶液，然后用3N鹽酸將pH調(diào)至4。過濾收集產(chǎn)生的沉淀，并干燥得到為白色固體的目標化合物(0.055g,51％)MS(ES)m/e 556.2[M+H]+。C30H29N5O6.H2O計算值C,62.82；H,5.45；N,12.21。實測值C,62.69；H,5.26；N,12.15。
實施例13(±)-2,3,4,5-四氫-7-[[2-(苯并咪唑-2-基)乙?；鵠氨基]-5-氧代-4-(2-苯基乙基)-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸的制備a)(±)-2,3,4,5-四氫-7-[[2-(苯并咪唑-2-基)乙?；鵠氨基]-5-氧代-4-(2-苯基乙基)-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸甲酯于室溫下將EDC(0.27g,1.4mmol)加至(±)-2,3,4,5-四氫-7-氨基-5-氧代-4-(2-苯基乙基)-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸酯(0.40g,1.1mmol)、苯并咪唑-2-乙酸(Archiv.Der Pharmazie 1960,293,758；0.25g,1.4mmol)、HOBt.H2O(0.20g,1.5mmol)和DIEA(0.35ml,2mmol)于乙腈(5ml)的溶液中。將所得溶液攪拌2天，然后濃縮至干。使殘留物在乙酸乙酯和水之間分配，分層。用鹽水洗滌有機相，干燥(硫酸鎂)并濃縮。經(jīng)硅膠層析(1％-10％CH3OH于CH2Cl2中)得到琥珀色泡沫狀的目標化合物(0.21g,36％)MS(ES)m/e 512.2[M+H]+。
b)(±)-2,3,4,5-四氫-7-[[2-(苯并咪唑-2-基)乙?；鵠氨基]-5-氧代-4-(2-苯基乙基)-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸于室溫下將(±)-2,3,4,5-四氫-7-[[2-(苯并咪唑-2-基)乙酰基]氨基]-5-氧代-4-(2-苯基乙基)-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸甲酯(0.21g,0.41mmol)和氫氧化鋰一水合物(0.022g,0.52mmol)于THF(10mL)和H2O(2mL)的溶液攪拌過夜，然后濃縮。殘余物溶于水，用乙酸乙酯洗滌溶液，然后用3N HCl調(diào)至pH4。過濾收集沉淀，干燥即得為灰白色固體的目標化合物(0.12g,59％)MS(ES)m/e 498.2[M+H]+。C28H27N5O4.1.5H2O的計算值C,64.11；H,5.76；N,13.35。實測值C,64.36；H,5.57；N,13.21。
實施例14(S)-2,3,4,5-四氫-7-[[[(苯并咪唑-2-基)甲基]甲基氨基]羰基]-4-甲基-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酰胺的制備a)(S)-2,3,4,5-四氫-7-[[[(苯并咪唑-2-基)甲基]甲基氨基]羰基]-4-甲基-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酰胺將于無水MeOH(10mL)中的(±)-2,3,4,5-四氫-7-[[[(苯并咪唑-2-基)甲基]甲基氨基]羰基]-4-甲基-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸甲酯(330mg,0.76mmol)在冰浴中冷卻，同時向溶液中吹入氨氣0.5hr。然后將反應物于室溫密閉下放置18hr。濃縮后，殘余物經(jīng)快速硅膠層析(90∶10 CH2Cl2/MeOH)純化得到為白色固體的目標化合物(52％)MS(ES)m/e 421.2[M+H]+C22H24N6O3·1.5H2O的計算值C,59.05；H,6.08；N,18.78。實測值C,58.90；H,6.04；N,18.45。
實施例15(±)-5-[[2,3,4,5-四氫-7-[[[(苯并咪唑-2-基)甲基]氨基]羰基]3-氧代-4-(2-苯基乙基)-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-基]甲基]四唑的制備a)(±)-2,3,4,5-四氫-7-(叔丁氧基羰基)-3-氧代-4-(2-苯基乙基)-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸甲酯將(±)-2,3,4,5-四氫-7-羧基-3-氧代-4-(2-苯基乙基)-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸甲酯(1.0g,2.6mmol)混懸于甲苯(10mL)中，滴加N,N-二甲基甲酰胺-二-叔-丁基縮醛(5mL,20.8mmol)。反應混合物于80℃加熱1.5hr，然后冷卻至室溫，倒入5％Na2CO3溶液中。分層，水溶液用甲苯萃取(2x)。用鹽水洗滌合并的有機層，經(jīng)硫酸鎂干燥，過濾和蒸發(fā)即得目標化合物(0.91g,82％)MS(ES)m/e 439.2[M+H]+。
b)(±)-2,3,4,5-四氫-7-(叔丁氧基羰基)-3-氧代-4-(2-苯基乙基)-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸用H2O(20mL)和0.91N NaOH(5mL)處理(±)-2,3,4,5-四氫-7-(叔丁氧基羰基)-3-氧代-4-(2-苯基乙基)-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸甲酯(1.5g,3.4mmol)于乙二醇二甲基醚(160mL)中的溶液。在氬氣環(huán)境中于室溫下將反應物攪拌24小時，然后用冰AcOH酸化至pH3，濃縮至小體積(10mL)，倒入冰水中。收集沉淀的固體，干燥即得定量的目標化合物。MS(ES)m/e 425.2[M+H]+。
c)(±)-2,3,4,5-四氫-7-(叔丁氧基羰基)-3-氧代-4-(2-苯基乙基)-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-[N-(2-氰基乙基)乙酰胺]在氬氣環(huán)境下用二異丙基乙基胺(0.65g,5mmol)、EDC(0.764g,4mmol)和HOBt·H2O(0.54g,4mmol)處理(±)-2,3,4,5-四氫-7-(叔丁氧基羰基)-3-氧代-4-(2-苯基乙基)-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸(1.2g,2.6mmol)于無水DMF(12mL)中的溶液。將所得溶液攪拌10分鐘，然后用含有二異丙基乙胺(0.85g,6.6mmol)的3-氨基丙腈富馬酸鹽的無水DMF(2mL)溶液處理。將反應物在氬氣環(huán)境下攪拌18小時，然后濃縮至干。殘余物在水和乙酸乙酯之間分配，分層。用鹽水洗滌有機層，硫酸鎂上干燥，過濾和濃縮。油狀殘余物經(jīng)硅膠快速層析柱(98∶2 CH2Cl2/MeOH)純化即得目標化合物(750mg,50％)MS(ES)m/e 477.2[M+H]+。d)(±)-1-(2-氰基乙基)-5-[[2,3,4,5-四氫-7-(叔丁氧基羰基)-3-氧代-4-(2-苯基乙基)-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-基]甲基]四唑在氬氣環(huán)境及室溫下，用三苯基膦(1.14g,4.6mmol)、三甲基甲硅烷基疊氮化物(0.52g,4.6mmol)和偶氮二羧酸二乙酯(0.8mL,4.6mmol)處理(±)-2,3,4,5-四氫-7-(叔丁氧基羰基)-3-氧代-4-(2-苯基乙基)-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-[N-(2-氰基乙基)乙酰胺](750mg,1.3mmol)于無水THF(15mL)中的溶液。50小時后，將反應物濃縮至干，殘余物經(jīng)硅膠快速層析柱(98.5∶1.5 CH2Cl2/MeOH)純化即得目標化合物(0.56g,86％)MS(ES)m/e 502.2[M+H]+。
e)(±)-1-(2-氰基乙基)-5-[[2,3,4,5-四氫-7-羧基-3-氧代-4-(2-苯基乙基)-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-基]甲基]四唑于室溫氬氣環(huán)境下用4M鹽酸在二氧六環(huán)(10ml)中的溶液處理(±)-1-(2-氰基乙基)-5-[[2,3,4,5-四氫-7-(叔丁氧基羰基)-3-氧代-4-(2-苯基乙基)-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-基]甲基]四唑(0.5g,1mmol)在二氯甲烷(20ml)中的溶液。20小時后，將所述反應物濃縮至干，用5％碳酸鈉稀釋殘留物。用乙酸乙酯萃取所述溶液，棄去乙酸乙酯層。用稀鹽酸酸化水層并用乙酸乙酯(3x)萃取。用鹽水洗滌合并的乙酸乙酯萃取物，經(jīng)硫酸鎂干燥并蒸發(fā)得到目標化合物(0.36g,81％)MS(ES)m/e445.4[M+H]+。
f)(±)-1-(2-氰基乙基)-5-[[2,3,4,5-四氫-7-[[[(苯并咪唑-2-基)甲基]氨基]羰基]-3-氧代-4-(2-苯基乙基)-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-基]甲基]四唑于氬氣環(huán)境下用DIEA(129mg,1mmol)、EDC(172mg,0.9mmol)和HOBt.H2O(122mg,0.9mmol)處理(±)-1-(2-氰基乙基)-5-[[2,3,4,5-四氫-7-羧基-3-氧代-4-(2-苯基乙基)-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-基]甲基]四唑(360mg,0.8mmol)在無水DMF(5ml)中的溶液。于室溫下將所述反應物攪拌10分鐘，然后加入含有DIEA(413mg,3.2mmol)的2-氨基甲基苯并咪唑二鹽酸鹽水化物(352mg,1.6mmol)在DMF(2ml)中的溶液。20小時后，將所述反應物濃縮至干并使殘留物分配于水和乙酸乙酯之間。分離層，用乙酸乙酯萃取水層。合并有機層，經(jīng)硫酸鎂干燥，過濾并濃縮。將殘留物經(jīng)硅膠快速層析純化(95∶5二氯甲烷/甲醇)得到目標化合物(120mg,21％)。MS(ES)m/e 575.2[M+H]+。g)(±)-5-[[2,3,4,5-四氫-7-[[[(苯并咪唑-2-基)甲基]氨基]羰基]-3-氧代-4-(2-苯基乙基)-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-基]甲基]四唑用硫酚(0.02ml)處理(±)-1-(2-氰基乙基)-5-[[2,3,4,5-四氫-7-[[[(苯并咪唑-2-基)甲基]氨基]羰基]-3-氧代-4-(2-苯基乙基)-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-基]甲基]四唑(100mg,0.2mmol)在甲醇(1ml)中的溶液，接著用1N氫氧化鈉溶液(2.2ml)處理。3小時后，將所述反應物濃縮至干，將殘留物經(jīng)制備性TLC純化(85∶15二氯甲烷/甲醇)。將分離的產(chǎn)物溶于水中，過濾所述溶液去除不溶性的雜質(zhì)。用2滴冰乙酸處理所述濾液。收集沉淀固體并干燥得到目標化合物(45mg,41％)MS(ES)m/e522.2[M+H]+。 C30H31N9O4.2.25H2O計算值C,56.15；H,5.52；N,19.65。實測值C,56.51；H,5.05；N,19.72。
實施例16(S)-2,3,4,5-四氫-7-[[[(苯并咪唑-2-基)甲基]氨基]羰基]-3-氧代-4-[4-[(2-羧基苯甲酰基)氨基]丁-1-基]-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸的制備a)N-[[2-(N-4-羥基丁-1-基)氨基甲基-4-叔丁氧基羰基]苯基-L-天冬氨酸β-甲酯于室溫氬氣環(huán)境下將N-[[2-甲?；?4-叔丁氧基羰基]苯基]-L-天冬氨酸β-甲酯(WO 95/18619；2.55g,7.2mmol)、4A分子篩和4-羥基丁胺(0.64g,7.26mmol)在甲醇(35ml)中的混合物攪拌30分鐘，然后加入氰基硼氫化鈉(0.49g,0.79mmol)和乙酸(0.3ml)。將所述反應混合物置于室溫過夜，然后真空去除溶劑。將殘留物溶于水中并用稀鹽酸酸化該溶液至pH4。乙酸乙酯萃取，干燥(硫酸鎂)，過濾并濃縮得到為淡黃色固體的目標化合物(1.75g,57％)TLC Rf(4∶20∶20∶56 MeOH/EtOAc/己烷/Cl2CH2)0.22；1H NMR(CDCl3)δ1.55(s,9H),1.56(m,2H),1.80(m,2H),3.01(m,4H),3.55(m,2H),3.70(s,3H),4.05(m,1H),4.40(m,1H),4.55(m,1H),6.81(d,J=8.4Hz,1H),7.70(s,1H),7.89(d,J=8.4Hz,1H).
b)(S)-7-(叔丁氧基羰基)-2,3,4,5-四氫-3-氧代-4-(4-羥基丁-1-基)-1H-1,4-苯并二氮雜_-2乙酸甲酯于室溫氬氣環(huán)境下將苯并三唑-1-基氧基-三(二甲基氨基)六氟磷酸膦鎓(2.08g,14.7mmol)加至N-[[2-(N-4-羥基丁-1-基)氨基甲基-4-叔丁氧基羰基]苯基-L-天冬氨酸β-甲酯(1.75g,4.1mmol)和三乙胺(1.15ml,8.2mmol)在二氯甲烷(150ml)中的溶液中。于室溫下將所述反應混合物攪拌過夜，然后順序用冰冷的稀鹽酸、水、5％碳酸氫鈉、飽和鹽水洗滌，然后干燥(硫酸鎂)。過濾并濃縮，將殘留物經(jīng)硅膠快速層析純化(5％甲醇∶乙酸乙酯)得到目標化合物(0.631g,38％)TLC Rf(4％MeOH/EtOAc)0.26；1H NMR(CDCl3)δ1.46-1.61(m,4H),1.57(s,9H),2.64(d,J=6.9Hz,1H),2.66(dd,J=15.9,6.3Hz,1H),2.99(dd,J=15.6,6.9Hz,1H),3.56-3.54(m,4H),3.74(s,3H),3.84(d,J=16.2Hz,1H),4.54(m,1H),5.10(m,1H),5.41(d,J=16.2Hz,1H),6.49(d,J=8.3Hz,1H),7.59(d,J=1.8Hz,1H),7.67(dd,J=8.3,1.8Hz,1H)；MS(ES)m/e 407.2[M+H]+；[α]D=-185.4°(c=1,CH3OH).
c)(S)-7-(叔丁氧基羰基)-2,3,4,5-四氫-3-氧代-4-(4-苯二甲酰亞氨基丁-1-基)-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸甲酯于室溫氬氣環(huán)境下向(S)-7-(叔丁氧基羰基)-2,3,4,5-四氫-3-氧代-4-(4-羥基丁-1-基)-1H-1,4-苯并二氮雜_-2乙酸甲酯(437mg,1.07mmol)和三苯基膦(308mg,1.17mmol)在THF(20ml)中的溶液中加入鄰苯二甲酰亞胺(173mg,1.17mmol)和偶氮二羧酸二乙酯(205mg,1.17mmol)。于室溫下將所述反應混合物攪拌過夜，去除溶劑，將殘留物經(jīng)硅膠快速層析純化(4∶20∶20∶56甲醇/乙酸乙酯/己烷/二氯甲烷)得到目標化合物(0.430g,75％)TLC Rf(4∶20∶20∶56MeOH/EtOAc/hexane/Cl2CH2)0.32；1H NMR(CDCl3)δ1.55(s,9H),1.55-1.61(m,4H),2.68(dd,J=14.0,5.7Hz,2H),2.98(dd,J=14.0,6.6Hz,1H),3.46-3.64(m,4H),3.71(s,3H),3.85(d,J=16.5Hz,1H),4.63(d,J=4.4Hz,1H),5.08(dd,J=5.7,6.6Hz,1H),5.37(d,J=16.5Hz,1H),6.48(d,J=8.3Hz,1H),7.67(s,1H),7.69(d,J=8.3,1.8Hz,1H),7.72-7.76(m,2H),7.81-7.86(m,2H).
d)(S)-2,3,4,5-四氫-7-羧基-3-氧代-4-(4-苯二甲酰亞氨基丁基)-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸甲酯于室溫氬氣環(huán)境下將4N鹽酸/二氧六環(huán)(5ml,20mmol)加至(S)-7-(叔丁氧基羰基)-2,3,4,5-四氫-3-氧代-4-(4-苯二甲酰亞氨基丁基)-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸甲酯(660mg,0.89mmol)在二氯甲烷(20ml)中的溶液中。將所述混合物攪拌18小時。濃縮所述懸浮液得到為灰白色固體的目標化合物(425mg,98％)1HNMR(CDCl3)δ1.55-1.61(m,4H),2.71(dd,J=14.1,6.0Hz,2H),3.01(dd,J=14.1,6.3Hz,1H),3.50-3.65(m,4H),3.75(s,3H),3.89(d,J=16.5Hz,1H),4.68(d,J=4.5Hz,1H),5.12(dd,J=6.0,6.3Hz,1H),5.40(d,J=16.6Hz,1H),6.41(bs,1H),6.53(d,J=8.4Hz,1H),7.69-7.75(m,4H),7.82-7.85(m,2H)；MS(ES)m/e 480.2[M+H]+.
e)(S)-2,3,4,5-四氫-7-[[[(苯并咪唑-2-基)甲基]氨基]羰基]-3-氧代-4-(4-苯二甲酰亞氨基丁-1-基)-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸甲酯于室溫下將EDC(240mg,1.25mmol)加至(S)-2,3,4,5-四氫-7-羧基-3-氧代-4-(4-苯二甲酰亞氨基丁-1-基)-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸甲酯(0.85g,0.88mmol)、2-(氨基甲基)苯并咪唑二鹽酸鹽(230mg,1.04mmol)、HOBt.H2O(169mg,1.25mmol)和二異丙基乙胺(0.78ml,4.5mmol)在無水乙腈(10ml)中的攪拌的溶液中。19小時后，在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(高度真空)上濃縮所述反應物，使殘留物分配于水(5ml)和乙酸乙酯(20ml)之間。分離層并用水(5ml)洗滌有機層。干燥(硫酸鎂)，濃縮并經(jīng)硅膠層析(5％甲醇/二氯甲烷)得到為灰白色固體的目標化合物(230mg,43％)TLC Rf(5％MeOH/Cl2CH2)0.30；1H NMR(CD3OD)δ1.42-1.56(m,5H),2.63(dd,J=6.4,16.2Hz,1H),2.95(dd,J=6.7,16.2Hz,1H),3.33-3.40(m,2H),3.48-3.55(m,2H),3.57(d,J=16.5 Hz,1H),3.67(s,3H),4.72-4.80(m,3H),5.03(dd,J=6.4,6.7Hz,1H),5.20(d,J=16.5Hz,1H),6.44(d,J=8.4Hz,1H),7.18-7.21(m,2H),7.52-7.63(m,6H)；7.74-7.76(m,2H),9.08(br s,1H).
f)(S)-2,3,4,5-四氫-7-[[[(苯并咪唑-2-基)甲基]氨基]羰基]-3-氧代-4-[4-[(2-羧基苯甲酰基)氨基]丁-1-基]-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸于室溫下將氫氧化鋰(30mg,0.71mmol)加至(S)-2,3,4,5-四氫-7-[[[(苯并咪唑-2-基)甲基]氨基]羰基]-3-氧代-4-(4-苯二甲酰亞氨基丁-1-基)-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸甲酯(223mg,0.33mmol)在甲醇(2ml)和水(3ml)中的溶液中。于室溫下將所述反應混合物攪拌19小時。用稀鹽酸酸化至pH 4并濃縮產(chǎn)生固體。過濾得到為白色固體的目標化合物(145mg,66％)[α]D=-100.4°(c=1,CH3OH)；1H NMR(CD3OD)δ1.32-1.65(m,5H),2.58(dd,J=16.4,6.7Hz,1H),2.90(dd,J=16.4,7.9Hz,1H),3.06(m,1H),3.69(m,1H),4.00(d,J=16.7Hz,1H),4.69(br s,2H),5.11(dd,J=7.9,6.7Hz,1H),5.36(d,J=16.7 Hz,1H),6.50(d,J=8.4Hz,1H),7.29(m,2H),7.37(m,4H)；7.51(m,2H),7.664(s,1H),7.74(d,J=6.8Hz,1H)；MS(ES)m/e 613.2[M+H]+.計算值C32H32N6O7··1.5H2OC,60.08；H,5.51；N,113.14.實測值C,59.77；H,5.46；N,12.98.
實施例17(±)-7-[3-(苯并咪唑-2-基)丙基]-4-甲基-3-氧代-2,3,4,5-四氫-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸的制備a)(±)-1-(叔丁氧基羰基)-7-(4-羥基-1-丁炔-1-基)-4-甲基-3-氧代-2,3,4,5-四氫-1,4-苯并二氮雜_-1-乙酸甲酯于氬氣環(huán)境下將3-丁炔-1-醇(65mg,0.93mmol)、雙(三苯基膦)氯化鈀(Ⅱ)(5mg,0.007mmol)、三苯基膦(10mg,0.038mmol)和碘化銅(10mg,0.052mmol)(Ⅰ)加至(±)-2,3,4,5-四氫-1-(叔丁氧基羰基)-7-碘代-4-甲基-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸甲酯(由實施例7c獲得；440mg,0.94mmol)在三乙胺(34ml)中的溶液中。將所述反應混合物加熱回流4小時，然后通過celite_過濾，濃縮濾液。將殘留物經(jīng)硅膠柱層析純化(4∶20∶20∶56甲醇/乙酸乙酯/己烷/二氯甲烷)得到為淡黃色液體的目標化合物(390mg,94％)TLC Rf(5％MeOH∶Cl2CH2)0.37；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.34(dd,J=1.8,8.1Hz,1H),7.31(d,J=1.8Hz,1H),7.13(d,J=8.1 Hz,1H),5.15-5.23(m,1H),4.75(d,J=14.4Hz,1H),3.68(d,J=14.4Hz,1H),3.63-3.67(m,2H),3.59(s,3H),3.04,(s,3H),2.88(dd,J=5.5,15.2Hz,1H),2.45(t,J=6.4Hz,2H),2.26(dd,J=9.5,15.2Hz,1H),2.04(br s,1H),1.34(br s,9H)；MS(ES)m/e417[M+H]+.
b)(±)-1-(叔丁氧基羰基)-7-(4-羥基丁-1-基)-4-甲基-3-氧代-2,3,4,5-四氫-1,4-苯并二氮雜_-1-乙酸甲酯將10％Pd/C(40mg)加至(±)-1-(叔丁氧基羰基)-7-(4-羥基-1-丁炔-1-基)-4-甲基-3-氧代-2,3,4,5-四氫-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸甲酯(370mg,0.89mmol)在乙醇(20ml)中的溶液中，于室溫氫氣環(huán)境下(50psi)在Parr裝置上振搖所述混合物。12小時后，通過celite_過濾所述反應物，濃縮濾液得到為淡黃色液體的目標化合物(350mg,94％)TLC Rf(4∶20∶20∶56MeOH/EtOAc/己烷/Cl2CH2)0.55；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.10-7.19(m,3H),5.59-5.77(m,1H),4.85(d,J=15.0Hz,1H),3.68-3.60(m,5H),3,12(s,3H),2.85(dd,J=5.4,15.3Hz,1H),2.65(t,J=6.4Hz,2H),2.34(dd,J=10.0,15.3Hz,1H),1.30-1.78(m,13H)；MS(ES)m/e 421[M+H]+.
c)(±)-1-(叔丁氧基羰基)-7-(4-羧基丁-1-基)-4-甲基-3-氧代-2,3,4,5-四氫-1,4-苯并二氮雜_-1-乙酸甲酯于0℃向(±)-1-(叔丁氧基羰基)-7-(4-羥基丁-1-基)-4-甲基-3-氧代-2,3,4,5-四氫-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸甲酯(350mg,0.82mmol)在二氯甲烷中的溶液中加入2,2,6,6-四甲基氧代氯化哌啶鎓(J.Org.Chem.1985,50,3930-3931；220mg,1.1mmol)。于0℃氬氣環(huán)境下將所述混合物攪拌2小時。加入2-甲基-2-丁烯(1ml)，接著加入新鮮制備的NaClO2溶液(0.76g,6.7mmol)、NaH2PO4.H2O(0.78g,5.68mmol)和水(25ml)。去除冰浴，將所述混合物吸收于乙酸乙酯中并順序用0.05M鹽酸和鹽水洗滌。干燥(硫酸鎂)，濃縮并經(jīng)硅膠層析(5％乙酸于4∶20∶20∶56甲醇/乙酸乙酯/己烷/二氯甲烷)得到目標化合物(350mg,98％)TLC Rf(5％AcOH在4∶20∶20∶56MeOH/EtOAc/己烷/Cl2CH2)0.32；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.13-7.18(m,3H),5.60-5.69(m,1H),4.83(d,J=14.2Hz,1H),3.76(d,J=14.2 Hz,1H),3.66(s,3H),3.12(s,3H),2.93(dd,J=4.5,15.3Hz,1H),2.67(t,J=7.3Hz,2H),2.36(t,J=7.3Hz,2H),2.30-2.34(m,1H),1.95(q,J=7.3Hz,2H),1.34(s,9H)；MS(ES)m/e 435[M+H]+.
d)(±)-1-(叔丁氧基羰基)-7-[3-(苯并咪唑-2-基)丙基]-4-甲基-3-氧代-2,3,4,5-四氫-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸甲酯將氯代甲酸異丁酯(97mg,0.8mmol)加至(±)-1-(叔丁氧基羰基)-7-(4-羧基丁-1-基)-4-甲基-3-氧代-2,3,4,5-四氫-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸甲酯(350mg,0.8mmol)和Et3N(81mg,0.8mmol)在無水THF(8ml)中的攪拌和冷凍(-10℃)的混合物中。10分鐘后，加入1,2-亞苯基二胺(1.43g,0.9mmol)在THF(2ml)中的溶液。于室溫下繼續(xù)攪拌過夜，然后蒸發(fā)溶劑。使殘留物溶于乙酸乙酯中，順序用碳酸氫鈉水溶液和鹽水洗滌所述溶液。干燥(硫酸鎂)并濃縮產(chǎn)生淡黃色固體。將其溶于冰乙酸(5ml)中，將所述反應物加熱至60℃。3小時后，冷卻所述混合物，濃縮，用2.5N氫氧化鈉中和，用二氯甲烷萃取。干燥(硫酸鎂)，濃縮并經(jīng)硅膠層析(1-5％甲醇/二氯甲烷梯度)得到目標化合物(200mg,50％)TLC Rf(4∶20∶20∶56甲醇/乙酸乙酯/二氯甲烷)0.18；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.57-7.61(m,2H),7.15-7.28(m,4H),7.08(s,1H),5.60-5.55(m,1H),4.75-4.88(m,1H),3.71(d,J=14.2Hz,1H),3.70(s,3H),3.10(s,3H),2.94(dd,J=4.2,15.3Hz,1H),2.85-2.90(m,2H),2.73-2.79(m,2H),2.32-2.36(m,1H),2.15-2.23(m,1H),1.34和1.55(br s,旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體,9H)；MS(ES)m/e 507[M+H]+.
e)(±)-7-[3-(苯并咪唑-2-基)丙基]-4-甲基-3-氧代-2,3,4,5-四氫-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸于室溫下將氫氧化鋰(17mg,0.17mmol)加至(±)-1-(叔丁氧基羰基)-7-[3-(苯并咪唑-2-基)丙基]-4-甲基-3-氧代-2,3,4,5-四氫-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸甲酯(200mg,0.395mmol)在甲醇(2ml)和水(3ml)中的溶液中。于室溫下將所述反應混合物攪拌4小時。用稀鹽酸酸化至pH4并濃縮產(chǎn)生白色固體。于0℃將其溶于二氯甲烷(10ml)和三氟乙酸(5ml)中的混合物中，將所述反應物保持于0℃30分鐘。蒸發(fā)溶劑并將殘留物與乙醚研磨經(jīng)ODS快速層析純化(10-18％的含有0.1％TFA乙腈/水梯度)。濃縮并冷凍干燥得到無色粉末的目標化合物(75mg,48％)1HNMR((400MHz,CDCl3)δ7.58-7.61(m,2H),7.37-7.39(m,2H),6.79(d,J=8.2Hz,1H),6.68(s,1H),6.39(d,J=8.2Hz,1H),5.18(d,J=16.8 Hz,1H),4.77(dd,J=7.0,7.5Hz,1H),3.63(d,J=16.8Hz,1H),3.03-3.19(m,3H),2.97(s,3H),2.83(dd,J=7.0,16.4Hz,1H),2.52-2.56(m,2H),2.08-2.12(m,2H)；MS(ES)m/e393.0[M+H]+.計算值C22H24N4O3··C2HF3O2·0.5H2OC,55.92；H,5.08N,10.實測值C56.16；H,4.92；N,10.88.
實施例18(S)-2,3,4,5-四氫-7-[[N-[(苯并咪唑-2-基)甲基]-N-(4-氨基丁基)氨基]羰基]-4-甲基-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸的制備a)4-[(苯并咪唑-2-基)甲基]氨基丁腈將4-溴代丁腈(0.37g,2.4989mmol)加至2-氨基甲基苯并咪唑二鹽酸鹽(0.5g,2.2717mmol)和碳酸氫鈉(0.67g,7.951mmol)在無水DMF(10ml)中的攪拌的混合物中。于室溫下攪拌24小時，濃縮所述混合物。將殘留物吸收于水中并用二氯甲烷萃取。經(jīng)硫酸鎂干燥有機萃取物，濃縮并經(jīng)硅膠快速柱層析純化(5％甲醇/二氯甲烷)得到為棕色油狀物目標化合物(0.15g,35％)1HNMR(250MHz,DMSO-d6)δ1.82(m,2H),2.45(t,J=4Hz,2H),2.85(t,J=4Hz,2H),4.11(s,2H),7.14(m,2H),7.50(m,2H).
b)(S)-2,3,4,5-四氫-7-[[N-[(苯并咪唑-2-基)甲基]-N-(4-氰基丙基)氨基]羰基]-4-甲基-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸甲酯將EDC(0.265g,0.8906mmol)加至4-[(苯并咪唑-2-基)甲基]氨基丁腈(0.159g,0.7422mmol)、2,3,4,5-四氫-7-羧基-4-甲基-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸甲酯(0.217g,0.7422mmol)、HOBt.H2O(0.120g,0.8906mmol)和i-Pr2NEt(0.192g,1.4844mmol)在無水CH3CN(7ml)中的攪拌的混合物中。于室溫下攪拌48小時后，濃縮所述混合物。將殘留物吸收于水中并用二氯甲烷萃取。順序用飽和的碳酸氫鈉和鹽水洗滌有機層，經(jīng)硫酸鎂干燥，濃縮為棕色油狀物。經(jīng)硅膠快速層析純化(3％甲醇/二氯甲烷)得到為灰白色泡沫狀物的目標化合物(0.261g,74％)
1H NMR(250MHz,DMSO-d6)δ1.95(m,2H),2.66(dd,J=16.4,3.5Hz,1H),2.78(dd,J=16.4,3.5Hz,1H),2.85(t,J=8.7Hz,2H),3.45(t,J=8.7Hz,2H),3.60(s,3H),3.80(d,J=16Hz,1H),4.52(s,2H),4.84(d,J=2.9 Hz,2H),5.15(m,1H),5.48(d,J=16Hz,1H),6.40(d,J=3.5Hz,1H),6.54(d,J=8.3Hz,1H),7.25(m,4H)；,7.50(m,1H),7.62(m,1H).
c)(S)-2,3,4,5-四氫-7-[[N-[(苯并咪唑-2-基)甲基]-N-(4-氰基丙基)氨基]羰基]-4-甲基-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸將2.5N氫氧化鈉(0.7ml,1.6433mmol)加至(S)-2,3,4,5-四氫-7-[[N-[(苯并咪唑-2-基)甲基]-N-(4-氰基丙基)氨基]羰基]-4-甲基-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸甲酯(0.261g,0.5478mmol)在甲醇(5rml)中的攪拌的溶液中。于室溫下攪拌過夜，濃縮所述混合物。將殘留物吸收于水中，用6NHCl將所述溶液酸化至pH=4。過濾白色固體并干燥得到目標化合物(0.21g,81％)1H NMR(250MHz,DMSO-d6)δ1.95(m,2H),2.66(dd,J=16.4,3.5Hz,1H),2.78(dd,J=16.4,3.5Hz,1H),2.85(t,J=8.7Hz,2H),3.45(t,J=8.7Hz,2H),3.80(d,J=16 Hz,1H),4.52(s,2H),4.84(d,J=2.9Hz,2H),5.15(m,1H),5.48(d,J=16Hz,1H),6.40(d,J=3.5Hz,1H),6.54(d,J=8.3Hz,1H),7.25(m,4H),7.50(m,1H),7.62(m,1H).
d)(S)-2,3,4,5-四氫-7-[[N-[(苯并咪唑-2-基)甲基]-N-(4-氨基丁基)氨基]羰基]-4-甲基-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸于室溫下用Ra/Ni將(S)-2,3,4,5-四氫-7-[[N-[(苯并咪唑-2-基)甲基]-N-(4-氰基丙基)氨基]羰基]-4-甲基-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜_-1-乙酸(0.200g,0.4325mmol)在氫氧化銨(1ml,30％溶液)在甲醇(5ml)中的混合物氫化24小時。過濾去除催化劑，濃縮濾液并經(jīng)反相層析(含有0.1％TFA的10％乙腈/水)得到為灰白色固體的目標化合物(0.100g,33％)1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ1.45(m,2H),1.72(m,2H),2.54(dd,J=16.4,3.5Hz,1H),2.70(m,2H),2.75(dd,J=16.4,3.5Hz,1H),2.95(s,3H),3.65(t,J=8.7Hz,2H),3.85(d,J=16Hz,1H),5.05(s,2H),5.15(m,1H),5.48(d,J=16Hz,1H),6.65(d,J=8.3Hz,1H),7.20(m,2H),7.61(m,2H),7.75(s,2H),7.85(m,2H)；IR(KBr)3425,3000,3100,1728,1675,1630,1625,1613 cm-1；MS(ES)m/e 479(M+H).計算值C25H30N6O4·2CF3CO2HC,49.30；H,4.56；N,11.89.實測值C,49.22；H,4.89；N,11.84.
實施例19(S)-2,3,4,5-四氫-7-[[N-[(苯并咪唑-2-基)甲基]-N-(2-氰基甲基)氨基]羰基]-4-甲基-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸的制備a)[(苯并咪唑-2-基)甲基]氨基乙腈根據(jù)實施例18(A)的步驟，但用溴代乙腈代替4-溴代丁腈制備為灰白色固體的目標化合物(0.15g,35％)1H NMR(250MHz,DMSO-d6)δ3.71(s,2H),3.98(s,2H),7.14(m,2H),7.50(m,2H).
b)(S)-2,3,4,5-四氫-7-[[N-[(苯并咪唑-2-基)甲基-N-(2-氰基甲基)氨基]羰基]-4-甲基-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸甲酯根據(jù)實施例18(b)的步驟，但用[(苯并咪唑-2-基)甲基]氨基乙腈代替4-[(苯并咪唑-2-基)甲基]氨基丁腈制備為灰白色泡沫狀物的目標化合物(0.487g,66％)1H NMR(250MHz,DMSO-d6)δ2.66(dd,J=16.4,3.5Hz,1H),2.78(dd,J=16.4,3.5Hz,1H),2.92(s,2H),3.60(s,3H),3.80(d,J=16 Hz,1H),4.52(s,2H),4.84(d,J=2.9Hz,2H),5.15(m,1H),5.48(d,J=16Hz,1H),6.40(d,J=3.5Hz,1H),6.54(d,J=8.3Hz,1H),7.25(m,4H),7.50(m,2H),7.62(m,2H).
c)(S)-2,3,4,5-四氫-7-[[N-[(苯并咪唑-2-基)甲基]-N-(2-氰基甲基)氨基]羰基]-4-甲基-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸根據(jù)實施例18(c)的步驟，將(S)-2,3,4,5-四氫-7-[[N-[(苯并咪唑-2-基)甲基]-N-(2-氰基甲基)氨基]羰基]-4-甲基-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸甲酯皂化，并使產(chǎn)物在乙醇中重結(jié)晶得到為白色固體的目標化合物(0.420g,89％)
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ2.66(dd,J=16.4,3.5Hz,1H),2.78(dd,J=16.4,3.5Hz,1H),2.92(s,2H),3.80(d,J=16Hz,1H),4.52(s,2H),4.84(d,J=2.9Hz,2H),5.15(m,1H),5.48(d,J=16Hz,1H),6.40(d,J=3.5Hz,1H),6.54(d,J=8.3Hz,1H),7.25(m,4H),7.50(m,1H),7.62(m,1H)；MS(ES)m/e 465(M+H)+.計算值C23H22N6O4·2HClC,53.19；H,4.66；N,16.18；實測值C,52.98；H,4.43；N,16.53.
實施例20(S)-2,3,4,5-四氫-7-[[[(苯并咪唑-2-基)甲基]甲基氨基]羰基]-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸的制備a)(R)-2-三氟甲磺?；晁岫柞⑷谆撬狒?10.0g,35.7164mmol)滴加至D-蘋果酸二甲酯(5.5g,33.9213mmol)、無水吡啶(2.82g,35.7164mmol)在無水二氯甲烷(55ml)中的攪拌冷卻(0℃)的混合液中。于0℃攪拌4小時后，用水驟冷所述混合物并分離層。順序用稀鹽酸和鹽水洗滌有機層，經(jīng)硫酸鎂干燥并濃縮得到為白色固體的目標化合物(8.50g,96％)1HNMR(250MHz,CDCl3δ3.10(d,J=5.8Hz,2H),3.74(s,3H),3.78(s,3H),5.52(t,J=5.8Hz,1H).
b)D-(2-氰基苯基)蘋果酸二甲酯于室溫下將2-氨基芐腈(0.5g,4.2323mmol)、2,6-二叔丁基吡啶(0.85g,4.4439mmol)和(R)-2-三氟甲磺?；晁岫柞ピ?∶1己烷/氯仿(25ml)中的混合物攪拌76小時。濃縮所述混合物，將殘留物吸收于水中并用乙酸乙酯萃取。順序用10％鹽酸和鹽水洗滌有機萃取物，經(jīng)硫酸鎂干燥，濃縮并經(jīng)硅膠快速層析純化(10％乙酸乙酯/己烷)得到為黃色固體的目標化合物(0.886g,80％)1HNMR(250MHz,CDCl3)δ2.95(d,J=5.8Hz,1H),3.74(s,3H),3.78(s,3H),4.60(m,1H),5.28(d,J=5.8Hz,1H),6.73(d,J=8.5Hz,1H),6.80(t,J=8.5Hz,1H),7.47(m,2H).
c)(S)-2,3,4,5-四氫-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸甲酯用Ra/Ni于55psi下將D-(2-氰基苯基)蘋果酸二甲酯(10.75g,41.0006mmol)在甲醇(用NH3(g)預飽和10分鐘，100ml)氫化48小時。過濾去除催化劑，濃縮濾液并經(jīng)硅膠快速層析純化(40％乙酸乙酯/己烷)得到為灰白色固體的目標化合物(5.03g,53％)1HNMR(250MHz,CDCl3)δ2.65(dd,J=16.3,7.6Hz,1H),2.99(da,16.3,5.9Hz,1H),3.74(s,3H),3.95(dd,J=16,6.9Hz,1H),4.79(m,1H),4.95(dd,J=16,5.3Hz,1H),6.55(t,J=5.3Hz,1H),6.65(d,J=7.6Hz,1H),6.78(d,J=7.6Hz,1H),6.97(d,J=7.6Hz,1H),7.15(d,J=7.6Hz,1H).
d)(S)-2,3,4,5-四氫-7-溴代-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸甲酯于室溫下將(S)-2,3,4,5-四氫-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸甲酯(5.03g,21.4746mmol)和n-Bu4NBr3(10.35g,21.4746mmol)在氯仿(100ml)中的混合物攪拌3小時，然后濃縮所述混合物。將殘留物吸收于水中，攪拌，過濾得到為灰白色固體的目標化合物(5.61g,83％)1H NMR(250MHz,CDCl3)δ2.74(dd,J=16.3,7.6Hz,1H),3.05(dd,J=16.3,5.9Hz,1H),3.75(s,3H),4.05(dd,J=16,6.9Hz,1H),4.73(t,J=5.9Hz,1H),4.86(dd,J=16,5.3Hz,1H),6.68(d,J=7.6Hz,1H),6.75(t,J=5.3Hz,1H),7.14(s,1H),7.25(d,J=7.6 Hz,1H).
e)(S)-2,3,4,5-四氫-7-[[N-[(苯并咪唑-2-基)甲基]-N-甲基氨基]羰基]-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸甲酯向(S)-2,3,4,5-四氫-7-溴代-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸甲酯(1.5g,4.77905mmol)、2-(甲基氨基甲基)苯并咪唑二鹽酸鹽(2.24g,9.5809mmol)、三苯基膦(1.26g,4.7905mmol)、n-Bu3N(6.21g,33.5333mmol)和(Ph3P)4Pd(1.10g,0.9581mmol)在N-甲基2-吡咯烷酮(20ml)中的混合物中充入氬氣和一氧化碳10分鐘。然后于一氧化碳環(huán)境下將所述混合物在100-105℃加熱8小時。冷卻所述混合物并用6N HCl酸化至pH=2。用乙酸乙酯萃取所述溶液，棄去乙酸乙酯層。用30％氫氧化鈉中和水層并用二氯甲烷萃取。經(jīng)硫酸鎂干燥有機萃取物，濃縮并經(jīng)硅膠快速層析純化(5％甲醇/二氯甲烷)得到為灰白色固體的目標化合物(1.62g,80％)1HNMR(250MHz,DMSO-d6)δ2.65(dd,J=16.3,7.6Hz,1H),2.81(dd,J=16.3,5.9Hz,1H),3.05(s,3H),3.60(s,3H),3.75(dd,J=16.3,6.9Hz,1H),4.78(s,2H),4.95(m,1H),5.05(dd,J=16,5.3Hz,1H),6.20(d,J=5.9Hz,1H),6.55(d,J=7.6Hz,1H),7.25(m,4H),7.55(m,2H),8.21(t,J=5.3Hz,1H).
f)(S)-2,3,4,5-四氫-7-[[[(苯并咪唑-2-基)甲基]甲基氨基]羰基]-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸根據(jù)實施例18(c)的步驟，將(S)-2,3,4,5-四氫-7-[[N-[(苯并咪唑-2-基)甲基]-N-甲基氨基]羰基]-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸甲酯皂化得到為灰白色固體的目標化合物(0.060g,57％)1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ2.52(dd,J=16.3,7.6Hz,1H),2.84(dd,J=16.3,5.9Hz,1H),3.20(s,3H),3.75(dd,J=16.3,6.9Hz,1H),4.95(t,J=5.9Hz,1H),5.05(dd,J=16,5.3Hz,1H),5.10(s,2H),6.59(d,J=7.6Hz,1H),7.12(s,1H),7.20(d,J=7.6Hz,1H),7.48(m,2H),7.69(m,2H),7.90(d,J=5.3Hz,1H)；IR(KBr)3600-3100,3100-2800,1681,1613,1601,1485,1445,1314,830,764,742 cm-1；MS(ES)m/e 422(M+H)+.計算值C21H21N5O4C,61.91；H,5.20；N,17.19.實測值C,61.57；H,5.32；N,17.29.
實施例21(S)-2,3,4,5-四氫-7-[[[[1-(2-羥基乙基)苯并咪唑-2-基]甲基]氨基]羰基]-4-甲基-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸的制備a)2-[[(苯并咪唑-2-基)甲基]氨基]乙酸乙酯于室溫下將2-氨基甲基苯并咪唑二鹽酸鹽水化物(4.0g,18.1736mmol)、碳酸氫鈉(7.63g,90.868mmol)和2-溴代乙酸乙酯(4.55g,27.2603mmol)在無水DMF(60ml)中的混合物攪拌24小時，然后濃縮。將殘留物吸收于水中并用二氯甲烷萃取。經(jīng)硫酸鎂干燥有機萃取物,經(jīng)硅膠快速層析純化(5％甲醇/二氯甲烷)得到為棕色油狀物的目標化合物(0.50g,12％)1H NMR(250MHz,CDCl3)δ1.95(s,3H),3.48(s,2H).4.50(m,4H),7.25(m,2H),7.35(m,1H),7.73(m,1H).
b)(S)-2,3,4,5-四氫-7-[[[[1-(2-乙酰氧基乙基)苯并咪唑-2-基]甲基]氨基]羰基]-4-甲基-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸甲酯根據(jù)實施例18(b)的步驟，但用2-[[(苯并咪唑-2-基]甲基]氨基]乙酸乙酯代替4-[(苯并咪唑-2-基]甲基]氨基丁腈制備為白色固體的目標化合物(0.251g,78.5％)1H NMR(250MHz,CDCl3)δ1.95(s,3H),2.66(dd,J=16.4,3.5Hz,1H),2.95(s,3H),3.05(dd,J=16.4,3.5Hz,1H),3.60(d,J=16Hz,1H),3.75(s,3H),4.45(d,J=5.9Hz,2H),4.62(s,2H),4.92(t,J=5.9Hz,2H),5.10(m,1H),5.40(d,J=16Hz,1H),6.49(d,J=8.3Hz,1H),7.32(m,3H),7.60(m,2H),7.71(m,1H),8.15(t,J=5.3Hz,1H).
c)(S)-2,3,4,5-四氫-7-[[[[1-(2-羥基乙基)苯并咪唑-2-基]甲基]氨基]羰基]-4-甲基-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸將1.0N LiOH(1.4ml,1.425mmol)加至(S)-2,3,4,5-四氫-7-[[[[1-(2-乙酰氧基乙基)苯并咪唑-2-基]甲基]氨基]羰基]-4-甲基-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸甲酯(0.241g,0.475mmol)在THF(5ml)中的攪拌的部分懸浮液中。于室溫下攪拌過夜，濃縮所述混合物。將殘留物吸收于水中并用乙酸酸化至pH=4。過濾灰白色固體并與丙酮一起研磨得到為白色固體的目標化合物(0.16g,75％)
1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ2.54(dd,J=16.4,3.5Hz,1H),2.95(s,3H),3.05(dd,J=16.4,3.5Hz,1H),3.60(d,J=16Hz,1H),4.45(d,J=5.9Hz,2H),4.62(s,2H),4.92(t,J=5.9Hz,2H),5.10(m,1H),5.40(d,J=16Hz,1H),6.49(d,J=8.3Hz,1H),7.32(m,3H),7.60(m,2H),7.71(m,1H),8.15(t,J=5.3Hz,1H)；MS(ES)m/e452(M+H)+.計算值C23H25N5O5·0.75H2OC,59.71；H,5.72；N,15.14.實測值C,59.65,H,5.70；N,14.88.
實施例22(S)-2,3,4,5-四氫-7-[[N-(苯并咪唑-2-基]甲基-N-[[4-(2-羧基苯甲酰基)氨基]丁基]氨基]羰基]-3-氧代-4-(2-苯基乙基)-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸的制備a)4-[[(苯并咪唑-2-基)甲基]氨基]丁基苯二甲酰亞胺于100-110℃將2-氨基甲基苯并咪唑二鹽酸鹽水化物(22.10g,100.7269mmol)、碳酸氫鈉(42.40g,503.6347mmol)和4-溴代丁基苯二甲酰亞胺(34.10g,120.8723mmol)在無水DMF(250mg)中的混合物加熱6小時，然后冷卻并濃縮。將殘留物吸收于水中并用二氯甲烷萃取。經(jīng)硫酸鎂干燥有機萃取物，濃縮并經(jīng)硅膠快速層析純化(5％甲醇/二氯甲烷)得到為棕色泡沫狀物的目標化合物(10.8g,31％)1H NMR(250MHz,CDCl3)δ1.65(m,2H),1.85(m,2H),2.75(t,J=8.9Hz,2H),3.78(t,J=8.9 Hz,2H),4.17(s,2H),7.20(m,2H),7.60(m,2H),7.72(m,2H),7.88(m,2H).
b)(±)-2,3,4,5-四氫-7-[[N-(苯并咪唑-2-基]甲基-N-[[4-(苯二甲酰亞胺基)丁基]氨基]羰基]-3-氧代-4-(2-苯基乙基)-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸甲酯將EDC(1.50g,5.0525mmol)加至4-[[(苯并咪唑-2-基)甲基]氨基]丁基苯二甲酰亞胺(1.75g,5.0525mmol)、(±)-2,3,4,5-四氫-7-羧基-3-氧代-4-(2-苯基乙基)-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸甲酯(1.61g,4.2104mmol)、HOBt.H2O(0.69g,5.0525mmol)和i-Pr2NEt(1.10g,8.4209mmol)在無水CH3CN(30ml)中的攪拌的混合物中。于室溫下攪拌24小時后，濃縮所述混合物。將殘留物吸收于水中并用二氯甲烷萃取。順序用飽和的碳酸氫鈉和鹽水洗滌有機萃取物，經(jīng)硫酸鎂干燥，濃縮并經(jīng)硅膠快速層析純化(5％甲醇/二氯甲烷)得到為黃色泡沫狀物的目標化合物(2.85g,95％)1H NMR(250MHz,DMSO-d6)δ1.60(m,2H),2.65(m,2H),2.85(dd,J=16.4,3,5Hz,1H),3.55(m,4H),3.65(s,3H),4.00(d,J=16.0Hz,1H),4.18(q,J=8.9Hz,2H),4.75(s,2H),5.15(m,1H),5.45(d,J=16.0Hz,1H),6.23(d,J=5.3Hz,1H),6.57(d,J=7.6Hz,1H),7.20(m,7H),7.55(m,4H),7.90(m,4H).
c)(±)-四氫-7-[[N-(苯并咪唑-2-基]甲基-N-(4-氨基丁基)氨基]羰基]-3-氧代-4-(2-苯基乙基)-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸甲酯將(±)-2,3,4,5-四氫-7-[[N-(苯并咪唑-2-基]甲基-N-[[4-(苯二甲酰亞胺基)丁基]氨基]羰基]-3-氧代-4-(2-苯基乙基)-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸甲酯(0.50g,0.7015mmol)和肼(0.07g,2.1045mmol)在甲醇(5ml)中的混合物回流6小時，然后冷卻并濃縮。將殘留物吸收于水中，用6NHCl酸化至pH=2，過濾去除白色固體。棄去該固體。用乙酸乙酯萃取濾液，棄去乙酸乙酯層。用碳酸鈉將水層堿化至pH=9并用氯仿萃取。經(jīng)硫酸鎂干燥有機層并濃縮得到為灰白色固體的目標化合物(0.41g,89％)1H NMR(250MHz,DMSO-d6)δ1.47(m,2H),1.75(m,2H),2.65(m,5H),2.85(dd,J=16.3,5.9Hz,1H),3.65(s,7H),4.05(d,J=16.0Hz,1H),5.05(s,2H),5.15(m,1H),5.45(d,J=16,1H),6.65(d,J=7.6Hz,1H),7.25(m,6H),7.41(s,1H),7.60(m,2H),7.85(m,2H).
d)(±)-2,3,4,5-四氫-7-[[N-(苯并咪唑-2-基)甲基]-N-[[4-(2-羧基苯甲酰基)氨基]丁基]氨基]羰基]-3-氧代-4-(2-苯基乙基)-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸將1.0N LiOH(1.2ml)加至(±)-四氫-7-[[N-(苯并咪唑-2-基]甲基-N-(4-氨基丁基)氨基]羰基]-3-氧代-4-(2-苯基乙基)-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸甲酯(0.34g,0.47mmol)在THF中的攪拌的溶液中。于室溫下攪拌過夜后，濃縮所述混合物，用乙酸將殘留物酸化至pH=4。過濾固體并與丙酮/乙醚研磨得到為白色固體的目標化合物(0.130g,39％)1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ1.47(m,2H),1.75(m,2H),2.54(dd,J=16.3,3.5Hz,1H),2.65(m,2H),2.85(dd,J=16.3,5.9Hz,1H),3.20(m,2H),3.75(m,4H),4.05(d,J=16.0Hz,1H),5.05(s,2H),5.15(m,1H),5.45(d,J=16,1H),6.65(d,J=7.6Hz,1H),7.25(m,6H),7.41(s,1H),7.60(m,2H),7.85(m,2H)；IR(KBr)3400,3326,3100-3000,1721,1637,1626,1616,1607,1300,750,694 cm-1；MS(ES)m/e717(M+H)+.計算值C40H38N6O8·3H2OC,63.56；H,5.87；N,11.12.實測值C,63.56；H,5.83；N,11.04.
實施例23(±)-2,3,4,5-四氫-7-[[N-(苯并咪唑-2-基)甲基]-N-[[4-(4-疊氮基-2-羥基苯甲?；?氨基]羰基]-3-氧代-4-(2-苯基乙基)-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸的制備a)(±)-2,3,4,5-四氫-7-[[N-(苯并咪唑-2-基)甲基]-N-[[4-(4-疊氮基-2-羥基苯甲酰基)氨基]羰基]-3-氧代-4-(2-苯基乙基)-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸甲酯將EDC(0.25g,0.8424mmol)加至(±)-2,3,4,5-四氫-7-[[N-(苯并咪唑-2-基)甲基]-N-[[4-(苯二甲酰亞胺基)丁基]氨基]羰基]-3-氧代-4-(2-苯基乙基)-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸甲酯(0.409g,0.702mmol)、4-疊氮基水楊酸-N-羥基琥珀酰胺酯(0.194g,0.702mmol)和i-Pr2NEt(0.272g,2.106mmol)在2∶1無水CH3CN/DMF(10ml)中的攪拌的混合物中。于室溫下攪拌24小時后，濃縮所述混合物。將殘留物吸收于水中，過濾并經(jīng)干燥后得到為灰白色固體的目標化合物(0.204g,39％)1H NMR(250MHz,DMSO-d6)δ1.40(m,2H),1.75(m,2H),2.65(m,3H),2.75(dd,J=16.3,5.9Hz,1H),3.20(m,2H),3.51(m,4H),3.65(m,3H),3.95(d,J=16Hz,1H),4.79(s,2H),5.12(m,1H),5.37(d,J=16 Hz,1H),6.20(s,1H),6.55(m,3H),7.20(m,8H),7.55(m,3H),7.85(d,J=7.6Hz,1H),7.98(s,1H),8.75(s,1H).
b)(±)-2,3,4,5-四氫-7-[[N-(苯并咪唑-2-基)甲基]-N-[[4-(4-疊氮基-2-羥基苯甲酰基)氨基]羰基]-3-氧代-4-(2-苯基乙基)-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸根據(jù)實施例22(d)的流程，將(±)-2,3,4,5-四氫-7-[[N-(苯并咪唑-2-基)甲基]-N-[[4-(4-疊氮基-2-羥基苯甲酰基)氨基]羰基]-3-氧代-4-(2-苯基乙基)-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸甲酯皂化得到為白色固體的目標化合物(0.100g,50％)1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ1.40(m,2H),1.75(m,2H),2.65(m,3H),2.75(dd,J=16.3,5.9 Hz,1H),3.20(m,2H),3.51(m,4H),3.95(d,J=16Hz,1H),4.79(s,2-H),5.12(m,1H),5.37(d,J=16Hz,1H),6.20(s,1H),6.55(m,3H),7.20(m,8H),7.55(m,3H),7.85(d,J=7.6Hz,1H),7.98(s,1H),8.75(s,1H)；MS(ES)m/e 730(M+H)+.計算值C39H39N9O6·2.5H2OC,60.46；H,5.72；N,16.27.實測值C,60.46；H,5.43；N,15.90.
實施例242,3,4,5-四氫-7-[[N-(苯并咪唑-2-基)甲基-N-[[[(+)-生物?；鵠氨基]丁基]氨基]羰基]-3-氧代-4-(2-苯基乙基)-1H-1,4-苯并二氮雜_-(2RS)-乙酸的制備a)2,3,4,5-四氫-7-[[N-(苯并咪唑-2-基)甲基-N-[[[(+)-生物?；鵠氨基]丁基]氨基]羰基]-3-氧代-4-(2-苯基乙基)-1H-1,4-苯并二氮雜_-(2RS)-乙酸甲酯向(±)-四氫-7-[[N-(苯并咪唑-2-基)甲基-N-(氨基丁基)氨基]羰基]-3-氧代-4-(2-苯基乙基)-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸甲酯(0.40g,0.6865mmol)、(+)-生物素(0.17g,0.6865mmol)、HOBt·H2O(0.11g,0.8239mmol)和i-Pr2NEt(0.18g,1.3730mmol)于1∶2 DMF/CH3CN(12mL)的混合物中加入EDC(0.25g,0.8239mmol)。于室溫下攪拌24小時后，將混合物濃縮。將殘余物溶于水并用CHCl3萃取。按順序用飽和的NaHCO3和鹽水洗滌有機萃取液，用硫酸鎂干燥，濃縮，經(jīng)硅膠快速層析(10％MeOH/CH2Cl2)純化即得黃色泡沫狀目標化合物(0.24g,44％)1HNMR(250MHz,DMSO-d6)δ1.30(m,2H),1.60(m,4H),2.05(t,J=8.9Hz,2H)；,2.60(m,3H),2.68(dd,J=16.3,5.9Hz,1H),3.10(m,4H),3.45(m,2H),3.60(m,2H),3.65(s,3H),4.01(d,J=16Hz,1H),4.12(t,J=8.9Hz,1H),4.30(t,J=8.9Hz,1H),4.78(s,2H),5.10(m,1H),5.45(d,J=16Hz,1H),6.20(d,J=5.3Hz,1H),6.40(d,J=8.9Hz,2H),6.55(d,J=7.6Hz,1H),7.25(m,9H),7.45(m,1H),7.55(m,1H),7.70(t,J=8.6Hz,1H).
b)2,3,4,5-四氫-7-[[N-(苯并咪唑-2-基)甲基-N-[[[(+)-生物?；鵠氨基]丁基]氨基]羰基]-3-氧代-4-(2-苯基乙基)-1H-1,4-苯并二氮雜_-(2RS)-乙酸將1.0NLiOH(0.44ml)加入2,3,4,5-四氫-7-[[N-(苯并咪唑-2-基)甲基-N-[[[(+)-生物?；鵠氨基]丁基]氨基]羰基]-3-氧代-4-(2-苯基乙基)-1H-1,4-苯并二氮雜_-(2RS)-乙酸甲酯(0.24g,0.2967mmol)于1∶2THF/MeOH(6mL)的攪拌的溶液中。于室溫下攪拌過夜后，將混合物濃縮。殘余物溶于水，并用AcOH酸化至pH=4。將灰白色的固體過濾，用熱丙酮研磨即得為白色固體的目標化合物(0.160g,68％)1H NMR(400MHz,DMSO-d6)d 1.30(m,2H),1.60(m,4H),2.05(t,J=8.9 Hz,2H),2.60(m,3H),2.68(dd,J=16.3,5.9Hz,1H),3.10(m,4H),3.45(m,2H),3.60(m,2H),4.01(d,J=16Hz,1H),4.12(t,J=8.9Hz,1H),4.30(t,J=8.9Hz,1H),4.78(s,2H),5.10(m,1H),5.45(d,J=16Hz,1H),6.20(d,J=5.3Hz,1H),6.40(d,J=8.9Hz,2H),6.55(d,J=7.6Hz,1H),7.25(m,9H),7.45(m,1H),7.55(m,1H),7.70(t,J=8.6Hz,1H)；MS(ES)m/e 795(M+H)+.計算值C42H50N8O6S·1.75H2OC,61.04；H,6.52；N,13.56.實測值C,60.89；H,6.24；N,13.31.
實施例25(±)-2,3,4,5-四氫-7-[[N-[(苯并咪唑-2-基)甲基]-N-(4-氨基丁基)氨基]羰基]-3-氧代-4-(2-苯基乙基)-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸的制備a)(±)-2,3,4,5-四氫-7-[[N-[(苯并咪唑-2-基)甲基]-N-(4-氨基丁基)氨基]羰基]-3-氧代-4-(2-苯基乙基)-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸根據(jù)實施例24(b)的流程，將(±)-2,3,4,5-四氫-7-[[N-[(苯并咪唑-2-基)甲基]-N-(4-氨基丁基)氨基]羰基]-3-氧代-4-(2-苯基乙基)-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸甲酯皂化即得為灰白色固體的目標化合物(0.250g,80％)1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ1.37(m,2H),1.62(m,2H),2.52(dd,J=3.5Hz,1H),2.64(m,2H),2.75(dd,J=16.3,5.9Hz,1H),3.51(m,4H),3.91(d,J=16Hz,1H),4.98(s,2H),5.05(m,1H),5.37(d,J=16Hz,1H),6.53(d,J=7.9Hz,2H),7.17(m,7H),7.52(m,1H),7.62(s,1H),7.78(m,1H)；IR(KBr)3386,3100-3000,1647,1613,1403,740,699cm-1；MS(ES)m/e 569(M+H)+.計算值C32H36N6O4·2.75H2OC,62.18；H,6.77；N,13.60.實測值C,62.11；H,6.68；N,13.57.
實施例26(±)-2,3,4,5-四氫-7-[[N-[(苯并咪唑-2-基)甲基]-N-[[4-(4-疊氮基-3-碘代-2-羥基苯甲?；?氨基]丁基]氨基]羰基]-3-氧代-4-(2-苯基乙基)-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸的制備a)3-碘代-4-疊氮基水楊酸-N-羥基琥珀酰亞胺酯將碘(0.510g,1.9913mmol)加入4-疊氮基水楊酸-N-羥基琥珀酰亞胺酯(0.500g,1.8103mmol)和三氟醋酸銀(0.44g,1.9931mmol)于CHCl3(10mL)的攪拌的混合物中。于室溫下攪拌過夜，將反應過濾以除去固體沉淀。按順序用H2O、飽和的NaHCO3和鹽水洗滌濾液，然后在經(jīng)硫酸鎂干燥。濃縮即得淺紫色固體的目標化合物(0.703g,97％)
1HNMR(250MHz,CDCl3)δ2.98(s,4H),6.83(d,J=7.6Hz,1H),8.05(d,J=7.6Hz.1H).
b)(±)-四氫-7-[[N-[(苯并咪唑-2-基)甲基]-N-[[4-(4-疊氮基-3-碘代-2-羥基苯甲?；?氨基]丁基]氨基]羰基]-3-氧代-4-(2-苯基乙基)-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸甲酯根據(jù)實施例22(b)流程，但用3-碘代-4-疊氮基水楊酸-N-羥基琥珀酰亞胺酯代替4-[[(苯并咪唑-2-基)甲基]氨基]丁基鄰苯二甲酰亞胺，制備得到為黃色泡沫的目標化合物(0.312g,56％)1H NMR(250MHz,DMSO-d6)δ1.42(m, 2H),1.60(m,2H),2.52(dd,J=16.3,3.5Hz,1H),2.63(m, 2H),2.79(dd,J=16.3,5.9Hz,1H),3.25(s,2H),3.55(m,6H),3.65(s,3H),3.95(d,J=16Hz,1H),4.75(s,2H),5.02(m,1H),5.35(d,J=16 Hz,1H),6.14(d,J=5.3 Hz,1H),6.52(d,J=7.9 Hz,1H),6.86(d,J=7.9Hz,1H),7.25(m,10H),7.51(s,2H),7.90(d,J=7.9Hz,1H),9.01(s,1H).
c)(±)-四氫-7-[[N-[(苯并咪唑-2-基)甲基]-N-[[4-(4-疊氮基-3-碘代-2-羥基苯甲酰基)氨基]丁基]氨基]羰基]-3-氧代-4-(2-苯基乙基)-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸根據(jù)實施例22(c)的流程，將(±)-四氫-7-[[N-[(苯并咪唑-2-基)甲基]-N-[[4-(4-疊氮基-3-碘代-2-羥基苯甲?；?氨基]丁基]氨基]羰基]-3-氧代-4-(2-苯基乙基)-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸甲酯皂化。經(jīng)硅膠快速柱層析(0.5,0.5,9.5AcOH/MeOH/CH2Cl2)純化即得灰白色固體的目標化合物(0.170g,58％)
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ1.42(m,2H),1.60(m,2H),2.52(dd,J=16.3,3.5Hz,1H),2.63(m,2H),2.79(dd,J=16.3,5.9Hz,1H),3.25(s,2H),3.55(m,6H),3.95(d,16,1H),4.75(s,2H),5.02(m,1H),5.35(d,J=16Hz,1H),6.14(d,J=5.3Hz,1H),6.52(d,J=7.9Hz,1H),6.86(d,J=7.9Hz,1H),7.25(m,10H),7.51(s,2H),7.90(d,J=7.9Hz,1H),9.01(s,1H)；MS(ES)m/e 856(M+H)+；IR(KBr)3360,3100-3000,2116,1704,1643,1610,1586,1477,1305,1274,766,700cm-1.計算值C39H38IN9O6·4.5H2OC,50.01；H,5.06；N,13.46.實測值C,50.19；H,5.01；N,13.12.
實施例275-[[[(苯并咪唑-2-基)甲基]甲基氨基]羰基]-1H-苯并咪唑-2-氨基乙酸的制備a)5-[[[(苯并咪唑-2-基)甲基]甲基氨基]羰基]-1H-苯并咪唑-2-氨基乙酸甲酯于室溫下將二異丙基乙胺(1,1ml,6.48mmol)加至5-羧基-苯并咪唑-2-氨基乙酸甲酯(0.24g,0.96mmol)、2-(甲基氨基甲基)苯并咪唑雙-三氟乙酸酯(0.56g,1.44mmol)、HOBt.H2O(0.19g,1.44mmol)和EDC(0.28g,1.44mmol)在無水DMF(8ml)中的攪拌的溶液中。23小時后，用二氯甲烷(100ml)稀釋所述反應混合物并順序用5％碳酸氫鈉(30ml)和鹽水(30ml)洗滌。干燥(硫酸鎂)，濃縮并經(jīng)硅膠層析(10％甲醇/二氯甲烷)得到為灰白色固體的目標化合物(0.16g,42％)MS(ES)m/e393.0(M+H)+。
b)5-[[[(苯并咪唑-2-基)甲基]甲基氨基]羰基]-1-苯并咪唑-2-氨基乙酸于室溫下將1.0N LiOH(1.0ml,1.0mmol)滴加至5-[[[(苯并咪唑-2-基)甲基]甲基氨基]羰基]-1H-苯并咪唑-2-氨基乙酸甲酯(0.16g,0.41mmol)在THF(10ml)和水(10ml)中的混合物中。1小時后，在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上濃縮所述反應混合物至小體積并在冰浴上冷卻，然后用1.0NAcOH(1.0ml)中和。收集固體，用冷水洗滌，空氣干燥得到為灰白色固體的目標化合物(0.15g,100％)MS(ES)m/e 379.2(M+H)+。
實施例28
(±)-2,3,4,5-四氫-7-[[[(苯并咪唑-2-基)甲基]甲基氨基]羰基]-4-(3,3-二甲基丁基)-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸的制備a)(±)-2,3,4,5-四氫-7-[[[(苯并咪唑-2-基)甲基]甲基氨基]羰基]-4-(3,3-二甲基丁基)-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸甲酯于室溫下將二異丙基乙胺(0.94ml,5.4mmol)加至(±)-7-羧基-4-(3,3-二甲基丁基)-3-氧代-2,3,4,5-四氫-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸(0.39g,1.08mmol)、2-(甲基氨基甲基)苯并咪唑雙-三氟乙酸酯(0.42g,1.08mmol)、HOBt.H2O(0.22g,1.62mmol)和EDC(0.31 g,1.62mmol)在無水DMF(8ml)中的攪拌的溶液中。23小時后，用二氯甲烷(100ml)稀釋所述反應混合物并順序用5％碳酸氫鈉(2×25ml)和鹽水(25ml)洗滌。干燥(硫酸鎂)，濃縮并經(jīng)硅膠層析(7％甲醇/二氯甲烷)得到為白色固體的目標化合物(0.39g,71％)MS(ES)m/e 506.4(M+H)+。
b)(±)-2,3,4,5-四氫-7-[[[(苯并咪唑-2-基)甲基]甲基氨基]羰基]-4-(3,3-二甲基丁基)-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸于室溫下將1.0N LiOH(1.0ml,1.0mmol)滴加至(±)-2,3,4,5-四氫7-[[[(苯并咪唑-2-基)甲基]甲基氨基]羰基]-4-(3,3-二甲基丁基)-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸甲酯(0.38g,0.75mmol))在THF(10ml)和水(10ml)中的混合物中。50分鐘后，在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上濃縮所述反應混合物至小體積并在冰浴上冷卻，然后用1.0N AcOH(2.5ml)中和。收集固體，用冷水洗滌，空氣干燥得到為白色固體的目標化合物(0.27g,73％)MS(ES)m/e 492.2(M+H)+。
實施例29(±)-2,3,4,5-四氫-7-[[[(苯并咪唑-2-基)甲基]氨基]羰基]-4-(3,3-二甲基丁基)-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸的制備a)(±)-2,3,4,5-四氫-7-[[[(苯并咪唑-2-基)甲基]氨基]羰基]-4-(3,3-二甲基丁基)-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸甲酯于室溫下將二異丙基乙胺(0.79ml,4.56mmol)加至(±)-7-羧基-4-(3,3-二甲基丁基)-3-氧代-2,3,4,5-四氫-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸(0.33g,0.91mmol)、2-(氨基甲基)苯并咪唑二鹽酸鹽水化物(0.3g,1.36mmol)、HOBt.H2O(0.18g,1.36mmol)和EDC(0.26g,1.36mmol)在無水DMF(8ml)中的攪拌的溶液中。20小時后，用二氯甲烷(70ml)稀釋所述反應混合物并順序用5％碳酸氫鈉(2×20ml)和鹽水(20ml)洗滌。干燥(硫酸鎂)，濃縮并經(jīng)硅膠層析(7％甲醇/二氯甲烷)得到為白色固體的目標化合物(0.25g,56％)MS(ES)m/e 492.4(M+H)+。
b)(±)-2,3,4,5-四氫-7-[[[(苯并咪唑-2-基)甲基]氨基]羰基]-4-(3,3-二甲基丁基)-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸于室溫下將1.0N LiOH(1.0ml,1.0mmol)滴加至(±)-2,3,4,5-四氫-7-[[[(苯并咪唑-2-基)甲基]氨基]羰基]-4-(3,3-二甲基丁基)-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸甲酯(0.24g,0.49mmol))在THF(8ml)和水(8ml)中的混合物中。2.5小時后，在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上濃縮所述反應混合物至小體積并在冰浴上冷卻，然后用1.0N AcOH(1.2ml)中和。收集所述固體，用冷水洗滌，空氣干燥得到為白色固體的目標化合物(0.25g,109％)MS(ES)m/e 478.2(M+H)+。
實施例30(±)-2,3,4,5-四氫-7-[[[(4-氮雜苯并咪唑-2-基)甲基]甲基氨基]羰基]-4-(3,3-二甲基丁基)-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸的制備a)(±)-2,3,4,5-四氫-7-[[[(4-氮雜苯并咪唑-2-基)甲基]甲基氨基]羰基]-4-(3,3-二甲基丁基)-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸甲酯于室溫下將二異丙基乙胺(0.53ml,3.0mmol)加至(±)-7-羧基-4-(3,3-二甲基丁基)-3-氧代-2,3,4,5-四氫-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸甲酯(0.22g,1.0mmol)、2-(甲基氨基)甲基-4-氮雜苯并咪唑二乙酸甲酯(0.29g,1.0mmol)、HOBt·H2O(0.12g,0.91mmol)和EDC(0.17g,0.91mmol)在無水CH3CN(12ml)中的攪拌的溶液中。21小時后，將反應混合物濃縮，用二氯甲烷(100ml)稀釋，并順序用5％碳酸氫鈉(2×20ml)和鹽水(20ml)洗滌。干燥(硫酸鎂)，濃縮并經(jīng)硅膠層析(7％甲醇/二氯甲烷)得到為白色固體的目標化合物(0.147g,48％)MS(ES)m/e 507.4(M+H)+。
b)(±)-2,3,4,5-四氫-7-[[[(4-氮雜苯并咪唑-2-基)甲基]甲基氨基]羰基]-4-(3,3-二甲基丁基)-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸于室溫下將1.0N LiOH(0.69ml,0.69mmol)滴加至(±)-2,3,4,5-四氫-7-[[[(4-氮雜苯并咪唑-2-基)甲基]甲基氨基]羰基]-4-(3,3-二甲基丁基)-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸甲酯(0.14g,0.276mmol))在THF(8ml)和水(8ml)中的混合物中。2小時后，在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上濃縮所述反應混合物至小體積并在冰浴上冷卻，然后用1.0N AcOH(0.69ml)中和。收集固體，用冷水洗滌，空氣干燥得到為白色固體的目標化合物(0.074g,54％)MS(ES)m/e 493.2(M+H)+。
實施例31(S)-2,3,4,5-四氫-7-[[[[1-[(苯并咪唑-2-基)甲基]苯并咪唑-2-基]甲基]氨基]羰基]-4-甲基-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸的制備a)(S)-2,3,4,5-四氫-7-[[[[1-[(苯并咪唑-2-基)甲基]苯并咪唑-2-基]甲基]氨基]羰基]-4-甲基-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸甲酯于室溫下將二異丙基乙胺(0.27ml,1.53mmol)加至(S)-7-羧基-4-甲基-3-氧代-2,3,4,5-四氫-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸甲酯三氟醋酸鹽(0.14g,0.34mmol)、2-[[1-[(苯并咪唑-2-基)甲基]苯并咪唑]甲基]胺雙(三氟醋酸鹽)(0.17g,0.34mmol)、HOBt·H2O(0.064g,0.48mmol)和EDC(0.091g,0.48mmol)在無水DMF(10ml)中的攪拌的溶液中。22小時后，將反應混合物濃縮，用二氯甲烷(70ml)稀釋，并順序用5％碳酸氫鈉(2×30ml)和鹽水(20ml)洗滌。干燥(硫酸鎂)，濃縮并經(jīng)硅膠層析(7％甲醇/二氯甲烷)得到為白色固體的目標化合物(0.080g,43％)MS(ES)m/e 552.2(M+H)+。
b)(S)-2,3,4,5-四氫-7-[[[[1-[(苯并咪唑-2-基)甲基]苯并咪唑-2-基]甲基]氨基]羰基]-4-甲基-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸于室溫下將1.0N LiOH(0.36ml,0.36mmol)滴加至(S)-2,3,4,5-四氫-7-[[[[1-[(苯并咪唑-2-基)甲基]苯并咪唑-2-基]甲基]氨基]羰基]-4-甲基-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸甲酯(0.08g,0.14mmol)在THF(5ml)和水(4ml)中的混合物中。2小時后，在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上濃縮所述反應混合物至小體積并在冰浴上冷卻，然后用1.0N AcOH(0.69ml)中和。將溶液冷凍干燥得到為白色粉末的粗品(0.086g)。經(jīng)C-18 Bond(含有0.1％TFA的0％-20％CH3CN/H2O洗脫)純化得到為白色粉末的目標化合物MS(ES)m/e 538.2(M+H)+。
實施例32(S)-2,3,4,5-四氫-7-[[二[(苯并咪唑-2-基)甲基]氨基]羰基]-4-甲基-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸的制備a)(S)-2,3,4,5-四氫-7-[[二[(苯并咪唑-2-基)甲基]氨基]羰基]-4-甲基-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸甲酯于室溫下將二異丙基乙胺(0.22ml,1.29mmol)加至(S)-7-羧基-4-甲基-3-氧代-2,3,4,5-四氫-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸甲酯三氟醋酸鹽(0.075g,0.26mmol)、二[(苯并咪唑-2-基)甲基]胺三(三氟醋酸鹽)(0.16g,0.26mmol)、HOBt.H2O(0.05g,0.36mmol)和EDC(0.069g,0.36mmol)在無水CH3CN(10ml)中的攪拌的溶液中。17小時后，將反應混合物濃縮，用二氯甲烷(80ml)稀釋，并順序用5％碳酸氫鈉(2×20ml)和鹽水(20ml)洗滌。干燥(硫酸鎂)，濃縮并經(jīng)硅膠層析(7％甲醇/二氯甲烷)得到為白色固體的目標化合物(0.05g,36％)MS(ES)m/e 552.2(M+H)+。
b)(S)-2,3,4,5-四氫-7-[[二[(苯并咪唑-2-基)甲基]氨基]羰基]-4-甲基-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸于室溫下將1.0N LiOH(0.23ml,0.23mmol)滴加至(S)-2,3,4,5-四氫-7-[[二[(苯并咪唑-2-基)甲基]氨基]羰基]-4-甲基-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸甲酯(0.05g,0.09mmol))在THF(6ml)和水(4ml)中的混合物中。1小時后，在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上濃縮所述反應混合物至小體積并在冰浴上冷卻，然后用1.0N AcOH(0.3ml)中和。收集所得固體，用冷水洗滌，空氣干燥得到為白色固體的目標化合物(0.048g,98％)MS(ES)m/e 538.2(M+H)+。
實施例33±)-2,3,4,5-四氫-7-[[二[(苯并咪唑-2-基)甲基]氨基]羰基]-3-氧代-4-(2-苯乙基)-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸的制備a)(±)-2,3,4,5-四氫-7-[[二[(苯并咪唑-2-基)甲基]氨基]羰基]-3-氧代-4-(2-苯乙基)-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸甲酯于室溫下將二異丙基乙胺(0.3ml,1.74mmol)加至(±)-7-羧基--3-氧代-2-(2-苯基乙基)-2,3,4,5-四氫-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸甲酯(0.11g,0.29mmol)、二[(苯并咪唑-2-基)甲基]胺三(三氟醋酸鹽)(0.18g,0.29mmol)、HOBt·H2O(0.058g,0.43mmol)和EDC(0.083g,0.43mmol)在無水CH3CN(l2ml)中的攪拌的溶液中。21小時后，將反應混合物濃縮，用二氯甲烷(100ml)稀釋，并順序用5％碳酸氫鈉(2×20ml)和鹽水(20ml)洗滌。干燥(硫酸鎂)，濃縮并經(jīng)硅膠層析(7％甲醇/二氯甲烷)得到為白色固體的目標化合物(0.13g,70％)MS(ES)m/e 642.2(M+H)+。
b)(±)-2,3,4,5-四氫-7-[[二[(苯并咪唑-2-基)甲基]氨基]羰基]-3-氧代-4-(2-苯乙基)-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸于室溫下將1.0N LiOH(0.6ml,0.6mmol)滴加至(±)-2,3,4,5-四氫-7-[[二[(苯并咪唑-2-基)甲基]氨基]羰基]-3-氧代-4-(2-苯乙基)-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸甲酯(0.13g,0.20mmol)在THF(5ml)和水(5ml)中的混合物中。18小時后，在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上濃縮所述反應混合物至小體積并在冰浴上冷卻，然后用1.0N AcOH(0.6ml)中和。將溶液冷凍干燥得到為白色粉末的粗品(0.092g,77％)。經(jīng)ODS層析(梯度，含0.1％TFA的5％-30％CH3CN/H2O)得到為白色粉末的目標化合物MS(ES)m/e628.2(M+H)+。
實施例34(±)-3-[[[2-(苯并咪唑-2-基)乙基]氨基]琥珀?；鵠氨基-4-戊炔乙酯的制備a)(±)-4-乙炔基-2-氮雜環(huán)丁酮于0℃將4-乙酰氧基-2-氮雜環(huán)丁酮(9.0g,69.7mmol)緩慢加至乙炔基氯化鎂(31ml的0.5M THF溶液，0.55mmol)的溶液中。1.5小時后，加入1.0N HCl(100ml)，將混合物溶于EtOAc(300ml)中，并按順序用1.0N HCl(100ml)、飽和的NaHCO3(100ml)和鹽水(100ml)洗滌。干燥(硫酸鎂)并濃縮即得為淺棕色固體的目標化合物(4.57g,69％)MS(ES)m/e 96.0(M+H)+。
b)(±)-3-氨基-4-戊炔酯乙酯將(±)-4-乙炔基-2-氮雜環(huán)丁酮(1.3g,13.68mmol)、EtOH(54ml)和濃HCl(6ml)的混合物加熱回流18小時。將反應物冷卻至室溫，用飽和的NaHCO3調(diào)pH至8.0。用EtOAc(3×70ml)萃取反應，用鹽水(50ml)洗滌合并的EtOAc層。干燥(硫酸鎂)并濃縮即得為棕色液體的目標化合物(1.06g,55％)MS(ES)m/e 141.9(M+H)+。
c)[[2-(苯并咪唑-2-基)乙基]氨基]琥珀酸甲酯在0℃時將3-甲酯基丙酰氯(0.6g,4.0mmol)加入2-氨基乙基苯并咪唑二乙酸鹽(1.13g,4.0mmol)和二異丙基乙胺(2.59g,20mmol)于無水CH2Cl2(45ml)的攪拌的溶液中。于室溫下攪拌1.5小時后，用CH2Cl2(50ml)將反應混合物稀釋并順序用水(30ml)、5％碳酸氫鈉(30ml)和鹽水(30ml)洗滌。干燥(硫酸鎂)，濃縮并經(jīng)硅膠層析(8％甲醇/二氯甲烷)得到為黃色固體的目標化合物(0.2g,18％)MS(ES)m/e276.4(M+H)+。
d)[[2-(苯并咪唑-2-基)乙基]氨基]琥珀酸將[[2-(苯并咪唑-2-基)乙基]氨基]琥珀酸甲酯(0.2g,0.73mmol)、1.0N NaOH(1.82ml,1.82mmol)和MeOH(10ml)的混合物于室溫下攪拌24小時，然后濃縮至干。加水(5ml)，用1.0N HCl(1.82ml)中和，所得溶液經(jīng)冷凍干燥即得為灰白色粉末的粗品目標化合物(0.23g)MS(ES)m/e 261.9(M+H)+e)(±)-3-[[[2-(苯并咪唑-2-基)乙基]氨基]琥珀?；鵠氨基-4-戊炔酸乙酯于室溫下將二異丙基乙胺(0.32ml,1.83mmol)加入(±)-3-氨基-4-戊炔酸乙酯(0.12g,0.88mmol)、[[2-(苯并咪唑-2-基)乙基]氨基]琥珀酸(0.19g,0.73mmol)、HOBt·H2O(0.15g,1.1mmol)和EDC(0.21g,1.1mmol)于無水CH3CN(15ml)和DMF(3ml)中的攪拌的溶液中。23小時后，將反應混合物濃縮，用CH2Cl2(100ml)將反應混合物稀釋并順序用5％碳酸氫鈉(2×25ml)和鹽水(25ml)洗滌。干燥(硫酸鎂)，濃縮并經(jīng)硅膠層析(7％甲醇/二氯甲烷)得到為白色固體的目標化合物(0.07g,25％)MS(ES)m/e 385.4(M+H)+。
實施例35(±)-3-[[[2-(苯并咪唑-2-基)乙基]氨基]琥珀?；鵠氨基-4-戊炔酸的制備a)(±)-3-[[[2-(苯并咪唑-2-基)乙基]氨基]琥珀?；鵠氨基-4-戊炔酸于室溫下將1.0N LiOH(0.78ml,0.78mmol)滴加到(±)-3-[[[2-(苯并咪唑-2-基)乙基]氨基]琥珀?；鵠氨基-4-戊炔酸乙酯(0.12g,0.31mmol)于THF(5ml)、H2O(5ml)和CH3CN(1ml)的混合物中。3小時后，在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上將反應混合物濃縮至小體積，在冰浴中冷卻，然后用1.0NAcOH(0.78ml)中和。將溶液冷凍干燥得到為白色粉末的粗品(0.167g)。經(jīng)ODS層析(含0.1％TFA的10％CH3CN/H2O)得到為白色粉末的目標化合物MS(ES)m/e 357.1(M+H)+。
實施例36(±)-3-[[[4-(4-氮雜苯并咪唑-2-基)丁酰基]甘氨?；鵠氨基]-4-戊炔酸(SB-237554)的制備a)(4-氮雜苯并咪唑-2-基)丁酸甲酯于0℃將三乙基胺(319ml,22.9mmol)加到2,3-二氨基吡啶(2.5g,22.9mmol)和4-(氯代甲?；?丁酸甲酯(3.77g,22.9mmol)于無水THF(50ml)的混合物中。于室溫攪拌16小時后，在真空條件下將反應物濃縮至干。殘余物溶于冰醋酸(25ml)中并于110℃加熱。93小時后，將反應冷卻至室溫，并于真空下濃縮。用水(40ml)和CH2Cl2(40ml)將深棕色殘余物稀釋，用5N NaOH將混合物中和至pH7。分層，水溶液層進一步用CH2Cl2(2×100ml)萃取。按順序用5％碳酸氫鈉(2×30ml)和鹽水(30ml)洗滌合并的有機相。干燥(硫酸鎂)，濃縮并經(jīng)硅膠層析(7％甲醇/二氯甲烷)得到目標化合物(0.47,9％)MS(ES)m/e 220.0(M+H)+。
b)(4-氮雜苯并咪唑-2-基)丁酸將(4-氮雜苯并咪唑-2-基)丁酸甲酯(0.47g,2.13mmol)、1.0NNaOH(6ml)和MeOH(10ml)的混合物于室溫下攪拌5.5小時，然后濃縮至干。用水(2ml)將殘余物稀釋，并用1.0N HCl(0.73ml)中和。收集所得固體，空氣干燥即得為黃色粉末的目標化合物(0.32g,73％)MS(ES)m/e 206.0(M+H)+。
C)(±)-3-[[(N-叔丁氧基羰基)甘氨酰基]氨基]-4-戊酸乙酯于室溫下將二異丙基乙胺(0.92ml,5.32mmol)加到(±)-3-氨基-4-戊炔酸乙酯(0.3g,2.13mmol)、Boc-Gly(0.56g,3.19mmol)、HOBt·H2O(0.43g,3.19mmol)和EDC(0.61g,3.19mmol)于無水CH3CN(15ml)中的攪拌的溶液中。34小時后，將反應混合物濃縮，用CH2Cl2(70ml)將反應混合物稀釋并順序用5％碳酸氫鈉(2×15ml)和鹽水(15ml)洗滌。干燥(硫酸鎂)，濃縮并經(jīng)硅膠層析(1∶1 EtOAc/己烷)得到為無色油狀的目標化合物(0.5g,79％)MS(ES)m/e 299.2(M+H)+。d)(±)-3-[(甘氨酰基)氨基]-4-戊酸乙酯三氟乙酸鹽將TFA(5ml)和CH2Cl2(15ml)的溶液于室溫下一次性加入(±)-3-[[(N-叔丁氧基羰基)甘氨?；鵠氨基]-4-戊炔酸乙酯(0.5g,1.68mmol)中。30分鐘后，溶液于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上濃縮，殘余物于甲苯中(再濃縮除去殘余的TFA)得到淺黃色漿狀的目標化合物(0.55g,106％)MS(ES)m/e 199.2(M+H)+。
e)(±)-3-[[[4-(4-氮雜苯并咪唑-2-基)丁?；鵠甘氨酰基]氨基]-4-戊炔酸乙酯于室溫下將二異丙基乙胺(0.94ml,5.43mmol)加到(±)-3-[(甘氨?；?氨基]-4-戊酸乙酯三氟乙酸鹽(0.55g,1.76mmol)、(4-氮雜苯并咪唑-2-基)丁酸(0.32g,1.55mmol)、HOBt·H2O(0.31g,2.33mmol)和EDC(0.45g,2.33mmol)于無水CH3CN(15ml)中的攪拌的溶液中。64小時后，將反應混合物濃縮，用CH2Cl2(100ml)將反應混合物稀釋并順序用5％碳酸氫鈉(2×25ml)和鹽水(25ml)洗滌。干燥(硫酸鎂)，濃縮并經(jīng)硅膠層析(7％MeOH/CH2Cl2)得到為白色固體的目標化合物(0.11g,18％)MS(ES)m/e 3 86.4(M+H)+。
f)(±)-3-[[[4-(4-氮雜苯并咪唑-2-基)丁酰基]甘氨?；鵠氨基]-4-戊炔酸于室溫下將1.0N LiOH(0.71ml,0.71mmol)滴加到(±)-3-[[[4-(4-氮雜苯并咪唑-2-基)丁?；鵠甘氨?；鵠氨基]-4-戊炔酸乙酯(0.11g,0.285mmol)于THF(5ml)、H2O(5ml)和CH3CN(1ml)的混合物中。2小時后，在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上將反應混合物濃縮至小體積，在冰浴中冷卻，然后用1.0N AcOH(0.70ml)中和。將溶液冷凍干燥得到為白色粉末的粗品(0.1g,100％)。經(jīng)ODS層析(含0.1％TFA的5％CH3CN/H2O)得到為白色粉末的目標化合物MS(ES)m/e 358.4(M+H)+。
實施例37(S)-2,3,4,5-四氫-7-[[[(4-氮雜-5-甲基苯并咪唑-2-基)甲基]甲基氨基]羰基-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸的制備a)D-蘋果酸二甲酯-O-三氟甲磺酸于0℃氬氣環(huán)境下將D-蘋果酸二甲酯(12.96g,80mmol)和吡啶(6.8ml,84mmol)在無水二氯甲烷(50ml)中的溶液滴加至三氟甲磺酸酐(14.2ml,84mmol)在無水二氯甲烷(40ml)中(在火焰干燥的燒瓶中)。于0℃將產(chǎn)生的黃桔色的混合物攪拌30分鐘，然后于室溫下攪拌4小時。通過加入水(50ml)驟冷所述反應物，分離層。順序用水(3x)和鹽水洗滌有機層。干燥(硫酸鎂)并濃縮得到為灰白色固體的目標化合物(22.45g,95％)MS(ES)m/e 295(M+H)+。
b)N-(2-氰基苯基)-D-天冬氨酸二甲酯于0℃氬氣環(huán)境下將D-蘋果酸-O-三氟甲磺酸二甲酯(22.4g,76.2mmol)在氯仿(40ml)和己烷(40ml)中的溶液加至在火焰干燥的燒瓶中的2-氨基芐腈(9.0g,76.2mmol)和2,6-二叔丁基吡啶在氯仿(50ml)和己烷(50ml)中的溶液中。于0℃將產(chǎn)生的混合物攪拌30分鐘，然后于室溫下攪拌3天。真空去除溶劑并將殘留物置于乙酸乙酯中并順序用5％HCl(10x)和鹽水洗滌。干燥(硫酸鎂)，濃縮并經(jīng)硅膠快速層析純化(12％乙酸乙酯/己烷)得到為澄清油狀物的目標化合物(12.3g,62％)MS(ES)m/e 263.3(M+H)+。
c)(S)-2,3,4,5-四氫-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸甲酯于室溫氫氣環(huán)境下(氣球)將N-(2-氰基苯基)-D-天冬氨酸二甲酯(12g,45.7mmol)、Et3N(7.64ml,54.84mmol)和Raney-Ni(46g，濕重，用甲醇預洗)在甲醇(200ml)中的混合物攪拌2天。過濾去除催化劑并用甲醇(3x)洗滌。濃縮并經(jīng)硅膠快速層析純化(0-5％甲醇/二氯甲烷)得到為白色固體的目標化合物(7.93g,74％)MS(ES)m/e 235.3(M+H)+。
d)(S)-2,3,4,5-四氫-7-溴代-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸甲酯于室溫下將三溴化四丁基銨(5.16g,10.7mmol)分步加至(S)-2,3,4,5-四氫-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸甲酯(2.5g,10.7mmol)在氯仿(50ml)中的溶液中，于室溫下將所述混合物攪拌2天。然后加入水(30ml)，分離有機層并順序用水和鹽水洗滌。干燥(硫酸鎂)，濃縮并經(jīng)硅膠快速層析純化(0-5％甲醇/二氯甲烷)得到為白色固體的目標化合物(1.99g,60％)MS(ES)m/e 313.0(M+H)+。
e)(S)-2,3,4,5-四氫-7-[[[(4-氮雜-5-甲基苯并咪唑-2-基)甲基]甲基氨基]羰基]-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸甲酯于110℃一氧化碳環(huán)境下將含有(S)-2,3,4,5-四氫-7-溴代-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸甲酯(624mg,2mmol)、2-(氨基甲基)-4-氮雜-5-甲基苯并咪唑二鹽酸鹽(695mg,2.8mmol)、DIEA(1.8ml,10mmol)和(Ph3P)2PdCl2(126mg,0.18mmol)在NMP(22ml)的混合物加熱48小時。在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上(高度真空)去除溶劑并將殘留物經(jīng)硅膠快速層析純化(0.5-5％甲醇/二氯甲烷)得到為淡黃色固體的目標化合物(170mg,19.5％)MS(ES)m/e 473.5(M+H)+。
f)(S)-2,3,4,5-四氫-7-[[[(4-氮雜-5-甲基苯并咪唑-2-基)甲基]甲基氨基]羰基]-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸于室溫下將1.0M LiOH(0.6ml,0.6mmol)滴加至(S)-2,3,4,5-四氫-7-[[[(4-氮雜-5-甲基苯并咪唑-2-基)甲基]甲基氨基]羰基]-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸甲酯(170mg,0.39mmol)在甲醇(5ml)和THF(5ml)中的溶液中。攪拌生成的混合物20小時并濃縮。將殘留物溶于水中，用30％TFA酸化并經(jīng)ODS層析(用含有0.1％TFA的5％CH3CN/H2O洗脫)。濃縮并冷凍干燥得到為灰白色粉末的目標化合物[α]n25-74.5°(c=1,CH3OH)；MS(ES)m/e 423.2(M+H)+.
計算值C21H22N6O4·2 TFA·1.75H2OC,44.03；H,4.06；N,12.32.實測值C,44.33；H,4.04；N,12.28.
實施例38(S)-2,3,4,5-四氫-7-[[[(苯并咪唑-2-基)甲基]氨基]羰基]-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸的制備a)(S)-2,3,4,5-四氫-7-碘代-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸甲酯吡啶-ICl復合物于5℃氬氣環(huán)境下將一氯化碘(100ml,1M于二氯甲烷中的溶液)緩慢加至吡啶(8.5ml,105mmol)在無水二氯甲烷(20ml)中的溶液中使溫度維持10-15℃。于5-10℃將所述混合物攪拌20分鐘，然后加入己烷(50ml)，于冷浴中將所述混合物再攪拌30分鐘。吸取過濾收集固體，順序用己烷和石油醚洗滌，干燥得到為黃色結(jié)晶固體的試劑(22.5g)。
將吡啶-ICl復合物(1.27g,5.28mmol)分步加至(S)-2,3,4,5-四氫-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸甲酯(1.18g,4.8mmol)在二氯甲烷(20ml)和甲醇(20ml)中的溶液中。于室溫下將產(chǎn)生的混合物攪拌40分鐘，然后加入1M硫酸氫鈉(20ml)。吸取過濾收集固體并用乙醚洗滌。干燥得到為灰白色固體的目標化合物(1.72g，定量)MS(ES)m/e361.2(M+H)+。
b)(S)-2,3,4,5-四氫-7-[[[(苯并咪唑-2-基)甲基]氨基]羰基]-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸甲酯于110℃一氧化碳環(huán)境下將(S)-2,3,4,5-四氫-7-碘代-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸甲酯(1.08g,3mmol)、2-氨基甲基苯并咪唑二鹽酸鹽水化物(924mg,4.2mmol)、DIEA(6.2ml,15mmol)和(Ph3P)2PdCl2(211mg,0.3mmol)在NMP(30ml)的混合物加熱3小時。在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上(高度真空)去除溶劑并將殘留物經(jīng)硅膠快速層析純化(0-7％甲醇/二氯甲烷)得到為灰白色固體的目標化合物(530mg,44％)MS(ES)m/e 408.1(M+H)+。
(S)-2,3,4,5-四氫-7-[[[(苯并咪唑-2-基)甲基]氨基]羰基]-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸
c)根據(jù)實施例37(f)的方法，但用(S)-2,3,4,5-四氫-7-[[[(苯并咪唑-2-基)甲基]氨基]羰基]-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸甲酯代替(S)-2,3,4,5-四氫-7-[[[(4-氮雜-5-甲基苯并咪唑-2-基)甲基]甲基氨基]羰基]-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸甲酯制備為白色粉末的目標化合物(66％)[α]n25-145.3°(c=1,CH3OH)；MS(ES)m/e 394.2(M+H)+.計算值C20H19N5O4·2TFA·0.125H2OC,46.22；H,3.43；N,11.23.實測值C,46.13；H,3.78；N,11.49.
實施例39(±)-N-[2-(氨基甲基)-4-[[[(4-氮雜-5-甲基苯并咪唑-2-基)甲基]甲基氨基]羰基]苯基]天冬氨酸的制備a)(±)-2,3,4,5-四氫-7-[[[(4-氮雜-5-甲基苯并咪唑-2-基)甲基]甲基氨基]羰基]-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸甲酯于室溫下將EDC(130mg,0.75mmol)加至(±)-2,3,4,5-四氫-7-羧基-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸甲酯(190mg,0.68mmol)、2-(氨基甲基)-4-氮雜-5-甲基苯并咪唑二鹽酸鹽(169mg,0.68mmol)、HOBt.H2O(101mg,0.75mmol)和DIEA(0.39ml,2.24mmol)在無水DMF中的溶液中。20小時后，在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(高度真空)上濃縮所述反應物，將殘留物經(jīng)硅膠層析(1-6.5％甲醇/二氯甲烷)得到為白色固體的目標化合物(260mg,88％)MS(ES)m/e 437.5(M+H)+。
b)(±)-N-[2-(氨基甲基)-4-[[[(4-氮雜-5-甲基苯并咪唑-2-基)甲基]甲基氨基]羰基]苯基]天冬氨酸根據(jù)實施例37(f)的方法，但用(±)-2,3,4,5-四氫-7-[[[(4-氮雜-5-甲基苯并咪唑-2-基)甲基]甲基氨基]羰基]-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸甲酯代替(S)-2,3,4,5-四氫-7-[[[(4-氮雜-5-甲基苯并咪唑-2-基)甲基]甲基氨基]羰基]-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸甲酯制備為白色粉末的目標化合物(66％)
MS(ES)m/e441.2(M+H)+.
計算值C21H24N6O5·2TFA·2.25H2OC,42.08；H,4.38；N,11.78.實測值C,42.01；H,4.18；N,11.55.
實施例40(S)-2,3,4,5-四氫-7-[[[(4-氮雜-5-甲基苯并咪唑-2-基)甲基]氨基]羰基]-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸的制備a)(S)-2,3,4,5-四氫-7-[[[(4-氮雜-5-甲基苯并咪唑-2-基)甲基]氨基]羰基]-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸甲酯根據(jù)實施例38(b)的方法，但用2-(氨基甲基)4-氮雜-5-甲基苯并咪唑二鹽酸鹽代替2-氨基甲基苯并咪唑二鹽酸鹽水化物制備為琥珀色固體的目標化合物(63％)MS(ES)m/e 423(M+H)+。
b)(S)-2,3,4,5-四氫-7-[[[(4-氮雜-5-甲基苯并咪唑-2-基)甲基]氨基]羰基]-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸根據(jù)實施例37(f)的方法，但用(S)-2,3,4,5-四氫-7-[[[(4-氮雜-5-甲基苯并咪唑-2-基)甲基]氨基]羰基]-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸甲酯代替(S)-2,3,4,5-四氫-7-[[[(4-氮雜-5-甲基苯并咪唑-2-基)甲基]甲基氨基]羰基]-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸甲酯制備為白色粉末的目標化合物(50％)MS(ES)m/e 409.2(M+H)+.計算值C20H20N6O4·1.75TFA.H2OC,45.09；H,3.82；N,3.45.實測值C,45.18；H,4.10；N,13.58.
實施例41(S)-2,3,4,5-四氫-7-[[[(苯并咪唑-2-基)甲基]氨基]羰基]-3-氧代-4-[2-(吡啶-3-基)乙基]-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸酯的制備a)4-氟代-3-[[2-(吡啶-3-基]乙基]氨基]苯甲酸叔丁酯將4-氟代-3-甲基苯甲酸叔丁酯(3.83g,18.22mmol)、NBS(3.578,20.24mmol)、過氧化苯甲酰(0.228,0.91mmol)和四氯化碳(90ml)加熱回流。16小時后，在冰水中冷卻所述反應物并過濾，濃縮濾液。使殘留物流經(jīng)短的硅膠柱(20％乙酸乙酯/己烷)去除基線物質(zhì)，并濃縮濾液。將殘留物溶于THF(90ml)中，迅速加入3-(2-氨基乙基)吡啶(6.97g,57mmol)。該加成反應溫和吸熱。將所述反應物攪拌過夜然后濃縮。用乙醚(100ml)稀釋殘留物并順序用1.0N氫氧化鈉(30ml)、水(30ml)和鹽水(30ml)洗滌。干燥(硫酸鎂)，濃縮并經(jīng)硅膠層析(10％甲醇/二氯甲烷)得到為黃色油狀物的目標化合物(2.58g,59％)MS(ES)m/e331(M+H)+。
b)(S)-4-氟代-3-[2-氮雜-4-(芐氧基羰基)氨基-3,6-二氧代-6-甲氧基-2-[2-(吡啶-3-基)乙基]己基]苯甲酸叔丁酯于室溫下將DCC(1.86g,9mmol)加至4-氟代-3-[[2-(吡啶-3-基]乙基]氨基苯甲酸叔丁酯(2.7g,8.18mmol)、N-Cbz-L-天冬氨酸β-甲酯(J.Am.Chem.Soc.1957,79,5967；2.53g,9mmol)和HOBt.H2O(1.2g,9mmol)在無水DMF(10ml)中的溶液中。24小時后，用乙醚(25ml)稀釋所述混合物并過濾。將濾液濃縮至干，用乙醚(50ml)稀釋殘留物并用水(2×10ml)和鹽水(10ml)洗滌。干燥(硫酸鎂)，濃縮并經(jīng)硅膠層析(二氯甲烷)得到為無色油狀物的目標化合物(2.4g,49％)MS(ES)m/e594(M+H)+。
c)(S)-4-氟代-3-[4-氨基-2-氮雜-3,6-二氧代-6-甲氧基-2-[2-(吡啶-3-基)乙基]己基]苯甲酸叔丁酯于室溫氫氣環(huán)境下(50psi)振搖(S)-4-氟代-3-[2-氮雜-4-(芐氧基羰基)氨基-3,6-二氧代-6-甲氧基-2-[2-(吡啶-3-基)乙基]己基]苯甲酸叔丁酯(2.4g,4mmol)、10％Pd/C(184mg,0.17mmol)和甲醇(17ml)的混合物。1.5小時后，通過celite_過濾所述反應物并濃縮。經(jīng)硅膠層析(10％甲醇于1∶1乙酸乙酯/氯仿中)得到為無色油狀物的目標化合物(1.1g,59％)MS(ES)m/e 460(M+H)+。
d)(S)-2,3,4,5-四氫-7-(叔丁氧基羰基)-4-[2-(吡啶-3-基)乙基]-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸甲酯于120-125℃氬氣環(huán)境下在油浴上加熱(S)-4-氟代-3-[4-氨基-2-氮雜-3,6-二氧代-6-甲氧基-2-[2-(吡啶-3-基)乙基]己基]苯甲酸叔丁酯(0.64g,1.39mmol)在無水DMSO(5.7ml)中的溶液。17.5小時后，在冰水中冷卻所述反應物并用水(12ml)稀釋。用乙酸乙酯(3×20ml)萃取所述混合物，用水(10ml)和鹽水(10ml)洗滌合并的乙酸乙酯層。干燥(硫酸鎂)，濃縮，經(jīng)硅膠層析(9∶1二氯甲烷/甲醇)得到近無色的固體目標化合物(0.15g,33％)MS(ES)m/e 440(M+H)+。
e)(S)-2,3,4,5-四氫7-羧基-4-[2-(吡啶-3-基)乙基]-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸甲酯將4M HCl/二氧六環(huán)(0.5ml)加至(S)-2,3,4,5-四氫7-(叔丁氧基羰基)-4-[2-(吡啶-3-基)乙基]-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸甲酯(0.18g,4.1mmol)在無水二氯甲烷(5ml)中的溶液中并于室溫下將所述反應物攪拌過夜。真空濃縮，接著在甲苯(3×10ml)中再濃縮得到目標化合物(0.12g,65％)MS(ES)m/e 384(M+H)+。
f)(S)-2,3,4,5-四氫-7-[[[(苯并咪唑-2-基)甲基]氨基]羰基]-3-氧代-4-[2-(吡啶-3-基)乙基]-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸甲酯將(S)-2,3,4,5-四氫-7-羧基-4-[2-(吡啶-3-基)乙基]-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸甲酯(0.12g,0.26mmol)和亞硫酰氯(15ml)的混合物回流1小時。將產(chǎn)生的桔色溶液濃縮至干殘留黃桔色泡沫狀物。將其溶于二氯甲烷(10ml)中并于0℃氬氣環(huán)境下滴加至含有2-氨基甲基苯并咪唑二鹽酸鹽水化物(0.058g,0.26mmol)、吡啶(0.72g,9.1mmol)和三乙胺(0.55g,5.46mmol)在二氯甲烷(15ml)中溶液。然后于室溫氬氣環(huán)境下攪拌所述反應混合物。25.5小時后，向所述反應混合物中加入二氯甲烷(200ml)和5％碳酸氫鈉(50ml)得到淡黃色沉淀，將其過濾并空氣干燥得到目標化合物(0.030g,22％產(chǎn)率)MS(ES)m/e 513(M+H)+。
g)(S)-2,3,4,5-四氫-7-[[[(苯并咪唑-2-基)甲基]氨基]羰基]-3-氧代-4-[2-(吡啶-3-基)乙基]-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸酯于室溫下將1.0 LiOH(0.57ml,0.57mmol)滴加至(S)-2,3,4,5-四氫-7-[[(苯并咪唑-2-基)甲基]氨基]羰基]-3-氧代-4-[2-(吡啶-3-基)乙基]-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸甲酯(0.030g,0.059mmol)在THF(4ml)和水(5ml)中的混合物中。將產(chǎn)生的淡棕黃色溶液攪拌21.5小時，然后在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上濃縮。將殘留物經(jīng)冷凍干燥得到為黃色粉末的粗品產(chǎn)物。經(jīng)制備性HPLC(PRP-1_柱，梯度洗脫，含有0.1％TFA的10-20％乙腈/水)得到目標化合物(0.010g,34％產(chǎn)率)MS(ES)m/e 499(M+H)+.計算值C22H26N6O4·3C2HF3O2·3HCl·3 H2OC,37.41；H,3.41；N,7.52.實測值C,37.6；H,3.52；N, 7.52.
實施例42(S)-2,3,4,5-四氫-7-[[[(苯并咪唑-2-基)甲基]甲基氨基]羰基]-4-甲基-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸乙酯的制備a)(S)-2,3,4,5-四氫-7-[[[(苯并咪唑-2-基)甲基]甲基氨基]羰基]-4-甲基-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸乙酯向乙醇(200ml)中通入氯化氫氣體10分鐘，然后加入(S)-2,3,4,5-四氫-7-[[[(苯并咪唑-2-基)甲基]甲基氨基]羰基]-4-甲基-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸(2.00g,4.5mmol)。于室溫下將所述反應物攪拌24小時，然后在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上濃縮至干。將殘留物在甲苯(2x)中再濃縮去除殘留的乙醇，然后經(jīng)硅膠層析(梯度，7％甲醇/二氯甲烷(1L)，然后10％甲醇/二氯甲烷)。將產(chǎn)生的殘留物溶于乙醇中，加入乙醚沉淀固體。收集固體并用乙醚洗滌得到為白色固體的目標化合物MS(ES)m/e 450.2(M+H)+.計算值C24H27N5O4·1.5H2OC,60.49；H,6.35；N,14.70.實測值C,60.41；H,6.27；N,14.38.
實施例434-[[[3-(1H-苯并咪唑-2-基)丙基]氨基]羰基]哌啶-1-乙酸的制備a)2-[3-(N-叔丁氧基羰基)氨基丙基]苯并咪唑于0℃氬氣環(huán)境下將氯代甲酸異丁酯(10.2ml,79mmol)在THF(25ml)中的溶液加至4-(叔丁氧基羰基)氨基丁酸(Organic Synthesis1984,63,160；13.5g,0.066mmol)和三乙胺(11ml,80mmol)在THF(50ml)中的溶液中。0.5小時后,向產(chǎn)生的白色的懸浮液中滴加1,2-亞苯基二胺(7g,64.8mmol)在THF(50ml)中的溶液。將所述反應物攪拌18小時，然后過濾，將濾液濃縮為半固體。將其溶于乙酸(100ml)中并于70℃將所述溶液加熱18小時。濃縮所述反應混合物，將殘留物在甲苯中再濃縮幾次。經(jīng)硅膠快速層析純化得到目標化合物(6.0g,33％)MS(ES)m/e 276(M+H)+。
b)2-(3-氨基丙基)苯并咪唑二鹽酸鹽于室溫下將2-[3-(N-叔丁氧基羰基)氨基丙基]苯并咪唑(1.2g,4.3mmol)和4M HCl的二氧六環(huán)(20ml)在二氯甲烷(25ml)中的溶液攪拌18小時。過濾產(chǎn)生的白色的懸浮液得到目標化合物(1.07g,97％)。
c)4-[[[3-(1H-苯并咪唑-2-基)丙基]氨基]羰基]哌啶-1-乙酸乙酯將4-羧基哌啶-1-乙酸乙酯鹽酸鹽(Yellin’s SB 223913 CIP)(0.76g,3mmol)在亞硫酰氯(10ml)中的混合物加熱回流15分鐘，然后濃縮至干。從甲苯中蒸發(fā)數(shù)次后，將殘留物和2-(3-氨基丙基)苯并咪唑二鹽酸鹽(0.77g,3mmol)和DIEA(3ml)溶于DMF(25ml)中。18小時后，使所述反應混合物分配于乙酸乙酯(50ml)和5％碳酸氫鈉(100ml)之間，用乙酸乙酯(2×50ml)萃取。順序用水和飽和氯化鈉溶液洗滌合并的有機萃取物，然后經(jīng)硫酸鎂干燥。濃縮并經(jīng)硅膠快速層析純化(6％甲醇/二氯甲烷)得到目標化合物(40mg,3％)。
b)4-[[[3-(苯并咪唑-2-基)丙基]氨基]羰基]哌啶-1-乙酸于室溫下將1N氫氧化鈉溶液(0.4ml,0.4mmol)加至4-[[3-(1H-苯并咪唑-2-基)丙基氨基]羰基]哌啶-1-乙酸乙酯(40mg,0.1mmol)在甲醇(10ml)中的攪拌的溶液中。18小時后，用乙酸(1ml)中和所述混合物并濃縮去除甲醇。將水溶液上XAD-2柱，用水(500ml)洗脫，然后用20％CH3CN/H2O洗脫。收集含有產(chǎn)物的組分并冷凍干燥得到目標化合物(9mg,25％)MS(ES)m/e 345.2 [M+H]+.
計算值C18H24N4O3·0.75H2OC,60.40；H,7.18；N,15.65.實測值C60.48；H,7.16；N,15.40.
實施例444-[[[3-(苯并咪唑-2-基]丙基]氨基]羰基]苯基乙酸的制備a)4-[[[3-(苯并咪唑-2-基]丙基]氨基]羰基]-1-苯基乙酸乙酯將2-(4-羧基苯基)乙酸乙酯(Yellin’s SB 223913 CIP)(0.5g,2.4mmol)、2-(3-氨基丙基)苯并咪唑二鹽酸鹽(0.7g,2.8mmol)、HOBt.H2O(0.36g,2.6mmol)、EDC(0.5g,2.6mmol)和DIEA(1.5ml,8.8mmol)在DMF(15ml)中的混合物快速溫熱并于室溫下攪拌18小時。使所述反應混合物分配于乙酸乙酯(50ml)和5％碳酸氫鈉(100ml)之間，用乙酸乙酯(2×50ml)萃取。順序用水和飽和氯化鈉溶液洗滌合并的有機萃取物，然后經(jīng)硫酸鎂干燥。將蒸發(fā)的殘留物的固體與乙醚一起研磨得到目標化合物(0.56g,66％)MS(ES)m/e 366.0[M+H]+計算值C21H23N3O3·0.25H2OC,68.18；H,6.40；N,11.36.實測值C,68.16；H,6.26；N,11.36.
b)4-[[[3-(苯并咪唑-2-基]丙基]氨基]羰基]苯基乙酸于室溫下將1N氫氧化鈉溶液(6ml,6mmol)加至4-[[[3-(1H-苯并咪唑-2-基]丙基]氨基]羰基]-1-苯基乙酸乙酯(0.38g,1mmol)在甲醇(15ml)中的攪拌的溶液中。4小時后,用乙酸(6ml)中和所述混合物并過濾產(chǎn)生的固體得到目標化合物(77mg,22％)MP 108-110℃；MS(ES)m/e 345.2[M+H]+.計算值C19H19N3O3·0.6H2OC,65.54；H,5.85；N,12.07.實測值C,65.63；H,5.65；N,11.95.
實施例45(S)-2,3,4,5-四氫-4-甲基-3-氧代-7-[[[(5-三氟甲基苯并咪唑-2-基]甲基]甲基氨基]羰基]-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸的制備a)3,4-二氨基三氟化苯將4-氨基-3-硝基三氟化苯(3.7070g,17.98mmol)溶于甲醇中，加入催化量的10％Pd/C。向反應物中通入氫氣并于室溫氫氣(氣球)下攪拌。24小時后，將所述反應物通過celite_過濾，真空蒸發(fā)濾液得到目標化合物(3.0878g,98％)。該物質(zhì)不經(jīng)鑒定使用。
b)2-[N-(芐氧基羰基)-N-甲基]氨基甲基-5-三氟甲基苯并咪唑?qū)bz-肌氨酸(3.9950g,17.13mmol)溶于無水THF中，加入氯代甲酸異丁酯(2.5ml,19.27mmol)，接著加入三乙胺(5.0ml,35.95mmol)。于室溫下使混合的酸酐形成30分鐘，然后加至3,4-二氨基三氟化苯(3.0818g,7.53mmol)在無水THF中的溶液中。于室溫下20小時后，真空蒸發(fā)所述反應物。使殘留物分配于乙酸乙酯和1.0N碳酸氫鈉之間，分離層。用乙酸乙酯萃取水層，干燥(硫酸鎂)合并的有機層，過濾并真空蒸發(fā)。使殘留物在甲苯中再濃縮，然后溶于冰乙酸(125ml)中。于110℃將所述溶液加熱24小時，然后真空蒸發(fā)乙酸。使殘留物從甲苯中再濃縮，然后吸附于硅膠上并上無水硅膠快速層析柱。用1∶1氯仿/乙醚洗脫得到目標化合物(2.9397g,47.2％)TLC Rf(1∶1 CH2Cl2/Et2O)0.57；MS(ES)m/e 364.2(M+H)+；1H NMR(250MHz,CDCl3)δ8.0-7.2(m,9H),5.05(s,2H),4.84(s,2H),3.07(s,3H).
c)2-(甲基氨基甲基)-5-三氟甲基苯并咪唑?qū)?-[N-(芐氧基羰基)-N-甲基]氨基甲基-5-三氟甲基苯并咪唑(2.9397g,8.09mmol)溶于甲醇中，加入催化量的10％Pd/C。向反應物中通入氫氣并于室溫氫氣(氣球)下攪拌。5小時后，將所述反應物通過celite_過濾，真空濃縮蒸發(fā)濾液殘留褐色油狀物。400MHz NMR分析顯示Cbz保護基仍然存在，因此使殘留物再經(jīng)歷反應條件。18小時后，通過celite_過濾去除催化劑并真空蒸發(fā)濾液得到目標化合物(1.7809g,96％)1H NMR(250MHz,CDCl3)δ7.76-7.32(m,4H),4.32(s,2H),2.59(s,3H).
d)(S)-2,3,4,5-四氫-4-甲基-3-氧代-7-[[[(5-三氟甲基苯并咪唑-2-基]甲基]甲基氨基]羰基]-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸甲酯將(S)-7-羧基-4-甲基-3-氧代-2,3,4,5-四氫-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸甲酯(179.2mg,0.61mmol)稱于100ml圓底燒瓶中。加入乙腈(10ml)，接著加入HOBt.H2O(97.9mg,0.72mmol)和EDC(149.3mg,0.78mmol)。所有固體溶解后，加入2-(甲基氨基甲基)-5-三氟甲基苯并咪唑(186.1mg,0.81mmol)在乙腈中的溶液和二異丙基乙胺(0.25mg,1.44mmol)。于室溫下24小時后，真空蒸發(fā)所述反應物，將殘留物經(jīng)硅膠層析(3％甲醇/氯仿)得到目標化合物(308.1mg,100％)TLC Rf(5％MeOH/CHCl3)0.21；1H NMR(250MHz,CDCl3)δ7.83-7.16(m,7H),5.37(d,1H),5.05-4.70(m,3H),2.96(m,3H),3.72(s,3H),3.16(s,2H),2.11(s,3H)；MS(ES)m/e 504.0(M+H)+.
e)(S)-2,3,4,5-四氫-4-甲基-3-氧代-7-[[[(5-三氟甲基苯并咪唑-2-基]甲基]甲基氨基]羰基]-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸將(S)-2,3,4,5-四氫-4-甲基-3-氧代-7-[[[(5-三氟甲基苯并咪唑-2-基]甲基]甲基氨基]羰基]-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸甲酯(308.1mg,0.61mmol)溶于甲醇(5ml)中，加入水(5ml)，接著加入1.0N氫氧化鈉(2.0ml,2.0mmol)。于室溫下24小時后，用1.0N鹽酸(2.0ml)中和所述反應物。于室溫下將奶白色的混合物攪拌15分鐘，然后用水稀釋，在燒結(jié)的玻璃漏斗上收集沉淀。在真空干燥器中將白色粉末干燥過夜得到目標化合物(268.0mg,90％)
MS(ES)m/e490.2(M+H)+.計算值C23H22N5O4F3·2.25H2O·0.25HClC,51.24；H,5.00；N,12.99.實測值C,51.44；H,4.96；N,12.45.
實施例46(S)-2,3,4,5-四氫-7-[[[(4,7-二甲氧基苯并咪唑-2-基]甲基]甲基氨基]羰基]-4-甲基-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸的制備a)2-[N-(芐氧基羰基)-N-甲基]氨基甲基-4,7-二甲氧基苯并咪唑根據(jù)實施例45(b)的方法，用1,2-二氨基-3,6-二甲氧基苯代替3,4-二氨基三氟化苯制備目標化合物MS(ES)m/e 356.2(M+H)+；1H NMR(250MHz,CDCl3)δ7.34(s,5H),6.54(d,2H),5.18(s,2H),4.65(s,2H),3.95(s,3H),3.86(s,3H),3.03(s,3H).
b)4,7-二甲氧基-2-(甲基氨基甲基)苯并咪唑?qū)?-[N-(芐氧基羰基)-N-甲基]氨基甲基-4,7-二甲氧基苯并咪唑(186.5mg,0.53mmol)溶于甲醇中，加入催化量的10％Pd/C。向反應物中通入氫氣并于室溫氫氣(氣球)下攪拌。20小時后，將所述反應物通過celite_過濾，真空蒸發(fā)濾液得到目標化合物(96.9mg,83％)1H NMR(250MHz,CDCl3)δ6.52(s,2H),3.94-3.86(m,6H),2.36(s,3H).
c)(S)-2,3,4,5-四氫-7-[[[(4,7-二甲氧基苯并咪唑-2-基]甲基]甲基氨基]羰基]-4-甲基-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸甲酯將(S)-7-羧基-4-甲基-3-氧代-2,3,4,5-四氫-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸甲酯(112.3mg,0.38mmol)稱于100ml圓底燒瓶中。加入乙腈,接著加入HOBt.H2O(62.3mg,0.46mmol)和EDC(120.0mg,0.63mmol)。所有固體溶解后，加入二異丙基乙胺(0.1ml,0.57mmol)，接著加入含有二異丙基乙胺(0.1ml,0.57mmol)的4,7-二甲氧基-2-(甲基氨基甲基)苯并咪唑(96.8mg,0.44mmol)在乙腈中的溶液。于室溫下2.5天后，真空蒸發(fā)所述反應物。將殘留物與甲苯一起再蒸發(fā)一次，然后經(jīng)硅膠層析(氯仿，然后5％甲醇/氯仿)得到目標化合物(152.0mg,80.0％)TLC Rf(5％MeOH/CHCl3)0.35；MS(ES)m/e 496.2(M+H)+；1H NMR(250MHz,CDCl3)δ7.25(m,2H),6.56(s,2H),5.36(d,1H),3.91(s,6H),3.70(s,3H),3.08(s,3H).
d)(S)-2,3,4,5-四氫-7-[[[(4,7-二甲氧基苯并咪唑-2-基]甲基]甲基氨基]羰基]-4-甲基-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸根據(jù)實施例45(e)的方法，使(S)-2,3,4,5-四氫-7-[[[(4,7-二甲氧基苯并咪唑-2-基]甲基]甲基氨基]羰基]-4-甲基-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸甲酯皂化得到目標化合物(110.0mg,74％)MS(ES)m/e 482.2(M+H)+.計算值C24H27N5O6·0.75H2OC,58.23；H,5.80；N,14.15.實測值C,58.26；H,5.59；N,13.90.
實施例47(S)-2,3,4,5-四氫-7-[[[(4-甲基苯并咪唑-2-基)甲基]甲基氨基]羰基]-4-甲基-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸的制備a)1,2-二氨基-3-甲基苯根據(jù)實施例45(a)的流程，但用2-甲基-6-硝基苯胺(3.0204g,19.98mmol)取代4-氨基-3-硝基三氟甲苯，制備目標化合物(2.4815g)?？刹唤?jīng)過鑒定而使用。
b)2-[N-(芐氧基羰基)-N-甲基]氨基甲基-4-甲基苯并咪唑?qū)bz-肌氨酸(4.6466g,19.92mmol)溶于100ml圓底燒瓶中的無水THF中。加入三乙基胺(3.0ml,21.57mmol)，然后加入氯代甲酸異丁酯(2.8ml,21.59mmol)。白色反應混合物于RT攪拌0.5hr，然后在-20到-30℃將其加到1,2-二氨基-3-甲基苯(2.4815g)于無水THF的溶液中。20分鐘后，將反應物溫熱至RT，在此溫度下攪拌16hr。在真空下將反應液蒸發(fā)，殘余物在EtOAc和1.0N NaHCO3中分配。分層，用EtOAc萃取水溶液層。干燥(MgSO4)合并的有機萃取液，過濾，真空下蒸發(fā)。殘余物自甲苯中重新濃縮，將干燥的固體溶于冰AcOH(150ml)。將溶液于110℃加熱18hr，然后在高真空中濃縮。殘余物自甲苯中重新濃縮，將其吸收于硅膠上，置于干燥硅膠快速層析柱上。用1∶1CH2Cl2/Et2O洗脫柱子即得目標化合物(3.1586g,51％)MS(ES)m/e 310.2(M+H)+；1H NMR(250MHz,CDCl3)δ7.35-7.01(m,10H),5.00(s,2H),4.72(s,2H),2.99(s,3H),2.55(s,3H).
c)4-甲基-2-(甲基氨基甲基)苯并咪唑根據(jù)實施例45(c)的流程，但用2-[N-(芐氧基羰基]-N-甲基]氨基甲基-4-甲基苯并咪唑代替2-[N-(芐氧基羰基)-N-甲基]氨基甲基-5-三氟甲基苯并咪唑，制備目標化合物(2.9916g，定量值)1H NMR(250MHz,CDCl3)87.36-7.01(m,4H),4.01(s,2H),2.52(s,3H),2.41(s,3H)。
d)(S)-2,3,4,5-四氫-7-[[[(4-甲基苯并咪唑-2-基)甲基]甲基氨基]羰基]-4-甲基-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸甲酯將(S)-7-羧基-4-甲基-3-氧代-2,3,4,5-四氫-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸甲酯(188.5mg,0.64mmol)稱重并置于100ml圓底燒瓶中。加入CH3CN,然后按順序加入HOBt.H2O(103.5mg,0.77mmol)、EDC(149.3mg,0.78mmol)和二異丙基乙胺(0.15ml,0.86mmol)。15分鐘后，加入4-甲基-2-(甲基氨基甲基)苯并咪唑(273.8mg,1.56mmol)于CH3CN中的溶液。加入CH2Cl2(5ml)溶解某些物質(zhì)。RT下18小時后，將反應物濃縮，殘余物在硅膠上經(jīng)層析(5％MeOH/CHCl3)后得到目標化合物(307.3mg，定量)MS(ES)m/e 450.2(M+H)+；1H NMR(250MHz,CDCl3)δ7.23-7.03(m,7H),6.41(br s,1H),5.33(d,J=16.3Hz,1H),3.69(s,3H),3.46(s,3H),3.10(s,3H).
e)(S)-2,3,4,5-四氫-7-[[[(4-甲基苯并咪唑-2-基)甲基]甲基氨基]羰基]-4-甲基-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸根據(jù)實施例45(e)的流程，將(S)-2,3,4,5-四氫-7-[[[(4-甲基苯并咪唑-2-基)甲基]甲基氨基]羰基-4-甲基-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸甲酯(307.3mg,0.68mmol)皂化即得目標化合物(243.9mg,82％)MS(ES)m/e 436.2(M+H)+.計算值C23H25N5O4·2.75H2OC,56.96；H,6.34；N,14.44實測值C,56.72；H,6.27；N,14.26.
實施例48(S)-2,3,4,5-四氫-7-[[[(4-氮雜-5,7-二甲基苯并咪唑-2-基)甲基]甲基氨基]羰基]-4-甲基-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸的制備a)2-氨基-4,6-二甲基-3-硝基吡啶將2-氨基-4,6-二甲基吡啶(5.55g,45.43mmol)稱重置于500ml圓底燒瓶中。將燒瓶冷卻至-78℃。加入濃硫酸(25ml,450mmol)，然后加入濃硝酸(3.5ml,56.0mmol)?；旌衔锍蔀楣腆w冷凍物。除去冷浴，將反應物溫熱至RT。約15分鐘后伴隨著一氧化二氮氣體的逸出進行了放熱反應，反應物變成深紅色。將反應物于85-90℃加熱3小時，然后冷卻至室溫，用冰水稀釋，用6N NaOH(160ml)中和。用EtOAc(3X)萃取水溶液，用MgSO4干燥合并的EtOAc層，過濾，真空下蒸發(fā)。用硅膠吸附所得桔黃色固體，置于干燥硅膠柱上經(jīng)快速層析。用1∶1 CHCl3/Et2O洗脫柱子，即得目標化合物(1.0650g,14％)MS(ES)m/e168.0(M+H)+。
b)2,3-二氧基-4,6-二甲基吡啶根據(jù)實施例45(a)的流程，用2-氨基-4,6-二甲基-3-硝基吡啶(1.0650g,6.37mmol)取代4-氨基-3-硝基三氟甲苯，制備目標化合物(836.1mg,95.7％)?？晌唇?jīng)鑒定而使用。
c)4-氮雜-2-[N-(芐氧基羰基)-N-甲基]氨基甲基-5,7-二甲基苯并咪唑根據(jù)實施例45(b)的流程，用2,3-二氨基-4,6-二甲基吡啶(836.1mg,6.09mmol)代替3,4-二-氨基三氟甲苯，經(jīng)硅膠層析(3％MeOH/CHCl3)得目標化合物(1.2273g,62％)MS(ES)m/e 325.0(M+H)+。
d)4-氮雜-2-(甲基氨基甲基)-5,7-二甲基苯并咪唑根據(jù)實施例45(c)的流程，用4-氮雜-2-[N-(芐氧基羰基)-N-甲基]氨基甲基-5,7-二甲基苯并咪唑(1.2273g,3.78mmol)代替2-[N-(芐氧基羰基)-N-甲基]氨基甲基-5-三氟甲基苯并咪唑，經(jīng)Et2O研磨后得到為白色粉末的目標化合物。該物質(zhì)可不經(jīng)鑒定而使用。
e)(S)-2,3,4,5-四氫-7-[[[(4-氮雜-5,7-二甲基苯并咪唑-2-基)甲基]甲基氨基]羰基]-4-甲基-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸甲酯將(S)-7-羧基-4-甲基-3-氧代-2,3,4,5-四氫-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸甲酯(175.0mg,0.60mmol)稱重并置于100ml圓底燒瓶中。加入CH3CN(10ml)，然后按順序加入HOBt.H2O(115.9mg,0.86mmol)、EDC(124.9mg,0.65mmol)和二異丙基乙胺(0.13ml,0.75mmol)。加入4-氮雜-2-(甲基氨基甲基)-5,7-二甲基苯并咪唑(144.5mg,0.76mmol)和二異丙基乙胺(0.13ml,0.75mmol)于CH3CN中的混懸液，將反應物于室溫下攪拌。22小時后，將反應物于真空下蒸發(fā)，殘余物與甲苯共蒸發(fā)。經(jīng)硅膠層析(3％MeOH/CHCl3(1L)，然后5％MeOH/CHCl3)即得目標化合物(76.9mg,28％)MS(ES)m/e 465.2(M+H)+。f)(S)-2,3,4,5-四氫-7-[[[(4-氮雜-5,7-二甲基苯并咪唑-2-基)甲基]甲基氨基]羰基]-4-甲基-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸將(S)-2,3,4,5-四氫-7-[[[(4-氮雜-5,7-二甲基苯并咪唑-2-基)甲基]甲基氨基]羰基]-4-甲基-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸甲酯(76.9g,0.17mmol)溶于MeOH(5ml)和H2O(5ml)中，加入1.0N NaOH(0.5ml,0.5mmol)。RT下24小時后，用1.0N HCl(0.5ml)中和反應物，真空下蒸發(fā)溶劑。經(jīng)ODS層析(梯度含0.1％TFA的10％％CH3CN/H2O(500ml)、含0.1％TFA的15％％CH3CN/H2O(500ml)、含0.1％TFA的30％％CH3CN/H2O(500ml)得到殘余物，將它與甲苯共蒸一次，高真空下干燥。所得殘余物溶于MeOH(5ml)，并用Et2O沉淀。用燒結(jié)玻璃漏斗收集白色固體，置于真空干燥器中干燥過夜即得目標化合物(52.0mg,68％)HPLC(ODS柱，1.5ml/min，梯度含0.1％TFA的5-50％CH3CN/H2O)tR12.38min；MS(ES)m/e 451.2(M+H)+.計算值C23H6N6O4·1H2O·1CF3CO2HC,51.55；H,5.02；N,14.43實測值C,51.34；H,5.00；N,14.41.
實施例49(S)-2,3,4,5-四氫-7-[[[(5,6-二氟苯并咪唑-2-基)甲基]甲基氨基]羰基]-4-甲基-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸的制備a)1,2-二氨基-4,5-二氟苯根據(jù)實施例45(a)的流程，用4,5-二氟-2-硝基苯胺(2.0g,11.49mmol)代替4-氨基-3-硝基三氟甲苯，制備目標化合物?？刹唤?jīng)鑒定而使用。
b)2-[N-(芐氧基羰基)-N-甲基]氨基甲基-5,6-二氟苯并咪唑根據(jù)實施例47(b)的流程，用1,2-二氨基-4,5-二氟苯代替1,2-二氨基-3-甲基苯,AcOH環(huán)化步驟在80℃進行而不是110℃，制備得目標化合物(1.3767g,36％)；TLC Rf(1∶1 CH2Cl2/Et2O)0.42；MS(ES)m/e 332.0(M+H)+;1HNMR(250MHz,CDCl3)δ7.50-7.14(m,8H),5.13(s,2H),4.61(s,2H),3.06(s,3H).
c)5,6-二氟代-2-(甲基氨基甲基)苯并咪唑根據(jù)實施例46(b)的流程，用2-[N-(芐氧基羰基)-N-甲基]氨基甲基-5,6-二氟苯并咪唑(1.3767g,4.16mmol)代替2-[N-(芐氧基羰基)-N-甲基]氨基甲基-4,7-二甲氧基苯并咪唑，制備目標化合物(875.6mg，定量)MS(ES)m/e 198.0(M+H)+d)(S)-2,3,4,5-四氫-7-[[[(5,6-二氟苯并咪唑-2-基)甲基]甲基氨基]羰基]-4-甲基-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸甲酯將(S)-7-羧基-4-甲基-3-氧代-2,3,4,5-四氫-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸甲酯(415.7mg,1.42mmol)溶于CH3CN，然后加入HOBt.H2O(209.3mg,1.55mmol)和EDC(314.9mg,1.64mmol)。5分鐘后，加入二異丙基乙胺(0.25ml,1.64mmol),產(chǎn)生一澄清的無色溶液。加入5,6-二氟代-2-(甲基氨基甲基)苯并咪唑(284.5g,1.44mmol)于CH3CN中的溶液。30分鐘后，反應物變成輕微混濁，因此加入更多的二異丙基乙胺(0.25ml)，反應物重新澄清無色。24小時后，將反應物于真空下蒸發(fā)。殘余物與甲苯共蒸發(fā)一次，經(jīng)硅膠層析(CHCl3(0.25L)、然后2％MeOH/CHCl3(1.5L)、然后5％MeOH/CHCl3)即得目標化合物的(456.8mg,68％)MS(ES)m/e 472.2(M+H)+；1H NMR(250MHz,CDCl3)δ7.34-7.08(m,6H),6.44(brs,1H),5.39(d,J=16.2 Hz,1H),3.70(s,3H),3.14(s,3H),2.96(s,3H).
e)(S)-2,3,4,5-四氫-7-[[[(5,6-二氟苯并咪唑-2-基甲基]甲基氨基]羰基]-4-甲基-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸將(S)-2,3,4,5-四氫-7-[[[(5,6-二氟苯并咪唑-2-基)甲基]甲基氨基]羰基]-4-甲基-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸甲酯(456.8mg,0.97mmol)溶于MeOH(10ml)和H2O(10ml)中。加入1.0N NaOH(3.0ml,3.0mmol)，將反應物于RT下攪拌。18小時后，用1.0N HCl(3.0ml)中和反應物。一種白色沉淀形成，將其收集于燒結(jié)玻璃濾器中，真空干燥器中干燥。經(jīng)ODS層析(梯度含0.1％TFA的10％CH3CN/H2O(500ml)、然后含0.1％TFA的18％CH3CN/H2O(500ml)、然后含0.1％TFA的25％CH3CN/H2O(500ml))得到殘余物，將其與甲苯共蒸發(fā)一次。所得殘余物溶于小體積MeOH中，用Et2O沉淀即得為白余色粉末的目標化合物(330.9mg),HPLC(ODC柱；1.5ml/min；含0.1％TFA的梯度5-50％CH3CN/H2O)tR=14.12min；MS(ES)m/e 458.2(M+H)+。C22H21N5O4F2·2.5H2O的計算值C,52.57；H,5.22；N,13.94實測值C,52.76；H,5.15；N,13.67。
實施例50(S)-2,3,4,5-四氫-7-[[[(4-氮雜-5-甲基苯基并咪唑-2-基)甲基]氨基]羰基]-4-甲基-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸的制備a)(S)-2,3,4,5-四氫-7-[[[(4-氮雜-5-甲基苯并咪唑-2-基)甲基]氨基]羰基]-4-甲基-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸甲酯將(S)-7-羧基-4-甲基-3-氧代-2,3,4,5-四氫-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸甲酯(228.8mg,0.78mmol)溶于CH3CN,然后按順序加入HOBt·H2O(154.2mg,1.14mmol)、EDC(179.4mg,0.94mmol)和二異丙基乙胺(0.50ml,0.94mmol)。加入2-(氨基甲基)-4-氮雜-5-甲基苯并咪唑二鹽酸鹽(125.4mg,0.77mmol)于CH3CN/DMF中的溶液，將反應物于RT下攪拌。24小時后，將反應物于真空下蒸發(fā)，殘余物與甲苯共蒸發(fā)一次。經(jīng)硅膠層析(CHCl3(0.25L)然后3％MeOH/CHCl3(0.5L)然后5％MeOH/CHCl3)即得目標化合物(159.9mg,48％)MS(ES)m/e437.2(M+H)+。
b)(S)-2,3,4,5-四氫-7-[[[(4-氮雜-5-甲基苯并咪唑-2-基)甲基]氨基]羰基]-4-甲基-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸根據(jù)實施例48(f)的流程，將(S)-2,3,4,5-四氫-7-[[[(4-氮雜-5-甲基苯并咪唑-2-基)甲基]氨基]羰基]-4-甲基-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸甲酯(159.9mg,0.37mmol)皂化和純化后即得目標化合物MS(ES)m/e 423.39(M+H)+.計算值C21H22N6O4·0.5H2O·1.25TFAC,52.64；H,5.02；N,16.74.實測值C,52.65；H,5.02；N.16.74.
實施例51(S)-2,3,4,5-四氫-4-甲基-7-[[[(4-硝基苯基并咪唑-2-基)甲基]甲基氨基]羰基]-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸的制備a)2-[N-(叔丁氧基羰基)-N-甲基]氨基甲基-4-硝基苯并咪唑?qū)oc-肌氨酸(2.0320g,10.74mmol)溶于無水THF，在干冰/丙酮浴中冷卻至-15℃。加入三乙胺(5.0ml,3.6375mmol)，然后再加入氯代甲酸異丁酯(1.5ml,11.56mmol)。0.5小時后，于-20℃將混合物加到1,2-二氨基-3-硝基苯(1.3047g,10.77mmol)于無水THF的溶液中，將反應物溫熱至RT。24小時后，將反應物于真空下蒸發(fā)，殘余物在EtOAc和1.0N NaHCO3之間分配。分層，用EtOAc萃取水溶液層。將合并的有機相干燥(MgSO4)，過濾，真空干燥。殘余物溶于冰AcOH(100ml)中，將溶液加熱至75℃。24小時后，將反應物于真空下蒸發(fā)，殘余物與甲苯共蒸發(fā)(2X)。將產(chǎn)物吸附于硅膠上，在干硅膠柱上快速層析(梯度CHCl3(0.51)，然后2％MeOH/CHCl3(1L)，然后2％MeOH/CHCl3)以得到目標化合物(2.2089g,75％)1HNMR(250MHz,CDCl3)δ8.10(dd,2H),7.40-7.32(m,1H),4.69(s,2H),3.02(s,3H),1.54(s,9H).
b)2-(甲基氨基甲基)-4-硝基苯并咪唑于室溫下用4N HCl在二氧六環(huán)中處理2-[N-(叔丁氧基羰基)-N-甲基]氨基甲基-4-硝基苯并咪唑(2.2089g,8.05mmol)。加入后，立即會生成白色固體沉淀。4小時后，反應物于真空下蒸發(fā)，殘余物于乙醚中研磨即得為白色固體的目標化合物(1.639g)。它不經(jīng)鑒定即可使用。
c)(S)-2,3,4,5-四氫-7-[[[(4-硝基苯并咪唑-2-基)甲基]甲基氨基]羰基]-4-甲基-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸乙酯根據(jù)實施例49(d)的流程，用2-(甲基氨基甲基)-4-硝基苯并咪唑代替5,6-二氟代-2-(甲基氨基甲基)苯并咪唑，制備目標化合物(292.9mg,定量)MS(ES)m/e 481.2(M+H)+。
d)(S)-2,3,4,5-四氫-7-[[[(4-硝基苯并咪唑-2-基)甲基]甲基氨基]羰基]-4-甲基-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸根據(jù)實施例45(e)的流程，將(S)-2,3,4,5-四氫-7-[[[(4-硝基苯并咪唑-2-基)甲基]甲基氨基]羰基-4-甲基-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸甲酯(292.9mg,0.61mmol)皂化即得目標化合物(211.0mg,68％)MS(ES)m/e467.4(M+H)+.計算值C22H22N6O6·2.5H2OC,52.12；H,5.27；N,16.58實測值C,52.07；H,4.97；N,16.40.
實施例52(S)-2,3,4,5-四氫-7-[[[(4-氨基苯并咪唑-2-基)甲基]甲基氨基]羰基-4-甲基-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸的制備a)(S)-2,3,4,5-四氫-7-[[[(4-氨基苯并咪唑-2-基)甲基]甲基氨基]羰基-4-甲基-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸將(S)-2,3,4,5-四氫-7-[[[(4-硝基苯并咪唑-2-基)甲基]甲基氨基]羰基-4-甲基-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸(108.7mg,0.21mmol)溶于MeOH中，加入催化量的10％Pd/C。向反應物中通入H2，然后在H2氣囊環(huán)境下于室溫攪拌。20小時后，通過Celite_過濾除去催化劑，濾液于真空下蒸發(fā)。所得固體溶于甲醇，用Et2O沉淀，于真空干燥器中干燥，并經(jīng)ODS層析純化(梯度含0.1％TFA的水500ml、含0.1％TFA的5％CH3CN/H2O 500ml、含0.1％TFA的10％CH3CN/H2O 500ml、含0.1％TFA的15％CH3CN/H2O 500ml、含0.1％TFA的20％CH3CN/H2O 500ml、含0.1％TFA的25％CH3CN/H2O 500ml、含0.1％TFA的30％CH3CN/H2O 500ml)。所得產(chǎn)物與甲苯共蒸發(fā)一次，然后用乙醚研磨即得目標化合物(34.7mg)MS(ES)m/e437.5(M+H)+；計算值C22H24N6O4·1.5H2O·1.5TFAC,47.32；H,4.53；N.13.24實測值C,47.35,H,4.86；N.13.61.
實施例532,3,4,5-四氫-7-[[[(1R)-(苯并咪唑-2-基)乙基]甲基氨基]羰基]-4-甲基-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜_-(2S)-乙酸的制備a)2-[1(R)-[N-(芐氧基羰基)-N-甲基]氨基乙基]苯并咪唑根據(jù)實施例47(b)的流程，用Cbz-N-甲基-D-丙氨酸代替Cbz-肌氨酸，用1,2-苯二胺代替1,2-二氨基-3-甲基苯，AcOH環(huán)化步驟于80℃進行而不是110℃，制備目標化合物MS(ES)m/e 310.2(M+H)+。
b)2-[1(R)-(甲基氨基乙基)]苯并咪唑根據(jù)實施例46(b)的流程，用2-[1(R)-[N-(芐氧基羰基)-N-甲基]氨基乙基]苯并咪唑代替2-[N-(芐氧基羰基)-N-甲基]氨基甲基-4,7-二甲氧基苯并咪唑，制備目標化合物(276.0mg,48％)MS(ES)m/e 176.2(M+H)+。
c)2,3,4,5-四氫-7-[[[(1R)-(苯并咪唑-2-基)乙基]甲基氨基]羰基]-4-甲基-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸甲酯根據(jù)實施例49(d)的流程，用2-[1(R)-(甲基氨基乙基)]苯并咪唑代替5,6-二氟代-2-(甲基氨基甲基)苯并咪唑，制備目標化合物(203.5mg,90％)MS(ES)m/e 450.5(M+H)+。
d)2,3,4,5-四氫-7-[[[(1R)-(苯并咪唑-2-基)乙基]甲基氨基]羰基]-4-甲基-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸根據(jù)實施例49(e)的流程，將2,3,4,5-四氫-7-[[[(1R)-(苯并咪唑-2-基)乙基]甲基氨基]羰基-4-甲基-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸乙酯皂化并經(jīng)ODS層析即得目標化合物(179.3mg,75％)MS(ES)m/e 4365(M+H)+.計算值C23H25N5O4·0.75H2O·0.75TFAC,55.01；H,5.14；N,13.10；實測值C,54.98；H,5.42；N,12.75.
實施例54
(S)-2,3,4,5-四氫-7-[[[(4-氮雜-5-甲基苯并咪唑-2-基)甲基]氨基]羰基]-4-甲基-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸乙酯的制備a)(S)-2,3,4,5-四氫-7-[[[(4-氮雜-5-甲基苯并咪唑-2-基)甲基]氨基]羰基]-4-甲基-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸乙酯將(S)-2,3,4,5-四氫-7-[[[(4-氮雜-5-甲基苯并咪唑-2-基)甲基]氨基]羰基]-4-甲基-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸(0.5g)溶于EtOH,溶液于冰浴中冷卻至0℃。向溶液中吹入HCl氣體直至飽和，然后將燒瓶用橡膠隔膜密封，撤掉冰浴。將反應物于RT攪拌20小時，然后真空下蒸發(fā)溶劑。殘余物與甲苯(3X)共蒸發(fā)三次，然后溶于EtOH，用Et2O沉淀。用燒結(jié)玻璃漏斗收集固體，用真空干燥器干燥過夜即得目標化合物(483.9mg)MS(ES)m/e 451.4(M+H)+.計算值C23H26N6O4·HCl·1.375H2OC,53.98；H,5.86；N,16.42.實測值C,54.00；H,5.82；N,16.42.
實施例552,3,4,5-四氫-7-[[[(1S)-(苯并咪唑-2-基)乙基]甲基氨基]羰基]-4-甲基-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜_-(2S)-乙酸的制備a)2-[1(S)-[N-(叔丁氧基羰基)-N-甲基]氨基乙基]苯并咪唑根據(jù)實施例51(a)的流程，用Boc-N-甲基-L-丙氨酸代替Boc-肌氨酸，用1,2-苯二胺代替1,2-二氨基-3-硝基苯，自CHCl3己烷中重結(jié)晶制備得目標化合物(1.7792g,65％)MS(ES)m/e 276.4(M+H)+。
b)2-[1(S)-(甲基氨基乙基)]苯并咪唑根據(jù)實施例51(b)的流程，用2-[1(S)-[N-(叔丁氧基羰基)-N-甲基]氨基乙基]苯并咪唑代替2-[N-(叔丁氧基羰基)-N-甲基]氨基甲基]-4-硝基苯并咪唑，制備目標化合物，可不經(jīng)鑒定而使用。
c)(S)-2,3,4,5-四氫-7-[[[(1S)-(苯并咪啉-2-基)乙基]甲基氨基]羰基]-4-甲基-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸甲酯根據(jù)實施例49(d)的流程，用2-[1(S)-(甲基氨基乙基)]苯并咪唑代替5,6-二氟代-2-(甲基氨基甲基)苯并咪唑，制備得目標化合物(414.7mg,88％)MS(ES)m/e 450.2(M+H)+。
d)2,3,4,5-四氫-7-[[[(1S)-(苯并咪唑-2-基)乙基]甲基氨基]羰基]-4-甲基-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸根據(jù)實施例45(e)的流程，將2,3,4,5-四氫-7-[[[(1S)-(苯并咪唑-2-基)乙基]甲基氨基]羰基]-4-甲基-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸甲酯皂化即得目標化合物(117.2mg)MS(ES)m/e 436.2(M+H)+.計算值C23H25N5O4·0.75H2O·0.75TFAC,55.05；H,5.14；N,13.10；實測值C,55.14；H,5.38；N,13.04.
實施例562,3,4,5-四氫-7-[[[(1S)-(苯并咪唑-2-基)乙基]氨基]羰基]-4-甲基-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜_-(2S)-乙酸的制備a)2-[1(S)-(叔丁氧基羰基)氨基乙基]苯并咪唑根據(jù)實施例51(a)的流程，用Boc-L-丙氨酸代替Boc-肌氨酸，用1,2-苯二胺代替1,2-二氨基-3-硝基苯，制備目標化合物(714.7mg,25％)MS(ES)m/e 262.4(M+H)+。
b)2-[1(S)-(氨基乙基)]苯并咪唑根據(jù)實施例51(b)的流程，用2-[1(S)-(叔丁氧基羰基)氨基乙基]苯并咪唑代替2-[N-(叔丁氧基羰基)-N-甲基]氨基甲基-4-硝基苯并咪唑，制備化合物，可不經(jīng)鑒定而使用。
c)2,3,4,5-四氫-7-[[[(1S)-(苯并咪唑-2-基)乙基]氨基]羰基]-4-甲基-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸甲酯根據(jù)實施例49(d)的流程，用2-[1(S)-(氨基乙基)]苯并咪唑取代5,6-二氟代-2-(甲基氨基甲基)苯并咪唑，制備目標化合物(270.7mg,80％)MS(ES)m/e 436.0(M+H)+。
d)2,3,4,5-四氫-7-[[[(1S)-(苯并咪唑-2-基)乙基]氨基]羰基]-4-甲基-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸根據(jù)實施例45(e)的流程，將2,3,4,5-四氫-7-[[[(1S)-(苯并咪唑-2-基]乙基]氨基]羰基]-4-甲基-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸甲酯皂化即得目標化合物(158.1mg,61％)MS(ES)m/e 422.0(M+H)+.計算值C22H23N5O4·1.75H2OC,58.37；H,5.90；N,15.46；實測值C58.17；H,5.77；N,15.08.
實施例572,3,4,5-四氫-7-[[[(1R)-(苯并咪唑-2-基)乙基]氨基]羰基]-4-甲基-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜_-(2S)-乙酸的制備a)2-[1(R)-(芐氧基羰基)氨基乙基]苯并咪唑根據(jù)實施例47(b)的流程，用Cbz-D-丙氨酸代替Cbz-肌氨酸，用1,2-苯二胺代替1,2-二氨基-3-甲基苯，AcOH環(huán)化步驟于80℃進行而非110℃，制備目標化合物(1.14559,43％)MS(ES)m/e 296.4(M+H)+。
b)2-(1(R)-氨基乙基)苯并咪唑根據(jù)實施例46(b)的流程，用2-[1(R)-(芐氧基羰基)氨基乙基]苯并咪唑代替2-[N-(芐氧基羰基)-N-甲基]氨基乙基-4,7-二甲氧基苯并咪唑，制備目標化合物(258.1mg,93％)MS(ES)m/e 161.9(M+H)+。
c)2,3,4,5-四氫-7-[[[(1R)-(苯并咪唑-2-基)乙基]氨基]羰基]-4-甲基-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜_-(2S)-乙酸甲酯根據(jù)實施例49(d)的流程，用2-((1R)-氨基乙基]苯并咪唑代替5,6-二氟代-2-(甲基氨基甲基)苯并咪唑，制備目標化合物(263.6mg,84％)MS(ES)m/e 436.3(M+H)+。
d)2,3,4,5-四氫-7-[[[(1R)-(苯并咪唑-2-基)乙基]氨基]羰基]-4-甲基-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸根據(jù)實施例49(e)的流程，將2,3,4,5-四氫-7-[[[(1R)-(苯并咪唑-2-基)乙基]氨基]羰基-4-甲基-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜_-(2S)-乙酸甲酯皂化即得目標化合物(125.0mg,49％)MS(ES) m/e 422.0(M+H)+.計算值C22H23N5O4·0.5H2O·1.25HClC,55.51；H,5.35；N,14.71.實測值C,55.70；H,5.47；N,14.53.
實施例58
(S)-2,3,4,5-四氫-7-[[[(咪唑并(1,2a)吡啶-2-基)甲基]甲基氨基]羰基]-4-甲基-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸的制備a)2-羰基乙氧基咪唑并[1,2a]吡啶將2-氨基吡啶(4g,42.50mmol)溶于MeOH(50ml)。加入溴代丙酮酸乙酯(8.3g,42.50mmol)，將反應物于70℃攪拌2小時。除去溶劑，溶液用1M NaOH中和。用EtOAc萃取反應物，鹽水洗滌合并的EtOAc層。干燥(MgSO4)，過濾，濃縮，經(jīng)硅膠快速柱層析(2％MeOH/Cl2CH2)得到淡黃色固體的目標化合物(4.5g,56％)1H NMR(400MHz,CDCl3)δ1.43(t,J=7Hz,3H),4.45(q,J=7Hz,2H),6.86(t,J=6.6Hz,1H),7.24(t,J=6.6Hz,1H).
b)2-羥基甲基咪唑并[1,2a]吡啶于0℃將2-羰乙氧基咪唑并[1,2a]吡啶(0.5g,2.81mmol)溶于無水THF中，然后加入氫化鋁鋰溶液(0.5ml的1.0M于THF中)。將反應物溫熱至RT并攪拌1小時。加入H2O(0.2ml)，然后加入15％NaOH(0.2ml)，最后再加H2O(0.6ml)。過濾除去固體并用熱THF(2×100ml)和熱CHCl3(4×100ml)洗滌。合并濾液和洗滌液，干燥(MgSO4)。過濾后減壓除去溶劑，殘余物經(jīng)硅膠快速柱層析(5％MeOH/Cl2CH2)純化得到淡黃色液體的目標化合物(0.1g,25％)1HNMR(400MHz,CDCl3)δ4.85(s,2H),6.76(t,J=6.8Hz,1H),7.15(t,J=6.8Hz,1H),7.53(s,1H),7.54(d,J=6.7Hz,1H),8.1(d,J=6.7Hz,1H).MS(ES)m/e149(M+H)+.
c)2-氯甲基咪唑并[1,2a]吡啶于0℃將亞硫酰氯(0.4ml,3.2mmol)加到2-羥基甲基咪唑并[1,2a]吡啶(0.4g,2.7mmol)于CHCl3(30ml)的溶液中。于RT下攪拌1小時后，將混懸液倒入冰、10％NaHCO3和CHCl3的混合物中。分層，用CHCl3萃取水相。合并有機萃取液，干燥(MgSO4)。過濾后，減壓下除去溶劑即得目標化合物(0.4g,89％)
1H NMR(400 MHz,CDCl3)δ4.7(s,2H),6.7(t,1H),7.2(t,1H),7.5(d,1H),7.6(s,1H),8.0(d,1H)；MS(ES)m/e 167(M+H)+.
d)2-(甲基氨基甲基)咪唑并[1,2a]吡啶于0℃將新鮮的濃縮甲胺(15ml)加到2-氯甲基咪唑并[1,2a]吡啶(317mg,2mmol)于EtOH(5ml)的溶液中，反應混合物于0℃攪拌2小時。除去溶劑，殘余物經(jīng)反相柱層析純化(C-18硅膠，含0.1％TFA的H2O)。冷凍干燥即得為白色固體的目標化合物(461mg,87％)1H NMR(250 MHz,CDCl3)δ2.5(s,3H),4.0(s,2H),6.7(t,1H),7.2(t,1H),7.5(d,1H),7.6(s,1H),8.1(d,1H).MS(ES)m/e 162(M+H)+.
e)(S)-2,3,4,5-四氫-7-[[[(咪唑并(1,2a)吡啶-2-基)甲基]甲基氨基]羰基]-4-甲基-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸甲酯將(S)-7-羰基-4-甲基-3-氧代-2,3,4,5-四氫-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸甲酯(828.2mg,2.83mmol)溶于CH3CN，按順序加入HOBt.H2O(398.1mg,2.92mmol)、EDC(562.9mg,2.94mmol)和二異丙基乙胺(1ml,5.74mmol)。當固體溶解后，加入2-(甲基氨基甲基)咪唑并[1,2a]吡啶(460.7mg,2.86mmol)和二異丙基乙胺(1.5ml,8.61mmol)于CH3CN中的溶液，將反應物于RT下攪拌。24小時后，將反應物濃縮，殘余物與甲苯(2X)共蒸發(fā)。所得殘余物經(jīng)硅膠層析(5％MeOH/CHCl3)得到目標化合物(694.6mg,56％)MS(ES)m/e 436.4(M+H)+。
f)(S)-2,3,4,5-四氫-7-[[[(咪唑并(1,2a)吡啶-2-基)甲基]甲基氨基]羰基]-4-甲基-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸將(S)-2,3,4,5-四氫-7-[[[(咪唑并(1,2a)吡啶-2-基)甲基]甲基氨基]羰基]-4-甲基-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸甲酯(663.4mg,1.52mmol)溶于MeOH(10ml)。加入H2O(10ml)，然后加入1.0NNaOH(5ml,5.0mmol)，將反應物于RT下攪拌。20小時后，用1.0 NHCl(5ml)中和反應物，溶液于真空下蒸發(fā)。殘余物經(jīng)ODS層析純化(梯度含0.1％TFA的H2O 500ml，含0.1％TFA的5％CH3CN/H2O500ml，含0.1％TFA的10％CH3CN/H2O 500ml，含0.1％TFA的15％CH3CN/H2O 500ml，含0.1％TFA的20％CH3CN/H2O 500ml)，然后再經(jīng)ODS層析一次(梯度含0.1％TFA的水250ml，然后含0.1％TFA的10％CH3CN/H2O 1.5L，然后含0.1％TFA的20％CH3CN/H2O1L)。合并含有純產(chǎn)物的部分，濃縮。殘余物與甲苯共蒸發(fā)，然后溶于MeOH，用Et2O重新沉淀即得目標化合物(96.4mg)MS(ES)m/e 421.9(M+H)+.
計算值C22H23N5O4·0.25H2O·TFAC,53.38；H,4.57；N,12.97.實測值C,53.68；H,4.97；N,12.94.
實施例59(±)-7-[[[(4,5-二甲基-1H-咪唑-2-基)甲基]甲基氨基]羰基]-2,3,4,5-四氫-4-甲基-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸的制備a)N-(羰芐氧基)-N-(甲基)乙腈于RT下將Cbz氯(7.40ml,49.3mmol)緩慢加至N甲基氨基乙腈鹽酸鹽(5.0g,46.92mmol)和三乙胺(13.4ml,96.2mmol)于二氯甲烷(200ml)的溶液中。將反應物于RT下攪拌18小時，用1N HCl、水和鹽水洗滌混合物。將有機層干燥(MgSO4)，濃縮得到為澄清油狀的目標化合物(6.97g,73％)。
b)N-(羰芐氧基)-N-(甲基)氨基硫代乙酰胺將硫代氫吹入N-(羰芐氧基)-N-(甲基)乙腈(15g,73.5mmol)和三乙胺(30.75ml,220.6mmol)于DMF(250ml)的溶液中。20分鐘后，將燒瓶密封，將反應物于RT下攪拌18h。然后將反應物倒入2N NaHCO3(1L)中，用二氯甲烷萃取。用1∶1的水/鹽水(5X)洗滌合并的有機相，干燥(MgSO4)，濃縮得到黃色油狀物，將其經(jīng)硅膠快速層析(梯度40-50％乙酸乙酯/己烷)純化即得為白色固體的目標化合物(12.26g,70％)MS(ES)m/e 239.0(M+H)+。
c)N-(羰芐氧基)-N-甲基-S-(甲基)乙?；虼鷣啺彼狨?acetothioimidate)
于RT下將碘甲烷(17.66ml,283.6mmol)加至N-(羰芐氧基)-N-(甲基)氨基硫代乙酰胺(6.75g,28.36mmol)于丙酮(100ml)的溶液中。在黑暗中將溶液于RT下攪拌3小時，將所得沉淀過濾即得為白色固體的目標化合物(9.63g,89％)MS(ES)m/e 253.4(M+H)+。
d)(±)-2-氨基-3,3-二甲氧基丁烷將氰基硼氫化鈉加至3,3-二甲氧基-2-丁酮(1.32g,10mmol)和乙酸銨(1.1g,100mmol)于甲醇(30ml)的溶液中用甲醇鹽酸液將pH調(diào)至6，將反應物于RT下攪拌過夜，濃縮。殘余物溶于水，用HCl水溶液調(diào)至pH 5。所得溶液用乙醚(3X)萃取，水溶液相用Na2CO3堿化至pH 10，再用乙醚萃取。將有機層干燥(MgSO4)，濃縮即得為澄清油的目標化合物(1.1g,83％)MS(ES)m/e 134.2(M+H)+。
e)N-(羰芐氧基)-N-(甲基-(4,5-二甲基-1H-咪唑-2-基)甲胺將(±)-2-氨基-3,3-二甲氧基丁烷(1.05g,7.89mmol)和N-(羰芐氧基)-N-甲基-S-(甲基)乙酰硫代亞氨酸酯(2.0g,5.26mmol)于甲醇(30ml)的溶液于60℃加熱2小時，濃縮得到黃色油。將粗油溶于6N Hcl(30ml)，于RT攪拌1小時。用NaOH水溶液將上述溶液堿化至pH12，然后用二氯甲烷萃取。將合并的有機相干燥(MgSO4)，濃縮得棕色油，經(jīng)硅膠快速層析(4％甲醇/二氯甲烷)純化得到為澄清油的目標化合物(0.590g,41％)MS(ES)m/e 274.0(M+H)+。
f)N-甲基-(4,5-二甲基-1H-咪唑-2-基)甲胺將N-(羰芐氧基)-N-甲基-(4,5-二甲基-1H-咪唑-2-基)甲胺(0.35g,1.28mmol)的甲醇(15ml)溶液和含10％Pd/C(0.035g)的冰醋酸(5ml)在H2環(huán)境中(45psi)振搖6小時。將反應物過濾，濃縮濾液即得棕色油狀的目標化合物(0.22g,86％)MS(ES)m/e 140(M+H)+，它不經(jīng)進一步純化即可用于下一步驟。
g)(±)-7-[[[(4,5-二甲基-1H-咪唑-2-基)甲基]甲基氨基]羰基]-2,3,4,5-四氫-4-甲基-3-氧代-1 H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸甲酯將N-甲基-(4,5-二甲基-1H-咪唑-2-基)甲胺(0.20g,1.1mmol)和(±)-7-羧基-2,3,4,5-四氫-4-甲基-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸甲酯(0.320g,1.1mmol)于DIEA(0.287ml,1.65mmol)存在下的溶液于室溫下攪拌。加入EDC(0.316g,1.65mmol)，然后再加入DMAP(0.013g,0.11mmol)。混合物于RT下攪拌18小時，濃縮得到油，經(jīng)硅膠快速層析(梯度0.5-2％甲醇/二氯甲烷)純化即得澄清油狀的目標化合物(0.060g,9％)MS(ES)m/e 414.2(M+H)+。
h)(±)-7-[[[(4,5-二甲基-1H-咪唑-2-基)甲基]甲基氨基]羰基]-2,3,4,5-四氫-4-甲基-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸將1N NaOH(3eq)加至(±)-7-[[[(4,5-二甲基-1H-咪唑-2-基)甲基]甲基氨基]羰基]-2,3,4,5-四氫-4-甲基-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸甲酯(0.06g,0.145mmol)的溶液中，將混合物于RT下攪拌5小時，濃縮。殘余物溶于水，用50％乙酸將pH調(diào)至5。將溶液濃縮，經(jīng)MPLC(ODS-AQ,含0.1％TFA的10％乙腈/水，于220nm處紫外測定)純化即得為白色固體的目標化合物(0.050g,86％)MS(ES)m/e 400.2(M+H)+。
實施例603-[(3-[2-(苯并咪唑-2-基)乙基]異噁唑啉-5(RS)-基]乙?；鵠氨基-3(R,S)-甲基丙酸的制備a)4-(苯并咪唑-2-基)-1-丁烯根據(jù)P50256-1中制備4的一般流程，用4-戊烯酸代替Boc-肌氨酸，制備目標化合物。
b)4-(1-甲苯磺酰基苯并咪唑-2-基)-1-丁烯將氫化鈉小心地加至4-(苯并咪唑-2-基)-1-丁烯(50mmol)和4-甲苯磺酰氯(55mmol)于無水THF(200ml)的溶液中。將反應物于RT下攪拌至反應完全，然后用飽和NH4Cl(200ml)驟冷，用EtOAc萃取混合物。將合并的有機萃取液干燥(MgSO4)并濃縮，殘余物用硅膠層析純化即得目標化合物。
c)4-(1-甲苯磺?；讲⑦溥?2-基)-1-丁醛于-78℃時將臭氧吹入4-(1-甲苯磺?；讲⑦溥?2-基)-1-丁烯(40mmol)于CH2Cl2(160ml)和MeOH(40ml)的溶液中直至生成持續(xù)的藍色，然后向溶液中吹入氬氣除去多余的臭氧。加入無水二甲基硫醚(過量)，將反應物溫熱至RT。將反應物于RT下攪拌至反應完全，然后濃縮，殘余物經(jīng)硅膠層析即得目標化合物。
d)4-(1-甲苯磺?；讲⑦溥?2-基)-1-丁醛肟將鹽酸羥胺(33mmol)于0℃加到4-(1-甲苯磺?；讲⑦溥?2-基)-1-丁醛(30mmol)和無水乙酸鈉(66mmol)于MeOH(150ml)的溶液中。將反應物于0℃攪拌直至完全，濃縮，殘余物在H2O與EtOAc之間分配。分層，用EtOAc萃取水層。按順序用5％NaHCO3和飽和鹽水洗滌合并的有機層，干燥(MgSO4)，濃縮得目標化合物。
e)4-(1-甲苯磺?；讲⑦溥?2-基)-1-丁肟酰氯根據(jù)WO 95/14682中實施例1(b)的流程，用4-(1-甲苯磺?；讲⑦溥?2-基)-1-丁醛肟代替4-氰基苯并肟，制備目標化合物。
f)[3-[2-(1-甲苯磺?；讲⑦溥?2-基)乙基]異噁唑咪-5(R,S)-基]乙酸叔丁酯根據(jù)WO 95/14682的實施例1(d)的流程，用4-(1-甲苯磺?；讲⑦溥?2-基)-1-丁肟酰氯代替4-氰基苯肟酰氯，用3-丁烯酸叔丁酯代替3-丁烯酸甲酯，制備目標化合物。
g)[3-[2-(1-甲苯磺?；讲⑦溥?2-基)乙基]異噁唑啉-5(R,S)-基]乙酸在0℃將于二氧六環(huán)(10ml)中的4M HCl加至[3-[2-(1-甲苯磺酰基苯并咪唑-2-基)乙基]異噁唑啉-5(R,S)-基]乙酸叔丁酯(5mmol)于CH2CH2(40ml)的溶液中。將反應物于RT下攪拌直至完全，然后濃縮得到目標化合物。
h)3-[[3-[2-(1-甲苯磺?；讲⑦溥?2-基)乙基]異噁唑啉-5(R,S)-基]乙?；鵠氨基-3(R,S)-甲基丙酸乙酯于RT下將EDC(1.2mmol)加至[3-[2-(1-甲苯磺酰基苯并咪唑-2-基)乙基]異噁唑啉-5(R,S)-基]乙酸(1mmol)、3(R,S)-氨基丁酸乙酯(1.2mmol)、HOBt·H2O(1.2mmol)和二異丙基乙胺(4mmol)于無水CH3CN(5ml)的溶液中。將反應物于RT下攪拌直至完全，然后濃縮，經(jīng)硅膠層析純化即得目標化合物。
i)3-[[3-[2-(苯并咪唑-2-基)乙基]異噁唑啉-5(R,S)-基]乙酰基]氨基-3(R,S)-甲基丙酸將1.0 N LiOH(2.5mmol)加至3-[3-[2-(1-甲苯磺?；讲⑦溥?2-基)乙基]異噁唑啉-5(R,S)-基]乙?；鵠氨基-3(R,S)-甲基丙酸乙酯(0.5mmol)于THF(2.5ml)的溶液中。將反應物于RT下攪拌直至完全，然后用1.0N HCl中和。將溶液濃縮，殘余物經(jīng)反相層析純化即得目標化合物。
實施例613-{3,4-二氫-8-[[[(苯并咪唑-2-基)甲基]甲基氨基]羰基]-1-甲基-2,5-二氧代-1H-1,4-苯并二氮雜_}-4-丙酸的制備a)2-氨基-4-碘苯甲酸根據(jù)Sasson等于J.Org.Chem.1986,51,2880-2883的方法，將4-碘-2-硝基甲苯氧化得到4-碘-2-硝基苯甲酸，然后用鐵和乙酸將硝基基團還原，從而制備目標化合物。
b)4-碘代-N-羧氨基苯甲酸酐通過一加液漏斗，將1.93M光氣的甲苯溶液(80ml)中溶液緩慢加到2-氨基-4-碘苯甲酸(26.3g,0.1mol)、碳酸鈉(10.6g,0.1mol)和水(250ml)的機械攪拌的冰冷溶液中。2小時后，通過過濾分離沉淀產(chǎn)物，按順序用水(200ml)、1∶1的甲醇/乙醚混合物(300ml)和乙醚(200ml)洗滌固體。真空壓干燥得目標化合物。
c)N-(2-氨基-4-碘苯甲?；?-β-丙氨酸芐酯將4-碘代-N-羧氨基苯甲酸酐(5.0g,0.0173mol)、β-丙氨酸芐酯甲苯磺酸鹽(5.85g,0.0173mol)和二甲基氨基吡啶(0.5g,0.0041mmol)于吡啶(35ml)中的電磁攪拌的溶液于80℃加熱2小時。將反應混合物冷至RT，真空濃縮。將所得殘余物溶于乙酸乙酯(100ml)，并按順序用10％硫酸銅(2×50ml)、飽和碳酸氫鈉(1×50ml)和鹽水(1×50ml)洗滌。干燥(Na2SO4)、過濾、濃縮、硅膠層析(1∶1 EtOAc/己烷)得目標化合物。
d)N-(4-碘代-2-甲基氨基苯甲?；?-β-丙氨酸芐酯將N-(2-氨基-4-碘苯甲?；?-β-丙氨酸芐酯(2.0mmol)、2,6-二甲基吡啶(0.35ml,3.0mmol)和甲基碘(0.19ml,3.0mmol)于DMF(15ml)中的電磁攪拌的溶液于50℃加熱15小時。將反應混合物冷卻至RT，真空濃縮。所得殘余物溶于乙酸乙酯(75ml)，并按順序用10％檸檬酸(1×50ml)、飽和碳酸氫鈉(1×50ml)和鹽水(1×50ml)洗滌。干燥(Na2SO4)、過濾、濃縮、硅膠層析(梯度35-65％EtOAc/己烷)得目標化合物。
e)3-[3,4-二氫-8-碘代-1-甲基-2,5-二氧代-1H-1,4-苯并二氮雜_]-4-丙酸芐酯在氬氣環(huán)境下將α-溴代乙酰溴(0.09ml,1.04mmol)于二氯甲烷(2ml)的溶液緩慢加至N-(4-碘代-2-甲基氨基苯甲?；?-β-丙氨酸芐酯(0.305g,0.69mmol)和三乙基胺(0.144g,1.04mmol)于亞甲基(3ml)的冷(-30℃)的電磁攪拌的溶液中。將反應混合物溫熱至RT并攪拌2小時。將混合物用二氯甲烷(40ml)稀釋，并按順序用10％檸檬酸(1×50ml)和飽和碳酸氫鈉(1×50ml)洗滌，干燥(Na2SO4)、過濾、真空濃縮。所得殘余物溶于DMF(3ml)，通過加液漏斗加入氫化鈉(25mg,1.04mmol)于DMF(2ml)的已冷卻至0℃的淤漿。攪拌24小時后，將混合物倒入10％檸檬酸(50ml)的冰冷溶液，用乙酸乙酯(3×40ml)萃取。用飽和碳酸氫鈉(1×50ml)洗滌合并的萃取液，干燥(Na2SO4)、過濾和濃縮。硅膠層析(梯度40-70％EtOAc/己烷)得目標化合物。
f)3-[3,4-二氫-8-[[[(苯并咪唑-2-基)甲基]甲基氨基]羰基]-1-甲基-2,5-二氧代-1H-1,4-苯并二氮雜_]-4-丙酸芐酯在CO環(huán)境下將3-[3,4-二氫-8-碘代-1-甲基-2,5-二氧代-1H-1,4-苯并二氮雜_]-4-丙酸芐酯(2mmol)、2-(甲基氨基甲基)苯并咪唑二鹽酸鹽(3mmol)、DIEA(1.8ml,10mmol)和(Ph3P)2PdCl2(140mg,0.2mmol)于N-甲基-2-吡咯烷酮(20ml)的混合物加熱至110℃并保持3小時。然后將混合物濃縮，殘余物經(jīng)硅膠快速層析即得目標化合物g)3-[3,4-二氫-8-[[[(苯并咪唑-2-基)甲基]甲基氨基]羰基]-1-甲基-2,5-二氧代-1H-1,4-苯并二氮雜_]-4-丙酸將3-[3,4-二氫-8-[[[(苯并咪唑-2-基)甲基]甲基氨基]羰基]-1-甲基-2,5-二氧代-1H-1,4-苯并二氮雜_]-4-丙酸芐酯(2mmol)和10％Pd/C(0.02g)于甲醇(100ml)中的混合物在H2環(huán)境(50psi)中氫化6小時。過濾除去催化劑，將濾液真空濃縮即得目標化合物實施例623-{4H-咪唑并[1,2a][1,4]苯并二氮雜_-5(6H)-1-甲基-6-氧代-9-[[[(苯并咪唑-2-基)甲基]甲基氨基]羰基]}-4-丙酸的制備a)N-(2-氨基-4-碘苯甲?；?-β-丙氨酸乙酯將4-碘代-N-羧氨基苯甲酸酐(0.0173mol)、β-丙氨酸乙酯鹽酸鹽(0.0173mol)和二甲基氨基吡啶(0.5g,0.0041mol)于吡啶(35ml)中的電磁攪拌的溶液于80℃加熱2小時。將反應混合物冷卻至RT并真空濃縮所得殘余物溶于乙酸乙酯(100ml),并按順序用10％硫酸銅(2×50ml)、飽和NaHCO3(1×50ml)和鹽水(1×50ml)洗滌。干燥(Na2SO4)、過濾、濃縮。并經(jīng)硅膠層析(1∶1 EtOAc/己烷)得目標化合物。
b)3-[3,4-二氫-8-碘代-2,5-二氧代-1H-1,4-苯并二氮雜_]-4-丙酸乙酯在氬氣環(huán)境下將α-溴代乙酰溴(0.09ml,1.04mmol)于二氯甲烷(2ml)中的溶液緩慢加至N-(2-氨基-4-碘苯甲?；?-β-丙氨酸乙酯(0.69mmol)和三乙胺(0.144g,1.04mmol)于二氯甲烷(3ml)的冷(-30℃)的磁力攪拌的溶液中。將反應混合物溫熱至RT并攪拌2小時。用二氯甲烷(40ml)稀釋混合物，并順序用10％檸檬酸(1×50ml)和飽和NaHCO3(1×50ml)洗滌，干燥(Na2SO4)、過濾、真空濃縮。所得殘余物溶于DMF(3ml)，通過加液漏斗加至已經(jīng)冷至0℃的氫化鈉(25mg，1.04mmol)于DMF(2ml)的淤漿中。攪拌2小時后，將混合物倒入10％檸檬酸的冰冷溶液(50ml)，用乙酸乙酯(3×40ml)萃取。用飽和NaHCO3(1×50ml)洗滌合并的萃取液，干燥(Na2SO4)、過濾、真空濃縮、經(jīng)硅膠層析即得目標化合物。
c)3-[3,4-二氫-8-碘代-2-硫酮-5-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜_]-4-丙酸乙酯于RT及氮氣環(huán)境下，將Lawesson’s試劑(1.0g)加至3-[3,4-二氫-8-碘代-2,5-二氧代-1H-1,4-苯并二氮雜_]-4-丙酸乙酯(1.0g,2.49mmol)于THF(10ml)的溶液中，將反應物于50℃加熱2小時。將反應混合物冷卻至RT并真空濃縮。硅膠層析(梯度40-60％EtOAc/己烷)得目標化合物。
d)3-[4H-咪唑并[1,2-a][1,4]苯并二氮雜_-5(6H)-1-甲基-6-氧代-9-碘代]-4-丙酸乙酯于RT將2N NaOH(1.2ml)加至3-[3,4-二氫-8-碘代-2-硫酮-5-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜_]-4-丙酸乙酯(0.95g,2.27mmol)、甲基碘(0.2g)和催化劑量的硫酸氫四丁基銨于CH2Cl2(10ml)和H2O(10ml)中的劇烈攪拌的兩相溶液中。2小時后，分層，用CH2Cl2(2×25ml)洗滌水層。將合并的有機萃取液干燥(Na2SO4)、過濾、真空濃縮。將得到的殘余物溶于甲苯(10ml)，并用炔丙基胺(0.64ml,4倍過量)和鹽酸吡啶(0.23g,1moleq)處理。將反應物加熱回流6小時，然后冷卻至RT。濃縮并經(jīng)硅膠層析(EtOAc)制得目標化合物。
e)3-[4H-咪唑并[1,2-a][1,4]苯并二氮雜_-5(6H)-1-甲基-6-氧代-9-[[[(苯并咪唑-2-基)甲基]甲基氨基]羰基]}-4-丙酸乙酯在CO環(huán)境下將3-[4H-咪唑并[1,2-a][1,4]苯并二氮雜_-5(6H)-1-甲基-6-氧代-9-碘代]-4-丙酸乙酯(2mmol)、2-(甲基氨基甲基)苯并咪唑(3mmol)、DIEA(1.8ml,10mmol)和(Ph3P)2Pd/Cl2(140mg,0.2mmol)于N-甲基-2-吡咯烷酮(20ml)中的混合物加熱至110℃并維持3小時。然后將混合物濃縮，殘余物經(jīng)硅膠快速層析即得目標化合物。
f)3-[4H-咪唑并[1,2-a][1,4]苯并二氮雜_-5(6H)-1-甲基-6-氧代-9-[[[(苯并咪唑-2-基)甲基]甲基氨基]羰基]-4-丙酸將3-[4H-咪唑并[1,2-a][1,4]苯并二氮雜_-5(6H)-1-甲基-6-氧代-9-[[[(苯并咪唑-2-基)甲基]甲基氨基]羰基]}-4-丙酸乙酯(54mmol)、LiOH·H2O(0.79mmol)THF(5ml)和水(2ml)的溶液于RT下攪拌過夜。將混合物濃縮，殘余物溶于水，所得溶液用3N HCl中和。收集沉淀并真空干燥即得目標化合物。
實施例634-[4-(2-(1H-苯并咪唑-2-基)乙基]-1-哌嗪基]-1-哌啶乙酸的制備a)4-[4-[(叔丁氧基羰基)]-1-哌嗪基]-1-哌啶乙酸乙酯根據(jù)Porter等于EPA0542363 A2的方法，通過NaCNBH3還原氨化，自1-哌嗪羧酸叔丁酯(Aldrich)和4-氧代-1-哌啶乙酸(Porter等，EPA 0542363 A2)制備目標化合物。b)4-(1-哌嗪基)-1-哌啶乙酸乙酯將4-[4-[(叔丁氧基羰基)]-1-哌嗪基]-1-哌啶乙酸乙酯和4M HCl/二氧環(huán)六烷于CH2Cl2中的溶液于RT下攪拌18小時。將反應混合物濃縮即得目標化合物的鹽酸鹽。c)2-[2-氯乙基)]苯并咪唑?qū)?-苯并咪唑乙醇和亞硫酰氯于CH2Cl2中的溶液加熱回流2小時。將混合物蒸發(fā)即得目標化合物。d)4-[4-[2-(1H-苯并咪唑-2-基)乙基]-1-哌嗪基]-1-哌啶乙酸乙酯將4-(1-哌嗪基)-1-哌啶乙酸乙酯、2-[2-氯乙基)]苯并咪唑和DIEA于DMF中的溶液于室溫下攪拌18小時。將混合物濃縮并經(jīng)層析純化即得目標化合物。e)4-[4-[2-(1H-苯并咪唑-2-基)乙基]-1-哌嗪基]-1-哌啶乙酸將4-[4-[2-(1H-苯并咪唑-2-基)乙基]-1-哌嗪基]-1-哌啶乙酸乙酯和1.0N NaOH于MeOH中的溶液于RT下攪拌。18小時后，混合物用AcOH中和，通過XAD-2柱除鹽，冷凍干燥即得目標化合物。
實施例641-羥基-4-[4-[3-(1H-苯并咪唑-2-基)丙基]-1-哌嗪基]-環(huán)己烷乙酸的制備a)1-羥基-4-[4-[2-(1H-苯并咪唑-2-基)丙基]-1-哌嗪基]-環(huán)己烷乙酸叔丁酯將1-羥基-4-(1-哌嗪基)-環(huán)己烷乙酸叔丁酯(EPA 0537980 A1)、2-(3-溴丙基)苯并咪唑(J.Org.Chem.1962,27,2165)和DIEA于DMF中的溶液于RT下攪拌18小時。將混合物濃縮并經(jīng)層析純化即得目標化合物。
b)1-羥基-4-[4-[2-(1H-苯并咪唑-2-基)丙基]-1-哌嗪基]-環(huán)己烷乙酸將1-羥基-4-[4-[2-(1H-苯并咪唑-2-基)丙基]-1-哌嗪基]-環(huán)己烷乙酸叔丁酯和4M HCl/-二-氧環(huán)六烷于CH2Cl2中的于RT下攪拌。18小時后，將混合物蒸發(fā)即得目標化合物。
實施例65N-[3-[1-[2-(2-苯并咪唑基)乙基]羰基]哌啶基]羰基]-β-丙氨酸的制備根據(jù)Beavers等于WO 95/25091中實施例1的流程，用(2-苯并咪唑基)丙酸代替Nα-Boc-D-lys(Cbz)-OH，制備目標化合物。
實施例662-[(苯并咪唑-2-基)甲基]-5-[2-(羧基-2-乙基)氨基]羰基]-2,3-二氫-3-氧代-1H-異吲哚的制備根據(jù)制備1-12(Hartman等，EP 0540334-A1)的制備1-H-異吲哚-5-甲酰胺，2,3-二氫-N-(2-羧基-乙基)-2-[2-(哌啶基)乙基]-3-氧代的流程，用2-(氨基甲基)苯并咪唑(Aldrich)代替Boc-4-哌啶-2-乙胺，，從而制備目標化合物。
實施例67[3(R)-[2-(苯并咪唑-2-基)乙基]-2-氧代哌啶基]乙?；?3(R)-甲基-β-丙氨酸的制備a)4-(苯并咪唑-2-基)丁酸甲酯根據(jù)實施例36(a)的流程，用1,2-二氨基苯代替2,3-二氨基吡啶，制備目標化合物。
b)4-(苯并咪唑-2-基)丁酸根據(jù)實施例36(b)的流程，將4-(苯并咪唑2-基)丁酸甲酯皂化即得目標化合物。
c)[3(R)-[2-(苯并咪唑-2-基)乙基]-2-氧代哌啶基]乙?；?3(R)-甲基-β-丙氨酸根據(jù)Duggan等(J.Med.Chem.1995,38,3332)的流程，用4-(苯并咪唑-2-基)丁酸取代(N-Boc-哌啶-4-基)丁酸，制備目標化合物。
實施例684-[[[[2-(苯并咪唑基)甲基]羰基]甲基氨基]-乙酰基]苯氧基乙酸的制備4-[2-(Boc-甲基氨基)乙?；鵠苯酚將碳酸氫二叔丁酯(5.96g,27.3mmol)于1,4-二氧六環(huán)(25ml)中的溶液于0℃滴加到4-[2-(甲基氨基)乙?；鵠苯酚鹽酸鹽(5.0g,24.8mmol)、1,4-二氧六環(huán)(30ml)、H2O(25ml)和1.0N NaOH(25ml,25mmol)的混合物中。24小時后，將反應物溫至RT并攪拌1.5小時。加入更多的1.0N NaOH(25ml,25mmol)，將反應物于RT下再攪拌0.5小時，濃縮。殘余物用EtOAc(80ml)稀釋，用1.0M NaHSO4將混合物酸化至pH2。所得混合物用EtOAc萃取，用H2O洗滌合并的有機層，干燥(MgSO4)。過濾并濃縮即得目標化合物(6.49g,99％)1H NMR(250 MHz,CDCl3)δ6.70-8.05(m,4H),4.53(s,2H),2.98(s,3H),1.50(s,9H).
b)4-[2-(Boc-甲基氨基)乙?；鵠苯氧基乙酸芐酯在氬氣環(huán)境下將實施例68(a)化合物(5.04g,19.0mmol)和K2CO3(2.63g,19.0mmol)于丙酮(100ml)中的混合物回流攪拌1小時。將混合物冷卻至RT，加入溴代乙酸芐酯(5.23g,22.8mmol)。將反應物加熱回流18小時，然后冷卻并過濾。用丙酮洗滌濾餅，將濾液濃縮。殘余物溶于CH2Cl2(300ml)，按順序用H2O(50ml)和鹽水(50ml)洗滌。干燥(Na2SO4)，濃縮，經(jīng)快速層析(硅膠，1∶3 EtOAc/己烷)得到目標化合物(7.28g,93％)1H NMR(250MHz,CDCl3)δ6.85-7.95(m,9H),5.23(s,2H),4.71(s,2H),4.55(d,2H),2.95(d,3H),1.45(d,9H).
c)4-[2-(甲基氨基)乙?；鵠苯氧基乙酸芐酯鹽酸鹽將實施例68(b)化合物(7.26g,17.57mmol)和4M HCl于1,4-二氧六環(huán)(150ml)中的混合物于室溫下攪拌1小時。濃縮并用Et2O研磨即得為白色粉末的目標化合物(5.93g,97％)1H NMR(250 MHz,CD3OD)δ7.05-8.00(m,9H),5.23(s,2H),4.88(s,2H),4.65(s,2H),2.80(s,3H).
d)4-[[[[2-(苯并咪唑基)甲基]羰基]甲基氨基]乙酰基]苯氧基乙酸芐酯將實施例68(c)化合物(1mmol)、2-(苯并咪唑基)乙酸(1mmol)、EDC(1.5mmol)和DIEA(3mmol)于DMF(25ml)中的混合物于RT下攪拌。將混合物倒入5％NaHCO3中并用EtOAc萃取。用水洗滌有機相，干燥(MgSO4)濃縮。殘余物經(jīng)層析(硅膠)得目標化合物。
e)4-[[[[2-(苯并咪唑基)甲基]羰基]甲基氨基]乙酰基]苯氧基乙酸酯將實施例68(d)化合物(1mmol)和1N NaOH(1.5ml)于CH3OH(20ml)中攪拌并濃縮。殘余物溶于水，用CH2Cl2萃取，用稀HCl將水相調(diào)至pH 5即得目標化合物。
實施例694-[[[[2-(苯并咪唑基)甲基]羰基]甲基氨基]乙?；鵠-1,2-亞苯二氧基二乙酸的制備a)4-[2-(Boc-甲基氨基)乙?；鵠-1,2-二羥基苯根據(jù)實施例68(a)的流程，用鹽酸腎上腺酮(5.0g,23.0mmol)代替4-[2-(甲基氨基)乙?；鵠苯酚鹽酸鹽，經(jīng)快速層析(硅膠，1∶1 EtOAc/己烷)制得目標化合物(1.2g,19％)MS(ES)m/e 282.2[M+H]+。
b)4-[2-(Boc-甲基氨基)乙?；鵠-1,2-亞苯二氧基二乙酸二甲酯根據(jù)實施例68(b)的流程，用實施例69(a)化合物(0.9g,3.2mmol)代替實施例68(a)化合物，用溴代乙酸甲酯(1.23g,8.0mmol)代替溴代乙酸芐酯，制備目標化合物(1.11g,81％)MS(ES)m/e 426.2[M+H]+。
c)4-[2-(甲基氨基)乙?；鵠-1,2-亞苯二氧基乙酸二甲酯鹽酸鹽根據(jù)實施例68(c)的流程，用實施例69(b)化合物(1.11g,2.6mmol)代替實施例68(b)化合物，制備目標化合物(1.1g，定量)MS(ES)m/e326.0[M+H]+。
d)4-[[[[2-(苯并咪唑基)甲基]羰基]甲基氨基]乙?；鵠-1,2-亞苯二氧基二乙酸二甲酯根據(jù)實施例68(d)的流程，用實施例69(c)化合物代替實施例68(c)化合物，制得目標化合物。
e)4-[[[[2-(苯并咪唑)甲基]羰基]甲基氨基]乙?；鵠-1,2-亞苯二氧基二乙酸根據(jù)實施例68(e)的流程，用實施例69(d)化合物代替實施例68(d)化合物，制得目標化合物。
實施例70N-[3-[[[(2-苯并咪唑基)甲基]羰基]氨基]苯甲酰基]-β-丙氨酸的制備a)N-[3-[[[(2-苯并咪唑基)甲基]羰基]氨基]苯甲?；鵠-β-丙氨酸芐酯將N-(3-氨基苯甲?；?-β-丙氨酸芐酯(Alig等，EPA372486)(1mmol)、(2-苯并咪唑基)乙酸(1mmol)、EDC(1.5mmol)和DIEA(3mmol)于DMF(25ml)中的混合物于RT下攪拌。將混合物倒入5％NaHCO3中并用EtOAc萃取。用水洗滌合并的有機相，干燥(MgSO4)并濃縮。殘余物經(jīng)層析(硅膠)即得目標化合物。
b)N-[3-[[[(2-苯并咪唑基)甲基]羰基]氨基]苯甲?；鵠-β-丙氨酸將實施例70(a)化合物(1mmol)和1N NaOH(1.5ml)于CH3OH(20ml)中的混合物攪拌，濃縮。殘余物溶于水，用CH2Cl萃取，用稀HCl將水相調(diào)至pH5即得目標化合物。
實施例71[[1-[N-[[(2-苯并咪唑基)甲基]羰基]酪?；鵠-4-哌啶基]氧基]乙酸的制備a)[[1-[N-[[(2-苯并咪唑基)甲基]羰基]酪酰基]-4-哌啶基]氧基]乙酸叔丁酯將[(1-酪?；?4-哌啶基)氧基]乙酸叔丁酯(Alig等，EPA372486)(1mmol)、(2-苯并咪唑基)乙酸(1mmol)、EDC(1.5mmol)和DIEA(3mmol)于DMF(25ml)中的混合物于RT下攪拌。將混合物倒入5％NaHCO3，并用EtOAc萃取。用水洗滌合并的有機相，干燥(MgSO4)和濃縮。殘余物經(jīng)層析(硅膠)即得目標化合物。
b)[[1-[N-[[(2-苯并咪唑基)甲基]羰基]酪酰基]-4-哌啶基]氧基]乙酸將實施例71(a)化合物(1mmol)和CF3CO2H于CH2Cl2中的混合物攪拌和濃縮即得目標化合物。
實施例72(S)-4-[[[(2-苯并咪唑基)甲基]羰基]甘氨?；鵠-3-甲氧基羰基甲基-2-氧代哌嗪-1-乙酸的制備根據(jù)Sugihara等于EP 0529858中的流程(實施例59)，用(2-苯并咪唑基)乙酸代替4-脒基苯甲酸鹽酸鹽，制得目標化合物。
實施例73(3S,5S)-5-[[4-[(2-苯并咪唑基)甲基]苯基]氧甲基]-3-羧甲基-2-吡咯烷酮的制備a)4-[(2-苯并咪唑基)甲基]苯酚根據(jù)Wahlgren和Addison的一般流程(J.Heterocycl.Chem.1989，26,541-543)，用4-(羥基)苯乙酸代替2-(羥基)苯乙酸，制得目標化合物。
b)(3S,5S)-5-[[4-[(2-苯并咪唑基)甲基]苯基]氧基甲基]-3-[(叔丁氧基羰基)甲基]-2-吡咯烷酮根據(jù)Himmelsbach等的流程(Australian Patent Application AU-A-86926/91，實施例51)，用實施例73(a)化合物取代4’-氰基-3’-氟代-4-羥基)聯(lián)苯基，得到目標化合物。
c)(3S,5S)-5-[[4-[(2-苯并咪唑基)甲基]苯基]氧甲基]-3-羧甲基-2-吡咯烷酮用CH2Cl2中的CF3CO2H處理實施例73(b)化合物，即得目標化合物。
實施例741-[(2-苯并咪唑基)甲基]-3-[4-(2-羧乙基)苯基]-4-甲氧基-3-吡咯酮-2-酮的制備根據(jù)Linz等的流程(EP 0567968)，用(2-苯并咪唑基)甲胺取代4-氰基苯胺，得到目標化合物。
實施例752-[6-(苯并咪唑-2-基)甲基氨基羰基]-1,2,3,4-四氫異喹啉基]乙酸的制備a)6-甲氧基-1,2,3,4-四氫異喹啉根據(jù)D.J.Sall和G.L.Grunewald的方法(J.Med.Chem.1987,30,2208-2216)制備6-甲氧基-1,2,3,4-四氫異喹啉。
b)2-[6-甲氧基-1,2,3,4-四氫異喹啉]乙酸乙酯將實施例75(a)化合物(1.1mmol)、氯代乙酸乙酯(1.17mmol)和碳酸鉀(1.17mmol)于乙腈(10ml)中溶液攪拌18小時。然后將混合物在EtOAc和H2O的混合物中分配。將有機相旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)成為油，經(jīng)硅膠層析純化得到目標化合物。
c)2-[6-羥基-1,2,3,4-四氫異喹啉]乙酸乙酯將實施例75(b)化合物(0.249g,1.0mmol)和三溴化硼(1M于CH2Cl2中，1.0ml,1.0mmol,ml)的溶液于-70℃攪拌2小時，然后于RT攪拌12小時。將溶液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)成為油。殘余物溶于EtOAc。用水(1X)、5％NaHCO3(2X)、水(1X)洗滌EtOAc。將EtOAc于Mg2SO4上干燥，過濾，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)得到目標化合物。
d)2-[6-三氟甲基磺酰氧基-1,2,3,4-四氫異喹啉基]乙酸乙酯將實施例75(c)化合物(0.235g,1.0mmol)、三氟磺酸酐(0.23ml,1.1mmol)和Et3N(0.32ml,1.5mmol)于CH2Cl2(5ml)中的溶液攪拌8小時。將上述溶液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)成為油。殘余物溶于EtOAc。用5％NaHCO3(2X)、水(1X)洗滌EtOAc。用Na2SO4將EtOAc干燥，過濾，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)即得目標化合物。
e)2-[6-羧基-1,2,3,4-四氫異喹啉基]乙酸乙酯在一氧化碳環(huán)境下，將實施例75(d)化合物(0.367g,1.0mmol)、二乙酸鈀(Ⅱ)(0.022g,0.1mmol)、三苯基膦(0.262g,1.0mmol)、二異丙胺(0.34ml,2.5mmol)、NMP(5ml)于碳酸銨(10％)水溶液中的溶液攪拌8小時。將該溶液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)成油。殘余物經(jīng)硅膠層析純化即得目標化合物。
f)乙基-[6-(苯并咪唑-2-基)甲基氨基羰基)-1,2,3,4-四氫異喹啉基]乙酸將實施例75(e)化合物(0.263g,1.0mmol)、(2-苯并咪唑基)乙酸化合物(0.34g,1.0mmol)、EDC(0.191g,1.0mmol)、HOBt·H2O(0.151g,1.0mmol)和三乙基胺(0.235ml,2.0mmol)于DMF(7ml)中的溶液攪拌8小時。將該溶液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)成油。殘余物經(jīng)硅膠層析純化即得目標化合物。
g)2-[6-(苯并咪唑-2-基)甲基氨基羰基)-1,2,3,4-四氫異喹啉基]乙酸將實施例75(f)化合物(0.42g,1.0mmol)于1N氫氧化鈉水溶液(1.5ml,1.5mmol)和乙醇(5ml)中的溶液攪拌8小時。將該溶液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)成油。殘余物經(jīng)硅膠柱純化得目標化合物。
實施例762-[6-(苯并咪唑-2-基)甲基氨基羰基)-1-氧代-1,2,3,4-四氫異喹啉基]乙酸的制備a)6-甲氧基-1-氧代-1,2,3,4-四氫異喹啉根據(jù)D.J.Sall和G.L.Grunewald等的方法(J.Med.Chem.(1987),30,2208-2216)，制備6-甲氧基-1-氧代-1,2,3,4-四氫異喹啉。
b)2-[6-甲氧基-1-氧代-1,2,3,4-四氫異喹啉]乙酸乙酯將實施例76(a)化合物(0.39mmol)和NaH(0.17g,0.43mmol,60％油分散相)于THF(5ml)中的混合物加熱回流1小時，然后冷卻至室溫。將氯代乙酸乙酯(0.43mmol)加到上述混合物中，將該混合物攪拌1小時?；旌衔镉盟?10ml)驟冷并用EtOAc(2×15ml)洗滌，合并有機層，用水(10ml)洗滌，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)成油。殘余物經(jīng)硅膠層析純化即得目標化合物。
c)2-[6-羥基-1-氧代-1,2,3,4-四氫異喹啉基]乙酸乙酯將實施例76(b)化合物(0.263g,1.0mmol)和三溴化硼(1M溶液于CH2Cl2中，1.1ml)的溶液于-70℃攪拌2小時，然后于RT攪拌4小時。將該溶液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)成油。殘余物溶于EtOAc。用水(1X)、5％NaHCO3(2X)、水(1X)洗滌EtOAc。經(jīng)MgSO4干燥EtOAc，過濾并經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)即得目標化合物。
d)2-[6-三氟甲基磺酰氧基-1-氧代-1,2,3,4-四氫異喹啉基]乙酸乙酯將實施例76(c)化合物(3.4mmol)和三氟磺酸酐(3.4mmol,ml)于吡啶(5ml)中的溶液于0℃冷卻，將其溫熱至室溫1小時。用水(5ml)將上述混合物驟冷，并用EtOAc(2×7ml)洗滌。合并有機層，用水(7ml)洗滌，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)成油。殘余物經(jīng)硅膠層析純化即得目標化合物。
e)2-[6-羧基-1-氧代-1,2,3,4-四氫異喹啉基]乙酸乙酯在一氧化碳環(huán)境下，將實施例76(d)化合物(0.23g,1.0mmol)、二乙酸鈀(Ⅱ)(0.026g,0.1mmol)、三苯基膦(0.262g,1.0mmol)、二異丙胺(0.23ml,2.0mmol)、NMP(7ml)于碳酸銨水溶液(10％)中的溶液攪拌8小時。將該溶液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)成油。殘余物經(jīng)硅膠層析得目標化合物。
f)乙基-[6-(苯并咪唑-2-基)甲基氨基羰基)-1,2,3,4-四氫異喹啉基]乙酸將實施例76(e)化合物(0.34g,1.0mmol)、2-(苯并咪唑基)乙酸化合物(0.43g,1.0mmol)、EDC(0.191g,1.0mmol)、HOBt·H2O(0.15g,1.0mmol)和三乙基胺(0.234ml,2.3mmol)于DMF(8ml)中的溶液攪拌8小時。將該溶液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)成油。殘余物經(jīng)硅膠層析純化即得目標化合物。
可選擇的，將實施例76(d)化合物(0.23g,1.0mmol)、二乙酸鈀(Ⅱ)(0.026g,0.1mmol)、三苯基膦(0.262g,1.0mmol)、二異丙胺(0.25ml,2.1mmol)、NMP(7ml)和中間體A化合物(0.31g,1.0mmol)于碳酸銨(10％)水溶液中的溶液在一氧化碳環(huán)境下攪拌8小時。將該溶液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)成油。殘余物經(jīng)硅膠層析純化得目標化合物。
g)2-[6-((苯并咪唑-2-基)甲基氨基羰基)-1,2,3,4-四氫異喹啉基]乙酸將實施例76(f)化合物(0.25g,1.0mmol)于1N氫氧化鈉水溶液(1.5ml,1.5mmol)和乙醇(8ml)中的溶液攪拌8小時。溶液經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)成油。殘余物經(jīng)硅膠純化得目標化合物。
實施例772-[6-((苯并咪唑-2-基)甲基羰基氨基)四氫化萘]乙酸的制備a)5-氨基-四氫化萘-2-乙酸叔丁酯根據(jù)M.J.Fisher等(流程12和實施例28,A-D部分，EO 0635492,Jan.25,1995)所述方法制備5-氨基-四氫化萘-2-乙酸叔丁酯b)2-[6-((苯并咪唑-2-基)甲基羰基氨基)四氫化萘]乙酸酯將實施例77(a)化合物(0.261g,1.0mmol)、2-(氨基甲基)苯并咪唑(0.256g,1.0mmol)、EDC(0.191g,1.0mmol)、1-羥基苯并三唑水合物(0.152g,1.0mmol)和三乙胺(0.234ml,2.1mmol)于DMF(5ml)中的溶液攪拌8小時。該溶液經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)成油。殘余物經(jīng)硅膠層析得目標化合物。
將粗品酯酰胺(0.32g,1.0mmol)和三氟乙酸(5ml)于二氯甲烷(5ml)中的溶液攪拌1小時。將該溶液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)成油。殘余物用Et2O處理。過濾并真空干燥即得目標化合物。
實施例782-[6-((苯并咪唑-2-基)甲基氨基羰基)四氫化萘]乙酸的制備a)5-羥基-四氫化萘-2-乙酸乙酯根據(jù)M.J.Fisher等(EP 0635492，流程6和實施例20,A-D部分，P71)的方法，制備化合物乙基-5-羥基-四氫化萘-2-乙酸
b)5-三氟甲基磺酰氧基-四氫化萘-2-乙酸乙酯將實施例78(b)化合物(0.321g,1.0mmol)于CH2Cl2(10ml)中的溶液冷卻至0℃。加入三氟甲磺酸酐(0.125ml,1.1mmol)。將上述溶液攪拌2小時。將溶液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)成油。殘余物溶于EtOAc。用水(1X)、5％NaHCO3、水(1X)洗滌EtOAc。用MgSO4干燥EtOAc，過濾。將濾液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)即得目標化合物。
c)6-羧基-四氫化萘-2-乙酸乙酯在一氧化碳環(huán)境下，將實施例78(c)化合物(0.26g,1.0mmol)、二乙酸鈀(Ⅱ)(0.023g,0.1mmol)、三苯基膦(0.262g,1.0mmol)、二異丙胺(0.245ml,2.1mmol)、NMP(10ml)于碳酸銨(10％)水溶液中的溶液攪拌8小時。將該溶液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)成油。殘余物經(jīng)硅膠層析純化即得目標化合物。
d)[6-((苯并咪唑-2-基)甲基氨基羰基)-四氫化萘-乙酸乙酯將實施例78(c)化合物(0.34g,1.0mmol)、(2-苯并咪唑基)乙酸化合物(0.32g,1.0mmol)、EDC(0.191g,1.0mmol)、HOBt·H2O(0.152g,1.0mmol)和三乙胺(0.23ml,2.1mmol)于DMF(6ml)中的溶液攪拌8小時。將上述溶液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)成油。殘余物經(jīng)硅膠層析純化得目標化合物。
可選擇的，將實施例78(b)化合物(0.34g,1.0mmol)、二乙酸鈀(Ⅱ)(0.023g,0.1mmol)、三苯基膦(0.262g,1.0mmol)、二異丙胺(0.23ml,2.1mmol)、NMP(10ml)和中間體A化合物(0.32g,1.0mmol)于碳酸銨水溶液(10％)中的溶液在一氧化碳環(huán)境下攪拌8小時。將上述溶液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)成油。殘余物經(jīng)硅膠層析得目標化合物。
e)2-[6-((苯并咪唑-2-基)甲基氨基羰基)-四氫化萘-2-乙酸將實施例78(d)化合物(0.31g,1.0mmol)于1N氫氧化鈉水溶液(1.5ml,1.5mmol)和乙醇(5ml)中的溶液攪拌8小時。將該溶液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)成油狀物。殘余物經(jīng)硅膠層析得到目標化合物。
實施例792-[5-((苯并咪唑-2-基)甲基羰基氨基)-苯并呋喃]-丙酸的制備a)乙基1-羧基甲氧基-4-硝基水楊醛將1-羥基-4-硝基水楊醛(Aldrich)(0.167g,1.0mmol)、溴代乙酸乙酯(0.166g,1.0mmol)、碳酸鉀(0.276g,2.0mmol)和碘化鈉(0.015g,0.1mmol)于THF(10ml)中的溶液加熱至80℃并維持24小時。將上述溶液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)成油狀物，殘余物經(jīng)硅膠層析得到目標化合物。
b)乙基2-羧基-5-硝基苯并呋喃將實施例79(a)化合物(0.229g,1.0mmol)、DBU(0.152g,1.0mmol)于乙醇(10ml)中的溶液在室溫下攪拌18小時。將上述溶液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)成油狀物，用EtOH(10ml)處理該殘余物。向溶液中吹入HCl氣體2分鐘，回流5小時。將上述溶液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)成油狀物。加入EtOAc并用水(2X)、5％檸檬酸(2X)、水(1X)、5％NaHCO3(2X)和水(1X)洗滌。將EtOAc旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)得到目標化合物。
c)乙基2-(2-羧基)亞乙基-5-硝基苯并呋喃用DiBAL(1.0M于THF中，1.0ml,1.0mmol)處理實施例79(b)化合物(0.235g,1.0mmol)于THF(5ml)中的冷溶液(-78℃)。將上述溶液于-78℃攪拌30分鐘，于RT下攪拌3小時。將該溶液用CH3COOH(3ml)處理，然后用水(2ml)處理。將該溶液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)成油狀物并用甲苯共沸處理除去乙酸。真空中干燥得到粗品醛。
在0℃用氫化鈉(60％于礦物油中的懸浮液，0.04g,1.0mmol)處理膦酸酯(0.224g,1.0mmol)于THF(5ml)中的溶液1小時。將上述醛(0.235g,1.0mmol)加到該溶液中。于室溫下，攪拌該溶液18小時。將溶液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)成油狀物，經(jīng)硅膠層析純化該殘余物得到目標化合物。
d)2-[5-氨基-苯并呋喃基]丙酸叔丁酯將實施例79(c)化合物(0.261g,1.0mmol)于含有鈀炭(0.026g,10％wt)的乙醇(5ml)溶液于45psi氫化1小時。將該溶液通過硅藻土過濾并將濾液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)成油狀物。經(jīng)硅膠層析得到目標化合物。
e)2-[5-((苯并咪唑-2-基)甲基羰基氨基-苯并呋喃]-丙酸將實施例79(d)化合物(0.263g,1.0mmol)、EDC(0.191g,1.0mmol)、1-羥基苯并三唑水合物(0.150g,1.0mmol)、2-(氨基甲基)苯并咪唑化合物(0.234g,1.0mmol)和三乙胺(0.288ml,2.0mmol)于DMF(5.0ml)中的溶液攪拌18小時。將上述溶液經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)成油狀物并將該殘余物經(jīng)硅膠層析得目標化合物。
將粗品酯(0.263g,1.0mmol)于MeOH(3.0ml)中的溶液用1NNaOH(1.5ml,1.5mmol)和水(2ml)處理。將上述溶液在RT下攪拌18小時。將該溶液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)成油狀物并用反相層析純化即得目標化合物。
實施例802-[5-((苯并咪唑-2-基)甲基羰基氨基)-2,3-二氫-苯并呋喃]-丙酸的制備a)2-[5-氨基-2,3-二氫-苯并呋喃基]丙酸乙酯在實施例79(d)化合物的層析純化中也可得到目標化合物。
b)2-[5-(6-氨基吡啶基-2-甲基羰基氨基)-苯并呋喃]-丙酸將實施例80(a)化合物(0.263g,1.0mmol)、EDC(0.191g,1.0mmol)、1-羥基苯并三唑水合物(0.15g,1.0mmol)、2-(氨基甲基)苯并咪唑化合物(0.32g,1.0mmol)和三乙胺(0.288ml,2.0mmol)于DMF(5.0ml)中的溶液攪拌18小時。將上述溶液經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)成油狀物并將該殘余物經(jīng)硅膠層析得目標化合物。
將粗品酯(0.290g,1.0mmol)于MeOH(5.0ml)中的溶液用1NNaOH(1.2ml,1.2mmol)處理18小時。將上述溶液在RT下攪拌18小時。將該溶液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)成油狀物并用反相層析純化即得目標化合物。
實施例812-[5-(6-氨基吡啶基-2-甲基氨基羰基)-苯并呋喃]-丙酸的制備a)2-乙氧基羰基-5-(叔丁基-二甲基甲硅烷氧基)-苯并呋喃將2-乙氧基羰基-5-(羥基)-苯并呋喃(通過M.L.Denny等于EP0655439,31,5,95中所述流程制備)(0.206g,1.0mmol)、叔丁基-二甲基甲硅烷基氯(0.23ml,1.0mmol)和咪唑(0.34g,1.0mmol)于THF中的溶液攪拌4小時。將上述溶液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)成油狀物。加入EtOAc并用水洗滌。將EtOAc旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)即得目標化合物。
b)2-氫羰基-5-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)-苯并呋喃用DiBAL(1.0M于THF中,1.0ml,1.0mmol)處理實施例81(a)化合物(0.35g,1.0mmol)于THF(5ml)中的冷(-78℃)溶液。將上述溶液于-78℃攪拌30分鐘，于RT下攪拌3小時。將該溶液用CH3COOH(3ml)處理，然后用水(2ml)處理。將上述溶液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)成油狀物并用甲苯共沸處理除去乙酸。經(jīng)真空中干燥得到目標化合物。
c)2-[5-(叔丁基-二甲基甲硅烷氧基)-苯并呋喃]-丙烯酸乙酯將膦酯(0.224g,1.0mmol)于THF(5ml)中的溶液用氫化鈉(于礦物油中的60％懸浮液，0.04g,1.0mmol)于0℃處理1小時。將上述醛(0.235g,1.0mmol)加到上述溶液中。將該溶液于RT攪拌18小時。將上述溶液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)成油狀物，將該殘余物經(jīng)硅膠層析純化得到目標化合物。
d)2-[-5-(羥基)-苯并呋喃]-丙酸-2-乙酯將實施例81(c)化合物(0.234g,1.0mmol)和10％鈀炭(0.023g,10％wt)于EtOH(5ml)中的混合物于50psi下氫化1小時。通過硅藻土過濾并經(jīng)濃縮得到上述酯(0.169g,56％)。
將上述粗品(0.34g,1.0mmol)的氟化四乙基銨(0.140g,1.0mmol)于THF(10ml)中的溶液于RT攪拌18小時。將上述溶液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)成油狀物并經(jīng)硅膠層析純化。
e)2-[-5-(三氟甲基磺酰氧基)-苯并呋喃]-丙酸-2-乙酯用三氟甲基磺酸酐(0.21ml,1.1mmol)于0℃處理實施例81(d)化合物(0.366g,1.0mmol)和Et3N(0.23ml,1.5mmol)于CH2Cl2(10ml)中的溶液。2小時后將上述溶液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)成油狀物。將殘余物溶于EtOAc。按順序用水(1X)、5％NaHCO3(2x)、水(1X)洗滌EtOAc。將EtOAc經(jīng)MgSO4干燥并過濾。將濾液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)即得目標化合物。
f)2-[5-(羧基)-苯并呋喃]-丙酸-2-乙酯將實施例81(e)化合物(0.366g,1.0mmol)、二乙酸鈀(Ⅱ)(0.023g,0.1mmol)、三苯基膦(0.262g,1.0mmol)、二異丙胺(0.23ml,2.1mmol)、NMP(7ml)于碳酸氫鈉水溶液(10％,6ml)中的溶液攪拌。將該溶液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)成油狀物。殘余物經(jīng)硅膠層析純化即得目標化合物。
g)2-[5-(6-(6-氨基吡啶基-2-甲基氨基羰基)苯并呋喃]-丙酸-2-乙酯將實施例81(f)化合物(0.366g,1.0mmol)、(2-苯并咪唑基)乙酸化合物(0.23g,1.0mmol)、EDC(0.191g,1.0mmol)、HOBt(0.152g,1.0mmol)和三乙基胺(0.235g,2.1mmol)于DMF(8ml)中的溶液攪拌8小時。將該溶液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)成油狀物。殘余物經(jīng)硅膠層析得到目標化合物。
可選擇的，將實施例81(e)化合物(0.366g,1.0mmol)、二乙酸鈀(Ⅱ)(0.023g,0.1mmol)、三苯基膦(0.262g,1.0mmol)、二異丙胺(0.23ml,2.1mmol)、NMP(10ml)和中間體A化合物(0.32g,1.0mmol)于碳酸銨水溶液(10％,10ml)中的溶液在一氧化碳環(huán)境下攪拌8小時。將上述溶液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)成油狀物。殘余物經(jīng)硅膠層析得目標化合物。
h)2-[5-(6-(6-氨基吡啶基-2-甲基氨基羰基)-苯并呋喃]-丙酸將實施例81(g)化合物(0.366g,1.00mmol)于1N NaOH水溶液(1.5ml.1.5mmol)和乙醇(8ml)中的溶液攪拌8小時。將上述溶液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)成油狀物。殘余物經(jīng)硅膠層析處目標化合物。
實施例822-[5-((苯并咪唑-2-基)甲基氨基羰基)-2,3-二氫-苯并呋喃]-丙酸的制備a)2-[5-(羥基)-2,3-二氫-苯并呋喃]-丙酸-2-叔丁酯實施例81(d)中層析純化也得到該目標化合物。
b)2-[5-(三氯甲基磺酰氧基)-2,3-二氫-苯并呋喃]-丙酸-2-叔丁酯將實施例82(a)化合物(0.28g,1.0mmol)和Et3N(0.23ml,2.1mmol)于CH2Cl2(5ml)中的冷溶液用三氟甲基磺酸酐(0.15ml,1.1mmol)處理2小時。將上述溶液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)成油狀物。將殘余物溶于EtOAc。用水(1X)、5％NaHCO3(2X)、水(1X)洗滌EtOAc經(jīng)MgSO4干燥，過濾，濾液經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)得到目標化合物。
c)2-[5-(羧基)-2,3-二氫-苯并呋喃]-丙酸-2-叔丁酯將實施例82(b)化合物(0.24g,1.0mmol)、、二乙酸鈀(Ⅱ)(0.023g,0.1mmol)、三苯基膦(0.262g,1.0mmol)、二異丙胺(0.23ml,2.1mmol)、NMP(8ml)于碳酸氫鈉水溶液(10ml,10％)中的溶液于RT下攪拌8小時。將上述溶液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)成油狀物。殘余物經(jīng)硅膠層析得目標化合物。
d)2-[5-(6-(6-氨基吡啶基-2-甲基氨基羰基)-2,3-二氫苯并呋喃]-丙酸-2-叔丁酯將實施例82(c)化合物(0.366g,1.0mmol)、(2-苯并咪唑基)乙酸化合物(0.23g,1.0mmol)、EDC(0.191g,1.0mmol)、HOBt(0.152g,1.0mmol)和三乙基胺(0.23g,2.1mmol)于DMF(8ml)中的溶液攪拌8小時。將該溶液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)成油狀物。殘余物經(jīng)硅膠層析得到目標化合物。
可選擇的，將實施例82(b)化合物(0.366g,1.0mmol)、二乙酸鈀(Ⅱ)(0.023g,0.1mmol)、三苯基膦(0.262g,1.0mmol)、二異丙胺(0.23ml,2.1mmol)、NMP(10ml)和中間體A化合物(0.23g,2.1mmol)于碳酸銨水溶液(10％,10ml)中的溶液在一氧化碳環(huán)境下攪拌8小時。將上述溶液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)成油狀物。殘余物經(jīng)硅膠層析得目標化合物。
e)2-[5-(6-(苯并咪唑-2-基)-甲基氨基羰基]-2,3-二氫-苯并呋喃]-丙酸將實施例82(d)化合物(0.37g,1.0mmol)于1N NaOH(1.5ml,1.5mmol)水溶液和乙醇(8ml)中的溶液攪拌8小時。將上述溶液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)成油狀物。殘余物經(jīng)硅膠層析處目標化合物。
實施例83
1-[(1H-苯并咪唑-2-基)甲基]-3-{4-[(2-乙氧基羰基)乙基]苯基}-3-氧代-咪唑烷a)2-氨基甲基-1-對-甲苯磺?；?苯并咪唑?qū)?-甲基苯并咪唑(1mmol)、對-甲苯磺酰氯(1.05mmol)和Et3N(1.05mmol)于水(2ml)和THF(1ml)中的溶液攪拌4小時。通過旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)將上述混合物濃縮并用水(10ml)稀釋。用EtOAc(2×15ml)洗滌上述溶液。合并有機層，用水(5ml)洗滌并經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)得到油狀物。
將上面所提到的油狀物(2-甲基-1-對-甲苯磺酰基-苯并咪唑)(1mmol)和N-溴代琥珀酰亞胺(1.05mmol)于CCl4(10ml)中的溶液回流18小時。當冷卻時一種白色固體從上述溶液中沉淀出來。將上述固體過濾，用CCl4研磨并于真空下干燥得到一種固體。
將Boc2NH(1mmol)和氫氧化鉀(1mmol)于乙醇(5ml)中的溶液攪拌1小時。加入無水乙醚(15ml)并將上述混合物過濾得到為白色固體的鹽。將前述固體2-溴代甲基-1-對-甲苯磺?；讲⑦溥?1mmol)和(Boc)2N-K+(mmol)于THF(10ml)中的溶液于60℃攪拌18小時。將混合物旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)成一油狀物。
將2-[雙-(叔丁氧基羰基)氨基甲基]-1-對-甲苯磺?；讲⑦溥?1mmol)于TFA(1.1mmol)和CH2Cl2中的溶液攪拌1小時。將上述溶液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)成油狀物并經(jīng)層析純化得到目標化合物。
b)2-[4-(2-羥基乙基氨基)苯基]丙酸乙酯根據(jù)F.Himmelsbach等的流程(實施例Ⅴ,P44,EP 0587134,Sept,8,1993)制備該化合物。其中將乙醇醛二聚物(Aldrich)(mmol)加到2-(4-氨基苯基)丙酸甲酯1(1mmol)于乙腈水溶液(pH6-7)(ml)的溶液中，然后加入氰基硼氫化鈉(1.1mmol)并將上述混合物攪拌1小時。將該混合物旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)成油狀物。將殘余物溶于冰水和乙酸乙酯的混合物。用4NNaOH中和水層并用乙酸乙酯洗滌。將上述有機相旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)成油狀物。該油狀物于乙酸乙酯中的溶液經(jīng)硅膠柱層析即得目標化合物。
c)N-[(1-對-甲苯磺?；?1H-苯并咪唑-2-基)甲基]-N’-羥基乙基-N’-{4[(2-乙氧基羰基)乙基]苯基}-脲根據(jù)F.Himmelsbach等的流程(EP 0587134,Sept.8,1993和EP0612741,Feb,21,1994)制備該化合物，其中將實施例83(a)化合物(1mmol)和光氣(1.1mmol)于THF(20ml)中的溶液于-20℃攪拌20分鐘。將實施例83(b)化合物(1.0mmol)加到上述溶液中并將所得混合物攪拌18小時將所得溶液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)。用5％檸檬酸、然后用水洗滌殘余物于乙酸乙酯中的溶液。將有機相旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)成油狀物。將該油狀物于乙酸乙酯中的溶液經(jīng)硅膠柱純化得到目標化合物。
d)N1-[(1-對-甲苯磺?；?1H-苯并咪唑-2-基)甲基]-N3-{4[(2-乙氧基羰基)乙基]苯基}-2-氧代-咪唑烷根據(jù)F.Himmelsbach等的流程(實施例Ⅲ,EP 0587134,Sept,8,1993和EP 0612741,Feb,21,1994)制備該化合物，其中將實施例83(c)化合物(1mmol)、甲磺酰氯(1.2mmol)和三乙胺(1.2mmol)于二氯甲烷(5ml)中的溶液于0℃攪拌1小時。將上述混合物在水和二氯甲烷的混合物中分配。合并有機層并經(jīng)無水硫酸鈉干燥和旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)。
將上述殘余物和碘化鈉(1.1mmol)于丙酮(5ml)中的溶液加熱回流3小時。并旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)成油狀物。將雙(三甲基甲硅烷基)疊氮化鉀(1.2mmol)加到上述殘余物于DMF(5ml)的溶液中，冷卻至0℃。用30分鐘將該溶液溫熱至室溫，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)成油狀物。將殘余物在水和二氯甲烷的混合物中分配。合并有機相并經(jīng)無水硫酸鈉干燥，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)。油狀物于乙酸乙酯中的溶液經(jīng)硅膠柱純化得到目標化合物。
e)N1-[(1H-苯并咪唑-2-基)甲基]-N3-{4-[(2-羧基)乙基]苯基}-2-氧代-咪唑烷將實施例83(d)化合物(1mmol)于THF(5ml)和1N NaOH(1.2ml，1.2mmol)中的溶液攪拌18小時。用濃鹽酸中和上述混合物并經(jīng)硅膠柱純化得到目標化合物。
實施例84非腸道型單位組合物一種含有為消毒干粉的實施例1的化合物20mg的制劑制備如下將20mg化合物溶于15ml蒸餾水中。在無菌條件下將上述溶液過濾到25ml的多劑量安瓶中并冷凍干燥。通過加入20ml于水(D5W)中的5％葡萄糖粉末復制用于靜脈或肌肉注射。因此根據(jù)注射體積確定劑量。通過將該劑量單位的定量體積加到另一體積的D5W中完成隨后的稀釋用于注射，或?qū)⒍康膭┝考拥搅硪谎b置中如瓶或袋中用于分散該藥物以便用于Ⅳ滴注或其它的輸-注體系。
實施例85口服劑型單位組合物通過混合和研磨50ml實施例1化合物與75mg乳糖和5mg硬脂酸鎂制備用于口服給藥的膠囊。將以上所得粉末過篩并填裝到硬膠囊中。
實施例86口服劑型單位組合物通過將20mg蔗糖、150mg二水硫酸鈣和50mg實施例1化合物用10％明膠溶液混合和制粒制備用于口服給藥的片劑。將濕顆粒過篩、干燥與10mg淀粉、5mg滑石粉和3mg硬脂酸混合；壓制成片劑。
上面的描述完全公開了怎樣制備和使用本發(fā)明。然后，本發(fā)明不僅僅限于這里以上所描述的實施方案，而是包括下列權(quán)利要求范圍內(nèi)的其所有的修改。這里所引述的對雜志、專利和其它公開物的各種參考文獻包括了本領(lǐng)域的現(xiàn)狀并在這里引入作進一步的參考。
權(quán)利要求
1．式(Ⅰ)或(Ⅱ)或(Ⅲ)或(Ⅳ)或(Ⅴ)的化合物或其藥學上可接受的鹽
或
或
或
或
其中W為-(CHRg)b-V’-或苯基；A為纖維蛋白原受體拮抗劑模板；V’為CONR21或NR21CO；G為NRe、S或O；Rg為H、C1-6烷基、Het-C0-6烷基、C3-7環(huán)烷基-C0-6烷基或Ar-C0-6烷基；R21為Het-(CH2)0-6-U’-(CH2)1-6-、C3-7環(huán)烷基-(CH2)0-6-U’-(CH2)1-6-或Ar-(CH2)0-6-U’-(CH2)1-6-；U’為CONRf或NRfCO；Rf為H、C1-6烷基或Ar-C1-6烷基；Re為H、C1-6烷基、Ar-C1-6烷基、Het-C1-6烷基、C3-7環(huán)烷基-C1-6烷基、(CH2)qOH或(CH2)kCO2Rg；k為0、1或2；q為1或2；b為0、1或2；Rb和Rc獨立選自H、C1-6烷基、Ar-C0-6烷基、Het-C0-6烷基或C3-6環(huán)烷基-C0-6烷基、鹵素、CF3、ORf、S(O)kRf、CORf、NO2、N(Rf)2、CO(NRf)2、CH2N(Rf)2或Rb和Rc結(jié)合形成5元或6元芳香或非芳香碳環(huán)或雜環(huán)，任選被多至3個選自鹵素、CF3、C1-4烷基、ORf、S(O)kRf、CORf、CO2RfOH、NO2、N(Rf)2、CO(NRf)2和CH2N(Rf)2或亞甲二氧基的取代基取代。
2．權(quán)利要求1的化合物，其中所述纖維蛋白原受體拮抗劑模板A為下式或其藥學上可接受的鹽
A1至A5形成可接近的取代的7元環(huán)，所述環(huán)可以為飽和或未飽和，任選含有多至2個選自O(shè)、S和N的雜原子，其中S和N任選被氧化；D1至D4形成可接近的取代的6元環(huán)，可任選含有多至2個氮原子；R至少為一個選自R7、Q-C1-4烷基、Q-C2-4鏈烯基、Q-C2-4炔基的取代基，任選被一個或多個=O、R11或R7取代；R*為H、Q-C1-6烷基、Q-C1-6氧代烷基、Q-C2-6鏈烯基、Q-C3-4氧代鏈烯基、Q-C3-4氧代炔基、Q-C2-4炔基、C3-6環(huán)烷基、Ar或Het，任選被一個或多個R11取代；Q為H、C3-6環(huán)烷基、Het或Ar；R7為-COR8、-COCR’2R9、-C(S)R8、-S(O)mOR’、-S(O)mNR’R”、-PO(OR’)、-PO(OR)’2、-B(OR’)2、-NO2和Tet；R8為-OR’、-NR’R”、-NR’SO2R’、-NR’OR’、-OCR’2C(O)OR’、-OCR’2OC(O)-R’、-OCR’2C(O)NR’2、CF3或AA；R9為-OR’、-CN、-S(O)rR’、S(O)mNR2’、-C(O)R’C(O)NR’2或-CO2R’；R11為H、鹵素、-OR12、-CN、-NR’R12、-NO2、-CF3、CF3S(O)r-、-CO2R’、-CONR’2、Q-C0-6烷基、Q-C1-6氧代烷基、Q-C2-6鏈烯基、Q-C2-6炔基、Q-C0-6烷氧基-、Q-C0-6烷基氨基或Q-C0-6烷基-S(O)r-；R12為R’、-C(O)R’、-C(O)NR’2、-C(O)OR15、-S(O)mR’或S(O)mNR’2；R13為R’、-CF3、-SR’或-OR’；R14為R’、-C(O)R’、CN、NO2、SO2R’或C(O)OR15；R15為H、C1-6烷基或Ar-C0-4烷基；R’為H、C1-6烷基、C3-7環(huán)烷基-C0-4烷基或Ar-C0-4烷基；R”為R’、-C(O)R’或-C(O)OR15；R”’為R”或AA2；AA1為通過其氨基連接的氨基酸，其羧基任選被保護，AA2為通過其羧基連接的氨基酸，其氨基任選被保護；m為1或2；n為0至3；p為0或1；和t為0至2。
3．權(quán)利要求2的化合物，其中A1為CR1R1’、CR1、NR1、N、O或S(O)x；A2為CR2R2’、CR2、NR2；A3為CR3R3’、CR3、NR3、N、O或S(O)x；A4為CR4R4’、CR4、NR4、N；A5為CR5R5’、CR5、NR5、N、O或S(O)x；D1-D4為CH或N；R1和R1’是R*或R，或一起為=O；R2和R2’是R*、R或為=O；R3和R3’是R*、R或為=O；R4和R4’是R*、R或為=O；R5和R5’是R*、R或為=O；x為0、1或2。
4．權(quán)利要求2的化合物，其中A1為CR1R1’、CR1、NR1、N、O或S；A2為CR2R2’、NR2或CR2；A3為CR3R3’；A4為CR4R4’、CR4、NR4或N；A5為CR5R5’、CR5、NR5、N或O；D1和D4為CH；D2或D3為CH6；R2或R4為R；R3、R3’和R5、R5’為=O或R*、H。
5．權(quán)利要求2的化合物，其中A1為CHR1’、CR1、NR”、N、或S；A2為CR2或CR2R2’；A3為CR3R3’；A4為CR4R4’或NR4；A5為CR5R5’D1-D4為CH。
6．權(quán)利要求2的化合物，其中A1為CR1,A2為CR2,A3為C=O,A4為NR4和A5為CHR5。
7．權(quán)利要求2的化合物，其中A1為NR1,A2為CHCR2,A3為CR3R3’,A4為NR4和A5為C=O。
8．權(quán)利要求2的化合物，其中A1和A4為C=O,A2為NR2,A3為CHR3’，和A5為NR5。
9．權(quán)利要求2的化合物，其中A1為NR1,A2為CHR2,A3為C=O,A4為NR’，和A5為CHR5。
10．權(quán)利要求2的化合物，為
11．權(quán)利要求2的化合物，為
12．權(quán)利要求11的化合物，其中R1為H或C1-4烷基；R2、R2’為H、-CH2CO2H；R5R5’為H、H。
13．式(ⅩⅪ)或(ⅩⅫ)化合物或其藥學上可接受的鹽
或
其中B為-(CHRg)a-U-(CHRg)b-V-或苯基或
A為纖維蛋白原受體拮抗劑模板；U和V不存在或為CO、CRg2、C(=CRg2)、S(O)k、O、NRg、CRgORg、CRg(ORk)CRg2、CRg2CRg(ORk)、C(O)CRg2、CRg2C(O)、CONRiNRiCOOC(O)、C(O)O、C(S)O、OC(S)、C(S)NRg、NRgC(S)、S(O)2NRg、NRgS(O)2、N=N、NRgNRg、NRgCRg2、NRgCRg2、CRg2O、OCRg2、C≡C或CRg=CRg；G為NRe、S或O；Rg為H、C1-6烷基、Het-C0-6烷基、C3-7環(huán)烷基-C0-6烷基或Ar-C0-6烷基；Rk為Rg、-C(O)Rg或-C(O)ORf；Ri為H、C1-6烷基、Het-C0-6烷基、C3-7環(huán)烷基-C0-6烷基、Ar-C0-6烷基、Het-(CH2)0-6-U’-(CH2)1-6-、C3-7環(huán)烷基-(CH2)0-6-U’-(CH2)1-6-或Ar-(CH2)0-6-U’-(CH2)1-6-或被一個至三個選自鹵素、CN、NRg2、ORg、SRg、CO2Rg、CON(Rg)2取代的C1-6烷基；Rf為H、C1-6烷基或Ar-C1-6烷基；Re為H、C1-6烷基、Ar-C1-6烷基、Het-C1-6烷基、C3-7環(huán)烷基-C1-6烷基、(CH2)qOH或(CH2)kCO2Rg；U’為CONRf或NRfCO；k為0、1或2；q為1或2；a為0、1或2；b為0、1或2；Rb和Rc獨立選自H、C1-6烷基、Ar-C0-6烷基、Het-C0-6烷基或C3-6環(huán)烷基-C0-6烷基、鹵素、CF3、ORf、S(O)kRf、CORf、NO2、N(Rf)2、CO(NRf)2、CH2N(Rf)2或Rb和Rc結(jié)合形成5元或6元芳香或非芳香碳環(huán)或雜環(huán)，任選被多至3個選自鹵素、CF3、C1-4烷基、ORf、S(O)kRf、CORf、CO2RfOH、NO2、N(Rf)2、CO(NRf)2和CH2N(Rf)2或亞甲二氧基的取代基取代。
14．權(quán)利要求13的化合物，其中所述纖維蛋白原受體拮抗劑模板A為下式或其藥學上可接受的鹽
其中A1至A5形成可接近的取代的7元環(huán)，所述環(huán)可以為飽和或未飽和，可任選含有多至2個選自O(shè)、S和N的雜原子，其中S和N可任選被氧化；D1至D4形成可接近的取代的6元環(huán)，任選含有多至2個氮原子；R至少為一個選自R7、Q-C1-4烷基、Q-C2-4鏈烯基、Q-C2-4炔基的取代基，任選被一個或多個=O、R11或R7取代；R*為H、Q-C1-6烷基、Q-C1-6氧代烷基、Q-C2-6鏈烯基、Q-C3-4氧代鏈烯基、Q-C3-4氧代炔基、Q-C2-4炔基、C3-6環(huán)烷基、Ar或Het，可任選被一個或多個R11取代；Q為H、C3-6環(huán)烷基、Het或Ar；R7為-COR8、-COCR’2R9、-C(S)R8、-S(O)mOR’、-S(O)mNR’R”、-PO(OR’)、-PO(OR)’2、-B(OR’)2、-NO2和Tet；R8為-OR’、-NR’R”、-NR’SO2R’、-NR’OR’、-OCR’2C(O)OR’、-OCR’2OC(O)-R’、-OCR’2C(O)NR’2、CF3或AA；R9為-OR’、-CN、-S(O)rR’、S(O)mNR’、-C(O)R’C(O)NR’2或-CO2R’；R11為H、鹵素、-OR12、-CN、-NR’R12、-NO2、-CF3、CF3S(O)r-、-CO2R’、-CONR’2、Q-C1-6烷基、Q-C1-6氧代烷基、Q-C2-6鏈烯基、Q-C2-6炔基、Q-C0-6烷氧基、Q-C1-6烷基氨基或Q-C0-6烷基-S(O)r-；R12為R’、-C(O)R’、-C(O)NR’2、-C(O)OR15、-S(O)mR’2或S(O)mNR’2；R13為R’、-CF3、-SR’或-OR’；R14為R’、-C(O)R’、CN、NO2、SO2R’或C(O)OR15；R15為H、C1-6烷基或Ar-C0-4烷基；R’為H、C1-6烷基、C3-7環(huán)烷基-C0-4烷基或Ar-C0-4烷基；R”為R’、-C(O)R’或-C(O)OR15；R”’為R”或AA2；AA1為通過其氨基連接的氨基酸，其羧基任選被保護，AA2為通過其羧基連接的氨基酸，其氨基任選被保護；m為1或2；n為0至3；p為0或1；和t為0至2。
15．權(quán)利要求14的化合物，其中A1為CR1R1’、CR1、NR1、N、O或S(O)x；A2為CR2R2’、CR2、NR2；A3為CR3R3’、CR3、NR3、N、O或S(O)x；A4為CR4R4’、CR4、NR4或N；A5為CR5R5’、CR5、NR5、N、O或S(O)x；D1-D4為CH或N；R1和R1’是R*或R，或一起為=O；R2和R2是R*、R或為=O；R3和R3是R*、R或為=O；R4和R4’是R*、R或為=O；R5和R5是R*、R或為=O；x為0、1或2。
16．權(quán)利要求14的化合物，其中A1為CR1R1’、CR1、NR1、N、O或S；A2為CR2R2’、NR2或CR2；A3為CR3R3’；A4為CR4R4’、CR4、NR4或N；A5為CR5R5’、CR5、NR5、N或O；D1和D4為CH；D2或D3為CH6；R2或R4為R；R3、R3’和R5、R5’為=O或R*、H。
17．權(quán)利要求14的化合物，其中A1為CHR1、CR1、NR”、N、或S；A2為CR2或CR2R2’；A3為CR3R3’；A4為CR4R4’或NR4；A5為CR5R5’D1-D4為CH。
18．權(quán)利要求14的化合物，其中A1為CR1,A2為CR2,A3為C=O,A4為NR4和A5為CHR5。
19．權(quán)利要求14的化合物，其中A1為NR1,A2為CHCR2,A3為CR3R3’,A4為NR4和A5為C=O。
20．權(quán)利要求14的化合物，其中A1和A4為C=O,A2為NR2,A3為CHR3’，和A5為NR5。
21．權(quán)利要求14的化合物，其中A1為NR1,A2為CHR2,A3為C=O,A4為NR’和A5為CHR5。
22．權(quán)利要求14的化合物，為
23．權(quán)利要求14的化合物，為
24．權(quán)利要求23的化合物，其中R1為H或C1-4烷基；R2、R2’為H、-CH2CO2H；R5R5’為H、H。
25．選自下列的化合物或其藥學上可接受的鹽5-[[[(苯并咪唑-2-基)甲基]甲基氨基]羰基]-1H-苯并咪唑-2-氨基乙酸；(±)-2,3,4,5-四氫-7-[[[(苯并咪唑-2-基)甲基]甲基氨基]羰基]-4-(3,3-二甲基丁基)-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸；(S)-2,3,4,5-四氫-4-甲基-3-氧代-7-[[[(5-三氟甲基苯并咪唑-2-基)甲基]甲基氨基]羰基]-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸；(S)-2,3,4,5-四氫-7-[[[(4,7-二甲氧基苯并咪唑-2-基)甲基]甲基氨基]羰基]-4-甲基-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸；(±)-2,3,4,5-四氫-7-[[[(苯并咪唑-2-基)甲基]氨基]羰基]-4-(3,3-二甲基丁基)-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸；(S)-2,3,4,5-四氫-7-[[[(4-甲基苯并咪唑-2-基)甲基]甲基氨基]羰基]-4-甲基-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸；S)-2,3,4,5-四氫-7-[[N-[(苯并咪唑-2-基)甲基]-N-(4-氨基丁基)氨基]羰基]-4-甲基-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸；(S)-2,3,4,5-四氫-7-[[N-(苯并咪唑-2-基)甲基-N-(2-氰基甲基)氨基]羰基]-4-甲基-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸；(S)-2,3,4,5-四氫-7-[[[(苯并咪唑-2-基)甲基]氨基]羰基]-3-氧代-4-(4-苯二酰亞氨基丁基)-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸；4-[[[3-(苯并咪唑-2-基)丙基]氨基]羰基]哌啶-1-乙酸；4-[[[3-(苯并咪唑-2-基)丙基]氨基]羰基]苯基乙酸；(S)-2,3,4,5-四氫-7-[[[(4-氮雜-5,7-二甲基苯并咪唑-2-基)甲基]甲基氨基]羰基]-4-甲基-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸；(±)-2,3,4,5-四氫-7-[[[(苯并咪唑-2-基)甲基]甲基氨基]羰基]-4-[2-(3,4-亞甲二氧基苯基)乙基]-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸；(±)-2,3,4,5-四氫-7-[[[(苯并咪唑-2-基)甲基]氨基]羰基]-4-(2-甲氧基乙基)-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸；(S)-2,3,4,5-四氫-7-[[[(苯并咪唑-2-基)甲基]甲基氨基]羰基]-4-甲基-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酰胺；(±)-2,3,4,5-四氫-7-[[[[1-[(苯并咪唑-2-基)甲基]苯并咪唑-2-基]甲基]氨基]羰基]-4-甲基-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸；(S)-2,3,4,5-四氫-7-[[[(苯并咪唑-2-基)甲基]甲基氨基]羰基]-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸；(S)-2,3,4,5-四氫-7-[[雙[(苯并咪唑-2-基)甲基]氨基]羰基]-4-甲基-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸；(±)-2,3,4,5-四氫-7-[[[(4-氮雜苯并咪唑-2-基)甲基]甲基氨基]羰基]-4-(3,3-二甲基丁基)-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸；(±)-2,3,4,5-四氫-7-[[[(苯并咪唑-2-基)甲基]甲基氨基]羰基]-3-氧代-4-(2,2,2-三氟乙基)-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸；(±)-2,3,4,5-四氫-7-[[2-(苯并咪唑-2-基)乙?；鵠氨基]-5-氧代-4-(2-苯基乙基)-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸；(±)-2,3,4,5-四氫-7-[[[(苯并咪唑-2-基)甲基]氨基]羰基]-3-氧代-4-(2,2,2-三氟乙基)-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸；(S)-2,3,4,5-四氫-7-[[[(5,6-二氟苯并咪唑-2-基)甲基]甲基氨基]羰基]-4-甲基-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸；(±)-2,3,4,5-四氫-7-[[雙[(苯并咪唑-2-基)甲基]氨基]羰基]-3-氧代-4-(2-苯基乙基)-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸；(S)-2,3,4,5-四氫-7-[[[(4-氮雜-5-甲基苯并咪唑-2-基)甲基]氨基]羰基]-4-甲基-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸；(S)-2,3,4,5-四氫-4-甲基-7-[[[(4-硝基苯并咪唑-2-基)甲基]甲基氨基]羰基]-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸；(±)-2,3,4,5-四氫-7-[[[(4-氮雜-5-甲基苯并咪唑-2-基)甲基]氨基]羰基]-3-氧代-4-(2,2,2-三氟乙基)-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸；(±)-4-[4-[[[(1H-苯并咪唑-2-基)甲基]甲基氨基]羰基]苯基]-3-苯基丁酸；(±)-3-[[[4-(4-氮雜苯并咪唑-2-基)丁?；鵠甘氨酰基]氨基]-4-戊酸；(S)-2,3,4,5-四氫-7-[[[[(1-(2-羥基乙基)苯并咪唑-2-基]甲基]氨基]羰基]-4-甲基-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸；(±)-2,3,4,5-四氫-7-[[[(4-氮雜-5-甲基苯并咪唑-2-基)甲基]氨基]羰基]-4-(2-甲氧基乙基)-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸；(S)-2,3,4,5-四氫-7-[[[(4-氨基苯并咪唑-2-基)甲基]甲基氨基]羰基]-4-甲基-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸；(S)-2,3,4,5-四氫-7-[[[(苯并咪唑-2-基)甲基]甲基氨基]羰基]-4-甲基-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸乙酯；(S)-2,3,4,5-四氫-7-[[[(苯并咪唑-2-基)甲基]甲基氨基]羰基]-4-甲基-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸，[(2,2-二甲基-2-甲氧基乙酰基)氧基]甲酯；2,3,4,5-四氫-7-[[[((1R)-(苯并咪唑-2-基)乙基]甲基氨基]羰基]-4-甲基-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜_-(2S)-乙酸；(±)-N-[2-(氨基甲基)-4-[[[(4-氮雜-5-甲基苯并咪唑-2-基)甲基]甲基氨基]羰基]苯基]天冬氨酸；(±)-2,3,4,5-四氫-4-甲基-3-氧代-7-[[[(菲咪唑-2-基)甲基]氨基]羰基]-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸；(±)-2,3,4,5-四氫-7-[3-(苯并咪唑-2-基)苯基]-4-甲基-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸；(±)-4-[4-[[[(苯并咪唑-2-基)甲基]甲基氨基]羰基]苯基]-3-(二甲基氨基羰基)丁酸；(S)-2,3,4,5-四氫-7-[[[(苯并咪唑-2-基)甲基]氨基]羰基]-3-氧代-4-[2-(吡啶-3-基)乙基]-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸酯；(S)-2,3,4,5-四氫-7-[[[(4-氮雜-5-甲基苯并咪唑-2-基)甲基]甲基氨基]羰基]-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸；±)-2,3,4,5-四氫-7-[[N-[(苯并咪唑-2-基)甲基]-N-[[4-(2-羧基苯甲酰基)氨基]丁基]氨基]羰基]-3-氧代-4-(2-苯基乙基)-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸；(±)-2,3,4,5-四氫-7-[[N-[(苯并咪唑-2-基)甲基]-N-[[4-(4-疊氮基-2-羥基苯甲?；?氨基]丁基]氨基]羰基]-3-氧代-4-(2-苯基乙基)-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸；(S)-2,3,4,5-四氫-7-[[[(4-氮雜-5-甲基苯并咪唑-2-基)甲基]氨基]羰基]-4-甲基-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸乙酯；2,3,4,5-四氫-7-[[N-[(苯并咪唑-2-基)甲基]-N-[[[(±)生物素?；鵠氨基]丁基]氨基]羰基]-3-氧代-4-(2-苯基乙基)-1H-1,4-苯并二氮雜_-(2RS)-乙酸；2,3,4,5-四氫-7-[[[(1S)-(苯并咪唑-2-基)乙基]甲基氨基]羰基]-4-甲基-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜_-(2S)-乙酸；(S)-2,3,4,5-四氫-7-[[[(咪唑并(1,2a)吡啶-2-基)甲基]甲基氨基]羰基]-4-甲基-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸；(S)-2,3,4,5-四氫-7-[[[(苯并咪唑-2-基)甲基]氨基]羰基]-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸；(±)-5-[[2,3,4,5-四氫-7-[[[(苯并咪唑-2-基)甲基]氨基]羰基]-3-氧代-4-(2-苯基乙基)-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-基]甲基]四唑；(S)-2,3,4,5-四氫-7-[[[(4-氮雜-5-甲基苯并咪唑-2-基)甲基]氨基]羰基]-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸；(±)-2,3,4,5-四氫-7-[3-(苯并咪唑-2-基)丙基]-4-甲基-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸；(±)-2,3,4,5-四氫-7-[[N-[(苯并咪唑-2-基)甲基]-N-(4-氨基丁基)氨基]羰基]-3-氧代-4-(2-苯基乙基)-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸；(±)-2,3,4,5-四氫-7-[[[(苯并咪唑-2-基)甲基]氨基]羰基]-4-甲基-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-(N-羥基)乙酰胺；(±)-3-[[[2-(苯并咪唑-2-基)乙基]氨基]琥珀酰基]氨基-4-戊炔酸乙酯；(±)-3-[[[2-(苯并咪唑-2-基)乙基]氨基]琥珀?；鵠氨基-4-戊炔酸；(±)-2,3,4,5-四氫-7-[[N-[(苯并咪唑-2-基)甲基]-N-[[4-(4-疊氮基-3-碘-2-羥基苯甲?；?氨基]丁基]氨基羰基]-3-氧代-4-(2-苯基乙基)-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸；2,3,4,5-四氫-7-[[[(1S)-(苯并咪唑-2-基)乙基]氨基]羰基]-4-甲基-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜_-(2S)-乙酸；2,3,4,5-四氫-7-[[[(1R)-(苯并咪唑-2-基)乙基]氨基]羰基]-4-甲基-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜_-(2S)-乙酸；和(±)-7-[[[(4,5-二甲基-1H-咪唑-2-基)甲基]甲基氨基]羰基]-2,3,4,5-四氫-4-甲基-3-氧代-1H-1,4-苯并二氮雜_-2-乙酸。
26．選自下列的化合物或其藥學上可接受的鹽3-[[3-[2-(苯并咪唑-2-基)乙基]異惡唑啉-5(R,S)-基]乙?；鵠氨基-3(R,S)-甲基丙酸；3{3,4-二氫-8-[[[((苯并咪唑-2-基)甲基)甲基氨基]羰基]-1-甲基-2,5-二氧代1H-1,4-苯并二氮雜_}-4-丙酸；3-{4H-咪唑[1,2a][1,4]苯并二氮雜_-5(6H)-1-甲基-6-氧代-9-[[[(苯并咪唑-2-基)甲基)甲基氨基]羰基]}-4-丙酸；4-[4-[2-(1H-苯并咪唑-2-基)乙基]-1-哌嗪基]-1-哌啶乙酸；1-羥基-4-[4-[3-(1H-苯并咪唑-2-基)丙基]-1-哌嗪基]-1-環(huán)己烷乙酸；N-[3-[1-[[2-(2-苯并咪唑基)乙基]羰基]哌啶基]羰基]-β-丙氨酸；2-[(苯并咪唑-2-基)甲基]-5-[2-(羧基乙基)氨基]羰基]-2,3-二氫-3-氧代-1H-異吲哚；[3(R)-[2-(苯并咪唑-2-基)乙基]-2-氧代哌啶基]乙酰基-3(R)-甲基-β-丙氨酸；4-[[[[2-(苯并咪唑基)甲基]羰基]甲基氨基]乙?；鵠苯氧基乙酸；4-[[[[2-(苯并咪唑基)甲基]羰基]甲基氨基]乙?；鵠-1,2-亞苯二氧基二乙酸；N-[3-[[[(2-苯并咪唑基)甲基]羰基]氨基]苯甲?；鵠-β-丙氨酸；[[1-[N-[[(2-苯并咪唑基)甲基]羰基]酪氨?；鵠-4-哌啶基]氧基]乙酸；(S)-4-[[[(2-苯并咪唑基)甲基]羰基]甘氨?；鵠-3-甲氧基羰基甲基-2-氧代哌嗪-1-乙酸；(3S,5S)-5-[[4-[(2-苯并咪唑基)甲基]苯基]氧基甲基]-3-羧基甲基-2-吡咯烷酮；1-[(2-苯并咪唑基)甲基]-3-[4-(2-羧基乙基)苯基]-4-甲氧基-3-吡咯啉-2-酮；2-[6-(苯并咪唑-2-基)甲基氨基羰基)-1,2,3,4-四氫異喹啉基]乙酸；2-[6-(苯并咪唑-2-基)甲基氨基羰基)-1-氧代-1,2,3,4-四氫異喹啉基]乙酸；2-[6-(苯并咪唑-2-基)甲基羰基氨基)-1,2,3,4-四氫萘基]乙酸；2-[6-(苯并咪唑-2-基)甲基氨基羰基)-1,2,3,4-四氫萘基]乙酸；2-[5-(苯并咪唑-2-基)甲基羰基氨基)-苯并呋喃]丙酸；2-[5-(苯并咪唑-2-基)甲基羰基氨基)-2,3-二氫-苯并呋喃]丙酸；2-[5-(6-氨基吡啶基-2-甲基氨基羰基)-苯并呋喃]-丙酸；2-[5-(苯并咪唑-2-基)甲基氨基羰基)-2,3-二氫-苯并呋喃]-丙酸；或1-[(1H-苯并咪唑-2-基)甲基]-3-{4[(2-乙氧基羰基)乙基]苯基}-3-氧代-咪唑烷。
27．藥用組合物，它包括藥學上可接受的載體和權(quán)利要求1至26中的任何一項的化合物。
28．在哺乳動物中抑制玻連蛋白受體的方法，它包括給予有效量的權(quán)利要求1的式(Ⅰ)或(Ⅱ)或(Ⅲ)或(Ⅳ)或(Ⅴ)的化合物。
29．權(quán)利要求28的方法，其中所述化合物抑制玻連蛋白受體，其抑制玻連蛋白受體的Ki為所述化合物抑制纖維蛋白原受體Ki的10倍以上。
30．權(quán)利要求28的方法，其中所述化合物抑制玻連蛋白受體，其抑制玻連蛋白受體的Ki為所述化合物抑制纖維蛋白原受體Ki的30倍以上。
31．權(quán)利要求28的方法，其中所述化合物抑制玻連蛋白受體，其抑制玻連蛋白受體的Ki為所述化合物抑制纖維蛋白原受體Ki的100倍以上。
32．權(quán)利要求28的治療其中骨的再吸收為一個誘因的疾病的方法。
33．權(quán)利要求28治療骨質(zhì)疏松、炎癥、再狹窄或動脈粥樣硬化癥的方法。
34．在哺乳動物中抑制玻連蛋白受體的方法，它包括給予有效量的權(quán)利要求13所定義的式(ⅩⅪ)或(ⅩⅫ)的化合物。
35．權(quán)利要求34的方法，其中所述化合物抑制玻連蛋白受體，其抑制玻連蛋白受體的Ki為所述化合物抑制纖維蛋白原受體Ki的10倍以上。
36．權(quán)利要求34的方法，其中所述化合物抑制玻連蛋白受體，其抑制玻連蛋白受體的Ki為所述化合物抑制纖維蛋白原受體Ki的30倍以上。
37．權(quán)利要求34的方法，其中所述化合物抑制玻連蛋白受體，其抑制玻連蛋白受體的Ki為所述化合物抑制纖維蛋白原受體Ki的100倍以上。
38．權(quán)利要求34的治療其中骨的再吸收為一個誘因的疾病的方法。
39．權(quán)利要求34治療骨質(zhì)疏松、炎癥、再狹窄或動脈粥樣硬化癥的方法。
40．在哺乳動物中抑制玻連蛋白受體的方法，它包括給予有效量的權(quán)利要求25的化合物。
41．權(quán)利要求40的方法，其中所述化合物抑制玻連蛋白受體，其抑制玻連蛋白受體的Ki為所述化合物抑制纖維蛋白原受體Ki的10倍以上。
42．權(quán)利要求40的方法，其中所述化合物抑制玻連蛋白受體，其抑制玻連蛋白受體的Ki為所述化合物抑制纖維蛋白原受體Ki的30倍以上。
43．權(quán)利要求40的方法，其中所述化合物抑制玻連蛋白受體，其抑制玻連蛋白受體的Ki為所述化合物抑制纖維蛋白原受體Ki的100倍以上。
44．權(quán)利要求40的治療其中骨的再吸收為一個誘因的疾病方法。
45．權(quán)利要求40的治療骨質(zhì)疏松、炎癥、再狹窄或動脈粥樣硬化癥的方法。
46．權(quán)利要求1至26中的任何一項的化合物在藥物生產(chǎn)中的應用。
47．權(quán)利要求1至26中的任何一項的化合物在需要的哺乳動物中抑制玻連蛋白受體的藥物生產(chǎn)中的應用。
48．權(quán)利要求1至26中的任何一項的化合物在治療骨吸收為一個誘因的疾病的藥物生產(chǎn)中的應用。
49．權(quán)利要求1至26中的任何一項的化合物在治療骨質(zhì)疏松、炎癥、再狹窄或動脈粥樣硬化癥的藥物生產(chǎn)中的應用。
50．制備式(Ⅰ)或(Ⅱ)或(Ⅲ)或(Ⅳ)或(Ⅴ)化合物或其藥學上可接受的鹽的方法
或或或
或
其中W為-(CHRg)b-V’-或苯基；A為纖維蛋白原受體拮抗劑模板；V’為CONR21或NR21CO；G為NRe、S或O；Rg為H、C1-6烷基、Het-C0-6烷基、C3-7環(huán)烷基-C0-6烷基或Ar-C0-6烷基；R21為Het-(CH2)0-6-U’-(CH2)1-6-、C3-7環(huán)烷基-(CH2)0-6-U’-(CH2)1-6-或Ar-(CH2)0-6-U’-(CH2)1-6-；U’為CONRf或NRfCO；Rf為H、C1-6烷基或Ar-C1-6烷基；Re為H、C1-6烷基、Ar-C1-6烷基、Het-C1-6烷基、C3-7環(huán)烷基-C1-6烷基、(CH2)qOH或(CH2)kCO2Rg；k為0、1或2；q為1或2；b為0、1或2；Rb和Rc獨立選自H、C1-6烷基、Ar-C0-6烷基、Het-C0-6烷基或C3-6環(huán)烷基-C0-6烷基、鹵素、CF3、ORf、S(O)kRf、CORf、NO2、N(Rf)2、CO(NRf)2、CH2N(Rf)2或Rb和Rc結(jié)合形成5元或6元芳香或非芳香碳環(huán)或雜環(huán)，任選被多至3個選自鹵素、CF3、C1-4烷基、ORf、S(O)kRf、CORf、CO2RfOH、NO2、N(Rf)2、CO(NRf)2和CH2N(Rf)2或亞甲二氧基的取代基取代，所述方法包括(ⅰ)式(Ⅰ)化合物，使式(Ⅰa)化合物與式(Ⅰb)化合物反應
L"-A(Ⅰb)其中Rb、Rc、Rf和A與上述式(Ⅰ)所定義的相同，其活性官能基團被保護；和L’和L”為反應在W部分形成酰胺鍵的基團或L’為被-SnBu3取代的苯基，L”為鹵素；此后去除任何保護基團，任選形成藥學上可接受的鹽；或(ⅱ)式(Ⅱ)化合物，使式(Ⅱa)化合物與式(Ⅰb)化合物反應
L"-A(Ⅰ-b)其中Rb、Rc、G和A與式(Ⅰ)所定義的相同，其活性官能基團被保護；和L’和L”為反應在W部分形成酰胺鍵的基團或L’為被-SnBu3取代的苯基，L”為鹵素；此后去除任何保護基團，任選形成藥學上可接受的鹽；或(ⅲ)式(Ⅲ)化合物，使式(Ⅲa)化合物與式(Ⅰb)化合物反應
L”-A(Ⅰb)其中Rb、Rc、Re和A與式(Ⅰ)所定義的相同，其活性官能基團被保護；和L’和L”為反應在W部分形成酰胺鍵的基團或L’為被-SnBu3取代的苯基，L”為鹵素；此后去除任何保護基團，任選形成藥學上可接受的鹽；或(ⅳ)式(Ⅳ)化合物，使式(Ⅳa)化合物與式(Ⅰb)化合物反應
L"-A(Ⅰb)其中Rg、Re和A與式(Ⅰ)所定義的相同，其活性官能基團被保護；和L’和L”為反應在W部分形成酰胺鍵的基團或L’為被-SnBu3取代的苯基，L”為鹵素；此后去除任何保護基團，任選形成藥學上可接受的鹽；或(Ⅴ)式(Ⅴ)化合物，使式(Ⅴa)化合物與式(Ⅰb)化合物反應
L"-A(Ⅰb)其中Rg、Re、和A與式(Ⅰ)所定義的相同，其活性官能基團被保護；和L’和L”為反應在W部分形成酰胺鍵的基團或L’為被-SnBu3取代的苯基，L”為鹵素；此后去除任何保護基團，任選形成藥學上可接受的鹽。
51．制備式(ⅩⅪ)化合物的方法
其中A和B與權(quán)利要求13所定義的相同，所述方法包括使式(ⅩⅩⅤ)化合物與式(ⅩⅩⅥ)化合物反應
L4-A(ⅩⅩⅥ)其中A與權(quán)利要求13所定義的相同，其活性官能團被保護；和L3和L4是在B部分反應形成共價鍵的基團；和此后去除任何保護的基團并任選形成藥學上可接受的鹽。
52．制備式(ⅩⅪ)化合物的方法
其中A、B和G與權(quán)利要求13所定義的相同，所述方法包括使式(ⅩⅩⅦ)化合物與式(ⅩⅩⅧ)化合物反應
L6-A(ⅩⅩⅧ)其中A和G與上述所定義的相同，其活性官能團被保護；和L5和L6是在B部分反應形成共價鍵的基團；和此后去除任何保護的基團并任選形成藥學上可接受的鹽。
全文摘要
公開式(Ⅰ－Ⅴ)化合物,它們?yōu)椴＿B蛋白受體拮抗劑并可以用于治療骨質(zhì)疏松。
文檔編號A61P29/00GK1209744SQ96180113
公開日1999年3月3日 申請日期1996年12月20日 優(yōu)先權(quán)日1995年12月29日
發(fā)明者W·H·米勒, W·E·邦迪內(nèi)爾, T·W·F·庫, R·M·克南, J·M·薩馬仁, C·克安, F·E·F·阿利, M·A·拉戈 申請人:史密絲克萊恩比徹姆公司