專利名稱：：抑制血凝的療效食品和藥物制劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及具有抗凝血作用的療效食品和口服的藥物制劑，這指的是它們用于抑制人和熱血動物的血凝。本發(fā)明也涉及制備這樣的食品和藥物制劑的方法，和抑制血凝的方法?？焖俚哪豢醋魇切纬裳ǖ囊粋€危險因素，它能導(dǎo)致象心臟病發(fā)作和心血管心臟疾病(CHD)那樣的威脅生命的并發(fā)癥。具有抗血凝劑活性的食品能有益于CHD的預(yù)防。血凝過程是一個包含許多因素包括維生素K依賴酶的復(fù)雜機理。維生素K屬于一般稱為異戊二烯基醌的一類化合物。其它的異戊二烯基醌，在不同的食品中被發(fā)現(xiàn)，包括泛醌、特別是泛醌9和泛醌10。泛醌指的是具有1-10二氫異戊二烯單元的類異戊二烯側(cè)鏈的一組脂溶2，3-二甲氧基-5-甲基-1，4-苯醌。異戊二烯基數(shù)量通過泛醌名稱附加的數(shù)字來表示。泛醌不看作是維生素，而作為輔酶。近些年來已經(jīng)廣泛地認為泛醌(輔酶(Q，UQ)，除了包含作為在線粒體和細菌呼吸中作為電子和質(zhì)子載體外，還以其還原結(jié)構(gòu)(泛醇ubiquinol)作為抗氧劑。作為抗氧劑，它可以防止不飽和脂肪酸的脂類過氧化反應(yīng)，也有助于最大程度地減小由于例如大腦機能障礙、白內(nèi)障、CHD和癌癥等老化疾病所造成的危害。對于UQ10的作用是特定的，這已經(jīng)通過大量臨床和試管研究所證實。這里，可以得到具體的藥物。Bracco等人在EP424679中披露了加入輔酶Q、特別是輔酶Q10以使脂肪或含有脂肪的食品、化妝品或藥品抗氧化。最近發(fā)現(xiàn)異戊二烯基醌的合成衍生物能抑制維生素K依賴酶γ-谷氨?；人崦负洼^小的程度上抑制維生素K環(huán)氧化物還原酶。本發(fā)明就是基于這樣的發(fā)現(xiàn)即泛醌在實驗室條件下影響維生素K-依賴酶。發(fā)現(xiàn)在大白鼠體內(nèi)以及奶牛肝系統(tǒng)中的維生素K-依賴羧基酶和維生素K環(huán)氧化物還原酶均可以被抑制，在濃度微摩爾范圍內(nèi)可獲得50％的抑制。由此可知泛醌(除了對例如脂類過氧化反應(yīng)，心臟功能、血壓和動脈硬化有有益影響)是維生素K的潛在對抗劑，可以干擾體內(nèi)在血凝過程中扮演重要角色的維生素K-依賴反應(yīng)。體內(nèi)實驗證明，泛醌在口服情況下卻沒有這樣的效果。當(dāng)靜脈注射(約6mg/kgbw)時，泛醌對血凝參數(shù)有抑制效果。意想不到地發(fā)現(xiàn)，谷物胚芽油，特別是玉米胚芽油含有泛醌，當(dāng)將含有45％能量是玉米油的飼料喂給測試動物(大白鼠)時，發(fā)現(xiàn)有明顯的抗血凝效果。當(dāng)將動物數(shù)據(jù)外推至人類(成人參考體重約60kg)時，有效劑量等于約40mg泛醌即9或100g玉米油。對于富含泛醌的油，玉米油的有效劑量基本上減至約10-20ml。還不能確定，胚芽油的抗凝效果是由于它們的泛醌含量還是由于玉米油中的其它成份的疊加效果。事實上，谷物胚芽油，特別是玉米油，具有明顯對血凝抑制的效果，當(dāng)口服時，其它油象豆油，椰子油或葵花油就未顯示出此效果，或者只有較小的效果。這一效果可能是由于胚芽油的增溶作用或是油中其它成份的疊加效果。因此本發(fā)明涉及利用谷物胚芽油，優(yōu)選玉米油作為制備對血凝具有抑制效果的療效食品和藥物制劑，涉及具有抗血凝效果的療效食品和口服藥物制劑，還涉及包括口服谷物胚芽油，優(yōu)選玉米油來抑制人體和熱血動物體中血凝的方法。本發(fā)明涉及利用谷物胚芽油、優(yōu)選玉米胚芽油來制備對血凝具有抑制效果的療效食品和藥物制劑。根據(jù)本發(fā)明的玉米油除了不飽和脂肪酸有益于膽固醇代謝和血壓控制以外，意想不到地發(fā)現(xiàn)，通過口服，對預(yù)防血栓形成和相關(guān)疾病的發(fā)生有明顯的有益效果。體內(nèi)實驗顯示出玉米胚芽油的攝入導(dǎo)致a)血漿凝血酶原的減少和b)肝凝血酶原前體分子的平行增長。作為動脈血栓形成趨勢的“體內(nèi)實驗動物模型”產(chǎn)生了進一步的數(shù)據(jù)。該模型一般稱為“主動脈環(huán)模型”。動脈環(huán)模型是一個實驗方案，用以測量在大白鼠體內(nèi)動脈血栓阻塞情況下營養(yǎng)素的作用(Hornstractal1975Athcrosclcrosis22，499-516)。大白鼠須經(jīng)過設(shè)定的處理，且經(jīng)一段時間后，在輸精管下的腹動脈切下3mm，使之能插入一個環(huán)形聚乙烯套管。傷口的連接采用這樣的方式就是該環(huán)從腹中伸出、伸向外部環(huán)境。在動脈環(huán)持久保持與容器壁接觸的地方，內(nèi)皮損傷和流動故障導(dǎo)致血栓的形成和擴展，在手術(shù)后造成阻塞狀態(tài)約5天。全部阻塞的時間由半透明環(huán)中血液顏色的改變來確定。環(huán)的插入和全部阻塞之間的時間稱作阻塞時間(OT)、且可以用作動物體內(nèi)動脈血栓形成趨勢的測量。OT時間越短，形成動脈血栓的趨勢就越大。該模型已被廣泛用作說明飽和和不飽和脂肪酸對血栓形成趨勢的作用。一般硬化的椰子油作為測試的正面參照物。根據(jù)本發(fā)明的谷物胚芽油的用途，特別是在普通的食用條件下，可有助于預(yù)防血栓栓塞和心血管疾病。目前香豆素型抗凝劑被頻繁用于此目的一般的劑量用來預(yù)防血栓形成和心肌梗塞，且較低的劑量用來預(yù)防周圍動脈疾病。玉米油是天然抗凝劑，其效果可與低劑量香豆素的效果相比。最主要的區(qū)別是玉米油對維生素K循環(huán)的作用是可逆的，而香豆素卻不是。因此，服用香豆素抗凝劑的病人需要受到頻繁地監(jiān)控(出血的危險)，而含玉米胚芽油的產(chǎn)品卻可以自由使用。根據(jù)本發(fā)明的含谷物胚芽油的療效食品和藥物制劑，優(yōu)選是玉米胚芽油，分別采用適當(dāng)?shù)幕A(chǔ)食品或合適的載體。下述實施例說明玉米油中的抗凝劑活性以及玉米油中的異戊二烯基醌，但并不意味著以任何方式對本發(fā)明限制。實施例1食用油對血漿凝血酶原濃度的影響(鼠喂養(yǎng)研究)在12周內(nèi)對Wistar鼠用含有45％的能量是表1中所涉及的任意一種油的飼料隨意喂食。每一組有20只鼠。在測試結(jié)束時通過對鼠尾靜脈進行靜脈穿刺的方法抽取血液樣品。作為血凝標記，凝血酶原濃度用凝度計(KC-4，Amelung、Germany)在采用市售促凝血酶原激酸制劑(ThromborelSR)和血凝因子II-缺乏血漿(由來自BehringwerkeAG，Marburg，Germany)條件下測定。凝血酶原濃度是通過借助于匯集正常鼠血漿參照曲線算得的。凝血酶原在血凝過程中是一個重要因素?？寡ㄐ纬尚再|(zhì)直接與血漿凝血酶原的減少相關(guān)。大白鼠食用玉米油導(dǎo)致它們血凝時間明顯的延長，這是通過“維生素K-依賴”血凝因素凝血酶原的減少所造成的。其它的油，例如椰子油、豆油和葵花油沒有發(fā)現(xiàn)這樣的延長效果。卓越的抗血栓形成效果清楚地在表1中得到證明。列于表1的每個數(shù)據(jù)代表20次凝血酶原測量±SD的平均值。表1食用油對血漿凝血酶元濃度的影響實施例2泛醌/質(zhì)體醌對試管中維生素K依賴酶的作用象葉綠醌(維生素K1)、泛醌和質(zhì)體醌這樣的異戊二烯基醌，在谷氨酸鹽轉(zhuǎn)化成γ-羧基-谷氨酸鹽(Gla)的過程中作為輔酶，這是在血凝因子形成中必須的步驟。維生素K的活性結(jié)構(gòu)是醌醇(KH2)，其氧化作用提供Gla形成所需要的能量。在這個反應(yīng)中KH2轉(zhuǎn)化成維生素K環(huán)氧化物(KO)，它通過稱為KO還原酶的作用在兩步驟中再循環(huán)。試管系統(tǒng)用于測試γ-谷氨?；人崦富騅O還原酶。由普通奶牛的肝以及正常的和維生素K缺乏的Lewis鼠制備得到鹽洗微粒體。使用在醌醇中、和醌中或環(huán)氧化物結(jié)構(gòu)中的輔助因子維生素K，在寬的異戊二烯基醌(UQ-9、UQ-10和PQ-9)濃度范圍內(nèi)制得抑制曲線。這樣的抑制曲線的例子示于圖1。由這些曲線，對于各種來自奶牛以及鼠的羧化酶系統(tǒng)，要求50％抑制(I-50)的抑制劑濃度被計算出來(圖1中的虛線)。在標準條件下培育，在TritonX-114中增溶后加入抑制劑。圖1中所有點代表兩次實驗的平均值。I-50值如所示虛線計算。所有抑制劑獲得的數(shù)據(jù)概括于表2，且說明所有I-50值在30至150μM的范圍內(nèi)。表2異戊二烯基醌對γ-谷氨?；人崦富钚缘淖饔盟袛?shù)據(jù)表示用S.E.M.三次實驗的平均值“n、d、”代表由于酶的不穩(wěn)定而不能測定結(jié)果所有測試的天然異戊二烯基苯醌對γ-谷氨?；人崦负蚄O-還原酶有抑制活性；兩種酶被抑制到一個可比較的程度。這證明泛酯/質(zhì)體醌的效力與抗凝劑活性有關(guān)。實施例3實施例3證明玉米油的高抗血栓形成活性動脈環(huán)模型5周大的公Wistar鼠參與實驗，用含有45％能量是硬化椰子油或葵花籽油或玉米油的飼料隨意喂養(yǎng)8周。由42只鼠組成的三組互相比較。8周后植入動脈環(huán)，繼續(xù)喂養(yǎng)直到阻塞發(fā)生。在該環(huán)被固體血栓阻塞之前所需要的時間(阻塞時間)用于對血栓形成趨勢的測量。越長的阻塞時間說明越低的血栓形成趨勢。阻塞時間的準確記錄需要對動物嚴格地進行日夜觀察。做了兩個實驗A和B，在實驗A中，使用的玉米油來自荷蘭市場，其不知具體來歷。在實驗B中使用的玉米油知其來歷和加工條件，特點是具有更高含量的泛醌(見表3)。在鼠體內(nèi)三種油對動脈血栓形成趨勢的效果示于圖2a和2b。在實驗A中對于椰子油、葵花籽油和玉米油組的平均阻塞時間分別是91、123和144小時(圖2a)。在硬化椰子油和葵花籽油之間阻塞時間基本上增長了(35％)，這與早期的觀察一致。它也清楚地表明玉米油組的阻塞時間還更長(相對于椰子油增長58％，幾乎是葵花油的兩倍)。在實驗B中，使用具有較高泛醌濃度的玉米油，這些區(qū)別更明顯地表明玉米油有利(圖2b)。這個結(jié)構(gòu)與實施例2所述的試管中泛醌對維生素K依賴酶的作用是一致的。表3用于動脈環(huán)實驗A和B的各種玉米油的泛醌和生育酚含量玉米油實驗A玉米油實驗B泛醌Q9264306泛醌Q1078α-生育酚115159α-生育酚57y-生育酚892953y-生育酚3131</table></tables>實施例4Mazola玉米油的攝入對人體抗血栓形成參數(shù)的影響通過對人體實驗研究，也證明了對抗血栓形成參數(shù)具有有益效果。在14天時間內(nèi)，4個測試者每天攝入80ml的Mazola玉米油。下列血液參數(shù)是在0天和第14天測得的凝血酶元、凝結(jié)因子VII、甘油三酸酯和維生系K。起始值的顯著減少非常符合前面實施例所觀察到的抗血栓效果(表4)。表4在每日攝入80mlMazola玉米油之后所選擇的血液參數(shù)的變化<tablesid="table4"num="004"><tablewidth="806">0天14天凝血酶元*(％)114104凝結(jié)因子VII*(％)105101甘油三酸酯(mmol)0.880.68維生素K(ng/ml)0.710.53</table></tables>*提供的數(shù)據(jù)基于所匯集的正常血漿參照值的百分比本發(fā)明現(xiàn)已全部描述完畢，許多變化和改進對本領(lǐng)域普通技術(shù)人員是顯而易見的，不能脫離如前所述的本發(fā)明的精神或范圍。權(quán)利要求1谷物胚芽油的用途，優(yōu)選玉米胚芽油，用于制備對血凝具有抑制效果的療效食品和藥物制劑。2具有抗血凝效果的療效食品和口服藥物制劑，包括在合適載體中的谷物胚芽油，優(yōu)選玉米胚芽油。3根據(jù)權(quán)利要求2的療效食品和藥物制劑，其中使用的胚芽油富含泛醌9/10。4根據(jù)權(quán)利要求3的療效食品和藥物制劑，其中使用的胚芽油通過CO2提取，餾分中富含泛醌9/10。5用于抑制人體和熱血動物血凝的方法，包括口服具有天然或富含泛醌9/10的谷物胚芽油，優(yōu)選玉米胚芽油。全文摘要本發(fā)明涉及谷物胚芽油的用途,優(yōu)選玉米油,用于制備對血凝具有抑制效果的療效食品和藥物制劑。本發(fā)明還涉及具有抗血凝效果的療效食品和口服藥物制劑。一種包括口服谷物胚芽油、優(yōu)選玉米油來抑制人體和熱血動物體中的血凝的方法。文檔編號A61K31/20GK1172591SQ9711308公開日1998年2月11日申請日期1997年4月23日優(yōu)先權(quán)日1996年4月23日發(fā)明者C·維米爾,G·格諾克,R·斯圖特申請人:Cpc國際有限公司