專利名稱：動(dòng)物用口服組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及動(dòng)物用口服組合物；具體地說，本發(fā)明涉及動(dòng)物用的含有枯草芽孢桿菌Kubota的口服組合物。
現(xiàn)有技術(shù)在豬圈，家禽場(chǎng)和各種牲口棚喂養(yǎng)期間，豬，家禽和其它家畜排出大量的糞便和尿，從中釋放出強(qiáng)烈的有害的臭氣，導(dǎo)致了嚴(yán)重的污染問題。
糞便和尿的有害的臭氣不僅產(chǎn)生于牧場(chǎng)，而且也產(chǎn)生于各自家庭的寵物以及動(dòng)物園和養(yǎng)魚缸的動(dòng)物，魚和貝殼類。因此，去除這種臭氣已經(jīng)是急需的。
發(fā)明解決的問題考慮到上述產(chǎn)業(yè)上的需求，本發(fā)明的一個(gè)目的是研制能夠以簡(jiǎn)單的方式有效地去除各種各樣的排泄物的臭氣的新系統(tǒng)，所述排泄物不僅來自于家畜而且來自于寵物和其它動(dòng)物，鳥類。
解決問題的方法為了達(dá)到發(fā)明目的本發(fā)明人已經(jīng)從各個(gè)角度進(jìn)行了調(diào)查。注意力集中到目前的發(fā)展事態(tài)，即微生物例如酵母，弧菌和活化的淤泥被用作為處理污水的細(xì)菌，本發(fā)明人進(jìn)一步對(duì)可有效地用于處理浮渣的細(xì)菌和除臭的細(xì)菌進(jìn)行篩選。本發(fā)明人己經(jīng)成功地從土壤中分離出細(xì)菌菌株，當(dāng)用作為處理污水的細(xì)菌時(shí)可降解浮渣，并且具有顯著的除臭效果。
經(jīng)驗(yàn)證，由此獲得的細(xì)菌菌株菌學(xué)特性屬于枯草芽孢桿菌，但是它具有的有用的特性如降解浮渣和除臭功能是在其它常規(guī)的枯草芽孢桿菌菌株中沒有觀察到的，由此，已將所分離到的菌株稱作為枯草芽孢桿菌的新菌株，稱為枯草芽孢桿菌Kubota。
該細(xì)菌菌株已寄存于日本，國家生物科學(xué)和人技術(shù)研究院，工業(yè)科學(xué)和技術(shù)事務(wù)所，登記號(hào)為枯草芽孢桿菌Kubota FERM BP-5847。
當(dāng)將枯草芽孢桿菌Kubota(下文中有時(shí)稱作為“細(xì)菌菌株”或“BSK細(xì)菌”)直接噴灑于糞便和尿上時(shí)能夠有效地去除糞便和尿的臭味。出人意料的是，已經(jīng)獲得了非常有效的新發(fā)現(xiàn)，當(dāng)將該細(xì)菌口服給藥時(shí)，排泄出的糞便和尿沒有有害的臭氣。
因此，本發(fā)明人已經(jīng)發(fā)現(xiàn)不僅在將BSK細(xì)菌直接應(yīng)用到糞便和尿時(shí)具有去除糞便和尿的臭氣的直接除臭效果，而且當(dāng)將該BSK細(xì)菌口服給藥時(shí)具有間接去除糞便和尿的臭氣的除臭效果，并且已經(jīng)進(jìn)行了繼續(xù)調(diào)查。這樣就得出了本發(fā)明。
換句話說，本發(fā)明基本上是基于動(dòng)物用的含有枯草芽孢桿菌Kubota的口服組合物的技術(shù)構(gòu)思。
下面將對(duì)本發(fā)明進(jìn)行詳細(xì)描述。
發(fā)明的實(shí)施方案在本發(fā)明中，將枯草芽孢桿菌Kubota(BSK細(xì)菌；FERM BP-5847)用作為除臭微生物。如上文中已經(jīng)描述的，根據(jù)其菌學(xué)特性認(rèn)為BSK細(xì)菌屬于枯草芽孢桿菌，但是從特性上說該細(xì)菌具有良好的用途例如除臭作用。
菌學(xué)特性描述如下。
(a)形態(tài)學(xué)1.細(xì)胞的形狀和大小短和小的芽孢桿菌(1.2-1.4×3.6-3.8μm)。
2.細(xì)胞的多態(tài)性沒有特定的多態(tài)性。細(xì)胞周圍有細(xì)胞膜并且有核。還有芽孢，觀察到隔膜。
3.存在或沒有運(yùn)動(dòng)性可運(yùn)動(dòng)。約十根鞭毛。
4.存在或沒有芽孢存在芽孢5.革蘭氏染色革蘭氏陽性。用FAVOR-GSET(Nissui)染色呈藍(lán)色。
6.抗酸特性用Ziehl-Neelsen染色呈紅色。
抗酸細(xì)菌(b)在單個(gè)的培養(yǎng)基上的生長(zhǎng)狀態(tài)將懸浮于生理鹽水中的細(xì)菌接種到肉湯瓊脂平極培養(yǎng)基上，于37℃生長(zhǎng)24小時(shí)，觀察到生長(zhǎng)良好。
菌落邊緣是R類型，不是圓形。顏色呈不透明的灰白黃色。
在羊血瓊脂培養(yǎng)，心浸液瓊脂培養(yǎng)和胰胨-大豆-瓊脂培養(yǎng)期間，菌落是R類型，呈不透明的灰白黃色，生長(zhǎng)良好。在各種培養(yǎng)基上的生長(zhǎng)狀態(tài)如下；普通瓊脂培養(yǎng)基 (+)羊血瓊脂培養(yǎng)基 (+)心浸液 (+)胰胨-大豆 (+)Sabouraud (-)鹽蛋瓊脂培養(yǎng)基 (-)Drigalski (-)腦-心浸液培養(yǎng)基 (+)[c]生理特性[1]還原硝酸鹽 (+)[2]VP試驗(yàn) (+)[3]產(chǎn)生吲哚 (-)[4]產(chǎn)生硫化氫 (-)[5]水解淀粉 (+)[6]檸檬酸的利用 (+)[7]染料的產(chǎn)生 水溶性[8]脲酶 (-)[9]氧化酶 (+)[10]催化酶 (+)[11]生長(zhǎng) 酸性微弱中性良好溫度 37℃良好30℃良好25℃良好[15]在氧中行為 好氧[16]O-F試驗(yàn)F 利用糖產(chǎn)生酸和氣酸氣L-阿拉伯糖 (-)(-)D-木糖 (-)(-)D-葡萄糖 (+)(-)D-果糖 (+)(-)麥芽糖 (+)(-)蔗糖 (-)(-)乳酸 (-)(-)海藻糖 (±) (-)D-三梨糖 (-)(-)D-甘露糖 (-)(-)肌醇 (-)(-)淀粉 (-)(-)(d)其它特性七葉苷分解 (+)纖維素分解 (+)丙二酸的利用 (+)精氨酸分解 (-)賴氨酸脫羧基作用 (+)尿氨酸脫羧基作用 (-)苯丙氨酸脫氨基作用 (-)溶血特性 β-型溶血作用營養(yǎng)缺陷型 (+)β-半乳糖苷酶 (-)本發(fā)明分離的枯草芽孢桿菌Kubota新菌株在任何普通營養(yǎng)培養(yǎng)基中生長(zhǎng)良好。特別是家禽糞便的提取液，家畜糞便提取液等等可作用極好的培養(yǎng)液。
在用或不用培養(yǎng)箱于20-40℃，優(yōu)選的是30-38℃培養(yǎng)10-24小時(shí)，菌株顯示生長(zhǎng)良好。
由于培養(yǎng)物本身含有大量的細(xì)胞，因此可利用獲得的培養(yǎng)物本身。
另外，通過離心等步驟可從培養(yǎng)物中分離細(xì)胞，然后將細(xì)胞徹底清洗，并且和培養(yǎng)的細(xì)胞一樣使用它們；所述細(xì)胞可以膏狀形式使用，如上述情況的濕餅狀物或者將細(xì)胞進(jìn)一步冷凍干燥；另一種可選的方法，將細(xì)胞稀釋并制備成懸浮液，可使用這樣的經(jīng)過處理的產(chǎn)品形式。不用說，同樣也可利用所述培養(yǎng)物的經(jīng)過處理的產(chǎn)品。
可使用口服組合物形式的BSK細(xì)菌(包括培養(yǎng)物和其經(jīng)過處理的產(chǎn)品)本身；另外，在向細(xì)胞加入淀粉，云母和其它成份并且混合之后，可將細(xì)胞配制成動(dòng)物用藥劑。作為藥劑，可適當(dāng)?shù)剡x擇粉劑，顆粒劑，片劑，液體，膏劑和其它形式。
可將本發(fā)明的口服組合物配制成飼料形式，并且在這種情況下，當(dāng)然可將BSK細(xì)菌的細(xì)胞加入到飼料中；還有，將細(xì)胞初步制備成預(yù)混合物形式，其也可使用；或者可將配制成上述藥劑形式的細(xì)胞加入到飼料中。
也就是說，本發(fā)明的口服組合物可以以藥劑形式或飼料形式使用；可將BSK細(xì)菌細(xì)胞(如果需要，在預(yù)混合或配制之后)直接口服給藥或以飼料添加劑形式加入到飼料或飲用水中并且混合，接著被攝入。對(duì)于飲用水，可將BSK細(xì)菌的細(xì)胞直接加入到飲用水并且混合，另外，將BSK細(xì)菌細(xì)胞包裝于水可滲透性的袋中，將其懸掛于飲用水塔中。此外，可將BSK細(xì)菌細(xì)胞與飼料或?qū)櫸锸称坊蝻嬃鲜称坊旌?，制備成最后的食料。食料中微生物的量取決于受體動(dòng)物的種類，年齡等等，但是作為試驗(yàn)性的標(biāo)準(zhǔn)，符合要求的是，對(duì)于體重70公斤的豬，每天應(yīng)該在喂食的水中隨意加入107個(gè)細(xì)胞的BSK細(xì)菌。
在對(duì)鼠進(jìn)行的口服施用試驗(yàn)中，用于本發(fā)明的口服組合物中的BSK細(xì)菌的LD50幾乎是無窮大；在將其包裹于鼠的皮膚上進(jìn)行的檢測(cè)試驗(yàn)中，沒有觀察到變化。因此，沒有安全性問題。使用BSK細(xì)菌是安全的，在高于前面描述的劑量的其它微生物劑量使用時(shí)對(duì)動(dòng)物沒有任何不利的影響。
再者，在由國家健康和福利部授權(quán)的審查機(jī)構(gòu)，東京食品衛(wèi)生協(xié)會(huì)，食品研究院，已經(jīng)對(duì)BSK細(xì)菌的安全性進(jìn)行了檢測(cè)。根據(jù)檢測(cè)結(jié)果，證實(shí)了該細(xì)菌的安全性。
正如以上已經(jīng)描述的，本發(fā)明的組合物有重要的特性，即除了將其直接應(yīng)用于糞便和尿時(shí)具有除臭作用外。從某種意義上，以該組合物口服給藥時(shí)間接地去除糞便的臭氣。
因此，將該組合物簡(jiǎn)單地加入到各種各樣的飼料，其它的食料或飲用水等等，或單純供給該組合物作為飼料，寵物食料，飲料等等可以去除糞便和尿的臭味。因此可以省去費(fèi)力的工作，節(jié)約精力和財(cái)力；特別是可以減少處理環(huán)境中的有害臭氣而付出的勞力，這不僅有利于牛場(chǎng)的工人，而且有利于牛場(chǎng)附近的居民，因?yàn)樗鼈兛梢圆皇苡泻Τ魵獾挠绊憽Ｒ虼司涂刂骗h(huán)境污染而言本發(fā)明是非常優(yōu)異的。
此外根據(jù)本發(fā)明，可以以簡(jiǎn)單的方式，去除家庭寵物和寵物商店，動(dòng)物園和養(yǎng)魚缸中動(dòng)物以及寵物旅館和獸醫(yī)診所的動(dòng)物產(chǎn)生的糞便和尿的臭味，因此可以去除上述環(huán)境的有害臭氣；即使將糞便和尿單獨(dú)滯留，有害臭氣的產(chǎn)生也得到抑制?；谶@一點(diǎn)，本發(fā)明是非常優(yōu)異的。
此外，如果將本發(fā)明的組合物本身加入到或與食料一起加入到水塔或魚塘，可以抑制水中產(chǎn)生有害的臭氣。因此，本發(fā)明尤其適用于清潔養(yǎng)魚缸，魚塘和池塘中的水，以及飼養(yǎng)熱帶魚的水塔和其它家庭的寵物和寵物商店中的水，并且可用于抑制有害臭氣和魚氣味的產(chǎn)生。
此外，本發(fā)明的組合物對(duì)治愈腸內(nèi)失調(diào)具有良好的作用，當(dāng)口服給藥時(shí)，該組合物可明顯地抑制腹瀉的出現(xiàn)。特別是，豬是容易腹瀉的動(dòng)物，所以如果在年幼的豬中抑制腹瀉的發(fā)作，它們能夠良好地生長(zhǎng)，導(dǎo)致各發(fā)育情況改善。另外，雞和其它動(dòng)物能夠急劇地提高肉和蛋的產(chǎn)生。從這些方面講，本發(fā)明也是非常優(yōu)異的。
下文中描述了本發(fā)明的實(shí)施例。
實(shí)施例1淀粉10克肉浸提液3克蛋白胨 10克氯化鈉 5克水 1000毫升[pH7.0]將上述組分的培養(yǎng)基置于500毫升的培養(yǎng)瓶中，向其中接種枯草芽孢桿菌Kubota FERM BP-5847，于37℃靜止培養(yǎng)20小時(shí)。
將得到的培養(yǎng)液離心收集細(xì)胞，然后將其與300克的淀粉混合。將得到的混合物定義為微生物制劑。
實(shí)施例2給在豬場(chǎng)喂養(yǎng)的生長(zhǎng)期的50頭年幼的豬供給商業(yè)途徑獲得的適于生長(zhǎng)的飼料。將實(shí)施例1中收集到的BSK菌株的細(xì)胞加入到飲用水中，每天加入105個(gè)細(xì)胞，由此獲得的水立即用于喂養(yǎng)。
一個(gè)月以后，測(cè)定豬棚中臭氣和氨的濃度。利用三點(diǎn)比較方法[大城市環(huán)境污染控制頒布令238號(hào)公告]測(cè)定臭氣的濃度，而氨濃度的檢測(cè)采用氨檢測(cè)器進(jìn)行。
結(jié)果，臭氣的濃度從供給組合物之前的117降低到供給后的74[一個(gè)月后]，這意味著臭氣降低和去除了37％之多。另一種可選的方法，氨濃度從供給組合物之前的2.3降低到供給后的1.0[一個(gè)月后]，這意味著臭氣降低和去除了57％之多，在此生長(zhǎng)期間，八頭年幼豬發(fā)生腹瀉，但是一個(gè)月后，沒有觀察到發(fā)生腹瀉的年幼豬。
實(shí)施例3將20頭奶牛場(chǎng)的奶牛劃分為兩組，每組十頭，然后將作為粗飼料的綠色燕麥與商業(yè)上獲得的飼料混合。隨后，得到的飼料進(jìn)一步與實(shí)施例1中制備的微生物制劑混合；加入的微生物制劑的量為0.1％。將得到的混合物在一個(gè)星期內(nèi)喂養(yǎng)給一個(gè)檢測(cè)組的十頭奶牛。相反，給對(duì)照組的十頭奶牛喂養(yǎng)沒有加入微生物制劑的飼料。
一個(gè)星期后，在檢測(cè)組的奶牛場(chǎng)牛舍中沒有觀察到特別的有害臭氣，并且甚至在其中滯留糞便和尿的奶牛場(chǎng)牛舍中牛奶的產(chǎn)生沒有受到干擾。相反，在整個(gè)星期內(nèi)，在對(duì)照組的奶牛場(chǎng)牛舍中充滿了難于忍受的氣味。但是對(duì)于檢測(cè)組，在緊接著的一天，停止供給微生物飼料也不產(chǎn)生有害的氣味。
實(shí)施例4通過將實(shí)施例1中制備的細(xì)胞的冷凍干燥產(chǎn)物以0.2％的濃度加入到商品金魚飼料中而制備一種飼料，將該飼料用于喂養(yǎng)商品園金魚缸中的金魚。
盡管一個(gè)月沒有變換水或者沒有清潔金魚缸，金魚缸中的水是清潔的，沒有產(chǎn)生有害的臭氣例如魚味。
發(fā)明效果通過以BSK細(xì)菌口服給藥可以去除各種各樣的動(dòng)物包括魚的有害氣味，因此，本發(fā)明的組合物可廣泛地應(yīng)用到家庭和牛場(chǎng)、魚繁殖場(chǎng)的魚，牛和家禽，而且可應(yīng)用到寵物，試驗(yàn)動(dòng)物和動(dòng)物園和養(yǎng)魚缸的動(dòng)物。因此，該組合物可用于控制當(dāng)今存在的嚴(yán)重的有害氣味的污染，以便可在城市的郊區(qū)建立牲畜工業(yè)，并且也可用于城市的郊區(qū)的牲口棚。因此，該組合物對(duì)牲畜的繁殖業(yè)具有巨大的貢獻(xiàn)。
根據(jù)條款13-2的規(guī)定寄存的微生物的參考資料1.枯草芽孢桿菌Kubotaa.寄存該微生物的保藏機(jī)構(gòu)的名稱和地址；名稱國際貿(mào)易和工業(yè)部，工業(yè)科學(xué)和技術(shù)機(jī)構(gòu)，國家生物科學(xué)和人技術(shù)研究院。
地址1-3，Higashilchome，Tsukuba-shi，Ibaraki-ken，305，Japanb.在該保藏機(jī)構(gòu)[a]的寄存日期1987年10月8日c.由該保藏機(jī)構(gòu)[a]授予的保藏編號(hào)FERM BP-584權(quán)利要求
1.一種含有枯草芽孢桿菌Kubota的動(dòng)物用口服組合物，所述芽孢桿菌具有下列菌學(xué)特性(a)形態(tài)學(xué)1.細(xì)胞的形狀和大小短和小的芽孢桿菌(1.2-1.4×3.6-3.8μm)。2.細(xì)胞的多態(tài)性沒有特定的多態(tài)性；細(xì)胞周圍有細(xì)胞膜并且有核；還有芽孢，特征地，觀察到隔膜。3.存在或沒有運(yùn)動(dòng)性可運(yùn)動(dòng)；約十根鞭毛；4.存在或沒有芽孢存在芽孢；5.革蘭氏染色革蘭氏陽性；用FAVOR GSET(Nissui)染色呈藍(lán)色；6.抗酸特性用Ziehl-Neelsen染色呈紅色；抗酸細(xì)菌；(b)在單個(gè)的培養(yǎng)基上的生長(zhǎng)狀態(tài)將懸浮于生理鹽水中的細(xì)菌接種到肉湯瓊脂平板培養(yǎng)基上，于37℃生長(zhǎng)24小時(shí)，觀察到生長(zhǎng)良好；菌落邊緣是R類型，不是圓形；顏色呈不透明的灰白黃色；在羊血瓊脂培養(yǎng)，心浸液瓊脂培養(yǎng)和胰胨-大豆-瓊脂培養(yǎng)期間，菌落是R類型，呈不透明的灰白黃色，生長(zhǎng)良好；在各種培養(yǎng)基上的生長(zhǎng)狀態(tài)如下普通瓊脂培養(yǎng)基(+)羊血瓊脂培養(yǎng)基(+)心浸液 (+)胰胨 大豆(+)Sabouraud(-)鹽蛋瓊脂培養(yǎng)基(-)Drigalski(-)腦-心浸液培養(yǎng)基 (+)[c]生理特性[1]還原硝酸鹽 (+)[2]VP試驗(yàn) (+)[3]產(chǎn)生吲哚 (-)[4]產(chǎn)生硫化氫 (-)[5]水解淀粉 (+)[6]檸檬酸的利用 (+)[7]染料的產(chǎn)生 水溶性[8]脲酶 (-)[9]氧化酶 (+)[10]催化酶(+)[11]生長(zhǎng) 酸性微弱中性良好溫度 37℃良好30℃良好25℃良好[15]在氧中行為 好氧[16]O-F試驗(yàn)F[17]利用糖產(chǎn)生酸和氣酸 氣L-阿拉伯糖(-)(-)D-木糖(-)(-)D-葡萄糖 (+)(-)D-果糖(+)(-)麥芽糖(+)(-)蔗糖 ( )(-)乳酸 (-)(-)海藻糖(±) (-)D-三梨糖 ( ) (-)D-甘露糖 (-)(-)肌醇 (-)(-)淀粉 (-)(-)(d)其它特性七葉苷分解 (+)纖維素分解 (+)丙二酸的利用(+)精氨酸分解 (-)賴氨酸脫羧基作用(+)尿氨酸脫羧基作用(-)苯丙氨酸脫氨基作用 (-)溶血特性β-型溶血作用營養(yǎng)缺陷型 (+)β半乳糖苷酶(-)
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的動(dòng)物用口服組合物，其中枯草芽孢桿菌Kubota是分離到的細(xì)胞，一種含有所述細(xì)胞的培養(yǎng)物和/或其經(jīng)過處理的產(chǎn)品的形式。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的動(dòng)物用口服組合物，其中該組合物是一種除臭組合物和/或用于治愈腸內(nèi)失調(diào)的一種組合物。
4.根據(jù)權(quán)利要求1-3中任一權(quán)項(xiàng)所述的動(dòng)物用口服組合物，其中該組合物是動(dòng)物用的飼料型和/或藥劑型組合物。
全文摘要
本發(fā)明涉及動(dòng)物用的含有枯草芽孢桿菌Kubota的口服組合物?？莶菅挎邨U菌Kubota的口服施用可以去除牲畜,家禽,魚等等的糞便和尿的臭味,也可以抑制腹瀉的出現(xiàn)。
文檔編號(hào)A61L9/01GK1181691SQ9719014
公開日1998年5月13日 申請(qǐng)日期1997年3月12日 優(yōu)先權(quán)日1996年3月14日
發(fā)明者久保田豐秋 申請(qǐng)人:久保田豐秋