專利名稱：特沙弗林用于制備與化療藥物一起使用用于癌癥化學(xué)增敏的藥劑的制作方法
許多常見的人類癌癥能抵抗化療劑的有效治療。一些類型的腫瘤，尤其是腎上腺癌、結(jié)腸癌、腸癌、腎癌和肝癌等，在化療的開始就產(chǎn)生了有抗藥性的細(xì)胞(Barrows,L.R.,1995)。在另一些情況中，抗性的產(chǎn)生與微生物的抗藥性產(chǎn)生十分相似，即在治療的過程中由于與抗性相關(guān)的遺傳變異產(chǎn)生了抗性。具有抗性的子代細(xì)胞于是在有藥的環(huán)境中繁殖。無論何種原因，抗性往往使一個抗腫瘤藥物失去療效。
臨床研究表明，編碼P-糖蛋白的基因MDR1的表達(dá)是導(dǎo)致人類多種癌癥中常見的多藥抗藥性的原因。該糖蛋白的作用是作為細(xì)胞膜上能量依賴性的多種藥物流出泵，從而降低了胞內(nèi)細(xì)胞毒性藥物的濃度。這種抗藥機(jī)理可說明常見腫瘤如結(jié)腸癌和腎癌一開始就有抗藥性的原因。對于在常見的血液腫瘤如急性非淋巴細(xì)胞白血病和惡性淋巴瘤中觀察到的獲得性抗性也能用上述機(jī)理解釋。雖然這種類型的抗藥性可能較普遍，但并非是細(xì)胞變得具有抗藥性的唯一機(jī)理。
癌癥治療的化學(xué)修飾包括使用一些本身無細(xì)胞毒性但可以改變宿主或腫瘤以增強(qiáng)抗腫瘤治療效果的藥劑或手法。這樣的藥劑稱為化學(xué)增敏劑。使用化學(xué)增敏劑的先驅(qū)研究表明，這些藥物可使一部分病人的抗藥性逆轉(zhuǎn)。同樣這些初步研究也表明，抗藥性是多種因素造成的，因?yàn)椴⒎侨坑锌顾幮缘牟∪藥в蠵-糖蛋白陽性的細(xì)胞，同樣，也只有一部分病人從目前使用化學(xué)增敏劑的方法中受益。化學(xué)增敏研究以前集中于能夠逆轉(zhuǎn)或調(diào)節(jié)實(shí)體瘤的多藥抗藥性的藥劑上。已知能夠調(diào)節(jié)P-糖蛋白功能的化學(xué)增敏劑包括鈣離子通道封閉劑(維拉帕米)，鈣調(diào)蛋白抑制劑(三氟吡啦嗪)，吲哚生物堿(利血平)，喹啉(奎寧)，親溶酶體劑(氯喹)，類固醇(孕酮)，三苯乙醇類似物(他莫昔芬)，去污劑(聚乙二醇化合物Cremophor EL)，和環(huán)肽抗生素(環(huán)孢菌素)(De Vita，等1993)。
一篇研究化學(xué)增敏劑應(yīng)用的文獻(xiàn)綜述得出如下結(jié)論ⅰ)持續(xù)的高劑量的靜脈內(nèi)維拉帕米治療可引起明顯的心血管副作用，并且有劑量限制，ⅱ)化學(xué)增敏劑如三氟吡啦嗪和他莫昔芬的劑量限制毒性是由于化學(xué)增敏劑自身固有的毒性造成的，而并非增強(qiáng)了化療毒性，ⅲ)用高劑量環(huán)孢菌素A作為化學(xué)增敏劑可引起血膽紅素過高的副作用，并且ⅳ)需要進(jìn)一步研究開發(fā)低毒高效的化學(xué)增敏劑以用于臨床(De Vita，等1993)。
在診斷時認(rèn)為對藥物敏感但在復(fù)發(fā)時獲得了多藥抗藥性表型的腫瘤是臨床上尤為棘手的問題。在診斷期，僅有少量腫瘤細(xì)胞可表達(dá)P-糖蛋白，化療在疾病初期提供了對這些少數(shù)P-糖蛋白的陽性細(xì)胞的選擇優(yōu)勢。另外一種可能是，天然產(chǎn)物來源的化療實(shí)際上引起多藥抗藥性基因MDR1的表達(dá)，從而導(dǎo)致復(fù)發(fā)時成為P-糖蛋白陽性腫瘤。在疾病早期使用化學(xué)增敏劑可以通過消除早期少量的P-糖蛋白陽性細(xì)胞以防止多藥抗藥性的出現(xiàn)。體外研究表明，通過聯(lián)合使用維拉帕米和阿霉素選擇抗藥性細(xì)胞確可防止P-糖蛋白的產(chǎn)生，但另外一種抗藥性機(jī)理則得到發(fā)展，該機(jī)理是改變了的拓?fù)洚悩?gòu)酶Ⅱ的功能引起的(Dalton,W.S.,1990)。
目前使用化學(xué)增敏劑逆轉(zhuǎn)臨床上多藥抗藥性失敗的原因可用下述幾個原因解釋ⅰ)在腫瘤部位化學(xué)增敏劑的水平不足，ⅱ)隨著腫瘤的發(fā)展，P-糖蛋白的水平增加，ⅲ)MDR1基因突變，導(dǎo)致結(jié)合在P-糖蛋白上化學(xué)增敏劑減少，ⅳ)治療過程中，其它不受化學(xué)增敏劑作用的非P-糖蛋白機(jī)理也可能引起抗性，ⅴ)化學(xué)增敏劑缺乏對腫瘤細(xì)胞的選擇性，也提高了正常組織對化療毒性作用的敏感度。一種非P-糖蛋白機(jī)制是由于拓?fù)洚悩?gòu)酶Ⅱ功能的改變，這種非P-糖蛋白機(jī)制產(chǎn)生了對蒽環(huán)類抗生素和表鬼臼毒素的抗性(De Vita，等1993)。
急切需要更有效更低毒的化學(xué)增敏劑以提高化療的效果。臨床上化學(xué)增敏劑的應(yīng)用依賴于其增加化療藥物細(xì)胞毒性的能力以及在體內(nèi)自身的低毒性。本發(fā)明致力于這些問題并提供了一類新的化學(xué)增敏劑，提供了癌癥治療的一個新途徑。
本發(fā)明提供了增加化療藥物活性的方法。具體地說，它是關(guān)于使用特沙弗林(texaphyrin)作為化學(xué)增敏劑以增加化療藥物的細(xì)胞毒性。提供了以特沙弗林作為化學(xué)增敏劑治療白血病、淋巴瘤、癌和肉瘤等癌癥的方法。
特別是，本發(fā)明提供了一種化學(xué)增敏方法，包含給需要的受治療者使用化療藥劑和特沙弗林?！盎瘜W(xué)增敏”一詞，在這里是指與不合并使用特沙弗林時化療藥物的細(xì)胞毒性水平相比，特沙弗林對化療藥物細(xì)胞毒性的增加或加強(qiáng)。也就是說，特沙弗林使癌細(xì)胞對化療藥物更加敏感，使化療藥物更為有效。已知特沙弗林自身并無抗癌的化療活性。
本發(fā)明的一個實(shí)施方案是一種用于治療患者癌癥的方法，該方法包括給受治療者使用化療藥物和特沙弗林。癌癥可以是白血病、淋巴瘤、肉瘤或癌。在優(yōu)選的方案中，對患有某種癌癥并施以化療的患者在兩次化療藥物治療的間隙，服用特沙弗林。
化學(xué)增敏可以與光能治療聯(lián)合使用，這是因?yàn)樘厣掣チ质枪饷舴肿?，在重要的生理波長700-900納米有吸收(參見本文引用的關(guān)于特沙弗林的美國專利，此處引用此文獻(xiàn)作為參考。)。這種方法包括用化療藥物和光敏性特沙弗林治療癌癥患者，并且照射腫瘤的附近部位。在這種聯(lián)合治療過程中，特沙弗林可以是不含金屬的，也可能與金屬形成配合物。如果帶有金屬，則該金屬是一種抗磁性的金屬陽離子，這種抗磁性金屬陽離子可以是Lu(Ⅲ)、La(Ⅲ),In(Ⅲ),Y(Ⅲ),Zn(Ⅱ)和Cd(Ⅲ)。優(yōu)選的金屬陽離子為Lu(Ⅲ)。
造影可以與化學(xué)增敏聯(lián)合進(jìn)行。因?yàn)獒徧厣掣チ质谴殴舱裨煊爸袃?yōu)秀的對比劑(參見本文引用的關(guān)于特沙弗林的美國專利，此處引用此文獻(xiàn)作為參考)。這種方法是指給患有癌癥的病人服用化療藥物以及順磁性金屬-特沙弗林配合物以治療癌癥。用此法治療癌癥，當(dāng)有特沙弗林時能加強(qiáng)化療藥物的活性，同時也可以監(jiān)測諸如腫瘤的位置和大小等情況。這種順磁性的金屬陽離子可以是錳(二價)，錳(三價)，鐵(三價)或是除去鑭(三價)，镥(三價)和钷(三價)之外的三價鑭系金屬陽離子。較優(yōu)選的順磁性金屬有錳(二價)，錳(三價)，鏑(三價)或釓(三價)，最優(yōu)選鏑(三價)或是釓(三價)。
本發(fā)明還提供了一種治療患者腫瘤的方法，包括先用化療藥物和有放射增敏特性的特沙弗林給受治療者服用，再用離子化放射線對患者的癌癥部位附近進(jìn)行照射。已證明特沙弗林具有放射增敏特性。與對照實(shí)驗(yàn)相比，可以增強(qiáng)在特沙弗林附近離子化放射線的細(xì)胞毒性(見PCT公開文本W(wǎng)O95/10307，此處引用此文獻(xiàn)作為參考。)。離子化放射線包括但不局限于如X-射線，內(nèi)部或外部伽瑪射線放射性同位素和離子化粒子。在這種聯(lián)合治療中，特沙弗林可以與金屬配合，雖然對于特沙弗林的放射增敏特性而言，金屬并非關(guān)鍵。
本發(fā)明的另一方面，特沙弗林可以用作表皮的化學(xué)增敏劑。表2中指明了5-氟尿嘧啶用于治療局部癌前期皮膚損傷的例子。本發(fā)明人預(yù)見到特沙弗林可用于增強(qiáng)表皮化療藥物的細(xì)胞毒性。
本發(fā)明的另一實(shí)施方案是一種選擇與作為化學(xué)增敏劑的特沙弗林聯(lián)合使用的化療藥物的方法。此方法包括以下幾個步驟ⅰ)在有或沒有特沙弗林存在下檢定候選化療藥物的細(xì)胞毒性，ⅱ)選擇當(dāng)存在特沙弗林時細(xì)胞毒性高于沒有特沙弗林時的細(xì)胞毒性的化療藥物，作為與化學(xué)增敏劑特沙弗林聯(lián)合使用的化療藥物。實(shí)施例1中引用的目前優(yōu)選的體外檢定方法是MTT細(xì)胞毒性檢定法。在實(shí)施例2中描述了體內(nèi)檢定的例子。
遵照一貫的專利法慣例，本申請及權(quán)利要求書使用的詞“一種”意味著“一個或多個”。
下列圖表組成本發(fā)明書的一部分，它們用于進(jìn)一步描述本發(fā)明的某些方面。結(jié)合下列給出的詳細(xì)描述的實(shí)施方案和一幅或多幅圖，可以更好地理解本發(fā)明。


圖1提供了數(shù)據(jù)的標(biāo)準(zhǔn)差分析結(jié)果。數(shù)據(jù)來源于僅注射阿霉毒(亞得里亞霉素)(O)，或者先注射阿霉素隨后于第5分鐘和5小時(■)注射特沙弗林到皮下移植了EMT6腫瘤的Balb/c鼠的結(jié)果。誤差標(biāo)記代表標(biāo)準(zhǔn)差，n=14。
圖2展示相對于對照組三種不同濃度的特沙弗林(\\\,50μM；□,100μM；///,150μM)和一種化療藥物對于MES-SA細(xì)胞的IC50值差異。與特沙弗林一起受試的藥物為紫杉醇，依托泊苷，4-羥環(huán)磷酰胺，順鉑和博萊霉素。
圖3展示了移植了B-16黑素瘤的C57黑鼠在不經(jīng)治療(●，平均存活天數(shù)21天)，僅用阿霉素治療(▲，平均存活天數(shù)29天)或用阿霉素治療后再用特沙弗林治療(Δ，平均存活天數(shù)40天)的存活狀況。
本發(fā)明是發(fā)現(xiàn)特沙弗林是化學(xué)增敏劑的結(jié)果。使用特沙弗林作為化學(xué)增敏劑是指當(dāng)化療藥物與特沙弗林聯(lián)合使用時對部分化療藥物的細(xì)胞毒性的增強(qiáng)作用。
化療藥物可以是下列藥物中的一種一種烷化劑如氮芥、乙撐亞胺或甲基密胺、磺酸烷基酯、亞硝基脲或三氮烯；一種抗代謝藥物如葉酸類似物、嘧啶類似物或嘌呤類似物；一種天然產(chǎn)物如長期花堿、表鬼臼毒素?？股?、酶、紫杉類化合物或生物反應(yīng)調(diào)節(jié)劑；其它化療藥物，如鉑配位復(fù)合物、蒽二酮、蒽環(huán)類抗生素、取代脲、甲基肼衍生物或是腎上腺皮質(zhì)抑制劑；或者是激素或拮抗劑，如腎上腺皮質(zhì)固醇、孕酮、雌激素、抗雌激素、雄激素、抗雄激素或是促性腺激素釋放激素的類似物。表2中指出了烷化劑、抗代謝物、天然產(chǎn)物、其它藥物、激素和拮抗劑以及相應(yīng)的癌癥的類型的例子。優(yōu)選的化療藥物是氮芥、表鬼臼毒素、抗生素、鉑配位復(fù)合物。更好的化療藥物是博萊霉素、阿霉素、紫杉醇、依托泊苷、4-羥環(huán)磷酰胺或順鉑。目前優(yōu)選的化療藥物為阿霉素或博萊霉素。
特沙弗林化合物其制備及其使用方法見美國專利4,935,498、5,162,509、5,252,720、5,272,142、5,256,399、5,292,414、5,432,171、5,439,570、5,475,104、5,451,576、5,457,183、5,369,101、5,569,759、5,559,207和5,587,463；待批的專利申請USSN08/196,964、08/433,573和08/484,551以及PCT公開文本W(wǎng)O90/10633、WO93/14093、WO94/29316和WO96/38461中的描述。此處每一專利、專利申請和公開文本都引用作為本發(fā)明的參考。
由于特沙弗林自身具有的生物定位特性，使特沙弗林作為化學(xué)增敏劑使用時有著十分重要的附加優(yōu)越性?！白陨淼纳锒ㄎ惶匦浴笔侵赶鄬τ谥車M織而言對特定組織有更高的選擇性親和力。如在美國專利5,252,720中描述，特沙弗林定位在富含脂肪的區(qū)域，如肝、腎、腫瘤和粉瘤。這種生物定位性使得在上述區(qū)域與普通組織相比有更強(qiáng)的細(xì)胞毒性。因而使獲得預(yù)期作用的化療藥物的用量在有特沙弗林時減少。由于化療藥物的減少，患者所受到的總毒性也相應(yīng)減少，而在如腫瘤等富含脂肪的地方的細(xì)胞毒性反而增強(qiáng)了。
不僅如此，特沙弗林可以與位點(diǎn)導(dǎo)向性分子偶聯(lián)形成一個在體內(nèi)定向傳輸?shù)呐悸?lián)物?！拔稽c(diǎn)導(dǎo)向”是指對目標(biāo)位點(diǎn)有特異性?！澳繕?biāo)位點(diǎn)特異性”是指在生理性的離子強(qiáng)度、溫度、pH值等條件下，目標(biāo)位點(diǎn)與特沙弗林-位點(diǎn)導(dǎo)向偶聯(lián)物一接觸，就會引起特異性結(jié)合。這種反應(yīng)是通過特異的靜電力、疏水作用力、熵或者是通過偶聯(lián)物上特定基團(tuán)與目標(biāo)上特異的基團(tuán)之間的其他作用，在有利于促進(jìn)反應(yīng)的條件下形成穩(wěn)定的復(fù)合物。本發(fā)明中考慮的樣本位點(diǎn)導(dǎo)向分子包括但不局限于寡核苷酸；聚酰胺(包括對生物受體有親和力的肽和諸如抗體的蛋白質(zhì))；類固醇或類固醇衍生物，激素如雌二醇或組胺；激素類似物如嗎啡以及其他大環(huán)類化合物如Sapphyrins和Rubyrins。
特沙弗林作為化學(xué)增敏劑的作用機(jī)理尚不清楚。不拘泥于理論而言，特沙弗林抑制了化療藥物所造成細(xì)胞損傷的修復(fù)，特沙弗林損害了細(xì)胞的能量儲存，或是增加了自由基的壽命。由于化學(xué)增敏劑的作用與P-糖蛋白無關(guān)(參見實(shí)施例9)，因此存在一個不依賴于P-糖蛋白的機(jī)理?！安灰蕾囉赑-糖蛋白的化學(xué)增敏劑”是指作為化學(xué)增敏劑的特沙弗林的作用獨(dú)立于使癌細(xì)胞產(chǎn)生抗性的MDR1機(jī)制。特沙弗林作為化學(xué)增敏劑對表達(dá)MDR基因和不表達(dá)MDR基因的細(xì)胞系均有作用，這一特點(diǎn)使特沙弗林區(qū)別于現(xiàn)有的僅克服MDR抗性機(jī)制的化學(xué)增敏劑。
特沙弗林作為化學(xué)增敏劑可在化療藥物服用前服用，也可與化療藥物同時或服用化療藥物后再服用。目前優(yōu)選服用化療藥物后再服用特沙弗林。特沙弗林可一次服用，也可以在一定時間間隔內(nèi)分兩次或多次服用。特沙弗林可在服用化療藥物后約1分鐘到約12小時內(nèi)服用，優(yōu)選范圍從約5分鐘到約5小時。當(dāng)以兩劑或多劑服用特沙弗林時，特沙弗林的服用間隔時間為約1分鐘到約12小時，優(yōu)選約5分鐘到約5小時，最優(yōu)為約4到5小時。服用方法可以重復(fù)例如1到3次。一個成功的體內(nèi)服用的時間表為服用化療藥物約5分鐘和約5小時后，服用特沙弗林，每周一次持續(xù)三周。特沙弗林的使用劑量為40μmol/公斤體重。用藥可在靜脈、腹膜內(nèi)、非腸道途徑、肌肉內(nèi)或者皮下注射、口服或局部用藥。優(yōu)選口服或靜脈注射，以靜脈注射為更優(yōu)選。
本發(fā)明方法中使用的特沙弗林用藥量為藥物有效劑量?！八幬镉行А笔侵缚梢栽黾踊熕幬锒拘缘膭┝?。具體劑量要根據(jù)所選擇的具體類型的特沙弗林、使用次數(shù)以及服用的化療藥物來決定。這樣的劑量按本領(lǐng)域的已知方法或本文中描述的方法無需很多實(shí)驗(yàn)就可以確定。
本領(lǐng)域技術(shù)人員按照本公開可以認(rèn)識到上述治療方案的靈活性，可以不需過多實(shí)驗(yàn)就能在具體條件下試驗(yàn)特沙弗林使用的最佳時間和最適劑量。
作為化學(xué)增敏劑的特沙弗林或特沙弗林金屬配合物可以有如下結(jié)構(gòu)Ⅰ或結(jié)構(gòu)Ⅱ
Ⅰ
ⅡM可以是H，一種二價金屬陽離子或是三價金屬陽離子。優(yōu)選為二價或三價的金屬陽離子。優(yōu)選的二價金屬陽離子有Ca(Ⅱ),Mn(Ⅱ),Co(Ⅱ),Ni(Ⅱ),Zn(Ⅱ),Cd(Ⅱ),Hg(Ⅱ),Fe(Ⅱ),Sm(Ⅱ)或是UO2(Ⅱ)。優(yōu)選的三價金屬陽離子為Mn(Ⅲ),Co(Ⅲ),Ni(Ⅲ),Fe(Ⅲ),Ho(Ⅲ),Ce(Ⅲ),Y(Ⅲ),In(Ⅲ),Pr(Ⅲ),Nd(Ⅲ),Sm(Ⅲ),Eu(Ⅲ),Gd(UⅢ),Tb(Ⅲ),Dy(Ⅲ),Er(Ⅲ),Tm(Ⅲ),Yb(Ⅲ),Lu(Ⅲ),La(Ⅲ)或是U(Ⅲ)。
R1-R4,R7和R8相互獨(dú)立地為氫，鹵原子，羥基，烷基，鏈烯基，炔基、芳基、鹵代烷基，硝基，甲?；；?，羥烷基，烷氧基，羥烷氧基，羥鏈烯基，羥炔基，糖類，羧基，羧烷基，氨基甲?；奔柞Ｍ榛?，氨基，氨烷基，位點(diǎn)導(dǎo)向分子或是與位點(diǎn)導(dǎo)向分子偶聯(lián)的配體。
R6和R9獨(dú)立地選自R1-R4,R7和R8，其前提條件是鹵原子不是碘，而且鹵代烷基不是碘代烷基。
R5和R10-R12相互獨(dú)立地為氫，烷基，鏈烯基，炔基，芳基，羥烷基，烷氧基，羥烷氧基，羥鏈烯基，羥炔基，羧烷基，氨甲?；?，氨甲酰烷基，氨基，氨烷基，與糖基偶聯(lián)的配體或是與位點(diǎn)導(dǎo)向分子偶聯(lián)的配體，n是小于或等于5的整數(shù)。
R13是烷基，鏈烯基，氧烷基或羥烷基，其含有至多3個碳原子且圍繞第一個結(jié)合碳原子有轉(zhuǎn)動撓性。這種轉(zhuǎn)動撓性使得其余基團(tuán)可定位在特沙弗林分子平面外。例如，優(yōu)選的鏈烯基是CH2-CH=CH2。吡咯氮原子的取代基優(yōu)選甲基。有甲基連于環(huán)氮原子上的特沙弗林在美國專利5,457,183中有敘述，該專利引入此處做參考。
上面描述的結(jié)構(gòu)Ⅰ中，典型的n為小于或等于5的整數(shù)。在含有二價或三價金屬陽離子的堿性大環(huán)類化合物中，n是1或2；然而，本領(lǐng)域技術(shù)人員按照本公開可以認(rèn)識到，n值可隨著取代基R1-R12的電荷數(shù)或隨著共價結(jié)合的位點(diǎn)導(dǎo)向分子的電荷數(shù)而改變。本領(lǐng)域技術(shù)人員可以理解本發(fā)明描述的配合物有一個或多個附加配基使其達(dá)到電中性或者和/或使金屬離子達(dá)到配位飽和。這樣的配基包括氯離子，硝酸根，乙酸根和氫氧根及其他。
本發(fā)明中用作烷基取代基的代表性烷烴包括甲烷、乙烷，直鏈、支鏈或環(huán)狀異構(gòu)的丙烷、丁烷、戊烷、己烷、庚烷、辛烷、壬烷和癸烷。優(yōu)選甲烷、乙烷和丙烷。多至三十，四十或約五十個碳原子的烷基也在本發(fā)明的預(yù)期中。代表性的烷基取代基包括被兩個或者多個本文描述的功能團(tuán)取代的烷基。
用作鏈烯基取代基的代表性例子包括乙烯，直鏈、支鏈或環(huán)狀異構(gòu)的丙烯、丁烯、戊烯、己烯、庚烯、辛烯、壬烯和癸烯，優(yōu)選乙烯和丙烯。多至三十、四十或五十個碳原子和多至五個雙鍵優(yōu)選多至三個雙鍵的鏈烯基也包括在本發(fā)明的預(yù)期中。
用作炔基取代基的代表性炔包括乙炔、直鏈、支鏈及環(huán)狀異構(gòu)的丙炔、丁炔、戊炔、己炔、庚炔、辛炔、壬炔和癸炔，其中優(yōu)選乙炔和丙炔。多至三十或五十個碳原子和多至五個或三個三鍵的炔基也包括在本發(fā)明的預(yù)期中。
芳基可以是帶有苯、萘、菲和蒽等特征性環(huán)狀結(jié)構(gòu)或者類似結(jié)構(gòu)的化合物，可以是6-碳環(huán)的苯，也可以是其它芳香族衍生物的縮合的6-碳環(huán)。如芳基可以是未被取代的苯基或萘基，也可以是由硝基，羧基，磺酸，羥基，烷氧基或鹵原子取代的苯基或萘基。在這些情況中，苯基或萘基的取代基可以在形成大環(huán)的縮合反應(yīng)后通過合成步驟加入。
在鹵取代基中，除去R6和R9不為碘外，本發(fā)明的實(shí)踐中預(yù)計使用氯、溴、氟和碘。R6和R9可以是氯、溴和氟取代基。本發(fā)明中有代表性的鹵代烷包括鹵代甲烷、乙烷、丙烷、丁烷、戊烷、己烷、庚烷、辛烷、壬烷、癸烷。優(yōu)選甲烷、乙烷和丙烷的鹵代物，優(yōu)選氯代物或溴代物。
羥烷基是指醇烷基。優(yōu)選的是帶有1到20，尤其是1到10個羥基的羥烷基。羥烷基意在包括二元醇和聚二醇；烷二醇，優(yōu)選C1-10烷二醇，尤其優(yōu)選C1-3烷二醇；也包括聚乙二醇，聚丙二醇和聚丁二醇及含有亞乙基、亞丙基和亞丁基的組合的聚亞烷基二醇。
氧烷基的代表性例子包括這里描述的帶有醚鍵的烷基?！把跬榛币庠诎ê幸粋€或多個功能團(tuán)的聚醚。取代基中氧烷基的重復(fù)數(shù)可多至200個，優(yōu)選1到20個，更優(yōu)選1到10個，最優(yōu)選1到5個。一個優(yōu)選的氧烷基是O(CH2CH2O)xCH3，其中x等于1到100，優(yōu)選1到10，最優(yōu)選為1到5。
氧羥烷基是指含有醚鍵或酯鍵、含有羥基、取代的羥基、羧基、取代的羧基或其它基團(tuán)的烷基。
巰烷的代表性例子有乙硫醇、直鏈、支鏈或環(huán)狀異構(gòu)的丙烷、丁烷、戊烷、己烷、庚烷、辛烷、壬烷、癸烷的硫醇。優(yōu)選乙硫醇(C2H5SH)和丙硫醇(C3H7SH)。硫酸基取代的烷基包括上面描述過的烷基由一種或多個硫酸基因取代，代表性例子有硫酸二乙酯((C2H5)2SO4)。
磷酸酯的代表性例子有磷酸酯或聚磷酸酯基。磷酸取代的烷基的代表性例子有用一個或多個磷酸基團(tuán)取代的上面描述過的烷基。
羧基代表性例子包括上面描述過的烷基的羧酸和芳香羧酸如苯甲酸。代表性的氨甲酰例子包括伯氨甲酰(CONH2)，仲氨甲酰CONHR′和叔氨甲酰(CONR＇R″)，其中R′和R″是描述過的功能基團(tuán)。
代表性胺基的例子包括上面描述過的烷基的伯、仲和叔胺?！鞍奔柞；笔侵笌в兄倩蚴艴０锋I或類似鍵的烷基。“羧烷基”是指帶有羥基、羧基或酰胺取代的醚鍵或酯鍵，帶有從醚或類似物中去除的叔酰胺鍵的烷基。
“糖基”包括氧化的、還原的或取代的糖；六碳糖如D-葡萄糖、D-甘露糖或D-半乳糖；五碳糖如D-核糖或D-阿拉伯糖；酮糖如D-核酮糖，或D-果酮糖；雙糖如蔗糖、乳糖或麥芽糖；衍生物如乙縮醛、胺和磷酸化的糖；寡糖和各種糖的開鏈形式。氨基衍生化糖的例子有半乳糖胺、葡萄糖胺、唾液酸和D-葡萄糖胺的衍生物如1-氨基-1-脫氧山梨糖醇。本文所用的“位點(diǎn)導(dǎo)向分子”可以是寡核苷酸、抗體、激素、對生物受體有親和力的肽、Sapphyrin分子或是類似的分子。優(yōu)選的位點(diǎn)導(dǎo)向分子是激素，如雌二醇、雌激素、孕酮或是類似的分子。位點(diǎn)導(dǎo)向分子對治療位點(diǎn)有特異性結(jié)合能力。生物受體也分布在治療位點(diǎn)。特沙弗林-寡核苷酸偶聯(lián)物能夠?qū)⒒熁钚远ㄎ辉谔囟ㄆ谕奈稽c(diǎn)，其中的寡核苷酸可以是癌基因mRNA的互補(bǔ)物。美國專利5,194,482；5,110,802和5,216,144中討論了反義技術(shù)，此處引用這些文獻(xiàn)作為參考。
類固醇代表性例子包括有下列五種類固醇激素孕酮(如黃體酮)、糖皮質(zhì)激素(如皮質(zhì)醇)、鹽皮質(zhì)激素(如醛固酮)、雄激素(如睪丸酮)和雌激素(如雌二醇)。
肽或多肽的氨基酸代表性例子包括帶有簡單的脂肪族側(cè)鏈的氨基酸(如甘氨酸、丙氨酸、纈氨酸、亮氨酸和異亮氨酸)，帶有芳香族側(cè)鏈的氨基酸(如苯丙氨酸、色氨酸、酪氨酸和組氨酸)，帶有含氧和硫側(cè)鏈的氨基酸(如絲氨酸、蘇氨酸、甲硫氨酸和半胱氨酸)，帶有羧酸或酰胺基的側(cè)鏈的氨基酸(如天冬氨酸、谷氨酸、天冬酰胺和谷氨酰胺)，帶有強(qiáng)堿性基團(tuán)側(cè)鏈的氨基酸(如賴氨酸和精氨酸)，和脯氨酸。肽的代表性例子有由上述氨基酸衍生而來的自然存在的或人工合成的二、三、四亞肽或更長的肽。(如，內(nèi)啡肽、腦啡肽、表皮生長因子、聚-L-賴氨酸或是激素)。多肽的代表性例子有由上述氨基酸和肽衍生而來的自然產(chǎn)生的和人工合成的多肽(如胰島素、核糖核酸酶和內(nèi)啡肽)。
“對生物受體有親和力的肽”一詞是指在適宜的離子強(qiáng)度、溫度、pH等條件下肽與生物受體一旦接觸，就會發(fā)生特異性結(jié)合。這種反應(yīng)可以在特異的靜電力、疏水作用力、熵的作用下完成，也可通過肽上特定的氨基或糖殘基與受體上特定的氨基或糖殘基在促進(jìn)反應(yīng)的條件下形成穩(wěn)定的復(fù)合物。此反應(yīng)可能改變參與反應(yīng)的肽或受體的空間構(gòu)象、功能或活性。對生物受體有親和作用的肽可以包括內(nèi)啡肽、腦啡肽、生長因子如表皮生長因子、聚-L-賴氨酸、激素、蛋白質(zhì)中的一個肽段等。激素可以是例如雌二醇。
配體可以描述為一個接頭，即通過設(shè)計的活性基團(tuán)反應(yīng)形成的共價產(chǎn)物，它可以共價結(jié)合另一個與特沙弗林大環(huán)分隔的分子。接頭或配體的例子有酰胺，氨，二硫鍵，硫醚，醚，酯或磷酸酯共價鍵。
在最優(yōu)選的實(shí)施方案中，偶聯(lián)物和附加基團(tuán)通過碳-碳，碳-氮，碳-硫或碳-氧鍵共價結(jié)合到特沙弗林上，更優(yōu)選的是碳氧鍵和碳氮鍵。
一般而言，此處描述的應(yīng)用中優(yōu)選保留親脂性的水溶性特沙弗林?！八苄浴笔侵杆械娜芙舛却笥诘扔诩s1mM?！氨Ａ粲杏H脂性”是指對富含脂肪的組織或材料的親和力大于周圍的非富含脂肪的組織。“富含脂肪”是指含有較多的甘油三酯，膽固醇和脂肪酸等。
優(yōu)選的功能基方案是當(dāng)R6和R9不是氫時，R5和R10是氫或甲基；當(dāng)R5和R10不是氫，則R6和R9是氫，羥基或是非碘的鹵原子。其它優(yōu)選的功能基方案是當(dāng)R6和R9是氫，則R5,R10,R11和R12相互獨(dú)立地為氫，苯，低級烷基或低級羥烷基。優(yōu)選的低級烷基是甲基或乙基，優(yōu)選甲基。優(yōu)選的低級羥烷基是1到6個碳原子和1到4個羥基的羥烷基，優(yōu)選3-羥基丙基。苯基可以是被取代的，也可以是未被取代的。
在其他目前優(yōu)選的特沙弗林化合物Ⅰ或者Ⅱ中，R1-R12基團(tuán)見表A和表B中的特沙弗林A1-A88,M則是上面描述過的基團(tuán)。表中“SDM”是指“位點(diǎn)導(dǎo)向分子”。較為優(yōu)選的化合物是GdT2BET(化合物Ⅲ，其中M=Gd(Ⅲ))和LuT2BET(化合物Ⅲ，其中M=Lu(Ⅲ))。本發(fā)明并不局限于目前優(yōu)選采用的特沙弗林。
Ⅲ
表A本發(fā)明中特弗沙林大環(huán)A1-A88上的代表性取代基R1-R6的取代基見表A,R7-R12的取代基見有B.
<p>表A-續(xù)前
表A-續(xù)前
表A-續(xù)前
<p>表A-續(xù)前
<p>表A-續(xù)前
表B本發(fā)明中特弗沙林大環(huán)A1-A88上的代表性取代基R1-R6的取代基見表A,R7-R12的取代基見有B。
表B-續(xù)前
<p>表B-續(xù)前
<p>表B-續(xù)前
<p>表B-續(xù)前
表B-續(xù)前
表B-續(xù)前
重要的是，通過特定取代基合成的特沙弗林可以影響特沙弗林的脂-水分配系數(shù)，從而更適于與化療藥物聯(lián)合使用。本文引用關(guān)于特沙弗林、特沙弗林制備方法及其應(yīng)用的美國專利、PCT公開文本和未決申請專利申請作為參考。Sapphyrin化合物在美國專利5,041,078；5,159,065；5,120,411；5,302,714和5,457,195中已經(jīng)公開，此處引用這些文獻(xiàn)作為參考。
有機(jī)合成技術(shù)人員按照本公開以及作為參考材料的專利、專利申請和公開文本可以擴(kuò)展或改進(jìn)上述參考的基本合成路線，從而生產(chǎn)出具有不同取代基的特沙弗林。例如，聚醚連接的多羥基基團(tuán)，通過乙縮醛糖苷鍵連接的糖類取代基、寡糖或多糖可用類似方法連接到特沙弗林上。其中羧基通過芳香醚或官能化烷基取代基連接到特沙弗林核的雙羧酸特沙弗林可以被轉(zhuǎn)化成不同的酯化產(chǎn)物，其中酯鍵用以連接更多的帶有羥基的取代基。多羥基化特沙弗林可以通過使用仲酰胺鍵合成。糖基部分可通過酰胺鍵加入。含有的支鏈多羥基亞基的多羥基特沙弗林衍生物可以通過芳香醚或酯鍵加入到特沙弗林核上。
用亞硫酰氯或?qū)ο趸椒右宜狨ヌ幚眙然奶厣掣チ挚梢援a(chǎn)生活化的酰基，適于連接到單克隆抗體或其它感興趣的生物分子上?？梢杂脴?biāo)準(zhǔn)的就地偶聯(lián)方法(如，1,1’-羰基二咪唑)進(jìn)行偶聯(lián)。
大環(huán)B部分(苯環(huán))的R6和R9取代基通過在分子3,6位上與鄰苯二胺結(jié)合聯(lián)接到大環(huán)上。大環(huán)的T部分(三吡咯烷)上R5和R10取代基通過在與取代的鄰苯二胺縮合之前的合成步驟P三吡咯烷5位上羧基的適當(dāng)官能化而引入。
通過縮合結(jié)構(gòu)A的三吡咯烷醛或酮和結(jié)構(gòu)B的取代的鄰苯二胺方便地制得非芳香特沙弗林。
取代基R1-R13如文中所述。在一優(yōu)選的合成方法中，三乙胺或N,N,N′,N＇-四甲基-1,8,-二氨基萘(質(zhì)子受體)作為布朗斯臺德堿，氧化劑是空氣飽和有機(jī)溶劑、氧、氧化鉑、鄰氯醌或是2,3-二氯-5,6-二氰基-1,4-苯醌?；亓鞑襟E中攪拌或加熱的情況包括攪拌或加熱回流混合物24小時，有機(jī)可溶劑包括甲醇、或是甲醇和氯仿、或是甲醇和苯、或是甲醇和二甲基甲酰胺。
作為化學(xué)增敏劑，特沙弗林以藥物制劑的形式提供。特沙弗林藥劑可單獨(dú)服用，也可以和藥學(xué)可接受的載體一道以單一或多個劑量服用。適宜的藥物載體包括惰性固體稀釋劑或填充劑，無菌水溶液和不同的有機(jī)溶劑。由本發(fā)明的特沙弗林與藥學(xué)可接受的載體聯(lián)合構(gòu)成的藥物組合物可以方便地以不同劑型使用，如注射液。
采用腸道外給藥方式時，可以使用特沙弗林在芝麻油或花生油、含水丙二醇或無菌水溶液中的溶液。這樣的水溶液如有需要應(yīng)進(jìn)行適當(dāng)?shù)木彌_化，液體稀釋劑應(yīng)先用足量的鹽或葡萄糖致等滲。這些特定的水溶液尤其適于靜脈內(nèi)、肌肉內(nèi)、皮下或腹膜內(nèi)注射。與此相關(guān)，按照本公開本領(lǐng)域技術(shù)人員了解可使用的無菌水介質(zhì)。
適于注射用的劑型包括無菌水溶液或分散劑，或是用于現(xiàn)配現(xiàn)用的無菌注射液或分散劑的無菌粉末。無論何種劑型都必須是無菌的，必須是注射器易于使用的液體。該劑型需在制造、貯藏條件下穩(wěn)定，且保證不受到諸如細(xì)菌、真菌等微生物的污染。載體可以是包括如水、乙醇、多羥基化合物(如甘油、丙二醇、液態(tài)聚乙二醇等)及其適宜的混合物和植物油等的溶劑或分散劑。通過適當(dāng)?shù)陌氯缏蚜字瑏砭S持適當(dāng)?shù)牧鲃有?，對分散劑也可通過維持所需的顆粒大小和使用表面活性劑來維持適當(dāng)?shù)牧鲃有浴？墒褂每辜?xì)菌和抗真菌的藥物如對羥基苯甲酸酯類、氯代丁醇、苯酚、山梨酸或乙基汞硫代水楊酸鈉等來防止微生物的作用。在許多情況下，優(yōu)選包括如糖(甘露糖醇或葡萄糖)或氯化鈉的等滲劑。更優(yōu)選的等滲劑是2％～8％的甘露糖醇溶液，最優(yōu)選的是5％的甘露糖醇。通過在組合物中使用延緩吸收劑如單硬酯酸鋁和明膠來獲得延緩吸收型注射組合物。
無菌注射液是將活性化合物與其它上面列舉的成分以適當(dāng)?shù)牧咳苡谶m當(dāng)?shù)娜軇┲性俳?jīng)過過濾除菌制得的。一般地，分散劑是通過將各種無菌活性成分與帶有基本分散介質(zhì)和上面列舉的必需的其它成分一起混合而制得的。對于用于制備無菌注射液的無菌粉末，優(yōu)選的方法是通過真空干燥或冷凍干燥的方法從預(yù)先過濾除菌的溶液產(chǎn)生。產(chǎn)生的無菌粉末中帶有活性成分和其它附加的所需成分。
此處所說的“藥學(xué)可接受的載體”包括任何和全部的溶劑、分散介質(zhì)、包衣、抗細(xì)菌和抗真菌劑、等滲和延緩吸附劑等。這樣的介質(zhì)和試劑用于藥物活性物質(zhì)已為本領(lǐng)域周知。除非某些常規(guī)介質(zhì)或試劑與活性成分不相容，藥物組合物中使用這樣的介質(zhì)或試劑是在預(yù)期之中。補(bǔ)充的活性成分也可以包括在組合物中。
本發(fā)明設(shè)想特沙弗林可用作不同作用機(jī)制的不同化療藥物的化學(xué)增敏劑以增加細(xì)胞毒性。表2提供了目前已有的按類別分的化療藥物以及相應(yīng)的病癥。
表2用于治療腫瘤疾病的化療藥物1)表2(續(xù))
表2(續(xù))
表2(續(xù))
1)改編自Calabresi,P.BA.Chabner,“腫瘤疾病的化學(xué)治療”第Ⅻ章，1202-1263頁，后者出自《古得曼與吉爾曼治療的藥學(xué)基礎(chǔ)》(Goodman and Gilman’s The Pharmacological Basis of Therapeutics)第8版，1990年P(guān)ergamin出版公司；Barrows,L.R，“抗腫瘤和免疫活性藥物”，第75章，1236-1262頁，出自Remington《藥學(xué)的科學(xué)與實(shí)踐》(The Science and Practice of Pharmacy)，Mack出版公司，Easton，賓西法尼亞州，1995；此處引用這些參考文獻(xiàn)作為參考。2)腫瘤疾病是指癌，除非別有說明。
雖然一定程度地具體描述本發(fā)明，顯然按照前述公開，對本領(lǐng)域技術(shù)人員而言可以方便地加以改變、修飾和變化。因此，所有這樣的改變、修飾和變化，凡是落在本發(fā)明的精神和領(lǐng)域范圍內(nèi)的均應(yīng)認(rèn)為包括在本發(fā)明的權(quán)利要求范圍中。
本發(fā)明提供下面的實(shí)施例用以展示本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方案。本領(lǐng)域的技術(shù)人員應(yīng)認(rèn)識到下列實(shí)施例中公開的技術(shù)代表發(fā)明人發(fā)現(xiàn)在本發(fā)明的實(shí)施中效果良好的技術(shù)，因而應(yīng)認(rèn)為構(gòu)成實(shí)施本發(fā)明的優(yōu)選方案。然而，按照本公開，本領(lǐng)域技術(shù)人員知曉在所公開的特定實(shí)施方案中可以有許多改變，而仍可獲得相近或相似的結(jié)果，因而沒有超出本發(fā)明的精神和范圍之外。實(shí)施例1特沙弗林聯(lián)合博萊霉素的細(xì)胞毒性本實(shí)施例提供了釓特沙弗林作為化學(xué)增敏劑聯(lián)合博萊霉素的細(xì)胞毒性的研究。博萊霉素是一種基本的糖苷類抗生素，可以引起DNA斷裂，抑制胸腺嘧啶結(jié)合到DNA上(Barrows,L.R.,Remington藥學(xué)科學(xué)和實(shí)踐，Mack出版公司，Easton,賓州，1234-1244頁，1995)。釓特沙弗林(GdT2BET)是化合物Ⅱ，其中M為Gd(Ⅲ)。
使用改進(jìn)的MTT法(Mosmann,1983)進(jìn)行體外研究。培養(yǎng)在McCoy5A完全培養(yǎng)基(0.2毫升，其中含有3,000-5,000個細(xì)胞)中的MES-SA細(xì)胞(一種雜交的米勒氏人子宮肉瘤細(xì)胞系，斯坦福醫(yī)學(xué)院，斯坦福，加州)加到96孔板中的每一孔。細(xì)胞貼壁過夜。GdT2BET(100ml,2mM 5％甘露醇溶液)以50μM,100μM或150μM的濃度加入到每孔中。博萊霉素溶液(100μl,100μM)加入到孔板第一行的每孔中，使藥物以1∶3比例稀釋。每孔中的培養(yǎng)基充分混勻后取100ul移到對應(yīng)的下一行的孔中得到相應(yīng)的稀釋液。重復(fù)上述稀釋步驟，保留最后一行的孔作為對照，丟棄最后100μl含有藥物和特沙弗林的培養(yǎng)基。系列稀釋轉(zhuǎn)移步驟得到了原藥博萊霉素濃度1∶3,1∶9,1∶27,1∶81和1∶243比例的梯度稀釋液。
細(xì)胞在含有藥物和GdT2BET的培養(yǎng)基中生長48小時。每孔中加入溶于磷酸鹽緩沖液(PBS)中的MTT(20μl,5mg/ml)。(MTT，學(xué)名為3-(4,5-二甲基-噻唑-2-基-2,5-二苯基溴化四唑，Sigma,St.Louis,Mo))?？装逶?7℃且CO2含量為5％的組織培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。培養(yǎng)2-3小時后，輕輕倒掉培養(yǎng)基，加入0.1～0.15ml用0.1N鹽酸酸化的異丙醇(JT Baker化學(xué)有限公司，Phillipsburg，新澤西)以溶解細(xì)胞形成的甲替結(jié)晶。用多孔分光光度計(MR-580型，DynatechLaboratories,Alexandria,VA)讀取570nm波長和參考波長630nm的孔板的吸收值。每一濃度的藥品重復(fù)測定四次。存活百分率根據(jù)經(jīng)過藥物處理的細(xì)胞的光密度值(OD)與對照細(xì)胞的比值計算。
不同濃度的博萊霉素在50μM,100μM和150μM GdT2BT存在下對MES-SA細(xì)胞的細(xì)胞毒性數(shù)據(jù)說明，存在特沙弗林時，細(xì)胞的存活百分率明顯要低。在受測試的博萊霉素各種濃度下及特沙弗林受測試的三個濃度均顯示有細(xì)胞毒性增強(qiáng)作用。實(shí)施例2特沙弗林聯(lián)合阿霉素的細(xì)胞毒性本實(shí)施例提供了以GdT2BT特沙弗林作為化學(xué)增敏劑聯(lián)合阿霉素的細(xì)胞毒性的研究。阿霉素是一種蒽環(huán)類抗生素，它可以結(jié)合到DNA上，抑制核酸合成，抑制拓?fù)洚悩?gòu)酶Ⅱ作用以及產(chǎn)生氧自由基；它具有最寬的抗腫瘤譜并且是應(yīng)用最廣的抗腫瘤藥物(Barrows,L.R.,Remington藥學(xué)科學(xué)和實(shí)踐，Mack出版公司，Easton，賓州，第1249頁，1995)體外研究的方法按實(shí)施例1中所描述的方法用阿霉素(100μl,1000nM)和GdT2BET(2mM溶于5％甘露醇；50μM,100μM和150μM)來進(jìn)行研究。這些研究表明特沙弗林有保護(hù)性作用。下面提供的阿霉素體內(nèi)實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，上面的體外實(shí)驗(yàn)結(jié)果由于是同時服用阿霉素和特沙弗林得到的，可能是異常結(jié)果。
為檢證這一假設(shè)，按如下方法又進(jìn)行一次體外實(shí)驗(yàn)。按照實(shí)施例1中的方法，但是只是先將阿霉素自身加入到96孔板中第一行的每一孔中，然而依次連續(xù)稀釋。細(xì)胞在有藥情況下培養(yǎng)24小時，然后用培養(yǎng)基洗滌孔板，吸去培養(yǎng)基。將GdT2BET(150μM)加入到新鮮培養(yǎng)基中，再將該培養(yǎng)基加到每個孔中。特沙弗林和細(xì)胞一起培養(yǎng)24小時，然后加入MTT，剩余檢測方法如實(shí)施例1中描述。第二次體外實(shí)驗(yàn)的結(jié)果表明，在有特沙弗林時阿霉素的細(xì)胞毒性增強(qiáng)了。
用皮下移植了EMT6瘤的Balb/c小鼠進(jìn)行體內(nèi)實(shí)驗(yàn)。EMT6瘤是一種鼠乳癌，阿霉素的體內(nèi)抗腫瘤活性已經(jīng)在MTV乳癌中由Grandi等人(1988)和Di Marco等人(1972)描述過。在本研究中，阿霉素以2mg/ml的濃度溶于乳酸鹽林格溶液中。GdT2BET以2mM的濃度溶解在5％的甘露醇中。EMT6瘤(獲自J.Martin Brown博士，斯坦福醫(yī)學(xué)院，斯坦福，加州)移植到Balb/c鼠的右側(cè)脅腹皮下(Simonsen Laboratories,Gilroy,加州)；14只小鼠為一組。研究方案見表3。實(shí)驗(yàn)方案每周重復(fù)一次，共持續(xù)三周；每周用游標(biāo)卡尺測量腫瘤2～3次，注射藥物前稱小鼠體重。
在所有實(shí)驗(yàn)組中，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，注射阿霉素后注射特沙弗林可以明顯增加細(xì)胞毒性。在ADR+2GdT2BET組中兩例治愈。“治愈”一詞是指研究結(jié)束后無疾病證據(jù)，即動物看上去沒有腫瘤。表3用特沙弗林增加阿霉素(Adriamycin,ADR)作用效果的體內(nèi)化學(xué)增敏研究方案
利用上述ADR對照，ADR+2GdT2BET方案以及一個包括GdT2BET(40μmol/kg)注射后5小時，再注射ADR(7.5mg/kg)，5分鐘后再次注射GdT2BET(40μmol/kg)的三步驟注射方案進(jìn)行進(jìn)一步研究。實(shí)驗(yàn)方案每周重復(fù)一次共三周，每周用游標(biāo)卡尺測量腫瘤直徑2-3次。結(jié)果表明，有釓特沙弗林時，細(xì)胞毒性得到增強(qiáng)，其中ADR+2GdT2BET組觀察到兩例治愈。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)還顯示使用特沙弗林/ADR/特沙弗林的三步治療法細(xì)胞毒性可能過大，因?yàn)樵摻M六只動物中有三只死亡，其中首次注射特沙弗林死亡兩只，另一只在第二次注射特沙弗林后死亡。
對僅注射阿霉素(ADR)組和注射阿霉素5分鐘和5小時后再注射特沙弗林(ADR+2GdT2BET)組的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)差分析，結(jié)果見圖1。在ADR+2GdT2BET組中觀察到四例治愈，九天后的P值小于0.05。
進(jìn)一步體內(nèi)研究用脅腹側(cè)移植了B-16F10黑素瘤的45只C57BL/6N小鼠進(jìn)行。實(shí)驗(yàn)動物分成三組，每組15只，各組分別按如下方案處理ⅰ)對照組(不處理)；ⅱ)僅使用阿霉素處理，7.5mg/kg，ⅲ)用阿霉素(7.5mg/kg)后5小時再用20μmol GdT2BET/公斤體重處理。治療組在第0,7,14日接受治療。對照組平均存活時間為21天，僅使用阿霉素組平均存活時間為29天，而使用阿霉素和特沙弗林的組平均存活時間為40天(見圖3)。與僅使用阿霉素治療的動物組相比，使用阿霉素+GdT2BET組的存活曲線的對數(shù)秩分析表明存活率有明顯提高(P=0.0047)。單獨(dú)使用GdT2BET的動物組其存活率與對照組相同。
本實(shí)施例的數(shù)據(jù)清楚地表明特沙弗林的化學(xué)增敏效果。在用適當(dāng)?shù)闹委煼桨嘎?lián)合阿霉素使用特沙弗林時，可以增加細(xì)胞毒性。實(shí)施例3特沙弗林聯(lián)合紫杉醇的細(xì)胞毒性本實(shí)施例提供了用釓特沙弗林作為化學(xué)增敏劑聯(lián)合紫杉醇的研究結(jié)果。紫杉醇(Paclitaxel，這是Bristol-Myers Oncology對紫杉醇的商品名)通過穩(wěn)定絲裂紡錘體和不當(dāng)?shù)卮龠M(jìn)其形成來抑制細(xì)胞有絲分裂(Barrows,L.R,Remington藥學(xué)科學(xué)和實(shí)踐，Mack出版公司，Easton，賓州，第1249頁，1995)。
體外研究按實(shí)施例1中描述方法用紫杉醇(100μl,1000nM)和GdT2BET(50μM,100μM或150μM)加入到每個稀釋度的藥物中來進(jìn)行。研究結(jié)果表明，特沙弗林對細(xì)胞毒性，尤其是在紫杉醇濃度較低時，有增強(qiáng)作用。
用人纖維肉瘤細(xì)胞HT1080進(jìn)行體外研究表明，無論LuT2BET還是GdT2BET在濃度為30μM時，對紫杉醇的細(xì)胞毒性沒有影響。實(shí)施例4特沙弗林聯(lián)合4-OH環(huán)磷酰胺的細(xì)胞毒性本實(shí)施例提供了使用釓特沙弗林作為化學(xué)增敏劑聯(lián)合4-OH環(huán)磷酰胺的細(xì)胞毒性的研究結(jié)果。環(huán)磷酰胺是一種烷化劑(Barrows,L.R,Remington藥學(xué)科學(xué)和實(shí)踐，Mack出版公司，Easton，賓州，第1238,1246頁，1995)。
體外研究按實(shí)施例1中描述的方法用4-OH環(huán)磷酰胺(100μl,100μM)和GdT2BET(50μM,100μM和150μM)加入到每個稀釋度的藥物中來進(jìn)行。在4-OH環(huán)磷酰胺濃度較低時的結(jié)果表明特沙弗林有保護(hù)作用。這一結(jié)果也許是異常的，類似于實(shí)施例2中同時使用阿霉素和特沙弗林得到的異常結(jié)果。
體外研究用皮下移植了EMT6腫瘤的Balb/c小鼠按實(shí)施例2描述的方法進(jìn)行。4-羥環(huán)磷酰胺以5mg/ml的濃度溶于0.9％NaCl中。GdT2BET以2mM濃度溶于5％的甘露醇中。EMT6腫瘤移植到Balb/c小鼠的右側(cè)脅腹部皮下，9只鼠為一組。第1組服用環(huán)磷酰胺(CY)40mg/kg；第2組服用環(huán)磷酰胺(CY)40mg/kg 5分鐘后，再服用GdT2BET(40μmol/kg)；第三組服用環(huán)磷酰胺(CY)40mg/kg 5分鐘和5小時后，分別服用GdT2BET40μmol/kg。這一處理方案每周重復(fù)一次共三周。
研究結(jié)果表明，用特沙弗林和環(huán)磷酰胺按此治療方案沒有什么化學(xué)增敏作用。實(shí)施例2中的結(jié)果顯示，特沙弗林聯(lián)合阿霉素的化學(xué)增敏效果有治療方案依賴性，進(jìn)一步研究會闡明環(huán)磷酰胺的細(xì)胞毒性能否在其它使用特沙弗林的治療方案中得到增強(qiáng)。實(shí)施例5特沙弗林聯(lián)合依托泊苷的細(xì)胞毒性本實(shí)施例提供了釓特沙弗林作為化學(xué)增敏劑聯(lián)合依托泊苷的細(xì)胞毒性研究結(jié)果。依托泊苷主要通過拓?fù)洚悩?gòu)酶Ⅱ的切割破壞DNA，使細(xì)胞周期基本停留在G2期(Barrows,L.R.,Remington藥學(xué)科學(xué)和實(shí)踐，Mack出版公司，Easton，賓州，第1249頁，1995)。
體外研究按實(shí)施例中描述的方法用依托泊苷(100μl,100μM)和GdT2BET(50μM,100μM或150μM)加入到每個稀釋度的藥物中來進(jìn)行。這些研究結(jié)果表明，特沙弗林對細(xì)胞毒性，尤其是在低濃度的依托泊苷時有增強(qiáng)作用。
進(jìn)一步的體外研究中，30μM GdT2BET對依托泊苷治療人纖維肉瘤細(xì)胞HT1080有化學(xué)增敏作用，而30μM的LuT2BET則沒有。實(shí)施例6特沙弗林聯(lián)合順鉑的細(xì)胞毒性本實(shí)施例提供了釓特沙弗林作為化學(xué)增敏劑聯(lián)合順鉑的細(xì)胞毒性的研究結(jié)果。順鉑使DNA交聯(lián)，從而起類似烷化抗腫瘤藥物的作用(Barrows,L.R.,Remington藥學(xué)科學(xué)和實(shí)踐，Mack出版公司，Easton，賓州，第1249頁，1995)體外研究按實(shí)施例1描述的方法用順鉑(100μl,100μM)和GdT2BET(50μM,100μM和150μM)加入到每一稀釋度的藥物中進(jìn)行。這些研究結(jié)果表明特沙弗林對細(xì)胞毒性，尤其是在低濃度順鉑時，有增強(qiáng)作用。
進(jìn)一步用人纖維肉瘤細(xì)胞HT1080的體外研究表明，100μMGdT2BET聯(lián)合10μM的順鉑有化學(xué)增敏作用，而100μM的LuT2BET則沒有。實(shí)施例7體外特沙弗林化學(xué)增敏性結(jié)果小結(jié)本實(shí)施例提供了由實(shí)施例1和實(shí)施例3到6中體外MTT細(xì)胞毒性檢定法測得的結(jié)果小結(jié)。圖2表明了三種不同濃度的GdT2BET和一種受試化療藥物對MES-SA細(xì)胞的IC50值與對照組之差。與特沙弗林聯(lián)合的受試化療藥物分別為紫杉醇，依托泊苷，4-OH環(huán)磷酰胺，順鉑和博萊霉素。由于如實(shí)施例2中所描述的體外治療方案與其它藥物有所不同，故阿霉素的研究結(jié)果未包括在本小結(jié)中。所有研究結(jié)果顯示有特沙弗林時具有細(xì)胞毒性增強(qiáng)的效果。聯(lián)合博萊霉素時顯示特別明顯的活性增強(qiáng)作用(圖2)。實(shí)施例8特沙弗林和阿霉素的血液學(xué)研究本實(shí)施例提供了釓特沙弗林和阿霉素對普通小鼠的聯(lián)合毒性作用的血液學(xué)研究結(jié)果小結(jié)。
8只Balb/c小鼠組成的對照組不予處理。第二組8只小鼠按7.5mg/kg劑量注射阿霉素，每周一次共三周。第三組如第二組一樣注射阿霉素后5分鐘，再以40μmol/kg劑量注射GdT2BET，每周一次共三周。血液學(xué)常規(guī)數(shù)值由加州獸醫(yī)診斷公司提供(California Veterinary Diagostics,Inc.West Sacramento,加州)。分別于首次注射和末次注射兩周后測定白細(xì)胞，紅細(xì)胞，血紅蛋白(gm/dL)及血小板數(shù)目。
通過測定外周白細(xì)胞、血小板數(shù)目和血紅蛋白值的結(jié)果清楚表明，當(dāng)特沙弗林聯(lián)合阿霉素使用時，不增加由阿霉素引起的骨髓毒性。在對四個參數(shù)的研究中，在兩個時間表內(nèi)，接受阿霉素和特沙弗林組的數(shù)值十分接近于僅使用阿霉素治療的小鼠組中測得的值，兩者的差異在誤差允許的范圍之內(nèi)。這些結(jié)果進(jìn)一步說明特沙弗林在體內(nèi)無細(xì)胞毒性，尤其是對骨髓無毒性。實(shí)施例9MDR和非MDR細(xì)胞系對特沙弗林的吸收及化學(xué)增敏效果本實(shí)施例提供了表明镥特沙弗林的吸收和釓特沙弗林的化學(xué)增敏效果不依賴于宿主的多藥抗藥性表型的數(shù)據(jù)。
镥特沙弗林的吸收用表達(dá)多藥抗藥性蛋白的鼠白血病細(xì)胞系P388/ADR(Gottesman和Pastan,1993)及缺乏此蛋白的細(xì)胞系P388(Johnson等，1982)進(jìn)行測試。P388和P388/ADR細(xì)胞以細(xì)胞濃度7mg/ml(濕重)懸浮在FHS培養(yǎng)基(Fisher培養(yǎng)基中20mM HEPES,pH7.2,代替NaHCO3)中，與镥特沙弗林(化合物Ⅲ，其中M=Lu(Ⅲ),LuT2BET)一起37℃培養(yǎng)30分鐘。熒光測定顯示兩種細(xì)胞系對特沙弗林的吸收無差別。
用GdT2BET聯(lián)合化療藥物4-OH環(huán)磷酰胺，依托泊苷，阿霉素，順鉑和博萊霉素測定對野生型人肉瘤細(xì)胞系MES-SA及阿霉素選擇性mdr1變株MES-SA/Dx5細(xì)胞(斯坦福醫(yī)學(xué)院，斯坦福，加州)的細(xì)胞毒性。所有化療藥物在特沙弗林配合下對全部細(xì)胞系均有效，表明特沙弗林的作用機(jī)制不依賴于P-糖蛋白。實(shí)施例10選擇可用特沙弗林作為化學(xué)增敏劑的化療藥物的方法本實(shí)施例提供了選擇可用特沙弗林作為化學(xué)增敏劑的化療藥物的方法。使用如實(shí)施例1中描述的體外細(xì)胞毒性檢定方法，如MTT細(xì)胞毒性檢定法，在有特沙弗林時從侯選化療藥物中篩選可增加細(xì)胞毒性的化療藥物。此外，還可以用體內(nèi)模型在有特沙弗林時考察候選化療藥物的細(xì)胞毒性的增強(qiáng)效果。實(shí)施例2中的鼠的研究就是一個例子。與不存在特沙弗林時的細(xì)胞毒性相比，有特沙弗林時細(xì)胞毒性增強(qiáng)了的化療藥物可以認(rèn)為是一種可用特沙弗林作為化學(xué)增敏劑的化療藥物。
進(jìn)一步，培育轉(zhuǎn)基因小鼠來檢測潛在化學(xué)增敏劑對逆轉(zhuǎn)藥物抗性的作用(Mickisch等，1991)。這些小鼠在它們的骨髓細(xì)胞中表達(dá)MDR基因，對由如蒽環(huán)類抗生素等天然產(chǎn)物引起的白細(xì)胞減少有抗性。這種藥物抗性可以通過劑量依賴性方式加以克服，即同時注射如維拉帕米和奎寧的藥物。這種MDR-1轉(zhuǎn)基因小鼠模型也可用于檢測可用特沙弗林作為化學(xué)增敏劑的化療藥物。
最佳的化學(xué)增敏效果可通過變化化療藥物與特沙弗林的劑量、注射時間與方法來找到。每種藥物的注射時間與方法、每種藥物的劑量、動物對每種藥物的晝夜節(jié)律反應(yīng)等因素都需要每次變化一項逐一測試，以達(dá)到特沙弗林最佳的化學(xué)增敏效果。實(shí)施例11特沙弗林光能治療化學(xué)增敏作用特沙弗林的光能治療化學(xué)增敏作用(PDT-化學(xué)增敏)包括對患有癌癥的患者聯(lián)合使用特沙弗林和化療藥物，從而使光照部位的化療藥物治療效果增強(qiáng)的方法。本方法進(jìn)一步提供了與傳統(tǒng)化學(xué)增敏作用相比的特異性和定位性優(yōu)點(diǎn)。
特沙弗林是用于光能治療(PDT)的有效光增敏劑。它在組織透明的720-770nm范圍有較強(qiáng)的吸收，并且可以產(chǎn)生足夠量1O2。而且，用特沙弗林進(jìn)行光能治療的效果既使在有顏色的組織如黑色素瘤組織中也仍有效。
在本發(fā)明的PDT-化學(xué)增敏方法中，對打算采用化療的患有癌癥的患者或受試者服用化療藥物和光敏感的特沙弗林，隨后對癌癥周圍部位光照?；熕幬镞x自表2中所列的藥物。光敏感的特沙弗林服用劑量為藥物有效劑量?！八幬镉行┝俊笔侵概c化療藥物聯(lián)合使用后一經(jīng)光照就可以增加光照范圍附近的細(xì)胞殺傷作用的劑量。所需劑量隨著所選的特沙弗林種類、給藥方案的選擇、光照時間和注射的時間等不同而不同。這種劑量用本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的方法或依本文描述的方法不需過多的實(shí)驗(yàn)就可確定。例如LuT2BET可按約5～40μmol/kg劑量靜脈注射到接受化療藥物(如用紫杉類化合物治療乳腺癌)治療的患者。此后數(shù)分鐘到幾小時使用光照射。光源可以是如激光或是發(fā)光二極管。光的波長范圍從450nm-900nm，優(yōu)選700～800nm，最優(yōu)選730～770nm；光照可以是表面的，內(nèi)窺鏡的或是間質(zhì)組織的(即通過光導(dǎo)纖維的)形式。
按照本文公開的和權(quán)利要求中要求的所有的產(chǎn)品和方法無需過多實(shí)驗(yàn)就可以制造和施行。盡管以優(yōu)選的實(shí)施方案的形式描述了本發(fā)明中的產(chǎn)品和方法，對于本領(lǐng)域技術(shù)人員明顯地可在不偏離本發(fā)明的概念、精神和范圍的基礎(chǔ)上，對產(chǎn)品、方法以及此處描述的步驟或步驟順序加以改變。更確切地講，顯然化學(xué)和生理學(xué)相關(guān)的某些藥劑可以替換本文描述的藥劑，而獲得相同或相似的結(jié)果。對那些本領(lǐng)域技術(shù)人員而言顯而易見的所有這些類似的替代或修飾均被認(rèn)為屬于由權(quán)利要求書定義的本發(fā)明的精神、范圍和概念之內(nèi)。
下面的參考文獻(xiàn)提供了方法、示例或?qū)Ρ疚膬?nèi)容的細(xì)節(jié)補(bǔ)充，本文引用它們做為參考。參考文獻(xiàn)Barrows,L.R.,“抗腫瘤和免疫活性藥物”，(Antineoplastic andImmunoactive Drugs”)第75章，1236-1262頁，雷明頓藥學(xué)科學(xué)和實(shí)踐”Remington:The Science and Practice of Pharmacy)，馬克出版公司(Mack Publishing Co.),Easton,PA,1995。Dalton,W.S.,美國癌癥研究協(xié)會會報，(Proc.Am.Assoc.Cancer Res.)31:520,1990。De Vita,V.T.等，癌癥，腫瘤學(xué)原理與實(shí)踐(Cancer,Princile&amp;Practice ofOncology),第四版，J.B.Lippincott公司，費(fèi)城，PA,2661-2664頁.1993。Di Marco,A.等，癌癥化療報告(Cancer Chemotherapy Reports),56:153-161,1972。Calabresi,P.和B.A.Chabner,“腫瘤疾病的化療治療”(Chemotherapyof Neoplastic Diseases”第Ⅻ部分，1202-1263頁，古德曼和吉爾曼化療的藥理學(xué)基礎(chǔ)(Goodmen and Gilman′s The Pharmacological Basisof Therapeutics)第8版，1990,Pergamin Press,Inc。Gottesman,M.M和I.Pastan，生物化學(xué)年鑒(Ann.Rev.Biochem.),62:385-427,1993。Grandi,M.等“蒽環(huán)類抗生素類似物的篩選”(Screening of anthracycline analogs)，蒽環(huán)類和蒽二酮類抗癌癥藥物(Anthracycline and anthraceneclione-based anticancer agents)生物活性分子(Bioactive Molecules)卷6，第ⅩⅤ章，J.W.Lown編,Elsevier,1988。Johoson,R.K.等，癌治療報告(Cancer Treat.Rep.)62:1535-1547,1982。Mickisch,G.H等，美國國家科學(xué)院院報(Proc.Natl.Acad.Sci.USA)88:547-551,1991。Mosmann，免疫學(xué)方法雜志(J.Immunological Methods),65:55-63,1983。Raderer,M.和Scheithauer,W.癌癥(Cancer),72(12):3553～3563,1993。
權(quán)利要求
1．特沙弗林在制備用于與化療藥物一起使用起化學(xué)增敏作用的藥物組合物中的用途。
2．特沙弗林在制備用于與化療藥物一起治療受試者癌癥的藥物組合物中的用途。
3．權(quán)利要求1或2的用途，其中特沙弗林具有結(jié)構(gòu)Ⅰ
其中，ⅠM是氫，二價金屬陽離子或三價金屬陽離子；R1-R4,R7和R8獨(dú)立地為氫、鹵原子、羥基、烷基、鏈烯基、炔基、芳基、鹵代烷基、硝基、甲酰、酰基、羥烷基、烷氧基、羥烷氧基、羥鏈烯基、烴炔基、糖基、羧基、羧烷基、氨甲?；?、氨甲酰烷基、氨基、氨烷基、位點(diǎn)導(dǎo)向分子或是與位點(diǎn)導(dǎo)向分子偶聯(lián)的配體；R6和R9獨(dú)立地選自R1-R4,R7和R8的基團(tuán)，前提是鹵原子不是碘，鹵代烷基不是碘代烷；R5和R10-R12獨(dú)立地為氫、烷基、鏈烯基、炔基、芳基、羥烷基、烷氧基、羥烷氧基、羥鏈烯基、羥炔基、羧烷基、氨甲?；?、氨甲酰烷基、氨基、氨烷基或是與糖基或位點(diǎn)導(dǎo)向分子偶聯(lián)的配體；且n是小于或等于5的整數(shù)。
4．權(quán)利要求1或2的用途，其中特沙弗林具有結(jié)構(gòu)式Ⅱ
Ⅱ其中，R1-R4,R7和R8獨(dú)立地為氫、鹵原子、羥基、烷基、鏈烯基、炔基、芳基、鹵代烷基、硝基、甲酰、?；?、羥烷基、烷氧基、羥烷氧基、羥鏈烯基、羥炔基、糖基、羧基、羧烷基、氨甲?；奔柞Ｍ榛?、氨基、氨烷基、位點(diǎn)導(dǎo)向分子或是與位點(diǎn)導(dǎo)向分子偶聯(lián)的配體；R6和R9獨(dú)立地選自R1上R4,R7和R8的基團(tuán)，其前提是鹵原子不是碘，鹵代烷基不是碘代烷基；R5和R10-R12獨(dú)立地為氫、烷基、鏈烯基、炔基、芳基、羥烷基、烷氧基、羥烷氧基、羥鏈烯基、羥炔基、羧烷基、氨甲?；?、氨甲酰烷基、氨基、氨烷基或與糖基或位點(diǎn)導(dǎo)向分子偶聯(lián)的配體；R13是烷基、鏈烯基、氧烷基或羥烷基，其含有多至3個碳原子且有圍繞第一結(jié)合碳原子的旋轉(zhuǎn)撓性。
5．權(quán)利要求3的用途，其中R1是CH2(CH2)2OH,R2和R3是CH2CH3,R4是CH3,R7和R8是O(CH2CH2O)3CH3以及R5、R6、R9-R12是H。
6．權(quán)利要求5的用途，其中M是三價金屬陽離子，該三價金屬陽離子是Lu(Ⅲ)。
7．權(quán)利要求5的用途，其中M是三價金屬陽離子，該三價金屬陽離子是Gd(Ⅲ)。
8．權(quán)利要求1或2的用途，其中特沙弗林是一種光敏感性特沙弗林。
9．權(quán)利要求8的用途，其中光敏感性特沙弗林與抗磁性金屬陽離子配合，抗磁性金屬陽離子是Lu(Ⅲ)、La(Ⅲ)、In(Ⅲ)、Y(Ⅲ)、Zn(Ⅱ)或是Cd(Ⅱ)。
10．權(quán)利要求9的用途，其中抗磁性金屬陽離子是Lu(Ⅲ)。
11．權(quán)利要求1或2的用途，其中特沙弗林與順磁性金屬陽離子配合。
12．權(quán)利要求11的用途，其中順磁性金屬陽離子是Mn(Ⅱ),Mn(Ⅲ),Fe(Ⅲ)或除La(Ⅲ),Lu(Ⅲ)和Pm(Ⅲ)以外的鑭系三價金屬陽離子。
13．權(quán)利要求11的用途，其中順磁體金屬陽離子為Mn(Ⅱ),Mn(Ⅲ),Dy(Ⅲ)或Gd(Ⅲ)。
14．權(quán)利要求11的用途，其中順磁體金屬陽離子是Gd(Ⅲ)。
15．權(quán)利要求1或2的用途，其中化療藥物是烷化劑、抗代謝物、天然產(chǎn)物、激素或拮抗劑。
16．權(quán)利要求1或2的用途，其中化療藥物是鉑配位復(fù)合物、蒽二酮、蒽環(huán)類抗生類、取代脲、甲基肼衍生物或腎上腺皮質(zhì)抑制劑。
17．權(quán)利要求1或2的用途，其中化療藥物是紫杉醇、依托泊苷、4-OH環(huán)磷酰胺、順鉑、阿霉素或博萊霉素。
18．權(quán)利要求1或2的用途，其中化療藥物是阿霉素或博萊霉素。
19．權(quán)利要求1或2的用途，其中特沙弗林在使用化療藥物后使用。
20．權(quán)利要求1或2的用途，其中特沙弗林在表皮給藥。
21．權(quán)利要求1或2的用途，其中特沙弗林通過靜脈給藥。
22．權(quán)利要求1或2的用途，其中特沙弗林作為化學(xué)增敏劑通過不依賴P-糖蛋白的機(jī)制發(fā)揮作用。
23．權(quán)利要求2的用途，其中癌癥是白血病、淋巴瘤、癌或肉瘤。
24．一種化學(xué)增敏方法，其包括給有此需要的受試者服用化療藥物和特沙弗林。
25．一種化學(xué)增敏方法，其包括給有此需要的受試者服用化療藥物和光敏感性特沙弗林；且對受試者的特沙弗林周圍組織進(jìn)行光照。
26．一種化學(xué)增敏方法，其包括給有此需要的受試者服用化療藥物和有放射性增敏特性的特沙弗林；且對受試者的特沙弗林周圍組織進(jìn)行離子化放射線照射。
27．權(quán)利要求24,25或26的方法，其中的特沙弗林具有結(jié)構(gòu)Ⅰ
其中，ⅠM是氫，二價金屬陽離子或三價金屬陽離子；R1-R4,R7和R8獨(dú)立地為氫、鹵原子、羥基、烷基、鏈烯基、炔基、芳基、鹵代烷基、硝基、甲酰、?；?、羥烷基、烷氧基、羥烷氧基、羥鏈烯基、烴炔基、糖基、羧基、羧烷基、氨甲?；奔柞Ｍ榛?、氨基、氨烷基、位點(diǎn)導(dǎo)向分子或是與位點(diǎn)導(dǎo)向分子偶聯(lián)的配體；R6和R9獨(dú)立地選自R1-R4,R7和R8的基團(tuán)，前提是鹵原子不是碘，鹵代烷基不是碘代烷；R5和R10-R12獨(dú)立地為氫、烷基、鏈烯基、炔基、芳基、羥烷基、烷氧基、羥烷氧基、羥鏈烯基、羥炔基、羧烷基、氨甲?；?、氨甲酰烷基、氨基、氨烷基或是與糖基或位點(diǎn)導(dǎo)向分子偶聯(lián)的配體；且n是小于或等于5的整數(shù)。
28．權(quán)利要求24,25或26中的方法，其中特沙弗林具有結(jié)構(gòu)Ⅱ
Ⅱ其中，R1-R4,R7和R8獨(dú)立地為氫、鹵原子、羥基、烷基、鏈烯基、炔基、芳基、鹵代烷基、硝基、甲酰、?；⒘u烷基、烷氧基、羥烷氧基、羥鏈烯基、羥炔基、糖基、羧基、羧烷基、氨甲?；奔柞Ｍ榛?、氨基、氨烷基、位點(diǎn)導(dǎo)向分子或是與位點(diǎn)導(dǎo)向分子偶聯(lián)的配體；R6和R9獨(dú)立地選自R1-R4,R7和R8的基團(tuán)，其前提是鹵原子不是碘，鹵代烷基不是碘代烷基；R5和R10-R12獨(dú)立地為氫、烷基、鏈烯基、炔基、芳基、羥烷基、烷氧基、羥烷氧基、羥鏈烯基、羥炔基、羧烷基、氨甲?；奔柞Ｍ榛?、氨基、氨烷基或與糖基或位點(diǎn)導(dǎo)向分子偶聯(lián)的配體；R13是烷基、鏈烯基、氧烷基或羥烷基，其含有多至3個碳原子且有圍繞第一結(jié)合碳原子的旋轉(zhuǎn)撓性。
29．權(quán)利要求27的方法，其中R1是CH2(CH2)2OH,R2和R3是CH2CH3,R4是CH3,R7和R8是O(CH2CH2O)3CH3以及R5、R6、R9-R12是H。
30．權(quán)利要求29的方法，其中M是三價金屬陽離子，該三價金屬陽離子是Lu(Ⅲ)。
31．權(quán)利要求29的方法，其中M是三價金屬陽離子，該三價金屬陽離子是Gd(Ⅲ)。
32．權(quán)利要求24的方法，其中特沙弗林是一種光敏感性特沙弗林。
33．權(quán)利要求25或32的方法，其中光敏感性特沙弗林與抗磁性金屬陽離子配合，抗磁性金屬陽離子是Lu(Ⅲ)、La(Ⅲ)、In(Ⅲ)、Y(Ⅲ)、Zn(Ⅲ)或是Cd(Ⅲ)。
34．權(quán)利要求33的方法，其中抗磁性金屬陽離子是Lu(Ⅲ)。
35．權(quán)利要求24或26的方法，其中特沙弗林與順磁性金屬陽離子配合。
36．權(quán)利要求35的方法，其中順磁性金屬陽離子是Mn(Ⅱ),Mn(Ⅲ),Fe(Ⅲ)或除La(Ⅲ),Lu(Ⅲ)和Pm(Ⅲ)以外的鑭系三價金屬陽離子。
37．權(quán)利要求35的方法，其中順磁體金屬陽離子為Mn(Ⅱ),Mn(Ⅲ),Dy(Ⅲ)或Gd(Ⅲ)。
38．權(quán)利要求35的方法，其中順磁體金屬陽離子是Gd(Ⅲ)。
39．權(quán)利要求24,25或26的方法，其中化療藥物是烷化劑、抗代謝物、天然產(chǎn)物、激素或拮抗劑。
40．權(quán)利要求24,25或26的方法，其中化療藥物是鉑配位復(fù)合物、蒽二酮、蒽環(huán)類抗生類、取代脲、甲基肼衍生物或腎上腺皮質(zhì)抑制劑。
41．權(quán)利要求24,25或26的方法，其中化療藥物是紫杉醇、依托泊苷、4-OH環(huán)磷酰胺、順鉑、阿霉素或博萊霉素。
42．權(quán)利要求24,25或26的方法，其中化療藥物是阿霉素或博萊霉素。
43．權(quán)利要求24,25或26的方法，其中特沙弗林在使用化療藥物后使用。
44．權(quán)利要求24,25或26的方法，其中特沙弗林在表皮給藥。
45．權(quán)利要求24,25或26的方法，其中特沙弗林通過靜脈給藥。
46．權(quán)利要求24,25或26的方法，其中特沙弗林作為化學(xué)增敏劑通過不依賴P-糖蛋白的機(jī)制發(fā)揮作用。
全文摘要
提供了對癌癥化學(xué)增敏的方法。特沙弗林是可增加化療藥物的細(xì)胞毒性的新化學(xué)增敏劑。由于特沙弗林在表達(dá)P－糖蛋白和不表達(dá)P－糖蛋白的細(xì)胞系中均有效,故這種增敏作用是P－糖蛋白非依賴性的。提供了使用特沙弗林作為化學(xué)增敏劑治療如白血病、淋巴瘤、癌癥和肉瘤的方法。
文檔編號A61K38/14GK1213313SQ97192481
公開日1999年4月7日 申請日期1997年1月23日 優(yōu)先權(quán)日1996年1月25日
發(fā)明者R·A·米勒, S·W·揚(yáng) 申請人:環(huán)狀藥物公司