專(zhuān)利名稱(chēng)：治療免疫調(diào)節(jié)炎癥的裝置的制作方法
本申請(qǐng)是94191441.0號(hào)專(zhuān)利申請(qǐng)的分案申請(qǐng)，原申請(qǐng)的申請(qǐng)日為1994年3月11日，發(fā)明名稱(chēng)為“治療免疫調(diào)節(jié)的炎癥的組合物和方法”。
本發(fā)明一般涉及預(yù)防和治療免疫調(diào)節(jié)的炎癥的組合物和方法。更具體地，本發(fā)明涉及預(yù)防和治療與呼吸道有關(guān)的炎癥如哮喘和過(guò)敏性鼻炎。本發(fā)明的組合物和方法特別用于預(yù)防或治療與慢性哮喘有關(guān)的晚期支氣管縮小和氣道強(qiáng)應(yīng)答性。
現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)可抑制酶特別是蛋白酶的低分子量化合物可廣泛用于治療各種病理疾病。許多這類(lèi)化合物被稱(chēng)為肽模擬物，因?yàn)檎缢鼈兊拿Q(chēng)所指的，這些化合物模擬了各種僅由縮合氨基酸組成的肽抑制劑。這些低分子肽模擬的蛋白酶抑制劑與天然肽和蛋白質(zhì)相比具有的特殊優(yōu)點(diǎn)在于它們更穩(wěn)定，因?yàn)樗鼈兙哂兴璧乃幬飫?dòng)力學(xué)性質(zhì)和藥理性質(zhì)。
例如，稱(chēng)為血管緊張素轉(zhuǎn)換酶(ACE)的鋅金屬蛋白酶決定著血管緊張素Ⅰ分裂為血管緊張素Ⅱ。抑制ACE是一種控制高血壓的方法。ACE可被脯氨酸的巰基?；苌镉行У匾种?，特別是Weller&Gordon在美國(guó)專(zhuān)利4,456,595中公開(kāi)的稱(chēng)為巰甲丙脯酸的二肽模擬物(1-[(2S)-3-巰基-2-甲基丙?；鵠-L-脯氨酸及其類(lèi)似物。
絲氨酸蛋白酶凝血酶是一種在導(dǎo)致血塊的級(jí)聯(lián)凝固中的關(guān)鍵酶。通過(guò)藥物抑制凝血酶是一種減少血塊凝固趨勢(shì)的方法，因此它減少了可導(dǎo)致心臟病發(fā)作或中風(fēng)的血栓形成的可能性。凝血酶可被許多肽模擬物特別是稱(chēng)為精氨酸的氨基酸衍生物和替代物有效地抑制。okamoto等人在美國(guó)專(zhuān)利4,201,863中公開(kāi)的一類(lèi)N(2)-芳基磺?；?L-精氨酰胺特別是argipidine(arrgatroban)即為這一類(lèi)模擬抑制劑。
哮喘是一種綜合癥，對(duì)于其急性和慢性表現(xiàn)包含多種生化介質(zhì)。哮喘的常見(jiàn)特征在于對(duì)于免疫特定的變應(yīng)原和一般化的化學(xué)或物質(zhì)刺激氣管和支氣管的強(qiáng)應(yīng)答性漸進(jìn)發(fā)展。哮喘的細(xì)支氣管組織的強(qiáng)應(yīng)答性被認(rèn)為是由慢性炎癥反應(yīng)引起的，炎癥反應(yīng)刺激和損傷上皮襯內(nèi)的氣道壁并促使下層組織的病理性變厚。支氣管活組織檢查研究表明甚至輕度哮喘的病人在氣道壁中都有炎癥特征。
炎癥過(guò)程的起始是對(duì)吸入的變應(yīng)原變應(yīng)性應(yīng)答。帶有IgE受體的白細(xì)胞特別是肥大細(xì)胞和嗜堿細(xì)胞而且還包括單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和嗜曙紅細(xì)胞存在于支氣管的上皮和底層平滑肌組織中，并且通過(guò)使特定吸入的抗原與IgE受體結(jié)合開(kāi)始活化上述細(xì)胞?；罨姆蚀蠹?xì)胞釋放出大量預(yù)先形成的或初始的炎癥應(yīng)答的化學(xué)介質(zhì)和酶。另外，大量次級(jí)炎癥介質(zhì)通過(guò)活化的肥大細(xì)胞的酶反應(yīng)現(xiàn)場(chǎng)生成，包括超氧化物和脂質(zhì)衍生的介質(zhì)。另外，通過(guò)肥大細(xì)胞的脫?？舍尫懦鰩追N大分子蛋白多糖、過(guò)氧化物酶、芳基硫酸酯酶B，特別是類(lèi)胰蛋白酶和胰凝乳蛋白酶(胃促胰酶)。參見(jiàn)“Drug Therapy ofAsthma”,chap 62,1054-54。
肥大細(xì)胞的這種化學(xué)釋放可以解釋在暴露于空氣傳播的變應(yīng)原后在敏感的個(gè)體中存在的早期細(xì)支氣管縮肌應(yīng)答。早期的哮喘反應(yīng)在暴露于變應(yīng)原后大約15分鐘達(dá)到最大，接著1至2個(gè)小時(shí)內(nèi)恢復(fù)。在25-35％個(gè)體中，早期哮喘反應(yīng)后接著在幾小時(shí)內(nèi)呼吸功能開(kāi)始進(jìn)一步下降，并在暴露后6至12小時(shí)達(dá)到最大。后期哮喘反應(yīng)伴隨滲入到細(xì)支氣管平滑肌和上皮細(xì)織并且流入氣道的炎癥細(xì)胞數(shù)量明顯增加。這些細(xì)胞包括嗜曙紅細(xì)胞、中性白細(xì)胞和淋巴細(xì)胞，所有這些細(xì)胞通過(guò)肥大細(xì)胞衍生試劑的釋放被吸引到上述部位。在后期反應(yīng)階段滲入細(xì)胞本身被活化。后期哮喘應(yīng)答被認(rèn)為是通過(guò)巨噬細(xì)胞的分泌活性部分調(diào)節(jié)的次級(jí)炎癥反應(yīng)。
有關(guān)的一類(lèi)炎癥反應(yīng)發(fā)生在上呼吸道粘膜中，通常是對(duì)空氣傳播的變應(yīng)原的應(yīng)答。當(dāng)處于哮喘狀態(tài)時(shí)，肥大細(xì)胞通過(guò)IgE分子與特定的抗原交聯(lián)而被活化。對(duì)于變應(yīng)性的多年生的血管舒縮的鼻炎，在沒(méi)有可識(shí)別的暴露于特定抗原下肥大細(xì)胞也可被活化。在任一情況下，活化的肥大細(xì)胞在脫粒時(shí)釋放出初級(jí)和次級(jí)炎癥介質(zhì)。嗜曙紅細(xì)胞和巨噬細(xì)胞被吸引到上述部位以維持炎癥反應(yīng)。鼻根上皮組織的破壞常發(fā)生在后期反應(yīng)中。
類(lèi)胰蛋酶是人肥大細(xì)胞的主要分泌蛋白酶，并被認(rèn)為包括在神經(jīng)肽處理和組織炎癥中。成年人類(lèi)胰蛋白酶是一種多相催化活化的亞單元的糖基化的與肝素有關(guān)的四聚體。類(lèi)胰蛋白酸單體氨基酸序列與其基團(tuán)結(jié)構(gòu)一樣已特征化的大量其它絲氨酸蛋白酸中沒(méi)有接近的相應(yīng)之物。參見(jiàn)如Vanderslice等人(1990)Pron.Natl.Acad.Sci.USA87:3811-3815；Miller等人，(1990)J.Clin Invest.86:864-870；Miller等人(1989)J.Clin.Inrest.84:1188-1195,Vanderslice等人(1989)Biochemistry28:4148-4155；和Katunuma等人(1990)Monographs in Allergy27:51-66。
類(lèi)胰蛋白酶貯存在肥大細(xì)胞分泌粒中。在肥大細(xì)胞活化后，在各種生物液體中很容易測(cè)到人類(lèi)胰蛋白酶。例如，在過(guò)敏反應(yīng)后，類(lèi)胰蛋白酶出現(xiàn)在血流中，并且保持可測(cè)幾小時(shí)。參見(jiàn)Schwartz等人(1987)N.Engl J.Med.316:1622-1626。在用特定抗原刺激特異反應(yīng)性受實(shí)驗(yàn)者的鼻根和肺灌洗液的試樣中可測(cè)到類(lèi)胰蛋白酶的存在。參見(jiàn)Castells&Schwartz(1988)J.Allerg.Clin.Immunol.82:348-355和Wenzel等人(1988)Am.Rev.Resp.Dis.141:563-568。在支氣管粘膜變應(yīng)原激化后由特異反應(yīng)性哮喘病人得到的肺灌洗液中的類(lèi)胰蛋白酶水平增高。同樣，與不吸煙的對(duì)照者相比一些吸煙者的支氣管肺泡灌洗液的類(lèi)胰蛋白酶水平顯著提高，這一發(fā)現(xiàn)對(duì)活化肥大細(xì)胞的蛋白酶的釋放促使在吸煙者的氣腫中肺破壞的假說(shuō)提供了支持。參見(jiàn)Kalenderian等人(1988)(chest94:119-123。另外，現(xiàn)已證明類(lèi)胰蛋白酶是一種纖維細(xì)胞的有效促細(xì)胞分裂劑，從而表明它與肺纖維化和間質(zhì)肺病有關(guān)。參見(jiàn)Ruoss等人(1991)J.Clin.Invest.88:493-499。
類(lèi)胰蛋白酶與各種生物過(guò)程有關(guān)，包括血管舒張和支氣管松弛神經(jīng)肽的降解(參見(jiàn)Caughey等人(1988)J.pharmacol.Exp.Ther.244:133-137；Franconi等人(1988)J.Pharmacol.Exp.Ther.244:133-137；Franconi等人(1988)J.Pharmacol.Exp.Ther.248:947-951；和Tam等人(1990)Am.J.Respir.(ell Mol.Biol.3:27-32)和對(duì)于組胺支氣管應(yīng)答性的調(diào)節(jié)(參見(jiàn)Sekizawa等人(1989)J.Clin.Invest.83:175-179)。這些研究表明類(lèi)胰蛋白酶通過(guò)破壞支氣管擴(kuò)張肽可能增加哮喘中支氣管收縮。
另外，已經(jīng)證明了類(lèi)胰蛋白酶能分裂纖維蛋白原α-鏈以及帶有可釋放的激肽的高分子激肽原，因此可與肝素一起作為局部抗凝血?jiǎng)?。?lèi)胰蛋白通過(guò)MMP-3活化prostromelysin(proMMP-3)和前膠原酶(pro-MMP-1)的能力表明類(lèi)胰蛋白酶也與組織的炎癥和重建有關(guān)。這一發(fā)現(xiàn)也表明類(lèi)胰蛋白酶在類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的關(guān)節(jié)破壞中產(chǎn)生作用。另外已證明了類(lèi)胰蛋白酶能分裂與降鈣素原有關(guān)的肽。因?yàn)檫@種肽與神經(jīng)原炎癥有關(guān)，所以類(lèi)胰蛋白酶在皮膚神經(jīng)原炎癥的突發(fā)反應(yīng)的調(diào)節(jié)中為一重要因素。參見(jiàn)Caughey(1991)Am.J.Respir.Cell Mol.Biol.4:387-394。最近，已經(jīng)報(bào)道了各種形式的類(lèi)胰蛋白酶能將前凝血酶分裂為凝血酶，并通過(guò)CD4+T淋巴細(xì)胞調(diào)節(jié)HIV病毒膜蛋白gp120的識(shí)別(參見(jiàn)Katununa等人(1990)Monographs in Allergy27:51-66)。
在工業(yè)化國(guó)家，哮喘已成為最普通的慢性疾病。至今為止，常規(guī)的方法和治療劑不能有效地治療哮喘或其它免疫調(diào)節(jié)的炎癥。因此希望提供避免這些常規(guī)制劑和方法的缺點(diǎn)同時(shí)能有效地治療這些疾病的改進(jìn)的組合物和方法。
本發(fā)明提供了新的類(lèi)胰蛋白酶抑制劑，它包括式Ⅰ化合物或其藥物上可接受用鹽，
其中Ar為羥基取代的芳基或羥基取代的雜芳基，其中羥基位于酰胺側(cè)鏈的鄰位，如果Ar為羥基取代的芳基，那么帶有的酰胺側(cè)鏈的芳環(huán)不被鹵素取代并且在羥基的鄰位上不帶有低級(jí)烷基；R1為氫、低級(jí)烷基、芳基烷基或雜芳基烷基；R2為氫或低級(jí)烷基；R3選自
-(CH2)v·NH2其中m為3-6的整數(shù)，n為0-3的整數(shù)，p為0-2的整數(shù)，q為0-2的整數(shù)；r為0-5的整數(shù)；s為0-2的整數(shù)；t為1-3的整數(shù)；u為1或2；v為3-6的整數(shù)；w為0-3的整數(shù)；A為-CH=CH-或-C≡C-；X為-NH-或-CH2-；R4為低級(jí)烷基，取代的芳基烷基或取代的雜芳基烷基，R5和R6獨(dú)立選自氫、低級(jí)烷基、取代的芳烷基和取代的雜芳基烷基；或R4和R5與它們所連的氮和碳一起形成取代的4元、5元或6元雜環(huán)，R6為氫；或R4和R6與它們所連的氮和碳一起形成取代的4元、5元或6元雜環(huán)，R5為氫；R7為-OR8或-NR8R9，其中R8和R9獨(dú)立選自氫、低級(jí)烷基、芳基、芳基烷基或雜芳基烷基，或R8和R9與它們所連的氮一起形成取代的5元和6元雜環(huán)。
在優(yōu)選的實(shí)施方案中，Ar為1-羥基-2-萘基、2-羥基-1-萘基、3-羥基-2-吡啶基或2-羥基-3-喹喔啉基；R1為氫；R2為氫；R3選自
其中m為3-6的整數(shù)，n為0-3的整數(shù)，p為0-2的整數(shù)，q為0-2的整數(shù)；w為0-3的整數(shù)；A為-CH=CH-或-C≡C-；X為-NH-或-CH2-；R4為低級(jí)烷基，R5和R6為氫；或R4和R5與它們所連的氮和碳一起形成取代的4元、5元或6元雜環(huán)，R6為氫；R7為-OH、-OCH3、-NH2、3′-氨基羥基-1′-哌啶基或-N(CH3)2。
特別優(yōu)選的式Ⅰ的類(lèi)胰蛋白酶抑制劑為表Ⅰ和Ⅱ的化合物3
另一優(yōu)選的式Ⅰ的類(lèi)胰蛋白酶抑制劑為表Ⅰ和Ⅱ的化合物15
本文所述的化合物可用于預(yù)防和治療免疫調(diào)節(jié)的炎癥，特別是與呼吸道有關(guān)的炎癥包括哮喘以及特別是與慢性哮喘有關(guān)的強(qiáng)應(yīng)答性期和變應(yīng)性鼻炎。因此，本發(fā)明還提供了治療免疫調(diào)節(jié)的炎癥的方法，其中患有對(duì)用類(lèi)胰蛋白酶抑制劑治療敏感的免疫調(diào)節(jié)的炎癥的病人接受或服用治療有效劑量或一定量的本發(fā)明化合物。
本發(fā)明還提供了本文所述化合物的藥物組合物。這些藥物組合物具有各種劑型包括口服劑型以及可注射的和可灌注的溶液。一般地，當(dāng)用于治療或預(yù)防哮喘特別是與慢性哮喘有關(guān)的強(qiáng)應(yīng)答性時(shí)，這些藥物組合物可采用粉劑或溶液的氣霧劑。當(dāng)用于治療免疫調(diào)節(jié)的炎癥皮膚病時(shí)，本發(fā)明化合物可與無(wú)毒的可藥用的局部載體結(jié)合使用。本發(fā)明的化合物可與消炎藥或其他哮喘治療藥如β-腎上腺素能拮抗藥、消炎的皮質(zhì)類(lèi)固醇、抗膽堿能藥等結(jié)合使用。


圖1為表示羊的特定肺阻力作為抗原刺激后時(shí)間(小時(shí))的函數(shù)的曲線?？招恼叫伪硎緦?duì)照組值，空心園表示相同的動(dòng)物在服用表Ⅰ和Ⅱ的化合物3后的值。
圖2為表示在服用長(zhǎng)巴可之前服用表Ⅰ和Ⅱ化合物2時(shí)抗原刺激后24小時(shí)長(zhǎng)巴可誘導(dǎo)的支氣管收縮的羊強(qiáng)應(yīng)答性產(chǎn)生圖。黑色實(shí)心條對(duì)應(yīng)于對(duì)照組，基準(zhǔn)。淺色實(shí)心條對(duì)應(yīng)于藥物，基準(zhǔn)。陰影線條對(duì)應(yīng)于對(duì)照組，抗原后。白色條對(duì)應(yīng)于藥物，抗原后。
Ⅰ．定義和通用參數(shù)下述定義用于說(shuō)明和定義用來(lái)描述本發(fā)明的各種術(shù)語(yǔ)的含義和范圍。
“免疫調(diào)節(jié)的炎癥”一般包括與肥大細(xì)胞介質(zhì)釋放有關(guān)的且對(duì)用類(lèi)胰蛋白酶抑制劑治療敏感的疾病。這些疾病的實(shí)例包括速發(fā)型超敏反應(yīng)疾病如哮喘、變應(yīng)性鼻炎、蕁麻疹、血管水腫、濕疹性皮炎(特應(yīng)性皮炎)、過(guò)敏反應(yīng)、以及高增生性皮膚病、消化潰瘍、腸炎、皮炎等。
“強(qiáng)應(yīng)答性”是指與慢性哮喘有關(guān)的后期支氣管收縮和氣道高反應(yīng)性。哮喘的細(xì)支氣管組織的強(qiáng)應(yīng)答性被認(rèn)為是由慢性炎癥反應(yīng)引起的，炎癥反應(yīng)刺激和操作上皮襯內(nèi)的氣道壁并促使下層組織的病理性變厚。
“鹵素”是指氟、溴、氯和碘原子。
“羥基”是指基團(tuán)-OH。
“低級(jí)烷基”是指1至6個(gè)碳原子的環(huán)狀、支鏈或直鏈烷基。該術(shù)語(yǔ)可進(jìn)一步列舉的基團(tuán)為甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、叔丁基、異丁基(或2-甲基丙基)、環(huán)丙基甲基、正戊基和己基。
“芳基”或“Ar”是指具有單環(huán)(如苯基)、多環(huán)(如聯(lián)苯基)或其中至少一個(gè)環(huán)是芳環(huán)的多稠合環(huán)(如1,2,3,4-四氫萘基、萘基、蒽基或菲基)的芳族碳環(huán)基，它可任選是未取代或被下列基團(tuán)取代鹵素、低級(jí)烷基、低級(jí)烷氧基、低級(jí)烷硫基、三氟甲基、低級(jí)酰氧基、芳基、雜芳基和羥基。然而，根據(jù)本發(fā)明，帶有酰胺側(cè)鏈的芳環(huán)不能進(jìn)一步被鹵素取代。另外，帶有酰胺側(cè)鏈的芳環(huán)在羥基的鄰位(即酰胺側(cè)鏈的間位)不能有低級(jí)烷基。
“雜環(huán)”是指具有單環(huán)(例如嗎啉代、吡啶基或呋喃基)或多稠合環(huán)(例如1.5一二氮雜萘基、喹喔啉基、喹啉基、中氮茚基或苯并[b]噻吩基)并且在環(huán)中具有至少一個(gè)雜原子如N、O或S的飽和、不飽和或芳族碳環(huán)基，它可任選是未取代的或被下列基團(tuán)取代鹵素、低級(jí)烷基、低級(jí)烷氧基、低級(jí)烷硫基、三氟甲基、低級(jí)酰氧基和羥基。術(shù)語(yǔ)“雜芳基”和“HetAr”是指其中至少一個(gè)雜環(huán)為芳環(huán)的雜環(huán)。
“芳烷基”是指基團(tuán)-R-Ar其中Ar為芳基和R為直鏈或支鏈脂族基團(tuán)。芳烷基可任選是未取代的或被下列基團(tuán)取代鹵素、低級(jí)烷基、低級(jí)烷氧基、低級(jí)烷硫基、三氟甲基、低級(jí)酰氧基和羥基。
“雜芳基烷基”是指基團(tuán)-R-HetAr其中HetAr為雜芳基，R為直鏈或支鏈脂族基團(tuán)。雜芳基烷基可任選是未取代的或被下列基團(tuán)取代鹵素、低級(jí)烷基、低級(jí)烷氧基、低級(jí)烷硫基、三氟甲基、低級(jí)酰氧基和羥基。
“藥物上可接受的鹽”是指保持母體化合物的生物功效和性質(zhì)，并且不是生物學(xué)上或其它所不需要的鹽。
“藥物或治療上可接受的載體”是指不影響活性成份的生物活性功效并且對(duì)宿主或病人無(wú)毒的載體介質(zhì)。
“立體異構(gòu)體”是指具有相同分子量、化學(xué)組成和結(jié)構(gòu)，但原子彼此排列不同的化合物。也就是說(shuō)，某些相同的化學(xué)部分在空間處于不同的取向，因此，純的立體異構(gòu)體能夠旋轉(zhuǎn)偏振光平面。然而，某些純的立體異構(gòu)體具有的旋光度很低而用現(xiàn)代儀器不能測(cè)到。本發(fā)明的化合物具有一個(gè)或多個(gè)不對(duì)稱(chēng)碳原子，因此包括各種立體異構(gòu)體。所有立體異構(gòu)體都包括在本發(fā)明的范圍之中。
“治療”是指體外或體內(nèi)施用類(lèi)胰蛋白酶抑制劑，包括(ⅰ)抑制疾病的癥狀；(ⅱ)減輕或抑制疾病的長(zhǎng)期作用；和/或(ⅲ)減輕疾病的癥狀。
Ⅱ．類(lèi)胰蛋白酶抑制劑本發(fā)明提供了包括有效的絲氨酸蛋白酶抑制劑，更特別地為類(lèi)胰蛋白酶抑制劑的組合物，它可用于減輕免疫調(diào)節(jié)的炎癥特別是哮喘動(dòng)物由變應(yīng)原刺激誘導(dǎo)的支氣管收縮。
類(lèi)胰蛋白酶抑制劑是降低或阻止類(lèi)胰蛋白酶活性的物質(zhì)。根據(jù)本發(fā)明的另一方面，類(lèi)胰蛋白酶抑制劑包括式Ⅰ化合物或其藥物上可接受的鹽
Ar為羥基取代的芳基或羥基取代的雜芳基，其中羥基位于酰胺側(cè)鏈的鄰位，如果Ar為羥基取代的芳基，那么帶有酰胺側(cè)鏈的芳環(huán)不被鹵素取代并且在羥基的鄰位上不帶有低級(jí)烷基；R1為氫、低級(jí)烷基、芳基烷基或雜芳基烷基；R2為氫或低級(jí)烷基；R3進(jìn)自
-(CH2)v·NH2
其中m為3-6的整數(shù)n為0-3的整數(shù)；p為0-2的整數(shù)；q為0-2的整數(shù)；r為0-5的整數(shù)；s為0-2的整數(shù)；t為1-3的整數(shù)；u為1或2；v為3-6的整數(shù)；w為0-3的整數(shù)；A為-CH=CH-或-C≡C-；X為-NH-或-CH2-；R4為低級(jí)烷基，取代的芳基烷基或取代的雜芳基烷基，R5和R6獨(dú)立選自氫、低級(jí)烷基、取代的芳烷基和取代的雜芳基烷基；或R4和R5與它們所連的氮和碳一起形成取代的4元、5元或6元雜環(huán)，R6為氫；或R4和R6與它們所連的氮和碳一起形成取代的4元、5元或6元雜環(huán)，R5為氫；R7為-OR8或-NR8R9，其中R8和R9獨(dú)立選自氫、低級(jí)烷基、芳基、芳基烷基或雜芳基烷基，或R8和R9與它們所連的氮一起形成取代的5元或6元雜環(huán)。
在優(yōu)選的實(shí)施方案中，Ar為1-羥基-2-萘基、2-羥基-1-萘基、3-羥基-2-吡啶基或2-羥基-3-喹喔啉基；R1為氫；R2為氫；R3選自
其中m為3-6的整數(shù)，n為0-3的整數(shù)，P為0-2的整數(shù)，q為0-2的整數(shù)；w為0-3的整數(shù)；A為-CH=CH-或-C=C-；X為-NH-或-CH2-；R4為低級(jí)烷基，R5和R6為氫，或R4和R5與它們所連的氮和碳一起形成取代的4元、5元或6元雜環(huán)，R6為氫；R7為-OH、-OCH3、-NH2、3′-氨基羧基-1′-哌啶基或-N(CH3)2。
優(yōu)選的類(lèi)胰蛋白酶抑制劑為表Ⅰ和Ⅱ的化合物3
另一優(yōu)選的類(lèi)胰蛋白酶抑制劑為表Ⅰ和Ⅱ的化合物15
另一優(yōu)選的類(lèi)胰蛋白酶抑制劑為表Ⅰ和Ⅱ的化合物21
本發(fā)明的類(lèi)胰蛋白酶抑制劑可用已知方法由易于得到的起始原料制得，下文將更詳細(xì)地描述。
取決于官能團(tuán)的性質(zhì)，本發(fā)明化合物可與各種無(wú)機(jī)和有機(jī)酸和堿形成加成鹽。形成這些鹽的無(wú)機(jī)酸如鹽酸、氫溴酸、硫酸、硝酸、磷酸等，有機(jī)酸如乙酸、丙酸、乙醇酸、丙酮酸、草酸、蘋(píng)果酸、丙二酸、琥珀酸、馬來(lái)酸、富馬酸、酒石酸、檸檬酸、苯甲酸、肉桂酸、扁桃酸、甲磺酸、乙磺酸、對(duì)甲苯磺酸、水楊酸等。
也可以通過(guò)用堿金屬或堿金屬堿如堿金屬氫氧化物和堿金屬醇鹽或堿土金屬或堿土金屬堿如堿土金屬氫氧化物和堿土金屬醇鹽處理羧酸基團(tuán)生成鹽。另外，也可由羧酸與有機(jī)堿生成鹽，有機(jī)堿如三甲胺、二乙胺、乙醇胺、哌啶、異丙胺、膽堿、咖啡因等。
這些鹽可用常規(guī)方法制備，例如使產(chǎn)物的游離酸或堿形式與一當(dāng)量或幾當(dāng)量合適的堿或酸在鹽不溶的溶劑或介質(zhì)中或在可以真空下或通過(guò)冷凍干燥除去的溶劑如水中反應(yīng)，或在合適的離子交換樹(shù)脂上使已有鹽的陽(yáng)離子交換為其它陽(yáng)離子。
Ⅲ．體外和體內(nèi)試驗(yàn)按照抑制類(lèi)胰蛋白酶的能力來(lái)篩選有效的抑制劑的體外試驗(yàn)方法在現(xiàn)有技術(shù)中是已知的。例如參見(jiàn)Sturzebecher等人(1992)Biol.Chem.Hoppe-Seyler373:1025-1030。一般地，這些試驗(yàn)測(cè)量類(lèi)胰蛋白酶誘導(dǎo)的肽基色原物質(zhì)的水解。下面將描述具體方法的細(xì)節(jié)。
另外，本發(fā)明化合物的活性可用大量哮喘動(dòng)物模型之一進(jìn)行體內(nèi)試驗(yàn)來(lái)評(píng)估。參見(jiàn)Larson,“Experimental Models of ReversibleAirway obstruction”,The Lung:Scientific Foundations,Crystal,West等人，eds.,Raven Press,New York,1991；Warner等人(1990)Am.Rev.Respir.Dis.141:253-257。理想的動(dòng)物模型應(yīng)能復(fù)制人哮喘的主要臨床和生理特征，包括對(duì)化學(xué)介質(zhì)和物理刺激的氣道強(qiáng)應(yīng)答性，用用于人哮喘的藥物(β-類(lèi)腎上腺素能藥、甲基黃嘌呤、皮質(zhì)類(lèi)固醇等)可使氣道阻塞逆轉(zhuǎn)；活化的白細(xì)胞的滲入產(chǎn)生氣道炎癥；慢性炎癥的變性變化，例如基膜變厚、平滑肌肥大和上皮損傷。可用作動(dòng)物模型的種類(lèi)包括小鼠、鼠、豚鼠、兔、狗和羊。所有動(dòng)物都有某些限制，但合適地選擇動(dòng)物模型取決于所涉及的問(wèn)題。
用豚鼠和狗特別是basenji-greyhounol雜交品種評(píng)估初始的哮喘應(yīng)答，它對(duì)于大量非變應(yīng)原物質(zhì)如乙酰甲膽堿和檸檬酸產(chǎn)生非特定的氣道強(qiáng)應(yīng)答性。在用蛔蟲(chóng)屬蛋白抗原激發(fā)后某些選定的羊表現(xiàn)出雙重應(yīng)答。在雙重應(yīng)答動(dòng)物中，在暴露后6-8小時(shí)，初始哮喘應(yīng)答(IAR)后產(chǎn)生后期哮喘應(yīng)答(LAR)。對(duì)于表現(xiàn)LAR的那些動(dòng)物在抗原激化后24小時(shí)對(duì)膽堿能激動(dòng)劑卡巴可的高敏反應(yīng)增加。
用變應(yīng)性模型來(lái)評(píng)估本發(fā)明化合物的抗哮喘的有效作用。在暴露于特定變應(yīng)原之前或之后給變應(yīng)性羊施用含有本發(fā)明化合物的氣霧化溶液的組合物證明這些組合物可大大減輕或排除后期哮喘應(yīng)答及隨后的強(qiáng)應(yīng)答性。
本發(fā)明的化合物也可用于治療其中類(lèi)胰蛋白酶活性導(dǎo)致病理狀態(tài)的其它免疫調(diào)節(jié)的炎癥。這些疾病包括與肥大細(xì)胞有關(guān)的炎癥如類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、類(lèi)風(fēng)濕性脊椎炎、骨關(guān)節(jié)炎、痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎和其它關(guān)節(jié)炎疾病、腸炎、消化潰瘍和各種皮膚病。
本發(fā)明化合物用于治療大多數(shù)免疫調(diào)節(jié)的炎癥的功效可用體外或體內(nèi)試驗(yàn)方法來(lái)評(píng)估。因此，本發(fā)明化合物的抗炎效果可用本領(lǐng)域公知的試驗(yàn)確定，例如逆轉(zhuǎn)被動(dòng)的阿圖期反應(yīng)(RPAR)-PAW方法(參見(jiàn)Ganguly等人(1992)U.S.5,126,352)。確定本發(fā)明化合物治療各種皮膚病如高增生性皮膚病的治療作用的試驗(yàn)在本領(lǐng)域中是公知的，例如花生器烯酸鼠耳試驗(yàn)(id)。按照Chiu等人(1984)Archives Internation-ales de Pharmacodynamie et de Therapie270:128-140所述的方法來(lái)評(píng)估本發(fā)明化合物的抗?jié)兓钚浴?br> Ⅳ．體內(nèi)給藥根據(jù)本發(fā)明，給患有免疫調(diào)節(jié)的炎癥的病人服用治療或藥物有效量的類(lèi)胰蛋白酶抑制劑特別是式Ⅰ化合物。根據(jù)一個(gè)具體實(shí)施方案，本發(fā)明的組合物可用于預(yù)防或改善哮喘。在使用本發(fā)明組合物治療哮喘時(shí)，在暴露于變應(yīng)原或其它突發(fā)因素之前或如此暴露之后預(yù)防性地服用本發(fā)明化合物。本發(fā)明化合物特別用于改善在季節(jié)性和多年生的鼻炎中可見(jiàn)的后期組織的破壞。本發(fā)明的另一方面涉及預(yù)防和治療與肥大細(xì)胞有關(guān)的其它免疫調(diào)節(jié)的炎癥如蕁麻疹和血管水腫、溫疹性皮炎(特應(yīng)性皮炎)、過(guò)敏癥以及高增生性皮膚病、消化潰瘍等。
含有本發(fā)明化合物的組合物可以預(yù)防性的和/或治療性的形式給藥。在治療應(yīng)用中，給已經(jīng)患有上述疾病的病人服用治愈或至少部分抑制疾病癥狀及其并發(fā)癥有效量的組合物。足以達(dá)到上述目的的用量被定義為“治療有效量或劑量”。本文所用的有效量取決于疾病的嚴(yán)重程度和病期、以前的治療、病人的健康狀況、對(duì)藥物的反應(yīng)以及主治醫(yī)師的診斷。
在預(yù)防應(yīng)用中，給敏感的或處于特殊疾病危險(xiǎn)期的不敏感的病人服用含有本發(fā)明化合物的組合物。如此的用量被定義為“預(yù)防有效量或劑量”，在此應(yīng)用中，精確的用量也取決于病人的健康狀況、體重等。
一旦病人的狀況得到改善，如果必要的話，服用維持劑量。接著根據(jù)癥狀減少服用的劑量或頻率或兩者至能保持改善的狀況的水平。當(dāng)癥狀已減輕到所需程度則可停止治療。然而基于病癥的復(fù)發(fā)，病人需要長(zhǎng)期間治療。
一般地，類(lèi)胰蛋白酶抑制劑的合適的有效劑量為0.1至1000毫克(mg)/受體/天，優(yōu)選1至100mg/天。所需劑量?jī)?yōu)選以一、二、三、四或更多個(gè)亞劑量形式存在，在一天內(nèi)接合適的間隔服用亞劑量。這些亞劑量可以單位劑型服用。例如每單位劑型含有5至1000mg優(yōu)選10至100mg活性成份。
在這些治療中所用的組合物可采用各種劑型。它們包括固體、半固體和液體劑型，如片劑、丸劑、粉劑、液體溶液或懸浮液、脂質(zhì)體、注射液和灌注液。優(yōu)選的劑型取決于預(yù)定的給藥方式和治療應(yīng)用。
盡管可以單獨(dú)服用本發(fā)明的活性成份，但優(yōu)選作為藥物制劑的一部分存在。本發(fā)明的制劑包括至少一種治療上或藥物上有效量的本發(fā)明化合物或抑制劑與一種或多種可藥用的或可治療用的載體以及任選的其它治療成份。各種考慮已被描述了，例如在Gilman等人(eds)(1990)Goodman&Gilman′s:The Pharmacological Bases ofTherapeutics,8th Ed.,Pergamon Press和Remington＇s Supra中。在該文獻(xiàn)中討論了給藥方法例如口服、靜脈內(nèi)、腹膜內(nèi)或肌內(nèi)給藥及其它方法?？伤幱幂d體包括水、鹽水、緩沖液和在the Merck Index,Merck&Co.Rahway,NJ.中描述的其它化合物。
一般地，當(dāng)本發(fā)明化合物用于治療哮喘或變應(yīng)性鼻炎時(shí)，將它們配制成氣霧劑。術(shù)語(yǔ)“氣霧劑”包括本發(fā)明化合物的能產(chǎn)生氣體的懸浮介質(zhì)、它能被吸入細(xì)支氣管或鼻通道。特別地，氣霧劑包括本發(fā)明化合物的能產(chǎn)生氣體的小滴懸浮液，它們被制備在計(jì)量吸入器或噴霧器中。氣霧劑還包括懸浮在空氣或其它載體氣體中的本發(fā)明化合物的干粉狀組合物，綜通過(guò)從吸入器中吸入給藥。
對(duì)于用于制備本發(fā)明氣霧劑的溶液，優(yōu)選的本發(fā)明化合物的濃度范圍為0.1-1006毫克(mg)/毫升(mL)，較優(yōu)選為0.1-30mg/mL，最優(yōu)選為1-10mg/mL。溶液通常用生理上允許的緩沖液如磷酸鹽或碳酸氫鹽緩沖。通常的pH范圍為5至9，優(yōu)選6.5至7.8，較優(yōu)選7.0至7.6。一般加入氯化鈉將滲透性調(diào)節(jié)至生物范圍，優(yōu)選在10％等滲性內(nèi)。為產(chǎn)生氣霧劑吸入的這些溶液的制劑已被討論在Remington＇s Pharmaceutical Sciences中，也可參見(jiàn)Ganderton&Jones,Drug Delivery to the Respiratory Tract,Ellis Horwood(1987)；Gonda(1990)Critical Reviews in Therapeutic Drug Carrier Systems6:273-313；和Raeburn等人(1992)J.pharmacol.Toxicol.Methods27:143-159。
用通常用于制備氣霧吸入藥劑的公知方法將本發(fā)明化合物的溶液轉(zhuǎn)化為氣霧劑。一般地，這些方法包括通常用惰性載體氣體加壓或提供一種使溶液的容器加壓裝置，使加壓的氣體通過(guò)細(xì)管口，從而使溶液的小滴推入到需要服用藥物的動(dòng)物的口和氣管中。接管一般安在管口的出口上，以便容易給藥到口和氣管中。
在一實(shí)施方案中，本發(fā)明的裝置包括使本發(fā)明化合物的溶液與在哮喘療法中用于產(chǎn)生氣霧劑的常規(guī)裝置相連或裝于其中，常規(guī)裝置如計(jì)量吸入器、噴射噴霧器或超聲噴霧器。這些裝置任選包括安在管口上的接管。
在用于治療變應(yīng)性鼻炎的實(shí)施方案中，本發(fā)明的裝置包括使本發(fā)明化合物的溶液裝于鼻用噴霧器中。
含有本發(fā)明化合物和任選的賦形劑的干粉劑為本發(fā)明的另一實(shí)施方案。它可通過(guò)含有上述粉劑的藥物粉劑吸入器給藥。
當(dāng)然，本發(fā)明的方法可與治療免疫調(diào)節(jié)的炎癥特別是哮喘的其它藥劑結(jié)合使用。β-烊腎上腺素能促效劑可特別用于這些結(jié)合中，因?yàn)樗軠p輕初始哮喘應(yīng)答癥狀，而本發(fā)明化合物能減輕后期哮喘應(yīng)答。在這些溶液中優(yōu)選的β-類(lèi)腺素能促效劑包括用于減輕哮喘的任何常用的β-促效劑，如舒喘寧、叔丁喘寧、福莫忒醇(formoterol)、芬忒醇(fanoterol)或prenaline。
與本發(fā)明化合物結(jié)合使用的其它藥劑包括抗膽堿藥如溴化異丙托品幫消炎的皮質(zhì)炎固醇(腎上腺皮質(zhì)類(lèi)固醇)如氯地米松、去炎松、flurisolide或地塞米松。
本發(fā)明的化合物也可用于治療哺乳動(dòng)物的免疫調(diào)節(jié)的炎癥皮膚病如蕁麻疹和血管水腫、濕疹性皮炎以及高增生性皮膚病如牛皮癬。通過(guò)式Ⅰ化合物的局部給藥，可望減輕癥狀。因此患有免疫調(diào)節(jié)的炎癥皮膚病的病人可望減輕鱗片、紅斑、斑塊大小、瘙癢以及與皮膚病有關(guān)的其它癥狀。成功地治療各個(gè)個(gè)體病人所需的藥物劑量和時(shí)間是不同的，但本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)能認(rèn)識(shí)到這些不同并可根據(jù)治療過(guò)程調(diào)節(jié)。
本發(fā)明還包括皮膚局部應(yīng)用的制劑，它包括式Ⅰ化合物一般濃度為0.0001％至10％和無(wú)毒可藥用的局部用的載體。這些局部制劑可通過(guò)使本發(fā)明的活性成份與局部干劑、液劑、乳油劑和氣霧劑中常用的常規(guī)藥物稀釋劑和載體混合來(lái)制備。例如，軟膏劑和乳油劑可用水基或油基并加入合適的增稠劑和/或凝膠劑來(lái)配制。這些基質(zhì)包括水和/或油如液體石脂或植物油如花生油或蓖麻子油。根據(jù)基質(zhì)的性質(zhì)可用的增稠劑包括軟石臘、硬脂酸鋁、十六烷基十八烷醇、丙二醇、聚乙二醇、羊毛脂、氫化的羊毛脂、蜂蠟等。
洗液可用含水的或油狀基質(zhì)配制，它一般還包括一種或多種如下成份穩(wěn)定劑、乳化劑、分散劑、懸浮劑、增稠劑、著色劑、香料等。
粉劑可借助于任何合適的粉劑基質(zhì)如滑石、乳糖、淀粉等制備。滴劑可用含水基質(zhì)或非水基質(zhì)配制，它還可包括一種或多種分散劑、懸浮劑、加溶劑等。
本發(fā)明的局部藥物組合物還包括一種或多種防腐劑或制菌劑例如羥基苯甲酸甲酯、羥基苯甲酸丙酯、氯甲酚、氯化芐烷銨等。局部藥物組合物也可含有其它活懷成份如抗微生物劑特別是抗菌素、麻醉劑、止痛藥和止癢藥。
本發(fā)明的化合物也可用于治療消化潰瘍。更具體地，它們表現(xiàn)出化學(xué)治療活性，其活性使得它們能減輕消化潰瘍病的癥狀和抑制潰瘍形成，并促使胃和/或十二批腸潰瘍的愈合。本發(fā)明化合物可與其它治療劑結(jié)合使用，例如消炎藥和/或止痛藥如阿斯匹林、消炎痛、苯丁唑酮、異丁苯丙酸、甲氧萘丙酸、痛滅啶等。
對(duì)于預(yù)防和/或治療本發(fā)明藥物組合物可通過(guò)腸胃外或口服給藥。取決于給藥方法，本發(fā)明藥物組合物可用各種單位劑型給藥。例如，適合于口服的單位劑型包括粉劑、片劑、丸劑、膠囊劑和糖錠劑。
本發(fā)明的藥物組合物可以靜脈內(nèi)給藥。因此，本發(fā)明提供了靜脈內(nèi)給藥組合物，它包括溶于或懸浮于可接受載體優(yōu)選含水載體中的化合物和溶液。可使用各種含水載體例如水、緩沖水、0.4％鹽水等。這些組合物有時(shí)可用常規(guī)公知的滅菌方法滅菌或進(jìn)行無(wú)菌過(guò)濾。將所得的水溶液包括使用，例如進(jìn)行凍干，在施用之前將凍干的制劑與無(wú)菌水溶液混合，為達(dá)到近似的生理?xiàng)l件，這些組合物可含有可藥用的輔助物質(zhì)如PH調(diào)節(jié)和緩沖劑、強(qiáng)狀調(diào)節(jié)劑、溫潤(rùn)劑等，例如乙酸鈉、乳酸鈉、氯化鈉、氯化鉀、氯化鈣、脫水山梨糖醇單月桂酸酯、三乙醇胺油醇鹽等。
對(duì)于固體組合物，可使用常規(guī)無(wú)毒固體載體，它包括藥用級(jí)的甘露醇、乳糖、淀粉、硬脂酸鎂、糖精鈉、滑石、纖維素、葡萄糖、蔗糖、碳酸鎂等。對(duì)于口服給藥，可藥用無(wú)毒組合物可通過(guò)加入任何常用的賦形劑來(lái)制備，例如前面所列的那些載體，且通常含有0.1-95％活性成份，優(yōu)選大約20％。
為了使本文描述的發(fā)明被充分理解，列舉出下列實(shí)施例。當(dāng)然這些實(shí)施例僅用于說(shuō)明，而不構(gòu)成對(duì)本發(fā)明的任何限制。
實(shí)驗(yàn)Ⅰ．概述本文未描述的起始原料可從市場(chǎng)上購(gòu)買(mǎi)、是已知的或可按本領(lǐng)域公知的方法制備。式Ⅰ化合物可按本領(lǐng)域公知的方法用固體或溶液相合成技術(shù)制備。制備式Ⅰ化合物的起始原料在本領(lǐng)域中是公知的或可按本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的方法制備。例如多肽的固相合成技術(shù)被描述在Solid Phase Peptide Synthesis:A Practical Approach,(eds.E.Atherton&R.C.sheppard)IRL Press at Oxford Unirersity Press(1989)和Merrifield,J.Amer.Chem.Soc.85:2149-2156(1963)中。肽偶合化學(xué)也被描述在The Peptides,Vol.l,(eds.Gross,E.,&.J.Meienhofer)。Academic Press Orlando(1979)中。其它技術(shù)包括Geysen等人，Nature(1991)354:84-86中所述的方法。
在本文描述的制備本發(fā)明化合物的方法中，需要保護(hù)基團(tuán)是有機(jī)化學(xué)領(lǐng)域技術(shù)人員公知的。因此，本文所述的方法必含有使用合適的保護(hù)基，盡管沒(méi)有明確說(shuō)明。
如果需要的話，可用任何合適的分離或純化方法進(jìn)行本文所述的化合物和中間體的分離和純化。例如過(guò)濾、萃取、結(jié)晶、柱色諸、薄層色譜或厚層色譜、高壓液相色譜或這些方法的結(jié)合。合適的分離和離析方法的具體說(shuō)明參見(jiàn)下面的實(shí)施例。當(dāng)然也可使用其它等效的分離或離析方法。
Sakaguchi試驗(yàn)用于測(cè)定精氨酸和含有精氨酸的肽，參見(jiàn)Stewart&Young“Solid Phase Peptide Synthesis”,2d.Ed.,PierceChemical Company,P.114。制備含有0.01％α-萘酚和5％脲的95％乙醇溶液Ⅰ。將2g溴溶于100ml8％氫氧化鈉水溶液中制備溶液Ⅱ。向溶液Ⅰ中加入5片氫氧化鈉。將待分析的試樣點(diǎn)在薄層色譜(TLC)板上。然后用溶液Ⅰ展開(kāi)TLC板。將TLC板在空氣中干燥，然后用溶液Ⅱ展開(kāi)。紅點(diǎn)表明有氨基亞氨基甲烷基團(tuán)存在。Ⅱ．式Ⅰ化合物的固相合成A．表Ⅰ和Ⅱ的化合物3的制備將4-(2′,4′一二甲氧基苯基芴基甲氧羰基(Fmoc)-氨基甲基)苯氧基樹(shù)脂(Rink樹(shù)脂；Bachem,CA；3.5g，共載0.289毫當(dāng)量/克(meq/g)1.01mmol)懸浮于30ml1∶1(v/v)的N,N一二甲基甲酰胺(DMF)含有30％(體積)哌啶的甲苯的溶液中。將反應(yīng)混合物攪拌5分鐘，然后過(guò)濾。再加入哌啶溶液(30ml)，然后再將混合物攪拌5分鐘。過(guò)濾后，用DMF(6x)和二氯甲烷(6x)依次洗滌樹(shù)脂顆粒。
將Fmoc-L-脯氨酸(Milligen；6.06mmol)，苯并三唑-1-基-氧-三(二甲氨基)六氟磷酸鹽(BOP、Novabiochem；6.06mmol)和1-羥基苯并三唑(HOBT；Aldrich；6.06mmol)溶于大約30mlDMF中。然后將所得的澄清溶液加到Rink樹(shù)脂中，并將漿狀液攪拌(用氮?dú)夤呐?4小時(shí)。過(guò)濾反應(yīng)混合物，并按上述方法洗滌樹(shù)脂顆粒。按上述方法用哌啶除去Fmoc基團(tuán)。
將Fmoc-L-精氨酸(PMC)(Milligen；6.06mmol),BOP(6.06mmol)和HOBT(6.06mmol)的DMF(30ml)溶液加到樹(shù)脂顆粒中，然后將漿狀液攪拌4小時(shí)，然后按上述方法過(guò)濾、洗滌、用哌啶處理并再次洗滌。
加入1-羥基-2-萘甲酸(Aldrich；1.14g,6.06mmol),1,3-二異丙基碳化二亞胺(DIPCDI；Aldrich；0.949ml,6.06mmol)和HOBT(0.819g,6.06ml)的DMF(45mL)溶液，將反應(yīng)混合物攪拌(機(jī)械攪拌桿)7小時(shí)。過(guò)濾、洗滌并用哌啶處理(按上述方法)后，依次用DMF(6x)、二氯甲烷(6x)和甲醇(6x)洗滌樹(shù)脂。將樹(shù)脂懸浮于甲醇中，并攪拌(機(jī)械攪拌桿)過(guò)夜(15小時(shí))。將樹(shù)脂過(guò)濾并用甲醇洗滌兩次。
然后將白色自由流動(dòng)的固體懸浮于三氟乙酸(TFA)∶苯甲醚∶水(90∶5∶5,30ml)溶液。樹(shù)脂馬上變?yōu)樘壹t色，然后在1-2分鐘內(nèi)顏色變?nèi)艹蔀樯罴t色。攪拌5分鐘后，過(guò)濾反應(yīng)混合物。用新的分裂試劑重復(fù)上述步驟2次，只是每次重復(fù)的反應(yīng)時(shí)間延長(zhǎng)至10分鐘。
合并TFA溶液，將所得的澄清橙色溶液在室溫下放置3.5小時(shí)。真空濃縮得到淺黃色油狀物，并在真空(＜1乇)下保持3小時(shí)。將油狀物溶于50％乙晴水溶液(100ml)并冷凍干燥得到灰白色固體的粗產(chǎn)物(471mg)。
HPLC分析(Polymer Labs100A PLRP柱，1.0×150mm，用20至45％乙腈線性梯度洗脫13分鐘，流速0.1mL/min)，表明粗產(chǎn)物基本為單一化合物(保留時(shí)間為10.35分鐘，UV吸收＞98％)，通過(guò)HPLC用C18硅膠柱(Vydac；22×250mm,15-20μm,300A，用20至35％乙腈線性梯度洗脫30分鐘，流速10mL/min)進(jìn)行純化。需要多次注射30-35mg，合并同樣的餾分(保留時(shí)間約為44-48分鐘)并冷凍干燥得到松散的白色固體(351mg)，經(jīng)HPLC分析為單一化合物。
電噴質(zhì)譜(計(jì)算的分子量=440.49，實(shí)測(cè)值M+1=441.1)和NMR譜(質(zhì)子和13C)與預(yù)期的結(jié)構(gòu)一致。
1H NMR(CD3OD)&7.89(d,J=8Hz,1H),7.78(d,J=6Hz,1H),7.76(d,J=6Hz,1H),7.57(dt,J=8,1Hz,1H),7.48(dt,J=8,1Hz,1H),7.29(d,J=8Hz,1H),-4.95(模糊，1H),4.49(dd,J=8,5Hz,1H),3.97(dt,J=10,7Hz,1H),3.73(dt,J=10,7Hz,1H),3.23(t,J=7Hz,2H),2.20(m,1H),1.7-2.2(m,8H)B．其它式Ⅰ化合物的制備按照上述部分A的方法，用下列化合物代替1-羥基-2-萘甲酸2-羥基-4-甲基苯甲酸；3-羥基-2-喹喔啉甲酸；3-羥基-2-萘甲酸；2-羥基-1-萘甲酸；3-羥基-2-吡啶甲酸；4-羥基-7-甲基-3-(1,5一二氮雜萘)甲酸；2-羥基-3-吡啶甲酸；2-羥基苯甲酸；2,5-二羥基苯甲酸；和2-羥基-5-苯基苯甲酸(參見(jiàn)下面E)制得下列化合物。
表Ⅰ和Ⅱ的化合物2；表Ⅰ和Ⅱ的化合物9；表Ⅰ和Ⅱ的化合物14；表Ⅰ和Ⅱ的化合物15；表Ⅰ和Ⅱ的化合物16；表Ⅰ和Ⅱ的化合物17；表Ⅰ和Ⅱ的化合物18；表Ⅰ和Ⅱ的化合物19；表Ⅰ和Ⅱ的化合物20；以及表Ⅰ和Ⅱ的化合物21；C．其它式Ⅰ化合物的制備按照上述部分A的方法。用Fmoc-D-脯氨酸代替Fmoc-L-脯氨酸。得到表Ⅲ的化合的12。
D．其它式Ⅰ化合物的制備表Ⅰ和Ⅱ的化合物13的制備是按類(lèi)似于在上述部分A中用于偶合Fmoc-L-脯氨酸的方法，首先使Fmoc-L-苯丙氨酸與樹(shù)脂偶合，然后除去Fmoc基團(tuán)，使苯丙氨酸與Fmoc-L-脯氨酸偶合，用上述部分A所述的方法完成化合物13合成的其余部分。
同樣，表Ⅰ和Ⅱ的化合物6和7的制備包括使Fmoc-哌啶-3-甲酸或Fmoc-哌淀-4-甲酸分別與樹(shù)脂偶合，除去Fmoc基團(tuán)，然后與Fmoc-L-脯氨酸偶合，用上述部分A所述的方法完成合成的其余部分。
E．2-羥基-5-苯基苯用酸的制備按下列方法合成2-羥基-5-苯基苯甲酸。將四氫吡喃(THF)保護(hù)的4-苯基苯酚(474mg.2mmol，用Green&Wats pp.31-34所述的標(biāo)準(zhǔn)方法由4-苯基苯酚制備)的無(wú)水THF(5ml)溶液冷卻至-78℃。用正丁基鋰(2ml1.6M的己烷溶液)處理。攪拌反應(yīng)混合物，并溫?zé)嶂潦覝?，其間形成褐色懸浮液。2小時(shí)后，將反應(yīng)混合物冷卻至-78℃，用過(guò)量的無(wú)水CO2處理幾分鐘，攪拌反應(yīng)混合物并溫?zé)嶂潦覝亍?小時(shí)后，將反應(yīng)混合物在乙醚和1NNaOH水溶液間分配。用冰將水層冷卻至0℃，用1NHCl水溶液酸化至pH2。然后用二氯甲烷分配水溶液。用硫酸鎂干燥有機(jī)層。真空濃縮得到灰白色固體的粗產(chǎn)物(258mg,2-羥基-5-苯基苯甲酸)。粗產(chǎn)物的NMP譜與預(yù)期的結(jié)構(gòu)一致。
1H NMP(DMSO-d6)&8.04(d,J=3Hz,1H),7.76(dd,J=9,3Hz,1H),7.62(d,J=7Hz,2H),7.44(t,J=7Hz,2H),7.32(t,J=7Hz,1H),7.00(d,J=9Hz,1H)。
質(zhì)量計(jì)算值466.5，質(zhì)量實(shí)測(cè)值467.2,LC用25-45％乙腈梯度洗脫13分鐘。LC保留時(shí)間為3.5分鐘。產(chǎn)物無(wú)需進(jìn)一步純化則可使用。Ⅲ．式Ⅰ化合物的溶液相合成A．表Ⅰ和Ⅲ的化合物10的制備向在鹽/冰浴中冷卻至-5℃的20g(L)-苯丙氨酸中加入74ml濃硫酸。使反應(yīng)混合物的溫度達(dá)到平衡，然后在5分鐘內(nèi)滴加入9.4ml濃鹽酸。將反應(yīng)混合物攪拌30分鐘，然后加入700ml碎冰/水。用濃氫氧化銨調(diào)節(jié)pH至8-9。使溶液在室溫下結(jié)晶。然后在4℃冷卻過(guò)液。用硬化的濾紙收集淺黃色晶狀產(chǎn)物，用冷水洗滌并干燥。使產(chǎn)物在熱水中重結(jié)晶，蒸發(fā)濾液并重結(jié)晶(2x)，總產(chǎn)率為55％。
MP:218-222℃(粗產(chǎn)物)。TLC:Rf(F)0.18.NMR:(D2O/NaOD),r2.99(dd,J=13.4,7.2Hz,1H),3.10(dd,J=13.4,6.0Hz,1H),3.57(dd,J=7.2,6.0Hz,1H),7.48(d,J=8.6Hz,2H),8.21(d,J=8.7Hz,2H)。
叔丁氧羰基(BOC)保護(hù)的氨基酸可用常規(guī)方法制備。參見(jiàn)Greene&Wats Protectine Groups in Organic synthesis,2nd E2.,JohnWiley&Sons,Inc.:New York,pp.327-328(1991)。
向-20℃的BOC保護(hù)的對(duì)硝基苯丙氨酸(3.00g,9.67mmol)的無(wú)水二氯甲烷(5ml)溶液中加入N-甲基嗎啉(NMM,1.07ml,9.67mmol)，接著加入氯甲酸異丁酯(1.26ml,9.67mmol)。將反應(yīng)混合物在-20℃下攪拌15分鐘。然后向混合物中加入團(tuán)體甲基-L-脯氨酸鹽酸鹽(L-Pro-OMe,1.60g,9.67mmol)，接著再加入NMM(1.07ml,9.67 mmol)。在-20℃下攪拌一小時(shí)并在室溫下攪拌一小時(shí)后，真空濃縮反應(yīng)混合物然后用乙酸乙酯稀釋。乙酸乙酯溶液用10％檸檬酸水溶液，水和鹽水洗滌，用硫酸鎂干燥并真空濃縮。柱色譜純化后得到2.4g產(chǎn)物(＞60％產(chǎn)率)。
使用常規(guī)條件用HCl的二惡烷溶液處理除去BOC基團(tuán)。參見(jiàn)，Greene&Wuts，同上，pp328-329。向1-羥基-2-萘甲酸(160mg,0.84mmol)的二氯甲烷和N,N-二甲基甲酰胺(1∶1,3ml溶液中加入1-羥基苯并三唑(159mg,1.17mmol)。將溶液冷卻至0℃，加入1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳化二亞胺鹽酸鹽(EDCI,161mg,0.84mmol)。將溶液在0℃攪拌45分鐘后，加入上面制備的二肽(300mg,0.84mmol)溶液，接著加入NMM(93μl,0.84mmol)。將反應(yīng)混合物在0℃(攪拌1小時(shí)，在室溫?cái)嚢?5分鐘。然后將反應(yīng)混合物真空濃縮，用乙酸乙酯和水稀釋。分離有機(jī)層，用水然后用鹽水洗滌(4x)，干燥并真空濃縮。色譜純化后得到偶合產(chǎn)物(300mg,73％)。
向偶合產(chǎn)物(410mg,0.83mmol)的乙酸乙酯(20ml)溶液中加入冰乙酸(10滴)和10％鈀/活性炭(100mg)。將溶液氫化5小時(shí)，然后用硅藻土過(guò)濾反應(yīng)混合物，真空濃縮溶液得到375mg(98％)產(chǎn)物，無(wú)需進(jìn)一步純化則可使用。
向上面氫化反應(yīng)的產(chǎn)物(200mg,0.45mmol)的無(wú)水甲醇(10ml)溶液中加入甲脒磺酸(118mg,0.95mmol，通過(guò)按照Maryanoff等人(1986),J.Org.Chem.1082概述的方法，氧化從市場(chǎng)購(gòu)買(mǎi)的甲脒亞磺酸而制備)。將反應(yīng)混合物攪拌3天，真空濃縮反應(yīng)混合物，產(chǎn)物通過(guò)色譜分離(用甲醇∶二氯甲烷洗脫)得到17mg所需產(chǎn)物，即表Ⅲ的化合物10。Ⅳ．式Ⅰ化合物的交替溶液相合成A．1-芐氧基-2-萘甲酸(2.247g)的亞硫酰氯(15ml)溶液回流4小時(shí)。真空蒸發(fā)過(guò)量的試劑。殘余物用無(wú)水DMF(9ml)稀釋并濃縮至大約2ml。向該溶液中加入4-二甲氨基吡啶(1.02g)。將混合物在室溫下攪拌過(guò)夜。然后將所得的吡啶鎂配合物加到攪拌著的硝基-L-精氨酸(1.77g)，四甲基胍(1ml)和氯化鋰(4.56g)的DMF(60ml)溶液中。混合物在室溫下攪拌48小時(shí)。真空蒸發(fā)大部分DMF，將殘余物在1.5當(dāng)量(N)HCl水溶液和乙酸乙酯間分配。合并的有機(jī)層用飽和氯化鈉水溶液洗滌并用硫酸鎂干燥。真空濃縮得到粗產(chǎn)物(3.5g,1-芐氧基-2-萘甲?；?N-硝基-L-精氨酸)。TLC產(chǎn)物的Rf為0.22(用硅膠板并用10％甲醇/乙酸的氯仿溶液洗脫)。產(chǎn)物無(wú)需進(jìn)一步純化則可使用。
將1-芐氧基-2-萘甲?；?N-硝基-L-精氨酸(150mg)的無(wú)水DMF(5mg)溶液冷卻至-25℃，并用氯甲酸異丁酯(0.053mg)處理。攪拌反應(yīng)混合物并溫?zé)嶂潦覝亍?0分鐘后。加入固體L-脯氨酸酰胺(以其HCl鹽形式，65.9mg)。將混合物攪拌16小時(shí)，然后用乙酸乙酯稀釋。乙酸乙酯溶液用5％檸檬酸水溶液、飽和碳酸氫鈉水溶液和飽和氯化鈉水溶液洗滌，并用硫酸鎂干燥。真空濃縮溶液，用乙醇(40ml，含有10％甲醇和10％乙酸)稀釋殘余物，用10％鈀/炭(10mg)在52磅1平方英寸psi)下氫化直至反應(yīng)完成(用硅膠進(jìn)行TLC，用氯仿∶甲醇9∶1洗脫)。正如快速流動(dòng)點(diǎn)消失所示。反應(yīng)混合物用硅藻土過(guò)濾，用乙醇和甲醇洗滌。真空濃縮混合物，用高壓液相色譜純化得到1-羥基-2-萘甲?；?L-精氨酰基-L-脯氨酸酰胺(41mg，電噴質(zhì)譜M+1=441)，以其三氟乙酸鹽分離。
B．表Ⅲ的化合物1的制備按照上述部分A的方法，用2-芐氧基-1-萘甲酸代替1-芐氧基-2-萘甲酸，用肌氨酸酰胺代替L-脯氨酸酰胺，制得表Ⅲ的化合物1。
C．其它式Ⅰ化合物的制備按照上述部分B的方法，用下列化合物代替肌氨酸酰胺L-脯氨酸-N,N-二甲基酰胺；L-脯氨酸甲酯；以及反式-4-羥基-L-脯氨酸甲酯；制得下列化合物表Ⅰ和Ⅱ的化合物5；表Ⅰ和Ⅱ的化合物8；以及表Ⅲ的化合物4。Ⅴ．物理數(shù)據(jù)表Ⅰ
1．用Finnigan電噴質(zhì)譜儀測(cè)定所有質(zhì)量，除非另有說(shuō)明。
2．在所有情況下使用由乙腈和水組成的二元梯度體系。所有洗脫劑含有0.1％三氟乙酸。A:20-45％乙腈，歷時(shí)13分鐘。BV:10-35％乙腈，歷時(shí)13分鐘。C:5-95％乙腈，歷時(shí)45分鐘。D:2-95％乙腈，歷時(shí)10分鐘。E:25-45％乙腈，歷時(shí)13分鐘。
3．試驗(yàn)物質(zhì)為非對(duì)映體的混合物。
4．用Biolon質(zhì)譜儀測(cè)定質(zhì)量，其值表示M+。Ⅵ．體外類(lèi)胰蛋白酶抑制試驗(yàn)將對(duì)類(lèi)胰蛋白酶試驗(yàn)的化合物(大約1mg)溶于二甲亞砜(DMSO)，并用含有50mMn Tris-HCL(pH8.2),100mM NaCl和0.05％Tween-20的緩沖液稀釋至1∶10。用補(bǔ)加10％DMSO的同樣緩沖液由初始的稀釋液制備7份另外的3倍稀釋液。將8份稀釋液的每1份的等分試樣(50μl)依次轉(zhuǎn)到96孔U底微型滴定板的各孔中。然后將類(lèi)胰蛋白酶(25μl；0.5nm最終濃度)加到各孔中，并將試樣混合，在室溫下在室光(即在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中在室內(nèi)叮得的光)或在控制的“光照”或“黑暗”條件下培養(yǎng)1小時(shí)。本文的“光照條件”是指熒光燈發(fā)出的400≌1500英尺燭光的光照度，本文的“黑暗”是指用鋁箔遮住試樣容器。然后加入合成的三肽底物，甲苯磺?；?Glyprolys-對(duì)硝基苯胺(25μl；0.5mM最終濃度)開(kāi)始酶反應(yīng)，馬上將微型滴定板轉(zhuǎn)移到UU/MAX動(dòng)力學(xué)微板記錄儀(Moleculardevices)，接著在分光光度為405nm時(shí)水解色原底物5分鐘。在這些條件下酶試驗(yàn)通常得到線性進(jìn)度曲線。用稱(chēng)為“Batchki”的動(dòng)力學(xué)分析上程度(或從Biokin Led.,Madison WI購(gòu)買(mǎi))由進(jìn)度曲線計(jì)算出初速值，該初速值用于確定定每抑制的表觀抑制常數(shù)。上述程序被設(shè)計(jì)完成非線性數(shù)據(jù)的回歸和曲線擬合。
表Ⅱ到出了幾個(gè)本發(fā)明化合物所測(cè)的抑制常數(shù)(K′i,μM)，這些化合物中的R1為氫；R2為氫；R3為-(CH2)3-NH-(C=NH)-NH2；R4和R5與它們所連的氮和碳一起形成5元雜環(huán)；以及R6為氫。根據(jù)本發(fā)明，當(dāng)化合物的K′i小于1000μM時(shí)，化合物被稱(chēng)為“活性的”或有效的類(lèi)胰蛋白酶抑制劑。與Ki不同，K′i不是酶抑制劑配合物的一個(gè)真實(shí)無(wú)關(guān)常干非競(jìng)爭(zhēng)性抑制劑，Ki′等Ki；對(duì)于競(jìng)爭(zhēng)性和非競(jìng)爭(zhēng)性抑制劑，Ki′與Ki成正比。
將試驗(yàn)化合物的試驗(yàn)介質(zhì)溶液曝光可以降低Ki′。通常，試驗(yàn)條件是光敏感的，室內(nèi)光照試制變化可影響試驗(yàn)的重復(fù)性。由于這種潛在的誤差來(lái)源，一些試驗(yàn)則在黑暗條件下進(jìn)行。在表Ⅱ和Ⅲ中所到的Ki沒(méi)有括號(hào)的是在室光條件下測(cè)定的。有括號(hào)的Ki′是在上面定義的“黑暗”條件下測(cè)定的。帶有星號(hào)(*)的Ki′是在上面定義的“光照”條件下(即在400-450英尺燭光的光照度下)測(cè)定的。
表Ⅱ
表Ⅲ列出了幾個(gè)本發(fā)明化合物所測(cè)的抑制常數(shù)(Ki′,μM)。根據(jù)本發(fā)明，當(dāng)化合物的Ki′小于1000μM時(shí)，化合物被稱(chēng)為“活性的”或有效的類(lèi)胰蛋白酶抑制劑。
表Ⅲ
Ⅶ．表Ⅰ和Ⅱ的化合物抑制類(lèi)胰蛋白酶的其它特性A．pH依賴性在下列四種不同pH的緩沖體系中試驗(yàn)化合物3對(duì)類(lèi)胰蛋白酶的抑制120mM NaCl,2.7mM KCl,0.13mM NaH2PO4,0.896mM Na2HPO4。所用的最終緩沖體系包括0.05％Tween-20。表Ⅳ表示化合物3在不同的pH下的Ki′(μM)。
表Ⅳ<
B．pH7.5時(shí)的最佳試驗(yàn)本發(fā)明人已發(fā)現(xiàn)在下列緩沖體系中化合物3對(duì)光較不敏感120mM NaCl,2.7mM KCl,0.13mM NaH2PO4,0.896mM Na2HPO4。和0.05％Tween-20pH為7.5。因此，在完成上述試驗(yàn)步驟時(shí)，化合物3的稀釋和類(lèi)胰蛋白酶的加入均可在室光室溫(22-26℃)下進(jìn)行。在加入底物之前，用鋁箔遮住試驗(yàn)板培養(yǎng)1小時(shí)，該培養(yǎng)也可在室光下進(jìn)行。稀釋和加入類(lèi)胰蛋白酶的步驟必須在5分鐘內(nèi)完成。另外，化合物3必須溶于DMSO中。Ⅷ．體內(nèi)試驗(yàn)在這些研究中使用哮喘的變應(yīng)性羊模型。在此之前已公開(kāi)了這些方法(參見(jiàn)Abraham等人，(1983)Am.Rev.Respir.Dis.128:83-844；Allegra等人(1983)J.Appl.Physiol.59:1416-1422；Soler等人(1989)J.Appl.Physiol.67:406-413。每只羊均作為其本身的對(duì)照樣。這些動(dòng)物的體重為20-50千克。
在這些研究中，將9mg表Ⅰ和Ⅱ的化合物3溶于3mL緩沖鹽水中，在抗原刺激之前0.5小時(shí)，之后4小時(shí)和之后24小時(shí)，將總?cè)芤阂詺忪F劑形式給藥。(總劑量=27:n=6)，如圖1所示化合物3表現(xiàn)出減輕早期應(yīng)答的趨熱并能減少后期應(yīng)答。在對(duì)照(僅用載體)試驗(yàn)中，抗原刺激使早期和后期的峰值超過(guò)基線，特定肺阻(SRL)分別增加為374±104％和212±21％(平均值±SE)。與此相反，當(dāng)用表Ⅰ和Ⅱ化合物3處理羊時(shí)，早期和后期的SRL增加為280±39％和72±9％(P(0.05，與對(duì)照樣比較，Wilcoxon信號(hào)排列試驗(yàn))。早期應(yīng)答峰值為刺激后馬上產(chǎn)生的最大值的平均值。使在6-8小時(shí)內(nèi)每只動(dòng)物得到的最大應(yīng)答值平均從而計(jì)算得到后期應(yīng)答峰值。這種方法是可靠的，它排除了由于簡(jiǎn)單平均，后期應(yīng)答可能減少。在對(duì)照和藥物試驗(yàn)中抗原刺激后24小時(shí)，羊產(chǎn)生氣道強(qiáng)應(yīng)答性。(氣道強(qiáng)應(yīng)答性可表示為PC400，即，使SRL增加400％的長(zhǎng)巴可的濃度。因此，PC400減少表明氣道變?yōu)閺?qiáng)應(yīng)答性的)。表Ⅰ和Ⅱ的化合物3阻止了24小時(shí)強(qiáng)應(yīng)答性。參見(jiàn)圖2。在對(duì)照試驗(yàn)中基線PC400為22.±3.7呼吸單位，在抗原刺激后降為9.1±1.3呼吸單位(P＜0.05，與基線比較)。與此相反，在藥物試驗(yàn)中，相對(duì)于基線PC400未改變(16.0±3.8呼吸單位與抗原激發(fā)后的17.63.5呼吸單位比較)。因此，用表Ⅰ和Ⅱ化合物3處理使抗原激發(fā)的羊的氣道功能產(chǎn)生統(tǒng)計(jì)上顯著的改善。
在本申請(qǐng)中公開(kāi)的所有論文和參考文獻(xiàn)包括專(zhuān)利在此引入作為參考。
當(dāng)然上面描述是用于說(shuō)明而不是限制。許多實(shí)施方案對(duì)于閱讀了上面描述的本領(lǐng)域技術(shù)人員來(lái)說(shuō)顯而易見(jiàn)。因此，本發(fā)明的范圍不應(yīng)根據(jù)上述描述來(lái)確定，而應(yīng)根據(jù)所附的權(quán)利要求以及與這些權(quán)利要求相應(yīng)的全范圍來(lái)確定。
權(quán)利要求
1．一種氣霧劑裝置，包括藥物上可接受的載體溶液或干粉中的下式所示的化合物或其藥物上可接受的鹽，和將所述溶液或干粉轉(zhuǎn)化成適合吸入的氣霧劑形式的裝置
其中Ar為羥基取代的芳基或羥基取代的雜芳基，其中羥基位于酰胺側(cè)鏈的鄰位，如果Ar為羥基取代的芳基，那么帶有酰胺側(cè)鏈的芳環(huán)不被鹵素取代并且在羥基的鄰位上不帶有低級(jí)烷基；R1為氫、低級(jí)烷基、芳基烷基或雜芳基烷基；R2為氫或低級(jí)烷基；R3選自
-(CH2)v·NH2其中m為3-6的整數(shù)，n為0-3的整數(shù)，p為0-2的整數(shù)，q為0-2的整數(shù)；r為0-5的整數(shù)；s為0-2的整數(shù)；t為1-3的整數(shù)；u為1或2；v為3-6的整數(shù)；w為0-3的整數(shù)；A為-CH=CH-或-C≡C-；X為-NH-或-CH2-；R4為低級(jí)烷基，取代的芳基烷基或取代的雜芳基烷基，R5和R6獨(dú)立選自氫、低級(jí)烷基、取代的芳烷基和取代的雜芳基烷基；或R4和R5與它們所連的氮和碳一起形成取代的4元、5元或6元雜環(huán)；R6為氫；或R4和R6與它們所連的氮和碳一起形成取代的4元、5元或6元雜環(huán)，R5為氫；R7為-OR8或-NR8R9，其中R8和R9獨(dú)立選自氫、低級(jí)烷基、芳基、芳基烷基或雜芳基烷基，或R8和R9與它們所連的氮一起形成取代的5元或6元雜環(huán)。
2．權(quán)利要求1的裝置，其中Ar為1-羥基-2-萘基、2-羥基-1-萘基、3-羥基-2-吡啶基或2-羥基-3-喹喔啉基；R1為氫；R2為氫；R3選自
其中m為3-6的整數(shù)，n為0-3的整數(shù)，p為0-2的整數(shù)，q為0-2的整數(shù)，w為0-3的整數(shù)；A為-CH=CH-或-C≡C-；X為-NH-或-CH2-；R4為低級(jí)烷基，R5和R6為氫；或R4和R5與它們所連的氮和碳一起形成取代的4元、5元或6元雜環(huán)，R6為氫；R7為-OH、-OCH3、-NH2、3′-氨基羧基-1′-哌啶基或-N(CH3)2。
3．權(quán)利要求2的裝置，其中Ar為1-羥基-2-萘基、R1為氫、R2為氫、R3為-(CH2)3NH(CNH)NH2,R4和R5與它們所連的氮和碳一起形成取代的5元雜環(huán)，R6為氫和R7為-NH2。
4．權(quán)利要求2的裝置，其中Ar為2-羥基-1-萘基、R1為氫、R2為氫、R3為-(CH2)3NH(CNH)NH2,R4和R5與它們所連的氮和碳一起形成取代的5元雜環(huán)，R6為氫和R7為-NH2。
5．權(quán)利要求1的裝置，其中所述化合物以0.1-30mg/ml的濃度存在于所述載體溶液中。
6．權(quán)利要求1的裝置，還包括β-腎上腺素能促效劑化合物。
7．權(quán)利要求6的裝置，其中所述β-腎上腺素能促效劑化合物選自舒喘寧、叔丁喘寧、福莫忒醇(formoterol)、芬忒醇(fenoterol)和prenaline。
8．權(quán)利要求1的裝置，還包括消炎的皮質(zhì)甾類(lèi)。
9．權(quán)利要求8的裝置，其中所述消炎的皮質(zhì)甾類(lèi)選自氯地米松、去炎松、flurisolide和地塞米松。
10．權(quán)利要求1的裝置，還包括溴化異丙托品。
11．一種治療變應(yīng)性鼻炎的裝置，包括藥物上可接受的載體溶液中的下式所示的化合物或其藥物上可接受的鹽，和將所述溶液轉(zhuǎn)化成適合鼻內(nèi)給藥的氣霧劑形式的裝置
其中Ar為羥基取代的芳基或羥基取代的雜芳基，其中羥基位于酰胺側(cè)鏈的鄰位，如果Ar為羥基取代的芳基，那么帶有酰胺側(cè)鏈的芳環(huán)不被鹵素取代并且在羥基的鄰位上不帶有低級(jí)烷基；R1為氫、低級(jí)烷基、芳基烷基或雜芳基烷基；R2為氫或低級(jí)烷基；R3選自
-(CH2)v·NH2其中m為3-6的整數(shù)，n為0-3的整數(shù)，p為0-2的整數(shù)，q為0-2的整數(shù)；r為0-5的整數(shù)；s為0-2的整數(shù)；t為1-3的整數(shù)；u為1或2；v為3-6的整數(shù)；w為0-3的整數(shù)；A為-CH=CH-或-C≡C-；X為-NH-或-CH2-；R4為低級(jí)烷基，取代的芳基烷基或取代的雜芳基烷基，R5和R6獨(dú)立選自氫、低級(jí)烷基、取代的芳烷基和取代的雜芳基烷基；或R4和R5與它們所連的氮和碳一起形成取代的4元、5元或6元雜環(huán)；R6為氫；或R4和R6與它們所連的氮和碳一起形成取代的4元、5元或6元雜環(huán)，R5為氫；R7為-OR8或-NR8R9，其中R8和R9獨(dú)立選自氫、低級(jí)烷基、芳基、芳基烷基或雜芳基烷基，或R8和R9與它們所連的氮一起形成取代的5元或6元雜環(huán)。
12．權(quán)利要求11的裝置，其中Ar為1-羥基-2-萘基、2-羥基-1-萘基、3-羥基-2-吡啶基或2-羥基-3-喹喔啉基；R1為氫；R2為氫；R3選自
其中m為3-6的整數(shù)，n為0-3的整數(shù)，p為0-2的整數(shù)，q為0-2的整數(shù)，w為0-3的整數(shù)；A為-CH=CH-或-C≡C-；X為-NH-或-CH2-；R4為低級(jí)烷基，R5和R6為氫；或R4和R5與它們所連的氮和碳一起形成取代的4元、5元或6元雜環(huán)，R6為氫；R7為-OH、-OCH3、-NH2、3′-氨基羧基-1′-哌啶基或-N(CH3)2。
13．權(quán)利要求12的裝置，其中Ar為1-羥基-2-萘基、R1為氫、R2為氫、R3為-(CH2)3NH(CNH)NH2,R4和R5與它們所連的氮和碳一起形成取代的5元雜環(huán)，R6為氫和R7為-NH2。
14．權(quán)利要求12的裝置，其中Ar為2-羥基-1-萘基、R1為氫、R2為氫、R3為-(CH2)3NH(CNH)NH2,R4和R5與它們所連的氮和碳一起形成取代的5元雜環(huán)，R6為氫和R7為-NH2。
全文摘要
本發(fā)明提供了預(yù)防和治療免疫調(diào)節(jié)的炎癥特別是與呼吸道有關(guān)的疾病的組合物和方法。更具體地是施用類(lèi)胰蛋白酶抑制劑,一般為羥基芳?；蛄u基雜芳酰基取代的二肽。本發(fā)明還提供了藥物組合物,一般為氣霧劑或局部用制劑。本發(fā)明也提供了鼻內(nèi)施用這些組合物的氣霧劑裝置。
文檔編號(hào)A61P27/16GK1234229SQ9810227
公開(kāi)日1999年11月10日 申請(qǐng)日期1998年6月15日 優(yōu)先權(quán)日1993年3月12日
發(fā)明者克里·斯比爾, 查爾斯·約翰遜, 赫恩茲·W·格斯徹溫德 申請(qǐng)人:阿瑞斯藥物公司