專利名稱：Inhibiting platelet derivative growth factor and/or quinoline and ...的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及本發(fā)明涉及應(yīng)用喹啉／喹喔啉化合物抑制細胞增殖和／或細胞基質(zhì)生成和／或細胞移動(趨化作用)和／或T細胞激活和增殖的方法，其中所用化合物是有效的蛋白酪氨酸激酶抑制劑(TKI)。
細胞信號傳導(dǎo)通過包括細胞-細胞接觸或細胞-基質(zhì)接觸或胞外受體-底物接觸在內(nèi)的相互作用系統(tǒng)介導(dǎo)。胞外信號通常經(jīng)過酪氨酸激酶介導(dǎo)的磷酸化事件傳遞到細胞的其它部分，其中磷酸化事件能夠影響與細胞膜結(jié)合的信號傳導(dǎo)復(fù)合物下游的底物蛋白。一組特異性的受體-酶如胰島素受體、表皮生長因子受體(EGF-R)或血小板衍生生長因子受體(PDGF-R)是參與細胞信號傳導(dǎo)的酪氨酸激酶的實例。對于含酪氨酸殘基的底物蛋白質(zhì)的有效酶-介導(dǎo)磷酸化，需要酶的自磷酸化作用。已知這些底物會負責(zé)多種細胞事件，舉幾個例子來講，包括細胞增殖、細胞基質(zhì)生成、細胞遷移和編程性細胞死亡。
據(jù)認為，許多疾病狀態(tài)是由細胞不受控制的繁殖或基質(zhì)的過度生成或調(diào)控不良的編程性細胞死亡所致。這些疾病狀態(tài)涉及多種類型細胞，且包括這樣一些病癥，如白血病、癌癥、惡性膠質(zhì)瘤、牛皮癬、炎癥性疾病、骨病、纖維變性病、動脈粥樣硬化和冠狀動脈、股動脈、腎動脈血管成形術(shù)后的再狹窄或纖維增生性疾病如關(guān)節(jié)炎，肺、腎和肝纖維性變性。此外，冠狀動脈分流術(shù)所致的非控性細胞增殖性疾病。據(jù)信，抑制酪氨酸激酶活性對細胞不受控制的繁殖或基質(zhì)的過度生成或難以調(diào)控的編程性細胞死亡的控制非常有效。
同樣還已知某些酪氨酸酶抑制劑能夠與多于一種類型的酪氨酸激酶相互作用。一些酪氨酸激酶是維持人體正常功能所必需的。例如，在大多數(shù)正常情況下并不希望抑制胰島素的作用。因此，對于以細胞增殖和／或細胞基質(zhì)生成和／或細胞移動(趨化作用)為特征的疾病(如再狹窄)的選擇性治療，能夠以低于有效抑制胰島素受體激酶所需濃度抑制PDGF-R酪氨酸激酶活性的化合物提供了一種有價值的藥劑。
本發(fā)明涉及調(diào)整和／或抑制細胞信號傳導(dǎo)、細胞增殖、胞外基質(zhì)生成、趨化作用的方法，還涉及控制異常細胞生長和細胞炎癥性應(yīng)答的方法。更具體講，本發(fā)明涉及取代喹喔啉化合物的用途，通過有效地抑制血小板衍生生長因子-受體(PDGF-R)酪氨酸激酶活性和／或Lck酪氨酸激酶活性，這些化合物對分化、增殖或介質(zhì)釋放具有選擇性抑制作用。2．報道進展大量文獻報道中都介紹了對酪氨酸激酶受體酶(如EGF-R或PDGF-R)或非受體胞質(zhì)酪氨酸激酶(如v-abl，p56lck或c-src)具有選擇性的酪氨酸激酶抑制劑。最近，Spada和Myers(Exp．Opin．Ther．Patents 1995，5(8)，805)以及Bridges(Exp．Opin．Ther．Patents 1995，5(12)，1245)在他們的綜述中分別概述了有關(guān)酪氨酸激酶抑制劑和EGF-R選擇性抑制劑的文獻。另外，Law和Lydon也概述了酪氨酸激酶抑制劑的抗癌效力(新興藥物改良藥物的開發(fā)(Emerging DrugsThe Prospect For Improved Medicines)1996，241-260)。
已知的PRGF-R酪氨酸激酶活性抑制劑包括Maguire等(藥物化學(xué)雜志(J．Med．Chem．)1994，37，2129)和Dolle等(藥物化學(xué)雜志1994，37，2627)報道的喹啉基抑制劑。近來Traxler等(EP 564409)、Zimmerman，J．；和Traxler，P．等(生物有機與藥物化學(xué)通訊(Biorg．& Med．Chem．Lett．)1996，6(11)，1221-1226)以及Buchdunger，E．等(Proc．Nat．Acad．Sci．1995，92，2558)都報道了一類苯基氨基-嘧啶-基抑制劑。盡管在此領(lǐng)域中取得了這些進展，但由這些種類化合物制成的藥劑還沒有被批準用于治療人類增殖疾病。
再狹窄的多因素疾病與PDGF和PDGF-R之間的相關(guān)性在許多科學(xué)文獻中早已確認。然而，近年來有關(guān)肺纖維變性疾病(Antoniades，H．N．等，臨床研究雜志(J．Clin Invest．)，1990，86，1055)、腎和肝臟的纖維變性疾病(Peterson，T．C．肝臟學(xué)(Hepatology)，1993，17，486)的研究進展也說明PDGF和PDGF-R起一定作用。例如，如Shultz等(美國生理學(xué)雜志(Am．J．Physiol)，1988，255，F(xiàn)674)和Floege等(臨床和實驗免疫學(xué)(Clin．Exp．Immun．) 1991，86，334)所述，腎小球性腎炎是腎衰竭的主要病因，并且已確定PDGF是腎小球系膜細胞體外的有效促分裂原。Thornton，S．C等(臨床和實驗免疫學(xué)，1991，86，79)報道了TNFα-和PDGF(由類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎病人提供)是參與滑液細胞的增殖的主要細胞因子。此外，已經(jīng)識別出一些特殊腫瘤細胞種類(參見Silver，B．J．生物因子(BioFactors)，1992，3，217)，如成膠質(zhì)細胞瘤和卡波濟氏肉瘤，它們過度表達PDGF蛋白或其受體，從而導(dǎo)致癌細胞通過自分泌或旁分泌機制失控生長。因此，可以預(yù)料，PDGF酪氨酸激酶抑制劑可用于治療各種表面上看來不相關(guān)但在病因?qū)W上都與PDGF和／或PDGF-R有關(guān)的人類疾病。
Hanle等(炎癥研究(Inflamm．Res．)，1995，44，357)和Bolen與Bmgge(免疫學(xué)年度綜述(Ann．Rev．Immunol．)，1997，15，371)都評述了不同非受體型酪氨酸激酶如p56lck(以下簡稱“Lck”)在涉及T細胞激活和增殖的炎癥相關(guān)病癥中的作用。這些炎癥性疾病包括變應(yīng)性、自身免疫病、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎和移植排斥。最近，另一篇綜述概述了包括具有Lck抑制活性的化合物在內(nèi)的各類酪氨酸激酶抑制劑(Groundwater等，藥物化學(xué)進展(Progressin Medicinal Chemistry)，1996，33，233)。Lck酪氨酸激酶活性抑制劑包括一些天然產(chǎn)物，它們通常為非選擇性的酪氨酸激酶抑制劑，如星形孢菌素、金雀異黃素、某些黃酮類和制表菌素。近來還報道了虎刺醇是Lck的低納摩爾抑制劑(Faltynek等，生物化學(xué)(Biochemistry)，1995，34，12404)。合成Lck抑制劑的實例包括一系列二羥基-異喹啉抑制劑，據(jù)報道它們具有低微摩爾至亞微摩爾活性(Burke等，藥物化學(xué)雜志，1993，36，425)；和活性較低的喹啉衍生物(Lck的IC50為610微摩爾)。研究人員還公開了一系列在微摩爾-亞微摩爾低濃度范圍內(nèi)能抑制Lck的4-取代喹唑啉化合物(Myers等，WO95／15758和Myers等，生物有機和藥物化學(xué)通訊(Bioorg．Med．Chem．Lett．)，1997，7，417)。輝端的科研人員(Hanke等，生物化學(xué)雜志(J．Biol．Chem．)1996，271，695)公開了兩種分別稱作PP1和PP2的特異性吡唑并嘧啶抑制劑，它們對Lck和Fyn(另一種Src族激酶)具有低至納摩爾級的功效。關(guān)于喹啉或喹喔啉基化合物，還沒有報道過這一方面的Lck抑制劑。因此，可以預(yù)料，抑制Lck酪氨酸激酶活性的喹啉或喹喔啉抑制劑可用于治療各種表面上看來不相關(guān)但在病因?qū)W上都涉及Lck酪氨酸激酶信號傳導(dǎo)的人類疾病。
本發(fā)明的另一方面涉及包含藥物有效量的式Ⅰ化合物和可藥用載體的藥物組合物。本發(fā)明還涉及制備式Ⅰ化合物用的中間體，中間體和式Ⅰ化合物的制備方法，以及式Ⅰ化合物用于治療患有或易患與細胞分化、增殖、胞外基質(zhì)生成或介質(zhì)釋放有關(guān)的不適／病癥的患者的用途。
發(fā)明詳述除非另有說明，上文及本發(fā)明說明書全文中使用的下列術(shù)語應(yīng)當(dāng)理解為具有下述含義定義“患者”不僅包括人，而且還包括其它哺乳動物。
“有效量”是指能有效抑制PDGF-R酪氨酸激酶活性和／或Lck酪氨酸激酶活性，從而產(chǎn)生所需治療效果的本發(fā)明化合物的量。
“烷基”是指具有約1到約10個碳原子的支鏈或直鏈脂族烴基。優(yōu)選的烷基為具有約1到約6個碳原子的“低級烷基”。支鏈是指有一個或多個低級烷基如甲基、乙基或丙基連接在線性烷基鏈上。烷基還可以任選地被烷氧基，鹵素，羧基，羥基或R5R6N-取代。烷基的實例包括甲基，氟甲基，二氟甲基，三氟甲基，乙基，正丙基，異丙基，丁基，仲丁基，叔丁基，戊基和己基。
“鏈烯基”是指含有碳-碳雙鍵的脂族烴基，該基團可以是其鏈中含有約2-約10個碳原子的直鏈或支鏈基團。優(yōu)選的鏈烯基的鏈中含有2至約6個碳原子；更優(yōu)選鏈中含約2至約4個碳原子。支鏈是指有一個或多個低級烷基如甲基、乙基或丙基連接在線性鏈烯基鏈上。“低級鏈烯基”是指鏈中含有約2至約4個碳原子的基團，其中所述鏈可以是直鏈或支鏈。鏈烯基可被烷氧羰基取代。鏈烯基的實例包括乙烯基，丙烯基，正丁烯基，異丁烯基，3-甲基丁-2-烯基，正戊烯基，庚烯基，辛烯基，環(huán)己基丁烯基和癸烯基。
“亞乙烯基”是指-CH=CH-基團。
“環(huán)烷基”是指含有約3-約10個碳原子的非芳香性單-或多環(huán)環(huán)系。環(huán)烷基可任選地被一個或多個，優(yōu)選1-3個，更優(yōu)選1-2個下述“環(huán)烷基取代基”取代烷基，羥基，酰氧基，烷氧基，鹵素，R5R6N-，?；鵕5N-，羧基或R5R6NCO-取代基，更優(yōu)選的取代基為烷基，羥基，酰氧基，烷氧基和R5R6NCO-。而且，當(dāng)環(huán)烷基被至少兩個羥基取代基取代時，則至少兩個羥基取代基可用含1-6個碳原子的醛或酮縮酮化或縮醛化形成相應(yīng)的縮酮或縮醛?！傲u基環(huán)烷基”是指HO-環(huán)烷基，其中環(huán)烷基被如所述取代。當(dāng)羥基環(huán)烷基衍生于也被羥基取代的環(huán)烷基時，兩個羥基取代基可與1-6個碳原子的醛或酮縮醛化或縮酮化，形成相應(yīng)的縮醛或縮酮。gem-二醇的縮酮化導(dǎo)致形成螺稠環(huán)體系。優(yōu)選的螺環(huán)烷基環(huán)為1，4-二氧雜螺[4，5]癸-8-基。優(yōu)選的未取代或取代的單環(huán)環(huán)烷基環(huán)包括環(huán)戊基，羥環(huán)戊基，氟代環(huán)戊基，環(huán)己基，羥環(huán)己基，羥基甲基環(huán)己基和環(huán)庚基；更優(yōu)選羥環(huán)己基和羥環(huán)戊基。多環(huán)環(huán)烷基環(huán)的實例包括1-十氫化萘，金剛烷-(1-或2-)基，[2．2．1]二環(huán)庚基(降冰片基)，羥基[2．2．1]二環(huán)庚基(羥基降冰片基)，[2．2．2]二環(huán)辛基和羥基[2．2．1]二環(huán)辛基；更優(yōu)選羥基[2．2．1]二環(huán)庚基(羥基降冰片基)，和羥基[2．2．2．]二環(huán)辛基。
“環(huán)烯基”是指含有碳-碳雙鍵和約3-約10個碳原子的非芳香族單環(huán)或多環(huán)環(huán)系。環(huán)烯基可任選地被一個或多個，優(yōu)選1-3個，更優(yōu)選1-2個上述環(huán)烷基取代基取代。“羥基環(huán)烯基”是指HO-環(huán)烯基，其中環(huán)烷基被如上述取代基取代。優(yōu)選的未取代或取代的單環(huán)環(huán)烯基環(huán)包括環(huán)戊烯基，環(huán)己烯基，羥環(huán)戊烯基，羥環(huán)己烯基和環(huán)庚烯基；更優(yōu)選羥環(huán)戊烯基和羥環(huán)己烯基。優(yōu)選的多環(huán)環(huán)烯基環(huán)包括[2．2．1]二環(huán)庚烯基(降冰片烯基)和[2．2．2]二環(huán)辛烯基。
“芳基”是指含有約6-約10個碳原子的芳香族碳環(huán)基團。典型的芳基包括苯基或萘基，或被一個或多個可以相同或不同的芳基基團取代基取代的苯基或萘基，其中的“芳基基團取代基”包括氫，羥基，鹵素，烷基，烷氧基，羧基，烷氧羰基或Y1Y2NCO-，其中Y1和Y2獨立地為氫或烷基。優(yōu)選的芳基基團取代基包括氫，鹵素和烷氧基。
“雜芳基”是指約5-至約10-元芳香單環(huán)或多環(huán)烴環(huán)系，其中環(huán)系中的一個或多個碳原子為非碳元素，如氮，氧或硫?！半s芳基”也可以被一個或多個上述“芳基基團取代基”所取代。典型的雜芳基包括取代吡嗪基、呋喃基、噻吩基、吡啶基、嘧啶基，異噁唑基，異噻唑基，噁唑基，噻唑基，吡唑基，呋咱基，吡咯基，咪唑并[2，1-b]噻唑基，苯并呋咱基，吲哚基，氮雜吲哚基，苯并咪唑基，苯并噻吩基，喹啉基，咪唑基和異喹啉基。
“雜環(huán)基”是指約4-約10元單環(huán)或多環(huán)環(huán)系，其中一個或多個環(huán)系原子為選自氮、氧或硫的非碳原子。雜環(huán)基任選地被一個或多個，優(yōu)選1-3個，更優(yōu)選1-2個上述環(huán)烷基取代基取代?！傲u基雜環(huán)基”是指HO-雜環(huán)基，其中雜環(huán)基可被如上述取代?！暗s雜環(huán)基”是指如上述的雜環(huán)基，其中至少一個環(huán)原子是氮。典型的雜環(huán)基部分包括奎寧環(huán)基，硫己環(huán)，四氫吡喃基，四氫噻吩基，吡咯烷基，四氫呋喃基或7-氧雜二環(huán)[2．2．1]庚基。
“雜環(huán)羰氧基”是指與母體分子部分通過羰氧基(-C(O)O-)基團連接的如上所定義的雜環(huán)基基團。雜環(huán)基部分任選地被一個或多個優(yōu)選為1-3個，最優(yōu)選為1個如上所定義的環(huán)烷基取代基取代。代表性的雜環(huán)羰氧基為[1，4′]-聯(lián)哌啶基-1′-基羰氧基。
“雜環(huán)烯基”是指如上所述的雜環(huán)環(huán)系，其含有至少一個碳-碳或碳-氮雙鍵。雜環(huán)烯基可被一個或多個，優(yōu)選1-3個，更優(yōu)選1-2個上述環(huán)烷基取代基取代。羥基雜環(huán)烯基“是指HO-雜環(huán)烯基，其中雜環(huán)烯基可被如上述取代。”氮雜雜環(huán)烯基“是指如上所述的雜環(huán)烯基，其中至少一個環(huán)原子是氮。典型的單環(huán)雜環(huán)烯基包括1，2，3，4-四氫吡啶基，1，2-二氫吡啶基，1，4-二氫吡啶基，1，2，3，6-四氫吡啶基，1，4，5，6-四氫嘧啶基，3，4-二羥-2H-吡喃，2-吡咯啉基，3-吡咯啉基，2-咪唑啉基，2-吡唑啉基，四羥苯硫基，四羥硫吡喃基等。
“?；笔侵窰-CO-或烷基-CO-基團，其中的烷基如上定義。優(yōu)選的?；图壨榛?。代表性的酰基包括甲?；?，乙?；；?，2-甲基丙?；□；图乎；?。
“芳?；笔侵阜蓟?CO-基團，其中的芳基如上定義。代表性的基團包括苯甲?；?-和2-萘甲?；?。
“烷氧基”是指烷基-O-基團，其中的烷基如上定義。優(yōu)選的烷氧基為具有約1-約6個碳原子的“低級烷氧基”。烷氧基可任選地被一個或多個氨基、烷氧基、羧基、烷氧羰基、羧基芳基、氨基甲?；螂s環(huán)基基團取代。代表性的烷氧基包括甲氧基，乙氧基，正丙氧基，異丙氧基，正丁氧基，庚氧基，2-(嗎啉-4-基)乙氧基，2-(乙氧基)乙氧基，2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基，氨基甲?；?，N-甲基氨基甲?；琋，N-二甲基氨基甲酰基，羧基甲氧基和甲氧羰基甲氧基。
“環(huán)烷氧基”是指環(huán)烷基-O-基團，其中環(huán)烷基如上所述。示范性的環(huán)烷氧基包括環(huán)戊氧基和環(huán)己氧基。
“雜環(huán)氧基”是指雜環(huán)基-O-基團，其中的雜環(huán)基如上所述。示范性的雜環(huán)氧基基團包括奎寧環(huán)氧基，硫己環(huán)氧基，四氫吡喃氧基，四氫噻吩氧基，吡咯烷氧基，四氫呋喃氧基，7-氧雜二環(huán)[2．2．1]庚氧基，羥基四氫吡喃氧基和羥基-7-氧雜環(huán)[2．2．1]庚基氧基。
“芳氧基”是指芳基-O-基團，其中芳基如上所述。
“雜芳氧基”是指雜芳基-O-基團，其中雜芳基如上所述。
“酰氧基”是指?；?O-基團，其中?；缟纤?。
“羧基”是指HO(O)C-(羧酸)基。
“R5R6N-”是指取代或未取代的氨基，其中R5和R6如上所述。典型基團包括氨基(H2N-)，甲氨基，乙基甲基氨基，二甲氨基和二乙基氨基。
“R5R6NCO-”是指取代或未取代的氨基甲?；渲蠷5和R6如上所述。典型基團包括氨基甲?；?H2NCO-)，N-甲基氨基甲酰基(MeNHCO-)和N，N-二甲基氨基甲?；?Me2NCO-)。
“?；鵕5N-”是指酰氨基，其中R5和酰基如上定義。
“鹵素”是指氟，氯，溴，或碘。優(yōu)選氟，氯或溴，更優(yōu)選氟或氯。
“前藥”是指適合施用于患者而無過高的毒性、刺激性、變應(yīng)性反應(yīng)等作用，同時又能有效地用于預(yù)定用途的式Ⅰ化合物形式，包括縮酮，酯和兩性離子形式。前藥在體內(nèi)通過例如在血中水解而轉(zhuǎn)化為上式母體化合物。詳細描述見T．Higuchi和V．Stella，作為新型給藥系統(tǒng)的前藥，A．C．S．Symposium Series，第14卷，以及Edwrd B．Roche等的藥物設(shè)計中的生物可逆載體，American Pharmaceutical Association和Pergamon Press，1987，這兩篇文獻的內(nèi)容在此并入引作參考。
“溶劑化物”是指本發(fā)明化合物與一個或多個溶劑分子的物理締合物。這種物理締合物中涉及可變程度的離子及共價鍵合，包括氫鍵鍵合。在某些情況下，溶劑化物能夠分離，例如當(dāng)一個或多個溶劑分子結(jié)合到結(jié)晶固體的晶格內(nèi)時便是如此?！叭軇┗铩卑ㄈ芤合嗪涂煞蛛x的溶劑化物。典型的溶劑化物包括乙醇化物，甲醇化物等?！八衔铩笔侵钙渲腥軇┓肿訛樗娜軇┗?。優(yōu)選的實施方案一方面，本發(fā)明優(yōu)選的化合物是式Ⅰ化合物，或其N-氧化物、其水合物、其溶劑化物，其前藥、或其可藥用鹽，其中L1為(CR3aR3b)m-Z3-(CR3′aR3′b)n；L2為(CR3aR3b)p-Z4-(CR3′aR3′b)q；Z2為任選取代的羥環(huán)烷基或任選取代的羥環(huán)烯基；Z4為O和NR4；m為0；n為2或3，p+q=0或1；R1a和R1b獨立地為任選取代的烷基，任選取代的烷氧基，任選取代的環(huán)烷氧基，任選取代的雜環(huán)氧基或R5R6N-，或者R1a和R1b之一為氫或鹵素；R1c為氫，任選取代的烷基或任選取代的烷氧基；R3a，R3b，R3′a和R3′b獨立地為氫或低級烷基；R4為氫；和R5和R6與它們所連接的氮原子一起形成氮雜雜環(huán)基。
另一方面，本發(fā)明優(yōu)選的化合物為式Ⅰ化合物，或其N-氧化物、其水合物、其溶劑化物、其前藥、或其可藥用鹽，其中X為L2Z2；L2為(CR3aR3b)p-Z4-(CR3′aR3′b)q；Z2為任選取代的羥環(huán)烷基；Z4為O和NR4；p為0；q為0或1；R1a和R1b獨立地為任選取代的烷基，任選取代的烷氧基，任選取代的環(huán)烷氧基或任選取代的雜環(huán)氧基，或者R1a和R1b之一為氫或鹵素；而R1a和R1b中的另一個為任選取代的烷基，任選取代的烷氧基，任選取代的環(huán)烷氧基或任選取代的雜環(huán)氧基；R1c為氫；R3′a和R3′b獨立地為氫；和R4為氫。
另一方面，本發(fā)明優(yōu)選的化合物是式Ⅰ化合物，其中R1a和R1b獨立地為羥基任選取代的低級烷基，羥基，低級烷氧基，環(huán)烷氧基，雜環(huán)氧基，或者R1a和R1b之一為氫或鹵素，而R1a和R1b之一的另外一個為羥基任選取代的低級烷基，羥基，低級烷氧基，環(huán)烷氧基，雜環(huán)氧基。
另一方面，本發(fā)明優(yōu)選的化合物是式Ⅰ化合物，其中R1a和R1b獨立地是雜環(huán)羰基氧基或任選取代的低級烷氧基；更優(yōu)選的低級烷氧基是甲氧基或乙氧基。
另一方面，本發(fā)明優(yōu)選的化合物是式Ⅰ化合物，其中R1a和R1b為低級烷基，更優(yōu)選的低級烷基為甲基或乙基。
另一方面，本發(fā)明優(yōu)選的化合物是式Ⅰ化合物，其中R1a和R1b之一為低級烷氧基，而R1a和R1b中的另一個為鹵素；更優(yōu)選的低級烷氧基為甲氧基或乙氧基，且鹵素為氯或溴。
另一方面，本發(fā)明優(yōu)選的化合物是式Ⅰ化合物，其中R1a和R1b之一為低級烷基，而R1a和R1b中的另一個為低級烷氧基；更優(yōu)選的低級烷氧基為甲氧基或乙氧基，且低級烷基為甲基或乙基。
另一方面，本發(fā)明優(yōu)選的化合物是式Ⅰ化合物，其中R1a和R1b之一為低級烷氧基，而R1a和R1b中的另一個為環(huán)烷氧基；更優(yōu)選的低級烷氧基為甲氧基或乙氧基，且環(huán)烷氧基為環(huán)戊氧基或環(huán)己氧基。
另一方面，本發(fā)明優(yōu)選的化合物是式Ⅰ化合物，其中R1a和R1b之一為氫，而R1a和R1b中的另一個為低級烷氧基，環(huán)烷氧基或雜環(huán)氧基；更優(yōu)選的是，低級烷氧基為甲氧基或乙氧基，環(huán)烷氧基為環(huán)戊氧基或環(huán)己氧基，以及雜環(huán)氧基為呋喃氧基。
另一方面，本發(fā)明優(yōu)選的化合物是式Ⅰ化合物，其中R1a和R1b是低級烷氧基，其中低級烷氧基任選地被烷氧基，雜環(huán)基，羧基，烷氧羰基或氨基甲?；〈?。
另一方面，本發(fā)明優(yōu)選的化合物是式Ⅰ化合物，其中R1a和R1b之一是未被取代的低級烷氧基，而R1a和R1b的另一個任選地被雜環(huán)羰基氧基取代，或是被烷氧基，雜環(huán)基，羧基，烷氧羰基或氨基甲酰基取代的低級烷氧基。
另一方面，本發(fā)明優(yōu)選的化合物是式Ⅰ化合物，其中R1a和R1b之一是甲氧基，而R1a和R1b的另一個是[1，4′]-聯(lián)吡啶-1′-基羰基氧基，2-(乙氧基)乙氧基，2-(4-嗎啉基)乙氧基，2-(4-甲基哌嗪-1-基)-乙氧基，羧基甲氧基，甲氧羰基甲氧基，氨基羰基甲氧基，N-甲基氨基羰基甲氧基或N，N-二甲基氨基羰基甲氧基。
另一方面，本發(fā)明優(yōu)選的化合物是式Ⅰ化合物，其中R1c為氫，低級烷基或低級烷氧基；更優(yōu)選的是，低級烷氧基為甲氧基或乙氧基。
另一方面，本發(fā)明優(yōu)選的化合物是其中Z1為CH的式Ⅰ化合物。
另一方面，本發(fā)明優(yōu)選的化合物是其中Z1為N的式Ⅰ化合物。
另一方面，本發(fā)明優(yōu)選的化合物是其中Z2為任選取代的羥基環(huán)烷基的式Ⅰ化合物。
另一方面，本發(fā)明優(yōu)選的化合物是其中p和q都為0的式Ⅰ化合物。
另一方面，本發(fā)明優(yōu)選的化合物是其中p+q=1的式Ⅰ化合物。
另一方面，本發(fā)明優(yōu)選的化合物是其中Z4為O的式Ⅰ化合物。
另一方面，本發(fā)明優(yōu)選的化合物是其中Z4為O，且p和q均為0的式Ⅰ化合物。
另一方面，本發(fā)明優(yōu)選的化合物是其中Z4為O，且p+q=1的式Ⅰ化合物。
另一方面，本發(fā)明優(yōu)選的化合物是其中Z4為NR4的式Ⅰ化合物。
另一方面，本發(fā)明優(yōu)選的化合物是其中Z4為NR4，且p和q均為0的式Ⅰ化合物。
另一方面，本發(fā)明優(yōu)選的化合物是其中Z4為NR4，且m+n=1的式Ⅰ化合物。
另一方面，本發(fā)明優(yōu)選的化合物是其中Z4為S的式Ⅰ化合物。
另一方面，本發(fā)明優(yōu)選的化合物是其中Z4為S，且p和q均為0的式Ⅰ化合物。
另一方面，本發(fā)明優(yōu)選的化合物是其中Z4為S，且p+q=1的式Ⅰ化合物。
另一方面，本發(fā)明優(yōu)選的化合物是其中Z2為(羥基或烷基)取代的羥基環(huán)烷基，更優(yōu)選的是(低級烷基)羥基環(huán)烷基。
優(yōu)選的根據(jù)本發(fā)明的化合物選自下列種類反式-4-(7-氯-6-甲氧基喹喔啉-2-基氨基)-環(huán)己醇；反式-4-(6-氯-7-甲氧基喹喔啉-2-基氨基)-環(huán)己醇；反式-4-(6，7-二甲氧基喹喔啉-2-基氨基)-環(huán)己醇；順式-4-(6，7-二甲氧基喹喔啉-2-基氨基)-環(huán)己醇；(2內(nèi)，5外)-5-(6，7-二甲氧基喹喔啉-2-基氨基)-二環(huán)[2．2．1]庚烷-2-醇；(2外，5外)-5-(6，7-二甲氧基喹喔啉-2-基氨基)-二環(huán)[2．2．1]庚烷-2-醇；(2內(nèi)，3外，5外)-5-(6，7-二甲氧基喹喔啉-2-基氨基)-二環(huán)[2．2．1]庚烷-2，3-二醇；順式-2-(6-甲氧基喹喔啉-2-基氨基)-環(huán)戊醇；反式-2-(6-甲氧基喹喔啉-2-基氨基)-環(huán)戊醇；反式-4-(6-甲氧基喹喔啉-2-基氨基)-環(huán)己醇；[3aR，4S，6R，6aS]-6-(6，7-二甲氧基喹喔啉-2-基氨基)-2，2-二甲基-四氫-環(huán)戊[1，3 ]二氧雜環(huán)戊烯-4-羧酸乙酰胺；2-(1，4-二氧雜-螺[4，5]十二-8-基氧基)-6，7-二甲氧基喹喔啉；4-(6，7-二甲氧基喹喔啉-2-基氧基甲基)-環(huán)己醇；3-(6，7-二甲氧基喹喔啉-2-基氧基)-環(huán)己醇；4-(6，7-二甲氧基喹喔啉-2-基氧基)-環(huán)己醇；5-(6，7-二甲氧基喹喔啉-2-基氧基)-二環(huán)[2．2．1]庚烷-2，3-二醇；(2外，3外，5外)-5-(6，7-二甲氧基喹喔啉-2-基氨基)-二環(huán)[2．2．1]庚烷-2，3-二醇；乙酸順式-4-(6，7-二甲氧基喹喔啉-2-基氧基)-環(huán)己基酯；順式-4-(6，7-二甲氧基喹喔啉-2-基氧基)-環(huán)己醇；二甲基氨基甲酸4-(6，7-二甲氧基喹喔啉-2-基氧基)-環(huán)己基酯；反式-4-(6，7-二甲氧基-4-氧基喹喔啉-2-基氨基)-環(huán)己醇；乙酸反式-4-(6，7-二甲氧基喹喔啉-2-基氨基)-環(huán)己基酯；(2外，5外)-5-(6，7-二甲氧基喹喔啉-2-基氨基)-二環(huán)[2．2．1]庚烷-2-醇；(2內(nèi)，5外)-5-(6，7-二甲氧基喹喔啉-2-基氨基)-二環(huán)[2．2．1]庚烷-2-醇；(2外，6外)-6-(6，7-二甲氧基喹喔啉-2-基氨基)-二環(huán)[2．2．1]庚烷-2-醇；4-(6，7-二甲氧基喹喔啉-2-基氨基)-2-甲基-環(huán)己醇；(2反式，4反式)-4-(6，7-二甲氧基喹喔啉-2-基氨基)-2-甲基-環(huán)己醇；(+)-(2反式，4反式)-4-(6，7-二甲氧基喹喔啉-2-基氨基)-2-甲基-環(huán)己醇；(-)-(2反式，4反式)-4-(6，7-二甲氧基喹喔啉-2-基氨基)-2-甲基-環(huán)己醇；(2反式，4反式)-4-(6，7-二甲氧基喹喔啉-2-基氨基)-2-甲基-環(huán)己醇；(2順式，4順式)-4-(6，7-二甲氧基喹喔啉-2-基氨基)-2-甲基-環(huán)己醇；(2順式，4反式)-4-(6，7-二甲氧基喹喔啉-2-基氨基)-2-甲基-環(huán)己醇；4-(6，7-二甲氧基喹喔啉-2-基氨基)-2-甲基-環(huán)己醇；以及[1S，2R，4S，5R]-5-(6，7-二甲氧基喹喔啉-2-基氨基)-二環(huán)[2．2．1]-庚烷-2-醇。
更優(yōu)選下列化合物反式-4-(6，7-二甲氧基喹喔啉-2-基氨基)-環(huán)己醇；順式-4-(6，7-二甲氧基喹喔啉-2-基氨基)-環(huán)己醇；4-(6，7-二甲氧基喹喔啉-2-基氨基)-2-甲基-環(huán)己醇；(-)-(2反式，4反式)-4-(6，7-二甲氧基喹喔啉-2-基氨基)-2-甲基-環(huán)己醇；(2外，5外)-5-(6，7-二甲氧基喹喔啉-2-基氨基)-二環(huán)[2．2．1]庚烷-2-醇；反式-4-(7-氯-6-甲氧基喹喔啉-2-基氨基)-環(huán)己醇；以及4-(6，7-二甲氧基喹啉-3-基氨基)-環(huán)己醇；以及[1S，2R，4S，5R]-5-(6，7-二甲氧基喹喔啉-2-基氨基)-二環(huán)[2．2．1]-庚烷-2-醇。
應(yīng)當(dāng)理解，本發(fā)明包括這里所述的具體和優(yōu)選的基團的所有適宜組合。
本發(fā)明化合物可采用文獻中公知的方法由已知化合物或者易制備的中間體制備。示范性的一般方法如下。
另外，按照下述反應(yīng)流程Ⅰ-Ⅷ也可以制備式Ⅰ化合物，其中各變量如上所述，但本領(lǐng)域技術(shù)人員不難理解，那些與所述方法不相容的變量應(yīng)除外。
反應(yīng)流程Ⅰ
反應(yīng)流程Ⅱ 反應(yīng)流程Ⅲ 反應(yīng)流程Ⅳ
反應(yīng)流程Ⅴ 反應(yīng)流程Ⅵ 其中R1a，R1b和R1c中至少一個為低級 其中R1a，R1b和R1c中至少一個如本文定義，烷氧基，且x_為L1OP′或L2Z2，其中 并且當(dāng)X為L1OP＇時，然后除去保護基P′為適于在堿和烷基化劑存在下保護 P＇，得到相應(yīng)的OH基團羥基基團的保護基團在反應(yīng)流程Ⅵ、Ⅶ和Ⅷ中，R代表文所定義的R1a，R1b或R1c基團的前體基團，以致當(dāng)RBr，ROH或RCOCl與芳族羥基基團在反應(yīng)流程Ⅵ、Ⅶ和Ⅷ中所述的條件下反應(yīng)時形成R1a，R1b或R1c。
代表性的RBr包括溴乙酸和溴乙酸的甲基和乙基酯。
代表性的ROH包括2-乙氧基乙醇，2-(4-嗎啉基)乙醇和3-(4-甲基哌嗪基)丙醇。
代表性的RCOCl是[1，4′]-聯(lián)哌啶-1′-基羰基氯。反應(yīng)流程Ⅶ 其中X_為L1OP″或L2Z2，其中P″為適合于在反應(yīng)流程Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和Ⅸ中所述反應(yīng)條件下保護羥基的基團反應(yīng)流程Ⅷ 其中X″為L1OP″或L2Z2，其中P″和P_為適合于在反應(yīng)流程Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和Ⅸ中所述反應(yīng)條件下保護羥基的基團反應(yīng)流程Ⅸ 其中X_為(L1OP′或L2Z2)，其中P′為適于在格利雅試劑存在下保護羥基部分的基團當(dāng)X_為L1OP′時，則OP′部分可利用合適的脫保護劑轉(zhuǎn)化為相應(yīng)的羥基基團反應(yīng)流程Ⅹ Ⅰ．一般方法1．偶聯(lián)2-氯取代喹喔啉與胺或苯胺在大約160℃-大約180℃下，加熱2-氯-6，7-二甲氧基喹喔啉(1當(dāng)量)和胺(約1-約5當(dāng)量)的混合物大約3小時至過夜。將暗棕色殘留物溶于甲醇／二氯甲烷(0％-10％)，硅膠層析，用己烷／乙酸乙酯或甲醇／二氯甲烷(0％-100％)洗脫，得到所需產(chǎn)物。所需產(chǎn)物可進一步通過在甲醇、二氯甲烷或甲醇／水中重結(jié)晶純化。2．偶聯(lián)2-氯取代喹喔啉與醇或酚將醇或硫醇(1當(dāng)量)和氫化鈉(約1-約3當(dāng)量)在無水DMF／THF(0％-50％)中的懸浮液回流1小時，然后加入2-氯-6，7-二甲氧基喹喔啉(1當(dāng)量)?；亓魉没旌衔锛s1-4小時。中和懸浮液至大約pH 5-8，并分配在二氯甲烷和鹽水之中。將濃縮二氯甲烷后的殘留物進行硅膠層析，用己烷／乙酸乙酯或甲醇／二氯甲烷(0％-100％)洗脫，得到所需產(chǎn)物。3．采用氨基基-喹啉和醛或酮的還原胺化反應(yīng)。
將適當(dāng)取代的3-氨基喹啉(1當(dāng)量)與1當(dāng)量合適的醛或酮在甲醇(或其它適宜的溶劑混合物)中攪拌至TLC顯示亞胺的形成完成為止。加入過量NaCNBH4或NaBH4，或其它適宜的還原劑，并攪拌混合物至TLC顯示中間體亞胺完全消耗為止。濃縮混合物，殘留物通過硅膠層析，用己烷／乙酸乙酯(0-100％)或氯仿／甲醇(0-20％)洗脫，得到所需產(chǎn)物。4．3-氨基取代喹啉與溴苯基化合物的偶聯(lián)反應(yīng)惰性氣氛(如氬氣氛)下，將適當(dāng)取代的3-氨基喹啉(1當(dāng)量)與～1．4當(dāng)量強堿(如叔丁醇鈉)、1當(dāng)量合適的溴苯基化合物、催化量的2，2′-雙(二苯基膦基)-1-1′聯(lián)萘(S-BINAP)和雙(二亞芐基丙酮)-鈀(Pd(dba)2)在惰性有機溶劑(如甲苯)中混合攪拌，并加熱至大約80℃保持過夜。冷卻混合物，加溶劑(如乙醚)稀釋，過濾，濃縮并層析(用50％EtOAc／己烷洗脫)，得到所需產(chǎn)物。5．經(jīng)Mitsunobu條件由3-羥基取代的喹啉形成醚用各為1當(dāng)量的所需醇、三苯膦和偶氮二羧酸二乙酯(DEAD)或合適的等效物依次處理適當(dāng)取代的羥基喹喔啉的THF溶液(在大約0-大約25℃下)。反應(yīng)進程由TLC監(jiān)測，待反應(yīng)完成后(大約1-大約24小時)，濃縮混合物，殘留物通過硅膠層析，得到所需產(chǎn)物。6．脫烷基化低級烷氧基取代的喹啉或喹喔啉，隨后再烷基化用過量乙硫醇鈉(通常大約2當(dāng)量或更多當(dāng)量)處理合適的低級烷氧基取代的喹啉或喹喔啉(1當(dāng)量)的DMF溶液，在加熱下，攪拌反應(yīng)混合物約1-約24小時。將混合物分配到水和乙酸乙酯之內(nèi)，進行提取后處理，隨后如果需要的話進行層析，從而得到相應(yīng)的羥基取代喹啉或喹喔啉所需產(chǎn)物。
應(yīng)用上文詳述的Mitsunobu反應(yīng)條件，烷基化羥基取代的喹啉或喹喔啉產(chǎn)物。另一方法是應(yīng)用本領(lǐng)域公知的方法，在合適的溶劑中利用NaH或其它適宜的堿由活性烷基鹵或芐基鹵進行簡單烷基化。7．氧化喹啉或喹喔啉中的氮形成相應(yīng)的N-氧化物在大約室溫至回流溫度下(優(yōu)選在升高的溫度下)，優(yōu)選通過在惰性溶劑(如二氯甲烷)與過酸(例如過乙酸或間-氯過苯甲酸)反應(yīng)，式(Ⅰ)喹啉或喹喔啉化合物中的亞胺(=N-)部分可以轉(zhuǎn)化為其中亞胺部分被氧化為N-氧化物的相應(yīng)化合物。
本發(fā)明化合物以游離堿或酸的形式或以其可藥用鹽的形式使用，所有這些形式均在本發(fā)明范圍內(nèi)。
當(dāng)本發(fā)明化合物被堿性基團取代時，能夠形成酸加成鹽，并且這是一種更為簡單方便的使用形式；而且在實踐中，使用鹽形式本質(zhì)上相當(dāng)于使用游離堿形式?？捎糜谥苽渌峒映甥}的酸優(yōu)選包括在與游離堿化合時能產(chǎn)生可藥用鹽的那些酸，亦即鹽的陰離子(在鹽的藥物劑量下)對患者是無毒的，因而陰離子的副作用不會損害游離堿固有的對PDGF的有益抑制效力。雖然優(yōu)選所述堿性化合物的可藥用鹽，但是，所有酸加成鹽都可用作游離堿的來源，即使所需的具體鹽本身僅用作中間體(例如象在僅用于純化和鑒定目的而形成的鹽或在通過離子交換法制備可藥用鹽的過程中用作中間體的鹽一樣)也都如此。本發(fā)明范圍內(nèi)的可藥用鹽衍生自下列酸無機酸，如鹽酸，硫酸，磷酸和氨磺酸；和有機酸，如乙酸，檸檬酸，乳酸，酒石酸，丙二酸，甲磺酸，乙磺酸，苯磺酸，對-甲苯磺酸，環(huán)己基氨基磺酸，金雞納酸等。相應(yīng)的酸加成鹽分別包括氫鹵酸鹽，如鹽酸鹽和氫溴酸鹽，硫酸鹽，磷酸鹽，硝酸鹽，氨基磺酸鹽，乙酸鹽，檸檬酸鹽，乳酸鹽，酒石酸鹽，丙二酸鹽，草酸鹽，水楊酸鹽，丙酸鹽，琥珀酸鹽，富馬酸鹽，馬來酸鹽，亞甲基-雙-β-羥基萘甲酸鹽，龍膽酸鹽，甲磺酸鹽，羥乙基磺酸鹽和二-對甲苯基酒石酸甲磺酸鹽，乙磺酸鹽，苯磺酸鹽，對-甲苯磺酸鹽，環(huán)己基氨基磺酸鹽和奎尼酸鹽。
根據(jù)本發(fā)明的進一步特征，通過使用或采用已知方法，由游離堿與合適的酸反應(yīng)可以制備本發(fā)明化物的酸加成鹽。例如，本發(fā)明化合物的酸加成鹽可如下制備將游離堿溶于含有適當(dāng)酸的水或水-醇溶液或其它合適的溶劑中，進而通過蒸發(fā)溶液分離鹽，或者使游離堿和酸在有機溶劑中反應(yīng)，在這種情況下，鹽可以通過直接分離得到或者可通過濃縮溶液而獲得。
通過使用或采用已知方法，可以由這些酸加成鹽再生本發(fā)明化合物。例如，通過用堿例如碳酸氫鈉水溶液或氨水溶液處理，本發(fā)明母體化合物可以由其酸加成鹽再生獲得。
當(dāng)本發(fā)明化合物被酸性基團取代時，可以形成堿加成鹽，并且這是一種更為簡單方便的使用形式；而且在實踐中，使用鹽形式本質(zhì)上相當(dāng)于使用游離酸形式。可用于制備堿加成鹽的堿優(yōu)選包括在與游離酸化合時能產(chǎn)生可藥用鹽的那些堿，亦即鹽的陽離子(在鹽的藥物劑量下)對動物機體是無毒的，因而陽離子的副作用不會損害游離酸固有的對PDGF的有益抑制效果?？伤幱名}包括例如堿金屬和堿土金屬鹽，在本發(fā)明范圍內(nèi)的這些鹽衍生自下列堿氫化鈉，氫氧化鈉，氫氧化鉀，氫氧化鈣，氫氧化鋁，氫氧化鋰，氫氧化鎂，氫氧化鋅，氨，三甲胺，三乙胺，乙二胺，N-甲基葡糖胺，賴氨酸，精氨酸，鳥氨酸，膽堿，N，N′- 二芐基乙二胺，氯普魯卡因，二乙醇胺，普魯卡因，N-芐基苯乙胺，二乙胺，哌嗪，三(羥甲基)-氨基甲烷，氫氧化四甲銨等。
本發(fā)明化合物的金屬鹽可通過在含水或有機溶劑中使游離酸形式的本發(fā)明化合物與選定金屬的氫化物、氫氧化物、碳酸鹽或類似的活性化合物接觸而制備。所用的含水溶劑可以是水或者也可以是水與有機溶劑的混合物，其中的有機溶劑優(yōu)選醇如甲醇或乙醇，酮，如丙酮，脂族醚如四氫呋喃，或酯如乙酸乙酯。這些反應(yīng)通常在室溫下進行，但如果需要它們也可以加熱下進行。
本發(fā)明化合物的胺鹽可以通過在含水溶劑或有機溶劑中使胺與游離酸形式的本發(fā)明化合物接觸而制備。合適的含水溶劑包括水和水與醇(如甲醇或乙醇)、醚(如四氫呋喃)、腈(如乙腈)、或酮(如丙酮)的混合物。同樣也可以制得氨基酸鹽。
采用或采納已知方法，可以由其堿加成鹽再生得到本發(fā)明化合物。例如，通過用酸如鹽酸處理，能夠從其堿加成鹽再生本發(fā)明母體化合物。
與它們本身可作為活性化合物一樣，本發(fā)明化合物的鹽也可用于化合物的純化目的，例如，應(yīng)用本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的技術(shù)，利用鹽與母體化合物、副產(chǎn)物和／或起始物質(zhì)之間的溶解度差異進行純化。
本發(fā)明化合物可能含有不對稱中心。這些不對稱中心可以獨立地為R或S構(gòu)型。本領(lǐng)域技術(shù)人員也都十分清楚，某些式Ⅰ化合物可能顯示幾何異構(gòu)現(xiàn)象。幾何異構(gòu)體包括本發(fā)明化合物(即具有鏈烯基基團或環(huán)系上具有取代基的化合物)的順式和反式形式。另外，二環(huán)環(huán)系包括內(nèi)式和外式異構(gòu)體。本發(fā)明包括單一的幾何異構(gòu)體，立體異構(gòu)體，對映異構(gòu)體以及它們的混合物。
采用或應(yīng)用已知方法，例如，色譜技術(shù)和重結(jié)晶技術(shù)，可以自其混合物中分離出這些異構(gòu)體，或者也可以采用或應(yīng)用例如本文所述的方法由其中間體的適當(dāng)異構(gòu)體分別制備它們。
采用或應(yīng)用已知方法，例如參考實施例中所述的方法或其明顯的化學(xué)等同法，或者應(yīng)用本發(fā)明所述的方法，制備起始物質(zhì)和中間體。
本發(fā)明進一步用下列用于說明本發(fā)明化合物制備的說明性實施例加以說明，但本發(fā)明并不局限于此。
進一步地，下列實施例為合成本發(fā)明化合物所用方法的代表例。實施例1 3-環(huán)己氧基-6，7-二甲氧基喹啉0 ℃下，向THF溶液內(nèi)加入3-羥基-6，7-二甲氧基喹啉(0．237g，1．15mmol)、環(huán)己醇(0．347g，3．46mmol)、Ph3P(0．908g，3．46mmol)。分批加入偶氮二羧酸二乙酯，直至溶液保持深紅色為止(0．663g，3．81mmol)。4小時后，濃縮溶液并層析殘留物(50％EtOAc／己烷)。產(chǎn)物用異丙醇／己烷重結(jié)晶，為HCl鹽形式，系白色固體(m．p．229-232℃，分解)。實施例2 2-苯胺基-6-異丙氧基-喹喔啉鹽酸鹽氬氣氛下，向NaH(0．033g，0．84mmol)中加入1mL DMF，分批加入2-苯胺基-6-喹喔啉醇(0．1g，0．42mmol)／1．5mL DMF。30分鐘后，逐滴加入2-溴丙烷，將溶液加熱至50℃反應(yīng)1．5小時。加水驟冷冷卻的反應(yīng)混合物，并分配在EtOAc和H2O之內(nèi)，用H2O(3X)、鹽水洗滌，干燥(MgSO4)并濃縮。層析所得殘留物(30％EtOAc／己烷)，得到0．05 g二烷基化產(chǎn)物和0．1g標題化合物。按下所述制備HCl鹽的分析用樣品向游離堿的Et2O／IPA溶液內(nèi)加入IPA(異丙醇)／HCl，得到HCl鹽(n．p．205-210℃分解)。元素分析C17H17N3O·HCl計算值C，64．65；H，5．74；N，13．31；實測值C，64．51；H，5．90；N，13．09．實施例3 2-苯胺基-6-甲氧基-喹喔啉鹽酸鹽氬氛下將苯胺(1．3mL，14．3mmol)加入2-氯-6-甲氧基-喹喔啉(0．93g，4．8mmol)。120℃加熱反應(yīng)混合物2小時，然后于150℃反應(yīng)1．5小時。冷卻混合物并加入CH2Cl2。攪拌所得懸浮液，過濾出橙色固體，用CH2Cl2／Et2O洗滌，然后于水中劇烈攪拌40分鐘，過濾，用Et2O洗滌得到亮黃色固體。實施例4 2-苯胺基-6-喹喔啉醇采用Feutrill，G．I．；Mirrington，R．N．在四面體通訊(Tet．Lett．)，1970，1327中所述的將芳基甲基醚轉(zhuǎn)化為酚衍生物的方法。氬氣氛下，向2-苯胺基-6-甲氧基-喹喔啉(0．27g，1．07mmol)的DMF溶液內(nèi)加入乙硫醇鈉鹽(0．19g，2mmol)。加熱反應(yīng)混合物至110℃過夜。濃縮混合物，并分配到EtOAc和H2O／5％酒石酸之內(nèi)，使水層的pH大約等于4。有機層依次用水(4X)和2．5％NaOH(4X)洗滌。合并堿性層，用乙酸乙酯(2X)洗滌，再用5％酒石酸酸化，并用多份EtOAc洗滌。合并有機層，用鹽水洗滌，干燥(N2SO4)，并濃縮。層析所得固體(50％EtOAc／己烷)。通過用Et2O研制產(chǎn)物，得到黃色粉末分析樣品(m．p．211-213℃)。元素分析C14H11N3O計算值C，70．88；H，4．67；N，17．71；實測值C，70．64；H，4．85；N，17．58．實施例5 苯基-[6-(四氫呋喃-3-(R)-基-氧基)喹喔啉-2-基]胺0℃及氬氣氛下，向THF溶液內(nèi)加入2-苯胺基-6-喹喔啉醇(0．23g，0．97mmol)，(S)-(+)-3-羥基四氫呋喃(0．086mL，1．3mmol)，和三苯膦(0．31g，1．2mmol)。分批加入DEAD(0．18mL，1．2mmol)。溫?zé)岱磻?yīng)至室溫，攪拌1．5小時。濃縮混合物并將其分配到EtOAc和水之內(nèi)。有機層用水和鹽水洗滌，干燥(MgSO4)并濃縮。層析所得黃色油狀物(50％EtOAc／己烷)，并溶于Et2O／IPA。逐滴加入HCl／Et2O溶液，真空干燥所得橙色粉末。通過在含洗滌過的(3X H2O，5X MeOH)堿性離子交換樹脂的MeOH中攪拌，將所得粉末進行游離堿化。攪拌混合物30分鐘，過濾，濃縮，并用EtOAc／己烷重結(jié)晶，分兩批得到產(chǎn)物(m．p．173-175℃)。元素分析C18H17N3O2計算值C，70．35；H，5．57；N，13．67；實測值C，70．19；H，5．60；N，13．66．實施例6 2，7-雙-環(huán)己氧基-6-甲氧基-喹喔啉氬氣氛下，向NaH(0．32g，8mmol)的DMF溶液內(nèi)逐滴加入環(huán)己醇(0．7mL，6．7mmol)。室溫攪拌混合物25分鐘，然后分批加入2-氯-6，7-二甲氧基喹喔啉。室溫攪拌反應(yīng)15分鐘，進而分別在90℃攪拌2小時和在110℃攪拌1小時。冷卻混合物，加水驟冷，并分配到EtOAc／H2O之內(nèi)。有機層用水及鹽水洗滌，干燥(MgSO4)，層析(10％EtOAc／己烷)后得到蠟狀白色固體物(m．p．75-78℃)。元素分析C21H28N2O3計算值C，70．76；H，7．92；N，7．86；實測值C，70．81；H，7．79；N，7．70．實施例7 環(huán)己基-(6，7-二甲氧基喹喔啉-2-基甲基)-胺向6，7-二甲氧基-2-喹喔啉甲醛在21MeOH／1，2-二氯乙烷(7．5mL，0．5mmol)中的0．067M溶液內(nèi)加入環(huán)己胺(0．11mL，0．9mmol)。在室溫下攪拌反應(yīng)過夜，然后加入NaBH4(0．038g，1mmol)，再攪拌反應(yīng)混合物過夜。然后濃縮混合物并進行層析(50％EtOAc／己烷-大約含5％MeOH的50％EtOAc／己烷)。將所得油狀物溶于EtOAc／己烷，用HCl／Et2O處理。濃縮所得溶液，固體物用異丙醇研制，在60℃真空干燥后得到白色固體(m．p．185-190℃，分解)．元素分析C17H23N3O2·HCl計算值C，60．44；H，7．16；N，12．44；實測值C，60．48；H，6．88；N，12．07．實施例8 (6，7-二甲氧基喹啉-3-基)-反式-(3-(R)-甲基-環(huán)己基)胺和(6，7-二甲氧基喹啉-3-基)-順式-(3-(R)-甲基-環(huán)己基)胺類似上面的制備例，采用3-氨基-6，7-二甲氧基喹啉游離堿(0．32g，1．6mmol)和(R)-(+)-3-甲基環(huán)己酮(0．23mL，1．9mmol)進行反應(yīng)。層析所得產(chǎn)物混合物(70％EtOAc／己烷)，并用EtOAc／己烷重結(jié)晶，從而得到白色固體物(1∶1順-反異構(gòu)體混合物)(m．p．153-160℃)。元素分析C18H24N2O2計算值C，71．97；H，8．05；N，9．33；實測值C，72．12；H，7．85；N，9．29．實施例9 3-(6，7-二甲氧基喹啉-3-基-氨基)-2，2-二甲基-丙-1-醇類似實施例11中的制備過程進行反應(yīng)。氬氣氛下，向4_粉狀分子篩(0．35g)的MeOH溶液內(nèi)加入3-氨基-6，7-二甲氧基喹啉(0．32g，1．6mmol)和2，2-二甲基-3-羥基丙醛(0．19g，1．9mmol)。層析產(chǎn)物混合物(3％MeOH／CHCl3)，得到0．10g物質(zhì)，進而分配到CH2Cl2／10％NaOH之內(nèi)。有機層用10％NaOH、H2O、和鹽水洗滌，然后干燥(MgSO4)，用EtOAc／己烷重結(jié)晶，得到淺橙色固體物(m．p．170-173．5℃)。元素分析C16H22N2O3計算值C，66．18；H，7．64；N，9．65；實測值C，66．11；H，7．49；N，9．33．實施例10 環(huán)己基-(6-甲氧基-7-嗎啉-4-基-喹喔啉-2-基)-胺該制備基于修改的Buchwald等的方法(美國化學(xué)會會志，1996，118，7215)。氬氣氛下，向2-環(huán)己基氨基-6-甲氧基-7-溴-喹喔啉(0．1g，0．3mmol)的甲苯溶液內(nèi)加入嗎啉(0．1g，0．3mol)、叔丁醇鈉(0．04g，0．42mmol)、S(-)-BINAP(約0-001g)和雙(二亞芐基丙酮)合鈀(約0．001g)。加熱反應(yīng)混合物至80℃過夜。冷卻混合物，加乙醚稀釋，過濾，濃縮，并層析(50％EtOAc／己烷)。產(chǎn)物用EtOAc／己烷重結(jié)晶，分兩批得到黃色固體物(m．p．194-196℃)。元素分析C19H26N4O2計算值C，66．64；H，7．65；N，16．36；實測值C，66．60；H，7．60；N，16．51．實施例11 反式-4-(7-氯-6-甲氧基-喹喔啉-2-氨基)-環(huán)己醇和反式-4-(6-氯-7-甲氧基-喹喔啉-2-基-氨基)-環(huán)己醇氬氣氛下，向配有迪安斯塔克分水器和冷凝器的反應(yīng)燒瓶內(nèi)加入6∶1的2，7-二氯-6-甲氧基-喹喔啉2，6-二氯-7-甲氧基-喹喔啉混合物(0．30g，1．3mmol)和反式-4-氨基-環(huán)己醇(0．35g，3mmol)。加熱反應(yīng)混合物至170℃反應(yīng)大約10小時，然后濃縮并層析兩次(7％MeOH／CHCl3，然后5％MeOH／CHCl3)。產(chǎn)物用乙酸乙酯／己烷重結(jié)晶，得到淺黃色固體物(m．p．144-147℃)。元素分析C19H26N4O2·0．4H2O計算值C，57．20；H，6．02；N，13．34；實測值C，57．21；H，5．97；N，13．08．
1H NMR分析表明，產(chǎn)物為反式-4-(7-氯-6-甲氧基-喹喔啉-2-氨基)-環(huán)己醇與反式-4-(6-氯-7-甲氧基-喹喔啉-2-基-氨基)-環(huán)己醇的2∶1混合物。實施例12 反式-4-(6，7-二甲氧基喹喔啉-2-基氨基)-環(huán)己醇混合反式-4-氨基環(huán)己醇(0．11g，2當(dāng)量)和2-氯-6，7-二甲氧基喹喔啉(0．1g，1當(dāng)量)，并加熱到160-180℃反應(yīng)4-8小時。過濾所得黑棕色懸浮液并濃縮。殘留物通過快速柱純化，用3％甲醇／二氯甲烷洗脫，得到黃色粉末產(chǎn)物，m．p．為119-123℃。元素分析C16H21N3O3計算值C，62．33；H，7．05；N，13．63；實測值C，62．35；H，7．09；N，13．18．所得化合物可以按下述方法重結(jié)晶。將0．2g黃色粉末加入到2．5mL水和1．25mL甲醇內(nèi)，回流得到橙色透明溶液。放置此熱溶液，逐步冷卻。過濾收集針狀橙色結(jié)晶，高真空干燥后得到黃色固體(m．p．119-120℃)。
另一方面，按下所述制備標題化合物的HCl鹽0℃下，向反式-4-(6，7-二甲氧基喹喔啉-2-基氨基)-環(huán)己醇的異丙醇溶液內(nèi)加入HCl溶液。攪拌混合物15分鐘，然后過濾。在高真空下干燥所收集到的固體物，得到反式-4-(6，7-二甲氧基喹喔啉-2-基氨基)-環(huán)己醇鹽酸鹽。元素分析C16H22ClN3O3·1．2H2O計算值C，53．19；H，6．80；N，11．63；Cl 9．81；實測值C，53．14；H，6．85；N，11．24；CL，10．28．另一方面，標題化合物的硫酸鹽可以按下所述制備在典型的方法中，將反式-4-(6，7-二甲氧基喹喔啉-2-基氨基)-環(huán)己醇溶于丙酮或其它適宜的溶劑，如果需要加熱至45℃。在快速攪拌下，向所得溶液中小心加入含水硫酸(1當(dāng)量，1M溶液)。收集如此形成的鹽，干燥后得到硫酸鹽，產(chǎn)率＞80％。
類似地用適當(dāng)?shù)钠鹗嘉镔|(zhì)制備下列化合物3-(6，7-二甲氧基喹喔啉-2-基氨基)-丙烷-1-醇(m．p．154．5-156℃)。元素分析C13H17N3O3計算值C，59．30；H，6．51；N，15．87；實測值C，59．30；H，6．46；N，15．87。3-(6，7-二甲氧基喹喔啉-2-基氨基)-2，2-二甲基-丙烷-1-醇(m．p．174．5-176℃)。元素分析C15H21N3O3計算值C，61．84；H，7．27；N，14．42。實測值C，61-67； H，7．22；N，14．42。4-(6，7-二甲氧基喹喔啉-2-基氨基)-環(huán)己醇(m．p．168-171℃)。元素分析C16H21N3O計算值C，70．82；H，7．80；N，15．48；實測值C，70．80；H，7．90；N，15．20。實施例13 順式-4-(6，7-二甲氧基喹喔啉-2-基氨基)-環(huán)己醇順式-4-氨基環(huán)己醇(400mg，3．48mmol)與2-氯-6，7-二甲氧基喹喔啉(450mg，2mmol)混合物的乙醇溶液(5ml)置于密封管中，然后加熱至180℃3小時。硅膠層析深棕色混合物，用乙酸乙酯洗脫，得到期望的產(chǎn)物(m．p．65-67℃)。
元素分析C16H21N3O3·0．6H2O計算值C，61．17；H，7．12；N，13．37；實測值C，61．22；H，7．19；N，12．19。實施例14 (±)-二環(huán)[2．2．1]庚-2-基-(6，7-二甲氧基喹喔啉-2-基)-胺方法A將2-氯-6，7-二甲氧基喹喔啉(5g，22．3mmol)和(±)-外-降冰片基-2-胺(10g，90mmol)的混合物在160-180℃下加熱過夜。將深棕色殘留物溶于200mL二氯甲烷，用1N NaOH(50mL)洗滌。以硫酸鎂干燥有機層，然后過濾。硅膠層析濃縮后的殘留物，用己烷／乙酸乙酯(80％)洗脫，得到所需產(chǎn)物，為黃色固體物，可以用甲醇重結(jié)晶。
方法B將2-氯-6，7-二甲氧基喹喔啉(9g，40．1mmol)和(±)-外-降冰片基-2-胺(5．77g，52mmol)、叔丁醇鈉(4．22g，44mmol)、2，2′-雙(二苯基膦基)-1-1′-聯(lián)萘(BINAP，120mg)和雙(二亞芐基丙酮)-鈀Pd(dba)2在80mL甲苯中的混合物在80℃加熱8小時。再加入另一份BINAP(60mg)和Pd(dba)2(20mg)，在100℃加熱混合物過夜。加200mL二氯甲烷稀釋后，將反應(yīng)混合物用1N NaOH(100mL)洗滌。用硫酸鎂干燥有機層，并過濾。硅膠層析濃縮后的殘留物，用己烷／乙酸乙酯(80％)洗脫，得到所需產(chǎn)物，為淺黃色固體物(m．p．188-189℃)。元素分析C17H21N3O3計算值C，68．20；H，7．07；N，14．04；實測值C，68．18；H，7．03；N，14．03．類似地，由合適的起始物質(zhì)開始可以制得下列化合物(方法A)外-二環(huán)[2．2．1]庚-5-烯-2-基-(6，7-二甲氧基喹喔啉-2-基)胺(m．p．175-177℃)。元素分析C17H19N3O2計算值C，60．94；H，6．56；N，13．78；實測值C，66．98；H，6．62；N，12．73．(2內(nèi)，5外)-5-(6，7-二甲氧基喹喔啉-2基氨基)-二環(huán)[2．2．1]庚烷-2-醇(m．p．90-93℃)。(2外，5外)-5-(6，7-二甲氧基喹喔啉-2基氨基)-二環(huán)[2．2．1]庚烷-2-醇(m．p．97-100℃)。(2內(nèi)，3外，5外)-5-(6，7-二甲氧基喹喔啉-2基氨基)-二環(huán)[2．2．1]庚烷-2，3-二醇(m．p．220-222℃)。元素分析C17H21N3O4·0．2H2O計算值C，60．96；H，6．44；N，12．54。實測值C，60．93；H，6．06；N，11．60。環(huán)己基-(6，8-二甲基-喹喔啉-2-基)-胺[MS m／z255(M+)]．元素分析C16H21N3計算值C，75．26；H，8．29；N，16．46；實測值C，75．08；H，8．28；N，15．86．順式／反式-2-(6-甲氧基-喹喔啉-2基氨基)-環(huán)戊醇(m．p．137-139℃)。元素分析C14H17N3O2計算值C，64．85；H，6．61；N，16．20。實測值C，64．87；H，6．45；N，16．22。反式-4-(6-甲氧基-喹喔啉-2基氨基)-環(huán)己醇(m．p．70-75℃)。元素分析C15H19N3O2·0．3H2O計算值C，64．64；H，7．09；N，15．08。實測值C，64．68；H，7．06；N，14．77。[3aR，4S，6R，6aS]-6-(6，7-二甲氧基喹喔啉-2-基氨基)-2，2-二甲基-四氫-環(huán)戊[1，3]二氧雜環(huán)戊烯-4-羧酸乙酰胺(m．p．94-97℃)。元素分析C21H28N4O5·0．3H2O計算值C，59．79；H，6．83；N，13．28。實測值C，59．80；H，6．89；N，12．03。(6，7-二甲氧基喹喔啉-2-基)-(4-甲氧基-環(huán)己基)-胺(m．p．58-68℃)。元素分析C17H23N3O3·0．5H2O計算值C，62．56；H，7．41；N，12．87；實測值C，62．53；H，7．22；N，12．22．實施例15 外-2-(二環(huán)[2．2．1]庚-2-基氧基)-6，7-二甲氧基喹喔啉將外-2-降冰片(223mg，2 mmol)和NaH(60％，100mg，2．5mmol)在10mL無水THF中的混合物回流0．5小時，然后加入2-氯-6，7-二甲氧基喹喔啉(336mg，1．5mmo1)。繼續(xù)回流所得混合物2小時。過濾后濃縮，進而通過硅膠層析所得殘留物(50％乙醚／己烷)，得到所需產(chǎn)物，系白色固體(m．p．135-137℃)．元素分析C17H20N2O3計算值C，67．98；H，6．71；N，9．33；實測值C，67．96；H，6．762；N，9．19．類似地由合適的起始物質(zhì)制備下列化合物外-2-(二環(huán)[2．2．1]庚-5-烯-2-基氧基)-6，7-二甲氧基喹喔啉(m．p．108-110℃)．元素分析C17H18N2O3計算值C，68．44；H，6．08；N，9．39；實測值C，68．54；H，6．23；N，9．27．2-(二環(huán)[2．2．1]庚-5-烯-2-基氧基)-6，7-二甲氧基喹喔啉(m．p．93-95℃)．元素分析C17H18N2O3計算值C，68．44；H，6．08；N，9．39；實測值C，68．32；H，5．98；N，9．25．2-(1，4-二氧雜-螺[4，5]癸-8-基氧基)-6，7-二甲氧基喹喔啉(m．p．124-125℃)。元素分析C18H22N3O5計算值C，62．42；H，6．40；N，8．09。實測值C，62．63；H，6．46；N，7．79。實施例16 順／反-4-(6，7-二甲氧基喹喔啉-2-基氧基)-環(huán)己烷羧酸將順／反-4-羥基-環(huán)己烷羧酸(144mg，1mmol)和NaH(60％，160mg，4mmol)在無水THF／DMF(10mL／2mL)中的混合物加熱回流1小時，然后加入2-氯-6，7-二甲氧基喹喔啉(225mg，1mmol)。繼續(xù)回流所得混合物4小時。中和反應(yīng)混合物至pH5，用乙酸乙酯(2×50mL)提取。用硫酸鎂干燥合并的有機溶液并過濾。硅膠層析濃縮后的殘留物(先用乙酸乙酯，接著用甲醇洗脫)，得到所需產(chǎn)物，系白色固體物(m．p．90-93℃)。元素分析C17H20N2O5·0．5H2O計算值C，59．89；H，6．19；N，8．22；實測值C，59．91；H，6．62；N，7．90．類似地用適當(dāng)?shù)钠鹗嘉镔|(zhì)制備下列化合物4-(6-甲氧基-喹喔啉-2基氧基甲基)-環(huán)己醇(m．p．118-121℃)。元素分析C17H22N2O4計算值C，63．15；H，7．03；N，8．66。實測值C，63．13；H，6．65；N，9．01。3-(6，7-二甲氧基喹喔啉-2基氧基)-環(huán)己醇(m．p．151-153℃)。元素分析C16H20N2O4計算值C，63．14；H，6．62；N，9．20。實測值C，62．56；H，6．58；N，8．67。4-(6，7-二甲氧基喹喔啉-2基氧基)-環(huán)己醇(m．p．162-164℃)。元素分析C16H20N2O4計算值C，63．14；H，6．62；N，9．20。實測值C，62．52；H，6．80；N，8．88。
實施例17 5-(6，7-二甲氧基喹喔啉-2基氧基)-二環(huán)[2．2．1]庚烷-2，3-二醇室溫下將OsO4的叔丁醇溶液(2．5重量百分比，0．2ml)加入2-(二環(huán)[2．2．1]庚-5-烯-2-基氧基)-6，7-二甲氧基-喹喔啉(149mg，0．5mmol)和4-甲基嗎啉N-氧化物(234mg，2mmol)的5ml THF溶液中。劇烈攪拌棕色溶液2小時，然后用飽和的NaHS2O3(2ml)驟冷。用醚(3×100ml)提取，然后用硫酸鎂干燥。殘余物過濾后濃縮液硅膠層析(50％乙酸乙酯／己烷)，得到所需產(chǎn)物(m．p．85-88℃)．元素分析C17H20N2O5·0．9H2O計算值C，58．73；H，6．29；N，8．06。
實測值C，58．74；H，5．91；N，7．53。
類似制備的為(2外，3外，5外)-5-(6，7-二甲氧基喹喔啉-2基氨基)-二環(huán)[2．2．1]庚烷-2，3-二醇(m．p．150-153℃)。實施例18 順式-4-(6，7-二甲氧基喹喔啉-2基氧基)-環(huán)己乙酸酯和順式-4-(6，7-二甲氧基喹喔啉-2基氧基)-環(huán)己醇將順式-4-乙氧基-環(huán)己醇(632mg，4mmol)和NaH(60％，220mg，5-5mmol)的15ml無水THF溶液回流0．5小時，然后加入2-氯-6，7-二甲氧基喹喔啉(647mg，3mmol)。繼續(xù)回流所得混合物2小時。殘余物過濾后濃縮液硅膠層析(乙醚)，得到順式-4-(6，７-二甲氧基喹喔啉-2基氧基)-環(huán)己乙酸酯(m．p．150-152℃)．元素分析C18H22N2O5計算值C，62．42；H，6．40；N，8．09。
實測值C，62．39；H，6．55；N，7．82。和順式-4-(6，7-二甲氧基喹喔啉-2基氧基)-環(huán)己醇(m．p．148-150℃)。
元素分析C16H20N2O4計算值C，63．14；H，6．62；N，9．20。
實測值C，62．80；H，6．76；N，8．67。
類似的制備了反式-4-(6，7-二甲氧基喹喔啉-2基氧基)-環(huán)己醇[MSm／z304(M+)]實施例19 4-(6，7-二甲氧基喹喔啉-2-基氧基)-環(huán)己基二甲基-氨基甲酸酯4-(6，7-二甲氧基喹喔啉-2-基氧基)-環(huán)己醇(100mg，0．33mmol)，二甲基氨基甲酰氯(90微升，1．2mmol)和NaH(60％，19．6mg，0．49mmol)混合物的5ml THF溶液于室溫下攪拌3天，層析(50％乙酸乙酯／己烷)分離得到白色固體(m．p．152-155℃)．元素分析C19H25N3O5計算值C，60．79；H，6．71；N，11．19；實測值C，60．38；H，6-54； N，10．43。實施例20 3-環(huán)己氧基-6，7-二甲氧基喹喔啉1-氧化物將2-環(huán)己氧基-6，7-二甲氧基喹喔啉(10mg，0．38mmol)和間氯過苯甲酸(70％，113mg，0．46mmol)在10mL二氯甲烷中的混合物室溫攪拌1天。過濾后濃縮溶液，殘留物通過硅膠層析(20％乙酸乙酯／己烷)，得到所需產(chǎn)物(m．p．167-169℃)。
類似地可制得反式-4-(6，7-二甲氧基-4-氧基-喹喔啉-2-基氨基)-環(huán)己醇(m．p．220-222℃)。元素分析C16H21N3O4·0．2H2O計算值C，59．42；H，6．69；N，12．99；實測值C，59．43；H，6．64；N，12．95．實施例21 反式-4-(6，7-二甲氧基喹喔啉-2-基氨基)-環(huán)己基乙酸酯4-(6，7-二甲氧基喹喔啉-2-基氨基)-環(huán)己醇(303mg，1mmol)，乙酸酐(2ml)和吡啶(2ml)混合物的10ml二氯甲烷溶液于室溫下攪拌過夜?；旌衔锛铀?5ml)驟冷，用二氯甲烷提取(2×30ml)。用硫酸鎂干燥并過濾后，于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器上濃縮溶液。硅膠層析殘余物(乙酸乙酯)，得到所需的乙酸酯，為淺黃色固體(m．p．176-177℃)．元素分析C18H23N3O4計算值C，62．59；H，6．71；N，12．17；實測值C，62．89；H，6．67；N，11．95。實施例22 (2外，5外)-5-(6，7，-二甲氧基喹喔啉-2-基氨基)-二環(huán)[2．2．1]庚烷-2-醇(2外，5外)-5-氨基二環(huán)[2．2．1]庚烷-2-乙酸酯(127mg，0．75mmol)和2-氯-6，7-二甲氧基喹喔啉(224mg，1mmol)的混合物加熱至180℃反應(yīng)6小時。然后冷卻混合物至室溫，溶于二氯甲烷，通過快速柱純化?；厥盏漠a(chǎn)物(20mg，收率7．5％)溶于甲醇(2ml)，加入新鮮的1N甲醇鈉(0．063ml，0．063mmol)?；亓鞣磻?yīng)混合物90分鐘。用制備性薄層層析純化粗品混合物，得到黃色固體的產(chǎn)物，(m．p．97-100℃)。
元素分析C17H21N3O3(m／z)315用適當(dāng)?shù)钠鹗嘉镔|(zhì)類似地制備下列化合物(2內(nèi)，5外)-5-(6，7，-二甲氧基喹啉-2-基氨基)-二環(huán)[2-2．1]庚烷-2-醇，系黃色固體。元素分析C17H21N3O3(m／z)315。
(2外，6外)-6-(6，7，-二甲氧基喹啉-2-基氨基)-二環(huán)[2．2．1]庚烷-2-醇，系黃色固體(30mg，共21％)。
元素分析C17H21N3O3計算值C，64．74；H，6．71；N，13．32；實測值C，58．42；H，6．26；N，11．96。實施例23 (2反式，4順式)-4-(6，7-二甲氧基喹喔啉-2-基氨基)-2-甲基-環(huán)己醇和(2反式，4反式)-4-(6，7-二甲氧基喹喔啉-2-基氨基)-2-甲基-環(huán)己醇2-氯-6，7-二甲氧基喹喔啉(1．089，4．81mmol)和(2反式)-4-氨基-2-甲基環(huán)己醇(620mg，4．81mmol)的混合物加熱至180℃反應(yīng)6小時。反應(yīng)得到兩種非對映體。
分離主要異構(gòu)體，為黃色固體，命名為(2反式，4反式)-4-(6，7-二甲氧基喹喔啉-2-基氨基)-2-甲基-環(huán)己醇(240mg，0．76mmol)C17H23N3O3(m／z)317。元素分析C17H23N3O3·2H2O計算值C，58．00；H，7．69；N，11．94；實測值C，58．0； H，6．58；N，11．24。
次要異構(gòu)體也為黃色固體，命名為(2反式，4順式)-4-(6，7-二甲氧基喹喔啉-2-基氨基)-2-甲基-環(huán)己醇C17H23N3O3(m／z)317。
元素分析C17H23N3O3·H2O計算值C，60．08；H，6．94；N，12．53；實測值C，61．21；H，6．94；N，11．56。
進一步通過手性分離(2反式，4反式)4(6，7-二甲氧基喹喔啉-2-基氨基)-2-甲基-環(huán)己醇得到其單獨的對映體。第一個對映體有(+)-旋光性(于Chiracel OJ上的洗脫順序)，第二個對映體有(-)-旋光性(于ChiaracerOJ上的洗脫順序)。利用Chiracel OD柱的分析條件可得到(+)旋光性對映體第二個洗脫。(-)旋光性的對映體在PDGF-R ELISA檢驗中表現(xiàn)有極好的活性。實施例24 (2順式，4順式)-4-(6，7-二甲氧基喹喔啉-2-基氨基)-2-甲基-環(huán)己醇和(2順式，4反式)-4-(6，7-二甲氧基喹喔啉-2-基氨基)-2-甲基-環(huán)己醇(2反式，4反式)-4-(6，7-二甲氧基喹喔啉-2-基氨基)-2-甲基-環(huán)己醇和(2反式，4順式)-4-(6，7-二甲氧基喹喔啉-2-基氨基)-2-甲基-環(huán)己醇(120mg，0．38mmol)的2∶1混合物之THF溶液(7ml)中加入三苯膦(110mg，0．42mmol)和偶氮二羧酸二乙酯(0．066ml，0．42mmol)以及苯甲酸(46．4mg，0．38mmol)。室溫下攪拌混合物過夜，吸干殘余物硅膠分離(305乙酸乙酯／己烷)，得到苯甲酸酯混合物。
主要苯甲酸酯(50mg，0．12mmol)的甲醇溶液(2ml)中加入1N氫氧化鈉(0．12ml，0．12mmol)。從制備性薄層層析分離純的產(chǎn)物(13mg，32％收率)，系黃色固體(m．p．85-88℃)，命名為(2順式，4順式)-4-(6，7-二甲氧基-喹喔啉-2-基氨基)-2-甲基-環(huán)己醇。C17H23N3O3(m／z)317。
類似地，水解次要苯甲酸酯(4．4mg)，從制備性薄層層析分離所需產(chǎn)物(3．3mg，100％)，為黃色產(chǎn)物，命名為(2順式，4反式)-4-(6，7-二甲氧基基-喔啉-2-基氨基)-2-甲基-環(huán)己醇。C17H23N3O3(m／z)317。實施例25 (1R，2R，4S)-(+)-二環(huán)[2．2．1]庚-2-基-(6，7-二甲氧基喹喔啉-2-基)-胺利用手性HPLC柱(Chiralpac AD，25×2cm，含10mM(1S)-(+)-樟腦磺酸的60％庚烷／40％乙醇，12mL／分鐘)拆分實施例17的(±)-二環(huán)[2．2．1]庚-2-基-(6，7-二甲氧基喹喔啉-2-基)-胺，上述標題化合物以第一洗脫物形式得到。合并所收集的餾分，用50ml 1N的NaOH洗滌，然后干燥(MgSO4)。過濾后的溶液用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器濃縮，然后在高真空下干燥。得到黃色固體。[α]d20+19．5°(c=0．20，CH2Cl2)，m．p．184-186℃．元素分析C17H21N3O2×0．3H2O計算值C，66．90；H，7．15；N，13．77；實測值C，66．86；H，7．01；N，13．86．實施例26 (1S，2R，4S，5R)-5-(6，7，-二甲氧基喹喔啉-2-基氨基)-二環(huán)[2．2．1]庚烷-2-醇的生物轉(zhuǎn)化法制備真菌菌株F2052(Mortierella isabellina)購自Northern Utilizationresearch and Development division(NRRL)。
真菌儲存于-25℃。用2ml真菌懸浮液接種至每只中含有50ml種子培養(yǎng)基(培養(yǎng)基216)的250錐形燒瓶，往復(fù)式搖床(200轉(zhuǎn)／分)23℃培養(yǎng)3天。24小時后，將實施例25的(1R，2R，4S)-(+)-二環(huán)[2．2．1]庚-2-基-(6，7-二甲氧基喹喔啉-2-基)-胺溶于MeOH，加入燒瓶中至終濃度為300mg／L。培養(yǎng)24小時后收獲培養(yǎng)物。(培養(yǎng)基216葡萄糖0．4％，酵母提取物0．05％，大豆粉0．05％，NaCl 0．05％，KH2PO40．05％)。用乙腈進行提取，向1體積發(fā)酵液中加入1體積叔丁基甲基醚和1體積正己烷。于22℃磁力攪拌后，提取物分為3層。收集中間層，并蒸發(fā)干燥，重新溶解于乙酸乙酯中。用乙酸乙酯為洗脫劑于硅膠上(0．04-0．063mm)分離乙酸乙酯提取物。含有生物轉(zhuǎn)化產(chǎn)物的級分用H2O／MeOH梯度為洗脫劑于C18硅石上分離。層析得到純的標題化合物，系無定形的黃色粉狀，m．p．190-192℃。實施例27 反式-4-[7-甲氧基-6-(2-嗎啉-4-基-乙氧基)-喹喔啉-2-基氨基]-環(huán)己醇和反式-4-[6-甲氧基-7-(2-嗎啉-4-基-乙氧基)-喹喔啉-2-基氨基]-環(huán)己醇標題化合物如下制備利用實施例1的方法，使6-羥基-7-甲氧基-2-氯喹喔啉7-(2-嗎啉-4-基乙氧基)-6-甲氧基-2-氯喹喔啉與2-(嗎啉-4-基)乙醇進行Mitsunobu偶聯(lián)，隨后采用實施例11的方法，使所得6-(2-嗎啉-4-基乙氧基)-7-甲氧基-2-氯喹喔啉7-(2-嗎啉-4-基乙氧基)-6-甲氧基-2-氯喹喔啉與反式-4-氨基-環(huán)己醇反應(yīng)。實施例28 2-[2-(反式-4-羥基-環(huán)己基氨基)-7-甲氧基-喹喔啉-6-基氧基]-1-乙酸和2-[2-(反式-4-羥基-環(huán)己基氨基)-6-甲氧基-喹喔啉-7-基氧基]-1-乙酸標題化合物如下制備如實施例8所述，利用乙硫醇鈉鹽在DMF中脫烷基化4-(6，7-二甲氧基喹喔啉-2-氨基)環(huán)己醇，隨后按一般方法6所述在堿存在下用溴乙酸進行烷基化。實施例29 2-[2-(反式-4-羥基-環(huán)己基氨基)-7-甲氧基-喹喔啉-6-基氧基]-N，N-二甲基-乙酰胺和2-[2-(反式-4-羥基-環(huán)己基氨基)-6-甲氧基-喹喔啉-7-基氧基]-N，N-二甲基-乙酰胺采用二甲胺氨解實施例29的化合物，制得標題化合物。中間體實施例1 4-溴-5-甲氧基-苯-1，2-二胺二鹽酸鹽氬氣氛下，向EtOAc(50mL)和5-溴-4-甲氧基-2-硝基-苯胺(2．5g，10mmol)的溶液內(nèi)加入5％Pd／C(0．5g)。在50psi下氫化反應(yīng)混合物1小時。通過硅藻土，將混合物過濾到HCl／IPA／EtOAc溶液內(nèi)，濾墊用另外的EtOAc洗滌。濾出所得沉淀物，得到白色固體。中間體實施例2 7-溴-6-甲氧基-喹喔啉-2-醇和6-溴-7-甲氧基喹喔啉-2-醇氬氣氛下，向MeOH溶液(15mL)內(nèi)加入粉化的NaOH片狀物(0．86g，21mmol)和4-溴-5-甲氧基-苯-1，2-二胺二鹽酸鹽(2．7g，9．3mmol)。攪拌混合物10分鐘，然后分批加入45％乙醛酸乙酯的甲苯溶液(2．7g，12mmol)?；亓鞣磻?yīng)混合物1小時，然后冷卻。加入水，隨后過濾懸浮液。所得固體接連用水、甲醇、IPA和乙醚洗滌，得到黃色粉末。中間體實施例3 7-溴-2-氯-6-甲氧基-喹喔啉和6-溴-2-氯-7-甲氧基-喹喔啉向7-溴-6-甲氧基-喹喔啉-2-醇和6-溴-7-甲氧基-喹喔啉-2-醇的混合物(1g，3．9mmol)中加入POCl3(5mL)?；亓鞣磻?yīng)混合物1小時，倒入到冰水內(nèi)，過濾，然后水洗，從而得到淺褐色固體。7-溴-2-氯-6-甲氧基喹喔啉6-溴-2-氯-7-甲氧基-喹喔啉的比值大約為7∶1(由1H NMR確定)。中間體實施例4 5-氯-4-甲氧基-2-硝基苯胺向N-(5-氯-4-甲氧基-2-硝基苯基)-乙酰胺(2g，8．2mmol)在5N HCl(20mL)的溶液中加入1，4-二噁烷(10mL)，將混合物在60℃攪拌1．5小時。濃縮反應(yīng)混合物并分配到EtOAc／2N NaOH之內(nèi)。水層用EtOAc(3X)、鹽水洗滌，干燥(MgSO4)，爾后吸附在硅膠上進行層析(70％EtOAc／己烷)，得到橙色粉末。中間實施例5 4-氯-5-甲氧基-苯-1，2-二胺二鹽酸鹽氫氣氛下，向EtOAc(25mL)和5-氯-4-甲氧基-2-硝基-苯胺(1．6g，7．9mmol)的溶液內(nèi)加入5％Pd／C(0．5g)。在50psi下氫化反應(yīng)混合物1小時。在氮氣氛下通過硅藻土將混合物過濾到1N HCl ／Et2O的EtOAc溶液內(nèi)，濾墊用另外的EtOAc洗滌。濾出所得沉淀物，得到白色固體物。中間體實施例6 7-氯-6-甲氧基-喹喔啉-2-醇和6-氯-7-甲氧基-喹喔啉-2-醇0℃及氫氣氛下，向4-氯-5-甲氧基-苯-1，2-二胺二鹽酸鹽(1．8g，7．2mmol)的EtOH(15mL)溶液內(nèi)加入TEA(2．5mL，18mmol)。攪拌混合物20分鐘，然后分批加入45％乙醛酸乙酯的甲苯溶液(2．1g，9．3mmol)。溫?zé)岱磻?yīng)混合物至室溫，回流1．5小時，然后冷卻。加水，隨后過濾懸浮液，并接連用水、IPA、和乙醚洗滌，得到淺黃色粉末。使用前，先將產(chǎn)物與甲苯共沸數(shù)次，爾后真空干燥。中間體實施例7 2，7-二氯-6-甲氧基-喹喔啉和2，6-二氯-7-甲氧基-喹喔啉在有CaCl2干燥管存在下，向7-氯-6-甲氧基-喹喔啉-2-醇和6-氯-7-甲氧基-喹喔啉-2-醇的混合物(1g，4．7mmol)中加入POCl3(5mL)。回流反應(yīng)混合物30分鐘，倒入飽和碳酸氫鈉冷溶液內(nèi)，過濾，然后水洗，得到一固體物。其中2，7-二氯-6-甲氧基-喹喔啉與2，6-二氯-7-甲氧基-喹喔啉之比大約為6∶1(由1H NMR確定)。中間體實施例8 順式-4-氨基環(huán)己醇根據(jù)藥物化學(xué)雜志，18(6)634，1975所述方法略加改動制備順式-4-氨基環(huán)己醇。中間體實施例9 外-二環(huán)[2．2．1]庚-5-烯-2-胺采用和中間體實施例12相同的方法，由5-降冰片烯-2-醇經(jīng)多用途中間體外-2-二環(huán)[2．2．1]庚-5-烯-2-基異吲哚-1，3-二酮制備外-二環(huán)[2．2．1]庚-5-烯-2-胺。中間體實施例10 (2外，6外)-2-(6-羥基-二環(huán)[2．2．1]庚-2基-異吲哚-1，3-二酮和(2外，5外)-2-(5-羥基-二環(huán)[2．2．1]庚-2-基-異吲哚-1，3-二酮0℃下，外-2-二環(huán)[2．2．1]庚-2-烯-2-基-異吲哚-1，3-二酮(320毫克，134毫摩)的5毫升THF溶液中加入BH3／THF溶液(1M，2毫升，2毫摩)。室溫下攪拌混合物2小時，然后加入水(2毫升)和NaBO3·4H2O(900毫克)。所得懸浮液攪拌過夜。用乙醚(3×50毫升)提取，硫酸鎂干燥。過濾后濃縮殘余物，硅膠(乙醚)層析，得到可被進一步分離的所需產(chǎn)物。中間體實施例11 (2外，5內(nèi))-2-(5-羥基-二環(huán)[2．2．1]庚-2-基-異吲哚-1，3-二酮(a)(2外，6外)-2-(6-羥基-二環(huán)[2．2．1]庚-2-基-異吲哚-1，3-二酮和(2外，5外)-2-(5-羥基-二環(huán)[2．2．1]庚-2-基-異吲哚-1，3-二酮(800毫克，3．3毫摩)與吡啶氯鉻酸鹽(2克)混合物的10毫升二氯甲烷溶液于室溫下攪拌經(jīng)過周末。用乙醚(100毫升)稀釋后，過濾懸浮液并濃縮。硅膠(乙醚)層析殘余物得到750毫克相應(yīng)的酮(95％)。用反向HPLC進一步分離所得酮(CH3CN／H2O，10-70％)，得到外-2-(5-氧基-二環(huán)[2．2．1]庚-2-基-異吲哚-1，3-二酮。
(b)0℃下，外-2-(5-氧基-二環(huán)[2．2．1]庚-2-基-異吲哚-1，3-二酮的10毫升甲醇溶液中加入NaBH4(38毫克，1毫摩)。再攪拌混合物半小時，用1N HCl(1毫升)驟冷。濃縮后，用二氯甲烷提取殘余物(2×50ml)。蒸發(fā)二氯甲烷得到所需產(chǎn)物(可直接使用無需進一步純化)。中間體實施例12 (2內(nèi)，5外)-5-氨基-二環(huán)[2．2．1]庚烷-2-醇，(2外，5外)-5-氨基-二環(huán)[2．2．1]庚烷-2-醇，(2內(nèi)，6外)-6-氨基-二環(huán)[2．2．1]庚烷-2-醇和(2外，6外)-6-氨基-二環(huán)[2．2．1]庚烷-2-醇利用上述中間體實施例的方法從適當(dāng)?shù)钠鹗嘉镔|(zhì)制備標題化合物。中間體實施例13 2-甲基-6，7-二甲氧基喹喔啉標題化合物采用改進的Tamao等人的方法(四面體，1982，38，3347-3354)制備。。氬氣氛下，向THF溶液內(nèi)加入2-氯-6，7-二甲氧基喹喔啉(5g，26mmol)和NiCl2(dppp)(0．14g，0．26mmol)。冷卻反應(yīng)混合物到0℃，分批加入3M MeMgBr的乙醚溶液(13mL，39mmol)。溫?zé)岱磻?yīng)混合物至室溫，攪拌1小時，然后進一步回流1．5小時。冷卻混合物，用10％HCl驟冷，并攪拌10分鐘，隨后用5％NaOH調(diào)節(jié)至堿性。向反應(yīng)物中加入二氯甲烷和水，攪拌混合物過夜。然后再另外加入CH2Cl2，H2O和NaCl，過濾混合物。將所得溶液倒入分液漏斗內(nèi)，水層用二氯甲烷洗滌3次。合并有機層，用鹽水洗滌，干燥(MgSO4)，濃縮物倒入硅膠上，并進行層析(50％-80％EtOAc／己烷)，得到橙色固體(49％收率)。中間體實施例14 6，7-二甲氧基-2-喹喔啉甲醛氬氣氛下，向反應(yīng)燒瓶內(nèi)加入1，4-二噁烷(20mL)、2-甲基-6，7-二甲氧基喹喔啉(1．09g，5．3mmol)和SeO2(1．8g，16mmol)。加熱混合物至100℃反應(yīng)2小時45分鐘，冷卻，并通過硅藻土過濾。濾墊用數(shù)份乙酸乙酯和二氯甲烷洗滌。濃縮所得溶液，將殘留物溶于MeOH／CH2Cl2，并裝在硅膠柱上進行層析(30％EtOAc／CH2Cl2)，得到灰白色固體(73％收率)。中間體實施例15 (2外，5外)-5氨基二環(huán)[2．2．1]庚烷-2-乙酸酯按照略加改進的R．Gagnon的方法(J．Chem．Soc．Perkin trans I．1505，1995)，由二環(huán)[2．2．1]庚-2，5-二烯制備外-5-乙酰氧基二環(huán)[2．2．1]庚烷-2-酮和外-6-乙酰氧基二環(huán)[2．2．1]庚烷-2-酮。
室溫下，向外-5-乙酰氧基二環(huán)[2．2．1]庚烷-2-酮(350mg，2．08mmol)的10mL THF溶液中加入1M硼烷／THF溶液(1．2mL，1．2mmol)。攪拌混合物0．5小時，然后在0℃下加甲醇(3mL)和1N HCl(1．5mL)驟冷。用乙酸乙酯(3×30mL)提取，并以硫酸鎂干燥。過濾并濃縮后所得殘留物通過硅膠層析，得到(2內(nèi)，5外)-5-乙酰氧基二環(huán)[2．2．1]庚烷-2-醇。
0℃下，向(2內(nèi)，5外)-5-乙酰氧基二環(huán)[2．2．1]庚烷-2-醇(350mg，2．06mmol)的THF(10mL)溶液內(nèi)加入鄰苯二甲酰亞胺(454mg，3．09mmol)、三苯膦(810mg，3．09mmol)和偶氮二羧酸二乙酯(0．49mL，3．09mmol)。攪拌反應(yīng)過夜，然后用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器濃縮，并將殘留物通過柱色譜純化(20％乙酸乙酯／己烷)，得到所需產(chǎn)物，為黃色固體。
將上述固體(300mg，1mmol)和肼(0．126mL，2．2mmol)在5mL甲醇中的混合物加熱回流6小時。除去甲醇后，用二氯甲烷(3×30mL)提取殘留物。濃縮溶劑后得到(外，外)-5-氨基二環(huán)[2．2．1]庚烷-2-乙酸酯(127mg，75％)，它無需進一步純化而直接用于偶聯(lián)反應(yīng)中。
類似地，可以由合適的起始物質(zhì)制備(2內(nèi)，5外)-5-氨基二環(huán)[2．2．1]庚烷-2-乙酸酯，(2內(nèi)，6外)-6-氨基二環(huán)[2．2．1]庚烷-2-乙酸酯和(2外，6外)-6-氨基二環(huán)[2．2．1]庚烷-2-乙酸酯。中間體實施例16 (2反式)-4-氨基-2-甲基環(huán)己醇3-甲基-2-環(huán)己烯酮(4克，36．36毫摩)，甲苯磺酸(100毫克0和乙二醇(7毫升)混合物的100毫升甲苯溶液回流過夜，通過Dean-Stark收集器去除形成的水。濃縮后殘余物硅膠層析(10％乙酸乙酯／己烷)，得到3．36克(62％)7-甲基-1，4-二氧雜-螺[4．5]癸-7-烯。室溫下，經(jīng)攪拌的7-甲基-1，4-二氧雜-螺[4．5]癸-7-烯(3．36克，22．47毫摩)的四氫呋喃(THF)溶液(125毫升)中加入1M硼烷溶液(22．47毫升，22．47毫摩)。攪拌混合物1小時，0℃下先加入水(10毫升)隨后加入三水合過硼酸鈉(10．0克，66毫摩)終止反應(yīng)?；旌衔飻嚢柽^夜。分成兩層，用乙酸乙酯(4×150毫升)洗滌水層數(shù)次。得到所需的醇，經(jīng)快速柱層析后為澄清液體。
將上述醇(1．8克，10．5毫摩)溶于甲醇(50毫升)和1N HCl(16毫升)反應(yīng)混合物攪拌過夜。用1N氫氧化鈉(18毫升)中和酸性溶液，然后經(jīng)通常的水吸干處理。粗品混合物經(jīng)快速柱(50％乙酸乙酯)純化得到反式-4-羥基-3-甲基-環(huán)己酮。反式-4-羥基-3-甲基-環(huán)己酮(780毫克，6．1毫摩)的水溶液(3毫升)中加入羥胺鹽酸鹽(550毫克，7．92毫摩)，然后緩慢加入碳酸鈉的飽和溶液(326毫克，3．8毫摩)／水(1．02毫升)。攪拌30分鐘后，反應(yīng)混合物中加入乙醚，分成兩層。濃縮有機層，溶于乙醇(10毫升)。向回流的乙醇溶液中加入鈉鹽(1．8克，78．3毫摩)反應(yīng)1小時，再加熱所得混合物2．5小時。去除乙醇后加入正丙醇(10毫升)，乙醚(25毫升0和水(3毫升)。用硫酸鎂干燥有機溶液，過濾。濃縮溶劑，得到(2反式)-4-氨基-2-甲基環(huán)己醇的混合物，為白色固體。中間體實施例17 2-甲氧基-4，5-二氨基苯酚二鹽酸鹽按照Ehrlich等在有機化學(xué)雜志(J．Org．Chem．)，1947，12，522中所述的方法，氫化2-甲氧基-4，5-二硝基苯酚，制備標題化合物。中間體實施例18 7-羥基-6-甲氧基-喹喔啉-2-醇和6-羥基-7-甲氧基-喹喔啉-2-醇利用中間體實施例2的方法，通過與NaOH和乙醛酸乙酯反應(yīng)，由4-甲氧基-5-羥基苯-1，2-二胺二鹽酸鹽制備標題化合物。中間體實施例19 7-羥基-6-甲氧基-2-氯喹喔啉和6-羥基-7-甲氧基-2-氯喹喔啉利用中間體實施例3的方法，通過與POCl3反應(yīng)，由7-羥基-6-甲氧基-喹喔啉-2-醇和6-羥基-7-甲氧基-喹喔啉-2-醇制備標題化合物。
本文所述的式Ⅰ化合物通過抑制PDGF-R酪氨酸激酶活性而能抑制細胞增殖和／或細胞基質(zhì)生成和／或細胞移動(趨化作用)。這種細胞不受控制的繁殖或基質(zhì)的過度生成或調(diào)控不良的編程性細胞死亡引發(fā)多種疾病。這些疾病狀態(tài)涉及多種類型細胞，且包括這樣一些病癥，如白血病，癌癥，惡性膠質(zhì)瘤，牛皮癬，炎癥性疾病，骨病，纖維變性疾病，動脈粥樣硬化和冠狀動脈、股動脈或腎動脈血管成形術(shù)后的再狹窄或，如纖維增生性疾病中的關(guān)節(jié)炎，肺、腎和肝臟的纖維變性。特別是，據(jù)報道，PDGF和PDGF-R與特定種類癌癥和腫瘤有關(guān)，如腦癌，卵巢癌，結(jié)腸癌，前列腺癌，肺癌，卡波濟氏肉瘤和惡性黑素瘤。另外，還有冠狀動脈分流術(shù)所致的非控性細胞增殖性疾病。據(jù)信，抑制酪氨酸激酶活性對細胞不受控制的繁殖或基質(zhì)的過度生成或難以調(diào)控的編程性細胞死亡的控制非常有效。
本發(fā)明涉及調(diào)整和／或抑制細胞信號傳導(dǎo)、細胞增殖、和／或胞外基質(zhì)生成和／或細胞移動(趨化作用)的方法，還涉及控制異常細胞生長和細胞炎癥性應(yīng)答的方法。更具體講，本發(fā)明涉及取代喹啉和喹喔啉化合物的用途，通過有效地抑制血小板衍生生長因子-受體(PDGF-R)酪氨酸激酶活性，這些化合物對分化、增殖、基質(zhì)生成、趨化作用或介質(zhì)釋放具有選擇性抑制作用。
自磷酸化，即生長因子受體本身的磷酸化和胞內(nèi)底物宿主的磷酸化，會引發(fā)一些涉及細胞信號傳導(dǎo)、細胞增殖、細胞基質(zhì)生成、趨化作用和介質(zhì)釋放的生化事件。
通過有效地抑制Lck酪氨酸激酶活性，本發(fā)明化合物還可以用于治療移植抗性疾病和自身免疫病如類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，多發(fā)性硬化和系統(tǒng)性紅斑狼瘡，移植排斥，移植物抗宿主病，增殖過度性病癥如腫瘤和牛皮癬，以及其中細胞接受促炎性信號的疾病，如哮喘，炎癥性腸病和胰腺炎。在治療移植抗性疾病時，本發(fā)明化合物可以預(yù)防性使用，或者根據(jù)受治療的人對移植器官或組織的不利反應(yīng)情況使用。當(dāng)預(yù)防性使用時，本發(fā)明化合物可以在移植手術(shù)前施予患者或者施加在要移植的組織或器官上。預(yù)防性治療還包括在移植手術(shù)之后、但在觀察到對移植有不利反應(yīng)的任何征兆之前給藥。當(dāng)根據(jù)不利反應(yīng)的情況施用時，本發(fā)明化合物可以直接施予患者，以便在顯示出抗性表面征兆之后治療移植抗性。
另一方面，本發(fā)明還提供了治療患有或易患這樣一些病癥的患者的方法，其中所述病癥能夠通過施用PDGF-R酪氨酸激酶活性抑制劑和／或Lck酪氨酸激酶活性的抑制劑而得到改善或預(yù)防，例如，如上文所述的病癥，該方法包括對患者施用有效量的式Ⅰ化合物或含有式Ⅰ化合物的組合物，或其可藥用鹽。
應(yīng)當(dāng)理解，這里所述的治療包括預(yù)防性治療和對確認病癥的治療。
在其范圍內(nèi)，本發(fā)明還包括藥物組合物，該組合物包括藥物上可接受量的至少一種式Ⅰ化合物以及可藥用載體，例如佐劑，稀釋劑，包衣物和賦形劑。
在實踐中，治療用的本發(fā)明化合物或組合物可以任何適宜的形式通過例如吸入、局部、非腸道、直腸或口服途徑施用，優(yōu)選口服施用。更具體的給藥途徑包括靜脈內(nèi)、肌內(nèi)、皮下、眼內(nèi)、滑膜內(nèi)、結(jié)腸、腹膜內(nèi)、經(jīng)上皮途徑包括經(jīng)皮、經(jīng)眼、舌下、經(jīng)頰、透皮、眼球內(nèi)、經(jīng)吹入劑和經(jīng)氣霧劑形式的鼻內(nèi)吸入給藥。
式Ⅰ化合物可以呈適合最適宜允許途徑給藥的形式。本發(fā)明還涉及含有至少一種本發(fā)明化合物的藥物組合物，它們適合用作供患者使用的藥物。這些組合物可按照常規(guī)方法使用一種或多種可藥用佐劑或賦形劑制備。佐劑尤為包括稀釋劑，無菌含水介質(zhì)和各種無毒有機溶劑。為了獲得可藥用制劑，組合物可呈片劑、丸劑、顆粒劑、粉劑、水溶液或懸浮液、注射液、酏劑或糖漿形式，并且可以含有一種或多種選自甜味劑(如蔗糖，乳糖，果糖，糖精和Nutrasweet_)、調(diào)味劑(如薄荷油，冬青油，或櫻桃或桔子調(diào)料)、著色劑、和穩(wěn)定劑(如尼泊金甲酯或丙酯)的物質(zhì)。
載體的選擇以及活性物質(zhì)在載體中的含量通常一般取決于產(chǎn)物的溶解性和化學(xué)性質(zhì)、具體給藥方式以及制藥實踐中所遵守的條件。例如，將賦形劑(如乳糖，檸檬酸鈉，碳酸鈣，磷酸氫鈣)和崩解劑(如淀粉，藻酸和某些復(fù)合硅膠)與潤滑劑(如硬脂酸鎂，十二烷基硫酸鈉和滑石)混合，可用于制備片劑、錠劑、丸劑、膠囊劑等。為制備膠囊劑，較有利的是使用乳糖和液體載體，如高分子量聚乙二醇。許多其它物質(zhì)可用作包衣物或者用于修飾劑量單位的物理形式。例如，片劑、丸劑或膠囊劑可用蟲膠、蔗糖或它們二者包衣。當(dāng)使用水懸浮液時，它們可含有乳化劑或有助于懸浮的物質(zhì)。還可以使用稀釋劑如蔗糖，乙醇，多醇如聚乙二醇，丙二醇和甘油，以及氯仿或它們的混合物。另外，活性化合物也可以加入到持續(xù)釋放制品和制劑內(nèi)。
對于口服給藥，活化化合物可以與例如惰性稀釋劑或與可同化的可食用載體一起施用，或者可以包封在硬或軟殼明膠膠囊內(nèi)，或者還可以壓制成片劑、或者可以直接摻入到食物中，或者可與賦形劑一起混合并以可攝取片劑、口含片、錠劑、膠囊、酏劑、懸浮液、糖漿、糯米紙囊劑等形式使用。
對于非腸道給藥，可以使用本發(fā)明化合物在植物油(例如芝麻油、花生油或橄欖油)，或水-有機溶液(如水和丙二醇)、可注射的有機酯如油酸乙酯，以及可藥用鹽的無菌水溶液中的乳劑、懸浮劑或溶液。可注射形式必須是達到易注射程度的液體，并且可通過例如使用包衣物(如卵磷脂)、通過維持所需顆粒的大小(就分散液而言)以及通過利用表面活性劑保持適當(dāng)?shù)牧鲃有?。通過使用延緩吸收劑(例如，單硬脂酸鋁和明膠)可延長可注射組合物的吸收。本發(fā)明產(chǎn)物的鹽的溶液特別適于肌內(nèi)或皮下注射給藥。通過在水中與表面活性劑如羥丙基纖維素適當(dāng)混合，可以制備游離堿或其可藥用鹽形式的本發(fā)明活性化合物的溶液。也可以在乙二醇、液體聚乙二醇或其混合物、以及油中制備分散液。水溶液(也包括鹽在純凈蒸餾水中的溶液)可用于靜脈內(nèi)給藥，但條件是要適當(dāng)?shù)卣{(diào)節(jié)它們的pH，用足量葡萄糖或氯化鈉適當(dāng)緩沖并賦予等滲性，并通過加熱、輻射、微孔過濾、和／或用各種殺菌劑和殺真菌劑(例如尼泊金、氯丁醇、苯酚、山梨酸、硫柳汞等)進行殺菌。
無菌注射溶液可如下制備將需要量的活性化合物混入到含有上述各種其它成分的適當(dāng)溶劑中，如果需要，隨后進行無菌過濾。一般來講，分散液可通過將各種無菌活性成分摻入到無菌載體中而制備，其中所述無菌載體中包含基本分散介質(zhì)和所需的上述其它成分。就用于制備無菌注射溶液的無菌粉末而言，其優(yōu)選的制備方法包括真空干燥和凍干技術(shù)，從而產(chǎn)生活性成分加上前述其無菌過濾溶液中所需的任何附加成分的粉劑。
對于局部給藥，可使用含有本發(fā)明化合物的凝膠(水基或醇基)，霜劑或軟膏劑。本發(fā)明化合物也可以摻入到斑貼用的凝膠或基質(zhì)內(nèi)，從而能夠通過透皮屏障緩釋本發(fā)明化合物。
對于吸入給藥，可以將本發(fā)明化合物溶解或懸浮在適合噴霧器或懸浮液或溶液型氣霧劑中使用的的合適載體中，或者可使其吸收或吸附于干粉吸入器用的合適固體載體上。
直腸給藥用的固體組合物包括按照公知方法配制的栓劑，其中含有至少一種式Ⅰ化合物。
還可以如此配制本發(fā)明組合物，以便能抵抗由對流和／或擴散所致的從脈管(動脈或靜脈)壁上的迅速清除情況，從而增加病毒顆粒在所需作用部位的駐留時間。包括本發(fā)明化合物的外膜周藥庫(depot)可用于持續(xù)釋放。這樣一種用于施用本發(fā)明化合物的有用藥庫可以是共聚物基質(zhì)(如乙烯-乙酸乙烯酯)，或包覆有Silastic殼的聚乙烯醇。另一方面，本發(fā)明化合物也可以從植入在外膜內(nèi)的硅酮聚合物中局部釋出。
在經(jīng)皮、經(jīng)血管遞送過程中，將本發(fā)明化合物的損耗降至最小的另一可供選擇的途徑包括使用非擴散性藥物洗脫型微顆粒。這些微顆粒可包括各種合成聚合物，如polyactide，或天然物質(zhì)，包括蛋白質(zhì)或多糖。這類微顆粒能夠有計劃地控制包括藥物總劑量及其釋放動力學(xué)在內(nèi)的各種變量。通過多孔氣囊導(dǎo)管或斯滕特氏印模上的氣囊可以將微顆粒有效地注入到動脈或靜脈壁，并在血管壁和外膜周組織中保留至少兩周。局部血管內(nèi)位點特異性遞送治療劑的制劑和方法學(xué)見Reissen等人所述(美國心臟學(xué)院雜志(J．Am．Coll．Cardiol．)1994，231234-1244)，其全部內(nèi)容在此并入引作參考。
本發(fā)明組合物也可以包括水凝膠，這種水凝膠由任何生物相容性或非細胞毒性的(均或雜)聚物制備，如可用作藥物吸收海綿的親水聚丙烯酸聚合物。例如，這些聚合物在專利申請WO93／08845中有介紹，其全部內(nèi)容在此并入引作參考。它們中的某些，例如，特別是由氧化乙烯和／或氧化丙烯制得的那些，可以從市場上購得。
在使用本發(fā)明化合物治療與增殖過度性病癥有關(guān)的病理學(xué)疾病時，可以通過不同方式施用本發(fā)明化合物。對于再狹窄的治療，可以利用涂覆有親水膜(例如水凝膠)的血管成形術(shù)氣囊(其中的親水膜被化合物飽和)，或者利用含有化合物輸注腔的任何其它導(dǎo)管，將本發(fā)明化合物直接施予血管壁處，從而能夠以精確方式施加到受治療部位，并在受治療細胞部位有效地局部釋放出化合物。更為可取的是，這種給藥方法能夠使化合物迅速地與需要治療的細胞接觸。
本發(fā)明治療方法的優(yōu)點在于在受治療部位上導(dǎo)入本發(fā)明化合物。例如，可以將包含親水膠的組合物直接沉積在受治療部位的表面(例如，在手術(shù)干預(yù)過程中就可以如此)。有利的是，優(yōu)選在血管成形術(shù)過程中，親水膠通過涂布在導(dǎo)管(例如氣囊導(dǎo)管)上而能導(dǎo)入到所希望的血管內(nèi)部位，并釋放到血管壁中。在一種特別有利的方式中，利用氣囊導(dǎo)管將飽和親水膠導(dǎo)入到受治療部位。在導(dǎo)管插入到血流內(nèi)之后，為了將藥物損耗降至最低，可以用伴有保護性護套的氣囊，因為導(dǎo)管是向著靶血管方向前進的。
本發(fā)明的另一實施方案提供了利用灌注氣囊施用本發(fā)明化合物。這些灌注氣囊可能能使血流得以保持不變，這樣在氣囊膨脹時就降低了心肌局部缺血的危險性，也能夠在常壓下相對長時間內(nèi)(超過20分鐘)局部釋放化合物，而這種長時間對于其最佳作用而言也是必需的。另一方面，還可以使用溝槽氣囊導(dǎo)管(“溝槽氣囊血管成形術(shù)導(dǎo)管”，Mansfield Medical，BoronScientific Corp．，Watertown，MA)。后者包括覆蓋有24孔多孔管層的常規(guī)氣囊，通過附加的輸注口經(jīng)獨立的腔灌注這些多孔管。Reissen等(1994)介紹了各種類型的氣囊導(dǎo)管，如雙氣囊，多孔氣囊，微孔氣囊，通道氣囊，帶氣囊的斯滕特氏印模和親水膠導(dǎo)管，所有這些都可用于實施本發(fā)明，并且上述文獻的全部內(nèi)容在此并入引作參考。
特別優(yōu)選使用灌注氣囊導(dǎo)管，因為它不僅具有通過保持方便的滑動特性而能長期保持氣囊膨脹的優(yōu)點，而且還具有親水膠位點特異性的優(yōu)點，這兩種優(yōu)點能同時獲得。
本發(fā)明的另一方面涉及包括本發(fā)明化合物和泊咯沙姆(如泊咯沙姆407是一種生物相容性的無毒多醇，可從市場上購得(BASF，Parsippany，NJ))的藥物組合物。
浸漬有本發(fā)明化合物的泊咯沙姆在例如手術(shù)干預(yù)期間可直接沉積在受治療組織的表面。泊咯沙姆具有與親水膠基本相同的優(yōu)點，但粘性較低。
使用帶有本發(fā)明化合物浸漬過的泊咯沙姆的溝槽氣囊導(dǎo)管尤為有利。在這種情況下，不僅具有長期保持氣囊膨脹(同時能保持容易滑動的特性)的優(yōu)點，而且還具有泊洛沙姆位點特異性的優(yōu)點，這兩種優(yōu)點能同時獲得。
活性成分在本發(fā)明組合物中的百分含量是可變的，但必需構(gòu)成獲得適宜劑量所需的比例。顯然，可以在大約同一時間施用數(shù)種單位劑量形式。所用劑量由主治醫(yī)師或有資歷的醫(yī)師決定，并且取決于所需療效、給藥途徑和治療持續(xù)時間、以及患者的病情。對成人而言，吸入給藥的劑量一般為每天每千克體重約0．001-約50mg，優(yōu)選約0．001-約5mg，口服給藥劑量為約0．01-約100，優(yōu)選0．1-70，更優(yōu)選0．5-10m／kg體重，以及靜脈內(nèi)給藥的劑量為約0．001-約10，優(yōu)選0．01-10mg／kg體重。在各種具體病例中，將根據(jù)受治療患者的特定因素，如年齡、體重、總體健康狀況和其它能影響本發(fā)明化合物效力的性質(zhì)決定所用劑量。
為獲得所需療效，可以根據(jù)需要頻繁地施用本發(fā)明化合物／組合物。一些患者可能會對較高或較低劑量作出迅速反應(yīng)，由此可尋求出更低的合適維持劑量。對于其它患者而言，根據(jù)每一具體患者的生理需要，可能需要以每天1-4劑量的給藥頻率進行長期治療。通?；钚援a(chǎn)物每天可口服給藥1-4次。當(dāng)然，對其它患者來講，規(guī)定每天給藥不超過一次或兩次可能是必需的。
本發(fā)明化合物也可以與其它治療劑如藥劑一起聯(lián)合配制使用，或者如下文所述，如此配制它們以便與治療技術(shù)一起結(jié)合用于所述藥理學(xué)病癥部位，這可通過施用式Ⅰ化合物而使病癥得以緩解在采用諸如氣囊、部分切除或激光技術(shù)用的任何裝置治療血管成形術(shù)后再狹窄的過程中可使用本發(fā)明化合物。在1)對血管封閉進行初步治療，或2)在采用任何裝置的血管成形術(shù)不能得到開放動脈的情況下，本發(fā)明化合物可以在斯滕特氏印模安置在血管系統(tǒng)內(nèi)之后用于治療再狹窄。本發(fā)明化合物可以通過口服、非腸道給藥方式使用，或者本發(fā)明化合物可以通過特種裝置的介入或以在斯滕特氏印模裝置上的適當(dāng)配制涂層形式局部施用。
本發(fā)明化合物可以與任何抗凝劑、抗血小板劑、抗血栓劑或促溶解纖維蛋白劑聯(lián)合用于治療再狹窄。為了安全地進行介入療法或防止血栓形成的有害作用，通常在介入療法之前、之中和之后使用這些種類藥劑對患者進行并行治療。已知為抗凝劑、抗血小板劑、抗血栓劑或促溶解纖維蛋白劑的一些藥劑種類的實例包括肝素的任何制劑，低分子量肝素，五糖，纖維蛋白原受體拮抗劑，凝血酶抑制劑，Ⅹa因子抑制劑，或Ⅶa因子抑制劑。
在治療再狹窄或動脈粥樣硬化時本發(fā)明化合物可以與任何抗高血壓藥或膽固醇或脂質(zhì)調(diào)節(jié)劑聯(lián)合使用以同時治療高血壓或動脈粥樣硬化。一些可用于治療高血壓的藥劑的實例包括下列種類β-阻滯劑，ACE抑制劑，鈣通道拮抗劑和α-受體拮抗劑。一些可用于治療高膽固醇水平或脂質(zhì)水平失調(diào)的藥劑的實例包括已知為HMGCoA還原酶抑制劑的化合物，戊聚糖多硫酸酯鈉類(fibrate)化合物。
本發(fā)明化合物可以單獨或與可用于治療癌癥的已知化合物一起聯(lián)合用于治療各種形式癌癥。
應(yīng)當(dāng)理解，本發(fā)明包括本發(fā)明化合物與一種或多種上述種類治療劑的結(jié)合物。
按照文獻所述的試驗方法，本發(fā)明范圍內(nèi)的化合物顯示出顯著的藥理活性，據(jù)信，這些試驗結(jié)果與人和其它哺乳動物的藥理活性相關(guān)。下列體內(nèi)和體外藥理試驗結(jié)果是本發(fā)明化合物的典型特征。藥物組合物的制備和藥理試驗部分本發(fā)明范圍內(nèi)的化合物作為蛋白質(zhì)酪氨酸激酶抑制劑顯示出顯著活性，并且作為細胞抗增殖劑對包括牛皮癬、動脈粥樣硬化和再狹窄損傷在內(nèi)的某些病癥的治療具有治療價值。本發(fā)明范圍內(nèi)的化合物顯示出調(diào)節(jié)和／或抑制細胞信號傳導(dǎo)和／或細胞增殖和／或基質(zhì)生成和／或趨化作用和／或細胞炎性應(yīng)答的活性，并且可用于預(yù)防或延緩這些病癥的發(fā)生或復(fù)發(fā)或者用于治療這些病癥。
為了確定本發(fā)明化合物的效力，使用了下文所述的藥理試驗，這些試驗是本領(lǐng)域中公認的，并認為與哺乳動物的藥理活性相關(guān)。對本發(fā)明范圍內(nèi)的化合物進行這些不同試驗，據(jù)信所得結(jié)果與有效的細胞分化介質(zhì)活性有關(guān)?？梢源_信，對藥理學(xué)和醫(yī)藥化學(xué)領(lǐng)域的專業(yè)人員而言，這些試驗結(jié)果對于在一種或多種本文所述的療法中確定使用受試化合物的參數(shù)提供了充分技術(shù)情報。1．PDGF-R酪氨酸激酶自磷酸化酶聯(lián)免疫吸附測定標題測定按Doll等所述方法進行(藥物化學(xué)雜志(J．Med．Chem．)1994，37，2627)(其內(nèi)容在此并入引作參考)，但使用下述衍生自人主動脈平滑肌細胞(HAMSC)的細胞裂解物。2．細胞分裂發(fā)生測定的一般方法a．細胞培養(yǎng)將人主動脈平滑肌細胞(4-9代)在96孔培養(yǎng)板中于生長支持培養(yǎng)基中培養(yǎng)，每孔6000細胞，生長2-3天。達到大約85％匯合后，利用無血清培養(yǎng)基(SEM)，令細胞生長停滯。b．細胞分裂發(fā)生測定血清耗貧24小時后，移去培養(yǎng)液，替換為受試化合物／載體的SFM溶液(200μl／孔)?；衔锛尤茉诩毎囵B(yǎng)用的DMSO中，濃度10mM，然后進一步在SFM中稀釋。
用化合物預(yù)孵育30分鐘后，以10ng／mL PDGF刺激細胞。在每一化合物濃度下，對刺激和未刺激孔進行測定，一式兩份。
4小時后，加入1μCi3H胸苷／孔。
加入生長因子后24小時終止培養(yǎng)。用胰蛋白酶消化細胞，并利用自動細胞收獲儀(Wallac Machl196)將細胞收集在濾膜上。濾膜用閃爍計數(shù)儀計數(shù)(Wallac Betaplate)，測定摻入DNA的標記物。3．趨化作用測定從ATCC得到早期傳代的人主動脈平滑肌細胞(HASMC)。將細胞在Clonefics SmGM2 SingleQuots培養(yǎng)基中培養(yǎng)，使用4-10代細胞。待細胞80％匯合后，向培養(yǎng)液中加入熒光探針calcein AM(5mM，分子探針)，并溫育細胞30分鐘。在用HEPES緩沖鹽水洗滌之后，細胞用胰蛋白酶消化，并用含0．1％BSA、10mM谷氨酰胺和10％胎牛血清的MCDB131緩沖液(Gibco)中和。離心后，再洗滌細胞一次，以3000細胞／50mL再懸浮在無胎牛血清的相同緩沖液內(nèi)。用不同濃度式Ⅰ化合物(最終DMSO濃度=1％)在37℃溫育細胞30分鐘。對于趨化作用研究，使用96孔改進Boyden槽(Neuroprobe，Inc．)和8mm孔徑的聚碳酸酯膜(Porefics，CA)。所述膜用膠原蛋白(Sigma C3657，0．1mg／mL)涂覆。將PDGF-ββ(3ng／mL)／緩沖液(其中含有或不含式Ⅰ化合物)置于低槽內(nèi)，含或不含抑制劑的細胞(30，000)置于高槽內(nèi)。溫育細胞4小時。移去濾膜，并去除上膜側(cè)上的細胞。干燥后，利用Cytofluor Ⅱ(Millipore)在485／530nm激發(fā)／發(fā)射波長處測量膜的熒光強度。在每一試驗中，由六次平行測定得到平均細胞遷移值。根據(jù)DMSO處理的對照組值確定百分抑制率。根據(jù)五點濃度依賴性抑制值，計算IC50值。結(jié)果以五組這種試驗的平均±SEM表示。4．EGF-受體純化
EGF-受體的純化基于Yarden和Schlessinger的方法。A431細胞在80cm2瓶內(nèi)生長至匯合(2×107細胞／瓶)。用PBS洗滌細胞兩次，并用含11．0mmol EDTA的PBS收獲(37℃下1小時)，以600g離心10分鐘。4℃下，將細胞在冷加溶緩沖液(50mmol Hepes緩沖液，pH7．6，1％曲通X-100，150mmol NaCl，5mmol EGTA，1mmol PMSF，50mg／mL抑蛋白酶肽，25mmol芐脒，5mg／mL亮抑蛋白酶肽，和10mg／mL大豆胰蛋白酶抑制劑)以每2×107細胞1mL加溶20分鐘。以100，000g離心30分鐘后，將上清液裝入WGA-瓊脂糖柱(每2×107細胞100mL填充樹脂)，在4℃下?lián)u動2小時。除去未吸附物，樹脂用HTN緩沖液(50mmol Hepes，pH7．6，0．1％曲通X-100，150mmol NaCl)洗滌兩次，含1M NaCl的HTN緩沖液洗滌兩次，再用HTNG緩沖液(50mmol Hepes，pH7．6，0．1％曲通X-100，150mmol NaCl，和10％甘油)洗滌兩次。EGF-受體用含0．5M N-乙?；?D-葡萄糖胺的HTNG緩沖液(每2×107細胞用200mL)分批洗脫。洗脫物以數(shù)份等份樣形式貯存于-70℃，臨用前用TMTNG緩沖液(50mmol Tris-Mes緩沖液，pH7．6，0．1％曲通X-100，150mmol NaCl，10％甘油)稀釋。5．對EGF-R自磷酸化作用的抑制使細胞在人纖連蛋白涂布的組織培養(yǎng)皿上生長至匯合。用冰冷PBS洗滌兩次后，每培養(yǎng)皿加入500mL裂解緩沖液(50mmol Hepes，pH7．5，150mmol NaCl，1．5mmol MgCl2，1mmol EGTA，10％甘油，1％曲通X-100，1mmol PMSF，1mg／mL抑蛋白酶肽，1mg／mL亮抑蛋白酶肽)裂解細胞，并在4℃溫育5分鐘。在EGF刺激(500mg／mL，10分鐘，37℃)之后，用抗EGF-R(Ab 108)進行免疫沉淀，并在2或10mM本發(fā)明化合物存在下于4℃進行自磷酸化反應(yīng)(50mL等份液，3mCi[g-32P]ATP)樣本2分鐘。加入熱電泳樣本緩沖液終止反應(yīng)。SDA-PAGE分析(7．5％els)，接著進行放射自顯影，通過光密度掃描x射線膠片定量反應(yīng)。a．細胞培養(yǎng)通過用無酪氨酸激酶活性的野生型EGF-受體或突變EGF-受體(其中ATP結(jié)合位點上的Lys721分別被Ala殘基置換)的cDNA構(gòu)建體轉(zhuǎn)染缺乏內(nèi)源EGF-受體的NIH3T3細胞(克隆2．2)(購自C，F(xiàn)ryling，NCI，NIH)，制備稱作HER14和K721A的細胞。在含10％胎牛血清的DMEM(Hyclone，Logan，Utah)中培養(yǎng)所有細胞。6．利用市售試劑盒測定對PKA和PKC的選擇性a．Pierce比色法PKA分析試劑盒，螺旋酶形式(Spinzyme Format)簡單方案PKA酶(牛心)1U／檢定管肯普(kemptide)肽(染料標記)底物45分鐘＠30℃570nm處的吸收度b．Pierce比色法PKA分析試劑盒，螺旋酶形式(Spinzyme Format)簡單方案PKC酶(大鼠腦)0．025U／檢定管Neurogranin肽(染料標記)底物45分鐘＠30℃570nm處的吸收度7．p56lck酪氨酸激酶抑制活性的測定按美國專利5，714，493所述方法測定p56lck酪氨酸激酶抑制活性，所述文獻內(nèi)容在此并入引作參考。
在另一可供選擇的方法中，酪氨酸激酶抑制活性按下述方法測定。室溫下，底物(含酪氨酸的底物，即p56lck可識別的Biot-(βAla)3-Lys-Val-Ile-Gly-Glu-Gly-Thr-Tyr-Glu-Val-Val-Tyr-Lys-(NH2)，1μM)在有或無給定濃度試驗化合物存在下，用給定量經(jīng)克隆酵母純化的酶(酶通過在酵母構(gòu)建體中表達P56lck基因產(chǎn)生，其純化按照下述經(jīng)典方法完成)在ATP(10μM)，MgCl2(2．5mM)，MnCl2(2．5mM)，NaCl(25mM)，DTT(0．4mM)，在Hepes50mM，pH7．5存在下第一次磷酸化10分鐘?？偡磻?yīng)體積為50μl，反應(yīng)在96孔黑色熒光板內(nèi)進行。加入150μl含有銪穴狀化合物(PY20-K)(0．8μg／ml劑量)標記的選定抗酪氨酸抗體和別藻藍蛋白(4μg／ml)標記的鏈霉親和素(XL665)的終止緩沖液(100mM Hepes pH7．5，KF400mM，EDTA133mM，BSA 1g／l)終止反應(yīng)。鏈霉親和素和抗酪氨酸抗體的標記由Cis-BioInternational(法國)完成。使用能測量時間分辨均相熒光能量轉(zhuǎn)移的PackardDiscovery計數(shù)儀計數(shù)混合物(激發(fā)波長377nm，在620nm和665nm處讀取)。665nm信號／620nm信號的比值是磷酸化酪氨酸濃度的量度。用緩沖液替換酶，得到空白。無抑制劑情況下得到的比值與空白情況下得到的比值之差為比信號。計算％比信號。應(yīng)用Xlfit軟件，由10種濃度抑制劑(一式兩份)計算IC50值。參比化合物為星形孢菌素(Sigma)，其IC50為30±6nM(n=20)。
上述實驗方法的結(jié)果表明，本發(fā)明范圍內(nèi)的化合物具有有效的PDGF受體蛋白質(zhì)酪氨酸激酶抑制活性或p56lck酪氨酸激酶抑制活性，因而具有治療價值。對于所選擇的具體治療，上述藥理試驗的結(jié)果可用于確定給藥劑量和給藥方式。
在不背離本發(fā)明精神或基本屬性的情況下，本發(fā)明可以以其它特定形式實施。
權(quán)利要求
1．式I化合物或其N-氧化物、其水合物、其溶劑化物、其前藥或其可藥用鹽 其中X為L1OH或L2Z2；L1為(CR3aR3b)r或(CR3aR3b)m-Z3-(CR3′aR3＇b)n；L2為(CR3aR3b)p-Z4-(CR3′aR3′b)q或亞乙烯基；Z1為CH或N；Z2為任選取代的羥基環(huán)烷基，任選取代的羥基環(huán)烯基，任選取代的羥基雜環(huán)基或任選取代的羥基雜環(huán)烯基；Z3為O，NR4，S，SO或SO2；Z4為O，NR4，S，SO，SO2或價鍵；m為0或1；n為2或3，且n+m=2或3；p和q獨立地為0，1，2，3或4，并且當(dāng)Z4為價鍵時，p+q=0，1，2，3或4，而當(dāng)Z4不為價鍵時，則p+q=0，1，2或3；r為2，3或4；R1a和R1b獨立地為任選取代的烷基，任選取代的芳基，任選取代的雜芳基，羥基，酰氧基，任選取代的烷氧基，任選取代的環(huán)烷氧基，任選取代的雜環(huán)氧基，任選取代的雜環(huán)羰氧基，任選取代的芳氧基，任選取代的雜芳氧基，氰基，R5R6N或?；鵕5N，或者R1a和R1b之一為氫或鹵素，而另一個為任選取代的烷基，任選取代的芳基，任選取代的雜芳基，羥基，酰氧基，任選取代的烷氧基，任選取代的環(huán)烷氧基，任選取代的雜環(huán)氧基，任選取代的雜環(huán)羰氧基，任選取代的芳氧基，任選取代的雜芳氧基，氰基，R5R6N或?；鵕5N；R1c為氫，任選取代的烷基，任選取代的芳基，任選取代的雜芳基，羥基，酰氧基，任選取代的烷氧基，任選取代的環(huán)烷氧基，任選取代的雜環(huán)氧基，任選取代的雜環(huán)羰氧基，任選取代的芳氧基，任選取代的雜芳氧基，鹵素，氰基，R5R6N或酰基R5N；R3a，R3b，R3′a和R3′b獨立地為氫或烷基；R4為氫，烷基或?；?；和R5和R6獨立地為氫或烷基，或者R5和R6與它們所連接的氮原子一起形成氮雜雜環(huán)基。
2．權(quán)利要求1的化合物或其N-氧化物、其水合物、其溶劑化物，其前藥、或其可藥用鹽，其中L1為(CR3aR3b)m-Z3-(CR3′aR3′b)n；L2為(CR3aR3b)p-Z4-(CR3′aR3′ b)q；Z2為任選取代的羥環(huán)烷基或任選取代的羥環(huán)烯基；Z4為O和NR4；m為0；n為2或3，p+q=0或1；R1a和R1b獨立地為任選取代的烷基，任選取代的烷氧基，任選取代的環(huán)烷氧基，任選取代的雜環(huán)氧基或R5R6N，或者R1a和R1b之一為氫或鹵素，而R1a和R1b中的另一個為任選取代的烷基，任選取代的烷氧基，任選取代的環(huán)烷氧基，任選取代的雜環(huán)氧基或R5R6N；R1c為氫，任選取代的烷基或任選取代的烷氧基；R3a，R3b，R3′a和R3′b獨立地為氫或低級烷基；R4為氫；和R5和R6與它們所連接的氮原子一起形成氮雜雜環(huán)基。
3．權(quán)利要求1的化合物，或其N-氧化物、其水合物、其溶劑化物、其前藥、或其可藥用鹽，其中X為L2Z2；L2為(CR3aR3b)p-Z4-(CR3′aR3′b)q；Z2為任選取代的羥環(huán)烷基；Z4為O和NR4；p為0；q為0或1；R1a和R1b獨立地為任選取代的烷基，任選取代的烷氧基，任選取代的環(huán)烷氧基或任選取代的雜環(huán)氧基，或者R1a和R1b之一為氫或鹵素；而R1a和R1b中的另一個為任選取代的烷基，任選取代的烷氧基，任選取代的環(huán)烷氧基或任選取代的雜環(huán)氧基；R1c為氫；R3′a和R3′b獨立地為氫；和R4為氫。
4．權(quán)利要求1的化合物，其中Z1為CH。
5．權(quán)利要求1的化合物，其中Z1為N。
6．權(quán)利要求1的化合物，其中Z2為任選取代的羥環(huán)烷基。
7．權(quán)利要求1的化合物，其中p和q均為0。
8．權(quán)利要求1的化合物，其中p+q=1。
9．權(quán)利要求1的化合物，其中Z4為O。
10．權(quán)利要求1的化合物，其中Z4為O，且p和q均為0。
11．權(quán)利要求1的化合物，其中Z4為O，且p+q=1。
12．權(quán)利要求1的化合物，其中Z4為NR4。
13．權(quán)利要求1的化合物，其中Z4為NR4，且p和q均為0。
14．權(quán)利要求1的化合物，其中Z4為NR4，且p+q=1。
15．權(quán)利要求1的化合物，其中Z4為S。
16．權(quán)利要求1的化合物，其中Z4為S，且p和q均為0。
17．權(quán)利要求1的化合物，其中Z4為S，且p+q=1。
18．權(quán)利要求1的化合物，其中R1a和R1b獨立地為羥基任選取代的低級烷基，羥基，低級烷氧基，環(huán)烷氧基，雜環(huán)氧基，或者R1a和R1b之一為氫或鹵素，而R1a和R1b中的另一個為羥基任選取代的低級烷基，羥基，低級烷氧基，環(huán)烷氧基，雜環(huán)氧基。
19．權(quán)利要求1的化合物，其中R1a和R1b獨立地為任選取代的雜環(huán)基羰氧基或任選取代的低級烷氧基。
20．權(quán)利要求19的化合物，其中低級烷氧基為甲氧基或乙氧基。
21．權(quán)利要求1的化合物，其中R1a和R1b為低級烷基。
22．權(quán)利要求21的化合物，其中低級烷基為甲基或乙基。
23．權(quán)利要求1的化合物，其中R1a和R1b之一為低級烷氧基，而R1a和R1b中的另一個為鹵素。
24．權(quán)利要求23的化合物，其中低級烷氧基為甲氧基或乙氧基，且鹵素為氯或溴。
25．權(quán)利要求1的化合物，其中R1a和R1b之一為低級烷基，而R1a和R1b中的另一個為低級烷氧基。
26．權(quán)利要求25的化合物，其中低級烷氧基為甲氧基或乙氧基，且低級烷基為甲基或乙基。
27．權(quán)利要求1的化合物，其中R1a和R1b之一為低級烷氧基，而R1a和R1b中的另一個為環(huán)烷氧基。
28．權(quán)利要求27的化合物，其中低級烷氧基為甲氧基或乙氧基，且環(huán)烷氧基為環(huán)戊氧基或環(huán)己氧基。
29．權(quán)利要求1的化合物，其中R1a和R1b之一為氫，而R1a和R1b中的另一個為低級烷氧基，環(huán)烷氧基或雜環(huán)氧基。
30．權(quán)利要求29的化合物，其中的低級烷氧基為甲氧基或乙氧基，環(huán)烷氧基為環(huán)戊氧基或環(huán)己氧基，且雜環(huán)氧基為呋喃氧基。
31．權(quán)利要求1的化合物，其中R1c為氫，低級烷基或低級烷氧基。
32．權(quán)利要求31的化合物，其中的低級烷基為甲基或乙基，低級烷氧基為甲氧基或乙氧基。
33．權(quán)利要求1的化合物，其中的Z2為被羥基或烷基任選取代的羥環(huán)烷基。
34．權(quán)利要求33的化合物，其中的Z2為被低級烷基任選取代的羥環(huán)烷基。
35．權(quán)利要求19的化合物，其中的低級烷氧基任選地被烷氧基，雜環(huán)基，羧基，烷氧羰基或氨基甲?；〈?br> 36．權(quán)利要求35的化合物，其中R1a和R1b之一為未取代的低級烷氧基，而R1a和R1b中的另一個為任選地被由烷氧基、雜環(huán)基、羧基、烷氧羰基或氨基甲?；〈牡图壨檠趸螂s環(huán)羰基氧基取代。
37．權(quán)利要求36的化合物，其中R1a和R1b之一為甲氧基，而R1a和R1b中的另一個為[1，4′]-聯(lián)哌啶-1′-基羰氧基，2-(乙氧基)乙氧基，2-(4-嗎啉基)乙氧基，2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基，羧基甲氧基，甲氧羰基甲氧基，氨基羰基甲氧基，N-甲基氨基羰基甲氧基或N，N-二甲基氨基羰基甲氧基。
38．根據(jù)權(quán)利要求1的化合物，所述化合物為反式-4-(7-氯-6-甲氧基喹喔啉-2-基氨基)-環(huán)己醇；反式-4-(6-氯-7-甲氧基喹喔啉-2-基氨基)-環(huán)己醇；反式-4-(6，7-二甲氧基喹喔啉-2-基氨基)-環(huán)己醇；順式-4-(6，7-二甲氧基喹喔啉-2-基氨基)-環(huán)己醇；(2內(nèi)，5外)-5-(6，7- 二甲氧基喹喔啉-2-基氨基)-二環(huán)[2．2．1]庚烷-2-醇；(2外，5外)-5-(6，7-二甲氧基喹喔啉-2-基氨基)-二環(huán)[2．2．1]庚烷-2-醇；(2內(nèi)，3外，5外)-5-(6，7-二甲氧基喹喔啉-2-基氨基)-二環(huán)[2．2．1]庚烷-2，3-二醇；順式-2-(6-甲氧基喹喔啉-2-基氨基)-環(huán)戊醇；反式-2-(6-甲氧基喹喔啉-2-基氨基)-環(huán)戊醇；反式-4-(6-甲氧基喹喔啉-2-基氨基)-環(huán)己醇；[3aR，4S，6R，6aS]-6-(6，7-二甲氧基喹喔啉-2-基氨基)-2，2-二甲基-四氫-環(huán)戊[1，3]二氧雜環(huán)戊烯-4-羧酸乙酰胺；2-(1，4-二氧雜-螺[4，5]十二-8-基氧基)-6，7-二甲氧基喹喔啉；4-(6，7-二甲氧基喹喔啉-2-基氧基甲基)-環(huán)己醇；3-(6，7-二甲氧基喹喔啉-2-基氧基)-環(huán)己醇；4-(6，7-二甲氧基喹喔啉-2-基氧基)-環(huán)己醇；5-(6，7-二甲氧基喹喔啉-2-基氧基)-二環(huán)[2．2．1]庚烷-2，3-二醇；(2外，3外，5外)-5-(6，7-二甲氧基喹喔啉-2-基氨基)-二環(huán)[2．2-1]庚烷-2，3-二醇；乙酸順式-4-(6，7-二甲氧基喹喔啉-2-基氧基)-環(huán)己基酯；順式-4-(6，7-二甲氧基喹喔啉-2-基氧基)-環(huán)己醇；二甲基氨基甲酸4-(6，7-二甲氧基喹喔啉-2-基氧基)-環(huán)己基酯；反式-4-(6，7-二甲氧基-4-氧基喹喔啉-2-基氨基)-環(huán)己醇；乙酸反式-4-(6，7-二甲氧基喹喔啉-2-基氨基)-環(huán)己基酯；(2外，5外)-5-(6，7-二甲氧基喹喔啉-2-基氨基)-二環(huán)[2．2．1]庚烷-2-醇；(2內(nèi)，5外)-5-(6，7-二甲氧基喹喔啉-2-基氨基)-二環(huán)[2．2．1]庚烷-2-醇；(2外，6外)-6-(6，7-二甲氧基喹喔啉-2-基氨基)-二環(huán)[2．2．1]庚烷-2-醇；4-(6，7-二甲氧基喹喔啉-2-基氨基)-2-甲基-環(huán)己醇；(2反式，4反式)-4-(6，7-二甲氧基喹喔啉-2-基氨基)-2-甲基-環(huán)己醇；(+)-(2反式，4反式)-4-(6，7-二甲氧基喹喔啉-2-基氨基)-2-甲基-環(huán)己醇；(-)-(2反式，4反式)-4-(6，7-二甲氧基喹喔啉-2-基氨基)-2-甲基-環(huán)己醇；(2反式，4順式)-4-(6，7-二甲氧基喹喔啉-2-基氨基)-2-甲基-環(huán)己醇；(2順式，4順式)-4-(6，7-二甲氧基喹喔啉-2-基氨基)-2-甲基-環(huán)己醇；(2順式，4反式)-4-(6，7-二甲氧基喹喔啉-2-基氨基)-2-甲基-環(huán)己醇；和4-(6，7-二甲氧基喹喔啉-2-基氨基)-環(huán)己醇；或其N-氧化物、其水合物、其溶劑化物、其前藥、或其可藥用鹽。
39．根據(jù)權(quán)利要求1的化合物，它為反式-4-(6，7-二甲氧基喹喔啉-2-基氨基)-環(huán)己醇，或其N-氧化物、其水合物、其溶劑化物、其前藥、或其可藥用鹽。
40．根據(jù)權(quán)利要求1的化合物，它為順式-4-(6，7-二甲氧基喹喔啉-2-基氨基)-環(huán)己醇，或其N-氧化物、其水合物、其溶劑化物、其前藥、或其可藥用鹽。
41．根據(jù)權(quán)利要求1的化合物，它為4-(6，7-二甲氧基喹喔啉-2-基氨基)-2-甲基-環(huán)己醇，或其N-氧化物、其水合物、其溶劑化物、其前藥、或其可藥用鹽。
42．根據(jù)權(quán)利要求1的化合物，它為(2外，5外)-5-(6，7-二甲氧基喹喔啉-2-基氨基)-二環(huán)[2．2．1]庚烷-2-醇，或其N-氧化物、其水合物、其溶劑化物、其前藥、或其可藥用鹽。
43．根據(jù)權(quán)利要求1的化合物，它為反式-4-(7-氯-6-甲氧基喹喔啉-2-基氨基)-環(huán)己醇，或其N-氧化物、其水合物、其溶劑化物、其前藥、或其可藥用鹽。
44．根據(jù)權(quán)利要求1的化合物，它為4-(6，7-二甲氧基喹啉-3-基氨基)-環(huán)己醇，或其N-氧化物、其水合物、其溶劑化物、其前藥、或其可藥用鹽。
45．根據(jù)權(quán)利要求1的化合物，它為(-)-(2反式，4反式)-4-(6，7-二甲氧基喹喔啉-2-基氨基)-2-甲基-環(huán)己醇，或其N-氧化物、其水合物、其溶劑化物、其前藥、或其可藥用鹽。
46．根據(jù)權(quán)利要求1的化合物，它為[1S，2R，4S，5R]-5-(6，7-二甲氧基喹喔啉-2-基氨基)-二環(huán)[2．2．1]-庚烷-2-醇，或其N-氧化物、其水合物、其溶劑化物、其前藥、或其可藥用鹽。
47．一種藥物組合物，它包括權(quán)利要求1的化合物以及可藥用載體。
48．一種抑制PDGF酪氨酸激酶活性的方法，它包括使權(quán)利要求1的化合物與含PDGF酪氨酸激酶的組成接觸。
49．一種抑制Lck酪氨酸激酶活性的方法，它包括使權(quán)利要求1的化合物與含Lck酪氨酸激酶的組成接觸。
50．一種抑制患者細胞增殖、分化或介質(zhì)釋放的方法，所述患者患有以這種增殖和／或分化和／或介質(zhì)釋放為特征的疾病，該方法包括對患者施用藥物有效量的權(quán)利要求1的化合物。
51．一種治療與增殖過度性疾病相連的病狀的方法，所述方法包括對需要這種治療的患者施用藥物有效量的權(quán)利要求1的化合物。
52．根據(jù)權(quán)利要求51的方法，所述病狀為再狹窄。
53．一種治療再狹窄患者的方法，包括對需要這種治療的患者施用藥物有效量的權(quán)利要求1的化合物，其能在預(yù)定部位抑制血管平滑肌細胞增殖和遷移。
54．根據(jù)權(quán)利要求53的方法，其中所述部位是應(yīng)用血管成形術(shù)治療動脈粥樣硬化損害時對動脈壁所產(chǎn)生的機械損傷處。
55．根據(jù)權(quán)利要求53的方法，其中權(quán)利要求1的化合物借助涂布有被權(quán)利要求1化合物飽和的親水膜的血管成形術(shù)氣囊施用。
56．根據(jù)權(quán)利要求53的方法，其中權(quán)利要求1的化合物通過導(dǎo)管施用，所述導(dǎo)管包括含有權(quán)利要求1化合物溶液的輸注槽。
57．一種治療炎癥性疾病患者的炎癥的方法，其包括對所述患者施用有效量的權(quán)利要求1的化合物。
全文摘要
本發(fā)明涉及能抑制血小板衍生生長因子或p5文檔編號A61K31/498GK1280572SQ98806454
公開日2001年1月17日 申請日期1998年5月28日 優(yōu)先權(quán)日1997年5月28日
發(fā)明者A·P·斯帕達, W·賀, M·R·邁爾斯 申請人:羅納·布朗克羅爾藥制品有限公司