專利名稱：羧酸和其衍生物以及含有它們的藥物組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及具有治療作用的化合物和用這類化合物治療某些疾病/綜合癥的方法。
參考文獻(xiàn)下列參考文獻(xiàn)以在申請(qǐng)的相關(guān)部位的括號(hào)或上標(biāo)中的數(shù)字引入本申請(qǐng)中。
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上述出版物，專利和專利申請(qǐng)的內(nèi)容全文引入本文，好象各個(gè)出版物，專利和專利申請(qǐng)的語(yǔ)言明確和各自包括在本文中一樣。
背景技術(shù)：
肝細(xì)胞核因子-4α1(HNF-4α)(在文獻(xiàn)2中綜述)是核受體的超家族的孤獨(dú)成員。HNF-4α在成人和胚胎肝，腎，腸和胰腺中表達(dá)，并通過(guò)同源重組破壞鼠HNF-4α而導(dǎo)致胚胎死亡。與其他超家族的孤獨(dú)成員一樣，HNF-4α受體由包含通過(guò)鉸鏈區(qū)與疏水的C-端配體結(jié)合區(qū)域連接的很保守的N-端DNA結(jié)合區(qū)域組成。兩種HNF-4α同種型已經(jīng)被克隆和表征HNF-4α1和包含具有插入C-端區(qū)域的10個(gè)氨基酸的剪接變體的HNF-4α2。
HNF-4α是一種基因表達(dá)激活劑。由HNF-4α的轉(zhuǎn)錄激活通過(guò)其作為同源二聚體與靶基因的反應(yīng)DR-1啟動(dòng)子序列結(jié)合而介導(dǎo)，導(dǎo)致轉(zhuǎn)錄起始復(fù)合物的激活。由HNF-4α(在文獻(xiàn)2中綜述)激活的基因編碼各種酶和與脂蛋白，膽固醇和甘油三酯代謝(載脂蛋白AI，AII，AIV，B，CIII，微粒體甘油三酯轉(zhuǎn)移蛋白，膽固醇7α羥化酶)，脂質(zhì)代謝(線粒體中鏈脂肪?；?CoA脫氫酶，過(guò)氧化物酶體脂肪?；?CoA氧化酶，與脂肪酰基ω-氧化和類固醇羥基化關(guān)聯(lián)的細(xì)胞色素P-450同工酶，脂肪酸結(jié)合蛋白，細(xì)胞內(nèi)視黃醇結(jié)合蛋白II，運(yùn)甲狀腺素蛋白)，葡萄糖代謝(烯醇丙酮酸磷酸羧激酶，丙酮酸激酶，醛縮酶，glut2)，氨基酸代謝(酪氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶，鳥(niǎo)氨酸轉(zhuǎn)氨甲酰酶)，血液凝固(因子VII，IX，X)，鐵代謝(運(yùn)鐵蛋白，血紅蛋白)和巨噬細(xì)胞激活(肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子類蛋白/巨噬細(xì)胞刺激蛋白，乙肝核心和X蛋白，人HIV-1的長(zhǎng)端重復(fù)，α-1抗胰蛋白酶)相關(guān)的蛋白。
一些被HNF-4α激活的基因在動(dòng)脈粥樣化形成，癌癥，自身免疫和一些其他疾病3的開(kāi)始和進(jìn)程中扮演重要角色。載脂蛋白B，AIV和CIII以及微粒體甘油三酯轉(zhuǎn)移蛋白的超量表達(dá)由于極低密度脂蛋白(VLDL)和乳糜微粒的超量生產(chǎn)以及其血漿清除率的降低，將導(dǎo)致血脂蛋白異常(聯(lián)合的血甘油三酯高和血膽固醇高)。類似地，引起HNF-4α/HNF-1-誘導(dǎo)的胰胰島素超量表達(dá)/超量分泌的過(guò)強(qiáng)的胰糖酵解率將導(dǎo)致引起胰島素抵抗的高胰島素血。確實(shí)，HNF-4α和HNF-1的突變最近顯示是青年成熟期發(fā)作糖尿病(MODY)的原因4。與HNF-4α-誘導(dǎo)的肝烯醇丙酮酸磷酸羧激酶的超量表達(dá)和過(guò)量的肝臟葡萄糖生產(chǎn)聯(lián)合的胰島素抵抗將導(dǎo)致最終引起非胰島素依賴糖尿病(NIDDM)的葡萄糖耐受力降低(IGT)。而且，高胰島素血今天已被認(rèn)識(shí)到在特發(fā)性高血壓的開(kāi)始和進(jìn)程中作為重要的病因，因此HNF-4α控制的基因的超量表達(dá)可以進(jìn)一步引發(fā)高血壓。而且，也許與血纖維蛋白溶解抑制劑(例如，血纖維蛋白溶酶激活物抑制劑-1)聯(lián)合的凝血因子的HNF-4α-誘導(dǎo)的超量表達(dá)引起血栓的過(guò)量形成和血纖維蛋白溶解降低，伴隨著動(dòng)脈粥樣硬化傾向性的加重。
血脂蛋白異常，肥胖，IGT/NIDDM，高血壓和凝血/血纖維蛋白溶解缺陷最近已經(jīng)被認(rèn)識(shí)到由一個(gè)統(tǒng)一的綜合征(綜合征-X，代謝綜合征，胰島素抵抗綜合征)5串在一起。引起HNF-4α控制的基因的超量表達(dá)的HNF-4α的高轉(zhuǎn)錄活性可以確切地解釋綜合征-X類型的病因?qū)W聯(lián)系。綜合征-X類型和綜合征今天全部被認(rèn)識(shí)到是西方社會(huì)動(dòng)脈粥樣化心血管疾病的主要危險(xiǎn)因素，這暗示HNF-4α引發(fā)并促進(jìn)動(dòng)脈粥樣化形成。而且，因?yàn)槿橄?，結(jié)腸和前列腺癌在患綜合征-X的個(gè)體中被引發(fā)和促進(jìn)，所以HNF-4α控制的基因的超量表達(dá)可以與這些癌的開(kāi)始和進(jìn)程關(guān)聯(lián)。
除了由HNF-4α在綜合征-X相關(guān)的基因表達(dá)中扮演的角色外，HNF-4α還激活對(duì)與調(diào)節(jié)自身免疫反應(yīng)過(guò)程相關(guān)蛋白編碼的基因表達(dá)。因此，巨噬細(xì)胞刺激蛋白的HNF-4α-誘導(dǎo)的超量表達(dá)可以引起巨噬細(xì)胞對(duì)自身抗原或交叉反應(yīng)抗原的致敏作用，因而引發(fā)和加重自身免疫疾病，例如，風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，多發(fā)性硬化和牛皮癬的病情。而且，因?yàn)橐腋魏诵暮蚗蛋白，以及人HIV-1的長(zhǎng)端重復(fù)的轉(zhuǎn)錄由HNF-4α控制，所以HNF-4α可以與由這些病毒劑引發(fā)的感染過(guò)程的調(diào)節(jié)關(guān)聯(lián)。
因?yàn)镠NF-4α-誘導(dǎo)的基因的超量表達(dá)引起血脂蛋白異常，IGT/NIDDM，高血壓，凝血和血纖維蛋白溶解缺陷，動(dòng)脈粥樣化形成，癌癥，炎癥，免疫缺損和其他疾病，所以HNF-4α轉(zhuǎn)錄活性的抑制可以預(yù)期產(chǎn)生HNF-4α-誘導(dǎo)病理學(xué)的改善。但是，尚無(wú)配體被確定為用于HNF-4α的，該配體可以作為設(shè)計(jì)HNF-4α轉(zhuǎn)錄活性抑制劑的基礎(chǔ)。本發(fā)明涉及HNF-4α的低分子量配體，該配體被設(shè)計(jì)為HNF-4α-誘導(dǎo)的轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)劑，因而在治療由HNF-4α-控制的基因誘導(dǎo)或與其相關(guān)的疾病時(shí)作為有效的藥物。
發(fā)明概述根據(jù)本發(fā)明，提供有治療作用的化合物，包括式R-COOH的兩親羧酸，或這類化合物的鹽或酯或酰胺，其中R表示10-24個(gè)碳原子的飽和或不飽和烷基鏈，其中一個(gè)或多個(gè)碳原子可以被雜原子代替，其中一個(gè)或多個(gè)碳或雜原子鏈成員非強(qiáng)制性地形成環(huán)的部分，并且其中所述的鏈非強(qiáng)制性地被烴基，雜環(huán)基，低級(jí)烷氧基，羥基取代的低級(jí)烷基，羥基，羧基，鹵素，苯基或(羥基-，低級(jí)烷基-，低級(jí)烷氧基-，低級(jí)烯基-或低級(jí)炔基)-取代的苯基，C3-C7環(huán)烷基或(羥基-，低級(jí)烷基-，低級(jí)烷氧基-，低級(jí)烯基-或低級(jí)炔基)-取代的C3-C7環(huán)烷基取代，其中所述的兩親羧酸可以內(nèi)生性地轉(zhuǎn)化為其各自的輔酶A硫酯。
在優(yōu)選的方案中，兩親羧酸是生物異源兩親羧酸。在更優(yōu)選的方案中，生物異源兩親羧酸可以是長(zhǎng)鏈二羧酸，ω-OH羧酸，ω-B(OH)2羧酸，祛脂酸同系物或非甾類消炎藥。在最優(yōu)選的方案中，兩親羧酸選自如下組成的組硬脂?；?18∶0)-CoA，油酰基(18∶1)-CoA，亞油酰基(18∶2)-CoA，亞麻?；?18∶3)-CoA，二十碳五烯?；?20∶5)-CoA，二十二碳六烯?；?22∶6)-CoA，1，16-十六烷二酸，1，18-十八烷二酸，2，2，15，15-四甲基十六烷-1，16-二酸，2，2，17，17-四甲基十八烷-1，18-二酸，3，3，14，14-四甲基十六烷-1，16-二酸，3，3，16，16-四甲基十八烷-1，18-二酸，4，4，13，13-四甲基十六烷-1，16-二酸，4，4，15，15-四甲基十八烷-1，18-二酸，16-B(OH)2-十六烷酸，18-B(OH)2-十八烷酸，16-B(OH)2-2，2-二甲基十六烷酸，18-B(OH)2-2，2-二甲基十八烷酸，16-B(OH)2-3，3-二甲基十六烷酸，18-B(OH)2-3，3-二甲基十八烷酸，16-B(OH)2-4，4-二甲基十六烷酸，18-B(OH)2-4，4-二甲基十八烷酸，16-羥基十六烷酸，18-羥基十八烷酸，16-羥基-2，2-二甲基十六烷酸，18-羥基-2，2-二甲基十八烷酸，16-羥基-3，3-二甲基十六烷酸，18-羥基-3，3-二甲基十八烷酸，16-羥基-4，4-二甲基十六烷酸，和18-羥基-4，4-二甲基十八烷酸。
本發(fā)明另一方面提供治療綜合征X的方法，包括施用治療有效量的兩親羧酸。在優(yōu)選的方案中，包括綜合征X的各種疾病被單個(gè)治療。
本發(fā)明另一方面提供調(diào)節(jié)HNF-4α活性的方法。
另一方面，提供治療疾病或綜合征的方法，包括施用治療有效量的兩親羧酸。諸如乳腺癌，結(jié)腸癌和前列腺癌的疾病可以用本發(fā)明方法治療。
附圖簡(jiǎn)要說(shuō)明附

圖1顯示長(zhǎng)鏈酰基-CoA是HNF-4α的配體。GST-HNF-4α(LBD)融合蛋白標(biāo)記物(I)由與谷胱甘肽-S轉(zhuǎn)移酶融合的HNF-4α(LBD)組成。His-HNF-4α(n)由被6個(gè)組氨酸標(biāo)記的全長(zhǎng)HNF-4α組成。
a.棕櫚?；?16∶0)-CoA的飽和結(jié)合曲線。各個(gè)重組蛋白被溫育，如指出的那樣由[3H]棕櫚?；?16∶0)-CoA(0.05μCi)和過(guò)量的未標(biāo)記棕櫚酰基(16∶0)-CoA平衡。通過(guò)Scatchard分析測(cè)定2.6μM的離解常數(shù)(Kd)和1mol棕櫚?；?16∶0)-CoA/mol HNF-4α的最大結(jié)合。
b.通過(guò)肉豆蔻?；?14∶0)-CoA競(jìng)爭(zhēng)。各個(gè)重組蛋白如指出的那樣用8nM的[3H]棕櫚?；?16∶0)-CoA(60Ci/mmol)和過(guò)量的未標(biāo)記肉豆蔻酰基(14∶0)-CoA溫育。結(jié)合百分?jǐn)?shù)相對(duì)于在結(jié)合部分中放射標(biāo)記的[3H]棕櫚?；?16∶0)-CoA。對(duì)0.3pmol[3H]棕櫚?；?16∶0)-CoA的結(jié)合量為100％。結(jié)合百分?jǐn)?shù)相對(duì)于在結(jié)合部分中放射標(biāo)記的[3H]棕櫚酰基(16∶0)-CoA。對(duì)0.3pmol[3H]棕櫚?；?16∶0)-CoA的結(jié)合量為100％。EC50(50％專一性競(jìng)爭(zhēng))量相對(duì)于1.4μM(范圍為1.2-1.5μM)肉豆蔻?；?14∶0)-CoA。各個(gè)脂肪?；?CoA和生物異源兩親羧酸?；?CoA的EC50如下十二烷?；?12∶0)-CoA 2.3μM(范圍為2.1-2.4μM)棕櫚酰基(16∶0)-CoA 2.6μM(范圍為1.3-3.4μM)硬脂?；?18∶0)-CoA 2.7μM(范圍為2.1-3.3μM)油酰基(18∶1)-CoA 1.4μM(范圍為1.0-1.8μM)亞油?；?18∶2)-CoA 1.9uM(范圍為1.5-2.3μM)亞麻酰基(18∶3)-CoA 2.9μM(范圍為2.9-3.8μM)二十碳五烯?；?20∶5)-CoA 0.6μM(范圍為0.5-0.7μM)二十二碳六烯酰基(22∶6)-CoA1.6μM(0.6-2.7μM)3，3，16，16-四甲基十八烷-1，18-二酸 8μM(范圍為5-15μM)3，3，14，14-四甲基十六烷-1，16-二酸 8μM(范圍為5-15μM)3，3，12，12-四甲基十四烷二酸 40μM苯扎貝特 90μM萘苯丁酸 90μM布洛芬 40μM附圖2顯示HNF-4α的脂肪?；?CoA配體調(diào)節(jié)與其關(guān)聯(lián)DNA增強(qiáng)子的結(jié)合。
a.在沒(méi)有(1道)或有各10μM肉豆蔻?；?14∶0)-CoA(2道)或棕櫚酰基(16∶0)-CoA(3道)存在下，His-HNF-4α(14ng)與C3P結(jié)合。
b.在沒(méi)有(1道)或有各10μM硬脂?；?18∶0)-CoA(2道)或亞麻酰基(18∶3，w-3)-CoA(3道)存在下，His-HNF-4α(20ng)與C3P結(jié)合。
c.通過(guò)增加肉豆蔻?；?14∶0)-CoA的濃度激活與C3P結(jié)合的His-HNF-4α(14ng)。給出了含有與His-HNF-4α二聚體結(jié)合的放射標(biāo)記C3P的凝膠切面。
附圖3顯示體外通過(guò)長(zhǎng)鏈脂肪?；?CoA調(diào)節(jié)HNF-4α轉(zhuǎn)錄活性。
a.如所指示的，代表性的實(shí)驗(yàn)顯示在增加濃度的His-HNF-4α存在下，和在沒(méi)有(1-3，7-9道)或各10μM加入的棕櫚酰基(16∶0)-CoA(4-6道)或硬脂?；?18∶0)-CoA(10，11道)存在下試驗(yàn)?zāi)０宓捏w外轉(zhuǎn)錄。試驗(yàn)和對(duì)照模板的校正啟動(dòng)轉(zhuǎn)錄分別由(→)和(→)指示。
b.在沒(méi)有(空帶)或有各10μM加入的棕櫚?；?16∶0)-CoA(填滿的帶)或硬脂?；?18∶0)-CoA(畫(huà)影線的帶)存在下HNF-4α誘導(dǎo)體外轉(zhuǎn)錄。折疊轉(zhuǎn)錄指示由試驗(yàn)?zāi)０瀹a(chǎn)生的特異性轉(zhuǎn)錄與對(duì)照模板產(chǎn)生的轉(zhuǎn)錄比例，該對(duì)照模板正常為沒(méi)有HNF-4α?xí)r觀察到的比例。該附圖概括了各個(gè)?；?CoA的5個(gè)獨(dú)立實(shí)驗(yàn)。*-指與沒(méi)有加入配體的各個(gè)值相比。
附圖4顯示在瞬時(shí)轉(zhuǎn)染試驗(yàn)中，通過(guò)長(zhǎng)鏈脂肪酸和生物異源兩親羧酸調(diào)節(jié)HNF-4α活性。
a.通過(guò)長(zhǎng)鏈脂肪酸調(diào)節(jié)HNF-4α。通過(guò)轉(zhuǎn)染的HNF-4α的CAT活性的折疊誘導(dǎo)通過(guò)在pSG5-HNF-4α存在下與pSG5質(zhì)粒比較，并作為如指示的那樣加入培養(yǎng)基中的各個(gè)脂肪酸的函數(shù)，評(píng)價(jià)CAT活性而測(cè)定。該附圖概括了各個(gè)脂肪酸的3-4個(gè)獨(dú)立實(shí)驗(yàn)。平均值±S.E。
b.通過(guò)生物異源兩親羧酸抑制HNF-4α。折疊誘導(dǎo)指在用3，3，12，12-四甲基十四烷二酸(·)，3，3，14，14-四甲基十六烷-1，16-二酸(■)和3，3，16，16-四甲基十八烷-1，18-二酸(▲)前配體溫育的細(xì)胞中的CAT活性，正常為在沒(méi)有加入前配體溫育的細(xì)胞中的活性。上述羧酸和其他生物異源兩親羧酸配體的EC50如下3，3，12，12-四甲基十四烷二酸 ＞300μM3，3，14，14-四甲基十六烷二酸 155μM3，3，16，16-四甲基十八烷二酸 150μM2，2，13，13-四甲基十四烷二酸 230μM2，2，15，15-四甲基十六烷二酸 150μM2，2，17，17-四甲基十八烷二酸 150μM4，4，13，13-四甲基十六烷二酸 150μM4，4，15，1 5-四甲基十八烷二酸150μM苯扎貝特 260μM萘苯丁酸 160μM吲哚美辛 130μM發(fā)明詳述長(zhǎng)鏈脂肪酸顯示出通過(guò)各個(gè)脂肪?；?CoA硫酯與HNF-4α配體結(jié)合區(qū)域結(jié)合而直接調(diào)節(jié)HNF-4α的轉(zhuǎn)錄活性。由HNF-4α激動(dòng)或拮抗的酰基-CoA配體引起的轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)可以從兩個(gè)明顯獨(dú)立的配體-誘導(dǎo)作用產(chǎn)生，即移動(dòng)HNF-4α寡聚-二聚平衡或影響HNF-4α二聚體其關(guān)聯(lián)增強(qiáng)子的內(nèi)結(jié)合親和力。
本文所用的下列術(shù)語(yǔ)具有如下意義術(shù)語(yǔ)“兩親羧酸”指具有疏水骨架和羧酸官能團(tuán)的化合物。
術(shù)語(yǔ)“生物異源物質(zhì)”指與哺乳動(dòng)物的中間代謝無(wú)關(guān)的化合物。
術(shù)語(yǔ)“綜合征X”指包括下列疾病的一些或全部的綜合征1)血脂蛋白異常(聯(lián)合的血膽固醇高-血甘油三酯高，低HDL-膽固醇)，2)肥胖(尤其是超體重肥胖)，3)引起非胰島素依賴糖尿病(NIDDM)的葡萄糖耐受力降低(IGT)，4)原發(fā)性高血壓和5)凝血/血纖維蛋白溶解缺陷。
術(shù)語(yǔ)“調(diào)節(jié)”指增加或降低HNF-4α的表觀活性。HNF-4α的調(diào)節(jié)可以是直接的，例如與HNF-4α結(jié)合，或間接的，例如，通過(guò)其他途徑，例如，激酶活性介導(dǎo)的。與HNF-4α結(jié)合的本發(fā)明化合物可以激活或抑制其與關(guān)聯(lián)增強(qiáng)子的結(jié)合，為鏈長(zhǎng)和/或飽和度的函數(shù)。
治療綜合征X的方法可以寄希望于本發(fā)明。這類方法包括施用天然或生物異源兩親羧酸。也可以預(yù)期的抑制HNF-4α轉(zhuǎn)錄活性的方法是通過(guò)反義抑制，通過(guò)抗體抑制或任何其他降低HNF-4α表觀活性的方法。方法HNF-4α重組蛋白大鼠HNF-4α1 cDNA(pLEN4S)1被亞克隆到谷胱甘肽-S-轉(zhuǎn)移酶(GST)中，編碼pGEX-2T質(zhì)粒(Pharmacia)，產(chǎn)生的質(zhì)粒用smal和AccI裂解并再連接產(chǎn)生GST-HNF-4α(LBD)熔合質(zhì)粒。熔合質(zhì)粒通過(guò)用0.2mM IPTG溫育60分鐘而表達(dá)到E.coli BL21(DE3)菌株中，產(chǎn)物通過(guò)用谷胱甘肽-瓊脂珠(Sigma)親和層析純化，產(chǎn)生由融合到GST中的野生型HNF-4α的氨基酸96-455組成的GST-HNF-4α(LBD)熔合蛋白。克隆到6His-pET11d載體中的全長(zhǎng)HNF-4α1 cDNA被表達(dá)到E.coli BL21(DE3)plysS中。配體結(jié)合試驗(yàn)重組GST-HNF-4α(LBD)(100pmol)或His-HNF-4α(100pmol)在22℃用[3H]棕櫚酰基(16∶0)-CoA(American Radiolabeled Chemicals)在100μl 10mM磷酸緩沖液(pH 7.4)中溫育60分鐘。如指示的那樣加入競(jìng)爭(zhēng)劑配體或溶劑載體。通過(guò)Dowex-涂層的木炭分離游離的和HNF-4α結(jié)合的[3H]棕櫚?；?16∶0)-CoA，結(jié)合的配體通過(guò)液體閃爍計(jì)數(shù)定量。[3H]棕櫚?；?16∶0)-CoA的非特異性結(jié)合通過(guò)其與GST部分或與碳酸酐酶結(jié)合為非相關(guān)蛋白而測(cè)定。遷移率變動(dòng)分析His-HNF-4α和?；?CoA(如指示的)在22℃，在最終體積為20μl的含有50mM KCl，1mM二硫赤鮮糖醇，2.5mM MgCl2，10％甘油，1μg聚(dl-dC)的11mM Hepes(pH 7.9)中預(yù)溫育30分鐘。然后加入由人C3P apo CIII啟動(dòng)子序列(-87/-66)6組成的32P-標(biāo)記的寡核苷酸(0.1ng)，繼續(xù)再溫育15分鐘。蛋白-DNA復(fù)合物用5％非變性聚丙烯酰胺凝膠在0.6×TBE中溶解，并通過(guò)PhosphorImager分析定量。體外轉(zhuǎn)錄分析反應(yīng)混合物如所指示的含有20mM Hepes-KOH(pH 7.9)，5mMMgCl2，60mM KCl，8％甘油，2mM DTT，1mM 3’-O-甲基-GTP，10單位T1 RNA酶，20單位RNA酶蛋白質(zhì)抑制劑，0.5μg超聲的鮭精DNA和His-HNF-4α和試驗(yàn)配體。將該混合物在22℃溫育30分鐘，接著加入10ng由與200bp G-less盒連接的腺病毒主要晚期啟動(dòng)子(-400/+10)組成的pAdML200對(duì)照模板，和由apo CIII啟動(dòng)子序列(-87/-66)的三個(gè)C3P復(fù)制件組成的200ng試驗(yàn)?zāi)０?，在合成的卵白蛋白TATA盒啟動(dòng)子上游，在377 bp-G-less盒前面。將混合物在22℃再預(yù)溫育10分鐘，接著加入40μg HeLa核萃取液，在30℃再溫育30分鐘。然后加入0.5mM ATP，0.5mM CTP，25μM UTP，和10μCi[α-32P]UTP(s.a.800Ci/mol，Amersham)，反應(yīng)混合物在30℃以25μl的最終體積溫育45分鐘。通過(guò)加入175μl停止混合物(0.1M醋酸鈉(pH 5.2)，10mM EDTA，0.1％SDS，200μg/ml tRNA)終止反應(yīng)，接著苯酚萃取和乙醇沉淀。將RNA再懸浮于含有80％甲酰胺和10mM Tris-HCl(pH 7.4)的樣品緩沖液中，在含有7M尿素的5％聚丙烯酰胺凝膠上，在TBE中分離。校正啟動(dòng)的轉(zhuǎn)錄通過(guò)PhosphorImager分析定量。試驗(yàn)DNA通過(guò)往pC2AT19質(zhì)粒中插入一個(gè)PCR-擴(kuò)增的寡核苷酸而構(gòu)建，該寡核苷酸通過(guò)用(C3P)3-TK-CAT質(zhì)粒作為模板制備，并且由分別在5’和3’末端具有ECoRI和SSTI位點(diǎn)的Apo CIII啟動(dòng)子序列(-87/-66)的C3P元素的三個(gè)復(fù)制件組成。產(chǎn)生的質(zhì)粒用sphl和sacl裂解，并連接到含有HSV胸苷激酶啟動(dòng)子(-41/-29)序列和雞卵白蛋白啟動(dòng)子(-33/-21)序列的合成寡核苷酸(5’-CGAGGTCCACTTCGCTATATATTCCCCGAGCT-3’)中。轉(zhuǎn)染分析用(C3P)3-TK-CAT報(bào)道因子質(zhì)粒(5μg)共轉(zhuǎn)染6小時(shí)，并用通過(guò)磷酸鈣沉淀加入的pSG5-HNF-4α表達(dá)質(zhì)粒(0.025μg)或pSG5質(zhì)粒(0.025μg)共轉(zhuǎn)染的COS-7細(xì)胞在無(wú)培養(yǎng)基的血清中用如所指示的加入的脂肪酸(以6∶1的摩爾比與白蛋白復(fù)合)培養(yǎng)。將半乳糖苷酶表達(dá)載體pRSGAL(1μg)加入各個(gè)沉淀作為轉(zhuǎn)染內(nèi)部控制。(C3P)3-TK-CAT構(gòu)建通過(guò)將包含由HindIII限制位點(diǎn)掩護(hù)側(cè)翼的(-87/-66)Apo CIII啟動(dòng)子序列(5’-GCAGGTGACCTTTGCCCAGCGCC-3’)插入-105bp胸苷激酶啟動(dòng)子上游的pBLCAT247而制備。選擇含有直接取向的三個(gè)合成的寡核苷酸復(fù)制件的構(gòu)建，并通過(guò)測(cè)序確定。脂肪酰基-CoA通過(guò)溶解于干燥乙腈中的游離酸與1，1’-羰基二咪唑反應(yīng)制備脂肪?；?CoA。將反應(yīng)混合物蒸發(fā)至干，各個(gè)酰基-咪唑輟合物與1當(dāng)量溶于1∶1 THF水中的還原的CoA反應(yīng)。接著用硅膠60H板(Merck)(丁醇∶乙酸∶水 5∶2∶3)TLC。?；?CoA衍生物用0.1M Hcl沉淀，該沉淀用0.1 M HCl洗滌三次，無(wú)過(guò)氧化物的乙醚洗滌三次，并用丙酮洗滌三次。酰基-CoA通過(guò)其260/232nm比分光光度測(cè)定。
實(shí)施例為了進(jìn)一步說(shuō)明本發(fā)明和其優(yōu)點(diǎn)，給出下列特例，應(yīng)該理解，這些實(shí)施例僅僅是舉例說(shuō)明，而沒(méi)有任何限制作用。實(shí)施例1長(zhǎng)鏈?；?CoA是HNF-4α的配體各種鏈長(zhǎng)和飽和度的?；?CoA被發(fā)現(xiàn)與HNF-4α特異性結(jié)合。結(jié)合由融入谷胱甘肽-S-轉(zhuǎn)移酶(GST-HNF-4α(LBD))的HNF-4α配體結(jié)合區(qū)域或由6組氨酸標(biāo)記的全長(zhǎng)HNF-4α蛋白(His-HNF-4α)作為例子。與配體結(jié)合區(qū)域或全長(zhǎng)HNF-4α蛋白結(jié)合的棕櫚?；?16∶0)-CoA是具有2.6μM Kd的可飽和的，并接近1摩爾脂肪?；?CoA/摩爾HNF-4α的飽和度(附圖1A)。結(jié)合是對(duì)?；?CoA特異性的，而對(duì)游離脂肪酸或游離CoA是無(wú)活性的。各種鏈長(zhǎng)和飽和度的?；?CoA的結(jié)合通過(guò)與結(jié)合于重組GST-HNF-4α(LBD)或His-HNF-4α的放射標(biāo)記的棕櫚?；?16∶0)-CoA競(jìng)爭(zhēng)而證實(shí)(附圖1B)。對(duì)于鏈長(zhǎng)短于C12的飽和脂肪?；?CoA沒(méi)有觀察到結(jié)合。但是，HNF-4α的長(zhǎng)鏈脂肪?；?CoA的結(jié)合親和力基本上不受各個(gè)配體鏈長(zhǎng)或飽和度的影響，在0.5-3.0μM范圍內(nèi)。長(zhǎng)鏈脂肪?；?CoA與HNF-4α的結(jié)合特異性進(jìn)一步通過(guò)分析棕櫚?；?16∶0)-CoA與重組的組氨酸-標(biāo)記的過(guò)氧化物酶體增殖體激活的受體α(His-PPARRα)的推定結(jié)合而證實(shí)。與HNF-4α相反，長(zhǎng)鏈脂肪?；?CoA不通過(guò)PPARRα或視黃酸X受體α(RXRα)結(jié)合。這些結(jié)構(gòu)表明，天然長(zhǎng)鏈脂肪?；?CoA可以與HNF-4α的配體結(jié)合區(qū)域結(jié)合，并作為該蛋白的特異性配體。
?；?CoA與HNF-4α的結(jié)合不限于上面舉例的天然脂肪?；?CoA。因此，生物異源的?；?CoA(RCOSCoA)可以觀察到結(jié)合，其中R是由10-24個(gè)碳原子的飽和或不飽和烷基鏈組成的基團(tuán)，其中一個(gè)或多個(gè)碳原子可以被雜原子代替，其中一個(gè)或多個(gè)所述的碳原子或雜原子鏈成員非強(qiáng)制性地形成環(huán)的部分，并且其中所述的鏈被非強(qiáng)制性地取代(附圖1B)。實(shí)施例2通過(guò)長(zhǎng)鏈?；?CoA調(diào)節(jié)HNF-4α活性作為長(zhǎng)鏈酰基-CoA結(jié)合函數(shù)的HNF-4α活性通過(guò)研究HNF-4α與其apo CIII啟動(dòng)子序列(-87/-66)6的關(guān)聯(lián)C3P元素在有或沒(méi)有加入的各種鏈長(zhǎng)，飽和度，和取代程度的?；?CoA存在下的結(jié)合而評(píng)價(jià)。通過(guò)用凝膠遷移率變動(dòng)分析確證結(jié)合。如附圖2所示，隨著His-HNF-4α濃度增加，C3P與HNF-4α的結(jié)合也增加，并由鏈長(zhǎng)為C12-C16的天然飽和脂肪?；?CoA所激活。激活依賴于濃度，并且在其與HNF-4α結(jié)合所需的濃度范圍的肉豆蔻?；?14∶0)-CoA存在下最大。而且，一些脂肪?；?CoA以及物異源的酰基-CoA被發(fā)現(xiàn)作為真正的HNF-4α拮抗劑，即抑制其與其關(guān)聯(lián)增強(qiáng)子的內(nèi)部結(jié)合。因此，在硬脂酰基(18∶0)-CoA或α-亞麻?；?18∶3)-CoA存在下溫育HNF-4α強(qiáng)力抑制其與C3P寡核苷酸的結(jié)合(附圖2)。類似地，在各種生物異源的?；?CoA存在下溫育HNF-4α導(dǎo)致對(duì)其與關(guān)聯(lián)C3P寡核苷酸結(jié)合的抑制。因此，與HNF-4α結(jié)合的天然或生物異源的?；?CoA可以以鏈長(zhǎng)，飽和度或取代程度的函數(shù)作為其轉(zhuǎn)錄活性的激動(dòng)劑，部分激動(dòng)劑或拮抗劑。實(shí)施例3通過(guò)HNF-4α激動(dòng)劑和拮抗劑調(diào)節(jié)HNF-4α誘導(dǎo)的轉(zhuǎn)錄激動(dòng)或拮抗的HNF-4α-配體的作用進(jìn)一步通過(guò)分析由加入的HeLa核提取物催化，并由重組HNF-4α誘導(dǎo)的，由被HSV胸苷激酶和雞卵白蛋白啟動(dòng)子啟動(dòng)，并由apo CIII基因啟動(dòng)子的三個(gè)復(fù)制件增強(qiáng)的377 bp G-less盒組成的試驗(yàn)?zāi)０宓捏w外轉(zhuǎn)錄率而評(píng)價(jià)。通過(guò)HNF-4α的轉(zhuǎn)錄激活在有或沒(méi)有加入的代表性長(zhǎng)鏈脂肪?；?CoA存在下評(píng)價(jià)。由腺病毒主要晚期(AdML)啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)并缺少HNF-4α增強(qiáng)子的200 bp G-less盒組成的模板轉(zhuǎn)錄被用作內(nèi)部對(duì)照模板。如附圖3所示，試驗(yàn)?zāi)０宓捏w外轉(zhuǎn)錄以HNF-4α的函數(shù)增加，在HNF-4α濃度為200ng時(shí)接近飽和。HNF-4α誘導(dǎo)的轉(zhuǎn)錄在凝膠遷移率變動(dòng)分析中，由于HNF-4α激動(dòng)劑和拮抗劑發(fā)揮的作用，以線性通過(guò)加入的棕櫚酰基(16∶0)-CoA激活，并通過(guò)加入的硬脂?；?18∶0)-CoA而抑制。因此，與HNF-4α結(jié)合的?；?CoA可以在無(wú)細(xì)胞體系中直接調(diào)節(jié)其轉(zhuǎn)錄活性。
HNF-4α配體對(duì)介導(dǎo)轉(zhuǎn)錄的HNF-4α的胞內(nèi)作用在用HNF-4α表達(dá)載體和由胸苷激酶啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)并由1至3個(gè)apo CIII基因啟動(dòng)子的C3P復(fù)制件增強(qiáng)的CAT報(bào)道基因質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染的COS-7細(xì)胞內(nèi)評(píng)價(jià)。轉(zhuǎn)染的細(xì)胞在代表激動(dòng)或拮抗的HNF-4α前配體的游離脂肪酸和生物異源兩親羧酸存在下溫育。如附圖4所示，C3P-增強(qiáng)的報(bào)道基因質(zhì)粒的表達(dá)在沒(méi)有往培養(yǎng)基中加入脂肪酸的情況下由HNF-4α7倍激活。轉(zhuǎn)染HNF-4α的轉(zhuǎn)錄激活可以反映未配位HNF-4α二聚體的內(nèi)轉(zhuǎn)錄活性，或者可以從與內(nèi)源激活酰基-CoA的結(jié)合產(chǎn)生。往培養(yǎng)基中加入肉豆蔻酸(14∶0)或棕櫚酸(16∶0)產(chǎn)生HNF-4α依賴性轉(zhuǎn)錄的依賴于劑量的活性，而硬脂酸(18∶0)，α-亞麻酸(18∶3)或二十烷五酸(20∶5)卻在凝膠遷移率變動(dòng)分析(附圖2)和無(wú)細(xì)胞轉(zhuǎn)錄分析(附圖3)中由各個(gè)脂肪酰基-CoA的激動(dòng)或拮抗活性呈線性抑制。在轉(zhuǎn)染分析中HNF-4α轉(zhuǎn)錄活性的抑制在加入培養(yǎng)基中的生物異源兩親羧酸存在下可以類似地觀察到(附圖4b)，其中R是由10-24個(gè)碳原子的飽和或不飽和烷基鏈組成的基團(tuán)，其中一個(gè)或多個(gè)碳原子可以被雜原子代替，其中一個(gè)或多個(gè)碳或雜原子鏈成員非強(qiáng)制性地形成環(huán)的部分，并且其中所述的鏈非強(qiáng)制性地被烴基，雜環(huán)基，低級(jí)烷氧基，羥基取代的低級(jí)烷基，羥基，羧基，鹵素，苯基，取代的苯基，C3-C7環(huán)烷基或取代的C3-C7環(huán)烷基取代。因此，胞內(nèi)HNF-4α-介導(dǎo)的表達(dá)可以通過(guò)天然長(zhǎng)鏈脂肪酸和能夠內(nèi)部轉(zhuǎn)化為其相應(yīng)的CoA硫酯(RCOSCoA)的生物異源兩親羧酸調(diào)節(jié)。高效抑制化合物是其中R被ω-羧基取代的下列化合物2，2，15，15-四甲基十六烷-1，16-二酸，2，2，17，17-四甲基十八烷-1，18-二酸，3，3，14，14-四甲基十六烷-1，16-二酸，3，3，16，16-四甲基十八烷-1，18-二酸，4，4，13，13-四甲基十六烷-1，16-二酸，4，4，15，15-四甲基十八烷-1，18-二酸。另一組有效的化合物是其中R被ω-羥基取代的化合物16-羥基十六烷酸，18-羥基十八烷酸，16-羥基-2，2-二甲基十六烷酸，18-羥基-2，2-二甲基十八烷酸，16-羥基-3，3-二甲基十六烷酸，18-羥基-3，3-二甲基十八烷酸，16-羥基-4，4-二甲基十六烷酸，18-羥基-4，4-二甲基十八烷酸。另一組效果較低的化合物由祛脂酸同系物(祛脂酸酯化合物)或非甾族消炎藥組成。所發(fā)揮的綜合效果可以反映核心?；?CoA的優(yōu)勢(shì)組合物和當(dāng)與HNF-4α結(jié)合時(shí)由各自發(fā)揮的激動(dòng)/拮抗作用。實(shí)施例4生理關(guān)聯(lián)HNF-4α轉(zhuǎn)錄活性通過(guò)天然或能夠內(nèi)部轉(zhuǎn)化為其相應(yīng)的CoA硫酯的生物異源兩親羧酸的抑制可以提供一種治療由HNF-4α控制的基因超量表達(dá)引發(fā)和/或啟動(dòng)的疾病的治療方式。作為HNF-4α轉(zhuǎn)錄活性抑制劑的相關(guān)兩親羧酸的特性第一位取決于其各個(gè)CoA硫酯作為HNF-4α拮抗劑的內(nèi)容量。目前還不能預(yù)測(cè)哪一種能夠內(nèi)部轉(zhuǎn)化為其相應(yīng)的CoA硫酯的兩親羧酸可以被證實(shí)為真正的HNF-4α拮抗劑。肉豆蔻?；?14∶0)-CoA或棕櫚酰基(16∶0)-CoA被證實(shí)為HNF-4α轉(zhuǎn)錄活性的激活物，而系列中的下一同系物，即硬脂酰基(18∶0)-CoA被證實(shí)為真正的拮抗劑。然而，應(yīng)該指出，如果代替內(nèi)源性HNF-4α有效激動(dòng)劑，或與對(duì)HNF-4α結(jié)合更多產(chǎn)的激動(dòng)劑競(jìng)爭(zhēng)，部分激動(dòng)劑將誘導(dǎo)HNF-4α活性的表觀抑制。
作為HNF-4α轉(zhuǎn)錄活性抑制劑的兩親羧酸的綜合體內(nèi)特性不僅反映其各個(gè)CoA硫酯作為HNF-4α拮抗劑的內(nèi)容量，還進(jìn)一步依賴于特定的細(xì)胞類型和核心脂肪?；?CoA的優(yōu)勢(shì)組合物。該組合物可以通過(guò)各個(gè)酸的膳食/藥理學(xué)有效性輪廓，各個(gè)CoA-硫酯化的有效性以及各個(gè)?；鵆oA由酰基-CoA水解酶水解的有效性影響，酯化為脂質(zhì)，氧化為產(chǎn)物，延長(zhǎng)，去飽和或與其它?；?CoA結(jié)合蛋白結(jié)合。而且，由兩親羧酸而不是脂肪酸(例如視黃酸，前列腺素，白細(xì)胞三烯，等等)CoA-酯化產(chǎn)生的內(nèi)源性?；?CoA可以與HNF-4α結(jié)合，并調(diào)節(jié)其作為激動(dòng)劑或拮抗劑的活性產(chǎn)生的效果將進(jìn)一步依賴于可以影響HNF-4α的寡聚-二聚平衡，HNF-4α與其關(guān)聯(lián)增強(qiáng)子的結(jié)合親和力或HNF-4α與轉(zhuǎn)錄引發(fā)復(fù)合物之間的相互作用的附加核因子。特別地，因?yàn)镠NF-4α和過(guò)氧化物酶體激活物激活的受體(PPAR)共享相似的DR-1共有序列，并且PPAR可以通過(guò)長(zhǎng)鏈游離脂肪酸而不是其相應(yīng)的CoA硫酯激活，所以由某些酰基-CoA發(fā)揮并由HNF-4α介導(dǎo)的作用可以類似于，或由相應(yīng)的游離酸激活的PPAR拮抗。
不管上述未知的情況，如本文舉例的HNF-4α的?；?CoA的激動(dòng)/拮抗分布圖還是有助于認(rèn)識(shí)由膳食脂肪酸體內(nèi)發(fā)揮，并與一些由HNF-4α調(diào)節(jié)的基因有關(guān)的作用的分子基礎(chǔ)。膳食脂肪的長(zhǎng)鏈脂肪?；M成包括西方膳食熱量攝取的30-40％。除了其底物角色外，最經(jīng)常被氧化產(chǎn)生能量或分別酯化為甘油三酯和磷脂，產(chǎn)生脂肪和細(xì)胞膜，一些膳食脂肪酸已經(jīng)被認(rèn)識(shí)到作為癌癥7，動(dòng)脈粥樣化形成8，血脂蛋白異常9，胰島素抵抗10，11，高血壓12，凝血和溶解纖維蛋白缺陷13，炎癥，免疫缺損和其它疾病開(kāi)始和進(jìn)程的中性調(diào)節(jié)劑。這些未闡明的作用現(xiàn)在可以被認(rèn)為能由相應(yīng)的?；?CoA對(duì)HNF-4α轉(zhuǎn)錄活性所發(fā)揮的作用解釋，導(dǎo)致調(diào)節(jié)與上述疾病的開(kāi)始和進(jìn)程有關(guān)基因的表達(dá)。由膳食長(zhǎng)鏈脂肪酸對(duì)血脂和血凝發(fā)揮的作用根據(jù)由HNF-4α對(duì)編碼與脂蛋白代謝(載脂蛋白AI，AII，B，CIII，微粒體甘油三酯轉(zhuǎn)移蛋白)和血凝(因子IV，IX，X)有關(guān)蛋白質(zhì)的基因所發(fā)揮的確定作用而值得注意。確實(shí)，由一般的C12-C16膳食飽和脂肪酸特別是肉豆蔻酸誘導(dǎo)的血漿中VLDL-，LDL-和HDL-膽固醇確定的增加與由相應(yīng)的飽和酰基-CoA誘導(dǎo)的HNF-4α激活一致，而短于C12的脂肪?；?CoA不發(fā)揮作用。血脂由飽和硬脂酸(18∶0)出人意料的降低可以類似地由硬脂?；?18∶0)-CoA對(duì)HNF-4α活性所發(fā)揮的拮抗作用解釋。類似地，可歸于代替飽和膳食脂肪酸9的一和多不飽和脂肪酸的降脂作用與飽和脂肪?；?CoA相比，也與多或一不飽和脂肪酸的活性一致，進(jìn)一步由亞麻?；?18∶3)-CoA，二十烷五酸酰基(20∶5)-CoA或二十二烷六酸?；?22∶6)-CoA的HNF-4α直接抑制作用補(bǔ)充。而且，由飽和C12-C16膳食脂肪酸誘導(dǎo)并與因子VII的相應(yīng)增加相關(guān)聯(lián)的血凝性增加，由多不飽和膳食脂肪酸誘導(dǎo)的血凝性降低以及因子VII含量和特別由膳食硬脂酸(18∶0)誘導(dǎo)的血凝性出人意料的降低可以類似地歸于由相應(yīng)的脂肪酰-CoA對(duì)HNF-4α活性發(fā)揮的作用，導(dǎo)致調(diào)節(jié)HNF-4α控制的編碼維生素K-依賴的凝血因子的基因表達(dá)。
而且，HNF-4α控制的基因通過(guò)可以內(nèi)源性地酯化為其相應(yīng)的CoA硫酯并作為HNF-4α激動(dòng)劑或拮抗劑的生物異源兩親羧酸的轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)可以提供由HNF-4α控制的基因超量表達(dá)引發(fā)或啟動(dòng)的疾病的治療方式。由生物異源取代的兩親羧酸提供的例子根據(jù)與其在動(dòng)物模型中改變血脂蛋白異常，肥胖，胰島素抵抗和動(dòng)脈粥樣化形成14-17，即與一些與HNF-4α控制的基因超量表達(dá)有關(guān)的疾病方面的藥理表現(xiàn)有關(guān)的積累的信息是值得注意的。這些藥物的療效可以由如本文舉例的HNF-4α轉(zhuǎn)錄活性的抑制解釋。
權(quán)利要求
1.一種藥物組合物，所述的組合物包括治療有效量的式R-COOH化合物，或這類化合物的鹽或酯或酰胺，其中R表示10-24個(gè)碳原子的飽和或不飽和烷基鏈，其中一個(gè)或多個(gè)碳原子可以被雜原子代替，其中一個(gè)或多個(gè)碳或雜原子鏈成員非強(qiáng)制性地形成環(huán)的部分，并且其中所述的鏈非強(qiáng)制性地被烴基，雜環(huán)基，低級(jí)烷氧基，羥基取代的低級(jí)烷基，羥基，羧基，鹵素，苯基或(羥基-，低級(jí)烷基-，低級(jí)烷氧基-，低級(jí)烯基-或低級(jí)炔基)-取代的苯基，C3-C7環(huán)烷基或(羥基-，低級(jí)烷基-，低級(jí)烷氧基-，低級(jí)烯基-或低級(jí)炔基)-取代的C3-C7環(huán)烷基取代，其中所述的化合物可以內(nèi)生性地轉(zhuǎn)化為其各自的輔酶A硫酯，RCOSCoA。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的組合物，其中R選自ω-羧基，ω-羥基硼，和ω-羥基鏈。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的組合物，其中RCOOH是祛脂酸或纖維酸，或其鹽，酯，酰胺，或衍生物。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的組合物，其中RCOOH是非甾類消炎藥(NSAID)。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的組合物，其中RCOOH是長(zhǎng)鏈脂肪酸。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的組合物，其中脂肪酸選自硬脂酸(18∶0)油酸(18∶1)亞油酸(18∶2)亞麻酸(18∶3)二十碳五烯酸(20∶5)二十二碳六烯酸(22∶6)
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的組合物，其中有效化合物選自下列化合物，其中R是ω-羧基，而RCOOH選自如下組成的一組1，16-十六烷二酸，1，18-十八烷二酸，2，2，15，15-四甲基十六烷-1，16-二酸，2，2，17，17-四甲基十八烷-1，18-二酸，3，3，14，14-四甲基十六烷-1，16-二酸，3，3，16，16-四甲基十八烷-1，18-二酸，4，4，13，13-四甲基十六烷-1，16-二酸，4，4，15，15-四甲基十八烷-1，18-二酸。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的組合物，其中R是ω-羥基硼，而RCOOH選自如下組成的一組16-B(OH)2-十六烷酸，18-B(OH)2-十八烷酸，16-B(OH)2-2，2-二甲基十六烷酸，18-B(OH)2-2，2-二甲基十八烷酸，16-B(OH)2-3，3-二甲基十六烷酸，18-B(OH)2-3，3-二甲基十八烷酸，16-B(OH)2-4，4-二甲基十六烷酸，18-B(OH)2-4，4-二甲基十八烷酸。
9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的組合物，其中R是ω-羥基，而RCOOH是選自如下組成的一組16-羥基十六烷酸，18-羥基十八烷酸，16-羥基-2，2-二甲基十六烷酸，18-羥基-2，2-二甲基十八烷酸，16-羥基-3，3-二甲基十六烷酸，18-羥基-3，3-二甲基十八烷酸，16-羥基-4，4-二甲基十六烷酸，18-羥基-4，4-二甲基十八烷酸。
10.根據(jù)權(quán)利要求1-9任意一項(xiàng)所述的組合物，用于治療血脂蛋白異常(血甘油三酯高，血膽固醇高，低HDL-膽固醇)。
11.根據(jù)權(quán)利要求1-9任意一項(xiàng)所述的組合物，用于治療胰島素抵抗，葡萄糖耐受力降低和NIDDM。
12.根據(jù)權(quán)利要求1-9任意一項(xiàng)所述的組合物，用于治療原發(fā)性高血壓。
13.根據(jù)權(quán)利要求1-9任意一項(xiàng)所述的組合物，用于降低凝血性和增加血纖維蛋白溶解。
14.根據(jù)權(quán)利要求1-9任意一項(xiàng)所述的組合物，用于治療代謝綜合征(綜合征-X)。
15.根據(jù)權(quán)利要求1-9任意一項(xiàng)所述的組合物，用于治療冠狀或周身動(dòng)脈粥樣化形成。
16.根據(jù)權(quán)利要求1-9任意一項(xiàng)所述的組合物，用于治療風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，多發(fā)性硬化，牛皮癬或腸炎疾病。
17.根據(jù)權(quán)利要求1-9任意一項(xiàng)所述的組合物，用于治療乳腺癌，結(jié)腸癌，或前列腺癌。
18.根據(jù)權(quán)利要求1至16所述的藥物組合物，用于局部應(yīng)用。
19.治療綜合征-X的方法，該方法包括施用治療有效量的抑制HNF-4控制的轉(zhuǎn)錄化合物。
20.根據(jù)權(quán)利要求19所述的方法，其中所述的化合物包括可以被轉(zhuǎn)化為其相應(yīng)的CoA硫酯的兩親羧酸。
21.根據(jù)權(quán)利要求20所述的方法，其中所述的兩親羧酸是生物異源兩親羧酸。
22.根據(jù)權(quán)利要求19所述的方法，其中所述的化合物使二聚-寡聚平衡向有利于寡聚遷移。
23.根據(jù)權(quán)利要求19或28所述的方法，其中所述的化合物降低HNF-4二聚體對(duì)所述的靶基因的結(jié)合親和力。
24.根據(jù)權(quán)利要求19所述的方法，包括施用治療有效量的長(zhǎng)鏈脂肪酸。
25.根據(jù)權(quán)利要求20所述的方法，其中所述的兩親羧酸是不飽和脂肪酸。
26.根據(jù)權(quán)利要求20所述的方法，其中所述的兩親羧酸是多不飽和脂肪酸。
27.根據(jù)權(quán)利要求20所述的方法，其中所述的兩親羧酸是約12-24個(gè)碳原子的脂肪酸。
28.調(diào)節(jié)HNF-4α轉(zhuǎn)錄活性的方法，包括施用有效量的兩親羧酸。
29.根據(jù)權(quán)利要求28所述的方法，其中所述的調(diào)節(jié)是抑制HNF-4活性。
30.根據(jù)權(quán)利要求28所述的方法，其中所述的調(diào)節(jié)是激活HNF-4活性。
31.根據(jù)權(quán)利要求20或28所述的方法，其中所述的兩親羧酸是C18∶3脂肪酸。
32.根據(jù)權(quán)利要求20或28所述的方法，其中所述的兩親羧酸是C20∶5脂肪酸。
33.根據(jù)權(quán)利要求20或28所述的方法，其中所述的兩親羧酸是可以轉(zhuǎn)化為其相應(yīng)的CoA硫酯的脂肪酸。
34.根據(jù)權(quán)利要求28所述的方法用于治療冠狀或周身動(dòng)脈粥樣化形成。
35.根據(jù)權(quán)利要求28所述的方法用于治療風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，多發(fā)性硬化，牛皮癬或腸炎疾病。
36.根據(jù)權(quán)利要求28所述的方法用于治療乳腺癌，結(jié)腸癌，或前列腺癌。
全文摘要
根據(jù)本發(fā)明,提供有療效的化合物,包括式R－COOH的兩親羧酸,或這類化合物的鹽或酯或酰胺,其中R表示10—24個(gè)碳原子的飽和或不飽和烷基鏈,其中一個(gè)或多個(gè)碳原子可以被雜原子代替,其中一個(gè)或多個(gè)碳或雜原子鏈成員非強(qiáng)制性地形成環(huán)的部分,并且其中所述的鏈非強(qiáng)制性地被烴基,雜環(huán)基,低級(jí)烷氧基,羥基取代的低級(jí)烷基,羥基,羧基,鹵素,苯基或(羥基－,低級(jí)烷基－,低級(jí)烷氧基－,低級(jí)烯基－或低級(jí)炔基)－取代的苯基,C3－C7環(huán)烷基或(羥基－,低級(jí)烷基－,低級(jí)烷氧基－,低級(jí)烯基－或低級(jí)炔基)－取代的C3－C7環(huán)烷基取代,其中所述的化合物可以內(nèi)生性地轉(zhuǎn)化為其各自的輔酶A硫酯。
文檔編號(hào)A61K31/192GK1261274SQ98806550
公開(kāi)日2000年7月26日 申請(qǐng)日期1998年6月23日 優(yōu)先權(quán)日1997年6月26日
發(fā)明者詹考伯·巴-塔那 申請(qǐng)人:耶路撒冷希伯來(lái)大學(xué)依薩姆研究發(fā)展公司