專利名稱：用于治療和預(yù)防皮膚光損傷的抗誘變劑組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
總體上本發(fā)明涉及治療和預(yù)防皮膚或其它組織由于暴露在日光或紫外線照射或其它誘變因素下而造成的光損傷、基因損傷和腫瘤發(fā)生，包括對哺乳動(dòng)物例如人施用脫氧核糖核苷或脫氧核糖核苷的酯。當(dāng)在暴露于誘變射線或化學(xué)誘變劑之前、當(dāng)時(shí)或之后局部使用時(shí)，這些組合物能降低DNA損傷、突變頻率和腫瘤發(fā)生。
背景技術(shù)：
皮膚暴露在紫外線(或電離)射線中會損傷DNA，這種損傷如果沒有修復(fù)或修復(fù)不正確，會導(dǎo)致癌癥的發(fā)生并加速老化過程。DNA損傷和隨之而來的基因組不穩(wěn)定是癌發(fā)生及生物老化的明顯特征?；加蠨NA修復(fù)能力缺陷疾病(象著色性干皮病)的患者表現(xiàn)出過早的皮膚老化，而且在暴露于陽光的皮膚部分上患皮膚癌的幾率非常高(Robbins和Moshell，J.Inv.Dermatol.，73102-107，1979)。迄今為止，在藥理上對由日光或紫外線照射引起的皮膚損傷的防護(hù)，很大程度上局限于用如遮光劑或自由基清除劑等藥劑來阻止損傷，或者是用如視黃酸或羥基乙酸等藥劑來重構(gòu)輻射損傷皮膚的表面，此時(shí)并未必需要涉及細(xì)胞或組織損傷的最基本的機(jī)理并在基因組完整性水平上進(jìn)行修復(fù)。
事實(shí)上，如使用遮光劑這樣的防護(hù)措施并不完全有效，而且暴露于陽光下并不是經(jīng)?？梢灶A(yù)料得到的。在美國，皮膚癌的發(fā)病率接近每年1，000，000例。因此，需要有一種治療劑，它能夠降低發(fā)展皮膚癌或其它由皮膚光損傷引起的后果的風(fēng)險(xiǎn)，即使是在已經(jīng)曬過陽光之后使用該治療劑。在此類狀況下，遮光劑和可以誘使或促進(jìn)皮膚曬成褐色的試劑是沒有用的，因?yàn)樗鼈儍H在暴露于紫外線照射之前使用才有效。而且，在一些情況中，遮光劑和甚至內(nèi)源性黑色素實(shí)際上可以通過光動(dòng)力致敏作用來增強(qiáng)紫外線誘導(dǎo)的DNA損傷。
已經(jīng)有一些嘗試被用于在損傷已經(jīng)發(fā)生之后，提高或加速皮膚細(xì)胞內(nèi)DNA的修復(fù)并降低DNA損傷的后果。DNA修復(fù)首先主要的步驟是檢測并切除DNA上受損的部分。在一些形式的DNA損傷中，病毒酶T4核酸內(nèi)切酶V可以完成這一步。已有報(bào)道顯示，當(dāng)把T4核酸內(nèi)切酶V包裝在可穿透表皮的脂質(zhì)體中時(shí)，它可以在體內(nèi)加速小鼠光損傷皮膚中嘧啶二聚體(最普遍的光損傷形式)的切除速度(Yarosh等，CancerRes.524227-4231，1992)。已經(jīng)報(bào)道有一種細(xì)茵提取物加快暴露于紫外線之后的皮膚中期外DNA合成的速度，這種效果常常被用作DNA修復(fù)活性的指標(biāo)(Kludas和Heide，美國專利4464362)；然而，這一效果并沒有在隨后的一項(xiàng)研究中得到確證(Natarajan等，Mutation Research 20647-54，1988)。
然而，DNA修復(fù)的關(guān)鍵問題未必是損傷切除的速度，而是修復(fù)的保真性。如果細(xì)胞無法以可與DNA損傷片段切除速度相匹配的速度進(jìn)行準(zhǔn)確修復(fù)合成的話，那么加速DNA修復(fù)中切除步驟的試劑實(shí)際上會加速損傷(Collins和Johnson，J.Cell Physiol.99125-137，1979)。
脫氧核糖核苷或脫氧核糖核苷酸已經(jīng)被加入培養(yǎng)的細(xì)胞中，這些細(xì)胞已經(jīng)過輻射并存在可變的或分歧的對DNA損傷或突變的作用。有一些細(xì)胞類型，如淋巴細(xì)胞，其脫氧核糖核苷酸的重新合成能力是有限的。據(jù)報(bào)道，在此類細(xì)胞中，在紫外線輻射(Yew和Johnson，Biochim.Biophys.Acta，562240-251，1979；Green等，Mutation Research，350239-246，1996)或電離輻射(Petrovic等，Int.J.Radiat.Biol.，18243，1970)之后，外源脫氧核糖核苷提高細(xì)胞的成活率；在紫外線照射過的正常人成纖維細(xì)胞中加入脫氧核糖核苷之后并未發(fā)現(xiàn)成活率有明顯升高(Green等，Mutation Research，350239-246，1996)。關(guān)鍵的一點(diǎn)是在由紫外線輻射或其它誘變因素引起基因組損傷之后，細(xì)胞成活率的提高未必是合乎需要的。程序性細(xì)胞死亡或凋亡的過程是與檢測DNA損傷的細(xì)胞機(jī)制結(jié)合為一體的。因此，本身不足以引起細(xì)胞死亡的基因組損傷可以激發(fā)凋亡，一種活躍的細(xì)胞自殺程序，這樣該細(xì)胞中的DNA損傷就不會在下一代細(xì)胞中持續(xù)，否則隨著基因組損傷的積累就可能發(fā)生腫瘤。檢測DNA損傷和誘導(dǎo)凋亡的機(jī)制包括細(xì)胞周期調(diào)節(jié)蛋白，如腫瘤抑制蛋白p53。因此，提高照射之后的細(xì)胞成活率(如通過抑制凋亡)的試劑未必是抗癌的，而且可能實(shí)際上通過允許了原本可以被凋亡除掉的受損細(xì)胞的存活而增強(qiáng)了突變頻率和惡性轉(zhuǎn)化的風(fēng)險(xiǎn)。這一原則的一個(gè)重要例子是以下的證明在子宮內(nèi)暴露于電離射線的p53剔除的胚胎期小鼠與野生型對照相比具有較高的存活率(胎兒安全出生)，但也有高得多的先天缺陷頻率(Norimura等，Nature Medicine，2577-580)。
關(guān)于外源性脫氧核糖核苷對紫外線照射過的細(xì)胞突變頻率的影響已經(jīng)進(jìn)行了明確的研究，得到了各種不同的結(jié)果。Bianchi和Celotti(Mutation Research 146277-284，1985)報(bào)道高濃度的胸苷或脫氧胞苷增加紫外線照射過的V79中國倉鼠細(xì)胞的突變率；在加入任何濃度的核苷時(shí)均沒有發(fā)現(xiàn)突變頻率的降低。Musk等(Mutation Research 22725-30，1989)報(bào)道一種脫氧核糖核苷的混合物(其中包括相對于其它核苷過量的脫氧胞苷)降低紫外線C(254nm)照射的MM96L黑素瘤細(xì)胞的突變頻率，該細(xì)胞系已知含有超過構(gòu)建所需的過量的嘌呤脫氧核糖核苷酸。在同一研究中，外源脫氧核糖核苷對另一種暴露于紫外線C輻射之后的腫瘤細(xì)胞系(人海拉細(xì)胞)的突變頻率沒有影響。重要的是注意紫外線C輻射并不是地球表面太陽輻射的成分之一，因?yàn)樗淮髿鈱佑行ё钃趿?Pathak，1974，Sunlight and Man，T.B.Fitzpatrick編著，University of TokyoPress，東京，日本，第815頁)。脫氧核糖核苷對暴露于太陽輻射或紫外線輻射(以存在于太陽輻射中的波長)中的細(xì)胞的突變頻率的影響沒有被檢測到，作者們對他們的討論精確地做出結(jié)論說“…與紫外線C照射相比，陽光[照射]的MM96L細(xì)胞[突變]頻率較低，這意味著陽光沒有擾亂脫氧核糖核苷庫，或者它所引起的細(xì)胞應(yīng)答對核苷水平不敏感。”除了抑制凋亡或促進(jìn)DNA修復(fù)以足以允許細(xì)胞存活、但未必能糾正潛在的腫瘤發(fā)生突變的試劑之外，生長因子(包括參與正常傷口愈合應(yīng)答的因子，如TGF-β或PDGF)通常具有腫瘤促進(jìn)因子的功能。
美國專利5，246，708公開了包括將脫氧核糖核苷混合物用于促進(jìn)創(chuàng)傷、潰瘍和灼傷(包括由紫外線或陽光輻射引起的傷口)愈合的方法和組合物。
脫氧核糖核苷的?；苌镆驯恢v授是一種促進(jìn)脫氧核糖核苷進(jìn)入皮膚的傳遞分子，如美國專利申請系列編號466，379中所公開的。據(jù)所公開的，脫氧核糖核苷的?；苌锟梢栽谄つw受輻射損傷之后提高細(xì)胞修復(fù)和細(xì)胞存活。
低聚脫氧核糖核苷酸被建議用作黑素原生成的刺激物，其所基于的思想是DNA的損傷或DNA損傷的切除產(chǎn)物可能作為細(xì)胞信號提高皮膚中黑色素的產(chǎn)生以幫助保護(hù)其不受隨之而來的損傷。Gilchrest等(美國專利5，470，577；WO申請系列編號95/01773)提出外源的DNA光損傷產(chǎn)物可能激活黑素原生成，并不需要經(jīng)過一個(gè)對細(xì)胞DNA真正造成損傷的必需的中間環(huán)節(jié)。所述的意圖是模仿環(huán)丁烷嘧啶二聚物或其它DNA光損傷產(chǎn)物的存在，目的是給細(xì)胞提供假的DNA損傷信號，這樣可能可以在不存在真正的DNA損傷情況下激活誘導(dǎo)黑素原生成。用胸酰二核苷酸體外處理黑素瘤細(xì)胞和體內(nèi)處理幾內(nèi)亞豬皮膚導(dǎo)致黑色素產(chǎn)生的增加。作者們陳述他們相信DNA片段完整地進(jìn)入細(xì)胞、甚至它們的核內(nèi)。他們提出通過持續(xù)幾周地局部施用低聚脫氧核糖核苷酸(尤其是胸苷二核苷酸)以使皮膚不經(jīng)陽光照射而變成褐色，這樣可以通過誘導(dǎo)黑色素的合成來保護(hù)皮膚，這樣隨后就可使進(jìn)入和穿過皮膚的紫外線輻射減少。
Wiskemann(1974；Sunlight and Man，T.B.Fizpatrick編著，University of Tokyo Press，東京，日本，第51頁)報(bào)導(dǎo)全身性(腹膜內(nèi))施用胸苷脫氧核苷或核糖核苷和同類的腺苷、環(huán)腺苷單磷酸、尿苷、胞啶增加了在暴露于紫外線后頭幾小時(shí)內(nèi)在皮膚中全身施用的伊文思藍(lán)(Evan’s Blue)染料溢出的潛伏期，這表明由紫外線誘導(dǎo)的急性水腫減輕了。在這個(gè)系統(tǒng)中，在照射之后施用的DNA對染料的溢出不產(chǎn)生影響。作者們還明確地說明結(jié)合到藥膏中的核酸堿基并不穿透人表皮的角質(zhì)層(角質(zhì)層，即去核的角質(zhì)形成細(xì)胞的外層，它組成皮膚的主要的水分障礙)。
本發(fā)明的目的本發(fā)明的一個(gè)目的是提供一些組合物和方法，用于減少皮膚的突變頻率、光老化(photaging)以及腫瘤發(fā)生，從而減輕暴露于陽光和紫外線輻射以及其它誘變劑，包括內(nèi)源性氧化劑，所導(dǎo)致的后果。
本發(fā)明的一個(gè)目的是提供一種組合物，用于增強(qiáng)DNA的修復(fù)并防止誘變劑輻射的后果，甚至是在已經(jīng)發(fā)生損傷或已經(jīng)暴露于射線或者其它誘變劑之后施用。
本發(fā)明的一個(gè)首要目的是提供一些組合物和方法，用于有效地防止或治療皮膚暴露于陽光和紫外線輻射和其它環(huán)境誘變劑的后果。
本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供一些組合物和方法，用于提高化學(xué)遮光劑的活性。
本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供一些組合物和方法，用于減少遮光劑和其它外源性和內(nèi)源性的用于充當(dāng)紫外線誘導(dǎo)的皮膚損傷的光敏或光力學(xué)增強(qiáng)劑的化合物所造成的有害影響。
本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供一些組合物和方法，用于減少發(fā)炎性皮膚或粘膜疾病，包括牛皮癬、皮炎、以及炎性腸病，的一些后果。
本發(fā)明概述本發(fā)明涉及一些方法和組合物，用于通過局部施用含有有效量的脫氧核苷源的組合物來改善暴露于紫外線輻射、電離輻射或化學(xué)誘變劑之后的皮膚的DNA修復(fù)(或基因組保真度)以及減少光損傷。該組合物能夠把脫氧核苷遞送到需要的靶細(xì)胞。此類組合物在皮膚暴露于陽光、紫外線或電離輻射、或化學(xué)誘變劑(包括但不局限于內(nèi)源性或外源性的自由基或氧化氮源)之前、期間、以及之后施用于皮膚上。用本發(fā)明的組合物進(jìn)行治療改善了DNA修復(fù)的凈保真度并從而減少了陽光或紫外線輻射或其它誘變劑所引起的突變的頻率以及腫瘤發(fā)生的風(fēng)險(xiǎn)。
本發(fā)明提供了一些方法和組合物，用于把其濃度足以支持并改善受損DNA修復(fù)以及減少皮膚暴露于輻射或化學(xué)誘變劑的有害后果的脫氧核苷遞送給皮膚細(xì)胞。
本發(fā)明的化合物和組合物除了防止暴露于陽光的后果以外，還用于治療皮膚由陽光造成的皮膚損害，如光化角質(zhì)或光痣。
脫氧核苷或者作為游離脫氧核苷施用，或者作為其衍生物施用，該衍生物在施用到皮膚之后被轉(zhuǎn)化為脫氧核苷。這類衍生物包括脫氧核糖核苷酸、寡核苷酸、DNA本身、以及脫氧核苷的酰基化衍生物或脫氧核苷的其它的可被內(nèi)源性酶轉(zhuǎn)化為游離脫氧核苷的衍生物。
本發(fā)明的方法和組合物同時(shí)還改善了其它施用于皮膚上用于預(yù)防、治療或化妝目的的藥劑的活性并減少了它們的副作用，這些藥劑包括但不局限于遮光劑、視黃醛、α-羥基酸、甲基黃嘌呤、以及DNA修復(fù)酶。
本發(fā)明還涉及一些組合物和方法，用于減少內(nèi)源性和外源性具光化學(xué)活性的化合物或色素(它們充當(dāng)由陽光或紫外線輻射造成的DNA損傷的光敏劑或光力學(xué)增強(qiáng)劑)的有害后果(如細(xì)胞損傷，特別是DNA損傷，這可導(dǎo)致基因組突變或其它潛在的致癌性損傷的可能性增加)** *通過參閱讀下面的實(shí)施例中所討論的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，從下面的詳細(xì)描述中將更清楚、更完整地理解本發(fā)明以及本發(fā)明其它的目的、特征和優(yōu)點(diǎn)。
本發(fā)明的詳細(xì)說明DNA的損傷和修復(fù)參與皮膚癌和光老化的發(fā)展過程。本發(fā)明提供了可以成功地改善DNA修復(fù)的凈保真度的化合物。本發(fā)明將對衛(wèi)生保健產(chǎn)生重要的影響并將改善皮膚的化妝性外觀。
A．定義術(shù)語“脫氧核苷”指的是DNA的四種基本核苷成分的任意一種脫氧腺苷、脫氧胞苷、脫氧鳥苷、以及胸苷。術(shù)語“核糖核苷”指的是RNA的四種主要核苷成分的任意一種腺苷、胞啶、鳥苷、以及尿苷。
術(shù)語“脫氧核苷的酰基化衍生物”指的是含有來源于羧酸的?；〈拿撗鹾塑?其改變了游離脫氧核苷的藥物動(dòng)力學(xué)和生物利用度)，如美國專利申請序列號466，379中所公開的，該發(fā)明的全部內(nèi)容作為參照結(jié)合于本發(fā)明中。
在本發(fā)明的上下文中，術(shù)語“至少一種脫氧核苷源”或“脫氧核苷源”指的是脫氧核苷本身或脫氧核苷的衍生物，這些衍生物能被內(nèi)源性酶，特別是酯酶，轉(zhuǎn)化為脫氧核苷。例子包括脫氧核苷的?；苌?羧酸酯)、脫氧核糖核苷酸的?；苌?磷酸酯)、或寡脫氧核糖核苷酸的?；苌?磷酸二酯)。由于酯酶活性(包括能夠剪切羧酸酯和磷酸酯的各種不同的酶)在哺乳動(dòng)物組織，包括皮膚，中是到處存在的，所以這些脫氧核苷的酯在被施用到皮膚時(shí)被轉(zhuǎn)化為脫氧核苷。類似地，“至少一種核糖核苷源”指的是一種核糖核苷或核糖核苷的酯，包括核糖核苷酸、寡核糖核苷酸、或者核糖核苷的?；苌?。
術(shù)語“脫氧核苷的酯”(或脫氧核苷酯)指的是一種如上所述的脫氧核苷?；苌锘蛞粋€(gè)或多個(gè)脫氧核苷的磷酸酯，如脫氧核糖核苷酸、寡脫氧核糖核苷酸、或多聚脫氧核糖核苷酸。
在本發(fā)明的上下文中，術(shù)語“光致敏作用”指的是光吸收(紫外線或可見光)分子把激發(fā)態(tài)(通常是三重線態(tài))能量直接傳遞給一個(gè)目標(biāo)分子，導(dǎo)致DNA或其它細(xì)胞結(jié)構(gòu)損傷的過程。目標(biāo)分子可以是DNA本身，也可以是另外一個(gè)導(dǎo)致DNA損傷的目標(biāo)，如溶酶體的膜成分，它含有脫氧核糖核酸酶。
本發(fā)明中的術(shù)語“光力學(xué)敏化作用”指的是吸收紫外線的分子由于受到紫外線或可見光輻射的激活而產(chǎn)生自由基或其它可以擴(kuò)散的反應(yīng)中間體的過程。
術(shù)語“遮光劑”指的是一種旨在被用作遮光劑產(chǎn)品中的活性組分用于減少皮膚暴露于陽光輻射的紫外線成分中的紫外線吸收化學(xué)物質(zhì)。目前如在商業(yè)產(chǎn)品中使用的遮光劑的例子包括avobenzone(t-丁基二甲氧基二苯甲?；淄?、oxybenzone(二苯甲酮-3)、dioxybenzone(二苯甲酮-8)、sulisobenzone(二苯甲酮-4；2-羥基-4-甲氧基二苯甲酮-5-磺酸)、octocrylene(丙烯酸2-乙基己基-2-氰基-3，3-聯(lián)苯酯)、甲氧基肉桂酸辛酯(對-甲氧基肉桂酸2-乙基己酯)、水楊酸辛酯(水楊酸2-乙基己酯)、homosalate(水楊酸高薄荷酯)、throlamine salicylate(水楊酸三乙醇胺)、聯(lián)苯咪唑磺酸、PABA(對氨基苯甲酸)、roxadimate(4-二羥基丙基氨基苯甲酸乙酯)、lisadimate(對-氨基苯甲酸甘油酯)、Padimate O(二甲基PABA辛酯)、鄰氨基苯甲酸薄荷酯、和Parsol 1789(丁基甲氧二苯甲酰甲烷)。
術(shù)語“能量清除劑”指的是一種化合物，它吸收DNA損傷的遮光劑或內(nèi)源性光致敏或光力學(xué)增強(qiáng)劑的激發(fā)態(tài)的能量，減少了對目標(biāo)生物分子，如DNA，的損傷。在本文中，能量清除劑在有效濃度時(shí)應(yīng)該是無毒的，而且當(dāng)存在于紫外線輻射(有DNA損傷的光致敏劑或光力學(xué)增強(qiáng)劑存在下)時(shí)應(yīng)該可以對DNA的損傷有凈減少。在本發(fā)明的上下文中，“能量清除劑”具體指的是其能量少于或等于基因組DNA核苷酸堿基成分的具有最低的三重態(tài)的化合物。本發(fā)明的能量清除劑的首要特質(zhì)是，由于光化學(xué)能量狀態(tài)的性質(zhì)，或質(zhì)量作用(濃度)，它們防止了基因組DNA的損傷，這些損傷否則會因?yàn)榧ぐl(fā)態(tài)色素(不管是內(nèi)源性的，如黑色素，或外源性的，如遮光劑)的能量轉(zhuǎn)移而發(fā)生。具有與DNA結(jié)構(gòu)成分類似的光化學(xué)性質(zhì)的能量清除劑是有利的，而且包括至少一種脫氧核苷或核糖核苷，如脫氧核苷、?；撗鹾塑?、脫氧核糖核苷酸、寡脫氧核糖核苷酸、核糖核苷、核糖核苷酸、寡核糖核苷酸以及酰基化核糖核苷源。
此處所用的術(shù)語“有害后果”指的是由誘變劑造成的哺乳動(dòng)物細(xì)胞的損傷，特別是基因組的損傷，導(dǎo)致發(fā)展皮膚癌或其它皮膚損傷，如光痣、光化角化癥、或其它的光老化表征(如皮膚皺紋或“老年斑”)的機(jī)會增加。能夠?qū)е逻@些有害后果的誘變劑包括陽光輻射、紫外線輻射、電離輻射、自由基(不管是對具光化學(xué)活性的色素進(jìn)行照射的結(jié)果產(chǎn)物，或者是來自一些其它的來源，包括正常的代謝過程)、氧化氮、以及環(huán)境誘變劑。
B．本發(fā)明的化合物本發(fā)明的化合物主要是那些主要的DNA的脫氧核苷成分脫氧腺苷、脫氧胞苷、脫氧鳥苷、以及胸苷。本發(fā)明還包括使用有效量的這些脫氧核苷的前體，如寡脫氧核糖核苷酸、DNA、脫氧核糖核苷酸、以及這些脫氧核苷的?；苌铮揖唧w地，用于把光力學(xué)感光劑以及光致敏劑對DNA、核糖核苷、以及它們的同類物，如寡核糖核苷酸、核糖核苷酸、以及核糖核苷的酰基化衍生物，的影響減到最小。
2-脫氧核糖以及2-脫氧核糖的?；苌镆彩潜景l(fā)明的有用的化合物。把它們用于治療現(xiàn)有的由陽光誘導(dǎo)皮膚損傷，如光化角化癥，是特別有利的。
不受任何理論的限制，本發(fā)明的進(jìn)入細(xì)胞的活性劑被認(rèn)為是脫氧核苷或脫氧核苷的?；苌?，因?yàn)槊撗鹾颂呛塑账峄蚬衙撗鹾颂呛塑账岬年庪x子磷酸根部分阻礙其穿越細(xì)胞膜。磷酸化的脫氧核苷前體在施用于皮膚之前或之后，在進(jìn)入細(xì)胞之前被通過酶解或非酶解的方式降解轉(zhuǎn)換為游離的脫氧核苷。
脫氧核糖核苷可以通過幾種方法中的任意一種來制備。它們可以通過從生物來源(如魚的精子)的DNA降解制得、或通過化學(xué)合成或通過發(fā)酵的技術(shù)制得。
本方法也包括上述化合物的藥理上可接受的鹽。
C．本發(fā)明的組合物本發(fā)明包括用于提高DNA修復(fù)的純保真度以及保護(hù)皮膚以防備誘變劑的藥物組合物。該組合物包括1)有效量的一種或多種的脫氧核糖核苷來源，以及任選地2)有效量的藥理上可接受的局部用載體，該載體能將脫氧核糖核苷或它們的前體在體內(nèi)條件下運(yùn)送至皮膚中合適的靶細(xì)胞。
雖然個(gè)體的脫氧核糖核苷，尤其是脫氧胞苷(見實(shí)施例7)具有一定的減弱紫外線誘導(dǎo)的腫瘤發(fā)生的活性，但是在本發(fā)明的一種配方中，典型地包含有兩種或更多的脫氧核糖核苷，或者優(yōu)選地包含有所有的四種。本發(fā)明中所包括的組合物含有脫氧腺苷、脫氧胞苷、脫氧鳥苷或胸苷，它們或者作為單獨(dú)的試劑，或者可能是兩種、三種或四種這些化合物的組合。含有脫氧胞苷的組合物是特別有利的。本發(fā)明中所包含的組合物中各脫氧核糖核苷的濃度，不管是單獨(dú)存在或與其它脫氧核糖核苷或脫氧核糖核苷的前體(如脫氧核糖核苷酯)相結(jié)合，并標(biāo)準(zhǔn)化到游離核苷或在脫氧核糖核苷的磷酸鹽或寡核苷酸或藥物前體如脫氧核糖核苷?；难苌镏泻塑詹糠值牧?，變化范圍為0.1至10毫克/毫升，優(yōu)選的是1至5毫克/毫升。
對于去氧核糖或去氧核糖的?；苌?，在本發(fā)明組合物中合適的濃度變化范圍為0.1至100毫摩爾，優(yōu)選的是10到50毫摩爾。
為了使脫氧核糖核苷及其本發(fā)明中的相關(guān)化合物能夠進(jìn)入較深層的皮膚細(xì)胞，可以提高它們穿過皮膚外層(如角質(zhì)層)的滲透力的賦形劑是有用的。可以提高本發(fā)明的化合物穿透進(jìn)入皮膚的能力的賦形劑成分包括但不局限于乙醇、異丙醇、乙二醇醚如二甘醇一乙基醚、azone(1-十二烷基氮雜環(huán)庚烷-2-酮、油酸、亞油酸、丙二醇、高滲濃度的甘油、乳酸、羥基乙酸、檸檬酸和蘋果酸。
本發(fā)明組合物中二甘醇一乙基醚的合適的濃度范圍為2至20％，優(yōu)選的是5至15％(w/w)。
除了促進(jìn)試劑被皮膚吸收外，使用局部用α-羥基酸(如乳酸和羥基乙酸)可以影響皮膚減少紫外線進(jìn)入表皮易受傷害的基底層的能力。因此，對減少使用AHA(如用于促進(jìn)表皮細(xì)胞脫落)的人暴露于陽光或紫外線的后果的藥劑的需求在增加。由于吸收紫外線的遮光劑穿透到皮膚中是所不期望的，因?yàn)樗赡軙τ勺贤饩€誘導(dǎo)的細(xì)胞損傷產(chǎn)生光致敏及光力學(xué)增強(qiáng)作用，所以本發(fā)明的化合物獨(dú)特地適用于與AHA相結(jié)合(在同一配方中或在分開的配方中均可)，以改善皮膚對陽光或紫外線輻射損傷作用的抵抗力。
本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案是一種水凝膠配方，包括一種水的或水-醇介質(zhì)和一種膠化劑，以及一種脫氧核苷源。合適的膠化劑包括但不局限于甲基纖維素、羧甲基纖維素、羥丙基甲基纖維素、卡波姆(聚羰乙烯)、hypan、聚丙烯酸酯以及甘油聚丙烯酸酯。
膠化劑的濃度是根據(jù)它們對粘度以及藥物或化妝特性的影響來選擇的。一種卡波姆膠化劑，如卡波姆934P，的合適濃度為1至15％之間，優(yōu)選地是在2至10％之間(w/w)。
脂質(zhì)體是微型的脂質(zhì)小泡，它們可以含有藥物活性劑，要么包裹在小泡中的水空間中，要么包裹在脂質(zhì)膜本身中，據(jù)該藥劑的親脂性而定。脂質(zhì)體能夠把一種藥劑遞送穿越角質(zhì)層進(jìn)入較深層的皮膚，因此是本發(fā)明的化合物和組合物的合適的賦形劑。
Niosomes是類似于脂質(zhì)體的脂質(zhì)小泡，它的膜大量地由非離子脂質(zhì)組成，它的一些形式對于把化合物輸送穿越角質(zhì)層是有效的。
在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，脫氧核苷的親脂性?；苌铮缑撗鹾塑盏挠退峄蜃貦八狨?，除了被包裹在小胞膜中之外(或作為其替代)，被結(jié)合到niosome或脂質(zhì)體膜的膜中。
有利于結(jié)合到本發(fā)明組合物中的其它藥劑包括皮質(zhì)類固醇，特別是濃度為0.05至1％的氫化可的松、其它的治療有效量的抗炎性皮質(zhì)類固醇、局部麻醉劑包括但不局限于苯佐卡因、利多卡因、苯甲醇、蘆薈油(aloe vera)、aloe barbadensis、視黃醛、抗氧化劑(如維生素C和E)、黃素、多酚(如從綠茶或紅茶中提取的)、尿囊素、脂質(zhì)體DNA修復(fù)酶、抗茵劑(如季銨鹽化合物、桿菌肽、新霉素、多粘菌素)、鋅鹽、以及甲基黃嘌呤。所列的所有藥劑在治療或減緩由紫外線輻射或發(fā)炎性皮膚疾病引起的各種不同方面的皮膚傷害或不適中都有一定的用途，因此是對本發(fā)明脫氧核苷的單一作用的補(bǔ)充。
已知苯甲醇具有麻醉及防腐的性質(zhì)，它出乎意料地具有改善相對不溶解的嘌呤脫氧核糖核苷、脫氧腺苷以及脫氧鳥苷的水溶性的作用；在脫氧核苷的局部用配方中，苯甲醇的優(yōu)選濃度為0.5至5％。這對于使本發(fā)明的脫氧核苷以高濃度穩(wěn)定地結(jié)合到水賦形劑中是很重要的。
遮光劑本發(fā)明的化合物被有利地結(jié)合到與吸收紫外線的化學(xué)遮光劑相同的配方中，例如avobenzone(t-丁基二甲氧基二苯甲?；淄?、oxybenzone(二苯甲酮-3)、dioxybenzone(二苯甲酮-8)、sulisobenzone(二苯甲酮-4；2-羥基-4-甲氧基二苯甲酮-5-磺酸)、octocrylene(丙烯酸2-乙基已基-2-氰基-3，3-聯(lián)苯酯)、甲氧基肉桂酸辛酯(對-甲氧基肉桂酸2-乙基己酯)、水楊酸辛酯(水楊酸2-乙基己酯)、homosalate(水楊酸高薄荷酯)、throlaminesalicylate(水楊酸三乙醇胺)、聯(lián)苯咪唑磺酸、PABA(對氨基苯甲酸)、roxadimate(4-二羥基丙基氨基苯甲酸乙酯)、lisadimate(對-氨基苯甲酸甘油酯)、Padimate O(二甲基PABA辛酯)、鄰氨基苯甲酸薄荷酯、和Parsol 1789(丁基甲氧二苯甲酰甲烷)。
可選地，本發(fā)明的化合物被配制在一種適用于在施用遮光劑之前或之后施用于皮膚上的基質(zhì)中。本發(fā)明的這一實(shí)施方案使得脫氧核苷在減少紫外線損傷后果以及減弱由遮光劑本身所造成的細(xì)胞損傷的光力學(xué)增強(qiáng)作用的優(yōu)點(diǎn)在與廣泛的各種不同的商品遮光劑產(chǎn)品結(jié)合使用中獲得。
D．本發(fā)明化合物及組合物的治療使用減少皮膚暴露于紫外線或陽光輻射的有害后果本發(fā)明的化合物以及組合物，當(dāng)在哺乳動(dòng)物皮膚暴露于誘變性輻射之前、期間、或之后施用時(shí)，出乎意料地改善DNA修復(fù)的凈保真度，從而減少了突變的頻率、光老化以及發(fā)展皮膚癌的機(jī)會。
DNA修復(fù)分幾步進(jìn)行。DNA修復(fù)系統(tǒng)檢測到DNA中發(fā)生化學(xué)損傷，其可能是由紫外線輻射、電離輻射、自由基、或化學(xué)誘變劑造成的。包含有受損區(qū)域的一個(gè)核苷酸片段(通常還含有一些周圍的核苷酸)被剪切下來。被剪切的鏈被用游離的脫氧核糖核苷酸，使用完整的DNA鏈當(dāng)模板，重新合成。
通常認(rèn)為皮膚細(xì)胞(如角質(zhì)細(xì)胞、黑素細(xì)胞、成纖維細(xì)胞)DNA修復(fù)的改善需要參與DNA損傷的檢測和剪切的酶或其它蛋白的活性有所改變。因此，人們企圖通過由局部施用的脂質(zhì)體遞送DNA修復(fù)酶來改善皮膚中DNA的修復(fù)(美國專利(Yarosh等，Cancer Res.524227-31，1992)。
比損傷初始剪切率遠(yuǎn)遠(yuǎn)更為重要的是修復(fù)的保真度或準(zhǔn)確性。如果細(xì)胞無法以與受損DNA片段的剪切速率相當(dāng)?shù)乃俾蔬M(jìn)行準(zhǔn)確的修復(fù)合成的話，加速DNA修復(fù)的剪切步驟的藥劑實(shí)際上能使損傷加劇(Collins和Johnson，J.Cell Phvsiol.99125-137，1979)。
本發(fā)明的化合物和組合物，當(dāng)在暴露于陽光或紫外線輻射或其它的環(huán)境誘變劑之前、期間或之后施用時(shí)，減少由誘變劑誘導(dǎo)的突變頻率(實(shí)施例1)。這減少了由誘變劑造成的細(xì)胞的損傷，也減少了發(fā)展皮膚癌的機(jī)會，如實(shí)施例2及7中所示。對基因組保真度的影響大體上是由單一細(xì)胞修復(fù)的保真度的實(shí)際改善或發(fā)生不可修復(fù)DNA損傷的細(xì)胞的消除的改善來介導(dǎo)的。任何一種機(jī)制都導(dǎo)致暴露于誘變劑的皮膚基因組保真度的凈改善。
本發(fā)明的化合物當(dāng)與其它的已知對皮膚護(hù)理的各種不同的發(fā)面有用的藥劑(包括但不局限于遮光劑、甲基黃嘌呤、視黃醛、DNA修復(fù)酶、脫落劑、以及蛋白酶抑制劑，皮質(zhì)類固醇以及非類固醇類抗炎劑)結(jié)合施用時(shí)，具有出乎意料的益處。
本發(fā)明的化合物及組合物，當(dāng)在暴露于紫外線或陽光輻射之后足夠短的時(shí)間內(nèi)(如約3天內(nèi))施用，則改善細(xì)胞及大分子損傷的修復(fù)并提高凈余的基因組保真度，從而減少了發(fā)展此類暴露所造成的肉眼可見的有害后果(包括但不局限于光老化、曬黑綜合癥、光化角化癥、光痣、“老年斑”和皮膚癌，如基底細(xì)胞癌、鱗細(xì)胞癌、黑素瘤)的機(jī)會及其嚴(yán)重程度。本發(fā)明的化合物以及組合物也可以可選地在暴露于陽光或紫外線輻射之前或期間施用以縮短損傷與本發(fā)明化合物發(fā)揮修復(fù)增強(qiáng)作用之間的時(shí)間間隔。
用本發(fā)明的化合物及組合物對皮膚進(jìn)行治療結(jié)果減少發(fā)展皮膚癌及其它的暴露于陽光或紫外線的有害后果(如光老化)的機(jī)會，甚至在本發(fā)明的化合物是在甚至輻射之后，如在意外地暴露于潛在損傷劑量的陽光照射之后，施用。這種類型的活性是傳統(tǒng)的遮光劑或可能通過增強(qiáng)黑素生成起作用的藥劑所不具有的，它們僅在照射之前施用才有用。
本發(fā)明的化合物及組合物進(jìn)而對治療現(xiàn)有的發(fā)炎性或過度增殖的皮膚損傷，特別是那些由暴露于陽光或紫外線輻射所造成的，包括但不局限于光化角化癥、光痣、以及皺紋，是有用的。實(shí)施例9詳細(xì)說明了這種活性在一個(gè)患者中的表現(xiàn)，其中局部施用本發(fā)明的組合物導(dǎo)致一種現(xiàn)有的光化角化癥的完全退卻。
遮光劑活性的改善以及遮光劑對紫外線損傷的光力學(xué)增強(qiáng)的減弱作用遮光劑典型地是以防止由陽光誘導(dǎo)的紅斑為基礎(chǔ)而設(shè)計(jì)和試驗(yàn)的。雖然紅斑和遮光劑對紅斑的減弱作用是一種重要的短期效應(yīng)，但是遮光劑對紅斑以及炎性的減弱并不一定意味著它們對DNA產(chǎn)生了一種成比例的保護(hù)(或者對皮膚癌和一些DNA損傷的繼發(fā)的光老化特征產(chǎn)生成比例的防護(hù))。固然遮光劑在防止一些光老化特征以及與紫外線有關(guān)的癌發(fā)生中是有用的，但它們并沒有提供完全的防護(hù)，而且在一些情形中，可能會實(shí)際上通過充當(dāng)光力學(xué)致敏劑而加劇了光損傷(見實(shí)施例3)。
化學(xué)遮光劑旨在通過吸收其波長可導(dǎo)致誘變(或產(chǎn)生紅斑)的光子來起作用，從而產(chǎn)生一種短壽命的單一激發(fā)態(tài)；返回到基態(tài)伴隨著更大波長的光子的發(fā)射，它被認(rèn)為比入射輻射危害性更小。在一個(gè)分子從單一激發(fā)態(tài)迅速返回基態(tài)的過程中所發(fā)生的光子發(fā)射已知為“熒光”。然而遮光劑或其它的外源性或內(nèi)源性紫外線吸收分子也可以被激發(fā)到長壽命的三重態(tài)，這可以便利進(jìn)一步的反應(yīng)(在一個(gè)分子從三重激發(fā)態(tài)返回基態(tài)的過程中所發(fā)生的能量發(fā)射已知為“磷光”，其發(fā)生的時(shí)間間距典型地比熒光長很多)。結(jié)果是，一些紫外線吸收劑，特別是具有最低三重態(tài)(這種三重態(tài)比基因組DNA成分的最低三重態(tài)的能量水平更高)的那些，能吸收光子并實(shí)際上通過直接或間接的能量轉(zhuǎn)移(如從三重激發(fā)態(tài))，而不是通過簡單的熒光或無害波長的光子的發(fā)射，來加劇DNA的損傷。
二苯甲酮是二苯甲酮-3的一個(gè)結(jié)構(gòu)很接近的類似物。它增加了在經(jīng)紫外線照射的DNA中鏈斷裂及嘧啶二聚體的產(chǎn)量，而且已知在紫外線照射時(shí)產(chǎn)生自由基(Charlier等，Photochemistry andPhotobiology，15527-536，1972)。在實(shí)施例3、4、5及6中所給出的結(jié)果表明經(jīng)核準(zhǔn)的遮光劑成分同樣也發(fā)生類似的現(xiàn)象，同時(shí)表明本發(fā)明的脫氧核苷減少了施用遮光劑所帶來的這一有害后果。
當(dāng)遮光劑的濃度以足以阻斷紫外線輻射進(jìn)入細(xì)胞的濃度存在時(shí)，它是具保護(hù)性的。然而，如果光子吸收劑(包括通常的遮光劑成分)以不足以充分地阻斷紫外線的傳輸?shù)姆浅５偷臐舛却嬖跁r(shí)，它可以充當(dāng)能量傳輸分子，直接地(光致敏作用)或通過催化形成活性氧自由基(光力學(xué)致敏作用)有效地吸取紫外線的能量并把其轉(zhuǎn)移到細(xì)胞成分中。這樣，低濃度的二苯甲酮，例如，增強(qiáng)由紫外線輻射誘導(dǎo)的DNA損傷，而在足以完全阻斷紫外線進(jìn)入細(xì)胞或它們總共的中間微環(huán)境的較高的濃度下，它則保護(hù)DNA免受損傷(見實(shí)施例3)。
預(yù)期的體內(nèi)活性是一種含有二苯甲酮-3的遮光劑，如果施用足以完全阻斷光線進(jìn)入靶細(xì)胞的一層，則可以保護(hù)細(xì)胞免受損傷。然而，在不足以防止紫外線輻射穿透進(jìn)入靶細(xì)胞的較低濃度下，特別是在已經(jīng)有一些二苯甲酮-3通過角質(zhì)層或毛囊被吸收進(jìn)入決定性的細(xì)胞層的時(shí)候，它將對DNA產(chǎn)生潛在的體內(nèi)損傷。在用含有二苯甲酮-3的商品化遮光劑局部處理的小鼠中，在暴露于紫外線之后確實(shí)觀察到與這種假設(shè)一致的影響(見實(shí)施例6)。除了二苯甲酮衍生物以外的其它類別的遮光劑，當(dāng)在照射時(shí)以低濃度存在時(shí)，也會加劇由紫外線誘導(dǎo)的DNA損傷。
最近，已經(jīng)發(fā)展了一種很容易受各種不同致癌物(包括紫外線輻射)的影響的轉(zhuǎn)基因小鼠品系(v-HA-ras轉(zhuǎn)基因TG.AC小鼠)(Leder等，Proc.Nat.Acad.Sci.USA，879178-9182，1990)。在暴露于相對較小的紫外線輻射之后，這些小鼠在幾周的時(shí)間內(nèi)可靠地發(fā)展出皮膚乳頭狀瘤。當(dāng)在這種小鼠的背上施用一商購遮光劑圓貼片時(shí)，被保護(hù)區(qū)域的中心發(fā)生由紫外線誘導(dǎo)的乳頭狀瘤的幾率確實(shí)比未被保護(hù)的區(qū)域低，但是，在施用遮光劑的空白處，乳頭狀瘤的發(fā)生率常常非常高(有時(shí)比未受保護(hù)區(qū)域的還要高)(見實(shí)施例6)。一層足以阻斷紫外線進(jìn)入靶細(xì)胞的遮光劑是具保護(hù)性的，但是低濃度的遮光劑，如在遮光劑貼片的空白處，可以充當(dāng)光致敏劑，增加了由紫外線誘導(dǎo)的皮膚癌的發(fā)生率(比完全“未被保護(hù)的”皮膚還高)。在正常施用遮光劑的過程中，必定會使有關(guān)的皮膚細(xì)胞暴露于低的、具光致敏作用(而不是保護(hù)作用)的濃度的遮光劑中，如在施用的遮光劑貼片的空白處，或者在一層保護(hù)性的遮光劑被洗去或被損耗時(shí)。
在常規(guī)的遮光劑配方(或含有遮光劑的其它化妝品)中添加的脫氧核苷或其相關(guān)化合物的優(yōu)點(diǎn)除了支持DNA修復(fù)以外，還在于它們能夠通過充當(dāng)能量清除劑與傳統(tǒng)的遮光劑相配合協(xié)助，吸取由遮光劑(和細(xì)胞靶物即DNA具化學(xué)類似性)發(fā)射的能量或產(chǎn)生的自由基。外源性脫氧核苷除了直接吸收紫外線能量以外，還充當(dāng)由遮光劑或其它光致敏劑捕獲的能量的“誘惑劑”(〃decoys〃)，否則這些能量會被轉(zhuǎn)移給細(xì)胞靶物，包括DNA。這樣，脫氧核苷提供了一種與劑量相關(guān)的紫外線輻射對細(xì)胞DNA的損傷的減少，這種損傷是在有低濃度的光致敏劑(如二苯甲酮-3或其它的遮光劑)存在的情況下發(fā)生的(實(shí)施例4)。
適合的能量清除劑的一個(gè)判定性的特征是它們的最低三重能量態(tài)與原位DNA成分的相等或更低。因?yàn)槊撗鹾塑?或脫氧核糖核苷酸、?；撗鹾塑?、或寡脫氧核糖核苷酸)的物化性質(zhì)與基因組DNA是類似的，所以本發(fā)明的化合物特別適合充當(dāng)能量清除劑，以保護(hù)基因組DNA免受因?yàn)槟芰繌墓庵旅魟┗蚬饬W(xué)感光劑傳送而造成的損傷。在這一實(shí)施方案中，核糖核苷、核糖核苷酸、寡核糖核苷酸以及核糖核苷的?；苌锸菤w屬于本發(fā)明范圍內(nèi)的。此類清除劑在用于局部施用的組合物中的合適的濃度范圍為0.1至100mg/ml(在核苷酸或寡核苷酸或核苷?；苌锏那樾沃?，標(biāo)準(zhǔn)化到游離核糖核苷的數(shù)量)。優(yōu)選地，此類清除劑的濃度范圍為0.1至20mg/ml或特別地1至5mg/ml。
不僅僅是遮光劑存在對DNA損傷產(chǎn)生光力學(xué)增強(qiáng)作用的問題。其它的化合物，包括皮膚中的內(nèi)源性分子，能吸收一些其波長并不一定顯著地對DNA直接產(chǎn)生損傷的紫外線，并把能量傳送給細(xì)胞靶物，包括DNA，或者產(chǎn)生損傷細(xì)胞DNA的自由基。內(nèi)源性光致敏或具光力學(xué)活性的皮膚成分(具光化學(xué)活性的色素)的例子包括但不局限于吡咯紫素、色氨酸、核黃素、以及黑色素。外源性的具光力學(xué)活性的化合物包括補(bǔ)骨脂素，它存在于一些芳香油(香檸檬油)中，實(shí)際上被用于通過加劇細(xì)胞的損傷來增強(qiáng)由陽光誘導(dǎo)的曬黑以及牛皮癬的紫外線光線治療。許多治療藥物或它們的代謝物是具光化學(xué)活性的色素，它們在患者暴露于陽光、可見光、或紫外線輻射時(shí)會產(chǎn)生有害的皮膚反應(yīng)。化妝品中的色素以及其它的光吸收成分也是具光化學(xué)活性的色素，它們可以加劇細(xì)胞的光損傷。
本發(fā)明的脫氧核苷以及相關(guān)的化合物(如脫氧核糖核苷酸、寡核苷酸、或DNA本身)對減少由激發(fā)態(tài)的光吸收分子(包括外源性的具光化學(xué)活性的色素，如遮光劑以及化妝品色素，以及來源于內(nèi)源性色素，如色氨酸、吡咯紫素、咪唑丙烯酸以及黑色素)引起的細(xì)胞損傷是有用的。
進(jìn)而，因?yàn)橛啥郊淄苌镆鸬膶NA損傷的光力學(xué)增強(qiáng)作用部分是由自由基的產(chǎn)生所介導(dǎo)的(Charlier等，Photochemistryand Photobiology，15527-536，1972)，所以本發(fā)明的化合物和組合物對于保護(hù)皮膚及粘膜層免受自由基的損傷(不管自由基，如氫氧根自由基、過氧化物自由基、或脂過氧化物自由基，是否是通過光力學(xué)現(xiàn)象開始或產(chǎn)生的)是有用的。實(shí)施例3、4、5和6提供了本發(fā)明的脫氧核苷保護(hù)DNA免受由自由基引起的損傷的證據(jù)。
本發(fā)明的脫氧核苷以及相關(guān)的化合物被有利地結(jié)合到化學(xué)遮光劑的同一配方中，這些遮光劑包括但不局限于avobenzone(t-丁基二甲氧基二苯甲酰基甲烷)、oxybenzone(二苯甲酮-3)、dioxybenzone(二苯甲酮-8)、sulisobenzone(二苯甲酮-4；2-羥基-4-甲氧基二苯甲酮-5-磺酸)、octocrylene(丙烯酸2-乙基己基-2-氰基-3，3-聯(lián)苯酯)、甲氧基肉桂酸辛酯(對-甲氧基肉桂酸2-乙基己酯)、水楊酸辛酯(水楊酸2-乙基己酯)、homosalate(水楊酸高薄荷酯)、throlamine salicylate(水楊酸三乙醇胺)、聯(lián)苯咪唑磺酸、PABA(對氨基苯甲酸)、roxadimate(4-二羥基丙基氨基苯甲酸乙酯)、lisadimate(對-氨基苯甲酸甘油酯)、Padimate O(二甲基PABA辛酯)、鄰氨基苯甲酸薄荷酯、和Parsol 1789(丁基甲氧二苯甲酰甲烷)。這類遮光劑在配方中的濃度與管理的指導(dǎo)方針以及標(biāo)準(zhǔn)使用是一致的。
類似地，在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的化合物被結(jié)合到含有具光化學(xué)活性的色素的化妝品中，以把皮膚暴露于陽光或紫外線輻射以及此類化妝品成分兩者相結(jié)合的有害結(jié)果減到最低。
可選地，可把本發(fā)明的化合物以分開的組合物，如噴霧劑、洗劑、輥動(dòng)劑(roll-on*)、桿劑、或凝膠，在施用遮光劑產(chǎn)品或化妝品之前或之后施用到皮膚上。
甲基黃嘌呤甲基黃嘌呤，如咖啡因、茶堿、氨基茶堿或異丁基甲基黃嘌呤，已經(jīng)被提議作為“無陽光”曬黑劑，它通過調(diào)控黑素產(chǎn)生的生物化學(xué)途徑中的活性而起作用。它們被提議的機(jī)制涉及環(huán)腺苷單磷酸磷酸二酯酶的抑制作用，從而增強(qiáng)了環(huán)腺苷單磷酸在途徑調(diào)控的黑素產(chǎn)生中的生物活性。甲基黃嘌呤可以增強(qiáng)黑素細(xì)胞中黑色素的生產(chǎn)，它可以單獨(dú)起作用，或者與曬黑刺激劑，如紫外線或陽光照射，結(jié)合起作用。然而，已知甲基黃嘌呤也加劇由紫外線輻射造成的DNA損傷，這導(dǎo)致DNA修復(fù)的損傷或細(xì)胞周期控制機(jī)制的崩潰(Kastan等，CancerResearch，516304-6311，1991)。
本發(fā)明的化合物可被用于減少甲基黃嘌呤對因?yàn)槠つw暴露于紫外線或陽光輻射而造成的DNA損傷的有害影響。本發(fā)明的化合物因此改善了含有甲基黃嘌呤作為活性成分的皮膚曬黑產(chǎn)品的安全性。本發(fā)明的化合物可以分開施用，或者也可以與甲基黃嘌呤配方結(jié)合施用。
脫落劑含有α-羥基酸(AHA)，如乳酸、羥乙酸、檸檬酸、或蘋果酸，的化妝品被廣泛使用。它們具有濕潤和脫落的性質(zhì)。含有高濃度AHA的產(chǎn)品也被用于產(chǎn)生更激烈的“脫皮劑”，主要通過化學(xué)燒傷把表皮的外層除去。生長在里面的新的上皮通常比被除去的皮膚層更柔軟更光滑。β-羥基酸，如水楊酸，也是有用的脫落劑。視黃酸也被用于通過它的脫落作用以及通過激活上皮細(xì)胞翻覆和上皮代謝變更來實(shí)現(xiàn)類似的目的。
據(jù)報(bào)道，脫落劑可以減少角質(zhì)層阻擋陽光的能力，并且增加皮膚對其它試劑的通透性。因此，需要把紫外線保護(hù)和AHA結(jié)合使用。然而，由于AHA造成皮膚通透性的增強(qiáng)，所以在選擇防陽光保護(hù)劑時(shí)要謹(jǐn)慎，因?yàn)楸晃盏恼诠鈩NA損傷產(chǎn)生光力學(xué)增強(qiáng)作用。本發(fā)明的化合物可以有效地減少使用脫落劑的人暴露于陽光或紫外線輻射或其它的環(huán)境誘變劑，包括但不局限于α-羥基酸、β-羥基酸以及retinoids，之后的有害后果。
非類固醇類抗炎劑非類固醇抗炎劑通常被用于治療關(guān)節(jié)炎和其它的抗炎劑。另外，這一類中的一些成員，如二氯芬酸(乙酸2，6-二氯-苯基-氨基-苯酯)正在被研究用作減少皮膚光損傷的一些方面的局部用藥劑。
這一類藥物的一個(gè)原型成員，對乙酰氨基酚(acetaminophen)，通過抑制核糖核苷酸還原酶(它把核糖核苷二磷酸轉(zhuǎn)換為脫氧核苷二磷酸)來抑制由紫外線輻射造成的損傷后的DNA的修復(fù)(Hongslo等，Mutagenesis，8423-429，1993)。通過給接受非類固醇類抗炎劑口服或局部治療的患者的皮膚，特別是給總體上暴露于陽光的皮膚部位，提供脫氧核苷，本發(fā)明的組合物克服了與這類廣泛使用的藥物相關(guān)的有害后果。
鳥氨酸脫羧酶抑制劑皮膚經(jīng)紫外線照射的一個(gè)后果是細(xì)胞增殖率以及細(xì)胞增殖所需的酶(其中一種酶是鳥氨酸脫羧酶(ODC))的活性的提高。二氟甲基鳥氨酸(DFMO)是ODC的一種抑制劑，ODC是多胺合成所必需的，而多胺則是DNA復(fù)制所必需的。DFMO對減少皮膚癌以及癌前光化損傷是有用的。在暴露于陽光或紫外線輻射之后抑制細(xì)胞的周期可以給細(xì)胞更多的時(shí)間在誘變性損傷被細(xì)胞分裂固定之前修復(fù)DNA，但是細(xì)胞周期停滯同時(shí)也通常導(dǎo)致脫氧核苷水平的降低，而脫氧核苷卻是DNA損傷的修復(fù)所必需的。因此，脫氧核苷與DFMO以及其它的抗增殖劑(它們通過不直接涉及脫氧核苷混合物的誘導(dǎo)性耗損或失衡的機(jī)制起作用)結(jié)合使用是有用的?？蛇x地，本發(fā)明的脫氧核苷可以被結(jié)合到DFMO(或其它的通過不同于DNA前體合成損傷的途徑起作用的皮膚細(xì)胞增殖的抑制劑)的同一配方中。
在暴露于內(nèi)源性氧化氮的過程中對皮膚進(jìn)行治療氧化氮(NO)是一種具生物活性的調(diào)節(jié)物質(zhì)，由內(nèi)皮細(xì)胞、巨噬細(xì)胞以及其它類型的細(xì)胞分泌，特別是在發(fā)生炎癥時(shí)。氧化氮同時(shí)還是與暴露于紫外線相關(guān)聯(lián)的紅斑的一種重要的調(diào)節(jié)物質(zhì)。NO合成酶的抑制劑在暴露之后減少了皮膚血流量的增加(Deliconstantinos等，J Cardiovasc Pharmacol 20 Suppl 12S63-5，1992；Deliconstantinos等，Br J Pharmacol 114(6)1257-65，1995；Warren，F(xiàn)ASEB Journal，8(2)247-51，1995)。
氧化氮是核糖核苷酸還原酶(RR)的一種強(qiáng)有力的抑制劑。RR是脫氧核糖核苷酸重新合成的一種關(guān)鍵酶(Kwon等，J Exp Med174(4)761-7，1991；Lepoivre等，J Biol Chem 269(34)21891-7，1994)。氧化氮的抗增殖效果部分導(dǎo)致核糖核苷酸還原酶的抑制。這在對感染性微生物或腫瘤作出炎性反應(yīng)中是有利的，但對需要DNA修復(fù)能力的細(xì)胞，如暴露于由暴露于紫外線所引出的炎性調(diào)節(jié)物質(zhì)的皮膚，是有害的。從巨噬細(xì)胞釋放的NO的數(shù)量足以抑制核糖核苷酸還原酶，從而誘導(dǎo)了附近細(xì)胞的白細(xì)胞郁積。
最熟知的RR的抑制劑是羥基脲(HU)，它與N-ω-羥基-1-精氨酸(一種NO生產(chǎn)過程中的生理學(xué)中間物)的結(jié)構(gòu)是類似的。羥基脲可以充當(dāng)類似于NO的亞硝基化反應(yīng)物(LePoivre等，J Biol Chem269(34)21891-7，1994)。N0和羥基脲都通過淬滅一個(gè)在酶活性位點(diǎn)的酪氨?；鶃硪种芌R。
這里首次公開NO通過與外源性脫氧核苷可逆性機(jī)制使細(xì)胞對由紫外線誘導(dǎo)的DNA損傷敏感的發(fā)現(xiàn)(見實(shí)施例8)。另外，在沒有暴露于紫外線的情況下，NO本身導(dǎo)致DNA的損傷，這種損傷可以通過本發(fā)明的化合物來防止或逆反(實(shí)施例8)。
對紫外線暴露的發(fā)炎性反應(yīng)(這在與紫外線相關(guān)的免疫抑制過程中也起著重要的作用)，通過由NO抑制核糖核苷酸還原酶，加劇了紫外線暴露的誘變性和細(xì)胞毒性作用。本發(fā)明提供了一種用于補(bǔ)償NO這種有害作用的方法。外源性的脫氧核苷是在核糖核苷酸還原酶的下游進(jìn)入DNA代謝的，它補(bǔ)償了減少了的RR的活性。雖然NO在需要脫氧核糖核苷酸的細(xì)胞中是有害的，但是它在暴露于陽光的皮膚中卻有一些有利的作用。NO生產(chǎn)的抑制劑也削弱了被暴露于過量紫外線輻射(即，紫外線的劑量產(chǎn)生了足夠嚴(yán)重的曬黑以致傷口康復(fù)過程被啟動(dòng))所損傷的皮膚的康復(fù)能力(Benrath等，Neurosci Lett，1995)。因此，NO對組織的修復(fù)是有用的(可能通過改善血流，也可能通過刺激從巨噬細(xì)胞或角質(zhì)形成細(xì)胞釋放生長因子)，但它也可能會同時(shí)通過減弱細(xì)胞生產(chǎn)用于DNA修復(fù)的脫氧核糖核苷酸的能力加劇與紫外線相關(guān)的DNA的損傷。
由NO介導(dǎo)的RR的抑制提供了一種解釋了在重復(fù)暴露于強(qiáng)的太陽光的過程中，DNA損傷發(fā)生不成比例的增加，而暴露于陽光的其它癥狀卻沒有相應(yīng)地增加的機(jī)制。局部施用本發(fā)明的化合物和組合物提供了一種改善此種形式的有條件的過敏癥的方法。
NO參與了皮膚的發(fā)炎性反應(yīng)，這種反應(yīng)并不一定涉及暴露于陽光或紫外線輻射。NO是從被激活的巨噬細(xì)胞中釋放的，它是大多數(shù)發(fā)炎性反應(yīng)的一個(gè)成分。本發(fā)明的化合物和方法提供了一種克服NO在發(fā)炎性皮膚疾病(包括但不局限于牛皮癬、皮炎、過敏性皮炎、接觸性皮炎(如對有毒的常春藤和有毒的櫟木的反應(yīng))、濕疹以及痤瘡)中的一些有害作用的方法。在這些疾病中，NO通過抑制脫氧核糖核苷酸的合成使一些類型的細(xì)胞對由紫外線誘導(dǎo)的DNA損傷產(chǎn)生敏感性。本發(fā)明的化合物和組合物減弱了紫外線暴露和發(fā)炎性皮膚疾病相結(jié)合的這種有害后果。由于NO和引起DNA損傷的其它的內(nèi)源性氧化劑甚至在沒有顯著地暴露于紫外線輻射的時(shí)候仍存在于發(fā)炎性皮膚疾病(如牛皮癬或皮炎)中，所以本發(fā)明的脫氧核苷對保護(hù)在發(fā)炎性疾病中的皮膚細(xì)胞的遺傳完整性是有用的。本發(fā)明的化合物防止或修復(fù)了單純由NO引起的(未暴露于紫外線輻射)DNA損傷(實(shí)施例8)。
脫氧核苷同時(shí)對治療發(fā)炎性皮膚和粘膜疾病是有用的，部分通過為脫氧核苷還原酶提供更高濃度的脫氧核苷酸底物。核糖核苷(或核糖核苷的酯)在本發(fā)明中的用法和脫氧核苷的是一樣的。優(yōu)選地，在局部施用的組合物中，脫氧核苷結(jié)合有核糖核苷(或核糖核苷的酯)，后者的濃度為0.1至20mg/ml，優(yōu)選地1至5mg/ml。胸苷對發(fā)炎性疾病的治療是特別有用的。
用羥基脲抑制DNA前體的合成導(dǎo)致水解性的溶酶體酶活性的增強(qiáng)和泄漏，溶酶體酶參與細(xì)胞外損傷，如在發(fā)炎性皮膚疾病或光損傷中(Malec等，Chem.Biol．Interact.，57315-324，1986)。本發(fā)明的化合物防止了發(fā)炎性組織損傷的這一成分，特別是當(dāng)DNA前體合成的這種抑制是由內(nèi)源性產(chǎn)生的NO(它的功能與羥基脲是類似的)介導(dǎo)的時(shí)候。
對基因組的另一個(gè)損傷是細(xì)胞暴露于紫外線輻射導(dǎo)致酶(包括脫氧核糖核酸酶)從溶酶體中釋放出來。存在于溶酶體中的脫氧核糖核酸酶Ⅱ是一種核酸內(nèi)切酶，它在溶酶體崩潰之后使核DNA的鏈斷裂。在一般的發(fā)炎性疾病中，酶也會從溶酶體中泄漏出來。本發(fā)明的化合物和組合物對在發(fā)炎性皮膚疾病中，由從溶酶體釋放的脫氧核糖核酸酶引起染色體損傷之后，以及在皮膚暴露于陽光或紫外線輻射之后，保存基因組的完整性是有用的。
通過限制皮炎癥的一些有害的后果，本發(fā)明的化合物及組合物可被用作抗炎劑，而且可選地與其它的局部或全身性抗炎劑，包括但不局限于皮質(zhì)類固醇樣氫化可的松及其同類物，結(jié)合施用(作為分開的組合物施用，或優(yōu)選地，制備于同一配方中)。
類似地，本發(fā)明所包括的化合物及組合物對治療粘膜炎癥疾病，包括但不局限于炎性腸病、潰瘍性結(jié)腸炎、局部性腸炎、或胃腸道任何一個(gè)地方的粘膜炎，是有用的。優(yōu)選的治療方式是局部施用，在此種情形中通過灌腸劑或栓劑，為此把本發(fā)明的脫氧核苷以及其它的化合物摻入到合適的賦形劑中。
暴露于電離輻射的皮膚和粘膜組織的治療接受電離(或X射線或γ射線)輻射治療(如用于治療癌癥)的患者，其覆蓋內(nèi)在腫瘤的皮膚會遭受損傷，導(dǎo)致脫落和康復(fù)不良。本發(fā)明的化合物和組合物對治療由故意的或意外的電離輻射暴露造成的皮膚和粘膜表面的損傷是有用的。用于治療皮膚時(shí)，本發(fā)明的組合物在輻射治療之前或之后局部施用。用于治療如嘴、胃腸道、尿道或陰道中的粘膜表面時(shí)，本發(fā)明的合適的組合物也是局部進(jìn)行施用。用于治療粘膜表面的合適的組合物包括凝膠、洗液、軟膏、栓劑、口服膠囊、丸劑或糖衣丸或溶液。
E．本發(fā)明的化合物和組合物的施用方法及其配方本發(fā)明的化合物被配制于配藥可接受的賦形劑中，賦形劑把其濃度適合實(shí)現(xiàn)減少突變頻率和致癌機(jī)會目的的化合物遞送到需要的皮膚中的細(xì)胞群落。
本發(fā)明的組合物是在暴露于陽光或其它誘變劑之前、期間、或之后施用的。把含有脫氧核苷(0.1至10mg/ml，優(yōu)選地1至5mg/ml)的洗液或水凝膠以薄膜的形式施用于皮膚。組合物應(yīng)該在暴露于損傷劑量的陽光或紫外線輻射后的大約48或72小時(shí)之內(nèi)施用以便在輻射后第一次細(xì)胞分裂之前支持DNA的修復(fù)，但是在暴露于強(qiáng)太陽光之前、期間、或之后12小時(shí)內(nèi)施用是優(yōu)選的。在暴露于輻射或其它誘變劑之前施用本發(fā)明的組合物也是有效的，只要如此提供的脫氧核苷或其組成代謝物在暴露于誘變劑時(shí)存在于需要它們有益作用的細(xì)胞中。優(yōu)選地，本發(fā)明的組合物在皮膚暴露于陽光或其它誘變劑前大約12小時(shí)之內(nèi)施用。
本發(fā)明的組合物優(yōu)選地是作為日用皮膚治療劑進(jìn)行施用，每日施用一至多次，特別是施用于身體暴露于陽光的部位或者是炎性皮膚疾病的發(fā)生部位。暴露于陽光輻射導(dǎo)致皮膚光損傷和光老化通常是一個(gè)積累的過程，包括反復(fù)暴露于陽光，甚至是每天，持續(xù)一年的時(shí)間。在本發(fā)明中，用本發(fā)明的化合物和組合物來防止或治療皮膚的光損傷包括對由過去的陽光暴露所造成的現(xiàn)有的皮膚損傷進(jìn)行治療，以及對現(xiàn)在的或?qū)淼挠杀┞队陉柟饣蚱渌T變劑所造成的損傷進(jìn)行防止，或減弱其嚴(yán)重程度。
通過經(jīng)由細(xì)胞分裂來修復(fù)進(jìn)行中的DNA的分子損傷或在基因組損傷永久性確定之前對其進(jìn)行修復(fù)，或者通過經(jīng)由能量清除來防止最初的損傷，本發(fā)明的組合物防止或延緩了輻射、自由基、或化學(xué)誘變劑的有害后果，如很容易用肉眼看到的皮膚損傷、光老化、光化角化癥、以及皮膚癌，的發(fā)生。因此，本發(fā)明的組合物和方法減少了皮膚光損傷表征的發(fā)生率，特別是當(dāng)有規(guī)律地施用，如每日施用的時(shí)候，或尤其在暴露于陽光輻射之前、期間、或之后施用的時(shí)候。
本發(fā)明的組合物同時(shí)對促進(jìn)已有的由陽光誘導(dǎo)的和其它的發(fā)炎性和過度增殖性的皮膚損傷，如光化角化癥、接觸性皮炎、牛皮癬、濕疹、或痤瘡、或皮膚癌，如黑素瘤、基底細(xì)胞癌、或鱗狀細(xì)胞癌的康復(fù)是有用的。在此類疾病中，把局部性使用的凝膠、乳霜、軟膏或洗液根據(jù)需要每日一至兩次施用于受影響的區(qū)域。
在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，在施用遮光劑之前把一種含有脫氧核苷的組合物施用于皮膚，由此來替代含有傳統(tǒng)遮光劑和脫氧核苷或本發(fā)明相關(guān)的化合物的配方的使用。
當(dāng)治療結(jié)腸粘膜炎癥，如炎性腸病，時(shí)，把本發(fā)明的組合物作為一種栓劑或灌腸劑施用，根據(jù)臨床需要大約每日一次。體積為10至500ml的含有脫氧核苷的合適的灌腸劑組合物適用于治療炎性腸病，如潰瘍性結(jié)腸炎或局部性腸炎。當(dāng)治療胃腸道其它部位，如嘴，中的粘膜炎時(shí)，使用該種給藥途徑的標(biāo)準(zhǔn)的配藥可接受的賦形劑，如漱口液或粘性水狀凝膠。
F．本發(fā)明化合物的合成脫氧核苷是DNA的成分，它存在于所有的生物體中，因此原理上可以從各種不同的來源中提取。實(shí)際上，目前最方便的生物來源是魚精，它含有相當(dāng)高濃度的DNA。把魚精囊勻漿，把其中所含的DNA部分純化并用脫氧核糖核酸酶和磷酸酶處理以把其降解到核苷的水平，隨后再把其用層析或重結(jié)晶進(jìn)行純化。
由于在本發(fā)明的一些實(shí)施方案中使用的是脫氧核苷的混合物，所以把經(jīng)過純化的脫氧核苷按合適的比例重新進(jìn)行組合。可選地，在把脫氧核苷從其它的魚精成分(或，當(dāng)DNA是源于其它的生物來源時(shí)，是其它的污染物)中純化出來的過程中并不把各種脫氧核苷相互分開；如果需要，可以把適量的單種脫氧核苷添加到這種混合物中，以調(diào)節(jié)脫氧核苷的相對比例。
脫氧核苷也可以從更簡單的前體進(jìn)行化學(xué)合成。
脫氧核苷的?；苌铮缑绹鴮＠暾埿蛱?66，379中所公開的，在以下是有用的1).通過皮膚中非特異性的酯酶逐漸的去?；饔迷丛床粩嗟靥峁┟撗鹾塑眨约?)。改善通過疏水性生物膜或細(xì)胞外介質(zhì)，如表皮角質(zhì)層的胞間脂質(zhì)的穿透性。
對于熟悉本領(lǐng)域的人士，顯然可以用其它的合成方法來制備本發(fā)明的化合物。
* * *以下實(shí)施例是解釋性的，并不局限本發(fā)明的方法和組合物。其它對各種不同的在臨床治療中正常都會遇到的條件和參數(shù)所進(jìn)行的合適的修改或改變(它們對于本領(lǐng)域的技術(shù)人員是顯而易見的)都?xì)w屬于本發(fā)明的精神和范圍之內(nèi)。
實(shí)施例1在暴露于UVB之后輻射后局部施用脫氧核苷改善了小鼠皮膚DNA的修復(fù)用〃Big Blue〃轉(zhuǎn)基因小鼠試驗(yàn)系統(tǒng)來確定皮膚對紫外線輻射產(chǎn)生應(yīng)答而發(fā)生的突變。這些小鼠在每個(gè)細(xì)胞中帶有約40個(gè)拷貝的λ噬茵體穿梭載體，其中每個(gè)含有一個(gè)作為突變目標(biāo)的lacⅠ基因，以及l(fā)acⅠ增強(qiáng)子、lac啟動(dòng)子和αlacZ報(bào)告基因。
把小鼠暴露于紫外線輻射并用本發(fā)明的化合物或賦形劑進(jìn)行治療，然后提取皮膚樣品中的基因組DNA，穿梭載體被包裹在λ病毒的頭部。把含有穿梭載體的λ噬茵體病毒接種在帶有顏色試劑X-Gal的大腸桿菌平板中。X-Gal在半乳糖苷酶(αlacZ基因的產(chǎn)物)的酶學(xué)改變時(shí)變?yōu)樗{(lán)色。含有未突變的lacⅠ基因的病毒產(chǎn)生白色的噬茵斑，lacⅠ基因的突變產(chǎn)生藍(lán)色的噬茵斑。通過計(jì)算白色和藍(lán)色噬茵斑的相對數(shù)目來確定突變的頻率。
把Stratagene BigBlueTM轉(zhuǎn)基因小鼠(每組7只)剃毛，隔天用UVB進(jìn)行照射(313nm，85％的能量)，1．25KJ/m2。
在照射30分鐘以后局部施用脫氧核苷(“dNsides”，脫氧腺苷、脫氧胞苷、脫氧鳥苷、以及胸苷每種各4mg/ml)或賦形劑(丙二醇)，重復(fù)5天。
在照射后的第5天處死小鼠。從被照射的背部以及未被照射的腹部的皮膚提取DNA，把其包裹在λ噬茵體中并接種在含有X-Gal的大腸桿菌平板中。突變的茵落是藍(lán)色的。在每一組中計(jì)數(shù)到＞200，000個(gè)茵落。
表1局部的脫氧核苷減少了被紫外線照射的皮膚的突變頻率自發(fā)突變頻率(未經(jīng)照射的皮膚)平均 4.5×10-5經(jīng)UVB照射的皮膚的突變頻率總體 因UV而產(chǎn)生的增量對照 34.9×10-530.4×10-5脫氧核苷 7.8×10-53.3×10-5如表1中所示，在照射后用脫氧核苷進(jìn)行局部治療減少了由UV-B輻射誘導(dǎo)的突變的發(fā)生率，在本實(shí)驗(yàn)中減少近10倍(30.4×10-5比3.3×10-5)實(shí)施例2在照射后給v-Ha-ras轉(zhuǎn)基因TG.AC小鼠局部施用脫氧核苷防止由紫外線誘導(dǎo)的乳頭狀瘤的發(fā)展實(shí)施例1證明了在照射后進(jìn)行局部治療可以通過支持和改善DNA的修復(fù)過程來減小”Big Blue”轉(zhuǎn)基因小鼠的一個(gè)報(bào)告基因由紫外線誘導(dǎo)的突變的頻率。對類似于致癌物的紫外線輻射產(chǎn)生應(yīng)答而發(fā)生突變的頻率的減少的一個(gè)后果應(yīng)該是由紫外線誘導(dǎo)的腫瘤發(fā)生的減少。
已經(jīng)發(fā)展了一種對致癌物極度敏感的轉(zhuǎn)基因小鼠系。這使得可以對各種不同的化學(xué)劑和其它的治療的致癌可能性進(jìn)行快速確定。需要把正常的小鼠重復(fù)暴露于紫外線輻射好幾周才能使其可靠地發(fā)展皮膚瘤。不同的是，vHa-ras TG.AC轉(zhuǎn)基因小鼠在單次或少量幾次暴露于紫外線輻射之后即可迅速發(fā)展腫瘤。
在9只暴露于UV-B輻射(0.3-1.25KJ/m2x3 q2d)隨后在輻射后用賦形劑(丙二醇)治療的小鼠中，在暴露的四周后發(fā)現(xiàn)了總共35個(gè)乳頭狀瘤。
在7只暴露于同樣劑量的UV-B輻射并在輻射后再接受脫氧核苷(每種主要的脫氧核苷4mg/ml，溶于丙二醇中)治療的小鼠中，僅發(fā)現(xiàn)一個(gè)乳頭狀瘤(表2)。
表2局部脫氧核苷減少了UV誘導(dǎo)的腫瘤發(fā)生對照 3.89個(gè)腫瘤/小鼠經(jīng)脫氧核苷治療0.14個(gè)腫瘤/小鼠脫氧核苷對減少由紫外線誘導(dǎo)的腫瘤發(fā)生的有利影響勢必是因?yàn)榧?xì)胞修復(fù)或細(xì)胞校正得到了改善，或者是因?yàn)槟[瘤的促進(jìn)作用被抑制，而不是防止了初始損傷，因?yàn)槊撗鹾塑帐窃谡丈渲蟛攀┯玫?。這一觀察顯示在暴露于UV-B輻射之后(或假定地在暴露期間)用脫氧核苷進(jìn)行治療對腫瘤發(fā)生有重要的抑制作用，這是基因組保真度的維持得到改善的結(jié)果)。
由報(bào)道過的脫氧核苷在加速傷口愈合的效力(美國專利5，246，708)來看，局部施用脫氧核苷(甚至是在照射之后施用)的抗腫瘤發(fā)生作用是特別令人吃驚的，因?yàn)橐阎募铀賯谟系钠渌纳L因子，如血小板衍生生長因子(PDGF)或轉(zhuǎn)化生長因子β(TGF-β)，充當(dāng)著腫瘤增強(qiáng)因子的作用。
當(dāng)在把細(xì)胞暴露于紫外線或電離輻射之后施用脫氧核苷時(shí)，脫氧核苷對培養(yǎng)基中細(xì)胞的生存有有利的影響，由這一點(diǎn)來看，本實(shí)驗(yàn)中的脫氧核苷的抗腫瘤發(fā)生作用也是出乎意料的。防止受損細(xì)胞的凋亡預(yù)期應(yīng)該增加腫瘤發(fā)展的可能性，如在具有缺陷性p53相關(guān)機(jī)制的動(dòng)物中所發(fā)生的。
實(shí)施例3低濃度的二苯甲酮-3使由紫外線誘導(dǎo)的DNA損傷惡化把T25細(xì)頸瓶中的匯合人成纖維細(xì)胞用HBSS(Hank’s BalancedSalt Solution，漢克氏平衡鹽溶液)洗3次并與賦形劑或各種不同濃度的二苯甲酮-3(OB)一起保溫2小時(shí)。抽出培養(yǎng)基并用一層1mm厚的HBSS覆蓋細(xì)胞，從上面照射UV-B(50J/m2)。抽出培養(yǎng)基并把細(xì)胞用2mM的羥基脲保溫3小時(shí)。再抽出培養(yǎng)基，用0.25％胰蛋白酶/EDTA對細(xì)胞進(jìn)行胰酶消化。把細(xì)胞在4℃離心，用50微升HBSS重懸，用200微升1N NaOH在室溫下保溫15分鐘。用堿性蔗糖梯度離心來評估DNA損傷(單鏈斷裂)。在蔗糖梯度中“擬核位置”與DNA單鏈斷裂的數(shù)目是成比例的。
沒有二苯甲酮-3的紫外線輻射導(dǎo)致擬核位置比基線增加3-4倍(表3)。二苯甲酮-3在所測驗(yàn)的較高濃度，20及200微摩爾，保護(hù)細(xì)胞DNA免受紫外線輻射的損傷，因?yàn)檫@些組別的擬核位置與未經(jīng)照射的細(xì)胞的接近。然而，暴露于2微摩爾OB的細(xì)胞比未經(jīng)OB照射的細(xì)胞損傷還要大，其擬核位置的數(shù)值比未經(jīng)照射的細(xì)胞大10倍。因此，低濃度的二苯甲酮-3強(qiáng)烈增加DNA的損傷，而在較高濃度，它則對細(xì)胞有保護(hù)作用。在實(shí)踐中，即使是在恰當(dāng)使用遮光劑的情況下，總是有一些皮膚部位暴露于低的、潛在有害的遮光劑濃度下，或者是在施用了遮光劑貼片的邊緣，或者是所施用的遮光劑層在經(jīng)過一天之后已經(jīng)消耗了。
表3低濃度的二苯甲酮-3增強(qiáng)由紫外線誘導(dǎo)的DNA損傷組別擬核的位置(mm)無紫外線 3紫外線50J/M211紫外線50J/M2+2μM OB 32紫外線50J/M2+20μM OB4紫外線50J/M2+200μM OB 3實(shí)施例4脫氧核苷減少由二苯甲酮-3引起的DNA損傷的光力學(xué)增強(qiáng)作用把匯合的人成纖維細(xì)胞暴露于2微摩爾的二苯甲酮-3(OB)中，如實(shí)施例3中，然后再暴露于UV-B輻射(50J/m2)中。同時(shí)也把不同瓶的細(xì)胞暴露于濃度遞增的脫氧核苷中。在一個(gè)蔗糖密度梯度中對細(xì)胞進(jìn)行處理以確定擬核(nucleoid)的位置，這是DNA單鏈斷裂的一種測量方法。
如表4中所示，脫氧核苷使由UV輻射加2μMOB誘導(dǎo)的DNA單鏈斷裂的產(chǎn)生量發(fā)生劑量依賴性的減少。濃度為2μM的脫氧核苷稍微減少DNA的損傷。當(dāng)脫氧核苷的濃度為200μM時(shí)，它幾乎完全消除了DNA的損傷。
表4脫氧核苷減少了由紫外線加二苯甲酮-3造成的DNA損傷的光力學(xué)增強(qiáng)作用組別 擬核的位置(mm)紫外線+2μM OB 56紫外線+2μM OB+2μM脫氧核苷47紫外線+2μM OB+20μM脫氧核苷 23紫外線+2μM OB+100μM脫氧核苷 22紫外線+2μM OB+200μM脫氧核苷 7實(shí)施例5單個(gè)的與組合的脫氧核苷對由光力學(xué)增強(qiáng)的、由紫外線誘導(dǎo)的DNA損傷的影響的比較人成纖維細(xì)胞如實(shí)施例4中所述進(jìn)行制備和處理。確定了單一的脫氧核苷對由光力學(xué)增強(qiáng)的DNA損傷(2μM二苯甲酮-3)的影響。在20μM的濃度對單一的脫氧核苷進(jìn)行試驗(yàn)，同時(shí)也對含有脫氧胞苷、脫氧鳥苷、脫氧腺苷、以及胸苷所有四種脫氧核苷每種各20μM的混合物進(jìn)行試驗(yàn)。
表5單個(gè)的與組合的脫氧核苷對紫外線誘導(dǎo)的DNA損傷的影響的比較組別 DAN鏈斷裂斷裂部位/47 MDa)對照(無紫外線).0紫外線+賦形劑 .325紫外線+胸苷 .13紫外線+脫氧胞苷 .12紫外線+脫氧腺苷 .17紫外線+脫氧鳥苷 .17紫外線+脫氧核苷(每種20μM).01如表5中所示，每種單一的脫氧核苷都可減少DNA損傷；所有四種脫氧核苷相結(jié)合比任何一種單一化合物都更有效。
實(shí)施例6由遮光劑誘導(dǎo)的紫外線誘導(dǎo)的腫瘤發(fā)生的惡化以及用脫氧核苷對這種惡化的預(yù)防把一圓貼片的商購遮光劑(Coppertone SPF 8，含有二苯甲酮-3)在暴露于125J/m2的UV-B輻射之前施用于TG.AC小鼠的背部。
在第10天，在于輻射時(shí)覆蓋有遮光劑的區(qū)域的圓形邊緣處周圍發(fā)現(xiàn)每只小鼠有8個(gè)乳頭狀瘤。未經(jīng)遮光劑處理的小鼠每只出現(xiàn)3個(gè)腫瘤。在施用了添加有脫氧核苷的同種商購遮光劑然后暴露于紫外線照射的小鼠中沒有產(chǎn)生乳頭狀瘤(表6)。
表6脫氧核苷減少了經(jīng)紫外線及遮光劑處理的小鼠的腫瘤發(fā)生紫外線輻射 3個(gè)腫瘤/小鼠遮光劑+紫外線輻射8個(gè)腫瘤/小鼠含脫氧核苷的遮光劑+紫外線輻射0個(gè)腫瘤/小鼠因此，在施用了遮光劑的貼片的邊緣處遮光劑的濃度迅速減少到零，在這些地方導(dǎo)致腫瘤發(fā)生的紫外線損傷實(shí)際上是被遮光劑增強(qiáng)，而不是減少了，這導(dǎo)致所形成的惡化前的乳頭狀瘤比根本不施用遮光劑的皮膚的還要多。
在商售遮光劑中添加脫氧核苷消除了遮光劑對腫瘤發(fā)生的有害影響。
實(shí)施例7單個(gè)的與組合的脫氧核苷對由紫外線誘導(dǎo)的腫瘤發(fā)生的影響的比較把30只12周齡的v-Ha-ras TG.AC小鼠剃毛并暴露于紫外線輻射中，在第0、6、8、11天分別照射1．25kJ/m2，劑量率為12.5W/m2。
把小鼠每5只分為一組并在照射30分鐘后開始用以下進(jìn)行處理1．賦形劑(丙二醇)2．dNsides-脫氧核苷(脫氧胞苷、脫氧鳥苷、脫氧腺苷、以及胸苷每種各4mg/ml)3．dC-脫氧胞苷(4mg/ml)4．dG-脫氧鳥苷(4mg/ml)5．dA-脫氧腺苷(4mg/ml)6．dT-胸苷(4mg/ml)觀察動(dòng)物8周，在8周的時(shí)間內(nèi)觀察到乳頭狀瘤的發(fā)展表7單個(gè)的與組合的脫氧核苷對紫外線誘導(dǎo)的腫瘤發(fā)生的影響的比較在第8周末了每只小鼠上的乳頭狀瘤數(shù)目賦形劑 1．8脫氧核苷0.0dC 0.25dG 1.0dA 0.67dT 1.6如表7中所示，四種脫氧核苷的混合物就防止腫瘤發(fā)展而言，提供有最佳的活性。脫氧胞苷也起保護(hù)作用。脫氧腺苷和脫氧鳥苷保護(hù)作用較差但是還有活性。胸苷沒有顯著的保護(hù)作用。
實(shí)施例8氧化氮通過一種脫氧核苷可逆的機(jī)制導(dǎo)致并增強(qiáng)DNA的損傷氧化氮是由紫外線誘導(dǎo)的紅斑的一個(gè)中介體，它也存在于炎性皮膚疾病中。氧化氮是誘變性的，可能會使由紫外線誘導(dǎo)的DNA損傷惡化，這部分是通過抑制核糖核苷酸還原酶(即負(fù)責(zé)把核糖核苷酸轉(zhuǎn)換為脫氧核糖核苷酸的酶)來實(shí)現(xiàn)的。
把人黑素細(xì)胞暴露到160μM DETA NONOate(Alexis Corporation，Cat#430-014-M005，一種當(dāng)暴露于水中時(shí)即自發(fā)產(chǎn)生氧化氮的試劑)中。把細(xì)胞暴露于單一的氧化氮、或氧化氮加劑量增加的紫外線輻射(50及300J/m2)中。同時(shí)也把多組細(xì)胞在暴露于氧化氮或氧化氮+紫外線輻射之前，或之前及之后，暴露于本發(fā)明的脫氧核苷中；對照組除了不加脫氧核苷之外，所受的處理都是一樣的。
把DNA從細(xì)胞中提取出來并用脈沖電場凝膠電泳來確定其DNA鏈的斷裂情況。
如表8中所示，單一的氧化氮造成顯著的DNA鏈的斷裂。當(dāng)把其暴露于紫外線輻射時(shí)，斷裂進(jìn)一步增加。本發(fā)明的脫氧核苷強(qiáng)烈地減少由氧化氮造成的DNA鏈的斷裂的發(fā)生率，以及那些由氧化氮和紫外線輻射結(jié)合所造成的斷裂。
表8脫氧核苷減少了由氧化氮誘導(dǎo)的DNA損傷組別 DNA鏈斷裂斷裂/105MDa對照 0.00氧化氮 0.13氧化氮+紫外線50J/m20.21氧化氮+紫外線300J/m20.51氧化氮+脫氧核苷在紫外線輻射之前及之后0.00氧化氮+紫外線50J/m2+脫氧核苷在紫外線輻射之前/之后 0.03氧化氮+紫外線300J/m2+脫氧核苷在紫外線輻射之前/之后0.03氧化氮+脫氧核苷紫外線輻射之后0.06氧化氮+紫外線50 J/m2+脫氧核苷在紫外線輻射之后 0.06氧化氮+紫外線300J/m2+脫氧核苷在紫外線輻射之后 0.03實(shí)施例9局部用脫氧核苷對現(xiàn)有的光化角化癥的治療光化角化癥(AK)是真皮內(nèi)瘤的一種形式，它是一種由陽光誘導(dǎo)的損傷，可發(fā)展變成鱗狀細(xì)胞癌。有一個(gè)46歲的婦女在其前額淺色的皮膚上有一個(gè)玫瑰色的、表面粗糙的持久的損傷，尺寸有5×10mm。這一損傷被一個(gè)廣泛認(rèn)可的皮膚科醫(yī)生診斷為光化角化癥。這個(gè)醫(yī)生給她開5-氟尿嘧啶用于治療。由于5-氟尿嘧啶是一種光化角質(zhì)癥的標(biāo)準(zhǔn)治療劑，會產(chǎn)生疼痛以及難看的皮膚腐蝕，這種腐蝕要花幾周的時(shí)間才能痊愈而且對基因組還有潛在的毒性，所以光化角質(zhì)癥的首選的治療是局部施用脫氧核苷(脫氧胞苷、脫氧鳥苷、脫氧腺苷、以及胸苷每種各4mg/ml)，采用水凝膠配方，每天在損傷處施用兩次，每次0.1ml。在10天內(nèi)，可以看到在她前額的光化角質(zhì)癥開始退縮，而且3周后，再也看不到光化角質(zhì)癥的痕跡了，而且在治療期間或之后都沒有任何疤痕或不適。這樣就不需要用5-氟尿嘧啶或其它的痛苦的或侵略性的措施，如切除或用液氮冷凍，來進(jìn)行治療了。在六個(gè)多月以后，光化角質(zhì)癥沒有再度發(fā)生。
實(shí)施例10本發(fā)明組合物的配方本發(fā)明組合物的一種適合臨床使用的配方含有以下成分。批量的大小可以根據(jù)需要的體積隨意選擇。
1．2’-脫氧胞苷鹽酸 0.4640g2．2’-脫氧腺苷一水合物 0.4290g3．2’-脫氧鳥苷一水合物 0.4270g4．胸苷 0.4000g5．乙二胺四乙酸二鈉二水合物，USP 0.0100g6．芐索氯銨，USP 0.0250g7．丁基化羥基甲苯，NF0.0005g8．卡波姆934P，NF0.7200g9．甘油，USP 10.000g10． 乙醇，USP 5.000g11． 二甘醇單乙基酯10.000g12． NaOH，NF(1N溶液) 根據(jù)調(diào)pH值的需要13． HCI，NF(IN溶液) 根據(jù)調(diào)pH值的需要14． 純凈水，USP 補(bǔ)充到100.00g配制1．把第8項(xiàng)(卡波姆934P)溶解在35g的純凈水中。
2．把第5項(xiàng)溶解在該溶液中。
3．把第9、10、11項(xiàng)與15g純凈水在另一個(gè)容器中相混合。
4．把第1、2、3、4、6以及7項(xiàng)溶解在步驟3的溶液中。
5．把步驟2和4中的溶液混合在一起。
6．把8.85g的第12項(xiàng)加到步驟5的溶液中。
7．把所得的凝膠混合15分鐘，而且如果需要，用第12或13項(xiàng)把pH調(diào)節(jié)到7.0+/-0.5。
8．把這一批次的最終重量用純凈水補(bǔ)足到100g，然后緩慢混合15分鐘。
* * *上述內(nèi)容旨在解釋本發(fā)明，并不是限制性的。可以作各種各樣的變化和修改而不致脫離本發(fā)明的實(shí)質(zhì)思想和范疇。
權(quán)利要求
1．一種促進(jìn)哺乳動(dòng)物皮膚或粘膜DNA修復(fù)的方法，該方法包括對上述哺乳動(dòng)物施用至少一種脫氧核糖核苷、脫氧核糖核苷酸、或寡脫氧核糖核苷酸。
2．如權(quán)利要求1中所述的方法，其中上述至少一種脫氧核糖核苷是局部施用的。
3．如權(quán)利要求1中所述的方法，其中上述至少一種脫氧核糖核苷選自脫氧胞苷、脫氧腺苷、脫氧鳥苷和胸苷。
4．如權(quán)利要求3中所述的方法，其中上述至少一種脫氧核糖核苷是脫氧胞苷。
5．如權(quán)利要求3中所述的方法，其中上述至少一種脫氧核糖核苷是脫氧腺苷。
6．如權(quán)利要求3中所述的方法，其中上述至少一種脫氧核糖核苷是脫氧鳥苷。
7．如權(quán)利要求3中所述的方法，其中上述至少一種脫氧核糖核苷是胸苷。
8．如權(quán)利要求3中所述的方法，其中上述至少一種脫氧核糖核苷是在一種賦形劑中施用的，該賦形劑含有每種脫氧核糖核苷0.1至10毫克每毫升。
9．如權(quán)利要求3中所述的方法，其中上述至少一種脫氧核糖核苷是在一種賦形劑中施用的，該賦形劑含有每種脫氧核糖核苷1.0至5毫克每毫升。
10．如權(quán)利要求3中所述的方法，其中上述至少一種脫氧核糖核苷是脫氧胞苷、脫氧腺苷、脫氧鳥苷和胸苷的混合物。
11．如權(quán)利要10中所述的方法，其中上述脫氧核糖核苷是在一種賦形劑中施用的，該賦形劑含有每種脫氧核糖核苷0.1至10毫克每毫升。
12．如權(quán)利要10中所述的方法，其中上述脫氧核糖核苷是在一種賦形劑中施用的，該賦形劑含有每種脫氧核糖核苷1至5毫克每毫升。
13．一種降低暴露在誘變因素下的哺乳動(dòng)物皮膚的突變頻率的方法，該方法包括對上述皮膚施用至少一種脫氧核糖核苷的來源。
14．如權(quán)利要13中所述的方法，其中上述誘變因素選自紫外線或陽光輻射、化學(xué)誘變劑、自由基或電離輻射。
15．如權(quán)利要13中所述的方法，其中上述來源選自至少一種游離的或?；拿撗鹾颂呛塑?。
16．如權(quán)利要13中所述的方法，其中上述來源選自脫氧核糖核苷酸、寡脫氧核糖核苷酸和多聚脫氧核糖核苷酸。
17．如權(quán)利要13中所述的方法，其中上述至少一種脫氧核糖核苷的來源是在一種賦形劑中施用，濃度為從1.0至20毫克每毫升。
18．如權(quán)利要求15中所述的方法，其中上述至少一種脫氧核糖核苷是游離或酰基化的脫氧胞苷。
19．如權(quán)利要求15中所述的方法，其中上述至少一種脫氧核糖核苷是游離或?；拿撗跸佘?。
20．如權(quán)利要求15中所述的方法，其中上述至少一種脫氧核糖核苷是游離或?；拿撗貘B苷。
21．如權(quán)利要求15中所述的方法，其中上述至少一種脫氧核糖核苷是游離或?；男剀?。
22．如權(quán)利要求15中所述的方法，其中上述至少一種脫氧核糖核苷是在一種賦形劑中施用的，該賦形劑含有每種脫氧核糖核苷0.1至10毫克每毫升。
23．如權(quán)利要求15中所述的方法，其中上述至少一種脫氧核糖核苷是在一種賦形劑中施用的，該賦形劑含有每種脫氧核糖核苷1．0至5毫克每毫升。
24．如權(quán)利要求15中所述的方法，其中上述至少一種脫氧核糖核苷是游離或?；拿撗醢?、脫氧腺苷、脫氧鳥苷和胸苷的混合物。
25．如權(quán)利要求24中所述的方法，其中上述至少一種脫氧核糖核苷是在一種賦形劑中施用的，該賦形劑含有每種脫氧核糖核苷0.1至10毫克每毫升。
26．如權(quán)利要求24中所述的方法，其中上述至少一種脫氧核糖核苷是在一種賦形劑中施用的，該賦形劑含有每種脫氧核糖核苷1至5毫克每毫升。
27．一種降低哺乳動(dòng)物因暴露于誘變因素下而發(fā)展成皮膚癌幾率的方法，該方法包括對上述哺乳動(dòng)物的皮膚施用至少一種脫氧核糖核苷的來源，其中施用所述來源使得上述至少一種脫氧核糖核苷在上述哺乳動(dòng)物暴露于所述誘變因素當(dāng)時(shí)或之后，以足以降低上述暴露的有害后果的劑量存在于所述哺乳動(dòng)物的皮膚上。
28．如權(quán)利要求27中所述的方法，其中上述來源在暴露于誘變因素之后的3天以內(nèi)施用。
29．如權(quán)利要求28中所述的方法，其中上述誘變因素選自陽光、紫外線或電離輻射。
30．如權(quán)利要求27中所述的方法，其中上述來源選自至少一種游離或?；拿撗鹾颂呛塑铡?br> 31．如權(quán)利要求27中所述的方法，其中上述來源選自脫氧核糖核苷酸、寡脫氧核糖核苷酸和多聚脫氧核糖核苷酸。
32．如權(quán)利要求27中所述的方法，其中上述至少一種脫氧核糖核苷的來源是在一種賦形劑中施用，濃度為從1.0至20毫克每毫升。
33．如權(quán)利要求30中所述的方法，其中上述至少一種脫氧核糖核苷是游離或?；拿撗醢铡?br> 34．如權(quán)利要求30中所述的方法，其中上述至少一種脫氧核糖核苷是游離或?；拿撗跸佘?。
35．如權(quán)利要求30中所述的方法，其中上述至少一種脫氧核糖核苷是游離或?；拿撗貘B苷。
36．如權(quán)利要求30中所述的方法，其中上述至少一種脫氧核糖核苷是游離或?；男剀?。
37．如權(quán)利要求30中所述的方法，其中上述至少一種脫氧核糖核苷是在一種賦形劑中施用的，該賦形劑含有每種脫氧核糖核苷0.1至10毫克每毫升。
38．如權(quán)利要求30中所述的方法，其中上述至少一種脫氧核糖核苷是在一種賦形劑中施用的，該賦形劑含有每種脫氧核糖核苷1.0至5毫克每毫升。
39．如權(quán)利要求30中所述的方法，其中上述至少一種脫氧核糖核苷是游離或?；拿撗醢?、脫氧腺苷、脫氧鳥苷和胸苷的混合物。
40．如權(quán)利要求39中所述的方法，其中上述至少一種脫氧核糖核苷是在一種賦形劑中施用的，該賦形劑含有每種脫氧核糖核苷0.1至10毫克每毫升。
41．如權(quán)利要求39中所述的方法，其中上述至少一種脫氧核糖核苷是在一種賦形劑中施用的，該賦形劑含有每種脫氧核糖核苷1至5毫克每毫升。
42．如權(quán)利要求27中所述的方法，其中上述皮膚癌選自基底細(xì)胞癌、黑素瘤和鱗狀細(xì)胞癌。
43．一種用于降低哺乳動(dòng)物皮膚光老化速度的方法，該方法包括對上述哺乳動(dòng)物的皮膚施用至少一種脫氧核糖核苷。
44．如權(quán)利要求43中所述的方法，其中上述至少一種脫氧核糖核苷是脫氧胞苷。
45．如權(quán)利要求43中所述的方法，其中上述至少一種脫氧核糖核苷是脫氧腺苷。
46．如權(quán)利要求43中所述的方法，其中上述至少一種脫氧核糖核苷是脫氧鳥苷。
47．如權(quán)利要求43中所述的方法，其中上述至少一種脫氧核糖核苷是胸苷。
48．如權(quán)利要求43中所述的方法，其中上述至少一種脫氧核糖核苷是在一種賦形劑中施用的，該賦形劑含有每種脫氧核糖核苷從0.1至10毫克每毫升。
49．如權(quán)利要求43中所述的方法，其中上述至少一種脫氧核糖核苷是在一種賦形劑中施用的，該賦形劑含有每種脫氧核糖核苷從1.0至5毫克每毫升。
50．如權(quán)利要求43中所述的方法，其中上述至少一種脫氧核糖核苷是脫氧胞苷、脫氧腺苷、脫氧鳥苷和胸苷的混合物。
51．如權(quán)利要求50中所述的方法，其中上述至少一種脫氧核糖核苷是在一種賦形劑中施用的，該賦形劑含有每種脫氧核糖核苷從0.1至10毫克每毫升。
52．如權(quán)利要求50中所述的方法，其中上述至少一種脫氧核糖核苷是在一種賦形劑中施用的，該賦形劑含有每種脫氧核糖核苷從1至5毫克每毫升。
53．一種用于降低哺乳動(dòng)物光化性角化病發(fā)生幾率的方法，該方法包括對上述哺乳動(dòng)物的皮膚施用至少一種脫氧核糖核苷的來源。
54．如權(quán)利要求53中所述的方法，其中上述來源選自脫氧核糖核苷、脫氧核糖核苷酸、寡脫氧核糖核苷酸、脫氧核糖核苷?；苌?。
55．一種用于降低哺乳動(dòng)物皮膚內(nèi)由于內(nèi)源性或外源性的具光化學(xué)活性的生色團(tuán)引起的光敏作用或光動(dòng)力致敏作用所引發(fā)的有害后果的方法，該方法包括對上述皮膚施用一種能量清除劑，該清除劑具有最低的小于或等于DNA堿基所具有的三重線態(tài)能量。
56．如權(quán)利要求55中所述的方法，其中上述外源生色團(tuán)是一種遮光劑試劑。
57．如權(quán)利要求56中所述的方法，其中上述生色團(tuán)選自avobenzone(t-丁基二甲氧基二苯甲?；淄?、oxybenzone(二苯甲酮-3)、dioxybenzone(二苯甲酮-8)、sulisobenzone(二苯甲酮-4；2-羥基-4-甲氧基二苯甲酮-5-磺酸)、octocrylene(丙烯酸2-乙基己基-2-氰基-3，3-聯(lián)苯酯)、甲氧基肉桂酸辛酯(對-甲氧基肉桂酸2-乙基己酯)、水楊酸辛酯(水楊酸2-乙基己酯)、homosalate(水楊酸高薄荷酯)、throlamine salicylate(水楊酸三乙醇胺)、聯(lián)苯咪唑磺酸、PABA(對氨基苯甲酸)、roxadimate(4-二羥基丙基氨基苯甲酸乙酯)、lisadimate(對-氨基苯甲酸甘油酯)、Padimate O(二甲基PABA辛酯)、鄰氨基苯甲酸薄荷酯、和Parsol 1789(丁基甲氧二苯甲酰甲烷)。
58．如權(quán)利要求55中所述的方法，其中上述能量清除劑試劑選自DNA、寡脫氧核糖核苷酸、核糖核苷、脫氧核糖核苷、核糖核苷酸、脫氧核糖核苷酸、酰基化的脫氧核糖核苷和?；暮颂呛塑铡?br> 59.如權(quán)利要求58中所述的方法，其中上述能量清除劑試劑是以0.1至20mg/ml的含量在賦形劑中施用。
60．如權(quán)利要求58中所述的方法，其中上述能量清除劑是含有游離或酰基化的脫氧胞苷、脫氧腺苷、脫氧鳥苷和胸苷的混合物。
61．如權(quán)利要求60中所述的方法，其中上述混合物是在一種賦形劑中施用的，該賦形劑含有每種脫氧核糖核苷從0.1至10毫克每毫升。
62．一種用于降低哺乳動(dòng)物的皮膚因暴露于誘變因素下而引起的不利后果的方法，該方法包括對上述哺乳動(dòng)物施用至少一種脫氧核糖核苷酸、脫氧核糖核苷酸或寡脫氧核糖核苷酸。
63．如權(quán)利要求62中所述的方法，其中上述誘變因素是陽光或紫外線輻射。
64．如權(quán)利要求62中所述的方法，其中上述誘變因素是電離輻射。
65．如權(quán)利要求62中所述的方法，其中上述誘變因素是一種自由基。
66．如權(quán)利要求62中所述的方法，其中上述至少一種脫氧核糖核苷是局部施用。
67．如權(quán)利要求62中所述的方法，其中上述至少一種脫氧核糖核苷選自脫氧胞苷、脫氧腺苷、脫氧鳥苷和胸苷。
68．如權(quán)利要求67中所述的方法，其中上述至少一種脫氧核糖核苷是脫氧胞苷。
69．如權(quán)利要求67中所述的方法，其中上述至少一種脫氧核糖核苷是脫氧腺苷。
70．如權(quán)利要求67中所述的方法，其中上述至少一種脫氧核糖核苷是脫氧鳥苷。
71．如權(quán)利要求67中所述的方法，其中上述至少一種脫氧核糖核苷是胸苷。
72．如權(quán)利要求67中所述的方法，其中上述至少一種脫氧核糖核苷是在一種賦形劑中施用的，該賦形劑含有每種脫氧核糖核苷從0.1至10毫克每毫升。
73．如權(quán)利要求67中所述的方法，其中上述至少一種脫氧核糖核苷是在一種賦形劑中施用的，該賦形劑含有每種脫氧核糖核苷從1.0至5毫克每毫升。
74．如權(quán)利要求67中所述的方法，其中上述至少一種脫氧核糖核苷是脫氧胞苷、脫氧腺苷、脫氧鳥苷和胸苷的混合物。
75．如權(quán)利要求74中所述的方法，其中上述至少一種脫氧核糖核苷是在一種賦形劑中施用的，該賦形劑含有每種脫氧核糖核苷從0.1至10毫克每毫升。
76．如權(quán)利要求74中所述的方法，其中上述脫氧核糖核苷是在一種賦形劑中施用的，該賦形劑含有每種脫氧核糖核苷從1至5毫克每毫升。
77．一種用于降低皮膚因暴露于內(nèi)源性產(chǎn)生的氧化氮而引起的有害后果的方法，該方法包括對上述皮膚施用至少一種脫氧核糖核苷的來源。
78．如權(quán)利要求77中所述的方法，其中上述至少一種脫氧核糖核苷的來源選自脫氧核糖核苷、脫氧核糖核苷酸、寡脫氧核糖核苷酸或?；拿撗鹾颂呛塑?。
79．如權(quán)利要求77中所述的方法，其中上述至少一種脫氧核糖核苷的來源是以濃度為1.0至20毫克每毫升在一種賦形劑中施用。
80．如權(quán)利要求78中所述的方法，其中上述至少一種脫氧核糖核苷是游離或?；拿撗醢?。
81．如權(quán)利要求78中所述的方法，其中上述至少一種脫氧核糖核苷是游離或?；拿撗跸佘?。
82．如權(quán)利要求78中所述的方法，其中上述至少一種脫氧核糖核苷是游離或?；拿撗貘B苷。
83．如權(quán)利要求78中所述的方法，其中上述至少一種脫氧核糖核苷是游離或?；男剀?。
84．如權(quán)利要求78中所述的方法，其中上述至少一種脫氧核糖核苷是在一種賦形劑中施用的，該賦形劑含有每種脫氧核糖核苷從0.1至10毫克每毫升。
85．如權(quán)利要求78中所述的方法，其中上述至少一種脫氧核糖核苷是在一種賦形劑中施用的，該賦形劑含有每種脫氧核糖核苷從1.0至5毫克每毫升。
86．如權(quán)利要求78中所述的方法，其中上述至少一種脫氧核糖核苷是游離的或?；拿撗醢?、脫氧腺苷、脫氧鳥苷和胸苷的混合物。
87．如權(quán)利要求86中所述的方法，其中上述至少一種脫氧核糖核苷是在一種賦形劑中施用的，該賦形劑含有每種脫氧核糖核苷從0.1至10毫克每毫升。
88．如權(quán)利要求86中所述的方法，其中上述至少一種脫氧核糖核苷是在一種賦形劑中施用的，該賦形劑含有每種脫氧核糖核苷從1至5毫克每毫升。
89．一種用于治療哺乳動(dòng)物皮炎癥的方法，該方法包括對上述發(fā)炎皮膚施用至少一種脫氧核糖核苷或核糖核苷的來源。
90．如權(quán)利要求89中所述的方法，其中上述皮炎癥選自皮炎、牛皮癬、濕疹和痤瘡。
91．如權(quán)利要求89中所述的方法，其中上述皮炎癥是由于暴露于陽光或紫外線的輻射。
92．如權(quán)利要求89中所述的方法，其中上述至少一種脫氧核糖核苷或核糖核苷的來源選自DNA、寡脫氧核糖核苷酸、核糖核苷、脫氧核糖核苷、核糖核苷酸、脫氧核糖核苷酸、酰基化的脫氧核糖核苷和?；暮颂呛塑铡?br> 93．如權(quán)利要求92中所述的方法，其中上述至少一種脫氧核糖核苷或核糖核苷的來源是以0.1至20mg/ml含量在賦形劑中施用的。
94．如權(quán)利要求92中所述的方法，其中上述至少一種脫氧核糖核苷的來源是含有游離或酰基化的脫氧胞苷、脫氧腺苷、脫氧鳥苷和胸苷的混合物。
95．如權(quán)利要求89中所述的方法，其中上述至少一種脫氧核糖核苷的來源是脫氧胞苷。
96．如權(quán)利要求89中所述的方法，其中上述至少一種核糖核苷的來源是腺苷。
97．如權(quán)利要求89中所述的方法，其中上述腺苷是以0.1至10mg/ml含量在賦形劑中施用的。
98．一種用于治療哺乳動(dòng)物粘膜炎癥的方法，該方法包括對上述粘膜炎癥施用至少一種的脫氧核糖核苷或核糖核苷的來源。
99．如權(quán)利要求98中所述的方法，其中上述粘膜皮炎癥選自炎癥性腸疾病、潰瘍性結(jié)腸炎、局限性腸炎、口炎或粘膜炎。
100．如權(quán)利要求98中所述的方法，其中上述至少一種脫氧核糖核苷或核糖核苷的來源選自DNA、一種寡脫氧核糖核苷酸、一種核糖核苷、一種脫氧核糖核苷、一種核糖核苷酸、一種脫氧核糖核苷酸、一種?；拿撗鹾颂呛塑蘸鸵环N酰基化的核糖核苷。
101．如權(quán)利要求100中所述的方法，其中上述至少一種脫氧核糖核苷的來源是以0.1至20mg/ml含量在賦形劑中施用的。
102．如權(quán)利要求100中所述的方法，其中上述至少一種脫氧核糖核苷的來源是含有游離或?；拿撗醢铡⒚撗跸佘?、脫氧鳥苷和胸苷的混合物。
103．如權(quán)利要求98中所述的方法，其中上述至少一種脫氧核糖核苷的來源是脫氧胞苷。
104．一種用于減低哺乳動(dòng)物由于暴露于陽光或紫外線輻射而引起的癌癥的發(fā)生幾率的方法，該方法包括局部施用一種含有一種遮光劑試劑和一種能量清除劑試劑的組合物。
105．如權(quán)利要求104中所述的方法，其中遮光劑試劑選自avobenzone(t-丁基二甲氧基二苯甲?；淄?、oxybenzone(二苯甲酮-3)、dioxybenzone(二苯甲酮-8)、sulisobenzone(二苯甲酮-4；2-羥基-4-甲氧基二苯甲酮-5-磺酸)、octocrylene(丙烯酸2-乙基己基-2-氰基-3，3-聯(lián)苯酯)、甲氧基肉桂酸辛酯(對-甲氧基肉桂酸2-乙基己酯)、水楊酸辛酯(水楊酸2-乙基己酯)、homosalate(水楊酸高薄荷酯)、throlamine salieylate(水楊酸三乙醇胺)、聯(lián)苯咪唑磺酸、PABA(對氨基苯甲酸)、roxadimate(4-二羥基丙基氨基苯甲酸乙酯)、lisadimate(對-氨基苯甲酸甘油酯)、Padimate 0(二甲基PABA辛酯)、鄰氨基苯甲酸薄荷酯、和Parsol 1789(丁基甲氧二苯甲酰甲烷)。
106．如權(quán)利要求104中所述的方法，其中上述能量清除劑選自DNA、寡脫氧核糖核苷、核糖核苷、脫氧核糖核苷、核糖核苷酸、脫氧核糖核苷酸、?；拿撗鹾颂呛塑蘸王；暮颂呛塑?。
107．如權(quán)利要求106中所述的方法，其中上述能量清除劑試劑是以0.1至20mg/ml含量在賦形劑中施用的。
108．如權(quán)利要求106中所述的方法，其中上述能量清除劑試劑是含有游離或酰基化的脫氧胞苷、脫氧腺苷、脫氧鳥苷和胸苷的混合物。
109．含有a)至少一種脫氧核糖核苷和b)一種增強(qiáng)上述至少一種的脫氧核糖核苷進(jìn)入皮膚能力的試劑的組合物。
110．如權(quán)利要求109中所述的組合物，其中上述皮膚是人的皮膚。
111．如權(quán)利要求109中所述的組合物，其中上述至少一種脫氧核糖核苷是脫氧胞苷。
112．如權(quán)利要求109中所述的組合物，其中上述至少一種脫氧核糖核苷的來源是脫氧腺苷。
113．如權(quán)利要求109中所述的組合物，其中上述至少一種脫氧核糖核苷的來源是脫氧鳥苷。
114．如權(quán)利要求109中所述的組合物，其中上述至少一種脫氧核糖核苷的來源是胸苷。
115．如權(quán)利要求109中所述的組合物，其中上述至少一種脫氧核糖核苷存在的濃度為每種脫氧核糖核苷0.1至10毫克每毫升。
116．如權(quán)利要求109中所述的組合物，其中上述至少一種脫氧核糖核苷存在的濃度為每種脫氧核糖核苷1.0至5毫克每毫升。
117．如權(quán)利要求109中所述的組合物，其中上述至少一種脫氧核糖核苷是含有游離的脫氧胞苷、脫氧腺苷、脫氧鳥苷和胸苷的混合物。
118．如權(quán)利要求117中所述的組合物，其中每種脫氧核糖核苷存在的濃度為0.1至10毫克每毫升。
119．如權(quán)利要求117中所述的組合物，其中每種脫氧核糖核苷存在的濃度為1至5毫克每毫升。
120．如權(quán)利要求109中所述的組合物，其中上述增強(qiáng)滲透力的試劑選自乙醇、異丙醇、azone(1-十二烷基氮雜環(huán)庚-2-酮)、油酸、亞油酸、丙二醇、高滲甘油、乳酸、羥基乙酸、檸檬酸、蘋果酸和二甘醇一乙基醚。
121．如權(quán)利要求120中所述的組合物，其中上述增強(qiáng)滲透力的試劑是二甘醇一乙基醚。
122．如權(quán)利要求121中所述的組合物，其中上述二甘醇一乙基醚存在的濃度為2至20％。
123．如權(quán)利要求121中所述的組合物，其中上述二甘醇一乙基醚存在的濃度為5至15％。
124．如權(quán)利要求109中所述的組合物，其中上述組合物是水凝膠。
125．如權(quán)利要求124中所述的組合物，其中上述水凝膠的凝膠劑選自甲基纖維素、羧甲基纖維素、羥丙基甲基纖維素、卡波姆(carbomer)、Hypan、聚丙烯酸酯和甘油聚丙烯酸酯。
126．如權(quán)利要求124中所述的組合物，其中上述水凝膠的凝膠劑是卡波姆。
127．如權(quán)利要求126中所述的組合物，其中上述卡波姆的濃度為2至10％。
128．一種組合物，包括a)．脫氧鳥苷和脫氧腺苷以及b)．苯甲醇
129．如權(quán)利要求128中所述的組合物，其中上述苯甲醇的濃度在0.1和5％之間。
130．如權(quán)利要求128中所述的組合物，其中脫氧鳥苷和脫氧腺苷的濃度在0.1和10毫克/毫升之間。
131．如權(quán)利要求128中所述的組合物進(jìn)一步含有脫氧胞苷和胸苷。
132．如權(quán)利要求131中所述的組合物，其中脫氧胞苷和胸苷的濃度在0.1和10毫克/毫升之間。
133．一種含有一種甲基黃嘌呤和至少一種脫氧核糖核苷來源的組合物。
134．如權(quán)利要求133中所述的組合物，其中上述至少一種脫氧核糖核苷來源選自至少一種脫氧核苷和至少一種脫氧核苷?；苌?。
135．一種組合物，包含a)．一種遮光劑b)．一種能量清除劑
136．一種如權(quán)利要求135中所述的組合物，其中上述的遮光劑選自avobenzone(t-丁基二甲氧基二苯甲酰基甲烷)、oxybenzone(二苯甲酮-3)、dioxybenzone(二苯甲酮-8)、sulisobenzone(二苯甲酮-4；2-羥基-4-甲氧基二苯甲酮-5-磺酸)、octocrylene(丙烯酸2-乙基己基-2-氰基-3，3-聯(lián)苯酯)、甲氧基肉桂酸辛酯(對-甲氧基肉桂酸2-乙基己酯)、水楊酸辛酯(水楊酸2-乙基己酯)、homosalate(水楊酸高薄荷酯)、throlamine salicylate(水楊酸三乙醇胺)、聯(lián)苯咪唑磺酸、PABA(對氨基苯甲酸)、roxadimate(4-二羥基丙基氨基苯甲酸乙酯)、lisadimate(對-氨基苯甲酸甘油酯)、Padimate O(二甲基PABA辛酯)、鄰氨基苯甲酸薄荷酯、和Parsol 1789(丁基甲氧二苯甲酰甲烷)。
137.一種如權(quán)利要求135中所述的組合物，其中上述的能量清除劑選自至少一種脫氧核糖核苷來源。
138．一種如權(quán)利要求137中所述的組合物，其中上述的至少一種脫氧核糖核苷來源選自脫氧核苷、脫氧核糖核苷酸、寡脫氧核糖核苷酸、或一種?；撗鹾颂呛塑铡?br> 139．一種如權(quán)利要求138中所述的組合物，其中上述的至少一種脫氧核糖核苷是一種含有游離的或?；撗醢铡⒚撗跸佘?、脫氧鳥苷、以及胸苷的混合物。
140．一種如權(quán)利要求138中所述的組合物，其中上述的每種脫氧核糖核苷的濃度為0.1至10mg/ml。
141．一種如權(quán)利要求138中所述的組合物，其中上述的至少一種脫氧核糖核苷是游離的或?；拿撗醢?。
142．一種如權(quán)利要求141中所述的組合物，其中上述的游離的或酰基化的脫氧胞苷的濃度為0.1至100mg/ml。
143．一種如權(quán)利要求135中所述的組合物，其中上述的能量清除劑選自至少一種核糖核苷來源。
144．一種如權(quán)利要求143中所述的組合物，其中上述的至少一種脫氧核糖核苷來源選自核糖核苷、核糖核苷酸、寡核糖核苷酸、或?；颂呛塑铡?br> 145．一種用于減少暴露于太陽光或紫外線輻射的哺乳動(dòng)物皮膚光損傷發(fā)展速率的方法，包括給上述哺乳動(dòng)物的皮膚施用至少一種脫氧核糖核苷來源，其中施用上述來源以使上述脫氧核糖核苷在上述哺乳動(dòng)物暴露于上述輻射的過程中或之后以足以減少上述暴露的有害后果的量存在于皮膚上。
146．一種如權(quán)利要求145中所述的方法，其中上述的來源選自至少一種游離或?；撗鹾颂呛塑?。
147．一種如權(quán)利要求145中所述的方法，其中上述的來源選自脫氧核糖核苷酸、寡脫氧核糖核苷酸、以及多聚脫氧核糖核苷酸。
148．一種用于減少暴露于太陽光或紫外線輻射的哺乳動(dòng)物皮膚光損傷發(fā)展速率的方法，包括局部施用一種包含遮光劑和能量清除劑的組合物。
149．如權(quán)利要求148中所述的方法，其中上述能量清除劑選自DNA、寡脫氧核糖核苷酸、核糖核苷、脫氧核糖核苷、核糖核苷酸、脫氧核糖核苷酸、酰基化的脫氧核糖核苷和?；暮颂呛塑?。
150．一種誘導(dǎo)由于暴露于陽光或紫外線輻射下而引起的炎癥性的或過度增殖性的皮膚病損的復(fù)原的方法，該方法包括局部施用一種含有至少一種脫氧核糖核苷或脫氧核糖的來源的組合物。
151．如權(quán)利要求150中所述的方法，其中上述皮膚病損選自光化角化癥、太陽痣、牛皮癬、皮炎、濕疹、黑素瘤、基底細(xì)胞癌、以及鱗狀細(xì)胞癌。
152．如權(quán)利要求150中所述的方法，其中上述的至少一種脫氧核糖核苷來源選自脫氧核糖核苷、脫氧核糖核苷酸、寡脫氧核糖核苷酸、或酰基化脫氧核苷。
153．如權(quán)利要求152中所述的方法，其中上述至少一種脫氧核糖核苷是一種含有游離或?；拿撗醢铡⒚撗跸佘?、脫氧鳥苷、以及胸苷的混合物。
154．如權(quán)利要求152中所述的方法，其中每種脫氧核糖核苷的濃度為0.1至10mg/ml。
155．如權(quán)利要求152中所述的方法，其中上述的至少一種脫氧核糖核苷是游離的或?；拿撗醢铡?br> 156．如權(quán)利要求155中所述的方法，其中上述的游離或?；撗醢盏臐舛葹?.1至100mg/ml。
157．如權(quán)利要求150中所述的方法，其中上述的去氧核糖在局部用配方中的濃度為為0.1至100毫摩爾。
全文摘要
公開了一種促進(jìn)皮膚中DNA修復(fù)、減小DNA損傷以及降低突變頻率的方法,該方法的目的是減小暴露在日光或紫外線照射下所造成的影響。本方法包括對皮膚施用一種將其濃度足以增強(qiáng)DNA的修復(fù)或降低突變頻率的脫氧核糖核苷制備在一賦形劑中的組合物,其中上述的賦形劑能將有效量的脫氧核糖核苷運(yùn)送至需要的皮膚細(xì)胞。
文檔編號A61K8/00GK1285751SQ98812891
公開日2001年2月28日 申請日期1998年11月3日 優(yōu)先權(quán)日1997年11月4日
發(fā)明者R·W·馮布斯特爾, F·羅曼瑟夫 申請人:普羅神經(jīng)細(xì)胞有限公司