專利名稱：：陽離子脂質(zhì)體和多脫氧核糖核苷酸的復(fù)合物作為藥劑的用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及由陽離子脂質(zhì)體和多脫氧核糖核苷酸形成的復(fù)合物作為藥劑的用途。更具體地說，本發(fā)明涉及上述具有顯著的時(shí)間上的穩(wěn)定性可作為具有抗炎活性藥劑的復(fù)合物的用途。眾所周知，脂質(zhì)體能夠用作全身給藥的藥物載體。它們是通過靜脈內(nèi)、皮下、肌肉內(nèi)注射或者通過輸注給藥的。至于涉及脂質(zhì)體和DNAs之間復(fù)合物的結(jié)構(gòu)，人們已知寡脫氧核苷酸和質(zhì)粒DNAs能夠通過離子鍵與陽離子型的脂質(zhì)體的外表面結(jié)合(C.F.Bennet等，Mol.Pharmacol.41，1023-1033，1992；XiangGao等，Biochem.Biophys.Res.Comm.179，280-285，1991)。但是，在該復(fù)合物和它們用作抗炎劑藥物時(shí)沒有給出任何有關(guān)時(shí)間上的穩(wěn)定性的暗示。從專利申請(qǐng)WO97/04787中人們也已知當(dāng)寡核苷酸具有8至50個(gè)核苷酸的鏈長時(shí)，它們能夠被包載在脂質(zhì)體中。在這些文獻(xiàn)中也沒有給出有關(guān)這類復(fù)合物在時(shí)間上穩(wěn)定性的任何信息?，F(xiàn)已描述過含有脂質(zhì)體和分子量為16000Da的多脫氧核糖核苷酸的復(fù)合物可以通過解聚核酸得到，其中可以把這些聚合物包含在脂質(zhì)囊中(Gursoy等，Pharmazie48，(1993)H.7，559-560)。WO97/04787重復(fù)了上述相同的描述。人們也已知含有寡核苷酸和多脫氧核糖核苷酸的脂質(zhì)體復(fù)合物具有顯著增加后一物質(zhì)的藥理活性的特性(Bennet等，Gursoy等，見上；A.Colige，Biochemistry1993，32，7-11)。盡管如此，申請(qǐng)人進(jìn)行的試驗(yàn)已經(jīng)表明現(xiàn)有技術(shù)中的這些復(fù)合物不能用作藥劑，因?yàn)楫?dāng)把它們懸浮于給藥所需的含水介質(zhì)中時(shí)，它們就會(huì)迅速喪失其活性。除此之外，在該復(fù)合物中脂質(zhì)體的陽離子成分、如硬脂酰胺和季銨型表面活性劑是潛在的毒性劑并且能夠引起毒副作用。因?yàn)楹嗟奈锢硗庑蔚淖兓?，即從有乳?初乳)轉(zhuǎn)化成最終的清澈，伴隨著沉淀物的形成，復(fù)合物的降解也是明顯的。眾所周知，多脫氧核糖核苷酸類，特別是稱作去纖苷酸的多脫氧核糖核苷酸可以作為具有纖維蛋白溶酶(profibrinolytic)活性(R.Pescador等，Thromb.Res.301-11，1983)、抗血栓形成的-血栓溶解的(thrombolytic)(R.Niada等，Pharmacol.Res.Commun.14(10)，949-957，1982)、抗高血壓的(F.Trento等，XXVIICongr.Naz.Soc.It.Farmacol.Torino25-29，1994年9月，AbstractBook第703頁)、抗局部缺血、細(xì)胞保護(hù)性(G.Rossoni等，J.Cardiovasc.Pharmacol.27，680-6851986)以及抗炎活性(R.Sealia，Meth.Find.Exp.Clin.Pharmcol.18(10)669-679，1996)的藥劑。每日劑量范圍從600到1200mg。所有這些物質(zhì)的藥理活性都主要指的是從它們血管內(nèi)皮局部釋放治療有效量的內(nèi)生前列腺環(huán)素的特性(參見R.Niada.等，上述，C.Thiemermann等，Am.J.Cardiol.56987-9821985)。現(xiàn)在申請(qǐng)人已經(jīng)出人意料地和令人驚奇地發(fā)現(xiàn)從脂質(zhì)體和多脫氧核糖核苷酸能夠制備具有時(shí)間上持續(xù)的高活性并去除毒副作用的復(fù)合物。這將使得使用含有本發(fā)明的復(fù)合物的含水乳劑用來連續(xù)治療一天或多天得以實(shí)現(xiàn)并且也使得長期持續(xù)給藥諸如輸注得以實(shí)現(xiàn)。所以本發(fā)明的目的是把由陽離子型脂質(zhì)體和通過解聚核酸得到的具有7,000-60,000道爾頓、優(yōu)選10,000-60,000道爾頓、最優(yōu)選為15,000-60,000道爾頓分于量的多脫氧核糖核苷酸形成的復(fù)合物用作藥劑，尤其是抗炎劑，其中多脫氧核糖核苷酸位于脂質(zhì)體的外表面。該脂質(zhì)體復(fù)合物的特征在于通過加入等份的氯化十六烷基吡啶鎓溶液，它們的溶液與該季銨離子形成的定量沉淀物是不同于在相同條件下通過處理由相同的多脫氧核糖核苷酸和陽離子型脂質(zhì)體組成的脂質(zhì)體復(fù)合物、其中的多脫氧核糖核苷酸位于脂質(zhì)體內(nèi)部所得到的。在本發(fā)明優(yōu)選的實(shí)施方案中，多脫氧核糖核苷酸是去纖苷酸。所以按照本發(fā)明，在不影響治療有效性的條件下，減少給患者給藥的每日劑量也是可能的。脂質(zhì)體是脂囊泡，它是在含水相中形成的，且一般由磷脂類組成。在水和一種不溶性有機(jī)溶劑存在下，所述的化合物能夠形成一種球形殼，其殼壁是雙層的，其中分子的極性部分(親水性的)在脂質(zhì)體的外側(cè)而脂質(zhì)部分(疏水性的)在雙層內(nèi)。在這種情況下，把該囊泡稱之為單層狀。也有多層狀脂質(zhì)體，它們由多種脂質(zhì)層組成。用于本發(fā)明含脂質(zhì)體的復(fù)合物中的分子量為15,000-60,000道爾頓的多脫氧核糖核苷酸可以通過提取并接著解聚高分子量的核酸獲得。如USP3,770,720中所述進(jìn)行高分子量核酸的提取，本文將該文獻(xiàn)引用為參考文獻(xiàn)。如USP4,985,552所述通過進(jìn)行核酸的解聚能夠獲得分子量為15,000-30,000道爾頓的多脫氧核糖核苷酸，本文將USP4,985,552引用為參考文獻(xiàn)。申請(qǐng)人已經(jīng)證實(shí)當(dāng)如MethodsinEnzymol.第3卷第708-712頁中所定義的可逆性深色在20和40％之間(就未變性的樣品可逆增色性的吸收值而言)時(shí)使用USP4,985,552工藝的相同條件終止解聚也能夠獲得分子量在30,000-60,000的聚合物，或者當(dāng)可逆增色性的值等于或大于3時(shí)，終止解聚能夠獲得分子量等于或大于7,000的多脫氧核糖核苷酸。可逆增色性是伴隨解聚過程的一個(gè)參數(shù)。優(yōu)選的與陽離子型脂質(zhì)體形成復(fù)合物的多脫氧核糖核苷酸是大家已知的分子量為15,000-30,000的去纖苷酸類(D.C.I.)(InformationPhannaceutiquesO.M.S.n.4，第1卷/1987，第272頁)。本發(fā)明脂質(zhì)體的主要脂質(zhì)成分是卵磷脂或磷脂酰乙醇胺，它們能夠與R.R.C.NewVolume“脂質(zhì)體，一種實(shí)際途徑”IRL出版社，1994中公開的其它脂質(zhì)結(jié)合在脂質(zhì)體中，本文將該文獻(xiàn)引用為參考文獻(xiàn)。優(yōu)選相關(guān)的脂質(zhì)是麥角甾醇和膽甾醇。該組合物中能夠加入選自于公知的并且列在上述相同文獻(xiàn)中的一種或多種抗氧化劑。優(yōu)選的抗氧化劑是α-生育酚。向本發(fā)明的脂質(zhì)體中加入陽離子型表面活性劑，該表面活性劑含有一個(gè)或多個(gè)單一或雙取代的氨基或季銨基團(tuán)。該季銨基團(tuán)包括碳原子數(shù)在8至22之間的一條或多條脂族鏈。優(yōu)選具有18個(gè)碳原子脂族鏈的季銨型表面活性劑。脂質(zhì)體的脂質(zhì)/脂質(zhì)類總量和陽離子型表面活性劑之間的摩爾比在10∶0.05到10∶3之間的范圍，優(yōu)選為10∶1。當(dāng)與卵磷脂(或磷脂酰乙醇胺)一起使用時(shí)，還有第二種不同的脂質(zhì)，兩種脂質(zhì)和表面活性劑之間的內(nèi)部摩爾比(卵磷脂(或磷脂酰乙醇胺)第二種脂質(zhì)表面活性劑)在9∶1∶0.05到7∶3∶3之間的范圍內(nèi)，優(yōu)選8∶2∶1。脂質(zhì)體用來和活性組分(多脫氧核糖核苷酸)的重量比在10∶2到10∶0.1的范圍內(nèi)，優(yōu)選10∶1。按照D.C.Litzinger，BiochimBiophys.Acta1281，139-149，1996或者在上述的R.R.C.New’sVolume中所述能夠進(jìn)行本發(fā)明所用的陽離子脂質(zhì)體復(fù)合物的制備。具體來說，可用于制備本發(fā)明復(fù)合物的工藝包括下列步驟a.借助溶劑反相蒸發(fā)法制備脂質(zhì)體(參考文獻(xiàn)為SzokaP.etAlii.Proc.Natl.Acad.Sci.USA7541941978)4份有機(jī)相和1份水，其中有機(jī)相可以是極性的(例如，直鏈或支鏈的C1-C4的低級(jí)脂肪族醇)或非極性的(如直鏈或支鏈的C1-C4的二烷基醚類，如二乙醚，部分氯化的C1-C2的烴，優(yōu)選氯仿)，其中溶有脂質(zhì)類、陽離子表面活性劑和抗氧化劑，把這樣得到的兩相系統(tǒng)在0℃進(jìn)行超聲處理5-20分鐘，然后在室溫下減壓蒸發(fā)有機(jī)相，由此得到一種乳濁液，b.按照R.R.C.Newvolume的第52-54頁所描述的技術(shù)使該乳濁液流過孔直徑在100到600nm之間，優(yōu)選400nm的聚碳酸酯膜；把該步驟至少重復(fù)三次，從而得到與膜孔相當(dāng)?shù)钠骄睆降男∧?，c.在加入凍干輔助劑的含水溶液后，把含水乳濁液凍干，其中的凍干輔助劑如單糖類如蔗糖、山梨糖醇、甘露醇、果糖或多糖類如葡聚糖、具有不同分子量的麥芽糖糊精類，從而使該輔助劑比脂質(zhì)類至少多7倍。優(yōu)選多10到15倍之間，d.最終藥用乳劑的制備在無菌環(huán)境下，邊攪拌，邊把稀釋過的多脫氧核糖核苷酸的無菌等滲水溶液加入裝有凍干乳濁液的容器中。形成了含有臘質(zhì)體復(fù)合物的乳濁液，其中多脫氧核糖核苷酸用一個(gè)離子鍵與脂質(zhì)體的外壁連接。另一種方法，把一種無菌等滲溶液加入裝有凍干脂質(zhì)體的容器中，并且在無菌環(huán)境下把這樣得到的乳濁液與含有活性組分的溶液混合。本發(fā)明脂質(zhì)體的穩(wěn)定性已經(jīng)通過在乳劑制備后迅速測(cè)定藥效活性，然后在25℃黑暗中和無菌條件下放置第30天測(cè)定藥效活性而進(jìn)行了評(píng)估。將含有包裹有多脫氧核糖核苷酸脂質(zhì)體復(fù)合物(Gursoy等，見上)的乳劑進(jìn)行相同的試驗(yàn)并且用作對(duì)照制劑。申請(qǐng)人也已經(jīng)發(fā)現(xiàn)本發(fā)明復(fù)合物也可以用作具有較高活性而同時(shí)沒有毒副作用的抗高血壓劑和抗血栓形成劑。在下列試驗(yàn)?zāi)Ｐ椭幸呀?jīng)測(cè)定了藥理活性。-抗炎活性(Miyasaka等，Eur.J.Pharmacol.77229-2361982)。-動(dòng)脈高血壓(F.Trento等見上)。-抗血栓形成的活性(R.Niada等，Thromb.Res.23233-246，1981)。在涉及抗炎活性的試驗(yàn)中，已經(jīng)檢測(cè)了存在于得到的動(dòng)物胸膜滲出物的多形核白細(xì)胞(polymorphonucleates)的髓過氧物酶的量。該酶的量與產(chǎn)生的炎癥成正比。結(jié)果用相對(duì)于對(duì)照組的髓過氧物酶(MPO)的百分變化量表示，用下列公式計(jì)算在動(dòng)脈高血壓的模型中，用于測(cè)定活性的參數(shù)是血壓，監(jiān)控使用釋放內(nèi)源性氧化氮抑制劑的L-NAME治療后30分鐘的血壓。在抗血栓形成活性模型中，在誘發(fā)局部內(nèi)皮損傷后，監(jiān)控頸動(dòng)脈溫度到60分鐘。結(jié)果用與對(duì)照組相比在試驗(yàn)樣品得到的曲線下的面積的百分變化率(ΔAUC％)表示，用下列比得到分別在表I、II和III中報(bào)導(dǎo)的所獲得的結(jié)果表示本發(fā)明的脂質(zhì)體和多脫氧核糖核苷酸的復(fù)合物是一直穩(wěn)定的，不同于對(duì)照制劑。所以，按照本發(fā)明，能夠給患者服用較低量的活性成分來維持不變的治療作用。也能夠使用相同的復(fù)合物乳劑，適當(dāng)配制并具有適當(dāng)?shù)幕钚猿煞值臐舛?，從而用于上述病理情況所需的整個(gè)治療周期。人們也已知公知為去纖苷酸的多脫氧核糖核苷酸類具有抗血栓形成活性(R.Niada，Pharmacol.res.Comm，見上)、抗局部缺血、細(xì)胞保護(hù)(C.Thiermemann，見上)、抗炎活性(G.Rossoni，J.Cardiovasc.Pharmacol.，見上)以及治療動(dòng)脈粥樣硬化的作用(P.Lobel等，Atherosclerosis80，69-791989)。所述的活性與血液中局部釋放治療有效量的內(nèi)皮前列腺環(huán)素有關(guān)。申請(qǐng)人已經(jīng)發(fā)現(xiàn)本發(fā)明所述的脂質(zhì)體—多脫氧核糖核苷酸復(fù)合物能夠用于治療需要持續(xù)釋放內(nèi)皮前列腺環(huán)素的病理。含有陽離子脂質(zhì)體—多脫氧核糖核苷酸的藥劑包括常用的載體和賦型劑。所述的制劑可以是無菌和不致熱的乳劑形式，或者是臨時(shí)溶于無菌水溶劑中的保存在無菌容器中的凍干物形式。在后一種情況，優(yōu)選把脂質(zhì)體的凍干粉分離存放并且已經(jīng)把多脫氧核糖核苷酸溶于含水無菌溶劑再加入脂質(zhì)體。作為含水無菌溶劑，含有常規(guī)緩沖液(檸檬酸鹽、磷酸鹽)的無菌等滲溶液能夠與已知的防腐劑一起使用。含有本發(fā)明復(fù)合物的乳劑的給藥途徑是非腸道給藥，即通過靜脈內(nèi)、肌肉內(nèi)、皮下注射和通過輸注給藥。含在制劑中的活性組分的量為1到20mg/ml的多脫氧核糖核苷酸。與脂質(zhì)體復(fù)合物一起給藥的多脫氧核糖核苷酸的每日劑量為10到200mg，優(yōu)選20到120mg。下列實(shí)施例具有清楚闡明本
發(fā)明內(nèi)容的目的，不能認(rèn)為是用來限定本發(fā)明的范圍的。實(shí)施例1多脫氧核糖核苷酸脂質(zhì)體的制備。按照溶劑反相蒸發(fā)法進(jìn)行用于本發(fā)明的脂質(zhì)體的制備。在二乙醚中溶入100mg的大豆卵磷脂(Phospholipon90-NattermanPhospholipidGmbH)、二(十八烷基)二甲基溴化胺(dioctadecyldinethylammoniumbromide)(簡(jiǎn)寫為DIDAB-FhkaChemieAG)和0.1％w/w的α-生育酚(FlukaChemieAG)。以10∶1的摩爾比混合卵磷脂和陽離子表面活性劑。向有機(jī)相中以4份有機(jī)相/1份水的比加入重蒸餾水，這樣得到一種w/o的乳劑。在0℃，用一臺(tái)Branson2200近距離聲波定位器分批對(duì)該乳劑進(jìn)行聲處理10分鐘。然后減壓蒸發(fā)除去乙醚直到得到含水的脂質(zhì)體系統(tǒng)為止，然后使其流過孔直徑為0.4μm的聚碳酸酯膜(Nucleopore)。把所述的步驟至少重復(fù)三次以上。加入等于10倍脂質(zhì)重量的甘露醇并把懸浮液凍干。在5ml的等滲生理溶液中溶入50mg的分子量為28,000的一種多脫氧核糖核苷酸，它是通過按照USP4,985,552解聚得到的。把上述得到的凍干物溶于5ml的重蒸餾水中?；旌喜嚢鑳上?。在這樣得到的乳劑中，卵磷脂的濃度為10mg/ml而多脫氧核糖核苷酸的濃度為5mg/ml。實(shí)施例2(對(duì)照)按照現(xiàn)有技術(shù)(Gursoy等Pharmazie48(19-93)H7559-560)，制備把多脫氧核糖核苷酸包裹在脂質(zhì)體中的多脫氧核糖核苷酸脂質(zhì)體。在容器中分別干燥具有上述相同成分的實(shí)施例1的相同有機(jī)相。加入制備前述實(shí)施例的多脫氧核糖核苷酸溶液所用的分子量為16,000的多脫氧核糖核苷酸的水溶液。通過超聲處理得到包有活性成分的脂質(zhì)體囊。卵磷脂和多脫氧核糖核苷酸的濃度與實(shí)施例1的復(fù)合物的相同。實(shí)施例3用電泳方法證實(shí)實(shí)施例1的多脫氧核糖核苷酸-脂質(zhì)體復(fù)合物的形成。電泳是在含有0.5g/ml的溴化乙錠作熒光劑的3％瓊脂糖凝膠中進(jìn)行。電泳系統(tǒng)是由含有厚度為1-3mm的凝膠層的小電泳室組成，施加50mV的電場(chǎng)。在凝膠中靠近陰極的6個(gè)不同的區(qū)分別加入20μl的實(shí)施例1的溶液(多脫氧核糖核苷酸的濃度為5mg/ml)以及各含有4、3、2、1、0.5mg/ml的多脫氧核糖核苷酸的溶液。施加電場(chǎng)40分鐘。多脫氧核糖核苷酸從加入?yún)^(qū)向陽極移動(dòng)。在電泳運(yùn)動(dòng)結(jié)束時(shí)，用溴化乙錠給瓊脂糖凝膠染色。該脂質(zhì)體復(fù)合物沒有顯示任何顏色。在凝膠中與多脫氧核糖核苷酸溶液的加入點(diǎn)相關(guān)的帶是明顯的，它的強(qiáng)度與加入的量成正比。實(shí)施例4通過用新鮮配制的所述復(fù)合物的樣品溶液和用在25℃密閉容器黑暗中保存30天的該溶液樣品治療大鼠而評(píng)估多脫氧核糖核苷酸的抗炎活性來對(duì)比按照實(shí)施例1所獲得的脂質(zhì)體—多脫氧核糖核苷酸復(fù)合物和復(fù)合物其中多脫氧核糖核苷酸包括在脂質(zhì)體內(nèi)部(實(shí)施例2，對(duì)照)的穩(wěn)定性。使用體重為250-270g的SpragueDawley雄性大鼠。分成三組，每組18只動(dòng)物，給每組大鼠中的每只分別以特定劑量把下列溶液中的一種進(jìn)行靜脈內(nèi)給藥1.對(duì)照組生理溶液，2ml/Kg。2.用脂質(zhì)體-多脫氧核糖核苷酸復(fù)合物(參見實(shí)施例1〕的治療組含有用量相當(dāng)于多脫氧核糖核苷酸濃度為1mg/ml的復(fù)合物的生理溶液，2mg/Kg。3.用按照A.Gursoy等(見上)的脂質(zhì)體-多脫氧核糖核苷酸復(fù)合物的治療組含有用量相當(dāng)于多脫氧核糖核苷酸濃度為1mg/ml的復(fù)合物的生理溶液，2mg/Kg。治療30分鐘后，在適度乙醚麻醉下，通過口服而經(jīng)胸膜內(nèi)途徑把0.5ml的1％w/v的角叉菜膠生理溶液和5ml的水進(jìn)行給藥來引起動(dòng)物的胸膜炎。6小時(shí)后處死動(dòng)物。用一只注射器收集胸膜滲出物，通過檢測(cè)髓過氧物酶(MPO)來確定多形核嗜中性白細(xì)胞(PMN)的含量，其中髓過氧物酶是這些細(xì)胞的特征酶。按照SchierwagenC.等在J.Pharmacol.Methods231791990中所述進(jìn)行測(cè)定。攪拌滲出物樣品，然后把0.2ml加入到4.8ml的0.5％w/v的HTAB(溴化十六烷基三甲銨)緩沖溶液中。然后在80℃下把樣品冷凍從而使細(xì)胞碎裂、解凍和然后經(jīng)過80瓦聲處理1分鐘。然后把該制備液加熱到60℃兩小時(shí)從而降解髓過氧物酶抑制劑并且接著在4℃以11,800g離心5分鐘。在進(jìn)行酶的分光光度測(cè)定法(波長650nm)之前，用HTAB溶液稀釋該樣品從而使讀數(shù)值在使用純的MPO酶得到的標(biāo)準(zhǔn)曲線的范圍內(nèi)。結(jié)果用相對(duì)于對(duì)照組中測(cè)定的MPO的量的百分比變化來表示并且列于下列表I中。該表顯示出在零時(shí)兩種制劑的抗炎活性基本上相同，30天后，本發(fā)明的制劑的活性不能顯著區(qū)別于初始值，而含有對(duì)照實(shí)施例的脂質(zhì)體的制劑相對(duì)于初始值有70％的活性下降。同時(shí)注意到后一種制劑被降解了，因?yàn)樗喑霈F(xiàn)了變清澈并且存在不能再懸浮的沉淀物。用該制劑治療的動(dòng)物顯示出了明顯的疼痛癥狀和顯著的呼吸困難。實(shí)施例5把含有上述新鮮配制的復(fù)合物的樣品溶液和在25℃密閉容器黑暗中放置30天的相同溶液的樣品對(duì)用抑制內(nèi)源性氧化氮(NO)的釋放誘發(fā)的高血壓的大鼠給藥，通過評(píng)估多脫氧核糖核苷酸對(duì)患有高血壓的大鼠的抗高血壓活性，來比較按照實(shí)施例1得到的脂質(zhì)體—多脫氧核糖核苷酸復(fù)合物與其中多脫氧核糖核苷酸包含在脂質(zhì)體中間的復(fù)合物(實(shí)施例2的對(duì)照)的穩(wěn)定性。用氨基甲酸乙酯麻醉體重量為250±20g的沒禁食的SpragueDawley雄性鼠。將兩只導(dǎo)管分別插在左頸動(dòng)脈中來記錄平均動(dòng)脈血壓(MABP)，和右頸靜脈中，用來把試驗(yàn)組合物給藥。在氣管中插入套管并把動(dòng)物體溫保持在37℃。在整個(gè)試驗(yàn)中連續(xù)記錄MABP。使用肝素(500U.I./Kg靜脈注射)來防止血液在記錄系統(tǒng)中凝固。30分鐘后，在同一小組中把大鼠隨機(jī)化。通過使用藥丸馬上接著灌輸進(jìn)行組合物或安慰劑的治療。從灌輸開始1小時(shí)后，所有動(dòng)物接受L-NAME的靜脈藥團(tuán)(10mg/Kg)。注射L-NAME后，將灌輸持續(xù)30分鐘。由組合物誘導(dǎo)的壓力改善是用L-NAME治療后30分鐘的間隔中曲線下的面積(AUC)來表示。在試驗(yàn)?zāi)Ｐ椭校诳紤]下把動(dòng)物分為四組(每組6只動(dòng)物)，給它們中的每只用1ml/Kg的藥團(tuán)隨后立即用2ml/Kg/h的灌輸液靜脈內(nèi)治療，有下列說明1.對(duì)照組(CTR)1ml/Kg藥團(tuán)的生理溶液+2ml/Kg/h灌輸液。2.用濃度為10mg/ml的分子量為28,000的多脫氧核糖核苷酸藥團(tuán)的生理溶液的治療組10mg/Kg的劑量(藥團(tuán))+20mg/Kg/h的灌輸液。3.用脫氧核苷酸濃度為5mg/ml的本發(fā)明脂質(zhì)體—多脫氧核糖核苷酸復(fù)合物藥團(tuán)的生理溶液的治療組5mg/Kg的劑量(藥團(tuán))+10mg/Kg/h的灌輸液。4.用脫氧核苷酸濃度為5mg/ml的對(duì)照實(shí)施例2的脂質(zhì)體—脫氧核苷酸復(fù)合物的藥團(tuán)的生理溶液的治療組5mg/Kg的劑量(藥團(tuán))+10mg/Kg/h的灌輸液。表II中報(bào)道了使用含有上述脂質(zhì)體復(fù)合物的新鮮配制的樣品溶液和在25℃黑暗中的密閉容器存放的相同溶液的樣品測(cè)定的藥理活性。結(jié)果顯示在零時(shí)兩種制劑幾乎具有相同的抗高血壓活性，30天后，現(xiàn)有技術(shù)的制劑的活性與相應(yīng)的起始值比下降了大約70％。用所述制劑治療的動(dòng)物表現(xiàn)出伴有明顯呼吸困難的疼痛癥狀。實(shí)施例6把含有上述新鮮配制的復(fù)合物的樣品溶液和在25℃密閉容器黑暗中放置30天的相同溶液的樣品對(duì)大鼠給藥，通過評(píng)估多脫氧核糖核苷酸對(duì)大鼠的抗血栓形成的活性，來比較按照實(shí)施例1得到的臘質(zhì)體—多脫氧核糖核苷酸復(fù)合物與其中多脫氧核糖核苷酸包含在脂質(zhì)體內(nèi)部的復(fù)合物(對(duì)照實(shí)施例2)的穩(wěn)定性。用氨基甲酸乙酯(1.25g/Kg腹膜內(nèi)注射)麻醉體重為200-230g的禁食16小時(shí)的SpragueDawley雄性鼠。分離動(dòng)物的右頸動(dòng)脈和左頸靜脈后，在右動(dòng)脈上放置雙極性電極(LesionProducingDevice3500UgoBasile-Comerio，Varese)，并且在0.5cm處用一個(gè)熱敏感探針連接一臺(tái)多種波動(dòng)描記器。在靜脈中插入一只導(dǎo)管來把該制劑給藥。穩(wěn)定15分鐘后，通過電極連續(xù)記錄內(nèi)皮損傷誘發(fā)前5分鐘到后60分鐘動(dòng)脈的溫度。這通過降低血管溫度和血流減緩之間的關(guān)系將間接測(cè)定內(nèi)皮血栓形成。通過一系列的5次電刺激引起內(nèi)皮損傷。一次到另一次之間的間隔為一分鐘的刺激使得在損傷的動(dòng)脈上所測(cè)定的電阻是10mA。用一個(gè)測(cè)試器測(cè)定電阻并且在第30秒的刺激期間對(duì)每只動(dòng)物都進(jìn)行調(diào)節(jié)，并且需要施加的電壓大約是30伏。在電刺激前(基值)馬上測(cè)定動(dòng)脈溫度并且在刺激后固定時(shí)間間隔(5、10、15、30、45和60分鐘)測(cè)定動(dòng)脈溫度。每組由10-12只大鼠組成。在開始電刺激前5分鐘把靜脈藥團(tuán)給藥進(jìn)行全部的治療。這些組如下1.對(duì)照組SHAM，其中對(duì)動(dòng)物手術(shù)并且如上述監(jiān)控，但是它們沒有經(jīng)過電刺激。2.對(duì)照組，用生理溶液治療(1.5ml/Kg靜脈注射)。3.用脂質(zhì)體—多脫氧核糖核苷酸復(fù)合物(參見實(shí)施例1)的治療組含有用量相當(dāng)于多脫氧核糖核苷酸濃度為5mg/ml的復(fù)合物的生理溶液；給藥劑量7.5mg/Kg。4.用A.Gursoy等的脂質(zhì)體—多脫氧核糖核苷酸復(fù)合物(見上述)的治療組含有用量相當(dāng)于多脫氧核糖核苷酸濃度為5mg/ml的該復(fù)合物的生理溶液；給藥劑量7.5mg/Kg。在用兩種復(fù)合物制備溶液的同時(shí)和把所述溶液在25℃黑暗處存放30天后測(cè)定活性。表III報(bào)導(dǎo)了結(jié)果。從該表中，可以注意到當(dāng)在零時(shí)兩種制劑的抗血栓形成活性是基本上相當(dāng)?shù)模?0天后，現(xiàn)有技術(shù)制劑的活性與相應(yīng)的初始值相比降低了大約70％。實(shí)施例7單一劑量給藥的含有本發(fā)明所用的脂質(zhì)體的藥物制劑。含有凍干脂質(zhì)體的3ml無菌小瓶—phospholipon90mg100—DIDABmg10—α-生育酚mg0.1—蔗糖g1使用前加1ml注射用水。然后以無菌方式加入下列無菌溶液，生產(chǎn)前用1ml可處理的無菌注射器加入上述—多脫氧核糖核苷酸(參見實(shí)施例1)mg10—檸檬酸三鈉二水合物mg2.5—注射用水和防腐劑，足量到ml1實(shí)施例8用于整個(gè)治療循環(huán)的臨時(shí)藥物制劑?！袃龈芍|(zhì)體的30ml的無菌瓶—phospholipon90gl—DIDABmg100—α-生育酚mg1—蔗糖g10使用前，以無菌方式在瓶中加入10ml注射用水。向這樣制備的乳劑中加入15ml瓶或10ml可處理的生產(chǎn)前注射器中含有的下列無菌溶液—多脫氧核糖核苷酸(參見實(shí)施例1)mg100—檸檬酸三鈉二水合物mg25—注射用水和防腐劑足量到ml10該制劑提供了用于5天持續(xù)治療的大量20mg/死亡劑量。表I在評(píng)估該多脫氧核糖核苷酸的抗炎活性過程(降低患有用角叉菜膠誘發(fā)的胸膜炎的小鼠胸膜滲出物中髓過氧物酶活性)中與Gursoy等的脂質(zhì)體-多脫氧核糖核苷酸復(fù)合物(表中第3組)相比實(shí)施例1的復(fù)合物(表中第2組)在第30天的穩(wěn)定性表II在評(píng)估該多脫氧核糖核苷酸的抗高血壓活性過程中與Gursoy等的脂質(zhì)體-多脫氧核糖核苷酸復(fù)合物(表中第4組)相比實(shí)施例1的復(fù)合物(表中第3組)在第30天的穩(wěn)定性*該多脫氧核糖核苷酸的給藥劑量(10mg/Kg藥團(tuán)+20mg/Kg/h)過低而不能產(chǎn)生與對(duì)照組相比有意義的抗高血壓活性。表III在評(píng)估該多脫氧核糖核苷酸的抗血栓形成活性過程中與Gursoy等的脂質(zhì)體-多脫氧核糖核苷酸復(fù)合物(第4組)相比實(shí)施例1的復(fù)合物(第3組)在第30天的穩(wěn)定性。</tables>權(quán)利要求1.由陽離子型脂質(zhì)體和具有7,000-60,000道爾頓分子量、優(yōu)選10,000-60,000道爾頓分子量的多脫氧核糖核苷酸形成的復(fù)合物作一種藥劑的用途，其中所述的多脫氧核糖核苷酸是通過把核酸解聚得到的，在復(fù)合物中多脫氧核糖核苷酸位于脂質(zhì)體的外表面。2.權(quán)利要求1的復(fù)合物用于制備具有抗炎活性藥劑的用途。3.權(quán)利要求1的復(fù)合物用于制備具有抗血栓形成活性藥劑的用途。4.權(quán)利要求1的復(fù)合物用于制備具有抗高血壓活性藥劑的用途。5.權(quán)利要求1的復(fù)合物用于制備需要持續(xù)釋放內(nèi)皮前列環(huán)素的病理學(xué)療法的治療的藥劑的用途。6.按照權(quán)利要求1-5的復(fù)合物，其中多脫氧核糖核苷酸是去纖苷酸。7.按照權(quán)利要求6的復(fù)合物，其中多脫氧核糖核苷酸的分子量在15,000到30,000的范圍中。8.按照權(quán)利要求1-7的組合物，其中加入一種或多種抗氧化劑，優(yōu)選α-生育酚。9.按照權(quán)利要求1-8的復(fù)合物，其中存在含有一種或多種單一、雙-取代的氨基或季銨基團(tuán)的陽離子表面活性劑，所述的季銨基團(tuán)含有一個(gè)或多個(gè)碳原子數(shù)為8到22的脂族鏈，優(yōu)選所述的陽離子表面活性劑是具有18個(gè)碳原子脂族鏈的季銨表面活性劑。10.按照權(quán)利要求1-9的復(fù)合物，其中脂質(zhì)體的脂質(zhì)/脂質(zhì)類和陽離子表面活性劑總量之間的摩爾比為10∶0.05到10∶3，優(yōu)選為10∶1。11.按照權(quán)利要求10的復(fù)合物，其中與卵磷脂(或磷脂酰乙醇胺)一起存在的還有第二種不同的脂質(zhì)，并且卵磷脂(或磷脂酰乙胺)第二種脂質(zhì)表面活性劑的摩爾比范圍從9∶1∶0.05到7∶3∶3，優(yōu)選8∶2∶1。12.按照權(quán)利要求1-11的復(fù)合物，其中脂質(zhì)體和活性組分之間重量比從10∶2到10∶0.1，優(yōu)選為10∶1。13.按照權(quán)利要求1-12的復(fù)合物，它可以通過包括下列步驟的工藝得到a.通過下列方式制備脂質(zhì)體混合4份溶有脂質(zhì)、陽離子表面括性劑和抗氧化劑的極性或無極性的有機(jī)相和1份水，然后使所得到的兩相系統(tǒng)在0℃進(jìn)行聲處理5-20分鐘，并且在室溫和減壓條件下蒸發(fā)有機(jī)相，這樣形成一種乳濁液；b.使該乳濁液流過具有100到600nm、優(yōu)選400nm孔直徑的聚碳酸酯膜，把該步驟至少重復(fù)三次，c.在加入凍干輔助劑后凍干該乳濁液，從而使該輔助劑的用量至少是超過脂質(zhì)用量的7倍，優(yōu)選的超過量的量為10到15倍，d.在無菌環(huán)境中攪拌下把一種稀釋的無菌等滲的多脫氧核糖核苷酸水溶液加入到裝有凍干物的容器中，或者通過把無菌等滲溶液加入到裝有凍干脂質(zhì)體的容器中，并且在無菌環(huán)境下把這樣得到的乳濁液與含有活性成分的溶液混合，從而制成藥用乳劑。14.按照權(quán)利要求1-12的復(fù)合物，包含在用于非腸道給藥的藥劑中。15.權(quán)利要求1-14的復(fù)合物用于制備具有抗炎活性藥劑的用途。16.權(quán)利要求1-14的復(fù)合物用于制備具有抗血栓形成活性藥劑的用途。17.權(quán)利要求1-14的復(fù)合物用于制備具有抗高血壓活性藥利的用途。18.權(quán)利要求1-14的復(fù)合物用于制備治療需要持續(xù)釋放內(nèi)皮前列腺環(huán)素的病理情況的藥劑的用途。全文摘要本發(fā)明涉及一種復(fù)合物作藥劑特別是抗炎劑的用途,其中所述的復(fù)合物是由陽離子型脂質(zhì)體和具有分子量為7,000—60,000道爾頓的多脫氧核糖核苷酸形成的,該多脫氧核糖核苷酸是通過解聚核酸得到的,在所述的復(fù)合物中多脫氧核糖核苷酸位于脂質(zhì)體的外表面。文檔編號(hào)A61K31/715GK1277024SQ9910949公開日2000年12月20日申請(qǐng)日期1999年6月11日優(yōu)先權(quán)日1999年6月11日發(fā)明者R·波爾塔,L·菲爾羅,F·特倫托,C·納斯特魯茲,E·埃斯波斯托,E·梅內(nèi)加蒂申請(qǐng)人:克林諾斯生物藥品工業(yè)有限公司