專利名稱：核糖核苷酸還原酶抑制劑3－ap和3－amp的前藥形式的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及新的前藥形式的核糖核苷酸還原酶抑制劑及其治療癌癥和/或腫瘤的用途，該前藥具有高的水溶性、生物利用度和對體外代謝滅活的抵抗性。
背景技術(shù)：
癌癥是今天已知的頭號死亡原因，對很多實(shí)體瘤的有效治療仍是不清楚的。核糖核苷酸還原酶是細(xì)胞復(fù)制的基礎(chǔ)酶。人們相信對核糖核苷酸還原酶具有強(qiáng)抑制性的新的抗腫瘤藥物應(yīng)是對現(xiàn)存癌癥治療方案的有效補(bǔ)充。
在DNA的生物合成中，核糖核苷酸經(jīng)還原轉(zhuǎn)變?yōu)橄鄳?yīng)的脫氧核糖核苷酸是關(guān)鍵步驟，這是熟人們所悉的。因?yàn)槊撗鹾颂呛塑账嵩诓溉閯?dòng)物細(xì)胞中存在量極低，故研究者假設(shè)在阻斷DNA合成中核糖核苷酸的抑制劑可能比DNA聚合酶的抑制劑更有效。見Cory和Chiba，“對核苷二磷酸還原酶組分的直接聯(lián)合化療”，核糖核苷二磷酸還原酶活性的抑制劑，Cory，J.G.和Cory，A.M.Eds.；Pergamon PressOxford，1989；pp 245-264。所以，通過此工作人們相信開發(fā)核糖核苷酸還原酶的強(qiáng)抑制劑將創(chuàng)造出強(qiáng)有效的抗癌武器。
多年來，對新α-(N)-雜環(huán)基醛縮氨基硫脲(HCTs)，即一類核糖核苷二磷酸還原酶的最強(qiáng)抑制劑的研究，已引起人們極大關(guān)注。已報(bào)道了各種HCTs，如5-羥基吡啶-2-甲醛縮氨基硫脲(5HP)、4-甲基-5-氨基-1-甲?；愢s氨基硫脲(MAIQ-1)、5-(乙?；被?吡啶-2-甲醛縮氨基硫脲(5-AAP)、3-和5-氨基吡啶-2-甲醛縮氨基硫脲(3-AP和5-AP)及其4-甲基衍生物(3-AMP和5-AMP)、3-和5-羥基-4-甲基吡啶-2-甲本醛縮氨基硫脲(3-HMP和5-HMP)。見DeConti等，Cancer Res，1972，32，1455-1462；Agrawal等，J Med.Chem，1976，19，970-972；French等，J.Med.Chem，1974，17，172-181；Liu等，J.Med.Chem.1992，35，3672-3677；Wang等，J.Med Chem.，1992，35，3667-3671。
對HCTs系列的結(jié)構(gòu)-活性關(guān)系的研究表明，3-AP和3-AMP對L1210白血病、M-109肺癌和A2780人卵巢癌比現(xiàn)有的其它HCTs顯示出了更好的治療效果。Liu等，J.Med.Chem.，1992，35，3672-3677；Agrawal等，“α-(N)-雜環(huán)基甲醛縮氨基硫脲的化學(xué)和生物學(xué)活性”，Progress inMedicinal Chemistry；Ellis，G.P；West，G.B.，Eds.；Elsevier/North-Holland Biomedical PressNew York，1978；Vol.15，pp 321-356。此外，與羥基脲(HU)相比，3-AP和3-AMP是具有顯著抗腫瘤活性的有效試劑，在臨床上是已允許使用的核糖核苷酸還原酶抑制劑。
盡管3-AP和3-AMP顯示了體內(nèi)活性，然而HCT系列中這些新的前沿化合物的治療可能性受到其有限的水溶性和生物利用度的限制。見Liu等，J.Med.Chem.，1992，35，3672。此外，對3-AP和3-AMP的氨基官能團(tuán)的N-乙?；砹藴缁钸@些抗腫瘤劑的潛在的未解決的代謝途徑。出處同上。為了解決這些問題，本發(fā)明直接針對3-AP和3-AMP的幾種水溶性前藥。這些包括含磷酸的前藥。
發(fā)明目的本發(fā)明的一個(gè)目的是提供水溶性前藥形式的3-AP和3-AMP，以增加3-AP和3-AMP的濃度，使其能轉(zhuǎn)運(yùn)至病人體內(nèi)的活性位點(diǎn)。
本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供3-AP和3-AMP的前藥形式，這樣增加了其生物利用度。
本發(fā)明的第三個(gè)目的是提供3-AP和3-AMP的前藥形式，這樣降低了其氨基官能團(tuán)的體內(nèi)乙酰化作用。
本發(fā)明的第四個(gè)目的是提供治療動(dòng)物或人類患者患有的腫瘤的方法，該方法使用本發(fā)明的前藥化合物。
發(fā)明簡述本發(fā)明涉及3-氨基吡啶-2-甲醛縮氨基硫脲(3-AP)和3-氨基-4-甲基吡啶-2-甲醛縮氨基硫脲(3-AMP)的前藥形式，它們具有高的水溶性、生物利用度和對代謝滅活的抵抗性。在3-AP和3-AMP的前藥形式中，它們比3-AP和3-AMP顯著地易于溶解，其中3-AP或3-AMP的3-氨基衍生為甲基或脲烷部分，優(yōu)選脲烷，其被有機(jī)磷酸基團(tuán)或二硫基團(tuán)取代，如

圖1所示。所設(shè)計(jì)的此含磷酸的前藥在中性pH條件下得到了好的水溶性和高的生物利用度。水溶性二硫化物前藥可以在谷胱甘肽和/或谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶濃度升高的腫瘤細(xì)胞中選擇性活化，由此開發(fā)腫瘤多重抗藥性的已知方法。在所有的情況中，氨基甲?；八庍B接劑作為對母體藥物3-AP和3-AMP的3-氨基取代基的暫時(shí)保護(hù)基，使這些前藥通過N-乙?；饔眠M(jìn)行代謝滅活的可能性變小。
本發(fā)明的前藥用于治療動(dòng)物或人類患者患有的腫瘤。在體內(nèi)，這些前藥代謝產(chǎn)生活性治療劑3-AP和3-AMP。比較使用本發(fā)明前藥和母體治療劑抗哺乳動(dòng)物的實(shí)體瘤的生長，表明這些前藥增加了效力。本發(fā)明前藥的特別優(yōu)選的實(shí)施方案包括下面的前藥I和II，它們是3-AP的有機(jī)磷酸衍生物，該有機(jī)磷酸基團(tuán)通過脲烷部分在3-氨基位置與3-AP連接；而前藥III，它是3-AP的二硫化物衍生物，該二硫基團(tuán)通過脲烷在3-氨基位置與3-AP連接。還優(yōu)選3-AMP類似的前藥形式。
前藥I 前藥II
前藥III R＝CH2CH2NH2CH2CH2NHAcCH2CH2OHCH2COOH，等本發(fā)明涉及下式的化合物
其中R4是H或甲基，R5是CHR、芐基或鄰位或?qū)ξ蝗〈钠S基；R是H、CH3、CH2-CH3、CH2CH2CH3或CH3CHCH3；R′是游離的磷酸根、磷酸鹽或-S-S-R″基團(tuán)；R″是CH2CH2NHR6、CH2CH2OH、CH2COOR7、鄰位或?qū)ξ蝗〈腃1-C3烷基苯基或鄰位或?qū)ξ蝗〈南趸交?；R6是H、C1-C4?；?、三氟乙酰基、苯甲?；蛉〈谋郊柞；?，和R7是H、C1-C4烷基、苯基、取代的苯基或芐基或者取代的芐基。
本發(fā)明還涉及含有抗腫瘤有效量的、上述任何一種或多種前藥化合物的藥物劑型形式的藥物組合物。選擇性地，并優(yōu)選地，本發(fā)明的藥物組合物還含有藥用添加劑、稀釋劑或賦形劑，并且該優(yōu)選的劑型是口服劑型。
本發(fā)明的治療包括給患有癌癥或腫瘤的患者使用抗腫瘤有效量的至少一種或多種本發(fā)明的前藥化合物。在本發(fā)明的此方面，優(yōu)選的是該癌癥將被緩解，對于腫瘤的情況，此腫瘤將基本萎縮。
附圖簡述圖1描述了本發(fā)明的前藥。
圖2&3描述了分別含磷酸和二硫鍵前藥的藥物體外和體內(nèi)釋放機(jī)制。
圖4&5，方案4和5提供了前藥I的合成(對位和鄰位)。
圖6，方案6提供了前藥II的四種合成方法。
圖7給出了二硫化物前藥29的合成。
圖8，方案8提供了前藥III的合成。
圖9描述了在肝S9部分存在下前藥I(對位)向3-AP的轉(zhuǎn)化圖。
圖10和11描述了用對照、3-AP或前藥I(對位)在治療Balb/c小鼠中M109腫瘤生長減緩的比較圖。
發(fā)明詳述在說明書中，術(shù)語“患者”用來描述某種動(dòng)物，包括哺乳動(dòng)物如人，給他們提供本發(fā)明組合物進(jìn)行治療。對于治療那些對特定的動(dòng)物如人的特別的感染、癥狀或病癥，患者是指特定的動(dòng)物。
本說明書中，術(shù)語“瘤形成”是指一種病理過程，該過程導(dǎo)致癌或惡性腫瘤，即由細(xì)胞增殖產(chǎn)生的異常組織的形成和生長，該組織一般比正常組織生長更快并在引起新生長的刺激原停止后仍繼續(xù)生長。惡性腫瘤顯示出部分或全部缺乏正常組織的結(jié)構(gòu)性組織和功能協(xié)調(diào)性，并總是侵染周圍的組織，向若干位點(diǎn)轉(zhuǎn)移，并在設(shè)法除去后常常復(fù)發(fā)，除非治療適當(dāng)，否則會引起患者死亡。在本文中，術(shù)語“瘤形成”用來描述所有的癌癥狀，包括與惡性血源性、腹水和實(shí)體瘤有關(guān)的病理過程。
在本說明書中，術(shù)語“抗腫瘤有效量”指用于治療癌性腫瘤患者以防止該腫瘤進(jìn)一步生長，使該生長得以控制，優(yōu)選緩解該腫瘤的本發(fā)明化合物的量。
在本說明書中，術(shù)語“治療有效量”指給哺乳動(dòng)物患者，特別是包括人的癌癥患者使用本發(fā)明化合物以降低或抑制血源性、腹水或?qū)嶓w瘤的生長和擴(kuò)散的量。優(yōu)選的是本發(fā)明的化合物會導(dǎo)致惡性血源性、腹水或?qū)嶓w瘤緩解。對于實(shí)體瘤，本發(fā)明的化合物將抑制腫瘤組織的進(jìn)一步生長并優(yōu)選使存在的腫瘤萎縮。
術(shù)語“保護(hù)”是指用在任何一種或多種中間體中的磷酸基團(tuán)或羥基受到保護(hù)，以避免不需要的反應(yīng)，但是該保護(hù)在選擇的條件下可除去。為此使用的保護(hù)基包括，例如，三氯乙基、乙基、氰基乙基、三甲基甲硅烷基乙基、甲硅烷基乙基、叔丁基二甲基甲硅烷基、叔丁基、三苯基甲硅烷基和叔丁基二苯基甲硅烷基等等。由甲硅烷基類保護(hù)基、醚保護(hù)基、酯保護(hù)基和有關(guān)基團(tuán)中可廣泛地選擇保護(hù)基，每個(gè)保護(hù)基根據(jù)其保護(hù)某部分以避免發(fā)生不需要的反應(yīng)的能力及其除去的容易程度和化學(xué)相容性進(jìn)行選擇。
本發(fā)明涉及3-氨基吡啶-2-甲醛縮氨基硫脲(3-AP)和3-氨基-4-甲基吡啶-2-甲醛縮氨基硫脲(3-AMP)的前藥形式，分別與3-AP和/或3-AMP比較，這些前藥具有高的水溶性、生物利用度和/或?qū)Υx滅活表現(xiàn)出的抗性。為了制備比母體藥物3-AP和3-AMP顯著地更易溶解的前藥形式，3-AP或3-AMP的3-氨基部分衍生出甲基或脲烷部分，優(yōu)選脲烷部分，如圖1所示其被有機(jī)磷酸基團(tuán)或二硫基團(tuán)取代。本發(fā)明的前藥比非前藥形式水溶性和/或活性有顯著提高。
3-AP和3-AMP前藥形式的合成前藥I的合成在按照本發(fā)明合成前藥I(對位)過程中，如圖4，方案4所示，磷酸二酯2a與2-苯乙烯基-3-甲酸吡啶類似物6在(PhO)2P(O)N3和EtN3的存在下反應(yīng)，來制備磷酸三酯脲烷化合物7，其經(jīng)臭氧分解后，再與氨基硫脲反應(yīng)并除去磷酸酯保護(hù)基，制得3-AP的前藥I(對位)。圖5，方案5給出了前藥I(鄰位)的類似合成方法，其中將2-乙烯基吡啶-3-甲酸衍生物6與磷酸三酯2b縮合而制備脲烷化合物10，隨后將其進(jìn)行臭氧分解以制備3-脲烷-吡啶-2-甲醛衍生物11，將其與氨基硫脲縮合制備縮氨基硫脲12，將其置于酸性條件下(存在于二氯甲烷中的三氟乙酸)除去三甲基甲硅烷基乙基磷酸酯保護(hù)基(如圖5所示)，制得前藥I(對位)。
前藥II的合成圖6，方案6中給出了合成前藥II的合成方案。前藥II類似于前藥I，不同的是前藥I中的脲烷側(cè)鏈中的苯環(huán)被除去。在圖6另一方案6中，從標(biāo)準(zhǔn)的前體容易合或前藥II。在方案6中，磷酸三酯連接劑(15a-b)與2-甲基吡啶衍生物13或2-乙烯基吡啶衍生物14(其可通過2-氯-3-氨基吡啶進(jìn)行Stille乙烯基化或其它方法制備)反應(yīng)制備脲烷衍生物16(a-b)和17(a-b)，將它們再進(jìn)行氧化，例如用臭氧或二氧化硒，形成2-甲醛衍生物18和19。這些2-甲醛衍生物中的每個(gè)再與氨基硫脲反應(yīng)，然后進(jìn)行磷酸三酯的脫保護(hù)而制得前藥II。
前藥III的合成前藥III(鄰位形式，其中R是對位硝基苯基)的合成描述于圖7，方案7中。在此合成中，將乙烯基衍生物5(按照本發(fā)明圖4，方案4制備)進(jìn)行臭氧分解以制備吡啶-2-甲醛21，將其衍生為二甲基縮醛衍生物22，然后脫酯化得列縮醛甲酸衍生物23。將縮醛甲酸衍生物23與二硫化物中間體24(由2-硫醇-芐基醇25和對硝基苯基氯代硫醇鹽26縮合制備)在(PhO)2P(O)N3存在下在三乙胺和苯中反應(yīng)，以制備衍生的二甲基縮醛衍生物27，將其再置于適當(dāng)升高的溫度下和酸性條件下在水/THF中以轉(zhuǎn)變?yōu)榧兹┭苌?8。將甲醛衍生物28隨后與氨基硫脲在催化劑量的濃鹽酸的存在下反應(yīng)制備前藥29(鄰位)。通過或以與鄰位形式類似的方法合成對位形式的前藥29，不同的是中間體24被修飾以便此芐醇基團(tuán)在硫的對位(通過使用對巰基芐醇)，而不是在鄰位。
圖8顯示了前藥III的鄰位形式的合成，其中R是三氟乙?；?。二硫化物30進(jìn)行轉(zhuǎn)硫醇作用制備中間體混合的二硫化物32，該二硫化物30是通過鄰位巰基芐醇和三氟乙?；陌吠榛虼见}33的氧化制得?；旌系亩蚧?2隨后與縮醛甲酸衍生物23在(PhO)2P(O)N3和三乙胺的存在下在苯中在80℃反應(yīng)制備脲烷衍生物33，將其隨后用甲苯磺酸在水和四氫呋喃中在適當(dāng)升高的溫度(60℃)下處理，以制備甲醛衍生物34。再將甲醛衍生物34與氨基硫脲在催化劑量的酸的存在下反應(yīng)，制備前藥III，其中R是三氟乙?；?。
本發(fā)明的一些其它前藥化合物以及相關(guān)的、等同化合物，可以通過類似的、簡單修改的上述合成途徑、方法而容易合成，這些方法是本領(lǐng)域熟知的。
水溶性為了檢測前藥I(二鈉鹽)與3-AP的水溶性比較，使用下面的方法。為了檢測3-AP在去離子水中的溶解性，將5mg 3-AP置于125ml錐形瓶中，向其中加入100ml水。室溫下將此混合物搖勻。2小時(shí)后，固體3-AP不能全部溶解于水。3-AP在去離子水中的總水溶解度＜1mg/20ml。對于前藥I(對位)的情況，將8mg前藥置于50ml錐形瓶中。向前藥中加入0.5ml水，只過了幾分鐘后，就很容易溶解產(chǎn)生清澈的淡黃色溶液。該前藥(二鈉鹽)在去離子水中的總水溶解度≥16mg/ml，比3-AP在水中的溶解度增加了300倍以上。
生物活性含磷酸的前藥的生物活性產(chǎn)生的預(yù)計(jì)途徑是通過將磷酸基團(tuán)連接至甲基或脲烷部分的磷-氧鍵裂解，然后通過裂解掉醌的甲基化物、甲醛和/或CO2，得到母體藥物3-AP或3-AMP，為最終的產(chǎn)物。這些途徑描述于圖2。醌的甲基化物本身可引起DNA的損壞，并因此對抑制細(xì)胞復(fù)制有貢獻(xiàn)。因此，這些醌的甲基化物可以作為添加劑或協(xié)同試劑與母體藥物一起產(chǎn)生協(xié)同的抑制作用。
圖3說明了二硫鍵連接的前藥的生物活性的預(yù)計(jì)途徑。雖不受理論或機(jī)理限制，但人們認(rèn)為在與GSH或相應(yīng)的硫醇孵育時(shí)，通過級聯(lián)的方式發(fā)生了二硫鍵連接的前藥的還原活化，其中連接在芳香環(huán)上的硫取代基應(yīng)作為離去基團(tuán)(由于芳香環(huán)的吸電子作用)，然后通過與含磷酸前藥的相似的裂解機(jī)理，得到治療有效試劑3-AP或3-AMP及另一種醌的甲基化物作為最終產(chǎn)物。
圖9表明在鼠肝臟的S9片段存在下前藥I(對位)在體外向3-AP的轉(zhuǎn)變。將存在于培養(yǎng)基中的前藥I的1μM溶液與約2.5mg肝臟S9片段孵育。該前藥的濃度很快降低并在37℃孵育100分鐘后低于檢測閾值。約80％的前藥回收為3-AP并且未發(fā)現(xiàn)其它代謝物。前藥I向3-AP轉(zhuǎn)變的速率為20納摩爾/分鐘/毫克鼠肝臟組織?；厥盏?-AP在肝臟S9片段中是穩(wěn)定的。當(dāng)前藥I在37℃的培養(yǎng)基中孵育2小時(shí)時(shí)，該前藥的濃度相對穩(wěn)定，并且通過HPLC檢測未發(fā)現(xiàn)3-AP。此結(jié)果表明由前藥I釋放3-AP是一種酶處理過程。
體內(nèi)效果前藥I和3-AP的體內(nèi)效果比較的試驗(yàn)結(jié)果見圖10。在第0天給Balb/c小鼠在右肋皮下注射0.2ml 5×106細(xì)胞/ml的M109腫瘤細(xì)胞懸浮液，該腫瘤細(xì)胞已在培養(yǎng)基中生長至對數(shù)階段，胰蛋白酶消化分離，用PBS洗滌并重組。在第3天給這些鼠注射兩次3-AP、前藥I或載體對照物，第4天注射一次，第6天注射兩次而第7天注射一次。十只小鼠只注射3-AP，每次注射量為4.5mg/kg體重。十只小鼠只注射前藥I，每次注射量為10mg/kg體重。十只小鼠只注射對照載體。在第7、10、13和17天通過觸診檢測腫瘤的大小，并將這些結(jié)果列于圖10。該試驗(yàn)清楚地表明前藥I在降低腫瘤生長方面比等摩爾量的3-AP更有效。圖11還比較了用兩種對照載體(1-磷酸鹽緩沖血清及2-10％DMSO)使Balb/c小鼠的M109的生長降低。這些結(jié)果也顯示了在摩爾對摩爾的基礎(chǔ)上該前藥I比3-AP更有效。將對照1作為前藥的對照；對照2用作母體藥物的對照。
本發(fā)明的治療方面涉及治療動(dòng)物或人類患有的腫瘤，特別是人類患有的腫瘤的方法，該方法包括使用本發(fā)明抗腫瘤有效量的前藥化合物，以抑制這些腫瘤的進(jìn)一步生長，讓此生長得到控制，優(yōu)選使該腫瘤緩解。本發(fā)明的方法中，給癌癥或者惡性或良性腫瘤患者使用治療有效量的至少一種本發(fā)明的前藥以抑制這些癌癥或腫瘤的生長和擴(kuò)散。優(yōu)選的是在本發(fā)明的治療內(nèi)容中，治療有效量會使癌癥或血源性腹水或?qū)嶓w瘤緩解。在實(shí)體瘤的情況下，優(yōu)選該腫瘤的大小確實(shí)會縮小。
基于這些前藥化合物的藥物組合物含有治療腫瘤有效量的上述化合物，這些化合物選擇性地與藥用添加劑、載體或賦形劑結(jié)合。本領(lǐng)域普通技術(shù)人員會意識到治療有效量將隨所治療的病癥、其嚴(yán)重性、所用治療方案、所用試劑的藥代動(dòng)力學(xué)特性和所治療的患者(動(dòng)物或人)的不同而變化。
一般優(yōu)選以口服給藥形式使用該藥物組合物，更優(yōu)選是腸溶包衣制劑如片劑、膠囊等，但是可通過非腸道、靜脈內(nèi)、肌肉內(nèi)、透皮、舌下、皮下、栓劑或其它途徑使用某些制劑。靜脈內(nèi)和肌肉內(nèi)制劑優(yōu)選在滅菌生理鹽水中使用。當(dāng)然，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員可修改本說明書中的藥物組合物，以便在不使本發(fā)明的組合物不穩(wěn)定或損害其治療活性的前題下，提供特定給藥途徑的一些制劑。
本發(fā)明的化合物是活性抗腫瘤試劑3-AP和3-AMP的前藥。在某些藥物劑型中，根據(jù)給藥途徑，某些本發(fā)明的化合物可能比其它化合物更適合。本領(lǐng)域普通技術(shù)人員會意識到如何利用本發(fā)明化合物的不同化學(xué)性質(zhì)以提供一種或多種劑型，從而有利于活性化合物向患者體內(nèi)靶位點(diǎn)的轉(zhuǎn)運(yùn)。在將本發(fā)明的化合物轉(zhuǎn)運(yùn)到患者體內(nèi)的靶位點(diǎn)時(shí)，為了使該化合物的抗腫瘤作用最大，每個(gè)普通技術(shù)人員可適當(dāng)利用該前藥的有利的藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)。
在本發(fā)明治療活性制劑中的化合物的量是治療癌癥或惡性腫瘤的有效量。一般來說，劑型中本發(fā)明化合物的治療有效量常常小于約0.05mg/kg至約500mg/kg所治療患者的體重，或根據(jù)所用化合物、所治療的腫瘤類型、該活性化合物定位于所治療組織的能力、給藥途徑和在患者體內(nèi)該化合物的藥代動(dòng)力學(xué)，用量可以更大。在治療實(shí)體瘤時(shí)，該化合物優(yōu)選用量為每次約0.05mg/kg至約250mg/kg或更大。此劑量范圍一般使活性化合物的有效血濃度為約0.01至約500毫充每毫升所治療患者的血液。根據(jù)治療的病癥，治療的時(shí)間可以是一天或多天或可以持續(xù)幾個(gè)月或者相當(dāng)長(幾年)。在使用本發(fā)明前藥的優(yōu)選例子中，人們注意到，與3-AP或3-AMP相比，給患者使用較少(以摩爾為單位)前藥化合物就可產(chǎn)生預(yù)期的效果。因此，本發(fā)明的化合物和方法的優(yōu)點(diǎn)還在于可確信其對患者的毒性顯著小于3-AP和3-AMP，因?yàn)橛幂^少的化合物(以摩爾計(jì))對患者就能達(dá)到預(yù)期的抗癌效果。
在本發(fā)明的治療方面，活性化合物的給藥可以是連續(xù)給藥(靜脈點(diǎn)滴)、肌肉注射，以致于每天口服給藥幾次(例如，每天四次)，并可以包括非腸道給藥，包括靜脈內(nèi)和肌肉內(nèi)，口服，局部，皮下，透皮(可包括透皮促進(jìn)劑)、舌下和栓劑給藥等?？诜o藥是本發(fā)明化合物的優(yōu)選給藥途徑。
為了制備本發(fā)明的藥物組合物，治療有效量的本發(fā)明的一種或多種化合物優(yōu)選的是起初就將其與選擇性存在的按照常規(guī)的配制藥物化合物技術(shù)中的藥用載體混合，從而制備一個(gè)劑量。根據(jù)給藥如口服或非腸道給藥所需的劑型，載體形式可以有很多變化。
對于非腸道給藥制劑，此載體可以包括與有助于分散的其它組分合用的滅菌水或氯化鈉水溶液，例如乙醇或其它藥用溶劑，包括DMSO等。當(dāng)然，當(dāng)溶液以滅菌形式使用或保存時(shí)，該組合物和載體也必須滅菌。還可以制備注射混懸液，這時(shí)可以使用適當(dāng)?shù)囊后w載體、助懸劑等。
在制備口服形式的藥物組合物時(shí)，可以使用任何一種或多種有用的有用介質(zhì)。因此，對于液體口服制劑如混懸劑、酏劑和溶液劑，可以使用適當(dāng)?shù)妮d體和添加劑包括水、甘油、油、醇、矯味劑、防腐劑、著色劑等。對于固體口服制劑如散劑、片劑、膠囊，及固體制劑如栓劑，可以使用適當(dāng)?shù)妮d體和添加劑，包括淀粉、糖載體如葡萄糖，甘露糖，乳糖和相關(guān)的載體、稀釋劑、成顆粒劑、潤滑劑、粘合劑、崩解劑等。如果需要，這些片劑和膠囊可以是由標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)制成腸溶包衣的或緩釋的形式。
本發(fā)明的化合物和組合物用于治療腫瘤，包括哺乳動(dòng)物包括人患有的癌癥。一般來說，為了治療惡性腫瘤，該組合物可以非腸道給藥，優(yōu)選劑量為約10毫克至約500毫克或更多，靜脈給藥，每天1至4次。本發(fā)明的化合物優(yōu)選口服給藥，但是它們也可以以其它途徑給藥，例如，非腸道給藥，甚至局部或以栓劑的形式給藥。
本發(fā)明的化合物可以單獨(dú)使用或與其它試劑聯(lián)合使用，特別是與本發(fā)明的其它化合物聯(lián)合使用。此外，在聯(lián)合化療中，與其它抗腫瘤試劑一起使用本發(fā)明的一種或多種化合物，本發(fā)明考慮的其它抗腫瘤試劑包括如抗代謝藥、依托泊苷、阿霉素、紫杉酚、長春新堿、環(huán)磷酰胺或絲裂霉素C等。
現(xiàn)在，在下列實(shí)施例中，完全通過舉例的形式描述本發(fā)明。本領(lǐng)域普通技術(shù)人員應(yīng)理解這些實(shí)施例是非限制性的并可以在不背離本發(fā)明的實(shí)質(zhì)和范圍的前題下對細(xì)節(jié)進(jìn)行變化。
實(shí)施例此部分提供的下列方法中每種化合物的詳細(xì)反應(yīng)條件和特性。對所有NMR譜來說，在QE Plus 300MHZ NMR光譜儀上，在300MHZ檢測1H，而在75MHZ檢測13C。用VG ZAB-SE質(zhì)譜儀和VG 70-SE-4F儀器記錄MS譜。其中還包括一些相關(guān)的參數(shù)。所有的溶劑在使用前蒸餾。
前藥I的合成磷酸三酯化合物2a的合成在0℃，向4-羥基芐醇(1.09g，8.79mmol)的30ml無水乙腈溶液中，加入四氯化碳(6.76g，44mmol)、N，N-二異丙基乙胺(2.39g，18.5mmol)和DMAP(107mf，0.88mmol)。2分鐘后，滴加存在于5ml乙腈中的二-(2-(三甲基甲硅烷基)乙基)亞磷酸酯1。將此反應(yīng)在4小時(shí)內(nèi)緩慢加熱。除去溶劑并將殘余物進(jìn)行閃式色譜(己烷∶乙酸乙酯，1∶1)得到2a，為無色油狀物。1H NMR(CDCl3，300MHZ)δ 7.34(ABq，J＝8.4Hz，2H)，7.21(ABq，J＝8.7Hz，2H)，δ4.67(s，2H)，δ4.18-4.30(m，4H)，δ1.04-1.18(m，4H)，δ0.03(s，18H).
2-氯代煙酸甲酯化合物4的合成在0℃，向2-氯代煙酸3(15.8g，0.1mol)的100ml無水甲醇懸浮液中，滴加亞硫酰氯(17.8g，0.15mol)。然后將此反應(yīng)緩慢加熱至室溫并攪拌2天。再真空除去溶劑并將此殘余物溶解于飽和碳酸氫鈉溶液中。用乙酸乙酯(3×100ml)萃取所得堿性溶液。用鹽水洗滌合并的有機(jī)相，用硫酸鈉干燥，真空濃縮得到2-氯代煙酸甲酯(15.3g，89％)，為油狀物。
1H NMR(CDCl3，300 MHZ)δ 8.52(dd，J＝1.8，4.5Hz，1H)，δ 8.19(dd，J＝2.1，7.8Hz，1H)，δ7.38(dd，J＝4.8，7.8Hz，1H)，δ3.97(s，3H)乙烯基酯吡啶化合物5的合成向2-氯代煙酸甲酯4(1.71g，10mmol)的10ml DMF溶液中，加入醋酸鈉(1.64g，20mmol)、三苯基膦(1.05g，4mmol)、醋酸鈀(II))0.112g，0.5mmol)，隨后加入苯乙烯(10.4g，0.10mmol)。將所得混合物加熱至130℃，保持3天。將此反應(yīng)冷卻至室溫并用20ml水停止反應(yīng)。用乙酸乙酯(3×50ml)萃取此混合物。用硫酸鈉干燥有機(jī)相并真空濃縮。將此殘余物堿性閃式色譜(己烷∶乙酸乙酯，8∶1至6∶1)，得到化合物5(1.70g，71％)，為黃色油狀物。
1H NMR(CDCl3，300MHZ)δ 8.73(dd，J＝1.4，4.5Hz，1H)，δ 8.21(dd，J＝1.8，7.8Hz，1H)，δ8.15(ABq，J＝15.6Hz，1H)，δ7.65(ABq，J＝7.2Hz，2H)δ7.37(ABq，J＝7.5Hz，2H)，δ7.30-7.42(m，1H)，δ7.23(dd，J＝4.8，7.8Hz，1H)，δ3.97(s，3H)乙烯基甲酸化合物6的合成向乙烯基酯吡啶化合物5(3.31g，13.85mmol)的10mlTHF溶液中，加入氫氧化鈉(3N，5ml)并將此反應(yīng)攪拌過夜。然后用Dowex 50w8-100將此反應(yīng)溶液酸化至pH7。過濾掉樹脂并將此濾液濃縮得到粗品6(3.0g，96％)，該粗品適于下步反應(yīng)。
1H NMR(acetone-d6，300MHZ)δ8.52(ABq，J＝15.9Hz，1H)，δ 8.45(dd，J＝1.5，4.5Hz，1H)，)，δ8.20(dd，J＝1.5，7.5Hz，1H)，)，δ7.82(ABq，J＝15.9Hz，1H)，δ 7.59(7.58，J＝1.5Hz，1H)，δ7.56(s，1H)，δ7.15-7.30(m，3H)，δ7.04(dd，J＝4.5，7.8Hz，1H)脲烷化合物7的合成將存在于10ml苯中的所制備的上述6(1.0g，4.46mmol)、二苯基磷?；B氮化物(1.3g，2.97mmol)和三乙胺(0.48g，4.75 IT mol)的混合物加熱至回流10分鐘。加入存在于5ml苯中的醇2a(1.2g，2.97mmol)，并將此混合物加熱回流3小時(shí)。加入5ml二烷，并將此混合物繼續(xù)加熱2小時(shí)。冷卻后，除去溶劑并將此殘余物通過硅膠柱純化(己烷∶乙酸乙酯，5∶1至2∶1)，得到黃色固體7(1.20g，64％)1H NMR(CDCl3，300MHZ)δ 8.41(dd，J＝1.2，5.1Hz，1H)，δ7.74(d，J＝15.9Hz，1H)，δ7.57(d，J＝8.1Hz，2H)，δ7.15-7.45(m，10H)，δ6.77(br，1H)，δ5.20(s，2H)，δ 4.20-4.32(m，4H)，δ1.05-1.20(m，4H)，δ0.03(s，18H).
2-甲醛脲烷化合物8的合成在-78℃，將7(1.14g，1.82mmol)的二氯甲烷/甲醇(100ml，1∶4)溶液以臭氧處理，并通過TLC控制該反應(yīng)。反應(yīng)后，通過向該反應(yīng)混合物中通入氧氣除去過量的臭氧，直到藍(lán)色反應(yīng)溶液變?yōu)闊o色。然后，在-78℃用二甲硫醚(3ml)停止反應(yīng)，并將此溶液慢慢加溫并在室溫?cái)嚢?小時(shí)。蒸發(fā)掉溶劑，并將此殘余物通過硅膠柱色譜(己烷∶乙酸乙酯，4∶1)純化，得到8(0.708g，70％)，為淡黃色油狀物。1H NMR(CDCl3，300MHZ)δ10.48(br，1H)，δ10.07(s，1H)，δ8.83(d，J＝8.7Hz，1H)，δ8.44(dd，J＝0.9，4.2Hz，1H)，δ7.49(dd，J＝4.5，8.7Hz，1H)，δ7.40(ABq，J＝8.4Hz，2H)，δ7.23(ABq，J＝8.1Hz，2H)，δ5.19(s，2H)，δ4.18-4.28(m，4H)，δ1.02-1.20(m，4H)，δ0.02(s，18H)縮氨基硫脲化合物9的合成向醛8(1.40g，2.54mmol)的乙醇/水(6ml，5∶1)溶液中，滴加氨基硫脲(0.254g，2.79mmol)的乙醇/水(30ml，7；3)溶液。室溫?cái)嚢?小時(shí)后，將此混合物過濾并用5ml乙醇/水(7∶3)和5ml乙醚洗滌該固體，得到白色固體9(1.20g)。將此濾液濃縮并將殘余物通過硅膠色譜(二氯甲烷∶甲醇＝2∶1)純化得到9(0.096g)。合并的產(chǎn)量為1.296g(82％)。
1H NMR(CD30D，300MHZ)δ 8.25-8.32(m，2H)，δ8.19(s，1H)，δ7.46(ABq，J＝8.7Hz，2H)，δ7.41(dd，J＝48，8.4Hz，1H)，δ7.23(ABq，J＝8.1Hz，2H)，δ5.21(s，2H).δ4.20-4 40(m，4H)，δ1.02-1.20(m，4H)，δ0.03(s，18H)前藥I(對位)的合成游離酸用二氯甲烷/TFA(1ml，4∶1)在室溫處理化合物9(48mg，0.077mmol)30分鐘。然后，真空除去溶劑并將此殘余物用二氯甲烷、甲醇(5ml，10∶1)洗滌，得到游離酸形式的前藥I(游離酸)，為黃色固體(35mg，108％)。1H NMR(DMSO-d6，300MHZ)δ 11.75(s，1H)，9.97(br，1H)，8.53(br，1H)，8.39(d，J＝4.2Hz，1H)，8.30(d，J＝8.1Hz，1H)，8.23(s，1H)，7.94(br，1H)，7.45(dd，J＝3.6，4.8Hz，1H)，7.39，(ABq，J＝8.4Hz，2H)7.18(ABq，J＝7.8Hz，2H)，5.13(s，2H)。
鈉鹽用二氯甲烷/TFA(1ml，4∶1)在室溫處理化合物9(47mg，0.075mmol)30分鐘。然后，真空除去溶劑并將前藥I的此粗品酸溶解于2.5ml0.5M碳酸氫鈉中。通過C-18柱純化所得的溶液得到前藥I的鈉鹽形式(22mg，67％)。
1H NMR(CD30D，300MHZ)δ 8.30-8.42(m，2H)，8.19(s，1H)，7.39(dd.J＝4.5，8.4Hz，1H)，7.28，(ABq，J＝9.3，10.5Hz，4H)，5.12(s，2H)。
前藥I(鄰位)的合成磷酸三酯中間體的合成在0℃，向2-羥基芐醇(1.19g，9.57mmol)的30ml無水乙腈溶液中，加入四氯化碳(7.37g，47.8mmol)、N，N-二異丙基乙胺(2.60g，20.1mmol)和DMAP(117mg，0.96mmol)。2分鐘后，滴加存在于5ml乙腈中的二-(2-(三甲基甲硅烷基)乙基)亞磷酸酯(2.70g，9.57mmol)。將此反應(yīng)緩慢加熱至室溫過夜。除去溶劑并將殘余物進(jìn)行閃式色譜(己烷∶乙酸乙酯，4∶1)得到2b(2.50g，64％)，為無色油狀物。
1H NMR(CDCl3，300MHz)δ7.44(d，J＝8.4Hz，1H)，δ7.15-7.35(m，3H)，δ4.64(s，2H)，δ4.18-4.35(m，4H)，δ4.09(br，1HO，δ1/13(dd，J＝6.3，10.2，4H)，δ 0.35(s，18H)脲烷化合物10的合成將存在于20ml苯中的6(2.0g，8.91mmol)、二苯基磷?；B氮化物(2.61g，9.50mmol)和三乙胺(0.96g，9.50mmol)的混合物加熱至回流10分鐘。加入存在于5ml苯中的醇2b(2.40g，5.94mmol)，并將此混合物加熱回流4小時(shí)。冷卻后，除去溶劑并將此殘余物通過硅膠柱(己烷∶乙酸乙酯，4∶1)純化，得到黃色固體10(2.41g，73％)。1H NMR (CDCl3，300MHz)δ 8.38(d，J＝4.5Hz，1H)，δ 8.19(d，br，J＝6.9Hz，1H)，δ 7.74(d，J＝15.3Hz，1H)，δ7.63(d，J＝7.2Hz，2H)，δ7.10-7.50(m，10H)，δ 5,32(s，2H)，δ 420-4.38(m，4H)，δ1.05-1.20(m，4H)，δ0.04(s，18H)甲醛脲烷化合物11的合成在-78℃，將10(2.30g，3.70mmol)的二氯甲烷/甲醇(50ml，1∶4)溶液以臭氧處理，并通過TLC控制該反應(yīng)。反應(yīng)后，通過向該反應(yīng)混合物中通入氧氣除去過量的臭氧，直到藍(lán)色反應(yīng)溶液變?yōu)闊o色。然后，在-78℃用二甲硫醚(3ml)停止反應(yīng)，并將此溶液慢慢加溫并在室溫?cái)嚢?小時(shí)。蒸發(fā)掉溶劑，并將此殘余物通過硅膠柱色譜(己烷∶乙酸乙酯，4∶1)純化，得到11(1.70g，83％)，為淡黃色油狀物。1H NMR(CDCl3，300MHz)δ 10.48(br，1H)，δ 10.50(s，1H)，δ 10.05(s，1H)，δ 8.86(d，J＝8.7Hz，1H)，δ 8.45(dd，J＝1.5，4.2Hz，1H)，δ7.4-7.55(m，3H)，δ 7.35(tdJ＝1.5，7.5 Hz，H)，δ 7.20(t，J＝7.5Hz，2H)，δ 5.35(s，2H)，δ 4.18-4.28(m，4H)，δ 1.02-1.20(m，4H)，δ 0.02(s，18H)縮氨基硫脲化合物12的合成向醛11(1.60g，2.90mmol)的乙醇/水(5ml，7∶3)溶液中，滴加氨基硫脲(0.29g，3.19mmol)的乙醇/水(50ml，7；3)溶液。室溫?cái)嚢?小時(shí)后，將此混合物過濾并用5ml乙醇/水(7∶3)和5ml乙醚洗滌該固體，得到黃色固體12(1.50g，83％)。
1H NMR(DMSO-d6，300MHz)δ 11.73(s，1H)，δ 10.02(br，1H)，δ 8.48(br，1 H)，δ 8.20-8.55(m，3H)，δ 7.89(br，1H)，δ 7.10-7.60(m，5H)，δ 5.23(s，2H)，δ 4.00-4.30(m，4H)，δ 0.9-1.20(m，4H)，δ 0.03(s，18H)游離酸前藥I(鄰位)的合成用二氯甲烷/TFA(1ml，4∶1)在室溫處理化合物12(580mg，0.93mmol)1小時(shí)。然后，真空除去溶劑得到游離酸前藥I(鄰位)，為黃色固體(395mg，102％)。1H NMR(DMSO-d6，300MHz)δ 11.89(s，1H)，10.16(br，1H)，8.57(br，1H)，8.48(d，J＝7.1Hz，1H)，8.40(d，J＝8.4Hz，1H)，8.23(s，1H)，8.12(br，1H)，7.60(dd，J＝5.1，8.4Hz，1H)，7.46，(d，J＝8.4Hz，1H)，7.27-7.38，(m，2H)，7.20(t，J＝7.2Hz，2H)，51.25(s，2H)鈉鹽將前藥I(鄰位)的粗品酸溶解于50ml飽和碳酸氫鈉溶液中。通過C-18柱純化所得的溶液得到前藥I(鄰位)的鈉鹽形式(120mg，31％)。
1H NMR(CD3OD，300MHz)8.44(br，1H)，δ 8.29(d，J＝3.9Hz 1H)，8.24(s，1H0，7.37(dd.J＝4.8，8.4Hz，1H)，7.25-7.35，(m，1H)，)，7.20(td，J＝1.5，7.5Hz，1H)，)，6.89(t，J＝7.5Hz，1H)，5.37(s，2H)吡啶甲醛21的合成將5(10.0g，41.84mmol)的甲醇(140ml)和二氯甲烷(55ml)溶液在-78℃進(jìn)行臭氧分解1小時(shí)。然后用二甲硫醚(10ml)在-78℃停止該綠色溶液的反應(yīng)。將此反應(yīng)混合物攪拌過夜。真空除去溶劑得到殘余物，將其在硅膠上純化得到6.24g(90％)醛21，為米色固體。1H NMR of 21(CDCl3)δ10.35(s，1H)，8.89-8.91(m，1H)，8.10-8.13(m，1H)，7.57-7.61(m，1H)，4.00(s，3H)。
吡啶二甲基縮醛甲酯22的合成向醛21(3.10g，18.79mmol)的甲醇溶液(47ml)中，加入三甲基原甲酸酯(10.3ml，93.95mmol)和催化劑量的TsOH。將此反應(yīng)加熱回流12小時(shí)。將此反應(yīng)混合物冷卻并蒸發(fā)除去溶劑得到殘余物，將其再溶解于乙酸乙酯(125ml)和乙醚(25ml)中。用飽和碳酸氫鈉溶液和鹽水洗滌所得有機(jī)層。將有機(jī)層干燥(硫酸鈉)并真空濃縮得到3.65g(92％)的二甲基縮醛22，為濃稠的油狀物。
1H NMR of 22(CDCl3)δ8.63-8.64(m，1H)，7.93-7.96(m，1H)，7.20-7.24(m，1H)，5.96(s，1H)，3.80(d，J＝1.0Hz，3H)，3.31(s，6H)。
吡啶二甲基縮醛甲酸23的合成向22(3.65g，17.29mmol)的THF(10ml)溶液中，室溫加入3N氫氧化鈉溶液(8.64ml，25.93mmol)。將此黃色溶液室溫?cái)嚢?2小時(shí)。用Dowex酸性樹脂(50WX8-100)將此反應(yīng)酸化為pH＝4.5。過濾此固體并用THF(30ml)洗滌。真空濃縮此濾液得到3.4g(100％)粗品酸23，為暗黃色泡沫。
1H NMR of 23(DMSO-d6)δ8.42-8.44(m，1H)，7.90-7.93(m，1H)，7.24-7.28(m，1H)，6.26(s，1H)，3.27(s，6H)。
脲烷二硫化物化合物27的合成將粗品酸23(894mg，4.54mmol)、二硫化物連接劑24(1.33g，純度80％，4.54mmol)、三乙胺(0.63ml，4.54mmol)和二苯基磷?；B氮化物(0.98ml，4.54mmol)的苯懸浮液(30ml)加熱回流16小時(shí)。將此反應(yīng)冷卻至室溫，并真空除去溶劑(在40℃以下)得到殘余物，將其通過柱色譜純化(40-60％乙酸乙酯/己烷)純化得到0.942g(53％)化合物27。
1H NMR of 27(CDCl3)δ8.60-8.48(m，2H)，8.14-8.23(m，3H)，7.25-7.67(m，7H). 5.41(s，2H)，5.33(s，1H)，3.46(s，6H)。
脲烷二硫化物甲醛化合物28的合成向27(700mg，1.437mmol)的THF(20ml)溶液中，加入水(3ml)和催化劑量的TsOH。將所得反應(yīng)加熱至60℃，保持16小時(shí)。讓此反應(yīng)冷卻至室溫，并真空除去溶劑。將所得殘余物通過硅膠色譜純化(30-40％乙酸乙酯/己烷)，得到391mg(62％)的化合物28，為黃色粉末。
1H NMR of 28(CDCl3)δ10.57(s，1H)，10.09(s，1H)，8.85(d，J＝8.7Hz，1H)，8.46(d，J＝4.4Hz，IH)，8.19-8.16(m，2H)，7.69-7.31(m，7H)，5.45(s，2H)。
前藥29(鄰位)的合成向化合物28(175mg，0.397mmol)的THF(6ml)溶液中，加入氨基硫脲(18.2mg，0.197mmol)的溫(約40℃)水(0.75ml)溶液。向所得黃色溶液中加入2滴10％的鹽酸。將此反應(yīng)室溫?cái)嚢?小時(shí)。真空除去溶劑，并將此產(chǎn)物與THF(4×5ml)共蒸發(fā)。所得黃色固體高真空干燥12小時(shí)得到所需二硫化物前藥29，產(chǎn)率接近100％。
1H NMR of 29(DMSO-d6)δ11.68(s，1H)，9.98(bs，1H)，8.40-8.35(m，2H)，8.23-8.19(m，2H)，7.90-7.35(m，9H)，5.36(s，1H)，5.25(s，1H)二硫化物中間體32的合成向2-苯甲硫醇25(2.63g，18.78mmol)、2-硫代乙基三氟乙酰胺31(3.25g，18.78mmol)和三乙胺(2.85g，28.2mmol)在50ml THF/水(50ml，4∶1)的混合物中，在0℃滴加過氧化氫(1.7ml，30％w/w)。將此反應(yīng)在0℃攪拌30分鐘，然后用濃鹽酸酸化至pH為2。用己烷∶乙酸乙酯1∶1萃取此混合物得到32和硫代乙基三氟乙酰胺二聚體(3.93g)的混合物。將此混合物不經(jīng)純化直接用于下步反應(yīng)。還得到一小部分純的32，為無色油狀物。
1H NMR(CDCl3，300MHz)δ7.70-7.82(m，1H)，δ 7.47-7.53(m，1H)，δ7.30-7.40(m，2H)，δ6.69(br，1H)，δ4.88(s，2H)，δ3.67(q，J＝6.3，2H)，δ2.89(t，J＝6.3，2H)，δ2.16(br，1H)，脲烷二硫化物二甲基縮醛33的合成將粗品23(1.38g，7.0mmmol)、粗品32(3.5g，11.3mmol)、二苯基磷?；B氮化物(3.09g，11.3mmol)和三乙胺(1.14g，11.3mmol)在25ml苯中的混合物加熱回流12小時(shí)。冷卻后，將此反應(yīng)混合物直接裝在硅膠柱上并用溶劑(己烷∶乙酸乙酯，2∶1)洗脫，得到暗黃色油狀物33(1.50g，42％)。
1H NMR(CDCl3，300MHz)δ8.48(s，1H)，δ8.46(s，1H)，δ8.23(dd，J＝0.9，4.5Hz，1H)，δ7.81(dd，J＝1.5，6.0Hz. 1H)，δ7.20-7.50(m，3H)，δ6.87(br.1H)，δ5.41(s，2H)，δ5.33(s，1H)，δ3.60-3.72(m，2H)，δ3.47(s，6H)，δ2.89(t，J＝6.6，2H)。
脲烷二硫化物甲醛混合物34的合成將33(0.384g，0.78mmol)和催化劑量的PTSSA的THF/水(4ml/ml)溶液加熱至60℃并通過TLC控制該反應(yīng)。30小時(shí)后，蒸發(fā)掉溶劑，并將此殘余物通過硅膠色譜(己烷∶乙酸乙酯，2∶1)純化，得到34(0.282g，79％)，為淡黃色固體。
1H NMR(CDCl3，300MHz)δ10.55(s，1H)，δ10.08(s，1H)，δ8.80(d，J＝8.4Hz，1H)，δ8.47(d，J＝8.4Hz，1H)，δ8.47(d，J＝4.2Hz，1H)，δ7.83(d，J＝7.5Hz，1H)，δ7.30-7.58(m，4H)，δ6.88(br，1H)δ5.43(s，2H)，δ7.23(q，J＝6.3Hz，2H)，δ2.93(t，J＝6.6，2H)前藥III(鄰位)的合成將甲醛34(0.216g，0.47mmol)溶解于2ml熱乙醇中，然后冷卻至室溫。向此溶液中分批加入存在于乙醇/水(2.4ml，1∶1)中的氨基硫脲(47mg，0.52mmol)。室溫?cái)嚢?小時(shí)后，將此混合物在冰箱(0-5℃)中放置過夜。然后將此混合物過濾并用2ml水、2ml乙醇/水(2∶1)和4ml乙醚洗滌此固體，得到白色固體35(0.206g，82％)。
1H NMR(CD3OD，300MHz)δ8.30-8.40(m，2H)，δ8.20(s，1H)，δ7.83(dd，J＝1.8，7.2Hz，1H)，δ7.30-7.55(m，4Hz，1H)，δ5.41(s，2H)，δ3.59(t，J＝6.6，2H)，δ2.89(t，J＝6.9，2H)生物活性在第0天給Balb/c小鼠在右肋皮下注射0.2ml 5×106細(xì)胞/ml的M109腫瘤細(xì)胞懸浮液，該腫瘤細(xì)胞已在培養(yǎng)基中生長至對數(shù)階段，胰蛋白酶消化分離，用PBS洗滌并重組。在第3天給這些鼠注射兩次3-AP、前藥I(對位)或載體對照，第4天注射一次，第6天注射兩次而第7天注射一次。十只小鼠只注射3-AP，每次注射量為4.5mg/kg體重。十只小鼠只注射前藥I，每次注射量為10mg/kg體重。十只小鼠只注射載體對照。在第7、10、13和17天通過觸診檢測腫瘤的大小，并將這些結(jié)果列于圖10。該試驗(yàn)清楚地表明前藥I在降低腫瘤生長方面比等摩爾量的3-AP更有效。在圖11中，用磷酸鹽緩沖鹽水(PBS)和含水二甲基亞砜(10％DMSO)作為對照比較了前藥I(對位)與3-AP的抗腫瘤作用。在此試驗(yàn)中，前藥I比3-AP或兩個(gè)對照組也表現(xiàn)出超強(qiáng)的抗腫瘤活性。
應(yīng)當(dāng)理解上述實(shí)施例和方案是為了舉例說明本發(fā)明，而不是以任何方式限制本發(fā)明。本領(lǐng)域技術(shù)人員可能對上述內(nèi)容進(jìn)行的多種改變或變化也是本發(fā)明所預(yù)料的，并且它們包括在本申請和下列權(quán)利要求的實(shí)質(zhì)和權(quán)限內(nèi)。
權(quán)利要求
1.下式的化合物
其中R4是H或甲基；R5是CHR、芐基或鄰位或?qū)ξ蝗〈钠S基；R是H、CH3、CH2CH3、CH2CH2CH3或CH3CHCH3；R′是游離的磷酸根、磷酸鹽或-S-S-R″基團(tuán)；R″是CH2CH2NHR6、CH2CH2OH、CH2COOR7、鄰位或?qū)ξ蝗〈腃1-C3烷基苯基或鄰位或?qū)ξ蝗〈南趸交?；R6是H、C1-C4?；⑷阴；?、苯甲酰基或取代的苯甲?；?，和而R7是H、C1-C4烷基、苯基、取代的苯基、或芐基或者取代的芐基。
2.權(quán)利要求1的化合物，其中R5是CH2。
3.權(quán)利要求1的化合物，其中R5是CH2。
4.權(quán)利要求3的化合物，其中R是甲基。
5.權(quán)利要求1的化合物，其中R4是H。
6.權(quán)利要求1的化合物，其中R4是甲基。
7.下式的化合物
其中R4是H或CH3，R5是CH2或
而R8是CH2CH2NH2、CH2CH2NHAc、CH2CH2OH或CH2CO2H。
8.權(quán)利要求7的化合物，其中R4是甲基。
9.權(quán)利要求7的化合物，其中R4是H。
10.治療動(dòng)物或人類患者腫瘤形成的方法，其中包括使用治療有效量的下式的化合物
其中R4是H或甲基，R5是CH2或
而R8是CH2CH2NH2、CH2CH2NHAc、CH2CH2OH或CH2CO2H。
11.權(quán)利要求10的方法，其中R4是甲基。
12.權(quán)利要求10的方法，其中R4是H。
13.治療動(dòng)物或人類患者腫瘤形成的方法，其中包括使用治療有效量的下式的化合物
其中R4是H或甲基，R5是CHR、芐基或鄰位或?qū)ξ蝗〈钠S基；R是H、CH3、CH2CH3、CH2CH2CH3或CH3CHCH3；R′是游離的磷酸根、磷酸鹽或-S-S-R″基團(tuán)；R″是CH2CH2NHR6、CH2CH2OH、CH2COOR7、鄰位或?qū)ξ蝗〈腃1-C3烷基苯基或鄰位或?qū)ξ蝗〈南趸交籖6是H、C1-C4酰基、三氟乙?；?、苯甲酰基或取代的苯甲?；?，和R7是H、C1-C4烷基、苯基、取代的苯基、或芐基或者取代的芐基。
14.權(quán)利要求13的方法，其中R4為H或甲基，而R6為CH2CH2NH2、CH2CH2NHAc、CH2CH2OH或CH2CO2H。
15.權(quán)利要求13的方法，其中R4是H。
16.權(quán)利要求13的方法，其中R4是甲基。
17.權(quán)利要求13的方法，其中R4是H或甲基，R5是CH2或
而R6是對位或鄰位取代的硝基苯基。
18.權(quán)利要求17的方法，其中R4是H。
19.權(quán)利要求17的方法，其中R4是甲基。
20.權(quán)利要求17的方法，其中R5是
21.權(quán)利要求17的方法，其中R5是CH2。
全文摘要
本發(fā)明涉及核糖核苷二磷酸還原酶抑制劑3－氨基吡啶－2－甲醛縮氨基硫脲(3－AP)和3－氨基－4－甲基吡啶－2－甲醛縮氨基硫脲(3－AMP)的新的前藥形式,這些前藥具有高的水溶性、生物利用度和對體內(nèi)將其氨基官能團(tuán)?；牡挚剐?。本發(fā)明的新化合物涉及式(1)的化合物,其中R
文檔編號C07F9/58GK1256687SQ98805148
公開日2000年6月14日 申請日期1998年5月14日 優(yōu)先權(quán)日1997年5月15日
發(fā)明者李軍, 牛傳勝, 李秀燕, 特倫斯·W·多伊爾, 陳淑惠 申請人:維奧恩藥品公司