專(zhuān)利名稱(chēng)：4,5－吡咯并羥吲哚的制作方法
不受控制的細(xì)胞增生是癌癥的標(biāo)志。癌腫瘤細(xì)胞典型地對(duì)直接或間接調(diào)節(jié)細(xì)胞-分裂周期的基因有某種形式的損傷。
依賴(lài)細(xì)胞周期蛋白的激酶(CDKs)是對(duì)于細(xì)胞周期控制至關(guān)重要的酶。見(jiàn)，例如，Coleman等，“依賴(lài)細(xì)胞周期蛋白激酶的化學(xué)抑制劑”醫(yī)學(xué)化學(xué)年度報(bào)告，32卷，1997，171-179頁(yè)。這些酶調(diào)節(jié)細(xì)胞周期的不同相之間的轉(zhuǎn)換，如從G1相漸進(jìn)至S相(活性DNA合成的周期)，或從G2相漸進(jìn)至M相，其中發(fā)生有絲分裂和細(xì)胞分裂。參見(jiàn)例如科學(xué)，274卷，1996年12月6日，1643-1677頁(yè)中出現(xiàn)的該主題的文章。
CDKs由催化性CDK亞基和調(diào)節(jié)性細(xì)胞周期蛋白亞基組成。細(xì)胞周期蛋白亞基是CDK活性的關(guān)鍵調(diào)節(jié)物，各CDK與特定子集的細(xì)胞周期蛋白相互作用例如細(xì)胞周期蛋白A(CDK1，CDK2)。不同的激酶/細(xì)胞周期蛋白對(duì)經(jīng)細(xì)胞周期的特定階段調(diào)節(jié)進(jìn)程。參見(jiàn)，例如Coleman的上述文獻(xiàn)。
細(xì)胞周期控制系統(tǒng)中的失常與不受控制的癌細(xì)胞生長(zhǎng)有關(guān)。參見(jiàn)，例如，Kamb“細(xì)胞周期與癌癥”Trends in Genetics，11卷，1995，136-140頁(yè)；和Coleman的上述文獻(xiàn)。另外，編碼CDK’s的基因或其調(diào)節(jié)物的表達(dá)的改變已經(jīng)在多種腫瘤中被觀察到。參見(jiàn)，例如Webster的“治療周期靶向的治療潛在性”Exp.Opin.Invest.Drugs，7卷，865-887頁(yè)(1998)，和其所引用的文獻(xiàn)。這樣就有使抑制CDKs的化合物作為抗增生治療劑的用途被證實(shí)的文獻(xiàn)的外延體。參見(jiàn)，例如xiong等人的美國(guó)專(zhuān)利US-5621082；EP0666270；WO 97/16447；和在Coleman的上述文獻(xiàn)中引用的文參考獻(xiàn)，尤其是參考文獻(xiàn)10。因此，需要識(shí)別CDK激酶活性的化學(xué)抑制劑。
特別需要識(shí)別容易合成，并能有效抑制一種或多種CDKs或CDK/細(xì)胞周期蛋白配合物，用于治療一種或多種腫瘤的小分子化合物。
據(jù)稱(chēng)對(duì)于經(jīng)酪氨酸激酶抑制而調(diào)節(jié)異常細(xì)胞增生有用的二氫吲哚酮(也稱(chēng)為羥吲哚)在WO 96/40116，WO 98/07695，WO 95/01349，WO96/32380，WO 96/22976 WO 96/16964(酪氨酸激酶抑制劑)，和WO98/50356(作為蛋白激酶活性調(diào)節(jié)劑的2-二氫吲哚酮衍生物)。羥吲哚衍生物已經(jīng)描述了各種其它治療用途5206261(改善大腦功能)；WO92/07830(肽拮抗劑)；EP 580502 A1(抗氧化劑)。
一直需要容易地合成，尤其是通過(guò)調(diào)節(jié)CDKs用于治療一種或多種腫瘤的小分子化合物。本發(fā)明的一個(gè)目的是提供這類(lèi)化合物和含有這類(lèi)化合物的組合物。
本發(fā)明涉及可以抑制依賴(lài)細(xì)胞周期蛋白的激酶(CDKs)，尤其是CDK2的新穎的4，5-吡咯并羥吲哚。這些化合物和其藥物可接受的鹽，和所述化合物的前藥是可用于治療或控制細(xì)胞增生疾病，尤其是癌癥的抗增生劑。本發(fā)明也涉及含有這類(lèi)化合物的藥物組合物，并涉及這些化合物在制備用于治療和/或預(yù)防癌癥，尤其是治療或控制固體腫瘤的藥物中的用途。本發(fā)明的化合物在治療或控制乳腺和結(jié)腸腫瘤方面特別有用。
本發(fā)明也涉及可用于合成上述化合物的新化合物。
本發(fā)明化合物是下式的4，5-吡咯并羥吲哚 和式I化合物的前藥和藥學(xué)活性代謝物；和上述化合物藥物可接受的鹽，其中R1是氫，-OR3，-COR3，-COOR3，-CONR4R5，-NR4R5；低級(jí)烷基(任選被一個(gè)或多個(gè)(b)，環(huán)烷基，雜環(huán)，芳基，雜芳基取代，其中環(huán)烷基和雜環(huán)各自任選被R11取代，而芳基和雜芳基各自任選被R12取代)，環(huán)烷基(任選被一個(gè)或多個(gè)(b)，低級(jí)烷基，雜環(huán)，芳基，和雜芳基取代，其中低級(jí)烷基和雜環(huán)各自任選被R11取代，而芳基和雜芳基各自任選被R12取代)，雜環(huán)(任選被一個(gè)或多個(gè)(b)，低級(jí)烷基，環(huán)烷基，芳基，和雜芳基取代，其中低級(jí)烷基和環(huán)烷基各自任選被R11取代，而芳基和雜芳基各自任選被R12取代)，芳基(任選被一個(gè)或多個(gè)(b)，-NO2，全氟烷基，低級(jí)烷基，環(huán)烷基，雜環(huán)，芳基，和雜芳基取代，其中低級(jí)烷基、環(huán)烷基和雜環(huán)各自任選被R11取代，而芳基和雜芳基各自任選被R12取代)，或雜芳基(任選被一個(gè)或多個(gè)(b)，-NO2，全氟烷基，低級(jí)烷基，環(huán)烷基，雜環(huán)，芳基，和雜芳基取代，其中低級(jí)烷基，環(huán)烷基和雜環(huán)各自任選被R11取代，而芳基和雜芳基各自任選被R12取代)；(b)是-OR3，-NR4R5，鹵素，-COR3，-COOR3，-OCOR3，-CONR4R5，-CN，-SO2R3，-SO2NR4R5；R2是氫，-OR3，-COR3，-COOR3，-OCOR3，-CONR4R5，鹵素，-CN，全氟烷基，-NR4R5；或低級(jí)烷基(任選被一個(gè)或多個(gè)-OR3，-OCOR3，和-NR4R5取代)；R3是氫，低級(jí)烷基(任選被一個(gè)或多個(gè)(c)，環(huán)烷基，雜環(huán)，芳基，雜芳基取代，其中環(huán)烷基和雜環(huán)各自任選被R11取代，而芳基和雜芳基各自任選被R12取代)，環(huán)烷基(任選被一個(gè)或多個(gè)(c)，低級(jí)烷基，雜環(huán)，芳基，和雜芳基取代，其中低級(jí)烷基和雜環(huán)各自任選被R11取代，而芳基和雜芳基各自任選被R12取代)，雜環(huán)(任選被一個(gè)或多個(gè)(c)，環(huán)烷基，低級(jí)烷基，芳基，和雜芳基取代，其中環(huán)烷基和低級(jí)烷基各自任選被R11取代，而芳基和雜芳基各自任選被R12取代)，芳基(任選被一個(gè)或多個(gè)(c)，-NO2，鹵素，全氟烷基，低級(jí)烷基，環(huán)烷基，雜環(huán)，芳基，和雜芳基取代，其中低級(jí)烷基、環(huán)烷基和雜環(huán)各自任選被R11取代，而芳基和雜芳基各自任選被R12取代)，或雜芳基(任選被一個(gè)或多個(gè)(c)，-NO2，鹵素，全氟烷基，低級(jí)烷基，環(huán)烷基，雜環(huán)，芳基，和雜芳基取代，其中低級(jí)烷基、環(huán)烷基和雜環(huán)各自任選被R11取代，而芳基和雜芳基各自任選被R12取代)；(c)是-OR7，-COOR6，-COR6，-CONR4R5，-NR4R5，-SO2R6，-SO2NR4R5，R4和R5各自獨(dú)立地是氫，-COR6，-COOR6，-CONR6R8，
低級(jí)烷基(任選被一個(gè)或多個(gè)(d)，環(huán)烷基，雜環(huán)，芳基，雜芳基取代，其中環(huán)烷基和雜環(huán)各自任選被R11取代，而芳基和雜芳基各自任選被R12取代)，環(huán)烷基(任選被一個(gè)或多個(gè)(d)，低級(jí)烷基，雜環(huán)，芳基，和雜芳基取代，其中低級(jí)烷基和雜環(huán)各自任選被R11取代，而芳基和雜芳基各自任選被R12取代)，雜環(huán)(任選被一個(gè)或多個(gè)(d)，低級(jí)烷基，環(huán)烷基，雜環(huán)，芳基，和雜芳基取代，其中低級(jí)烷基、環(huán)烷基和雜環(huán)各自任選被R11取代，而芳基和雜芳基各自任選被R12取代)，芳基(任選被一個(gè)或多個(gè)(d)，-NO2，鹵素，全氟烷基，低級(jí)烷基，環(huán)烷基，雜環(huán)，芳基，和雜芳基取代，其中低級(jí)烷基、環(huán)烷基和雜環(huán)各自任選被R11取代，而芳基和雜芳基各自任選被R12取代)，或雜芳基(任選被一個(gè)或多個(gè)(d)，-NO2，鹵素，全氟烷基，低級(jí)烷基，環(huán)烷基，雜環(huán)，芳基，和雜芳基取代，其中低級(jí)烷基、環(huán)烷基和雜環(huán)各自任選被R11取代，而芳基和雜芳基各自任選被R12取代)；(d)是-OR7，-COOR6，-COR6，-CONR6R7，-NR6R7，-SO2R6，-SO2NR6R7；或者，-NR4R5形成具有3至7個(gè)原子的環(huán)，所說(shuō)的環(huán)任選包括一個(gè)或多個(gè)其它雜原子，并且任選被一個(gè)或多個(gè)低級(jí)烷基，-OR7，-COR6，-COOR6，-CONR6R8，和-NR7R8取代；R6是氫或低級(jí)烷基(任選被一個(gè)或多個(gè)環(huán)烷基，雜環(huán)，芳基，雜芳基，-OR8，和-NR7R8取代)；R7是氫，-COR8，-CONR9R8或低級(jí)烷基(任選被R11取代)；R8和R9各自獨(dú)立地是氫或低級(jí)烷基；R11是-OR8，-COR8，-COOR8，-OCOR8，-CONR8R9，-NR8R9，-N(COR8)R9，-SO2R8，或-SO2NR8R9；R12是-OR8，-COOR8，-COOR8，-OCOR8，-CONR8R9，-NR8R9，-N(COR8)R9，-SO2R8，-SO2NR8R9，鹵素，-CN，-NO2，或全氟烷基；X是＝N-或＝C(R5)-；Y和Z各自獨(dú)立地是N，O，或S；條件是Y和Z至少有一個(gè)是N；還有條件是如果Y和Z都是N，則其中的一個(gè)可以被低級(jí)烷基所取代，其中該低級(jí)烷基任選被一個(gè)或多個(gè)-OR7，-NR4R5，環(huán)烷基，雜環(huán)，芳基，和雜芳基取代；和a是在Y-C或Z-C之間的雙鍵。
本文所用的術(shù)語(yǔ)具有如下定義。
“芳基”指具有5至10個(gè)原子并由1或2個(gè)環(huán)組成的芳香基。芳基的例子包括苯基和1-或2-萘基。
“環(huán)烷基”指由3至8個(gè)原子組成的非芳香的、部分或完全飽和的環(huán)狀脂肪烴。環(huán)烷基的例子包括環(huán)丙基，環(huán)戊基和環(huán)己基。
“有效量”指明顯抑制人腫瘤細(xì)胞，包括人腫瘤細(xì)胞系的增生和/或預(yù)防其分化作用的至少一種式I化合物，或其藥物可接受的鹽，前藥或其代謝物的量。
“鹵素”指氟，氯，溴或碘。
“雜芳基”是具有5至10個(gè)原子，1或2個(gè)環(huán)，并含有一個(gè)或多個(gè)雜原子的芳香基。雜芳基的例子有2-，3-或4-吡啶基，四唑基，惡二唑基，吡嗪基，喹啉基，吡咯基，和咪唑基。
“雜原子”指選自N，O和S的原子。
“雜環(huán)”指3-至10-元非芳香的，含有一個(gè)或兩個(gè)環(huán)和至少一個(gè)雜原子的部分或完全飽和的烴基，如四氫喹啉基。
“IC50”指特定測(cè)量活性的50％抑制所需要的具體4，5-吡咯并羥吲哚的濃度。IC50可以如下文實(shí)施例47所述測(cè)量。
“低級(jí)烷基”指具有1至6個(gè)，優(yōu)選1至4個(gè)碳原子的直鏈或支鏈飽和脂肪烴。典型的低級(jí)烷基包括甲基，乙基，丙基，異丙基，丁基，叔丁基，2-丁基，戊基，己基等。
“藥物可接受的鹽”指保留了式I化合物的生物效力和性質(zhì)，并由合適的無(wú)毒有機(jī)或無(wú)機(jī)酸或有機(jī)或無(wú)機(jī)堿形成的普通酸加成鹽或堿加成鹽。酸加成鹽的例子包括從無(wú)機(jī)酸如鹽酸、氫溴酸、氫碘酸、硫酸、氨磺酸、磷酸和硝酸衍生的鹽，和從有機(jī)酸如對(duì)甲苯磺酸、水楊酸、甲磺酸、草酸、琥珀酸、檸檬酸、蘋(píng)果酸、乳酸、富馬酸等衍生的鹽。堿加成鹽的例子包括從鉀、鈉、銨和季銨的氫氧化物，例如氫氧化四甲基銨衍生的鹽。
“藥學(xué)上可接受的”，如藥學(xué)上可接受的載體、賦形劑、前藥等，指藥理學(xué)可接受的，并對(duì)給藥具體化合物的患者基本上無(wú)毒。
“藥學(xué)活性代謝物”指藥學(xué)上可接受并有效的式I化合物的代謝產(chǎn)物。
“前藥”指在生理?xiàng)l件下或通過(guò)溶劑解可以轉(zhuǎn)化為任何式I化合物或轉(zhuǎn)化為式I化合物的藥物可接受的鹽的化合物。當(dāng)對(duì)患者給藥時(shí)，前藥可以是無(wú)活性的，但其在體內(nèi)轉(zhuǎn)化為式I的活性化合物。
“取代的”，如取代的烷基，除非另外說(shuō)明，指取代基可以在一個(gè)或多個(gè)位置存在，取代基獨(dú)立地選自具體的選項(xiàng)。
在式I化合物優(yōu)選的方案中，R5是氫。
在另一式I化合物優(yōu)選的方案中，R1是氫，-NR4R5，低級(jí)烷基(任選被一個(gè)或多個(gè)R11，環(huán)烷基，雜環(huán)，芳基，雜芳基取代，其中環(huán)烷基和雜環(huán)任選被R11取代，而芳基和雜芳基任選被R12取代)，環(huán)烷基(任選被一個(gè)或多個(gè)R11，低級(jí)烷基，雜環(huán)，芳基，和雜芳基取代，其中低級(jí)烷基和雜環(huán)任選被R11取代，而芳基和雜芳基任選被R12取代)，雜環(huán)(任選被一個(gè)或多個(gè)R11，低級(jí)烷基，環(huán)烷基，芳基，和雜芳基取代，其中低級(jí)烷基和環(huán)烷基任選被R11取代，而芳基和雜芳基任選被R12取代)，芳基(任選被一個(gè)或多個(gè)R12，低級(jí)烷基，環(huán)烷基，雜環(huán)，芳基，和雜芳基取代，其中低級(jí)烷基、環(huán)烷基和雜環(huán)任選被R11取代，而雜環(huán)和雜芳基任選被R12取代)，或雜芳基(任選被一個(gè)或多個(gè)R12，低級(jí)烷基，環(huán)烷基，雜環(huán)，芳基，和雜芳基取代，其中低級(jí)烷基，和環(huán)烷基任選被R11取代，而雜環(huán)和芳基任選被R12取代)。
在另一式I化合物優(yōu)選的方案中，R2是氫，-OR3，-NR4R5，或低級(jí)烷基(任選被一個(gè)或多個(gè)-OR3，-NR4R5取代)。
在式I化合物一個(gè)更優(yōu)選的方案中，R1是氫，-NR4R5，低級(jí)烷基(任選被一個(gè)或多個(gè)R11，雜環(huán)，芳基和雜芳基取代，其中雜環(huán)任選被R11取代，而芳基和雜芳基任選被R12取代)，芳基(任選被一個(gè)或多個(gè)R12和低級(jí)烷基取代，其中低級(jí)烷基再任選被R11取代)，或雜芳基(任選被一個(gè)或多個(gè)R12和低級(jí)烷基取代，其中低級(jí)烷基任選再被R11取代)；而R2是氫，-OR8，或低級(jí)烷基(任選被一個(gè)或多個(gè)-OR8和-NR8R9取代)。
在式I化合物另一優(yōu)選的方案中，Y和Z都是N。另一方面，本發(fā)明涉及其中Y和Z之一是氮，而另一個(gè)是氧或硫的化合物。
優(yōu)選的式I化合物包括其中R1是氫或低級(jí)烷基的化合物(任選如上所述被取代)；其中R1是芳基，尤其是苯基的化合物(任選如上所述被取代)；其中R1是-NR4R5的化合物，其中R4和R5之一是氫，另一個(gè)是低級(jí)烷基(任選如上所述被取代)；和其中R1是-NR4R5的化合物，其中R4和R5之一是氫，另一個(gè)是芳基，尤其是苯基(任選如上所述被取代)。
本文所公開(kāi)并被上式覆蓋的化合物可以存在互變異構(gòu)或結(jié)構(gòu)異構(gòu)。本發(fā)明包括這些化合物的任何互變異構(gòu)或結(jié)構(gòu)異構(gòu)形式，或這類(lèi)形式的混合物，并不限于在上面得到的式子范圍內(nèi)所應(yīng)用的任何一種互變異構(gòu)或結(jié)構(gòu)異構(gòu)形式。
式I化合物可以通過(guò)本專(zhuān)業(yè)已知的方法制備。用于合成這些化合物的合適的方法在下面實(shí)施例中提供。一般說(shuō)來(lái)，這些化合物可以根據(jù)如下合成途徑制備。方法1步驟A 步驟B 方法2 方法3 方法4步驟A 步驟B 步驟C
在上述方法1-3中，Y和Z都是N。在方法4中，Y和Z之一是N而另一個(gè)是O或S。
在另一方案中，本發(fā)明涉及包含至少一種式I化合物或其前藥、或式I化合物的藥物可接受的鹽或這類(lèi)化合物的前藥的藥物組合物。
這些藥物組合物可以口服給藥，例如以片劑，包衣片劑，糖丸，硬或軟膠囊，溶液，乳液或懸浮液形式給藥。它們也可以直腸給藥，例如以栓劑形式給藥，或者腸胃外給藥，例如以注射溶液形式給藥。
包含式I化合物、這類(lèi)化合物的前藥或其鹽的本發(fā)明藥物組合物可以用本專(zhuān)業(yè)已知的方法生產(chǎn)，例如通過(guò)常規(guī)混合，制膠囊，溶解，成粒，乳化，捕集，制糖丸，或凍干法生產(chǎn)。這些藥物制劑可以用治療惰性的無(wú)機(jī)或有機(jī)載體配制。乳糖，玉米淀粉或其衍生物，滑石，硬脂酸或其鹽可以用作片劑，包衣片劑，糖丸和硬膠囊的載體。軟膠囊的合適載體有植物油，蠟，脂肪，半固體或液體poll。根據(jù)活性物質(zhì)的性質(zhì)，在軟膠囊的情況下一般不用載體。生產(chǎn)溶液或糖漿所用的載體是水，多醇，蔗糖，轉(zhuǎn)化糖和葡萄糖。注射液的合適載體是水，醇，多醇，甘油，植物油，磷脂和表面活性劑。栓劑的合適載體是天然或硬化的油，蠟，脂肪和半固體多醇。
藥物制劑也可以含有防腐劑，增溶劑，穩(wěn)定劑，潤(rùn)濕劑，乳化劑，甜味劑，著色劑，調(diào)味劑，改變滲透壓的鹽，緩沖劑，包衣基或抗氧化劑。它們也可以含有其它有治療價(jià)值的物質(zhì)，包括式I化合物之外的其它活性成分。
如上所述，式I化合物、其前藥和其鹽、和含有這些化合物的組合物可用于治療或控制細(xì)胞增生疾病，尤其是腫瘤性疾病。這些化合物和含有所述化合物的制劑對(duì)于治療或控制固體腫瘤，例如乳腺和結(jié)腸腫瘤特別有用。
本發(fā)明化合物的治療有效量指能夠有效預(yù)防，減緩或改善病情，或延長(zhǎng)被治療患者生命的量。治療有效量的確定在本專(zhuān)業(yè)的知識(shí)范圍內(nèi)。
式I化合物的治療有效量或劑量可以在很寬的限制內(nèi)變化，并可以在各種具體情況下根據(jù)個(gè)體需要進(jìn)行調(diào)節(jié)。一般說(shuō)來(lái)，在對(duì)體重約70k的成人口服或腸胃外給藥的情況下，日劑量約10mg至約10000mg，優(yōu)選約200mg至約1000mg將是合適的，當(dāng)指明時(shí)，上限可以被超過(guò)。日劑量可以單劑量或多劑量給藥，或者對(duì)于腸胃外給藥時(shí)，可以連續(xù)灌注。
本發(fā)明化合物可以根據(jù)已知技術(shù)，如上面提供的一般途徑合成。下列實(shí)施例舉例說(shuō)明用于合成本發(fā)明化合物和制劑的方法。實(shí)施例1一般合成步驟和原料一般方法A制備取代的三環(huán)苯并咪唑 步驟1將腈(RCN，2g)的甲醇(20ML)溶液(用于這些實(shí)施例中所有的腈都是購(gòu)買(mǎi)的)冷卻至0℃(冰水浴)，并將HCl或HBr氣體通入溶液混合物中。通過(guò)TLC監(jiān)測(cè)原料腈的消失。全部轉(zhuǎn)化后，將混合物減壓濃縮，得到亞氨酸酯粗產(chǎn)物，不經(jīng)進(jìn)一步純化用于下一步。步驟2將二氨基羥吲哚(0.22mmol，60mg)和粗亞氨酸酯(4當(dāng)量，0.88mmol)在乙醇(3ML)中的混合物加熱回流。反應(yīng)用TLC監(jiān)測(cè)。一般在0.5至4小時(shí)后完成轉(zhuǎn)化。使反應(yīng)混合物冷卻至室溫(r.t.)，然后用1N HCl淬滅。抽濾收集產(chǎn)生的沉淀，用水洗滌并在真空爐中干燥。如果需要，產(chǎn)物通過(guò)反相色譜純化。一般方法B制備取代的氨基-苯并咪唑 將二氨基羥吲哚(60mg，0.22mmol)和異硫氰酸酯(5當(dāng)量，1.1mmol)在乙醇(2ML)中的非均相混合物放入厚壁玻璃管內(nèi)。然后在室溫加入偶合劑N-(3-二甲基氨基丙基)-N’-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(Fluka)(65mg，0.33mmol)。用特氟龍蓋將該管密封，并放在油浴中于94-98℃加熱。反應(yīng)通過(guò)TLC監(jiān)測(cè)。反應(yīng)時(shí)間為45分鐘至12小時(shí)。反應(yīng)完成后，將混合物冷卻至室溫，并用水淬滅反應(yīng)。如果形成沉淀，則接著進(jìn)行下面的步驟1。否則進(jìn)行下面的步驟2。
步驟1抽濾收集沉淀，用水洗滌，并在真空爐中干燥。如果需要，用反相HPLC進(jìn)行純化。
步驟2混合物用乙酸乙酯萃取。分開(kāi)兩相。有機(jī)層用鹽水洗滌，無(wú)水硫酸鈉干燥，并減壓濃縮。殘余物用乙醚研制，抽濾收集產(chǎn)生的固體。如果需要，產(chǎn)物通過(guò)反相HPLC純化。原料15-硝基-2-苯基苯并噻唑 將2-氯-5-硝基苯胺(2.00g，11.8mmol)(Aldrich)，苯甲酰氯(1.98g，14.2mmol)(J.T.BakeD，三乙胺(“TEA”，1.79g，17.7mmol)(Aldrich)，和少許4-二甲基氨基吡啶晶體(“DMAP”，Aldrich)在100ML二氯甲烷中于0℃混合。使混合物溫?zé)嶂潦覝?，并在室溫?cái)嚢?6小時(shí)?；旌衔镉孟←}酸溶液，水，飽和碳酸氫鈉溶液，鹽水洗滌，硫酸鈉干燥。將溶劑濃縮，得到2.57g固體，將其與絕對(duì)乙醇混合并加熱回流。隨后，將硫(310m曲和硫化鈉(2.23g)的混合物加熱(加熱槍)形成顆粒狀固體。將該固體混合物加入回流的乙醇混合物，并繼續(xù)回流6小時(shí)。將混合物冷卻，用濃鹽酸酸化，倒入水中。將含水混合物用乙酸乙酯萃取三次。合并的有機(jī)萃取液用水，鹽水洗滌，并用無(wú)水硫酸鎂干燥。將溶液濃縮得到1.5起黃色固體，不經(jīng)進(jìn)一步純化就使用。原料25-硝基-2-苯基苯并噁唑 2-氨基-4-硝基苯酚(1.00g，6.49mmol)(Aldrich)，原苯甲酸三甲基酯(1.42g，7.79mmol)(Aldrich)，和50mg對(duì)甲苯磺酸一水合物(Aldrich)在30ML苯中混合。將混合物加熱回流3小時(shí)，冷卻，用30ML己烷稀釋?zhuān)⑦^(guò)濾。固體殘余物用乙酸乙酯/己烷結(jié)晶，得到1.30g(5.42mmol，83％)黃綠色固體，不經(jīng)進(jìn)一步純化就可使用。原料36-硝基-2-苯基苯并噁唑 2-氨基-5-硝基苯酚(1.00g，6.49mmol)(Aldrich)，原苯甲酸三甲基酯(1.42g，7.79mmol)(Aldrich)，和50mg對(duì)甲苯磺酸一水合物(Aldrich)在30ML苯中混合。將混合物加熱回流3小時(shí)，冷卻，用30ML己烷稀釋?zhuān)⑦^(guò)濾。固體殘余物用乙酸乙酯/己烷結(jié)晶，得到1.32g(5.52mmol，85％)綠色固體。原料46-硝基-2-苯基苯并噻唑 在-5℃，攪拌下往2-苯基苯并噻唑(1.05g，4.97mmol)(LancasteD在濃硫酸(10ML)中的混合物加入硝酸(0.35ML)和硫酸(1.8ML)溶液中。反應(yīng)混合物在-5℃攪拌2小時(shí)，倒入冰中，并用乙酸乙酯(3×50ML)萃取。合并的萃取液用鹽水洗滌，無(wú)水硫酸鎂干燥并真空濃縮。殘余物用硅膠柱純化，用己烷/乙酸乙酯＝5/1洗脫，得到0.802g(3.13mmol，63％)白色固體。原料5(5-硝基-2-苯基苯并噁唑-4-基)乙腈 5-硝基-2-苯基苯并噁唑(300mg，1.25mmol)(原料2)和4-氯苯氧基乙腈(219mg，1.3mmol)(Aldrich)在二甲亞砜(3.5ML)中混合。加入粉末狀的氫氧化鉀(276mg，5mmol)，混合物在室溫下攪拌2.25小時(shí)。將混合物倒入冰水中，并用濃鹽酸酸化。混合物用乙酸乙酯(3×)萃取。合并的有機(jī)層用水(2×)，鹽水洗滌，無(wú)水硫酸鎂干燥。將溶劑真空濃縮，殘余物用乙酸乙酯/己烷結(jié)晶，得到產(chǎn)物(產(chǎn)率114mg，33％)。原料6(5-硝基-2-苯基苯并噻唑-4-基)乙腈
5-硝基-2-苯基苯并噻唑(1.52g，5.94mmol)(原料1)和4-氯苯氧基乙腈(1.05g，6.26mmol)(Aldrich)在二甲亞砜(20ML)中混合。加入粉末狀的氫氧化鉀(1.40g，25mmol)，混合物在室溫下攪拌8小時(shí)。將混合物倒入冰水中，并用濃鹽酸酸化?；旌衔镉靡宜嵋阴?3×)萃取。合并的有機(jī)層用水(2×)，鹽水洗滌，無(wú)水硫酸鎂干燥。將溶劑真空濃縮，殘余物用乙酸乙酯/己烷結(jié)晶，得到產(chǎn)物(產(chǎn)率0.64g，37％)。原料7(6-硝基-2-苯基苯并噁唑-7-基)乙腈 在-30℃、攪拌下，往叔丁醇鉀(701mg，6.25mmol)在DMF(6ML)中的懸浮液中加入6-硝基-2-苯基苯并噁唑(500mg，2.08mmol)(原料3)和4-氯苯氧基乙腈(366mg，2.19mmol)(Aldrich)的DMF(20ML)溶液?；旌衔镌诖藴囟认聰嚢?小時(shí)，并在0℃用1N鹽酸水溶液中和。水層用乙酸乙酯萃取。合并的萃取液用無(wú)水硫酸鎂干燥，并真空濃縮得到黃色固體。粗產(chǎn)物通過(guò)硅膠層析純化。(產(chǎn)率520mg，90％)。原料8(6-硝基-2-苯基苯并噻唑-7-基)乙腈 在-30℃、攪拌下，往叔丁醇鉀(171mg，1.53mmol)(Aldrich)在DMF(2ML)中的懸浮液中加入6-硝基-2-苯基苯并噻唑(130mg，0.51mmol)(原料4)和4-氯苯氧基乙腈(89.4mg，0.53mmol)(Aldrich)的DMF(7ML)溶液?；旌衔镌诖藴囟认聰嚢?小時(shí)，并在0℃用1N鹽酸水溶液中和。水層用乙酸乙酯萃取。合并的萃取液用無(wú)水硫酸鎂干燥并真空濃縮得到黃色固體。粗產(chǎn)物通過(guò)硅膠層析純化。(產(chǎn)率42mg，28％)。原料91，3-二氫-4-氟-2H-吲哚-2-酮 將6-氟-2-硝基芐基氰化物(23.10g，0.12mol)(根據(jù)A.Kalir，Synthesis(1987)514-515)溶于10∶1 MeOH/H2O(250ML)，并將溶液在冰水浴中冷卻。往冷卻的混合物中通入HBr氣體75分鐘。使溶液溫?zé)嶂潦覝?，然后減壓將其濃縮至其體積的一半。室溫下先后加入THF(100ML)，水(100ML)和濃鹽酸(6ML)，并保持?jǐn)嚢?5分鐘。將混合物倒入水中，并用乙酸乙酯萃取。合并的有機(jī)層用水，飽和碳酸氫鈉水溶液，鹽水洗滌，然后用硫酸鈉干燥并減壓濃縮。將該物(20.9g)溶于乙酸(200ML)，并在Parr裝置中于50Psi，在10％Pd/C(4.33g)存在下氫化2小時(shí)。將反應(yīng)混合物濾過(guò)硅藻土濾餅，并將該濾餅用乙酸洗滌。將溶液減壓濃縮并溶于含有1N氫氧化鈉(15ML)的甲醇(300ML)中。該混合物被倒入2∶1飽和氯化鈉/水(600ML)中，并用乙酸乙酯萃取。合并的有機(jī)相用鹽水洗滌，硫酸鈉干燥并濃縮。粗殘余物用乙醚研制得到5.8g(第一批)純1，3-二氫-4-氟-2H-吲哚-2-酮。母液進(jìn)行硅膠層析(230-400目，用40％乙酸乙酯/己烷洗脫)得到1.6g產(chǎn)物(氰化物的總產(chǎn)率41％)。原料101，3-二氫-4-氟-5-硝基-2H-吲哚-2-酮 在攪拌下將1，3-二氫-4-氟-2H-吲哚-2-酮(6.29g，41.6mmol)(原料9)溶于100ML濃硫酸。將該混合物在干冰-丙酮浴中冷卻至-20℃，在30分鐘內(nèi)將其慢慢加入2.6ML(41.6MMOL)硝酸在10ML硫酸中的溶液中。加完后，反應(yīng)混合物在-20℃攪拌45分鐘(30分鐘后，TLC50％乙酸乙酯/己烷顯示反應(yīng)完成)，然后倒入1L冰水中，用2×200ML乙酸乙酯萃取，2×200ML飽和氯化鈉溶液洗滌，硫酸鈉干燥，過(guò)濾并在45℃高真空濃縮，得到褐色固體(7.8豫)。用乙酸乙酯結(jié)晶得到褐色固體(3.94曲。母液進(jìn)行硅膠層析(230-400目，用50％乙酸乙酯/己烷洗脫)得到1.91g產(chǎn)物(總產(chǎn)率71.7％)。實(shí)施例22-苯基-6，8-二氫噁唑并[4，5-e]吲哚-7-酮(A) 將(5-硝基-2-苯基苯并噁唑-4-基)-乙腈(1.10g，3.98mmol)(原料5)懸浮于濃硫酸/水(1/1，25ML)，并在100℃攪拌30分鐘。產(chǎn)生的溶液用水稀釋?zhuān)⒂靡宜嵋阴ポ腿?，合并的有機(jī)萃取液用無(wú)水硫酸鎂干燥，真空濃縮得到粗酸。
加熱回流下，30分鐘內(nèi)往粗酸的乙酸(10ML)溶液中分批加入過(guò)量鋅粉(1.57g，24.2mmol)直至反應(yīng)溶液變清。將混合物濾過(guò)硅藻土(FisherSCientific)墊，并用熱DMF洗滌。真空除去溶劑，殘余物被懸浮，并在3M鹽酸中攪拌30分鐘。收集不溶物，用水洗滌，晾干得到2-苯基-6，8-二氫噁唑并[4，5-e]吲哚-7-酮。(產(chǎn)率180mg，18％)實(shí)施例32-苯基-6，8-二氫噻唑并[4，5-e]吲哚-7-酮(B)
將(5-硝基-2-苯基苯并噻唑-4-基)乙腈(204.2mg，0.692mmol)(原料6)的溶液懸浮于濃硫酸/水(1/1，3ML)，并在100℃攪拌30分鐘。將產(chǎn)生的溶液用水稀釋?zhuān)⒂靡宜嵋阴ポ腿。喜⒌挠袡C(jī)萃取液用無(wú)水硫酸鎂干燥并真空濃縮，得到粗酸。加熱回流下，30分鐘內(nèi)往粗酸的乙酸(10ML)溶液中分批加入過(guò)量鋅粉(0.45g，6.92mmol)。將混合物濾過(guò)硅藻土墊，并用熱DMF洗滌。真空除去溶劑，殘余物被懸浮，并在3M鹽酸中攪拌30分鐘。收集不溶物，用水洗滌，晾干得到2-苯基-6，8-二氫噻唑并[4，5-e]吲哚-7-酮。(產(chǎn)率20mg，11％)實(shí)施例42-苯基-6，8-二氫噁唑并[5，4-e]吲哚-7-酮(C) 將(6-硝基-2-苯基苯并噁唑-7-基)-乙腈(66mg，0.23mmol)(原料7)懸浮于濃硫酸/水(1/1，2ML)，并在100℃攪拌30分鐘。產(chǎn)生的溶液用水稀釋?zhuān)⒂靡宜嵋阴ポ腿?，合并的有機(jī)萃取液用無(wú)水硫酸鎂干燥，真空濃縮得到粗酸。加熱回流下，30分鐘內(nèi)往粗酸的乙酸(3ML)溶液中分批加入過(guò)量鋅粉(120mg，1.85mmol)。將混合物濾過(guò)硅藻土墊，并用熱DMF洗滌。真空除去溶劑，混懸殘余物，并在3M鹽酸中攪拌30分鐘。收集不溶物，用水洗滌，晾干得到2-苯基-6，8-二氫噁唑并[5，4-e]吲哚-7-酮。(產(chǎn)率17mg，30％)實(shí)施例52-苯基-6，8-二氫噻唑并[5，4-e]吲哚7-酮(B) 將(6-硝基-2-苯基苯并噻唑-7-基)乙腈(40mg，0.23mmol)(原料8)的溶液懸浮于濃硫酸/水(1/1，2ML)，并在100℃攪拌30分鐘。將產(chǎn)生的溶液用水稀釋?zhuān)⒂靡宜嵋阴ポ腿?，合并的有機(jī)萃取液用無(wú)水硫酸鎂干燥并真空濃縮，得到粗酸。隨后，加熱回流下，30分鐘內(nèi)往粗酸的乙酸(3ML)溶液中分批加入過(guò)量鋅粉(88.4mg，1.36mmol)。將混合物濾過(guò)硅藻土墊，并用熱DMF洗滌。真空除去溶劑，殘余物被懸浮，并在3M鹽酸中攪拌30分鐘。收集不溶物，用水洗滌，晾干得到2-苯基-6，8-二氫噻唑并[5，4-e]吲哚-7-酮。(產(chǎn)率12mg，33％)實(shí)施例6(Z)-6，8-二氫-8-[(3-甲氧基-1H-吡咯-2-基)亞甲基]-2-苯基-7H-吡咯并[3，2-e]苯并噁唑-7-酮(E) 將3-甲氧基吡咯-2-甲醛(15mg，0.12mmol)(根據(jù)F.Bellamy等，J.Chem.Research(S)(1979)，18-19；J.Chem.Research(M)(1979)0101-0116)、哌啶(3滴)(Aldrich)和2-苯基-6，8-二氫-噁唑并[4，5-e]吲哚-7-酮(25mg，0.10mmoD(實(shí)施例2所得)溶于DMF(1ML)?；旌衔锉患訜嶂?0℃，并在此溫度下攪拌1小時(shí)。將混合物冷卻，倒入水中，用濃鹽酸酸化?；旌衔镉靡宜嵋阴ポ腿?，合并的有機(jī)萃取液用水，鹽水洗滌，無(wú)水硫酸鎂干燥。減壓濃縮溶劑，粗產(chǎn)物通過(guò)逆相HPLC純化，用乙腈-水混合物作溶劑。(產(chǎn)率3.6mg，8.4％)實(shí)施例7(Z)-6，8-二氫-8-[(3-甲氧基-1H-吡咯-2-基)亞甲基]-2-苯基-7H-吡咯并[3，2-e]苯并噻唑-7-酮(F) 將3-甲氧基吡咯-2-甲醛(11mg，0.088mmol)(根據(jù)上述Bellamy的文獻(xiàn))，哌啶(3滴)(Aldrich)，和2-苯基-6，8-二氫-噻唑并[4，5-e]吲哚-7-酮(21.4mg，0.08mmol)(實(shí)施例3所得)溶于DMF(3MU?；旌衔锉患訜嶂?0℃，并在此溫度下攪拌1小時(shí)。將混合物冷卻，倒入水中，用濃鹽酸酸化。混合物用乙酸乙酯萃取，合并的有機(jī)萃取液用水，鹽水洗滌，無(wú)水硫酸鎂干燥。減壓濃縮溶劑，粗產(chǎn)物通過(guò)反相HPLC純化，用乙腈-水混合物作溶劑，然后用乙醇結(jié)晶。(產(chǎn)率4.5mg，15％)實(shí)施例8(Z)-6，8-二氫-8-[(3-甲氧基-1H-吡咯-2-基)亞甲基]-2-苯基-7H-吡咯并[3，2-g]苯并噁唑-7-酮(G) 將3-甲氧基吡咯-2-甲醛(13mg，0.105mmol)(根據(jù)上述Bellamy的文獻(xiàn))和2-苯基-6，8-二氫-噁唑并[5，4-e丹吲哚-7-酮(17.4mg，0.068mmol)(原料4)懸浮于10％哌啶(Aldrich)的2-丙醇(1ML)溶液中。將混合物加熱回流2小時(shí)。將混合物冷卻，倒入水中，含水混合物用濃鹽酸酸化。水層用乙酸乙酯萃取，合并的有機(jī)萃取液用水，鹽水洗滌，無(wú)水硫酸鎂干燥。減壓濃縮溶劑，粗產(chǎn)物通過(guò)逆相HPLC純化，用乙腈-水混合物作溶劑。(產(chǎn)率10mg，41％)實(shí)施例9(Z)-6，8-二氫-8-[(3-甲氧基-1H-吡咯-2-基)亞甲基]-2-苯基-7H-吡咯并[2，3-g]苯并噻唑-7-酮(均 將3-甲氧基吡咯-2-甲醛(13mg，0.105mmol)(根據(jù)上述Bellamy的文獻(xiàn))和2-苯基-6，8-二氫-噻唑并[5，4-e]吲哚-7-酮(20mg，0.075mmol)(實(shí)施例5)懸浮于10％哌啶(Aldrich)的2-丙醇(1ML)溶液中?；旌衔锉患訜峄亓?小時(shí)。將混合物冷卻，倒入水中，含水混合物用濃鹽酸酸化。水層用乙酸乙酯萃取，合并的有機(jī)萃取液用水，鹽水洗滌，無(wú)水硫酸鎂干燥。真空除去溶劑，粗產(chǎn)物通過(guò)逆相HPLC純化，用乙腈-水混合物作溶劑。(產(chǎn)率10mg，36％)實(shí)施例10(Z)-1，3-二氫-4-氟-5-硝基-3-[(1H-吡咯-2-基)亞甲基]-2H-吲哚-2-酮(I) 在室溫往1，3-二氫-4-氟-5-硝基-2H-吲哚-2-酮(400mg，2.04mmol)(原料10)的甲醇(4ML)溶液中先后加入吡咯-2-甲醛(220mg，2.25mmol)(Aldrich)和氫氧化四丁基銨(4.5ml，1.0M甲醇溶液)(Aldrich)?；旌衔镌谑覝?cái)嚢?2小時(shí)，然后用1N鹽酸淬滅。抽濾收集黃色的沉淀，用水洗滌，并在真空爐中干燥。(產(chǎn)率510mg，92％)。實(shí)施例11(Z)-4-疊氮基-1，3-二氫-5-硝基-3-[(1H-吡咯-2-基)亞甲基]-2H-吲哚-2-酮(J) 將(Z)-1，3-二氫-4-氟-5-硝基-3-[(1H-吡咯-2-基)亞甲基]-2H-吲哚-2-酮(400mg，1.46mmol)(實(shí)施例10所得)懸浮于THF/乙醇(20ml/10ml)。在室溫下先后加入Hunig’s堿(二異丙基乙胺，3.8ML，22MMOL)(Aldrich)和三甲基硅烷基疊氮化物(1.87ml，14.65mmol)(Aldrich)。混合物被回流12小時(shí)。不均勻的反應(yīng)混合物被冷卻至室溫，并用1N鹽酸淬滅。抽濾收集沉淀，用水洗滌，真空爐中干燥，得到(Z)-4-疊氮基-1，3-二氫-5-硝基-3-[(1H-吡咯-2-基)亞甲基]-2H-吲哚-2-酮紅色固體(產(chǎn)率340mg，79％)。實(shí)施例12(Z)-4，5-二氨基-1，3-二氫-3-[(1H-吡咯-2-基)亞甲基]-2H-吲哚-2-酮(K) 將(Z)-4-疊氮基-1，3-二氫-5-硝基-3-[(1H-吡咯-2-基)亞甲基]-2H-吲哚-2-酮(340mg，1.15mmol)(實(shí)施例11所得)在室溫下溶于THF(30ML)。加入氫氧化銨(0.36ML)，接著加入催化量的毒化過(guò)的鉑/碳(5％Pt/C·1/2S，50mg)(Engelhard Industries)。反應(yīng)混合物在Parr彈中于50 psi的氫氣中氫化2.5小時(shí)。將混合物濾過(guò)硅藻土餅，并將該餅用THF洗滌兩次。用新鮮催化劑，溶劑和氫氧化銨重復(fù)氫化(50 psi，2小時(shí))。濾過(guò)硅藻土后，混合物被減壓濃縮。粗產(chǎn)物通過(guò)快速硅膠層析純化(230-400目，用75％乙酸乙酯/己烷洗脫)，得到(Z)-4，5-二氨基-1，3-二氫-3-[(1H-吡咯-2-基)亞甲基]-2H-吲哚-2-酮。(產(chǎn)率160mg，58％)。實(shí)施例13(Z)-1，3-二氫-4-氟-3-[(3-甲氧基-1H-吡咯-2-基)亞甲基]-5-硝基-2H-吲哚-2-酮(L) 將1，3-二氫-4-氟-5-硝基-2H-吲哚-2-酮(5.25g，26.8mmol)(原料9)懸浮于110ML1.35％哌啶的2-丙醇溶液(Aldrich)。加入3-甲氧基-2-吡咯甲醛(3.68g，29.4mmol，1.1當(dāng)量)(上述Bellamy的文獻(xiàn))，此混合物在60℃加熱3.5小時(shí)(TLC50％乙酸乙酯/己烷)。反應(yīng)混合物被倒入1L冰水混合物中，濾出固體沉淀，用水洗滌，并在50℃于真空爐中干燥。得到(Z)-1，3-二氫-4-氟-3-[(3-甲氧基-1H-吡咯-2-基)亞甲基]-5-硝基-2H-吲哚-2-酮橙褐色固體。(產(chǎn)率6.6g，81％)。實(shí)施例14(Z)-4-疊氮基-1，3-二氫-3-[(3-甲氧基-1H-吡咯-2-基)亞甲基]-5-硝基-2H-吲哚-2-酮(M) 將(Z)-1，3-二氫-4-氟-3-[(1H-吡咯-2-基)亞甲基]-5-硝基-2H-吲哚-2-酮(6.60g，21.8mmol)(實(shí)施例13所得)懸浮于330ML THF和165ML乙醇。往此混合物中加入二異丙基乙胺(56.9ML，326MMOU和三甲基硅烷基疊氮化物(28.6ml，218mmol)(Aldrich)。反應(yīng)混合物被回流過(guò)夜并倒入2L冰和1N鹽酸的混合物中。濾出固體沉淀，用水洗滌，于50℃真空干燥，得到(Z)-4-疊氮基-1，3-二氫-3-[(1H-吡咯-2-基)亞甲基]-5-硝基-2H-吲哚-2-酮深紅色固體(產(chǎn)率6.44g，90％)。實(shí)施例15(Z)-4，5-二氨基-1，3-二氫-3-[(3-甲氧基-1H-吡咯-2-基)亞甲基]-2H-吲哚-2-酮(№ 將(Z)-4-疊氮基-1，3-二氫-3-[(1H-吡咯-2-基)亞甲基]-5-硝基-2H-吲哚-2-酮(2.08g，6.37mmol)(實(shí)施例14所得)在室溫下溶于THF(160ML)。加入氫氧化銨(2ML)，接著加入催化量的毒化過(guò)的鉑/碳(300mg)。反應(yīng)混合物在Parr彈中于50 psi的氫氣中氫化12小時(shí)。將混合物濾過(guò)硅藻土餅，并將該餅用THF洗滌兩次，并將濾液減壓濃縮。粗產(chǎn)物通過(guò)快速硅膠層析純化(230-400目，用75％乙酸乙酯/己烷洗脫)，得到(Z)-4，5-二氨基-1，3-二氫-3-[(3-甲氧基1H-吡咯-2-基)亞甲基]-2H-吲哚-2-酮。(產(chǎn)率1.44g，84％)。實(shí)施例16(Z)-2-苯基-8-[(1H-吡咯-2-基)亞甲基]-3，6，7，8-四氫-吡咯并[3，2-e]苯并咪唑-7-酮(O) 用上述方法A，從芐腈的亞氨酸酯(220mg，0.88mmol)(Aldrich所得的芐腈)和HBr制備(Z)-2-苯基-8-[(1H-吡咯-2-基)亞甲基]-3，6，7，8-四氫-吡咯并[3，2-e]苯并咪唑-7-酮。(產(chǎn)率58％)。實(shí)施例17(Z)-8-[(3-甲氧基-1H-吡咯-2-基)亞甲基]-2-甲基-3，6，7，8-四氫-吡咯并[3，2-e]苯并咪唑-7-酮(P) 用上述方法A，從乙腈的亞氨酸酯(94.6mg，0.88mmol)(Aldrich所得的芐腈)和HCl制備(Z)-8-[(3-甲氧基-1H-吡咯-2-基)亞甲基]-2-甲基-3，6，7，8-四氫-吡咯并[3，2-e]苯并咪唑-7-酮。(產(chǎn)率93％)。實(shí)施例18(Z)-8-[(3-甲氧基-1H-吡咯-2-基)亞甲基]-2-苯基-3，6，7，8-四氫-吡咯并[3，2-e]苯并咪唑-7-酮(Q) 用上述方法A，從芐腈的亞氨酸酯(165mg，0.88mmol)和HCl制備(Z)-8-[(3-甲氧基-1H-吡咯-2-基)亞甲基]-2-苯基-3，6，7，8-四氫-吡咯并[3，2-e]苯并咪唑-7-酮。(產(chǎn)率58％)。實(shí)施例19(Z)-4-[8-[(3-甲氧基-1H-吡咯-2-基)亞甲基]-3，6，7，8-四氫-吡咯并[3，2-e]苯并咪唑-2-基]苯甲酸(砷 用上述方法A，從4-氰基苯甲酸(191.5mg，0.88mmol)和HCl制備(Z)-4-[8-[(3-甲氧基-1H-吡咯-2-基)亞甲基]-3，6，7，8-四氫-吡咯并[3，2-e]苯并咪唑-2-基]苯甲酸。(產(chǎn)率82％)。實(shí)施例20(Z)-2-(2-羥基苯基)-8-[(3-甲氧基-1H-吡咯-2-基)亞甲基]-3，6，7，8-四氫-吡咯并[3，2-e]苯并咪唑-7-酮(S) 用上述方法A，從2-氰基苯酚的亞氨酸酯(166mg，0.88mmol)和HCl制備(Z)-2-(2-羥基苯基)-8-[(3-甲氧基-1H-吡咯-2-基)亞甲基]-3，6，7，8-四氫-吡咯并[3，2-e]苯并咪唑-7-酮。(產(chǎn)率78％)。實(shí)施例21(Z)-2-[(4-甲氧基苯基)甲基]-8-[(3-甲氧基-1H-吡咯-2-基)亞甲基]-3，6，7，8-四氫-吡咯并[3，2-e]苯并咪唑-7-酮(T) 用上述方法A，從(4-甲氧基苯基)乙腈的亞氨酸酯(191.5mg，0.88mmol)和HCl制備(Z)-24(4-甲氧基苯基)甲基]-84(3-甲氧基-1H-吡咯-2-基)亞甲基]-3，6，7，8-四氫-吡咯并[3，2-e]苯并咪唑-7-酮。(產(chǎn)率97％)。實(shí)施例22外消旋-(Z)-2-(1-羥基-1-苯基甲基)-8-[(3-甲氧基-1H-吡咯-2-基)亞甲基]-3，6，7，8-四氫-吡咯并[3，2-e]苯并咪唑-7-酮(U) 用上述方法A，從扁桃腈的亞氨酸酯(179mg，0.88mmol)和HCl制備外消旋-(Z)-2-(1-羥基-1-苯基甲基)-84(3-甲氧基-1H-吡咯-2-基)亞甲基]-3，6，7，8-四氫-吡咯并[3，2-e]苯并咪唑-7-酮。(產(chǎn)率50％)。實(shí)施例23(Z)-2-[2-(4-羥基苯基)乙基]-84(3-甲氧基-1H-吡咯-2-基)亞甲基]-3，6，7，8-四氫-吡咯并[3，2-e]苯并咪唑-7-酮(V)
用上述方法A，從3-(4-羥基苯基)丙腈的亞氨酸酯(191.5mg，0.88mmol)和HCl制備(Z)-2-[2-(4-羥基苯基)乙基]-8-[(3-甲氧基-1H-吡咯-2-基)亞甲基]-3，6，7，8-四氫-吡咯并[3，2-e]苯并咪唑-7-酮。(產(chǎn)率79％)。實(shí)施例24(Z)-2-[3-(苯基)丙基]-8-[(3-甲氧基-1H-吡咯-2-基)亞甲基]-3，6，7，8-四氫-吡咯并[3，2-e]苯并咪唑-7-酮(W) 用上述方法A，從4-苯基丁腈的亞氨酸酯(189.8mg，0.88mmol)和HCl制備(Z)-2-[3-(苯基)丙基]-8-[(3-甲氧基-1H-吡咯-2-基)亞甲基]-3，6，7，8-四氫-吡咯并[3，2-e]苯并咪唑-7-酮。(產(chǎn)率82％)。實(shí)施例25(Z)-2-[N-(3-甲氧基丙基)氨基]-8-[(3-甲氧基-1H-吡咯-2-基)亞甲基]-3，6，7，8-四氫-吡咯并[3，2-e]苯并咪唑-7-酮(X) 用上述方法B(步驟2)，從3-甲氧基丙基異硫氰酸酯(150μl)(Lancaster)制備(Z)-2-[N-(3-甲氧基丙基)氨基]-8-[(3-甲氧基-1H-吡咯-2-基)亞甲基]-3，6，7，8-四氫-吡咯并[3，2-e]苯并咪唑-7-酮。(產(chǎn)率23％)。實(shí)施例26(Z)-2-[M(3，4-二甲氧基苯基)氨基]-8-[(3-甲氧基-1H-吡咯-2-基)亞甲基]-3，6，7，8-四氫-吡咯并[3，2-e]苯并咪唑-7-酮(Y) 用上述方法B(步驟2)，從3，4-二甲氧基苯基異硫氰酸酯(214.8mg)(Transworld)制備(Z)-2-[N-(3，4-二甲氧基苯基)氨基]-8-[(3-甲氧基-1H-吡咯-2-基)亞甲基]-3，6，7，8-四氫-吡咯并[3，2-e]苯并咪唑-7-酮。(產(chǎn)率84％)。實(shí)施例27(Z)-2-[N-(4-甲氧基苯基)氨基]-8-[(3-甲氧基-1H-吡咯-2-基)亞甲基]-3，6，7，8-四氫-吡咯并[3，2-e]苯并咪唑-7-酮(Z) 用上述方法B(步驟1)，從4-甲氧基苯基異硫氰酸酯(182μl)(Transworld)制備(Z)-2-[N-(4-甲氧基苯基)氨基]-8-[(3-甲氧基-1H-吡咯-2-基)亞甲基]-3，6，7，8-四氫-吡咯并[3，2-e]苯并咪唑-7-酮。(產(chǎn)率32％)。實(shí)施例28(Z)-2-[N-[(4-甲氧基苯基)甲基]氨基]-8-[(3-甲氧基-1H-吡咯-2-基)亞甲基]-3，6，7，8-四氫-吡咯并[3，2-e]苯并咪唑-7-酮(AA) 用上述方法B(步驟1)，從4-甲氧基芐基異硫氰酸酯(197μl)(Transworld)制備(Z)-2-[N-[(4-甲氧基苯基)甲基]氨基]-8-[(3-甲氧基-1H-吡咯-2-基)亞甲基]-3，6，7，8-四氫-吡咯并[3，2-e]苯并咪唑-7-酮。(產(chǎn)率38％)。實(shí)施例29(Z)-2-[N-(3-乙酰基苯基)氨基]-8-[(3-甲氧基-1H-吡咯-2-基)亞甲基]-3，6，7，8-四氫-吡咯并[3，2-e]苯并咪唑-7-酮(BB) 用上述方法B(步驟1)，從3-乙?；交惲蚯杷狨?195mg)(Transworld)制備(Z)-2-[N-(3-乙?；交?氨基]-84(3-甲氧基-1H-吡咯-2-基)亞甲基]-3，6，7，8-四氫-吡咯并[3，2-e]苯并咪唑-7-酮。(產(chǎn)率76％)。實(shí)施例30(Z)-4-[[84(3-甲氧基-1H-吡咯-2-基)亞甲基]-7-氧代-3，6，7，8-四氫-咪唑并[4，5-e]吲哚-2-基]氨基]苯甲酸乙酯(CC) 用上述方法B(步驟1)，從4-乙氧羰基苯基異硫氰酸酯(228mg)(Transworld)制備(Z)-44[84(3-甲氧基-1H-吡咯-2-基)亞甲基]-7-氧代-3，6，7，8-四氫-咪唑并[4，5-e]吲哚-2-基]氨基]苯甲酸乙酯。(產(chǎn)率99％)。實(shí)施例31(Z)-2-[N-(4-二甲基氨基苯基)氨基]-8-[(3-甲氧基-1H-吡咯-2-基)亞甲基]-3，6，7，8-四氫-吡咯并[3，2-e]苯并咪唑-7-酮(DD) 用上述方法B(步驟1)，從4-二甲基氨基苯基異硫氰酸酯(196mg)(Transworld)制備(Z)-2-[N-(4-二甲基氨基苯基)氨基]-84(3-甲氧基-1H-吡咯-2-基)亞甲基]-3，6，7，8-四氫-吡咯并[3，2-e]苯并咪唑-7-酮。(產(chǎn)率76％)。實(shí)施例32(Z)-4-[[84(3-甲氧基-1H-吡咯-2-基)亞甲基]-7-氧代-3，6，7，8-四氫-咪唑并[4，5-e]吲哚-2-基]氨基]苯甲酸甲酯(CC)
用上述方法B(步驟1)，從4-甲氧羰基苯基異硫氰酸酯(212mg)(Transworld)制備(Z)-4-[[8-[(3-甲氧基-1H-吡咯-2-基)亞甲基]-7-氧代-3，6，7，8-四氫-咪唑并[4，5-e]吲哚-2-基]氨基]苯甲酸甲酯。(產(chǎn)率75％)。實(shí)施例33(Z)-2-[N-[(4-氟苯基)甲基]氨基]-8-[(3-甲氧基-1H-吡咯-2-基)亞甲基]-3，6，7，8-四氫-吡咯并[3，2-e]苯并咪唑-7-酮(FF) 用上述方法B(步驟1)，從4-氟苯基異硫氰酸酯(184μl)(Transworld)制備(Z)-2-[N-[(4-氟苯基)甲基]氨基]-8-[(3-甲氧基-1H-吡咯-2-基)亞甲基]-3，6，7，8-四氫-吡咯并[3，2-e]苯并咪唑-7-酮。(產(chǎn)率59％)。實(shí)施例34(Z)-2-[N-[2-(3，4-二甲氧基苯基)乙基]氨基]-8-[(3-甲氧基-1H-吡咯-2-基)亞甲基]-3，6，7，8-四氫-吡咯并[3，2-e]苯并咪唑-7-酮(GG) 用上述方法B(步驟1)，從2-(3，4-二甲氧基苯基)乙基異硫氰酸酯(246μl)(Transworld)制備(Z)-2-[M[2-(3，4-二甲氧基苯基)乙基]氨基]-8-[(3-甲氧基-1H-吡咯-2-基)亞甲基]-3，6，7，8-四氫-吡咯并[3，2-e]苯并咪唑-7-酮。(產(chǎn)率78％)。實(shí)施例35外消旋-(Z)-84(3-甲氧基-1H-吡咯-2-基)亞甲基]-2-[N-(1-苯乙基)氨基]-3，6，7，8-四氫-吡咯并[3，2-e]苯并咪唑-7-酮(HH) 用上述方法B(步驟1)，從α-甲基芐基異硫氰酸酯(180μl)(Transworld)制備外消旋-(Z)-8-[(3-甲氧基-1H-吡咯-2-基)亞甲基]-2-[N-(1-苯乙基)氨基]-3，6，7，8-四氫-吡咯并[3，2-e]苯并咪唑-7-酮。(產(chǎn)率31％)。實(shí)施例36(Z)-2-[N-(2-甲氧基苯基)氨基]-84(3-甲氧基-1H-吡咯-2-基)亞甲基]-3，6，7，8-四氫-吡咯并[3，2-e]苯并咪唑-7-酮(II) 用上述方法B(步驟1)，從2-甲氧基苯基乙基異硫氰酸酯(182μl)(Transworld)制備(Z)-2-[N-(2-甲氧基苯基)氨基]-84(3-甲氧基-1H-吡咯-2-基)亞甲基]-3，6，7，8-四氫-吡咯并[3，2-e]苯并咪唑-7-酮。(產(chǎn)率37％)。實(shí)施例37(Z)-84(3-甲氧基-1H-吡咯-2-基)亞甲基]-2-[N-(4-苯基丁基)氨基]-3，6，7，8-四氫-吡咯并[3，2-e]苯并咪唑-7-酮(JJ) 用上述方法B(步驟1)，從4-苯基丁基異硫氰酸酯(210mg)(Sigma)制備(Z)-8-[(3-甲氧基-1H-吡咯-2-基)亞甲基]-2-[N-(4-苯基丁基)氨基]-3，6，7，8-四氫-吡咯并[3，2-e]苯并咪唑-7-酮。(產(chǎn)率52％)。實(shí)施例38(Z)-8-[(3-甲氧基-1H-吡咯-2-基)亞甲基]-2-[N-[(2-四氫呋喃基)甲基]氨基]-3，6，7，8-四氫-吡咯并[3，2-e]苯并咪唑-7-酮(KK) 用上述方法B(步驟1)，從2-四氫呋喃基異硫氰酸酯(157mg)(Transworld)制備(Z)-84(3-甲氧基-1H-吡咯-2-基)亞甲基]-2-[N-[(2-四氫呋喃基)甲基]氨基]-3，6，7，8-四氫-吡咯并[3，2-e]苯并咪唑-7-酮。(產(chǎn)率44％)。實(shí)施例39(Z)-4-[[8-[(3-甲氧基-1H-吡咯-2-基)亞甲基]-7-氧代-3，6，7，8-四氫-咪唑并[4，5-e]吲哚-2-基]氨基]丁酸乙酯(LL) 用上述方法B(步驟1)，從乙基異硫氰酸丁酸酯(191μl)(Transworld)制備(Z)-4-[[84(3-甲氧基-1H-吡咯-2-基)亞甲基]-7-氧代-3，6，7，8-四氫-咪唑并[4，5-e]吲哚-2-基]氨基]丁酸乙酯。(產(chǎn)率35％)。實(shí)施例40(Z)-8-[(3-甲氧基-1H-吡咯-2-基)亞甲基]-2-[N-(1-萘基)氨基]-3，6，7，8-四氫-吡咯并[3，2-e]苯并咪唑-7-酮(MM) 用上述方法B(步驟1)，從1-萘基異硫氰酸酯(204mg)(Aldrich)制備(Z)-84(3-甲氧基-1H-吡咯-2-基)亞甲基]-2-[N-(1-萘基)氨基]-3，6，7，8-四氫-吡咯并[3，2-e]苯并咪唑-7-酮。(產(chǎn)率65％)。實(shí)施例41(Z)-84(3-甲氧基-1H-吡咯-2-基)亞甲基]-2-[N-[2-(N-哌啶基)乙基]氨基]-3，6，7，8-四氫-吡咯并[3，2-e]苯并咪唑-7-酮(NN) 用上述方法B(步驟1)，從2-哌啶乙基異硫氰酸酯(187mg)(Transworld)制備(Z)-8-[(3-甲氧基-1H-吡咯-2-基)亞甲基]-2-[N-[2-(N-哌啶基)乙基]氨基]-3，6，7，8-四氫-吡咯并[3，2-e]苯并咪唑-7-酮。(產(chǎn)率68％)。實(shí)施例42(Z)-1，3-二氫-4-氟-3-[(4-甲基-1H-咪唑-5-基)亞甲基]-5-硝基-2H-吲哚-2-酮(OO) 在室溫下往1，3-二氫-4-氟-5-硝基-2H-吲哚-2-酮(1g，5mmol)的甲醇(10ML)溶液中先后加入4-甲基-5-咪唑甲醛(612mg，5.5mmoB(Aldrich)和氫氧化四丁基銨(11ML，1.0M甲醇溶液)(Aldrich)。此混合物在室溫?cái)嚢?小時(shí)抽濾收集產(chǎn)生的綠色沉淀，用乙醚洗滌并晾干，得到(Z)-1，3-二氫-4-氟-3-[(4-甲基-1H-咪唑-5-基)亞甲基]-5-硝基-2H-吲哚-2-酮綠色粉末。(產(chǎn)率1.14g，79％)。實(shí)施例43(Z)-4-疊氮基-1，3-二氫-3-[(4-甲基-1H-咪唑-5-基)亞甲基]-5-硝基-2H-吲哚-2-酮(PP) 將(Z)-1，3-二氫-4-氟-3-[(3-甲基-1H-咪唑-5-基)亞甲基]-5-硝基-2H-吲哚-2-酮(576mg，2.0mmol)(上面實(shí)施例42所得)懸浮于THF/乙醇(15ML/8ML)。往此混合物中先后加入Hunig’s堿(二異丙基乙胺，5ML，30MMOL)(Aldrich)和三甲基硅烷基疊氮化物(2.6ml，20mmol)(Aldrich)。反應(yīng)混合物被回流3小時(shí)20分鐘。將不均勻的反應(yīng)混合物冷卻至室溫，抽濾收集橙色的懸浮物。用乙醇洗滌沉淀，真空干燥過(guò)夜。(產(chǎn)率490mg，79％)。實(shí)施例44(Z)-4-氨基-1，3-二氫-3-[(4-甲基-1H-咪唑-5-基)亞甲基]-5-硝基-2H-吲哚-2-酮(QQ) 往(Z)-4-疊氮基-1，3-二氫-3-[(4-甲基-1H-咪唑-5-基)亞甲基]-5-硝基-2H-吲哚-2-酮(160mg，0.51mmol)(實(shí)施例43所得)的乙醇(10ML)懸浮液中在室溫下加入三氯化錫二水合物。不均勻的混合物被加熱回流6小時(shí)，然后冷卻至室溫。抽濾收集橙色的固體，用乙醚洗滌并真空干燥過(guò)夜，得到(Z)-4-氨基-1，3-二氫-3-[(4-甲基-1H-咪唑-5-基)亞甲基]-5-硝基-2H-吲哚-2-酮。(產(chǎn)率45mg，31％)。實(shí)施例45(Z)-4，5-二氨基-1，3-二氫-3-[(4-甲基-1H-咪唑-5-基)亞甲基]-2H-吲哚-2-酮(RR) 將(Z)-4-疊氮基-1，3-二氫-3-[(4-甲基-1H-咪唑-5-基)亞甲基]-5-硝基-2H-吲哚-2-酮(150mg，0.48mmol)(實(shí)施例44所得)在室溫下懸浮于溶于THF(40ML)。加入氫氧化銨(0.15ML)，接著加入催化量的毒化過(guò)的鉑/碳(50mg，5％Pt/C·1/2S，)(EngelhardIndustries)。反應(yīng)混合物在Parr彈中于50psi的氫氣中氫化16小時(shí)。將混合物濾過(guò)硅藻土餅，并將該餅用THF洗滌兩次。粗產(chǎn)物通過(guò)快速硅膠層析純化(230-400目，用1％甲醇/1％三乙胺/THF洗脫)，得到(Z)-4，5-二氨基-1，3-二氫-3-[(4-甲基-1H-咪唑-5-基)亞甲基]-2H-吲哚-2-酮暗紅色固體。(產(chǎn)率52mg，42％)。實(shí)施例46(Z)-8-[(4-甲基-1H-咪唑-5-基)亞甲基]-3，6，7，8-四氫-吡咯并[3，2-e]苯并咪唑-7-酮(SS) 將(Z)-4，5-二氨基-1，3-二氫-3-[(4-甲基-1H-咪唑-5-基)亞甲基]-2H-吲哚-2-酮(30mg，0.1175mmol)(上述實(shí)施例45所得)和鹽酸甲脒(95mg，1.18mmol)(Aldrich)在乙醇(1.5ML)中的混合物加熱回流1小時(shí)。將混合物冷卻至室溫，并將反應(yīng)用水淬滅。水層用二氯甲烷萃取。合并的有機(jī)層用鹽水洗滌，無(wú)水硫酸鎂干燥并減壓濃縮。粗油狀殘余物用乙醚研制，抽濾收集產(chǎn)生的黃色沉淀。(第一批；產(chǎn)率5mg，16％)。實(shí)施例47(Z)-8-[(3-甲氧基-1H-吡咯-2-基)亞甲基]-3，6，7，8-四氫-吡咯并[3，2-e]苯并咪唑-7-酮(TT) 將(Z)-4，5-二氨基-1，3-二氫-3-[(3-甲氧基-1H-吡咯-2-基)亞甲基]-2H-吲哚-2-酮(60mg，0.22mmol)(上述實(shí)施例15所得)和鹽酸甲脒(177mg，2.2mmol)(Aldrich)在乙醇(3ML)中的混合物加熱回流45分鐘。將混合物冷卻至室溫，并慢慢加入水誘導(dǎo)沉淀。抽濾收集沉淀，用水洗滌并真空干燥過(guò)夜，得到(Z)-8-[(3-甲氧基-1H-吡咯-2-基)亞甲基]-3，6，7，8-四氫-吡咯并[3，2-e]苯并咪唑-7-酮。(產(chǎn)率48mg，99％)。實(shí)施例48(Z)-8-[(3-甲氧基-1H-吡咯-2-基)亞甲基]-2-[N-[4-苯基-(2-甲氧基苯基)氨基]-3，6，7，8-四氫-吡咯并[3，2-e]苯并咪唑-7-酮(UU) 用上述方法B(步驟1)，從[4-苯基-(2-甲氧基苯基)]異硫氰酸酯(265mg)(Transworld)制備(Z)-8-[(3-甲氧基-1H-吡咯-2-基)亞甲基]-2-[N-[4-苯基-(2-甲氧基苯基)氨基]-3，6，7，8-四氫-吡咯并[3，2-e]苯并咪唑-7-酮。(產(chǎn)率96％)。實(shí)施例49(Z)-2-[N-(1，3-苯并二氧戊環(huán)-5-基)甲基氨基]-8-[(3-甲氧基-1H-吡咯-2-基)亞甲基]-3，6，7，8-四氫-吡咯并[3，2-e]苯并咪唑-7-酮(VV) 用上述方法B(步驟2)，從(1，3-苯并二氧戊環(huán)-5-基)甲基異硫氰酸酯(212mg)(Transworld)制備(Z)-2-[N-(1，3-苯并二氧戊環(huán)-5-基)甲基氨基]-8-[(3-甲氧基-1H-吡咯-2-基)亞甲基]-3，6，7，8-四氫-吡咯并[3，2-e]苯并咪唑-7-酮。(產(chǎn)率86mg，90％)。實(shí)施例50(Z)-84(3-甲氧基-1H-吡咯-2-基)亞甲基]-2-[N-(1-萘基)甲基氨基]-3，6，7，8-四氫-吡咯并[3，2-e]苯并咪唑-7-酮(WW) 用上述方法B(步驟2)，從(1-萘基)甲基異硫氰酸酯(220mg)(Transworld)制備(Z)-84(3-甲氧基-1H-吡咯-2-基)亞甲基]-2-[N-(1-萘基)甲基氨基]-3，6，7，8-四氫-吡咯并[3，2-e]苯并咪唑-7-酮。(產(chǎn)率60mg，62％)。實(shí)施例51(Z)-84(3-甲氧基-1H-吡咯-2-基)亞甲基]-2-[N-(3-苯基丙基)氨基]-3，6，7，8-四氫-吡咯并[3，2-e]苯并咪唑-7-酮(XX) 用上述方法B(步驟2)，從3-苯基丙基異硫氰酸酯(195mg)(Transworld)制備(Z)-8-[(3-甲氧基-1H-吡咯-2-基)亞甲基]-2-[N-(3-苯基丙基)氨基]-3，6，7，8-四氫-吡咯并[3，2-e]苯并咪唑-7-酮。(產(chǎn)率44mg，48％)。實(shí)施例52(Z)-2-[N-(2，3-二氫-1H-茚-5-基)氨基]-8-[(3-甲氧基-1H-吡咯-2-基)亞甲基]-3，6，7，8-四氫-吡咯并[3，2-e]苯并咪唑-7-酮(YY) 用上述方法B(步驟2)，從(2，3-二氫-1H-茚-5-基)異硫氰酸酯(193mg)(Transworld)制備(Z)-2-[N-(2，3-二氫-1H-茚-5-基)氨基]-8-[(3-甲氧基-1H-吡咯-2-基)亞甲基]-3，6，7，8-四氫-吡咯并[3，2-e]苯并咪唑-7-酮。(產(chǎn)率27mg，30％)。
CDK2閃光板試驗(yàn)為了測(cè)定CDK2活性的抑制，將純化過(guò)的重組成視網(wǎng)膜細(xì)胞瘤(Rb)蛋白涂在96孔閃光板上(NeW England Nuclear，Boston，MA)。Rb是通過(guò)CDK2磷?；奶烊坏孜?Herwig and Strauss，Eurr.J.Biochem.，Vol.246(1997)，pp.581-601和其參考文獻(xiàn))。重組的人細(xì)胞周期蛋白E/CDK2復(fù)合物從昆蟲(chóng)細(xì)胞的提取物部分純化。活性的細(xì)胞周期蛋白E/CDK2與33P-ATP和化合物的稀釋液一起被加入涂過(guò)Rb的閃光板。將該板在室溫振動(dòng)下溫育25分鐘，然后洗滌并在Topcount閃爍計(jì)數(shù)器(Packard Instrument Co.，DowneersGrove，IL)上計(jì)數(shù)。試驗(yàn)化合物的稀釋液在各種試驗(yàn)中被重復(fù)試驗(yàn)。測(cè)量CDK2活性抑制的Rb磷?；种瓢俜?jǐn)?shù)根據(jù)下式測(cè)定100×[1-(試驗(yàn)化合物-非特異性數(shù))/(總數(shù)-非特異性數(shù))]其中“試驗(yàn)化合物”指當(dāng)不加入細(xì)胞周期蛋白E/CDK2時(shí)的每分鐘平均計(jì)數(shù)，“非特異性數(shù)”指不加入細(xì)胞周期蛋白E/CDK2時(shí)每分鐘的平均計(jì)數(shù)，而“總數(shù)”指不加入化合物時(shí)每分鐘的平均計(jì)數(shù)。
上述體外試驗(yàn)的結(jié)果在表I中得到。
表I
細(xì)胞基試驗(yàn)從American Type Cell Culture Collection(ATCC；Rockville，MD)購(gòu)買(mǎi)對(duì)雌雄激素受體呈陰性的上皮乳腺癌細(xì)胞系(MDA-MB-435)，并在由ATCC推薦的培養(yǎng)基中生長(zhǎng)。為了分析試驗(yàn)化合物對(duì)這些細(xì)胞生長(zhǎng)的作用，將該細(xì)胞以每孔2000個(gè)細(xì)胞平鋪在96-孔組織培養(yǎng)板上，并在37℃用5％二氧化碳溫育。第二天，將試驗(yàn)化合物溶于100％二甲亞砜(DMSO)產(chǎn)生10mM貯存溶液。各化合物用足量的無(wú)菌培養(yǎng)基稀釋至1mM，產(chǎn)生120μM的最終濃度。然后將化合物在培養(yǎng)基中用1.2％DMSO連續(xù)稀釋。四分之一最終體積的稀釋過(guò)的化合物被轉(zhuǎn)移到96孔板上。試驗(yàn)化合物被重復(fù)試驗(yàn)。將DMSO加入“對(duì)照細(xì)胞”的一排，使DMSO在各孔中的濃度為0.3％。沒(méi)有加入細(xì)胞的孔作為“空白”。沒(méi)有抑制劑的孔作為“無(wú)抑制劑對(duì)照”。將該板返回到溫育器中，加入試驗(yàn)化合物5天后，如下上述進(jìn)行分析。
將溴化3-(4，5-二甲基噻唑-2-基)-2，5-二苯基-2H-四唑(噻唑藍(lán)；MTT)加入各孔，產(chǎn)生1mg/ml的最終濃度。然后將該板在37℃溫育3小時(shí)。在吸出含MTT的培養(yǎng)基之前，該板以1000 rpm離心5分鐘。然后除去含MTT的培養(yǎng)基，并往各孔中加入100μl 100％乙醇，使產(chǎn)生的甲攢代謝物溶解。為了確定完全溶解，將該板在室溫下振動(dòng)15分鐘。在微滴板讀數(shù)計(jì)(MolecularDynamics)上于570nm的波長(zhǎng)，以650nm參照讀取吸收值。通過(guò)從所有孔減去空白(沒(méi)細(xì)胞)孔的吸收值，然后從1.00減去各試驗(yàn)平均吸收除對(duì)照的平均值所得的分?jǐn)?shù)而計(jì)算抑制百分?jǐn)?shù)。從濃度的對(duì)數(shù)與抑制百分?jǐn)?shù)的點(diǎn)的線性回歸測(cè)定抑制濃度(IC如)。
從ATCC獲得結(jié)腸癌細(xì)胞系SW 480，并根據(jù)上面提供的相同方案試驗(yàn)，并作如下修改細(xì)胞系SW 480以每孔1000個(gè)細(xì)胞平鋪，并在加入試驗(yàn)化合物4天后分析。
前述體外試驗(yàn)的結(jié)果在下表II和III中得到。表II在細(xì)胞系MDA-MB 435中的抗增生活性*
*大部分?jǐn)?shù)據(jù)反映一個(gè)實(shí)驗(yàn)的結(jié)果。在實(shí)驗(yàn)被重復(fù)的情況下，上述數(shù)據(jù)是各實(shí)驗(yàn)結(jié)果的平均值。表III在細(xì)胞系SW480中的抗增生活性
通過(guò)參考特定和優(yōu)選的方案舉例說(shuō)明本發(fā)明，本專(zhuān)業(yè)技術(shù)人員應(yīng)該理解各種改變和修飾都可以通過(guò)本發(fā)明的常規(guī)實(shí)驗(yàn)和實(shí)踐而進(jìn)行。因此，本發(fā)明不限于前面的描述，而由權(quán)利要求書(shū)和其等同替換來(lái)限定。
權(quán)利要求
1.下式化合物 和上述化合物藥物可接受的鹽，其中R1是氫，-OR3，-COR3，-COOR3，-CONR4R5，-NR4R5；低級(jí)烷基(任選被一個(gè)或多個(gè)(b)，環(huán)烷基，雜環(huán)，芳基，雜芳基取代，其中環(huán)烷基和雜環(huán)各自任選被R11取代，而芳基和雜芳基各自任選被R12挖取代)，環(huán)烷基(任選被一個(gè)或多個(gè)(b)，低級(jí)烷基，雜環(huán)，芳基，和雜芳基取代，其中低級(jí)烷基和雜環(huán)各自任選被R11取代，而芳基和雜芳基各自任選被R12取代)，雜環(huán)(任選被一個(gè)或多個(gè)(b)，低級(jí)烷基，環(huán)烷基，芳基，和雜芳基取代，其中低級(jí)烷基和環(huán)烷基各自任選被R11取代，而芳基和雜芳基各自任選被R12取代)，芳基(任選被一個(gè)或多個(gè)(b)，-NO2，全氟烷基，低級(jí)烷基，環(huán)烷基，雜環(huán)，芳基，和雜芳基取代，其中低級(jí)烷基、環(huán)烷基和雜環(huán)各自任選被R11取代，而芳基和雜芳基各自任選被R12取代)，或雜芳基(任選被一個(gè)或多個(gè)(b)，-NO2，全氟烷基，低級(jí)烷基，環(huán)烷基，雜環(huán)，芳基，和雜芳基取代，其中低級(jí)烷基，環(huán)烷基和雜環(huán)各自任選被R11取代，而芳基和雜芳基各自任選被R12取代)；(b)是-OR3，-NR4R5，鹵素，-COR3，-COOR3，-OCOR3，-CONR4R5，-CN，-SO2R3，-SO2NR4R5；R2是氫，-OR3，-COOR3，-COOR3，-OCOR3，-CONR4R5，鹵素，-CN，全氟烷基，-NR4R5；或低級(jí)烷基(任選被一個(gè)或多個(gè)-OR3，-OCOR3，和-NR4R5取代)；R3是氫，低級(jí)烷基(任選被一個(gè)或多個(gè)(c)，環(huán)烷基，雜環(huán)，芳基，和雜芳基取代，其中環(huán)烷基和雜環(huán)各自任選被對(duì)R11取代，而芳基和雜芳基各自任選被R12佗取代)，環(huán)烷基(任選被一個(gè)或多個(gè)(c)，低級(jí)烷基，雜環(huán)，芳基，和雜芳基取代，其中低級(jí)烷基和雜環(huán)各自任選被R11取代，而芳基和雜芳基各自任選被R12取代)，雜環(huán)(任選被一個(gè)或多個(gè)(c)，環(huán)烷基，低級(jí)烷基，芳基，和雜芳基取代，其中環(huán)烷基和低級(jí)烷基各自任選被R11取代，而芳基和雜芳基各自任選被R12取代)，芳基(任選被一個(gè)或多個(gè)(c)，-NO2，鹵素，全氟烷基，低級(jí)烷基，環(huán)烷基，雜環(huán)，芳基，和雜芳基取代，其中低級(jí)烷基、環(huán)烷基和雜環(huán)各自任選被R11取代，而芳基和雜芳基各自任選被R12取代)，或雜芳基(任選被一個(gè)或多個(gè)(c)，-NO2，鹵素，全氟烷基，低級(jí)烷基，環(huán)烷基，雜環(huán)，芳基，和雜芳基取代，其中低級(jí)烷基、環(huán)烷基和雜環(huán)各自任選被R11取代，而芳基和雜芳基各自任選被R12取代)；(c)是-OR7，-COOR6，-COR6，-CONR4R5，-NR4R5，-SO2R6，-SO2NR4R5，R4和R5各自獨(dú)立地是氫，-COR6，-COOR6，-CONR6R8，低級(jí)烷基(任選被一個(gè)或多個(gè)(d)，環(huán)烷基，雜環(huán)，芳基，雜芳基取代，其中環(huán)烷基和雜環(huán)各自任選被R11取代，而芳基和雜芳基各自任選被R12取代)，環(huán)烷基(任選被一個(gè)或多個(gè)(d)，低級(jí)烷基，雜環(huán)，芳基，和雜芳基取代，其中低級(jí)烷基和雜環(huán)各自任選被R11取代，而芳基和雜芳基各自任選被R12取代)，雜環(huán)(任選被一個(gè)或多個(gè)(d)，低級(jí)烷基，環(huán)烷基，，雜環(huán)，芳基，和雜芳基取代，其中低級(jí)烷基、環(huán)烷基和雜環(huán)各自任選被R11取代，而芳基和雜芳基各自任選被R12取代)，芳基(任選被一個(gè)或多個(gè)(d)，-NO2，鹵素，全氟烷基，低級(jí)烷基，環(huán)烷基，雜環(huán)，芳基，和雜芳基取代，其中低級(jí)烷基、環(huán)烷基和雜環(huán)各自任選被R11取代，而芳基和雜芳基各自任選被R12取代)，或雜芳基(任選被一個(gè)或多個(gè)(d)，-NO2，鹵素，全氟烷基，低級(jí)烷基，環(huán)烷基，雜環(huán)，芳基，和雜芳基取代，其中低級(jí)烷基、環(huán)烷基和雜環(huán)各自任選被R11取代，而芳基和雜芳基各自任選被R12取代)；(d)是-OR7，-COOR6，-COR6，-CONR6R7，-NR6R7，-SO2R6，-SO2NR6R7；或者，-NR4R5形成具有3至7個(gè)原子的環(huán)，所說(shuō)的環(huán)任選包括一個(gè)或多個(gè)其它雜原子，并且任選被一個(gè)或多個(gè)低級(jí)烷基，-OR7，-COR6，-COOR6，-CONR6R8，和-NR7R8取代；R6是氫或低級(jí)烷基(任選被一個(gè)或多個(gè)環(huán)烷基，雜環(huán)，芳基，雜芳基，-OR8，和-NR7R8取代)；R7是氫，-COR8，-CONR9R8或低級(jí)烷基(任選被R11取代)；R8和R9各自獨(dú)立地是氫或低級(jí)烷基；R11是-OR8，-COR8，-COOR8，-OCOR8，-CONR8R9，-NR8R9，-N(COR8)R9，-SO2R8，或-SO2NR8R9；R12是-OR8，-COR8，-COOR8，-OCOR8，-CONR8R9，-NR8R9，-N(COR8)R9，-SO2R8，-SO2NR8R9，鹵素，-CN，-NO2，或全氟烷基；X是＝N-或＝C(R5)-；Y和Z各自獨(dú)立地是N，O，或S；條件是Y和Z至少有一個(gè)是N；還有條件是如果Y和Z都是N，則其中的一個(gè)可以被低級(jí)烷基所取代，其中該低級(jí)烷基任選被一個(gè)或多個(gè)-OR7，-NR4R5，環(huán)烷基，雜環(huán)，芳基，和雜芳基取代；和a是在Y-C或Z-C之間的雙鍵。
2.權(quán)利要求1的化合物，其中R5是氫。
3.權(quán)利要求1或2的化合物，其中R1是氫，-NR4R5，低級(jí)烷基(任選被一個(gè)或多個(gè)R11，環(huán)烷基，雜環(huán)，芳基，和雜芳基取代，其中環(huán)烷基和雜環(huán)任選被R11取代，而芳基和雜芳基任選被R12取代)，環(huán)烷基(任選被一個(gè)或多個(gè)R11，低級(jí)烷基，雜環(huán)，芳基，和雜芳基取代，其中低級(jí)烷基和雜環(huán)任選被R11取代，而芳基和雜芳基任選被R12取代)，雜環(huán)(任選被一個(gè)或多個(gè)R11，低級(jí)烷基，環(huán)烷基，芳基，和雜芳基取代，其中低級(jí)烷基和環(huán)烷基任選被R11取代，而芳基和雜芳基任選被R12取代)，芳基(任選被一個(gè)或多個(gè)R12，低級(jí)烷基，環(huán)烷基，雜環(huán)，芳基，和雜芳基取代，其中低級(jí)烷基和雜環(huán)各自任選被R11取代，而雜環(huán)和雜芳基任選被R12取代)，或雜芳基(任選被一個(gè)或多個(gè)R12，低級(jí)烷基，環(huán)烷基，雜環(huán)，芳基，和雜芳基取代，其中低級(jí)烷基和環(huán)烷基任選被R11取代，而雜環(huán)和芳基任選被R12取代)。
4.權(quán)利要求3的化合物，其中R2是氫，-OR3，-NR4R5，或低級(jí)烷基(任選被一個(gè)或多個(gè)-OR3、-NR4R5取代)。
5.權(quán)利要求3的化合物，其中R1是氫，-NR4R5，低級(jí)烷基(任選被一個(gè)或多個(gè)R11，雜環(huán)，芳基，和雜芳基取代，其中雜環(huán)任選被R11取代，而芳基和雜芳基任選被R12取代)，芳基(任選被一個(gè)或多個(gè)R12和低級(jí)烷基取代，其中低級(jí)烷基再任選被R11取代)，或雜芳基(任選被一個(gè)或多個(gè)R12和低級(jí)烷基取代，其中低級(jí)烷基任選再被R11取代)。
6.權(quán)利要求5的化合物，其中R2是氫，OR8，或低級(jí)烷基(任選被一個(gè)或多個(gè)-OR8和-NR8R9取代)。
7.權(quán)利要求1-6的化合物，其中Y和Z都是N。
8.權(quán)利要求1-6任一項(xiàng)的化合物，其中Y和Z之一是氮，而另一個(gè)是氧或硫。
9.權(quán)利要求8的化合物，其為8-(3-甲氧基-1H-吡咯-2-基亞甲基)-2-苯基-6，8-二氫氧代噁唑并[4，5-e]吲哚-7-酮，8-(3-甲氧基-1H-吡咯-2-基亞甲基)-2-苯基-6，8-二氫氧代噻唑并[4，5-e]吲哚-7-酮，8-(3-甲氧基-1H-吡咯-2-基亞甲基)-2-苯基-6，8-二氫氧代噁唑并[5，4-e]吲哚-7-酮，或8-(3-甲氧基-1H-吡咯-2-基亞甲基)-2-苯基-6，8-二氫氧代噻唑并[5，4-e]吲哚-7-酮。
10.權(quán)利要求7的化合物，其為(Z)-8-[(3-甲氧基-1H-吡咯-2-基)亞甲基]-2-甲基-3，6，7，8-四氫-吡咯并[3，2-e]苯并咪唑-7-酮；(Z)-2-[(4-羥基苯基)甲基]-8-[(3-甲氧基-1H-吡咯-2-基)亞甲基]-3，6，7，8-四氫-吡咯并[3，2-e]苯并咪唑-7-酮；(Z)-2-(1-羥基-1-苯基甲基)-8-[(3-甲氧基-1H-吡咯-2-基)亞甲基]-3，6，7，8-四氫-吡咯并[3，2-e]苯并咪唑-7-酮；(Z)-2-[2-(4-羥基苯基)乙基]-8-[(3-甲氧基-1H-吡咯-2-基)亞甲基]-3，6，7，8-四氫-吡咯并[3，2-e]苯并咪唑-7-酮；(Z)-2-[3(苯基)丙基]-8-[(3-甲氧基-1H-吡咯-2-基)亞甲基]-3，6，7，8-四氫-吡咯并[3，2-e]苯并咪唑-7-酮；(Z)-8-[(4-甲基-1H-咪唑-5-基)亞甲基]-3，6，7，8-四氫-吡咯并[3，2-e]苯并咪唑-7-酮；或(Z)-8-[(3-甲氧基-1H-吡咯-2-基)亞甲基]-3，6，7，8-四氫-吡咯并[3，2-e]苯并咪唑-7-酮。
11.權(quán)利要求7的化合物，其為(Z)-2-苯基-8-[(1H-吡咯-2-基)亞甲基]-3，6，7，8-四氫-吡咯并[3，2-e]苯并咪唑-7-酮；(Z)-8-[(3-甲氧基-1H-吡咯-2-基)亞甲基]-2-苯基-3，6，7，8-四氫-吡咯并[3，2-e]苯并咪唑-7-酮；(Z)-4-[8-[(3-甲氧基-1H-吡咯-2-基)亞甲基]-3，6，7，8-四氫-吡咯并[3，2-e]苯并咪唑-2-基]苯甲酸；或(Z)-2-(2-羥基苯基)-8-[(3-甲氧基-1H-吡咯-2-基)亞甲基]-3，6，7，8-四氫-吡咯并[3，2-e]苯并咪唑-7-酮。
12.權(quán)利要求7的化合物，其為(Z)-2-[N-(3-甲氧基丙基)氨基]-8-[(3-甲氧基-1H-吡咯-2-基)亞甲基]-3，6，7，8-四氫-吡咯并[3，2-e]苯并咪唑-7-酮；(Z)-2-[N-[(4-甲氧基苯基)甲基]氨基]-8-[(3-甲氧基-1H-吡咯-2-基)亞甲基]-3，6，7，8-四氫-吡咯并[3，2-e]苯并咪唑-7-酮；(Z)-2-[N-[(4-氟苯基)甲基]氨基]-8-[(3-甲氧基-1H-吡咯-2-基)亞甲基]-3，6，7，8-四氫-吡咯并[3，2-e]苯并咪唑-7-酮；(Z)-2-[N-[2-(3，4-二甲氧基苯基)乙基]氨基]-8-[(3-甲氧基-1H-吡咯-2-基)亞甲基]-3，6，7，8-四氫-吡咯并[3，2-e]苯并咪唑-7-酮；外消旋-(Z)-8-[(3-甲氧基-1H-吡咯-2-基)亞甲基]-2-[N-(1-苯乙基)氨基]-3，6，7，8-四氫-吡咯并[3，2-e]苯并咪唑-7-酮；(Z)-8-[(3-甲氧基-1H-吡咯-2-基)亞甲基]-2-[N-(4-苯基丁基)氨基]-3，6，7，8-四氫-吡咯并[3，2-e]苯并咪唑-7-酮；(Z)-8-[(3-甲氧基-1H-吡咯-2-基)亞甲基]-2-[N-[(2-四氫呋喃基)甲基]氨基]-3，6，7，8-四氫-吡咯并[3，2-e]苯并咪唑-7-酮；(Z)-4-[[8-[(3-甲氧基-1H-吡咯-2-基)亞甲基]-7-氧代-3，6，7，8-四氫-咪唑并[4，5-e]吲哚-2-基]氨基]丁酸乙酯；(Z)-8-[(3-甲氧基-1H-吡咯-2-基)亞甲基]-2-[N-[2-(N-哌啶基)乙基]氨基]-3，6，7，8-四氫-吡咯并[3，2-e]苯并咪唑-7-酮；(Z)-2-[N-(1，3-苯并二氧戊環(huán)-5-基)甲基氨基]-8-[(3-甲氧基-1H-吡咯-2-基)亞甲基]-3，6，7，8-四氫-吡咯并[3，2-e]苯并咪唑-7-酮；(Z)-8-[(3-甲氧基-1H-吡咯-2-基)亞甲基]-2-[N-(1-萘基)甲基氨基]-3，6，7，8-四氫-吡咯并[3，2-e]苯并咪唑-7-酮；或(Z)-8-[(3-甲氧基-1H-吡咯-2-基)亞甲基]-2-[N-(3-苯基丙基)氨基]-3，6，7，8-四氫-吡咯并[3，2-e]苯并咪唑-7-酮。
13.權(quán)利要求7的化合物是(Z)-2-[N-(3，4-二甲氧基苯基)氨基]-8-[(3-甲氧基-1H-吡咯-2-基)亞甲基]-3，6，7，8-四氫-吡咯并[3，2-e]苯并咪唑-7-酮；(Z)-2-[N-(4-甲氧基苯基)氨基]-8-[(3-甲氧基-1H-吡咯-2-基)亞甲基]-3，6，7，8-四氫-吡咯并[3，2-e]苯并咪唑-7-酮；(Z)-2-[N-(3-乙?；交?氨基]-8-[(3-甲氧基-1H-吡咯-2-基)亞甲基]-3，6，7，8-四氫-吡咯并[3，2-e]苯并咪唑-7-酮；(Z)-4-[[8-[(3-甲氧基-1H-吡咯-2-基)亞甲基]-7-氧代-3，6，7，8-四氫-咪唑并[4，5-e丹哚-2-基]氨基]苯甲酸乙酯；(Z)-2-[N-(4-二甲基氨基苯基)氨基]-84(3-甲氧基-1H-吡咯-2-基)亞甲基]-3，6，7，8-四氫-吡咯并[3，2-e]苯并咪唑-7-酮；(Z)-4-[[8-[(3-甲氧基-1H-吡咯-2-基)亞甲基]-7-氧代-3，6，7，8-四氫-咪唑并[4，5-e丹哚-2-基]氨基]苯甲酸甲酯；(Z)-2-[N-(2-甲氧基苯基)氨基]-8[(3-甲氧基-1H-吡咯-2-基)亞甲基]-3，6，7，8-四氫-吡咯并[3，2-e]苯并咪唑-7-酮；(Z)-8-[(3-甲氧基-1H-吡咯-2-基)亞甲基]-2-[N-(1-萘基)氨基]-3，6，7，8-四氫-吡咯并[3，2-e]苯并咪唑-7-酮；(Z)-8-[(3-甲氧基-1H-吡咯-2-基)亞甲基]-2-[N-[4-苯基-(2-甲氧基苯基)氨基]-3，6，7，8-四氫-吡咯并[3，2-e]苯并咪唑-7-酮；或(Z)-2-[N-(2，3-二氫-1H-茚-5-基)氨基]-8-[(3-甲氧基-1H-吡咯-2-基)亞甲基]-3，6，7，8-四氫-吡咯并[3，2-e]苯并咪唑-7-酮。
14.化合物，2-苯基-6，8-二氫噁唑并[4，5-e]吲哚-7-酮；2-苯基-6，8-二氫噻唑并[4，5-e]吲哚-7-酮；2-苯基-6，8-二氫噁唑并[5，4-e]吲哚-7-酮；2-苯基-6，8-二氫噻唑并[5，4-e]吲哚-7-酮；(Z)-1，3-二氫-4-氟-5-硝基-3-[(1H-吡咯-2-基)亞甲基]-2H-吲哚-2-酮；(Z)-4-疊氮基-1，3-二氫-5-硝基-3-[(1H-吡咯-2-基)亞甲基]-2H-吲哚-2-酮；(Z)-4，5-二氨基-1，3-二氫-3-[(1H-吡咯-2-基)亞甲基]-2H-吲哚-2-酮；(Z)-1，3-二氫-4-氟-3-[(3-甲氧基-1H-吡咯-2-基)亞甲基]-5-硝基-2H-吲哚-2-酮；(Z)-4-疊氮基-1，3-二氫-3-[(3-甲氧基-1H-吡咯-2-基)亞甲基]-5-硝基-2H-吲哚-2-酮；(Z)-4，5-二氨基-1，3-二氫-3-[(3-甲氧基-1H-吡咯-2-基)亞甲基]-2H-吲哚-2-酮；(Z)-1，3-二氫-4-氟-3-[(4-甲基-1H-咪唑-5-基)亞甲基卜5-硝基-2H-吲哚-2-酮；(Z)-4-疊氮基-1，3-二氫-3-[(4-甲基-1H-咪唑-5-基)亞甲基]-5-硝基-2H-吲哚-2-酮；(Z)-4-氨基-1，3-二氫-3-[(4-甲基-1H-咪唑-5-基)亞甲基卜5-硝基-2H-吲哚-2-酮；和(Z)-4，5-二氨基-1，3-二氫-3-[(4-甲基-1H-咪唑-5-基)亞甲基]-2H-吲哚-2-酮。
15.包含作為活性成分的權(quán)利要求1化合物和藥物可接受的載體或賦形劑的藥物組合物。
16.用作醫(yī)藥的權(quán)利要求1的化合物。
17.權(quán)利要求1的化合物或式I化合物的前藥或其藥學(xué)活性的代謝物在制備含有這類(lèi)化合物的、用于治療細(xì)胞增生性疾病，尤其是乳腺或結(jié)腸腫瘤的醫(yī)藥中的用途。
18.如前所述的、尤其是參照實(shí)施例的新化合物、組合物和用途。
全文摘要
新的式Ⅰ的4,5－吡咯并羥吲哚,其中R
文檔編號(hào)A61K31/429GK1330654SQ99814679
公開(kāi)日2002年1月9日 申請(qǐng)日期1999年12月10日 優(yōu)先權(quán)日1998年12月17日
發(fā)明者陸建春, 克里斯托夫·米舒, 史蒂文·格雷戈里·米施克 申請(qǐng)人:霍夫曼-拉羅奇有限公司