可被生物機體吸收的止血生物制品/生物材料的病毒去除/滅活方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及生物醫(yī)藥及制品，尤其是可被生物機體吸收的止血生物制品/生物材 料的病毒去除/滅活方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 生物制品/生物材料FSP(FibrinSealantPatch)是一種止血用的生物材料，可 用于手術(shù)和急救場合的輔助止血、創(chuàng)傷封閉等目的。具有易使用、易攜帶、止血迅速、可被人 體完全吸收、人體相容性好、副作用小等特點。由于其主要成分中含有源自血漿的纖維蛋白 原和凝血酶以及來源于富含膠原組織的膠原蛋白，因此具有潛在的病毒感染的風(fēng)險。為了 盡可能地降低和（或）消除這種風(fēng)險，需要在其制造工藝中加入病毒滅活的處理步驟。
[0003] 目前應(yīng)用較多的去除/滅活病毒方法有巴氏消毒法、干熱法、有機溶劑/去污劑處 理法、膜過濾法、低pH孵化法。這些方法有的只能針對特定類型的病毒，如有機溶劑/去污 劑處理法；有的方法由于其滅活條件的要求，只能用于少數(shù)特定的制品生產(chǎn)工藝，如低pH 孵放法、干熱法等。隨著技術(shù)的進步，新的去除/滅活病毒方法不斷出現(xiàn)，例如亞甲基藍光 照法、紫外照射法、臭氧去除/滅活法、Y射線輻射法等。這些方法在一些產(chǎn)品生產(chǎn)工藝中 取得了積極的去除/滅活病毒效果，尤其是針對一些不適宜使用常規(guī)方法的生物制品/生 物材料。同時新方法的使用，也能起到縮短工藝步驟、節(jié)約生產(chǎn)成本、簡便生產(chǎn)操作等作 用。
[0004] 考慮到各種病毒滅活方法都存在一定的局限性，也為了盡量減少病毒對生物制品 /生物材料感染的風(fēng)險，在生產(chǎn)過程中一般要求采用的病毒去除/滅活方法必須能去除/滅 活各種類型的病毒，包括脂包膜病毒、非脂包膜、DNA病毒、RNA病毒以及細(xì)小病毒等。
[0005] 現(xiàn)有技術(shù)中也存在許多關(guān)于病毒去除/滅活的方法：
[0006]CN102210854B豬纖維蛋白原凍干加熱病毒滅活的方法
[0007] CN102286095B纖維蛋白原的制備方法
[0008]CN102295696B由冷沉淀制備凝血因子VIII、纖維蛋白原和纖維結(jié)合蛋白的方法
[0009] CN103785065A-種軟骨再生支架材料的制備方法
[0010]CN87101294A免疫球蛋白溶液的巴氏滅菌法
[0011] CN1448407A靜脈注射用人免疫球蛋白的生產(chǎn)工藝
[0012] CN101974070B-種人凝血酶原復(fù)合物的制備工藝
[0013]CN102036740A過濾方法
[0014]USP5116950Processforheattreatingfibrinogen
[0015]USP5639730Methodofproducingavirus-safebiologicalpreparation
[0016] 上述專利中，USP5116950和USP5639730采用的干熱方法滅活病毒，它們是針對纖 維蛋白原或其他凝血因子在溶液狀態(tài)或西林瓶裝凍干粉時進行滅活。專利CN102210854B是在65±2°C時加熱140±1小時滅活豬纖維蛋白原西林瓶裝凍干粉中的病毒。專利 CN102286095B和CN102295696B雖然不是專門針對血液制品的病毒滅活，但在其權(quán)利要 求書中提到l〇〇°C加熱30分鐘滅活病毒。專利CN103785065A是一種生物材料的制備 方法，同其他一些膜狀材料類似，其采用的是過氧乙酸-乙醇浸泡滅活病毒的方法。專利 CN87101294A采用低pH值和巴氏消毒法相結(jié)合，兩種方法同時對免疫球蛋白進行病毒滅 活。專利CN1448407A采用60°C加熱10小時的巴氏消毒法滅活免疫球蛋白中的病毒。專利 CN101974070B中凝血酶原制備中采用S/D法和99. 5±0. 5°C干熱30分鐘的方法滅活病毒。 專利CN102036740A涉及蛋白制劑中間品的病毒去除的過濾方法。不同產(chǎn)品所采用的病毒 去除/滅活方法不一樣，效果也不同。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0017] 本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供一種可被生物機體吸收的止血生物制品/生 物材料的病毒去除/滅活方法，具有操作簡便、效果顯著、成本較低的優(yōu)點。
[0018] 為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明的技術(shù)方案是：一種可被生物機體吸收的止血生物 制品/生物材料的病毒去除/滅活方法，凝血酶溶液、膠原蛋白溶液和纖維蛋白原溶液制得 止血生物制品/生物材料，病毒去除/滅活方法包括以下步驟中的一種或多種：
[0019] (a)利用S/D法去除原料血漿中的病毒，然后從原料血漿中提取得到凝血酶并制 成凝血酶溶液，利用過濾法去除凝血酶溶液中的病毒；
[0020] (b)利用低pH孵放法對膠原蛋白溶液中的病毒進行滅活；
[0021] (c)利用S/D法或巴斯德消毒法對纖維蛋白原溶液中的病毒進行去除/滅活；
[0022] (d)利用干熱法對止血生物制品/生物材料進行病毒滅活。
[0023] 本發(fā)明針對的產(chǎn)品為海綿狀或膜狀的生物材料，它的主要成分含纖維蛋白原、凝 血酶、白蛋白、第XIII凝血因子以及膠原蛋白；其輔助成分含糖、糖醇、氨基酸、鹽、PEG或 其衍生物、維生素等。本發(fā)明的病毒滅活產(chǎn)品不僅包含纖維蛋白原、凝血酶和膠原蛋白，而 且還首次將干熱法用于海綿狀或膜狀的生物材料滅活病毒。本發(fā)明采用多種對病毒的去除 /滅活方式，有效去除/滅活生物制品/生物材料FSP成品中潛在的各種脂包膜病毒和非脂 包膜病毒，而且這幾種方法都是操作簡便、效果顯著、成本較低的病毒去除/滅活方法。
[0024] 干熱法滅活病毒的驗證
[0025] 在生物制品/生物材料FSP生產(chǎn)過程中的纖維蛋白原、凝血酶、膠原蛋白等原液 中加入腦心肌炎病毒、Sindbis病毒、偽狂犬病毒和豬細(xì)小病毒等四種指示病毒（其中含有 脂包膜病毒和非脂包膜病毒），真空冷凍干燥，將FSP裝入包裝盒和包裝袋中密封，然后于 100土 1°C干熱處理30分鐘。加熱后將FSP剪碎，按lOml/cm2加入0. 9%氯化鈉溶液37°C 水浴30分鐘，檢測浸提液中病毒滴度。4種指示病毒的滅活效果如表1所示，均大于4Lg， 符合國家相關(guān)規(guī)定要求，達到了病毒滅活的效果。
[0026] 表1生物制品/生物材料FSP干熱滅活病毒的滴度結(jié)果
[0027]
【主權(quán)項】
1. 一種可被生物機體吸收的止血生物制品/生物材料的病毒去除/滅活方法，其特征 在于，凝血酶溶液、膠原蛋白溶液和纖維蛋白原溶液制得止血生物制品/生物材料，病毒去 除/滅活方法包括以下步驟中的一種或多種： (a) 利用S/D法去除原料血漿中的病毒，然后從原料血漿中提取得到凝血酶并制成凝 血酶溶液，利用過濾法去除凝血酶溶液中的病毒； (b) 利用低pH孵放法對膠原蛋白溶液中的病毒進行滅活； (c) 利用S/D法或巴斯德消毒法對纖維蛋白原溶液中的病毒進行去除/滅活； (d) 利用干熱法對止血生物制品/生物材料進行病毒滅活。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種可被生物機體吸收的止血生物制品/生物材料的病毒去 除/滅活方法，其特征在于：所述S/D法為在溶液中加入有機溶劑/去污劑聚山梨酯80至 0? 5 % ?2. 0 % (V/V)或 TritonX-100 至 0? 5 % ?2 % (V/V)和磷酸三丁酯至 0? 1 % ?0? 5 % (V/V)，攪拌均勻后于16?30°C孵育1?10小時。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種可被生物機體吸收的止血生物制品/生物材料的病毒去 除/滅活方法，其特征在于：所述巴斯德消毒法為讓溶液于50?80°C中加熱4?12小時。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種可被生物機體吸收的止血生物制品/生物材料的病毒去 除/滅活方法，其特征在于：利用巴斯德消毒法對纖維蛋白原溶液去除/滅活病毒時，在纖 維蛋白原溶液中添加蔗糖、白蛋白、精氨酸或鹽酸精氨酸、氯化鈉、檸檬酸三鈉作為保護劑。
5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種可被生物機體吸收的止血生物制品/生物材料的病毒去 除/滅活方法，其特征在于：所述過濾法為利用濾膜將溶液過濾去除病毒的方法。
6. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的一種可被生物機體吸收的止血生物制品/生物材料的病毒去 除/滅活方法，其特征在于：所述低pH孵放法為將溶液于pH2. 5?4. 5環(huán)境下放置0. 5? 24天。
7. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種可被生物機體吸收的止血生物制品/生物材料的病毒 去除/滅活方法，其特征在于：所述干熱法為將產(chǎn)品置于80?10(TC環(huán)境加熱0. 5?72小 時。
8. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種可被生物機體吸收的止血生物制品/生物材料的病毒去 除/滅活方法，其特征在于：所述止血生物制品/生物材料的制備方法步驟： (1) 將纖維蛋白原溶液在模盒中冷凍形成第一固體； (2) 在凍結(jié)的第一固體上噴灑凝血酶溶液，并迅速冷凍形成第二固體； (3) 在凍結(jié)的第二固體上倒入膠原蛋白溶液，并迅速冷凍形成第三固體； (4) 將凍結(jié)的第三固體于凍干機內(nèi)真空冷凍干燥即得到止血生物制品/生物材料。
9. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種可被生物機體吸收的止血生物制品/生物材料的病毒去 除/滅活方法，其特征在于：所述止血生物制品/生物材料用于手術(shù)和急救中的輔助止血、 封閉和粘合。
【專利摘要】一種可被生物機體吸收的止血生物制品/生物材料的病毒去除/滅活方法，包括以下步驟中的一種或多種：(a)利用S/D法去除原料血漿中的病毒，然后從原料血漿中提取得到凝血酶并制成凝血酶溶液，利用過濾法去除凝血酶溶液中的病毒；(b)利用低pH孵放法對膠原蛋白溶液中的病毒進行滅活；(c)利用S/D法或巴斯德消毒法對纖維蛋白原溶液中的病毒進行去除/滅活；(d)由上述(a)、(b)、(c)中的凝血酶溶液、膠原蛋白溶液和纖維蛋白原溶液制得止血生物制品/生物材料，利用干熱法對止血生物制品/生物材料進行病毒滅活。本發(fā)明采用多種對病毒的去除/滅活方式，有效去除/滅活生物制品/生物材料FSP成品中潛在的各種脂包膜病毒和非脂包膜病毒，而且這幾種方法都是操作簡便、效果顯著、成本較低的病毒去除/滅活方法。
【IPC分類】A61L15-32, A61L2-04, A61L2-00, A61L2-18, A61L2-02, A61L101-32
【公開號】CN104524603
【申請?zhí)枴緾N201410853989
【發(fā)明人】黃志霞, 李若冰, 萬德夫, 付巖霖, 朱晉輝, 李敏, 萬華印
【申請人】廣州市拜特凇醫(yī)藥科技有限公司
【公開日】2015年4月22日
【申請日】2014年12月30日